CS276805B6

CS276805B6 - Method for stabilizing folate

Info

Publication number: CS276805B6
Application number: CS221790A
Authority: CS
Inventors: Jitka Dipl Chem Cerna; Kamila Rndr Csc Pristoupilova; Milan Rndr Csc Kodicek; Marcela Spundova
Original assignee: Jitka Dipl Chem Cerna; Kamila Rndr Csc Pristoupilova; Milan Rndr Csc Kodicek; Marcela Spundova
Priority date: 1990-05-04
Filing date: 1990-05-04
Publication date: 1992-08-12
Also published as: CS9002217A2

Abstract

Řešení spadá do oblasti farmaceutického průmyslu. Obsahuje způsob stabilizace labilních folátů, tj. derivátů kyseliny listové, které tvoří většinu členů vitaminové skupiny folacin. Spočívá v šetrné dehydrataci vodných roztoků folátů nebo jejich solí se sacharidy za vzniku ve vodě rozpustných komplexů, které ' jsou výrazně stabilnější než výchozí foláty. Zvláště stabilní komplexy vznikají za těchto podmínek vazbou na laktosu přimo v mléce, kde působí jako další stabilizátory bílkoviny. Reakce probíhá v roztoku o hmotnostním poměru 10-2 až 10'6 g folátů na 1 g sachari du. Tímto postupem je možno připravit lékovou formu biologicky vysoce účinných látek.The solution falls within the field of pharmaceutical industry. It includes a method of stabilizing labile folates, i.e. folic acid derivatives, which constitute most members of the folacin vitamin group. It consists in the gentle dehydration of aqueous solutions of folates or their salts with carbohydrates to form water-soluble complexes, which are significantly more stable than the starting folates. Particularly stable complexes are formed under these conditions by binding to lactose directly in milk, where they act as additional protein stabilizers. The reaction takes place in a solution with a mass ratio of 10-2 to 10'6 g of folates per 1 g of carbohydrate. This procedure makes it possible to prepare a dosage form of biologically highly active substances.

Description

Vynález se týká postupu přípravy komplexů látek folátové struktury pro zvýšení jejich stability.The invention relates to a process for the preparation of complexes of substances of folate structure to increase their stability.

Foláty jsou deriváty kyseliny listové, které se vyskytují v přírodě většinou jako labilní di- a tetrahydroderiváty této látky- Ty z nich, které se vyznačují biologickou aktivitou pro Člověka, jsou zahrnuty do početné vitaminové skupiny zvané folacin. Základní strukturní skelet těchto látek tvoří kyselina p-aminobenzoylglutamová Cl) a pteridinové jádro (II).Folates are derivatives of folic acid, which occur in nature mostly as labile di- and tetrahydroderivatives of this substance. Those of them, which are characterized by biological activity for humans, are included in a numerous vitamin group called folacin. The basic structural skeleton of these substances consists of p-aminobenzoylglutamic acid (Cl) and the pteridine nucleus (II).

Jedním z fysiologicky nejdůležitějších folátů pro člověka je například kyselina N⁵-methyltetrahydrolistová (dále mTHF). Převažuje v lidské krvi, tj. v krevním séru a v červených krvinkách, dále v mléce a v této formě přechází i do mozku. Pro svoji vysokou labilitu vůči oxidaci vzdušným kyslíkem nebyla dosud mTHF vyrobena v lékové formě. V zahraničí je ha trhu jako diaster.eoisómér (obě formy v poměru 1=1) Ca nebo Ba soli v zatavených ampulích, plněných pod dusíkem, které slouží jen pro biochemické účely Nedostatek folacinu v lidském organismu se dosud léčí jen vysokými dávkami kyseliny listové nebo leukovorinu (formyl mTHF). Obě látky se však zde musejí převést enzymově na fysiologicky účinné formy. Pro léčení celé rady poruch metabolismu tohoto vitaminu, at již vrozených nebo získaných, by stabi1isovaná forma mTHF i popřípadě dalších labilních folátů mohla být i v malých dávkách účinněji využita než dosud užívaná kyselina listová nebo leukovorin.One of the most physiologically important folates for humans is, for example, N ⁵ -methyltetrahydrofolic acid (hereinafter mTHF). It predominates in human blood, ie in blood serum and red blood cells, as well as in milk and in this form also passes into the brain. Due to its high lability to oxidation by atmospheric oxygen, mTHF has not yet been produced in dosage form. Abroad, it is marketed as a diastereoisomer (both forms in a ratio of 1 = 1) Ca or Ba salts in sealed ampoules, filled under nitrogen, which are used only for biochemical purposes. leucovorin (formyl mTHF). However, both substances have to be enzymatically converted into physiologically active forms. For the treatment of a wide range of disorders of the metabolism of this vitamin, whether congenital or acquired, the stabilized form of mTHF and possibly other labile folates could be used more effectively even in small doses than the folic acid or leucovorin used hitherto.

