CS264241B1 - Prostředek pro stanovení proteolytické aktivity a způsob jeho výroby - Google Patents
Prostředek pro stanovení proteolytické aktivity a způsob jeho výroby Download PDFInfo
- Publication number
- CS264241B1 CS264241B1 CS87649A CS64987A CS264241B1 CS 264241 B1 CS264241 B1 CS 264241B1 CS 87649 A CS87649 A CS 87649A CS 64987 A CS64987 A CS 64987A CS 264241 B1 CS264241 B1 CS 264241B1
- Authority
- CS
- Czechoslovakia
- Prior art keywords
- casein
- black
- black ink
- solution
- ink
- Prior art date
Links
Landscapes
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Coloring Foods And Improving Nutritive Qualities (AREA)
Abstract
Příprava prostředku pro stanovení proteolytické aktivity se provádí tak, že se k roztoku kaseinu přidá černá tuš, kasein se za současné inkorporace tuše vysráží snížením pH roztoku na hodnotu jeho isoelektrického bodu a získaná Černá sraženina se po vysušení podrobí záhřevu při teplotě 150 až 250 °C po dobu 30 minut až 10 hodin. Prostředek sestává z kaseinu a černé tuše v poměru 10 :1 až 1 :1, kde množství kaselinu je uvedeno v gramech a množství černé tuše v mililitrech.
Description
Vynález se týká prostředku pro stanovení proteolytické aktivity a způsobu jeho výroby.
Aktivitu proteolytických enzymů je možno stanovit pomocí celé řady substrátů (Fukal, L, Káš, J„ Vodrážka, Z.: Biochem. clin. bohemoslov. 14,109 (1985); Fukal, L., Káš, J.: Chem. Listy 78, 1176 (1984)). Významné místo mezi nimi zaujímají substráty, které jsou založeny na nerozpustných bílkovinách. Mezi ně patří např. kolagen (Gisslow, Μ. T., McBride, B. C.: Anal. Biochem. 68, 70 (1975), keratin (Nakanishi, T., Yamamoto, T.: Agric. Biol. Chem. 38, 2391 (1974), fibrin (Thorsen, S., Astrup, T.: Proč. Soc. Exp. Biol. Med. 130, 811 (1969)) nebo elastin (Bielefeld, D. R., Senior, R. M., Yu, S. Y.: Biochem. Biophys. Res. Commun. 67, 1553 (1975)).
Pro zvýšení citlivosti stanovení byly vyvinuty nerozpustné bílkovinné substráty s navázaným barvivém. Příkladem je např. fibrin obarvený indigokarmínem (Nelson, W. L, Ciaccio, E. I., Hess, G. P.: Anal. Biochem. 2, 39 (1961)), nebo Azocoll (kožní prášek s navázaným azobarvivem; Moore, G. L: Anal. Biochem. 32, 122 (1969)).
Současné chromogenní nerozpustné substráty pro stanovení proteolytické aktivity vyžadují speciální způsoby výroby, a jejich příprava v laboratoři může být obtížná.
Předmětem vynálezu je nový prostředek pro stanovení proteolytické aktivity a způsob jeho přípravy.
Způsob přípravy tohoto prostředku podle vynálezu spočívá v tom, že se k roztoku kaseinu přidá roztok černé tuše, kasem se za současné inkorporace tuše vysráží snížením pH na hodnotu jeho isoelektrického bodu, a získaná černá sraženina se po vysušení podrobí záhřevu při vyšší teplotě (s výhodou 150 až 250 °C) po dobu 30 min až 10 hodin. Získaný tepelně modifikovaný chromogenní kasein je ve vodě a vodných roztocích prakticky nerozpustný. Působením proteolytických enzymů se z něho uvolňuje barvivo, jehož množství je úměrné aktivitě proteinasy a je možno ho stanovit spektrofotometricky, po odfiltrování nebo odstředění nerozloženého nerozpustného substrátu.
Předmětem vynálezu je také prostředek pro stanovení proteolytické aktivity, vyznačený tím, že sestává z kaseinu a černé tuše v poměru 10 :1 až 1 :1, kde množství kaseinu je uvedeno v gramech a množství černé tuše v mililitrech.
Vynález je dokumentován příklady:
Příklad 1 g kaseinu bylo rozpuštěno v 400 ml 02 %
Claims (2)
1. Prostředek pro stanovení proteolytické aktivity vyznačený tím, že sestává z kaseinu a černé tuše v poměru 10 :1 až 1 :1. kde množství kaseinu je uvedeno v gramech a množství v mililitrech.
2. Způsob výroby prostředku podle bodu 1 vyznačující se tím, že se k roztoku kaseinu
CS 264 241 Bl roztoku hydroxidu sodného. K roztoku bylo přidáno 5 ml černé tuše pro technická pera („Centrograf“). Poté byla po kapkách za stálého míchání přidávána 50 % kyselina octová, dokud se komplex kasein—tuš kompletně nevysrážel. Získaná černá sraženina komplexu kasein—tuš byla odfiltrována na papírovém filtru, promyta vodou, vysušena v sušárně při cca 80 °C a poté zahřáta v horkovzdušném sterilizátoru při teplotě 200 °C po dobu 4 hodiny. Získaný tepelně modifikovaný chromogenní kasein byl rozemlet v tříštivém kávomlýnku a opakovaně suspendován ve 2 až 4 % roztoku hydroxidu sodného, dokud se uvolňoval pigment. Po odfiltrování byl'substrát důkladně promyt vodou, vysušen v sušárně při 80 °C a opět rozemlet v tříštivém kávomlýnku na jemný prášek, který byl dále používán pro vlastní stanovení aktivity proteinas.
