CS260968B1 - Způsob výroby lidského leukocytárního interferonu - Google Patents

Abstract

Řešení se týká oblasti průmyslové biologie, Způsob výroby lidského leukocytárního interferonu spočívá v odstředění krve dároe, oddělení leukooytů, hemolýze zbývajících erytrocytň s chloridem amonným resuspendování usazených leukooytů v živném prostředí podle Eagla a oddělení cílového produktu. Přínosem jg, že odstředění použité krve se uskutečňuje při 1500 až 5000 g po dobu 35 až 45 minut, odebrání 30 až 75 % objemu vrohní části leukooyty obsahující erytrooytové hmoty, hemolýza se provede roztokem 0,80 až 0,84 chloridu amonného při poměru 1 t /3 až 50/.

Description

ΟΠΗΟΑΗΗΕ H3OBPETEHHH K ABTOPCKOMY CBHflETEJlbCTBY 3aHBjieHo: 20,08.81 3a«BKa #> 3337658/28-13 MKH3 A 61 K 45/02

Abtopw: Jl.n.Kopo6HHbiH, Α.Μ.Πηβοβθροβ, C.B.roHHaposa, H.H.KynHKQBaη ΙΟ,Β.Τηγοτηη

3aaBHTenb: Bcčcoioshmh HayHHo-HccnenoBaTenbCKHň HHCTHTyT oco6o nHCTtix 6ho-npenapaTOB

HaaBaHne Η3θ6ρετβΗΗΗ: CIIOCOB ΠΟΠΠΕΗΗΗ HEJIOBEHECKOrO ΠΕίΙΚΟΙίΗΤΑΡΗΟΓΌ HHTEP-ΦΕΡΟΗΑ Η3θ6ρεΤβΗΗβ OTHOCHTCH Κ oCíiaCTH npOMbnnneHHOft 0ΗθηθΓΗΗ, a ΗΜβΗΗΟ κ cnoco-6aM nojiyMeHHH ΗΗτερφβροΗβ M3 jieftKOííHTQB kpobh qefloBeKa. H3BecTeH cnoco6 nonyneHHH jieftKOnírrapHoro Ηκτερφεροκβ nyTeM BbiflenoHHH něňKOUjHTOB, HHflyKllHH HHTep4)epOHOO6pa3OBaHHB, 0HOCHHTe3a ΗΗΤβρφθρθΗ3,, BblflejieHHHΗΗΤ.βρφερθΗ3 (1). ΟΛΗβκο Bbixofl κηετοκ cocTaBJíaeT 10-1512 ot nonynanHH ηεδκσηΗτοΒ, co«epxa-mHXCH B UeJIbHOÍi KPOBH» lÍ3BecTeH Tam cnocoS nonyneHHH HenoBenecKOro neŇKonHTapHoro ΗΗτβρφεροκβnyTeM uenTpi^yr:npoBaHH« nottopcKOň KpOBH, oŤefleneHHH ηεϋκοηΜΤΟΒ, neMonnsa ocTaTouHbix 3pnTpou;HTOB xjiophctmm ημμοηηθμ, pecycneHRHpOBaHHH ocajjKa ηεκκοηΗ-tob b nHTaTenbHoň cpene Hrna, BMnenéHHH neneepro npoflyiera (2),

OflHaKO BbIXOfl ΜΗΤβρφβρΟΗβ Ηβ3Η3ΗΗΤεηβΗ H COCTaBJIHST 4*10ť ME/n C eflHHHUbloĎteMa nepepaSaTbiBaeMOň KpOBH.

Uenbio Η3θ6ρετβΗΗΗ HBnneTCH noBbnueHHe Bbrxona ueneBoro npoflyKTa.yKaaaHHaH u,enb nocTHraeTCH τβΜ, ητο πρκ ocymecTBneHHH cnoco6a nonyHěHHH

