CS277459B6 - Ninhydrin reagent and process for its preparation - Google Patents
Ninhydrin reagent and process for its preparation Download PDFInfo
- Publication number
- CS277459B6 CS277459B6 CS894707A CS470789A CS277459B6 CS 277459 B6 CS277459 B6 CS 277459B6 CS 894707 A CS894707 A CS 894707A CS 470789 A CS470789 A CS 470789A CS 277459 B6 CS277459 B6 CS 277459B6
- Authority
- CS
- Czechoslovakia
- Prior art keywords
- ninhydrin
- reagent
- oxygen
- amino acids
- methoxyethanol
- Prior art date
Links
Landscapes
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Investigating Or Analyzing Non-Biological Materials By The Use Of Chemical Means (AREA)
Abstract
Ninhydrinové činidlo ke stanovení aminokyselin, zejména v automatických analyzátorech aminokyselin. Činidlo obsahuje vjednom litru 8 až 20 g ninhydrinu, 250 až 500 ml ústojného roztoku o hodnotě pH 5,3 až 5,7, například sodnooctanového pufru, 500 až 750 ml 2- methoxyethanolu a 3.10‘2 až 9.10'2 g tetrahydroboratu sodného a připraví se tak, že ve 2-methoxyethanolu, zbaveném kyslíku probubláváním inertním plynem, se za míchání a stálého přívodu plynu postupně rozpustí ninhydrin a tetrahydroborat sodný, ke vzniklému roztoku se přidá paralelně připravený a kyslíku zbavený ústojný roztok a v přivádění plynu se pokračuje až do odstranění posledních stop kyslíku ze systémuNinhydrin reagent for the determination of amino acids, especially in automatic amino acid analyzers. The reagent contains in one liter 8 to 20 g of ninhydrin, 250 to 500 ml of a buffer solution with a pH of 5.3 to 5.7, for example sodium acetate buffer, 500 to 750 ml of 2-methoxyethanol and 3.10'2 to 9.10'2 g of sodium tetrahydroborate and is prepared by gradually dissolving ninhydrin and sodium tetrahydroborate in 2-methoxyethanol, freed from oxygen by bubbling in an inert gas, with stirring and a constant supply of gas, adding the buffer solution prepared in parallel and freed from oxygen to the resulting solution and continuing to supply gas until the last traces of oxygen are removed from the system
Description
Vynález se týká ninhydrinového činidla ke stanovení aminokyselin, zejména v automatických analyzátorech aminokyselin, a způsobu jeho přípravy.The present invention relates to a ninhydrin reagent for the determination of amino acids, in particular in automated amino acid analyzers, and to a process for its preparation.
Metody kvantitativního stanovení aminokyselin po jejich rozdělení ionexovou chromatografií, založené na detekci aminokyselin ninhydrinem, patří v práci stále k nejužívanějším. Barevná reakce mezi látkami obsahujícími aminoskupinu a ninhydrinem je velmi citlivá. Primární aminokyseliny jsou ninhydrinem desaminovány a dekarboxylovány za tvorby purpurově zbarveného komplexu Ruhemanovy červeně, absorbující v maximu při 570 nm s molárním extinkčním koeficientem cca 2.104.cm-1.1.mol”1. Sekundární aminokyseliny, jako pro1in a hydroxyprolin, tvoří žlutě zbarvený komplex s minimální absorpcí při 440 nm a molárním extinkčním koeficientem 2 az 4.10 .Methods for the quantitative determination of amino acids after their separation by ion exchange chromatography, based on the detection of amino acids by ninhydrin, are still among the most widely used in the work. The color reaction between amino-containing substances and ninhydrin is very sensitive. The primary amino acids are deaminated and decarboxylated with ninhydrin to form a purple complex of Ruheman red, absorbing at a maximum at 570 nm with a molar extinction coefficient of about 2.10 4 .cm -1 .1.mol ” 1 . Secondary amino acids, such as prolin and hydroxyproline, form a yellow complex with minimal absorption at 440 nm and a molar extinction coefficient of 2 to 4.10.
