CS 269556 Bl 1
Vynález se týká spósobu lzolácle albuminu, a to tým, že k východzej plazme, reap.séru aa přidá glukóza a etanol a při vhodnom pH sa plazmatlcké blelkovlny mimo albuminudeitruujú teplou.
Oopoaial najvýznamneJSle Izolačně postupy albuminu sút a/ Frakcionócia etanolom (Cohn.E.O. et. al.: Preparation and propertiea of aerůmand plasma proteine IV a eyatem for the eeparation into fractione of the protein andlipoporoteln componente of biologlcal tiasuea and fluida. □.Am.Chem.Soo.68, 459, 1946;Nitschman H., Kistler, P., Lergie.W.: Vereinfachter Verfahren zur Gewinung von huaanenAlbumin und gamaglobulin aua Blutplaama. Helv.Chem.Acta, 37, 866, 1954 ; HořejSÍ, □. ; O bílkovinách krevní plasmy. Čas.lék.českých 39, 1065, 1953). b/ Rlvanolové metoda (Hořejií.O., Smetana, R.: O vlivu rivanolu na plazmatlckébílkoviny, Chem.listy 48, 758, 1954; Škvařil,F1.: Příspěvek ke studiu účinku rivanoluna plaamatlcké bílkoviny. Čel.farmacie, 9, 522, 1957 ; Salfer, A., Lipkin.L.E.: Electro-phoretic and immunological atudies of rivanol fractionated aerům proteine. Proc.SocvExp.Biol.Med. 102, 1, 220-222, 1959). c/ Separácia bielkovln pomocou tvorby reverzibilných komplexov s koval (Surge-nor,D.M., Huntes,N.J., Brown.R.K.: Blood Cells and Plasma Protein (ed. Tullis.O.l.),Academie Preaa, New York, 1953). d/ Tepelno - denaturačné metody (Mlkula,!. a kol.: člastková závěrečná správaVII-4-7/02 - Využltle krve z odporazených zvierat pre výrobu přípravku na báze albumi-nu, 1987 ; AO 258203 *Spósob lzolácle zvleracieho albuminu ; Hoch,H., Chanusin:Arch.Blochem.,Biophya. 51, 27, 1954; Lundblad,3.: Vox Sang. 5, 122, 1971; Schneider,W.etal.: Folia hematol. 104, 116, 1977).
Nevýhodou týchto postupov je skutočnosf, že k stabillzácil albuminu sa použivajúfažko dostupné zahraničně stabilizátory, kterých cena negativno ovplyvnuje ekonomickýefekt výrobku a energeticky drahé a technicky náročné zariadenla.
Vynález rieíi izoláciu albuminu z plazmy alebo séra tým spósobom, že albumin jestabilizovaný glukózou, čin je chráněný v priebehu deStrukcie ostatných plazmatickýchbielkovln.
Podstata lzolácle albuminu z plazmy alebo séra spočívá v tom, že ku krvnej plazmeresp. séru sa přidá 0,2 až 0,3 M glukózy. Po dókladnej homogenizácll sa hodnota pHupraví 1 M kyselinou octovou na hodnotu 6,0 - 6,1. Za stálého mieiania sa po kvapkáchpřidává 96 % etanol do koncentrácle 12 - 18 objemových percent. Potom ss roztok za stá-lého mleěania zahrleva při teploto 45 - 55 °C po dobu 10 minút. Na to pH zmesl sa upra-ví no hodnotu 5,0 - 5,1 a schladi na teplotu +18 °C - +20 °C. Vzniklý precipitét sa od-středí a supernatant sa filtruje a lyofllizuje. Příklad č. 1 K 1000 al krvnej plazmy alebo séra sa přidává 49,5 g glukózy ako stabilizátoru apH sa upraví 1M kyselinou octovou na pH 6,0. K zaesi za stálého mieiania sa přidává96% etanol v množstvo 189 al a roztok je zohrievený pri teplote 45 °C po dobu 10 minút.Potom pH roztoku je upravené lM kyselinou octovou na hodnotu 5,1 a následné roztok jeschladený na teplotu 18 °C. Vzniklý precipitét Je separovaný na centrifúge. Supernatantje filtrovaný a lyofilizovaný. Hmotnosť lyofilizovaného produktu 20,1 g, elektroforetickéčistota 95,7. Příklad č. 2 K 2000 al krvnej plazmy alebo séra sa přidává 80 g glukózy ako stabilizátoru a pHsa upraví 1M kyselinou octovou na 6/1. K zaesi za stálého mieiania sa přidává 96 % eta-nol v množstve 253 ml a roztok je zohrievaný při teplote 55 °c po dobu 10 minút. PotompH roztoku sa upraví 1 M kyselinou octovou na hodnotu 5,1 a následné roztok je ochladenýna teplotu 20 °C. Vzniklý precipitét je separovaný na centrifúge. Supernatant Je filtro-vaný a lyofilizovaný. Hmotnosť lyofllizovaného produktu 38 g, elektroforetické čistota96,2.