Předmětem vynálezu je způsob stabilisace labilních folátů šetrnou dehydratací vodných roztoku těchto látek samotných nebo jejich solí, spolu se sacharidy za vzniku stabilního, ve vodě rozpustného komplexu. Reakce probíhá za použití mono-, di- nebo polysacharidů, jakož i maltodextrinů. Zvláště stabilní komplexy folátů lze při dehydrataci vytvořit jejich vazbou na laktosu v mléce o libovolné tučnosti. Předpokládáme, že stabi1Isujícím faktorem jsou zde přítomné bílkoviny. V tomto případě je z fysiologického hlediska vhodné mléko zakysané kulturou bakterií propionového kvašení, při kterém je do mléka produkována přirozená forma vitaminu B12 a ten usměrní využití folacinu jako donoru jednouhlíkového zbytku v organismu.The present invention relates to a process for stabilizing labile folates by gently dehydrating aqueous solutions of these substances themselves or their salts, together with carbohydrates, to form a stable, water-soluble complex. The reaction takes place using mono-, di- or polysaccharides as well as maltodextrins. Particularly stable folate complexes can be formed during dehydration by binding to lactose in milk of any fat content. We hypothesize that the proteins present are a stabilizing factor. In this case, from a physiological point of view, milk acidified by a culture of propionic fermentation bacteria is suitable, in which a natural form of vitamin B12 is produced into the milk, which regulates the use of folacin as a donor of a carbon residue in the body.

CS 276805 Β6CS 276805 Β6

Nej běžnější způsob šetrné dehydratace je sublimační sušení nebo sušení ve vakuu do 60 °C. Sublimačně sušené preparáty se připravují tak, že se ve vhodném poměru rozpustí v destilované vodě folát nebo jeho sílí a sacharidická složka. Roztoky se namrazí na stěnu nádoby v tenké vrstvě a dále podrobí sublimačnímu sušení. U preparátu na bázi mléka se roztok folátu nebo jeho soli promíchá s pasterovaným mlékem, popřípadě s mlékem zakysaným po pasterizaci aktivovanou kulturou Prop ionibacterium shermanii. Postup přípravy vzorku pro sublimační sušení je stejný jak bylo uvedeno pro komplexy se samotnými sacharidy.The most common method of gentle dehydration is freeze-drying or vacuum drying up to 60 ° C. Freeze-dried preparations are prepared by dissolving folate or its strength and the saccharide component in distilled water in a suitable ratio. The solutions are frozen on the wall of the vessel in a thin layer and further subjected to freeze-drying. In the case of a milk-based preparation, the folate solution or its salt is mixed with pasteurized milk or with sour milk after pasteurization with an activated culture of Prop ionibacterium shermanii. The procedure for sample preparation for freeze-drying is the same as for complexes with carbohydrates alone.

Stabilita a výtěžnost komplexu na bázi samotných sacharidů je závislá na vzájemném koncentračním poměru obou složek v roztoku před sušením. Reakce probíhá v roztoku o hmotnostním poměru 10“^ až 10 ⁶ g folátu na jeden gram látky sacharidické povahy Na připojeném výkrese je znázorněný graf stability mTHF a jejích komplexu s laktosou při 4 °CKřivka 1 - Ca sůl mTHFThe stability and yield of the complex based on carbohydrates alone depend on the mutual concentration ratio of the two components in solution before drying. The reaction takes place in a solution with a weight ratio of 10 "to 10 ⁶ g of folate per gram of carbohydrate substance. The attached drawing shows a graph of the stability of mTHF and its complex with lactose at 4 ° C. Curve 1 - Ca salt of mTHF

- preparát s 1 mg mTHF/g laktosy- preparation with 1 mg mTHF / g lactose

- preparát s 1 mg mTHF/G sušeného propionového mléka-- preparation with 1 mg mTHF / G dried propionated milk

Obsah mTHF byl u všech stanoven diferenčním mikrobiologickým testem s Lactobacillus easel a Streptococcus faecal is.The mTHF content of all was determined by a differential microbiological test with Lactobacillus easel and Streptococcus faecal is.

Příklad č. 1= Příprava sublimačně sušeného preparátu na bázi laktosy .Example No. 1 = Preparation of a freeze-dried lactose-based preparation.

