CS269835B1 - Způsob izolace kyseliny /23R/ 3ώ , 7 cú , 23-trihydroxy-5-cholan-24-ové ( fi) -phocaecholové) - Google Patents

Abstract

i<ySeiina /23R/ 3ώ , 7 «6 , 23-tri-hydroxy-. -5/4 -cholan-24-ová se připravuje z dostupných surovin. Ze směsi surových žlučových kyselin získaných alkalickou hydrolýzou kachní žluče a čištěných rekrystalizací se po acetylaci a esterifikaci chromatografie-; ky oddělí čistá kyselina /23R/ 3ιό , 7 ¢6 , * ZJ-trihydroxy-S/J -cholan-24-ová (/j-phoca- ; echolová).

Description

Vynález se týká způsobu izolace kyseliny /23R/ 3,0 , 7 oč , 23-trihydroxy-5/3-cholan-24-ové (β -phocaecholové) z kachní žluče.

Je známý způsob izolace kyseliny ze žluče mořských savců typu lachtanů (pinnipedia). Nevýhodou izolace kyseliny ze žluče těchto zvířat je těžká dostupnost suroviny. Ze žluče těchto živočichů byla kyselina (b - phocaecholová izolována bud srážením jako baryová sůl, nebo chromatografií jejích esterů na oxidu hlinitém, přičemž eluce byla prováděna benzenem, eterem a etanolem (1, 2).

Výše uvedenou nevýhodu odstraňuje způsob vynálezu, jehož podstata spočívá v tom, že surové žlučové kyseliny získané alkalickou hydrolýzou kachní žluče, zejména žluče domestikovaných kachen, se čistí rekrystalizací po acetylaci a esterifikaci a ze získané směsi žlučových kyselin se chromatograficky izoluje čistá kyselina /23R/ 3 «6 , 7, 23- ”

-trihydroxy-5/4-cholan-24-ová ( /3-phocaecholová).

Využití kyseliny β-phocaecholová je předpokládáno bud k farmaceutickým účelům, , nebo jako preparát k vědecké práci týkající se studia metabolismu žlučových kyselin a steroidů a jeho poruch.

Kachní žluč se smísí se 3 hmotnostními díly denaturovaného alkoholu, vzniklá sraženina se odfiltruje a roztok se filtruje přes vrstvu kysličníku hlinitého, eventuálně se třepe s dostatečným množstvím tohoto sorbentu. Tímto způsobem se získá z původní tmavozelené až černé žluči roztok světle žlutý. Tento roztok se odpaří až na 1/6 objemu a přidá se k němu tolik pevného KOH (ev. NaOH), aby výsledná koncentrace byla 10 % (hmotnost/objem). Roztok se potom vaří na zpětném chladiči 12 hodin nebo se zahřívá v autoklávu na 120 °C 2 hodiny.

Ochlazený roztok se za chlazení okyselí 7N HC1 až vypadne sraženina, která se izoluje, suší při teplotě max. 60 °C v proudu vzduchu. Výtěžek je asi 40 g z 1 1 žluče.

Tato směs žlučových kyselin se esterifikuje rozpouštěním v methanolu, který obsahuje 10 % koncentrované kyseliny sírové (nebo HC1). Na 100 g žlučových kyselin se bere 500 ml esterifikační směsi. Vzniklý roztok se nechá 12 až 24 hod. při pokojové teplotě a potom se ředí nadbytkem destilované vody. Vzniklá sraženina se izoluje a suší. Potom se rozpustí v 5tinás'obném objemovém množství acetylační směsi acetanhydrid/pyridin (objem/objem) 1/2 a zahřívá 2 hodiny na zpětném chladiči na 100 °C. Vzniklý acetát methylesterů se izoluje jako sraženina po vysrážení nadbytkem destilované vody za vydatného chlazení a rekrystaluje se z methanolu. Bílé krystalky se usuší, výtěžek je asi 70 %.

Tato krystalická hmota směsi žlučových kyselin se potom hydrolyzuju varem s 5% (hmotnost/objem) methanolickým KOH na zpětném chladiči. Po 2 hodinách varu se roztok ředí 2násobným objemem vody a methanol se odpaří. Vzniklá sraženina (po okyselení) se izoluje a suší. Tato sraženina se skládá převážně z kyseliny chenodeoxycholové a /b-phocaecholová. ,

Z této směsi še kyselina /J-phocaecholová izoluje dvěma způsoby: 1. Směs se převede na methylestery a chromatografuje na Silpearlu nebo na neutrálním *

A^O-j. Na 1 díl dělené směsi se vezme 20 váhových dílů sorbentu a chromatografuje se směsí ethylacetát/heptan (nebo toluen) v poměru 2/1 (objem/objem). Kyselina /5-phocaecholová vytéká po kyselině chemodeoxycholové. Výtěžek čisté frakce je asi 20 %.

2. Směs kyselin se neesterifikuje, ale chromatografuje na stejných sorbentech jako volné kyseliny systémem petrolether/aceton 2/1 (objem/objem), 1/1 (objem/objem), samotný aceton. V poslední (druhé) frakci vytéká kyselina /^-phocaecholová. Výtěžek je asi 30 %.

Claims (1)

1. PŘEDMĚT VYNÁLEZU

   Způsob izolace kyseliny /J-phocaecholové, vyznačený tím, že ze směsi surových žlučových kyselin, získaných alkalickou hydrolýzou kachní žluče, s následným okyselením a rekrystalizací produktu se po esterifikaci, acetylaci a rekrystalizaci z metanolu vzniklý diacetát, respektive triacetát methylesterů (vzniklý produkt) podrobí hydrolýze a okyselení, vzniklá směs žlučových kyselin - zejména kyseliny chenodeoxycholové a /í-phocaecholové - se po případném převedení na metylestery podrobí chromatografickému rozdělení.