uenoBeuecKoro πβήκομΗτερΗΟΓΟ ΗΗτβρφβροΗβ nyTeM ^eHτpHφyΓHpoBaHHH noHopcKoňKpOBH, OTfleJieHHB JieftKOUHTOB, reMOÍIH3a OCTaTOHHbIX SpHTpOnHTOB XnOpMCTbIM aM —μοηηθμ, pecycneHflHpoBaHHH ocaflKa πεήκοηκτοΒ b nHTaTenbHoň cpene Hrna, Bbine-neHHH neneBoro nponyKTa oTJiHHHTenbHoň ocoGeHHocTbio nenaerca το, hto neHTpH-φyΓHpoBa^^He nenbHoň kpobh ocymecTBnjnoT πρκ 1500-5000g b TeneHHe 35-45 MHHyT 260968 OTĎHpaioT 30-75% οδτ,εΜρ Bepxaeň uacra neHKOHHTcopepJKaiiíeň sphtpouhthoh Maccbi,reMOjiH3 ocymecTBJíHWT 0,80-0,842! pacTBopoM xnopHpa βμμοηηη tipu cooTHonieHHH1:(3-50).

Cnoco6 nOHCHHeTCH CJieflywmHMH npHMepaMH. ΠρΗΜβρ 1

KpoBb flOHopoB co6HpamT b njiacTHKOBbie πβκετΜ, coflepjKanme pHTpaTHbiň CTa6n-jiH3aTop. Cpa3y nocne c6opa KpoBb yeHTp^yrHpyioT np« 4°C b τεπεΗΗε 20 MHHyTπρπ 2000g, πτο6μ οτρεηΗΤΒ nna3My ot sphtpohhtob. nocne ypaneHHH njia3MM co6h-patoT 10-15 mji Buf fy coaf, nepeHocHT ero b προ6κρκΗ, οορερκβπριε 1 mji pacTBo-pa 3THJieHflnaMHHTeTpaaueTaTa (3flTA) h pccýcneHpHpytoT* ČMecb BbipepKHBaroT ' 10 MHHyT npH +4°C h ueHTpH<|>yrHpyiOT πρπ 160g b τεηεΗΗε 10 mhh. OcapoK πείίκο-HHTOb peeycneHflHpyioT b ,0 mji nHTaTenbHoň cpepbi Hrna MEM, copcpwameH 10% ue-noBeuecKoň α,ίΒοροτκκ. K nonyueHHofí cycneH3HH κηετοκ po6aBnnmT 1/10 oSteMa3ΠΤΑ h cycneH3Hio CMeiiiHBaioT c 8 ofiteMaMH 0,83% NH^Cl. Περε3 HecKonbKO MHHyTcMecb ueHTpH$yrHpyioT πρκ 1 60g b τεηεΗκε 10 MHHyT. nonyneHHbiH ocaflos πεήκο-Hhtob pecycneHflHpyioT b cBe»eň nHTaTenbHoň cpepe Hrna MEM no KOHeuHoň koh-

1 nHTpa kpobh ηπη 15% οτ toto KonnuecTBa πεήκορΗτοΒ, κοτοροε copepacHTca βflOHOpCKOH κροΒΗ.

JleňKopHTbi, pecycneHnHpoBaHHbie β πητβτθπβηοη cpepe Hrna, o6pa6aTbiBaroT200 ΜΕ/μπ neňKOHHTapHoro nenoBenecKoro ΗΗτερφεροΗβ πρκ 37°C b τεηεΗκε 2 na-cob. 3aTeM κ cycneH3HH πεκκορΗΤΟΒ poSaBnnioT HHpyKTop-BHpyc 6one3HH HbKncact-na ηπη BHpyc CeHpaň b po3e 20-25 HHKToToKCHnecKHX po3 Ha 1 KneTKy h HHKy6H-pyioT eme β τεπεΗΗε 1 naca npH 37’C. Πο HCTeneHHH 3Toro BpeMeHH HeapcopOupo-BaHHbiň Ha κηετκεχ BHpyc οτρεπΗίοτ neHTpH<J>yrHpoBaHHeM πρκ 600g b τεηεΗΗε115 MHHyT. IIonyueHHbiň ocapoK κηετοκ pecycneHflHpyioT b nHTaTenbHoň cpepe HrnaMEM β κοΗεηΗΟΗ KOHneHTpapHH 5—10χ10β κπ/μπ. nHTaTenbHan cpepa copepxHT 5%ηεηοΒεηεοκοΗ nna3Mbi, CycneH3Hic κηετοκ HHKyČHpawT πρκ 37 °C πρπ περεΜειΠΗΒβΗΗΗb tchghho 16-20 qacoB. Πο 33ΒεριπεΗΗΗ yKaaaHHoro cpOKa KynbTypanbHyio wHpKocTb οτρεηΗΐοτ οτ κηε-τοκ-npopypeHTOB qeHTpH&amp;yΓΗροΒΗΗκεΜ πρκ 1500g β τεηεΗΗε 30 MHHyT. OcapoKκηετοκ OTGpacbiBawr, a KynbTypanbHyw )KHp,KOCTb BbipepacHBamT β τεηεΗκε 3-4 cy-tok npH +4eC h pH pacTBopa, poBepeHHoro no 2,5 1 h HC1 c penbw ηηηκτηβηρηηBHpyca-HHflyKTopa, a 33τεΜ β Heň προΒορητ onpeperteHne THTpa ΗΗτερφεροΗΗ. A6conioTHHH Bbixofl ΗΗτερφεροΗβ c 1 nHTpa κροΒΗ pocraraeT 4*10* ME. ΠρκΜερ 2