Od doby, kdy byla chemická,reakce ninhydrinu s aminokyselinami adaptována na plně automatizovaný systém analýzy, se pozornost zaměřuje na optimalizaci složení ninhydrinového činidla, vedoucí k zajištění požadovaného stabilního lineárního vztahu mezi vývojem charakteristického zbarvení komplexu a koncentrací látky. Reakcí aminokyselin s ninhydrinem vzniká barevný komplex Ruhemanovy červeně (Ruheman, J. , J. Chem. Soc. 99, 707/1911/). Lineární vztah mezi intenzitou barevného komplexu a koncentrací aminokyselin a optimální vývoj zbarvení je zajišůován přítomností redukované formy ninhydrinu, hydrindantinu, v reakční směsi (Moore, S., Stein, W.H., 1948, J. Biol. Chem. 176, 367-388). Z odborné literatury je znám značný počet modifikací ninhydrinového činidla. Ve snaze zlepšit stabilitu a citlivost ninhydrinového systému byly zkoušeny různé ústroje, rozpouštědla a zejména různé redukující, látky, zajištující v systému vznik pro reprodukovatelný průběh reakce a optimální vývoj zbarvení nezbytné redukované formy ninhydrinu, hydrindantinu. Přidávání samotného hydrindantinu do systému sice svůj účel rovněž splní /Moore, S., Stein, W.H., 1954, J. Biol. Chem. 211, 907-913/, ale je pro jeho obtížnou dostupnost a vysokou cenu neekonomické. Různě obměňovány byly i koncentrace ninhydrinu a reakční teploty.Since the chemical reaction of ninhydrin with amino acids has been adapted to a fully automated assay system, attention has focused on optimizing the composition of the ninhydrin reagent, ensuring the desired stable linear relationship between the development of the characteristic color of the complex and the concentration of the substance. Reaction of amino acids with ninhydrin gives the color complex Ruheman red (Ruheman, J., J. Chem. Soc. 99, 707 (1911)). The linear relationship between color complex intensity and amino acid concentration and optimal color development is ensured by the presence of a reduced form of ninhydrin, hydrindanthine, in the reaction mixture (Moore, S., Stein, W.H., 1948, J. Biol. Chem. 176, 367-388). A number of modifications of the ninhydrin reagent are known in the art. In an effort to improve the stability and sensitivity of the ninhydrin system, various devices, solvents, and in particular various reducing agents have been tested, ensuring in the system the necessary reduced form of ninhydrin, hydrindanthine, for reproducible reaction and optimal color development. Although the addition of hydrindantine alone to the system also serves its purpose [Moore, S., Stein, W.H., 1954, J. Biol. Chem. 211, 907-913 /, but is uneconomical due to its difficult availability and high cost. Ninhydrin concentrations and reaction temperatures were also varied.
Jako rozpouštědlo byl zkoušen 2-methoxyethanol pufrovaný 4 N octanem sodným při pH 5,51 (Moore S., Stein, W.H., 1948, J.Biol. Chem. 176, 367-388), dimethylsulfoxid pufrovaný 4 N octanem lithným při pH 5,20 (Moore, S., 1968, J. Biol. Chem. 243, 6281-6283), dále pak tetramethylesulfon pufrovaný 4 N octanem lithným (Pickering, M.V., USP 4274833 /1981/) a ethylenglykol pufrovaný 4 N octanem sodným (Rausberg, P.H./1988/, Sborník z mezinárodní konference Analytika aminokyselin v zemědělství, Moskva 6.-7.4. 1988 /31 stran/).The solvent tested was 2-methoxyethanol buffered with 4 N sodium acetate at pH 5.51 (Moore S., Stein, WH, 1948, J. Biol. Chem. 176, 367-388), dimethyl sulfoxide buffered with 4 N lithium acetate at pH 5. , 20 (Moore, S., 1968, J. Biol. Chem. 243, 6281-6283), followed by 4 N lithium acetate buffered tetramethylesulfone (Pickering, MV, USP 4274833 (1981)) and 4 N sodium acetate buffered ethylene glycol ( Rausberg, PH / 1988 /, Proceedings of the International Conference Amino Acid Analytics in Agriculture, Moscow 6-7 April 1988/31 pages /).
