CS272329B1 - Enzymový reaktor pro stanovení'močoviny - Google Patents
Enzymový reaktor pro stanovení'močoviny Download PDFInfo
- Publication number
- CS272329B1 CS272329B1 CS88439A CS43988A CS272329B1 CS 272329 B1 CS272329 B1 CS 272329B1 CS 88439 A CS88439 A CS 88439A CS 43988 A CS43988 A CS 43988A CS 272329 B1 CS272329 B1 CS 272329B1
- Authority
- CS
- Czechoslovakia
- Prior art keywords
- enzyme
- urease
- urea
- enzyme reactor
- determination
- Prior art date
Links
Landscapes
- Immobilizing And Processing Of Enzymes And Microorganisms (AREA)
Abstract
Enzymový reaktor Ja tvořan trubičkou nebo hadičkou, v níž je na částice porézního skla potaženého polyglycidylmethakrylátovým gólem imobilizovana ureasa kovalontní vazbou po přímé ohomioké reekol onzymu o reaktivními epnxyskupinaml polymeru,
Description
Vynález se týká enzymového reaktoru pro stanovení močoviny na bázi imobilizované ureasy.
Velké možnosti využití enzymů v analytické chemii jsou dány vysokou substrátovou a účinkovou specifitou enzymů a dále jejich schopností katalyzovat reakce při velmi nízkých koncentracích substrátů. Širšímu·uplatnění enzymových metod v běžné analytické praxi však do značné míry brání poměrně vysoká cena enzymů, a tím i enzymových stanovení. Tento problém je postupně řešen náhradou rozpustných enzymů imobilizovanými enzymy použitelnými pro velký počet analys.
Vedle přesnosti a citlivosti jsou v mnoha oblastech analytické chemie, zvláště potom v klinické diagnostice, kladeny velké požadavky na rychlost analysy automatizace. Z tohoto hlediska je velmi atraktivní poměrně nová metoda průtokové injekční analysy. Tento analytický postup ve spojení s enzymovou katalysou umožňuje oddělit vlastní enzymovou reakci uskutečňovanou pomocí heterogenního biokatalyzátoru a následnou detekci vzniklých reakč- * nich produktů at již na bázi kolorimetrického elektrochemického nebo jiného způsobu stanovení. V tomto uspořádání je možno provádět diagnosticky velmi důležitá stanovení močoviny ve fyziologických tekutinách. Stanovení je založeno na rozkladu močoviny pomocí imobilizované ureasy a na následné detekci vzniklého amoniaku elektrochemicky pomocí skleněné pH elektrody selektivní na NH* inoty nebo jiné amonné elektrody.
Nejdůležitějším faktorem determinujícím možnosti širšího uplatnění uvedeného enzymového rekatorového systému je stabilita imobilizované ureasy. Na stabilitu imobilizovaného enzymu má vliv celá řada faktorů, z nichž největší význam mají způsob imobilizace a podmínky provozu. Problematice imobilizace ureasy byla věnována značná pozornost. Byla vypracována celá řada technik především kovalentní vazby ureasy na různé nosiče (viz například Chibata I.: Immobilized Enzymes, Research and Development, Kodansha, Tokyo (1978), Wiseman A.: Handbook of Enzyme Biotechnology, Ellis Horwood, Chichester (1975)). Přes veškeré toto úsilí zůstává otázka reaktoru s imobilizovanou ureasou, který by vyhovoval jak z hlediska rigidity systému, hydrodynamických vlastností, dostatečné enzymové aktivity a především stability imobilizované ureasy, stále otevřená.
Uvedené nevýhody odstraňuje enzymový reaktor, obsahující částice porézního skla potaženého polyglycidylmethakrylátovým gelem pro stanovení močoviny na bázi imobilizované ureasy podle vynálezu, jehož podstata spočívá v tom, že je tvořen trubičkou nebo hadičkou, ve které je na částice porézního skla potaženého polyglycidylmethakrylátovým gelem imobilizována ureasa kovalentní vazbou po přímé chemické reakci enzymu s reaktivními epoxyskupinami polymeru. Enzymový reaktor lze používat ve spojení s následnou elektrochemickou detekcí vzniklého amoniaku nebo s jeho kolorimetrickým stanovením po smíchání reagujících komponent (fenolátů s chlornanem). '
Výhodou enzymového reaktoru na stanovení močoviny podle vynálezu je vedle experimentální jednoduchosti jeho přípravy především vysoká stabilita umožňující provádět během dvou měsíců kolem tisíce analys, po kterých poklesne aktivita cca o 35 což umožňuje s ohledem na kapacitní rezervu imobilizované ureasy pokračující využívání rekatoru při dalších analysách.
Vynález je dokumentován příkladem použití, aniž by se jím omezoval.
Příklad provedení g porézního skla potaženého polyglycidalmethakrylátem byl smíchán se 100 mg ureasy ve 40 ml 0,05 M fosfátového pufru pH 6,9, 20 ,umol Na-EDTA a 5 ,umol 2-merkaptoetanolu.
Q ‘ '
Směs byla třepána 16 h při 20 C. Po ukončení vazebné reakce byl nosič s navázaným enzymem promýván střídavě pufrem použitým pro vazebnou reakci a tímtéž pufrem obsahujícím 1 M NaCl. Aktivita připraveného preparátu imobilizované ureasy byla 1,95 nkat/mg vlhkého nosiče. Preparát byl skladován při 4 °C.
•
CS 272329 Bl 2
Připravený heterogenní biokatalyzátor byl použit ve formě enzymového reaktoru pro stanovení můčoviny v systému průtokové injekční analysy.
Claims (1)
- PŘEDMĚT VYNÁLEZUEnzymový reaktor, obsahující částice porézního skla potaženého polyglycidylmethakrylátovým gelem pro stanovení močoviny na bázi imobilizované ureasy, vyznačující se tím, že je tvořen trubičkou nebo hadičkou, ve které je na částice porézního skla potaženého polyglycidylmethakrylátovým gelem imobilizována ureasa kovalentní vazbou po přímé chemické reakci enzymu s reaktivními epoxyskupinami polymeru.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CS88439A CS272329B1 (cs) | 1988-01-22 | 1988-01-22 | Enzymový reaktor pro stanovení'močoviny |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CS88439A CS272329B1 (cs) | 1988-01-22 | 1988-01-22 | Enzymový reaktor pro stanovení'močoviny |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CS43988A1 CS43988A1 (en) | 1990-05-14 |
| CS272329B1 true CS272329B1 (cs) | 1991-01-15 |
Family
ID=5336454
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CS88439A CS272329B1 (cs) | 1988-01-22 | 1988-01-22 | Enzymový reaktor pro stanovení'močoviny |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CS (1) | CS272329B1 (cs) |
-
1988
- 1988-01-22 CS CS88439A patent/CS272329B1/cs unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CS43988A1 (en) | 1990-05-14 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CA1056746A (en) | Biologically active membrane material | |
| Zhang et al. | Recent developments and applications of chemiluminescence sensors | |
| Cullen et al. | Multi-analyte miniature conductance biosensor | |
| EP0152886A2 (en) | Immobilized nucleic acid-containing probes | |
| Mascini et al. | Clinical uses of enzyme electrode probes | |
| Brooks et al. | Biosensors for process control | |
| Duan et al. | Immobilization of proteins on gold coated porous membranes via an activated self-assembled monolayer of thioctic acid | |
| Palchetti et al. | Biosensor technology: a brief history | |
| Lv et al. | Chemiluminescence biosensor chip based on a microreactor using carrier air flow for determination of uric acid in human serum | |
| Inman et al. | Preparation of some immobilized linked enzyme systems and their use in the automated determination of disaccharides | |
| US4169765A (en) | Apparatus for the quantitative determination of α-amylase | |
| US4172765A (en) | Method for the quantitative determination of alpha-amylase | |
| Kobos | Potentiometric enzyme methods | |
| CS272329B1 (cs) | Enzymový reaktor pro stanovení'močoviny | |
| Geckeler et al. | Polymer materials in biosensors | |
| Chirillo et al. | The use of immobilized enzyme reactors in continuous-flow analyzers for the determination of glucose, urea, and uric acid. | |
| Kiang et al. | Measurement of glucose in plasma, with use of immobilized glucose oxidase and peroxidase. | |
| Werner et al. | Immobilized enzymes in continuous-flow analysis. | |
| Everse et al. | Immobilized enzymes in biochemical analysis | |
| Barabino et al. | Coupled reactions of immobilized enzymes and immobilized substrates: clinical application as exemplified by amylase assay. | |
| Stiefel et al. | Comparison of human pancreatic and parotid amylase activities on different substrates | |
| EP0416419A2 (en) | Immobilized alcohol oxidase, method for its preparation and measuring apparatus | |
| Joseph et al. | A stopped-flow clinical analyzer in which immobilized-enzyme reaction loops are used. | |
| Wittstock et al. | Continuing challenges for the immunoassay field | |
| Guilbault | Analytical uses of immobilized enzymes |