Příklad 2
Analogicky jako v příkladu 1 byly připraveny chromogenní substráty inkorporací 10 ml černé tuše/10 g kaseinu a 1 ml černé tuše/10 g kaseinu.
Příklad 3
Analogicky jako v příkladu 1 byly připraveny různé šarže tepelně modifikovaného chromogenního kaseinu, lišící se použitou teplotou a dobou působení. Byly připraveny následující vzorky:
150°C/10h; 180°C/6h; 200°C/5h; 220 °C/ 2 h; 240 °C/1 h a 250 °C/30 min.
Příklad 4
Do zkumavek bylo naváženo po 20 mg substrátu, přidáno po 2 mi vhodného pufru a necháno 20 min botnat Poté bylo do zkumavek přidáno po 1 ml roztoku obsahujícího alkalické bakteriální proteinasy. Po vhodně dlouhé inkubaci (např. 30 min při 50 °C) byl substrát odfiltrován a filtrát byl spektrofotometricky proměřen, např. při vlnové délce 400 nm. Alternativně byly zkumavky po skončení inkubace přeneseny do ledové lázně, obsah zkumavek byl rychle odstředěn a supernatant spektrofotometricky proměřen. Mezi hodnotami absorbance cca 02—1,0 byla závislost mezi množstvím (aktivitou) alkalické bakteriální proteinasy a absorbancí filtrátu (supernatantu) lineární. Při vyšších hodnotách absorbance měla závislost konvexní charakter. Různé šarže substrátu, připravené podle příkladů 1, 2 a 3, vykazovaly podobné vlastnosti.
VYNÁLEZU přidá černá tuš, kasein se za současné inkorporace černé ruše vysráží snížením pH roztoku na hodnotu jeho isoelektrického bodu, a získaná černá sraženiny se po vysušení podrobí záhřevu při teplotách 150 až 250 °C po dobu 30 minut až 10 hodin.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CS87649A CS264241B1 (cs) | 1987-02-02 | 1987-02-02 | Prostředek pro stanovení proteolytické aktivity a způsob jeho výroby |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CS87649A CS264241B1 (cs) | 1987-02-02 | 1987-02-02 | Prostředek pro stanovení proteolytické aktivity a způsob jeho výroby |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CS64987A1 CS64987A1 (en) | 1988-10-14 |
| CS264241B1 true CS264241B1 (cs) | 1989-06-13 |
Family
ID=5338977
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CS87649A CS264241B1 (cs) | 1987-02-02 | 1987-02-02 | Prostředek pro stanovení proteolytické aktivity a způsob jeho výroby |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CS (1) | CS264241B1 (cs) |
-
1987
- 1987-02-02 CS CS87649A patent/CS264241B1/cs unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CS64987A1 (en) | 1988-10-14 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Dingle et al. | Studies on the mode of action of excess of vitamin A. 5. The effect of vitamin A on the stability of the erythrocyte membrane | |
| Habeeb | Preparation of enzymically active, water-insoluble derivatives of trypsin | |
| Palmer et al. | Ceroid lipofuscinosis in sheep. II. The major component of the lipopigment in liver, kidney, pancreas, and brain is low molecular weight protein. | |
| Goscin et al. | The purification and properties of superoxide dismutase from Saccharomyces cerevisiae | |
| Moore | Use of azo-dye-bound collagen to measure reaction velocities of proteolytic enzymes | |
| Biely et al. | Remazol brilliant blue-xylan: a soluble chromogenic substrate for xylanases | |
| Wallace | Hydrolysis of 14C-labelled proteins by rumen micro-organisms and by proteolytic enzymes prepared from rumen bacteria | |
| US3912593A (en) | Water-insoluble nitrogen-containing biologically active organic substances | |
| Malinowski et al. | Bovine erythrocyte superoxide dismutase: diazo coupling, subunit interactions and electrophoretic variants | |
| Silman et al. | Some water‐insoluble papain derivatives | |
| Singer et al. | Studies on succinic dehydrogenase. V. Isolation and properties of the dehydrogenase from baker's yeast | |
| Swislocki et al. | Purification and characterization of diphosphopyridine nucleosidase from pig brain | |
| Smith et al. | Soybean by-products, recovery of soybean whey protein with edible gums and detergents | |
| CS264241B1 (cs) | Prostředek pro stanovení proteolytické aktivity a způsob jeho výroby | |
| Gnosspelius | Myxobacterial slime and proteolytic activity | |
| CN105136699A (zh) | 基于未变性染色皮粉底物的蛋白酶胶原蛋白水解活力测定方法及其应用 | |
| Sippel | The histochemistry of thiols and disulphides. I. The use of N-(4-aminophenyl) maleimide for demonstrating thiol groups | |
| Cantarow et al. | Nicotinamide mononucleotide adenylyltransferase, a nonhistone chromatin protein: Purification and properties of the chicken erythrocyte enzyme | |
| EP0079793B1 (en) | Amylase inhibitor and preparation thereof | |
| Lojda et al. | Histochemical demonstration of enterokinase | |
| Halliwell | A micro-determination of carbohydrates and proteins | |
| Melius et al. | Characterization of the subunits of swine kidney leucine aminopeptidase | |
| Butterworth et al. | Fluorimetric assay for prolinase and partial characterisation in cultured skin fibroblasts | |
| Biely et al. | A new chromogenic substrate for assay and detection of α-amylase | |
| CS263665B1 (cs) | prostředek pro stanoveni proteolytscké aktivity a způsob jeho výroby |