Koncentrace ninhydrinu činí obvykle 2 % hmot., ale používá se i nižší. Užití reakční teploty je dáno konstrukcí reaktoru. Na rozdíl od reaktorů vodních jsou moderní kapilární reaktory vysokoteplotní, protože většina aminokyselin dosahuje maximálních hodnot barevného výtěžku při cca 125 °C.The ninhydrin concentration is usually 2% by weight, but lower ones are used. The use of reaction temperature is determined by the design of the reactor. Unlike water reactors, modern capillary reactors are high temperature, because most amino acids reach the maximum values of color yield at about 125 ° C.
K redukci ninhydrinu lze užít kyanidu draselného (Rosen, H., Berard, C.W., Levenson, S.M., 1962, Anal. Biochem. 4, 213-221,Potassium cyanide can be used to reduce ninhydrin (Rosen, H., Berard, C. W., Levenson, S. M., 1962, Anal. Biochem. 4, 213-221,
Schwerdtfeger, E., 1962, J. Chromatogr. 7, 418-419) nebo kyseliny askorbové či jejích solí (Abdehalden, R. Z. Physiol. Chem. 252, 89 /1938/; West, E.S., Rinehart, R.E., 1942, J. Biol. Chem. 146, 105-108). Obě uvedené látky však musejí být přítomny v extremně vysokém 5.10 M zredeni, pri kterem je obtížné udržet stabilitu činidla, protože dokonce již minutové působení kyslíku způsobuje velkou ztrátu schopnosti vyvíjet zbarvení. Přítomnost kyseliny askorbové v reakční směsi navíc vede k tvorbě artefaktů, které se na chromatogramu projevují negativně.Schwerdtfeger, E., 1962, J. Chromatogr. 7, 418-419) or ascorbic acid or its salts (Abdehalden, R. Z. Physiol. Chem. 252, 89 (1938); West, E.S., Rinehart, R.E., 1942, J. Biol. Chem. 146, 105-108). However, both of these substances must be present in an extremely high 5.10 M dilution, in which it is difficult to maintain the stability of the reagent, because even the action of oxygen for a minute causes a great loss of the ability to develop color. In addition, the presence of ascorbic acid in the reaction mixture leads to the formation of artifacts which have a negative effect on the chromatogram.
Úspěšné bylo užití chloridu cínatého jako redukční látky (Moore, S., Stein, W.H., 1948, J. Biol. Chem. 176, 67-388, Spackman, D.H., Stein, W.H., Moore, S., 1958, Anal. Chem. 30, 1190-1206). Činidlo však v průběhu stání vytváří bílou sraženinu cínatých solí, které zůstávají v zásobní nádrži, odkud se pak dostávají do průtočného systému analyzátoru a způsobují nepravidelnosti průtoku. V některých typech analyzátorů se proto zařazují do ninhydrinového průtočného systému filtry. Další nevýhodou tohoto systému je, že činidlo je k použití až po delší stání, kdy se zbarvení vyvíjí, prakticky se užívá až druhý den po přípravě (James, L.B., 1978, J. Chromatogr, 152, 298-300; Ibid 1984, 284, 97-103). ; The use of stannous chloride as a reducing agent has been successful (Moore, S., Stein, WH, 1948, J. Biol. Chem. 176, 67-388, Spackman, DH, Stein, WH, Moore, S., 1958, Anal. Chem. 30, 1190-1206). However, during standing, the reagent forms a white precipitate of tin salts, which remain in the storage tank, from where they enter the analyzer flow system and cause flow irregularities. In some types of analyzers, therefore, filters are included in the ninhydrin flow system. Another disadvantage of this system is that the agent is only available for use after prolonged standing, when the color develops, and is practically not used until the second day after preparation (James, LB, 1978, J. Chromatogr, 152, 298-300; Ibid 1984, 284 , 97-103). ;
Chlorid titanitý, užitý jako redukční látka (James, L.B., 1971, J. Chromatogr. 59, 178-180), přináší výhody rychlejší přípravy a užití, činidlo je použitelné již i 30 minut po připravení. Nevýhodou však je možná tvorba oxidů titanu, zejména oxidu titaničitého, který je nerozpustný dokonce i v silných kyselinách. Dalším nedostatkem je nutnost spektrofotometrické kontroly redukčního potenciálu chloridu titanitého před jeho užitím k. přípravě činidla.Titanium trichloride, used as a reducing agent (James, L.B., 1971, J. Chromatogr. 59, 178-180), offers the advantages of faster preparation and use, the reagent is usable even 30 minutes after preparation. However, the disadvantage is the possible formation of titanium oxides, in particular titanium dioxide, which is insoluble even in strong acids. Another disadvantage is the need for spectrophotometric control of the reduction potential of titanium trichloride before it is used to prepare the reagent.
Velmi stabilní ninhydrinové činidlo, které netvoří precipitáty, bylo získáno redukcí ninhydrinu in situ tetrahydroboratem sodným v dimethylsulfoxidu (Moore, S., 1968, J. Biol. Chem. 243, 6281-6283). Užití tetrahydroboratu sodného jako redukční látky ve spojení s dimethylsulfoxidem jako rozpouštědlem a se 4 N lithiumacetátovým pufrem o pH 5,2 k přípravě ninhydrinového činidla pro automatické analyzátory aminokyselin (Takahashi, S., 1978, J. Biochem. 83., 57-60) je také předmětem japonské patentové přihlášky 81-55 853 (1979). V ní uvedeným postupem se sice podaří získat velmi stabilní ninhydrinové činidlo, jeho užití je však limitováno závažným nedostatkem, spočívajícím ve výrazném posunu základní linie při stanovení bazických aminokyselin. Uvedená skutečnost je autory vysvětlována ovlivněním tvorby zbarvení reakční směsi za vysokých hodnot pH, tj. pH vyšších než 8, tj. v případě pufrů používaných k eluci bazických aminokyselin. Navrhují kompromisní opatření, kterým je zvýšení základní linie v bazické oblasti chromatogramu možné částečně eliminovat. Navržený postup spočívá v užití nižší než limitní, to je optimální koncentrace tetrahydroboratu sodného, avšak za současného snížení barevného výtěžku pro všechny aminokyseliny. Alternativním postupem je současné snížení obsahu ninhydrinu a tetrahydroboratu v činidle asi na polovinu, přičemž je zvýšit třeba průtok ninhydrinového činidla tak, aby byl stejný jako průtok elučního pufru. Oba uvedené postupy umožňují použití uvedeného systému i pro analýzu bazic kých aminokyselin, ale s tím, že dosažené zvýšení základní linie ovlivňuje jednak nepříznivě přesnost stanovení v oblasti bazických aminokyselin, jednak způsobuje snížení barevného výtěžku a tím i citlivost metody - barevný výtěžek klesá u jednotlivých aminokyselin cca od 15 do 40 %.A very stable ninhydrin reagent, which does not form precipitates, was obtained by in situ reduction of ninhydrin with sodium tetrahydroborate in dimethyl sulfoxide (Moore, S., 1968, J. Biol. Chem. 243, 6281-6283). Use of sodium tetrahydroborate as a reducing agent in combination with dimethyl sulfoxide as a solvent and 4 N lithium acetate buffer pH 5.2 to prepare a ninhydrin reagent for automated amino acid analyzers (Takahashi, S., 1978, J. Biochem. 83., 57-60) is also the subject of Japanese Patent Application 81-55 853 (1979). Although a very stable ninhydrin reagent can be obtained by the above procedure, its use is limited by a serious drawback, which consists in a significant shift of the baseline in the determination of basic amino acids. This fact is explained by the authors by influencing the color formation of the reaction mixture at high pH values, i.e. pH higher than 8, i.e. in the case of buffers used for the elution of basic amino acids. They propose a compromise measure by which the increase of the baseline in the basic area of the chromatogram can be partially eliminated. The proposed procedure consists in using a lower than the limit, i.e. the optimal concentration of sodium tetrahydroborate, but at the same time reducing the color yield for all amino acids. An alternative procedure is to simultaneously halve the content of ninhydrin and tetrahydroborate in the reagent, increasing the flow rate of ninhydrin reagent to the same as the flow rate of the elution buffer. Both methods allow the use of the system for the analysis of basic amino acids, but with the fact that the increase in baseline affects the accuracy of determination in the field of basic amino acids, causes a decrease in color yield and thus the sensitivity of the method - color yield decreases for individual amino acids about 15 to 40%.
Cílem vynálezu je odstranit výše uvedené nedostatky řešení, které představuje současný stav techniky v tomto oboru. Vynález je založen na poznatku, že tvorba barevného komplexu v bazické oblasti je negativně ovlivněna oxidativními vlastnostmi rozpouštědla - dimethylsulfoxidu, který za daných reakčních podmínek působí kompetitivně vůči tetrahydroboratu sodnému jako redukující složce ninhydrinu při tvorbě komplexu, a že tedy dimethylsulfoxid jako rozpouštědlo je třeba v systému nahradit rozpouštědlem jiným, nevykazujícím zmíněné nepříznivé vlastnosti, a v souvislosti s tím složení nového ninhydrinového činidla pro praktické použití v automatických analyzátorech aminokyselin optimalizovat.The object of the invention is to eliminate the above-mentioned drawbacks of the solution which represents the current state of the art in this field. The invention is based on the finding that the formation of a color complex in the basic region is adversely affected by the oxidative properties of solvent - dimethyl sulfoxide, which under given reaction conditions acts competitively against sodium tetrahydroborate as a reducing component of ninhydrin in complex formation, and that dimethyl sulfoxide as a solvent to replace the solvent with another, which does not show the mentioned unfavorable properties, and in this connection to optimize the composition of the new ninhydrin reagent for practical use in automatic amino acid analyzers.
Vytčeného cíle bylo dosaženo a předmětem vynálezu je ninhydrinové činidlo ke stanovení aminokyselin, zejména v automatických analyzátorech aminokyselin, jehož podstata spočívá v tom, že činidlo obsahuje v jednom litru 8 až 20 g ninhydrinu, 250 až 500 ml ústojného roztoku o hodnotě pH v rozmezí hodnot 5,3 až 5,7, například sodnooctanového pufru, 500 až 750 ml 2-methoxyethanolu a 3.10 az 9.10 g tetrahydroboratu sodného.The object is achieved and the object of the invention is a ninhydrin reagent for the determination of amino acids, in particular in automatic amino acid analyzers, the essence of which consists in that the reagent contains in one liter 8 to 20 g of ninhydrin, 250 to 500 ml of buffer solution with pH value in values 5.3 to 5.7, for example sodium acetate buffer, 500 to 750 ml of 2-methoxyethanol and 3.10 to 9.10 g of sodium tetrahydroborate.
Předností ninhydrinového činidla podle vynálezu je, že při zachování všech výhod známých činidel s tetrahydroboratem jako redukční látkou nevykazuje nežádoucí posun - zvýšení základní linie při stanovení bazických aminokyselin při hodnotách pH vyšších než 8, který se projevuje u popsaného ninhydrinového činidla s dimethylsulfoxidem jako rozpouštědlem a s lithiumacetátovým pufrem. Tato skutečnost dobře dokumentuje obr. č. 1, který znázorňuje srovnání detekce 17 aminokyselin hydrolyzátového programu za použití ninhydrinového činidla podle vynálezu a ninhydrinového činidla, připraveného podle japonské patentové přihlášky 81-55 853.The advantage of the ninhydrin reagent according to the invention is that, while retaining all the advantages of the known reagents with tetrahydroborate as reducing agent, it does not show an undesirable shift - baseline increase in basic amino acid determinations at pH values higher than 8. buffer. This is well documented in Fig. 1, which shows a comparison of the detection of 17 amino acids of a hydrolyzate program using a ninhydrin reagent of the present invention and a ninhydrin reagent prepared according to Japanese Patent Application 81-55,853.
Předmětem vynálezu je rovněž způsob přípravy ninhydrinového činidla, jehož podstata spočívá v tom, že v předloženém rozpouštědle - 2-methoxyethanolu, zbaveném kyslíku probubláváním inertním plynem, například žárovkárenským dusíkem nebo argonem, se za míchání a stálého přívodu inertního plynu postupně a v uvedeném pořadí rozpustí ninhydrin a tetrahydroborat sodný, ke vzniklému roztoku se přidá paralelně připravený a kyslíku zbavený ústojný roztok a v přivádění inertního plynu se pokračuje až do odstranění posledních stop kyslíku ze systému.The invention also relates to a process for the preparation of a ninhydrin reagent which consists in gradually dissolving in the present solvent-2-methoxyethanol, deoxygenated by bubbling an inert gas, for example incandescent nitrogen or argon, gradually and in that order with stirring and constant supply of inert gas. ninhydrin and sodium tetrahydroborate, a buffer solution prepared in parallel and deoxygenated is added to the resulting solution, and the inert gas supply is continued until the last traces of oxygen are removed from the system.
Ninhydrinové činidlo připravené způsobem podle vynálezu netvoří v průtočném systému analyzátoru sraženiny. Na rozdíl od obdobných činidel jiného složení není zapotřebí čekat na jeho dozrání. Činidlo je velmi stabilní - při 20 °C více než 1 měsíc, při 4 °C, tj. při teplotě chladícího prostoru automatického analyzátoru aminokyselin, je lze použít i po tříměsíčním skladování.The ninhydrin reagent prepared by the process of the invention does not form precipitates in the flow analyzer system. Unlike similar reagents of a different composition, there is no need to wait for it to mature. The reagent is very stable - at 20 ° C for more than 1 month, at 4 ° C, ie at the temperature of the cooling space of the automatic amino acid analyzer, it can be used even after three months of storage.
Způsob přípravy ninhydrinového činidla podle vynálezu de tailněji objasňuje níže uvedený příklad provedení.The process for preparing the ninhydrin reagent of the present invention is further illustrated by the following example.
Do zásobní nádrže ninhydrinové baterie analyzátoru, z níž se pětiminutovým vyháněním žárovkárenského dusíku odstraní kyslík, se předloží 1,5 1 2-methoxyethanolu, ze kterého se 20 minutovým probubláváním dusíku rovněž odstraní kyslík. Pak se přidá 30 g ninhydrinu, který se za pokračujícího probublávání dusíkem rozpustí. Současně se na teflonovém filmu naváží 0,120 g tetrahydroboratu sodného a navážené množství se po rozpuštění ninhydrinu spolu s teflonovým filmem vnese do zásobní nádrže. Směs se dále míchá na magnetické míchačce po dobu 30 minut za stálého převodu dusíku. Potom se přidá předem připravený 4 N sodnooctanový pufr o pH 5,5 v množství 0,5 1, z něhož byl 10 minutovým probubláváním odstraněn kyslík. Po přídavku tetrahydroboratu sodného se barva roztoku postupně mění ze žluté do červené a po přidání pufru až do purpurové. Finální roztok se ještě 15 až 20 minut probublává dusíkem do odstranění posledních stop kyslíku. Tím je činidlo připraveno k analýze.1.5 L of 2-methoxyethanol, from which oxygen is also removed by bubbling nitrogen for 20 minutes, is introduced into the analyzer's ninhydrin battery storage tank, from which oxygen is removed by expelling the filament lamp for 5 minutes. 30 g of ninhydrin are then added, which dissolves while continuing to purge with nitrogen. At the same time, 0.120 g of sodium tetrahydroborate is weighed on the Teflon film and the weighed amount is introduced into a storage tank after dissolving the ninhydrin together with the Teflon film. The mixture was further stirred on a magnetic stirrer for 30 minutes under a constant transfer of nitrogen. A pre-prepared 4 N sodium acetate buffer, pH 5.5, was then added in an amount of 0.5 L, from which oxygen was removed by bubbling for 10 minutes. After the addition of sodium tetrahydroborate, the color of the solution gradually changes from yellow to red and after the addition of buffer to purple. The final solution is purged with nitrogen for another 15 to 20 minutes until the last traces of oxygen are removed. This prepares the reagent for analysis.
Pro rutinní použití je vhodné činidlo uchovávat v chlazeném prostoru analyzátoru, není to však vysloveně nutné.For routine use, it is convenient to store the reagent in the refrigerated compartment of the analyzer, but this is not strictly necessary.
Claims (2)
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CS894707A CS277459B6 (en) | 1989-08-08 | 1989-08-08 | Ninhydrin reagent and process for its preparation |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CS894707A CS277459B6 (en) | 1989-08-08 | 1989-08-08 | Ninhydrin reagent and process for its preparation |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CS470789A3 CS470789A3 (en) | 1992-02-19 |
| CS277459B6 true CS277459B6 (en) | 1993-03-17 |
Family
ID=5390451
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CS894707A CS277459B6 (en) | 1989-08-08 | 1989-08-08 | Ninhydrin reagent and process for its preparation |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CS (1) | CS277459B6 (en) |
-
1989
- 1989-08-08 CS CS894707A patent/CS277459B6/en unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CS470789A3 (en) | 1992-02-19 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Schade et al. | Bound iron and unsaturated iron-binding capacity of serum; rapid and reliable quantitative determination | |
| Bergman et al. | New spectrophotometric method for the determination of proline in tissue hydrolyzates | |
| Kessler et al. | An automated procedure for the simultaneous determination of calcium and phosphorus | |
| Morgan | Studies on the mechanism of iron release from transferrin | |
| Sluyterman | Photo-oxidation, sensitized by proflavine, of a number of protein constituents | |
| McGown et al. | Tissue ascorbic acid analysis using ferrozine compared with the dinitrophenylhydrazine method | |
| US4308027A (en) | Method and composition for direct determination of iron in blood serum | |
| Matheson et al. | Quantitative chromatographic methods: part 5. An improved ninhydrin–hydrindantin reagent | |
| Fearon | The detection and estimation of uric acid by 2: 6-dichloroquinone-chloroimide | |
| Araiso et al. | Horseradish peroxidase. XLI. Complex formation with nitrate and its effect upon compound I formation | |
| US4683208A (en) | Method for the determination of bilirubin | |
| Nishiyama et al. | Assay of biological thiols by a combination of high-performance liquid chromatography and postcolumn reaction with 6, 6′-dithiodinicotinic acid | |
| JPH0331391B2 (en) | ||
| US5597702A (en) | Automated lead assay | |
| Giraudi et al. | Direct spectrophotometric determination of thiocyanate in serum and urine with a continuous-flow analyzer | |
| CS277459B6 (en) | Ninhydrin reagent and process for its preparation | |
| EP0061793B1 (en) | Method for preparing a chromogen reactive for determining the serum iron concentration and binding power, and the chromogen reactive obtained thereby | |
| McGahan et al. | A micromethod for the determination of iron and total iron-binding capacity in intraocular fluids and plasma using electrothermal atomic absorption spectroscopy | |
| JP2694004B2 (en) | Method for measuring fructosamine in serum or plasma | |
| CA1334925C (en) | Process for the determination of thyroxine and a suitable standard solution therefor | |
| Mokrasch | Spectrophotometric determination of phosphate in the presence of highly labile phosphorus compounds | |
| US4030885A (en) | Bilirubin determination | |
| Headridge | Photometric titrations | |
| Lamb | Direct quantitative determination of nicotinamide in vitamin mixtures | |
| Versée et al. | Rat α-foetoprotein. Purification, physicochemical characterization, oestrogen-binding properties and chemical modification of the thiol group |