V 500 ml vody se rozpustí 20 g laktosy a přidá se čerstvě připravená reakční směs, obsahující 20 mg mTHF (směs diastereoisomeru). Po jejím rozpuštění a důkladném promíchání se vodný roztok rozlije po cca 150 ml do 500 ml baněk a za rotace se v mrazicí lázni namrazi na stěny nádob. Potom se usuší na sublimačním zařízení. Konečný preparát obsahuje v 1 g 1 mg mTHF.20 g of lactose are dissolved in 500 ml of water and a freshly prepared reaction mixture containing 20 mg of mTHF (diastereoisomer mixture) is added. After dissolving and thoroughly mixing, the aqueous solution is poured into about 500 ml flasks into 500 ml flasks and frozen on the walls of the vessels in a freezing bath while rotating. It is then dried on a sublimation device. The final preparation contains 1 mg of mTHF in 1 g.

Příklad č. 2= Příprava sublimačně sušeného preparátu na bázi mléK 3 000 ml mléka o 2 % tučnosti o sušině cca 10 % se přidá čerstvě připravená reakční směs, obsahující 300 mg směsi diastereoisomerů Ca soli mTHF a důkladně se promíchá. Mléko se rozlije po 150 ml do 500 ml baněk a za rotace se v mrazicí lázni namrazi na stěny nádob. Potom se usuší na sublimačním zařízení. Konečný preparát obsahuje v 1 g 1 mg mTHF.Example No. 2 = Preparation of a freeze-dried milk-based preparation 3,000 ml of milk with 2% fat content and a dry matter content of about 10% are added to a freshly prepared reaction mixture containing 300 mg of a mixture of diastereoisomers of the Ca salt of mTHF and mixed thoroughly. The milk is poured in 150 ml bottles into 500 ml flasks and frozen on the walls of the containers in a freezing bath while rotating. It is then dried on a sublimation device. The final preparation contains 1 mg of mTHF in 1 g.

Stabilita dvou typů preparátů, tj. s čistou laktosou a s laktosou v mléce, připravených na bázi Ca-soli mTHF, je uvedena v přiloženém grafu ve srovnání se stabilitou samotné Ca-soli tohoto folátu. Obsah aktivní složky mTHF v komplexu činí u obou preparátů 1 mg/g laktosy. Z průběhu křivek je patrno, že zatímco samotná sul mTHF se na vzduchu rozloží již prakticky po 2 měsících skladování při 4 °C, zachovává si preparát na bázi čisté laktosy po 5 měsících za stejných podmínek skladování ještě 50 % původní aktivity. Zvlášt vynikající je potom stabilita preparátu na bázi propionového mléka, kterýsi za sledovaných podmí nek zachovává původní obsah po dobu 6 měsíců.The stability of the two types of preparations, i.e. pure lactose and lactose in milk, prepared on the basis of the Ca-salt of mTHF, is shown in the attached graph in comparison with the stability of the Ca-salt of this folate alone. The content of the active ingredient mTHF in the complex is 1 mg / g lactose in both preparations. It can be seen from the curves that while the mTHF salt itself decomposes in air after practically 2 months of storage at 4 ° C, the pure lactose preparation retains another 50% of its original activity after 5 months under the same storage conditions. The stability of the propionic milk-based preparation, which retains its original content for 6 months under the monitored conditions, is particularly excellent.

V praxi mají oba typy stabi 1isovaných preparátů folátů své specifické využití. Komplexy na bázi čistých sacharidů jsou vhodné pro parenterální použití s tím, že se v suchém stavu rozplní do ampul i nebo pěnic i 1 lnových lahviček evakuovaných nebo plněných pod dusíkem. Těsně před použitím se rozpustí po vstřiknutí sterilního fysiologického roztoku, v němž komplexy folátů jsou stálé cca 2 h, a to bez přídavku stabilizátoru- Preparáty na bázi mléka, které vykazují podstatně vyšší stabilitu, jsou vhodné pro perorální použití. Vynález tedy umožní aplikaci labilních derivátů kyseliny listové v lékové formě, což dosud možné nebylo.In practice, both types of stabilized folate preparations have their specific use. Complexes based on pure carbohydrates are suitable for parenteral use, in which they are filled in the dry state into ampoules or foam bottles of 1 ln vials evacuated or filled under nitrogen. It is dissolved immediately before use after injection of sterile saline in which the folate complexes are stable for about 2 hours, without the addition of a stabilizer. Milk-based preparations, which show significantly higher stability, are suitable for oral use. Thus, the invention will allow the application of labile folic acid derivatives in dosage form, which has not been possible so far.

Claims

PATENT CLAIMS

Process for stabilizing folates, characterized in that folates, for example N ⁵ -methyltetrahydrofolic acid, alone or in the form of their salts are mixed in aqueous solution with substances of a saccharide nature in a weight ratio of 10 ² to 10 ^-6 g of folates per 1 g of saccharide lactose in aqueous solution or milk, followed by dehydration at a temperature of up to 60 ° C in the absence of air.