KpoBb coSHpawx b nnacTHKoshie naKGThi THna "ΓεΜεκοκ", σορερχειπρο ρκτρετΗΜΗCTa6HnH3aTop, Cpa3y nocne c6opa KpoBb ^GHτpHφyΓHpy^oτ πρκ 2000*100g β τεηεΗΗε40-5 MHHyT πρκ +4σΟ· c penbw οτρεηεΗΗΗ nnasMbi οτ sphtpophtob. Ποοηε ypaneHHHnna3Mbi co6Hparar bgpxhhg 2/3 o6T>GMa 3pHTpopHTapHoň Maccbi h pecycneHpHpyioT β3 oStGMax 0,83 NK4C1. Cmocb peHTp^yrHpyroT npH 500g β τεηεΗκε 40 MHHyT. Πο- , nynGHHbiH ocaflOK κηετοκ pecycneupHpyjoT β 10 oĎteMax 0,83% NH4C1 h peHTpH^iy-, rHpyioT πρκ 150g β τεπεκκε 20 MHHyT. nonyneHHbift ocaflOK πείίκορΗτοΒ pecycnenpH- pyioT β ΠΗτβτεηϊιΗΟΗ cpepe Hrna MEM, copep»améit 4% nenoBenecKoň cbibopotkh bkohchhoh KOHHOHTpapHH 10y κπ/μπ', Βωχορ ηεήκορΗΤΟΒ cocTaBnaeT 5,0χ10β κπετοκc 1 nHTpa κροΒΗ ηπη 80% οτ hx copepJKaHHH b penbrioň kpobh, HHpyKpHio h 6hochh-T03 HHTODdlGOOHa ΠΡΟΒΟΠΗΤ TBK JKO IOK Β ΠΡΗΜΒΡΒ 1 .

KpoBb οτ poHOpoB co6HparoT b nnacTHKOBbie πβκετΜ THna "ΓεΜεκοη", copepaca-ηιηθ pHTpaTHbiň cTa6HHH3aTop. Cpa3y nocne c6opa kpobh ρεΗτρΗφνΓΗργιοτ npH 2000-lOOg β · τεπεΗΗε 40-5 MHHyT npH +4’C c penbw οτρεηεΗΗΗ nna3Mbi οτ 3ριιτρορΗΤθΒ. 260968 nocne yflaneHHH rinaaMbi co6npa»T BepxHHe 2/3 oSteMa spHTpoflHTapHoň Maccbi h pe-cycneHflHpyioT b 25 o&amp;beMax 0,83% NH^CI.h u;eHTpn4)yrnpyKT πρκ 250g b TeneHHe20 MHHyTe IlonyqeHHbiH ocafloK κπετοκ pecycneHflHpyroT b 3 oSteMax 0,80% NH^Cl hUeHTpH$ympyroT πρκ 150g b leúeHae 20 MHHyr. nonyneHHbiň ocanox neňKOflHTOB pe-cyčneHflupyioT b πητθτθπβηοη cpefle Hrna MEM, coflepxameň 4% HenoBenecKoň cmbo-POTKH B KOHeHHOňAKOHfleHTpaflHH 10 ΚΠ/ΜΠ. BblXOfl neňKOflHTOB COCTaBnHeT 5x10κπετοκ c 1 nHTpa kpobh ηπη 80% οτ hx očmero coflepaiaHHH b flenbHOň kpobh. Hh-flyKflHIO H 6HOCHHTe3 ΗΗΤβρφβρΟΗΗ npOBOflHT ·Τ3Κ »e K3K B npHMepe 1. A6cOJIIOTHb!H BblXOfl ΗΗΤβρφβρΟΗβ C 1 nHTpa KpOBH COCTaBnHeT 12 *10* ME. ÍIpHMep 4.

KpoBb οτ flOHopoB coČHpároT b nnacTHKOBbie naxeTbi Tuna ''TeMaKOH", coflepacaflHeUHTpaŤHbiň eTa6KrtH3aTop, Cpaay nocne c6opa xposb u,eHTpn(i)yrHpyioT πρκ 2000 -tlOOg b τεηβΗΗβ 40í5 MHHyT πρκ +4*C c nenbio OTfleneHHH nna3Mbi οτ apHTpoflHToB.Ilocne yflaneHHH nna3Mbi co6npaioT BepxHHe 2/3 oCteMa spHTpoflHTapHoň Maccbi h pe-cycneHflHpyroT b 50 oS-beMax NE^Cl. CMecb BbiflepscHBaror 10 MHHyT npH +4eC h fleHT-(JjyrHpyioT npH 150g b TeneHne 20 MHHyT. nonyneHHbiň ocapoK κπετοκ pecycneHflHpy-roT b ΠΗΤβτεπΒΗοή cpep;e Hrna MEM, coflepacameň 4% nenoBenecKoň cmbopotkh, b ko-HenHoft KOHii;eHTpau;HH 10? κπ/μπ. Bbixofl neňKOflHTOB cocTaBnneT 4*10-^ κπετοκ c1 nHTpa kpobh ηπη 70% οτ hx coflepoKaHHH b nenbHoň kpobh. HHflyKflHio h 6hochh-τε3 ΗΐιτερφεροΗΗ προβοαητ TaK we KaK b npHMepe 1 i 6 ASconioTHbiří Bbixofl ΗΗτερφεροΗβ< c 1 nHTpa kpobh cocTasnaeT 8x10 ME. ΠρΗΜβρ 5

KpoBb οτ flOHopoB coSHparoT b nnacTHKOBbie πβκετΜ Tnna "ΓβΜβκοΗ1’, coflěpacaflHeAHTpaTHbiň cTa6nnH3aTop. Cpaay nocne oTÓopa κροββ ΗεήτρΗφντΗρνιοτ πρκ 1500gb τεηεΗΗβ '90 mhh. πρκ 4°C c nenbro OTfleneHHH nna3Mbi οτ spHTpoflHTOB. nocneyflaneHHH nna3Mbi coĎHpawT BepxHHe 75% o6beMa apHTpoflHTapHoň Macau h peeycneH-flnpyioT ee b 3 o&amp;beMax 0,84% NH4CI, BbiflepwHBakiT CMecb npH +4tfC 20 MHHyT hfleHTpHpyioT npH 250g β τεηεΗΗε 20 MHHyT. nonyneHHbrfí ocafloK neňKOflHTOB pecyc-neHflHpyioT b 20 o6-beMa. 0,84% NH4CI, μεΗΤρΗφνΓΗρνιοτ npH 150g β τεηβΗΗθ20 MHHyT. OcaflOK neňKOflHTOB pecycneHflHpyroT b riHTaTenbHoň cpefle flo KOHeflfloňKOHfleHTpaflHH 10? κπ/μπ. Bbixofl neňKOflHTOB cocTaBnneT 3χ10* κπετοκ c 1 nHTpakpobh ηπη 50% οτ o6mero coflepacaHHH β αθηβηοη kpobh. HHflyKflHio η 6nocHHTe3ΗΗτερφεροκε προβοαητ τθκ we KaK β npHMepe 1. 6 A6conioTHbiíí Bbixofl ΗΗτερφεροΗ3 c 1 niiTpa kpobh cocTaBnneT 6x10 ΜΕ. ΠρΗΜβρ 6

KpoBb οτ flOHopoB coĎHpaioT β nnacTHKOBbie naxeTbi THna nreMaKOH", coflepaca-mne RHