CS269562B1

CS269562B1 - Spoaob ochrany kvaslniek proti póaobenlu velmi 1 nízkých teplot

Info

Publication number: CS269562B1
Application number: CS878359A
Authority: CS
Inventors: Emilia Ing Breierova; Anna Rnd Kockova-Kratochvilova
Original assignee: Emilia Ing Breierova; Kockova Kratochvilova Anna Rnd
Priority date: 1987-11-20
Filing date: 1987-11-20
Publication date: 1990-04-11
Also published as: CS835987A1

Description

CS 269562 01 1

Vynález sa týká sposobu ochrany kvasiníekproti účinku velni nízkých teplot- .-.

Ooteraz na ochranu kvesiniekpřed poeobenim velni nízkých teplot sa použivaii12 hmot. % dinetyleulfoxid /E. D. Meyer, N. A.Sinclair, B. Nagy:<Appl. Microbiol. 29, 739 (1975); Z. Hubálek, A. Kocková-Kratofchvllová: Folia Microbiol. 27, 242 (1982J/Í,Kombináciu 12 hmot. % dimotylsulfoxidu, alebo 12 hmot. % glycerolu s 5 hmot. % hydro-xyetylškrobom sa docieli hladina preživania Jednotlivých ternotolerantných a mezofil-ných druhov kvaainiek 60 % celkovej populácie buniek /b. E. Kiraop, O. 3. S. Snell:Maintenace od Microorganlsms, Academie Prase, London, 109 (1984)/. Uvedený spósob mánevýhody v tom, že poaýčhřofiIné druhy kvaainiek a mutantné kmene majú hladinu preži-vania velmi nlzku 10 až 20%, alebo vóbec nepreživajú.

Podstata vynálezu spočívá v tom, že na kvaeinku aa pčsobi vodným roztoko· obaehu-Júcim 0,27 až 0,50 hmot. % extracelulárnym kvasinkovým glykoproteinoa a 6 až 12 hmot. % glycerolu alebo dimetyleulfoxidu v ponore 10® až 10? kvasinkových buniek k 1 mltohto roztoku pri teplota 18 až 25 °C a potom ea zmrazí. Zmrazí aa na teplotu kvapalné-ho dusika. Výhodou tohto apósobu ochrany kvaainiek před poeobenim velmi nízkých teplót Je,že aa docieli hladina preživania ternotolerantných a mezofllných druhov kvaainiek až do100 % celkovej populácie a u paychroflíných a mutantných kraeňov kvaainiek 50 až 70 %celkovej populácie kvaainiek před zmrazením.

Extracelulárny kvasinkový glykoproteln použitý v prikladoch 2 až 8 aa pripraviznámým spóaobom /T. Nakajlma, C. E. Ballout 3. Blol. Chem. 249, 7679 (1974)/: Přiklad 1

Kultivačně médium (5 000 ml) sa odcentrifuguje od kvasnlčnej biomasy a odpaří pritlaku 5 kPa za teploty 40 °C na 1/20 púvodného objemu (250 ml) a glykoproteln sa vyzrá-ža trojnásobným množstvem (750 ml) 96 hmot. % etanolu. Zrazenina glykoprotelnu sa odcen-trifuguje, potom sa rozpustí v 100 ml deetllovanej vody a dialyzuje sa počas 48 hodinpri teploto 4 °C oproti destilovanej vodě. Olalyzát sa zlyoflllzuje. zláká sa přibližné3 g glykoprotelnu. Přiklad 2

Pripravi sa kryomédium obsahujúce 7 hmot. % pivovarnickej sladiny, 0,26 g kvasnlč-ného extraktu (Serva), 0,5 g peptónu (Oifco) a 100 ml vodného roztoku 0,27 hmot. %extracelulárneho kvasinkového glykoprotelnu. Kryomédium sa sterellzuje při teplota100 °C (Kochov spóaob aterillzécie). Po eterilizácii sa pridé dimetyleulfoxid na obsah12 hmot. %. Do polyetylónovej inseminačnej ampulky (bez citrátu sddnáho) sa stsrilnenapipetuje 0,5 ml kryomédia a pridé sa suapenzia kvasinkovej kultúry termotolerantnéhokmana napr. Candida albicans CCY 29-3-32 na koncantráciu 10 buniek v 1 ml. Ampulkasa teplorn zataví, vloží do kvapalného dusika a udržuje se pri teplota -196 °C. Po me-slacl, roku a 5 rokov sa ampulka vyberle a vloží do vodného kúpela teplého 37 °C na do-bu jednej hodiny. Potom sa ampulka otvori a testuje sa preživanie zmrazenej populáciebuniek kvaainiek, ktoré bolo po meslaci 100 %, po roku 100 % a po platich rokoch 100 %celkovej populácie buniek před zmrazením. Přiklad 3

Postupuje ea ako v přiklade 2 s tým rozdielom, že sa použije kryomédium obsshujúce6 hmot. % dimetyleulfoxidu. Preživanie bolo po meslaci 80 %, po roku 80 % a po piatichrokoch 80 % celkovej populácie buniek před zmrazením. Přiklad 4

Postupuje sa ako v přiklade 2 s tým rozdielom, že sa použije kryomédium obsahujúce12 hmot. % glycerolu. Preživanie bolo po meeiecl 95 %, po roku 95 % a po pletich rokoch95 % celkovej populácie buniek před zmrazením.

Claims

2 CSi .269562-Bii’ Přiklad 5 Postupuje ββ'-ako vtpríkilede'‘2’ e<> t.ýnu irozdlelom, že ea použije kryomódUUBiotosahu-Júca 6 hmot. % glycerolu. 'PYeživanle bolo po meeiaci 60 %, po roku 60 % a poplatich ro-koch 60 % celkovej populácle buniek před zařazením. Přiklad 6 Postupuje sa ako v prikladoch 2, e týa rozdialoa, že ea použije vodný roz«ok0,5 hmot. % extracelulárneho kvasinkového polyeacharidu. Pražlvanie bolo po meeiaci60 %, po roku 60 % a po piatich rokoch 60 % celkovej populácle buniek před zmrazením.Přiklad 7 Postupuje sa ako v prikladoch 2 s tým rozdialoa, že aa přidá do kryomédia euepenzlamezofilného kmeňa napr. Saccharomyces cerevisias CCY 21-4-13. Prežlvanie bolo po meeiaci100 %> po roku 100 %, po piatich rakoch 100 % celkovej populácle buniek před zmrazením.Přiklad 8 Postupuje ea ako v prikladoch 2 s týa rozdialoa, že ea přidá do kryoaédia euspen-zla psychroflíného kmeňa napr. Leucbsporldiura ecotil CCY 64-1-1. Prežlvanie bolo 50 %po meeiaci, po reku 50 % a po piatich rokoch 50 % celkovej populácle buniek před zmra-zením. PREOMET VYNÁLEZU

1. Spbeob ochrany kvasiniek proti púeobeniu velmi nizkych teplot a vnútornou ' ochranou kvasiniek vodnýa roztokou glycerolu alebo dimetyleulfoxidu, vyznačujúci ea tým, že na kvasinku ea pdeobi vodným roztokoa obeahujúcia 0,27 až 0,5 hmot. % extrace- lulárneho kvasinkového glykoproteinu a 6 až 12 hmot. % glycerolu alebo dimetyleulfoxiduA V λ v poměre 10 až 10 buniek kvasiniek k 1 ml tohto roztoku pri teploto 18 až 25 C apotom sa zmrazí.
2. Spóaob podlá bodu 1, vyznačujúcl ea týa, že ea zmraz! na teplotu kvapalného du- sika.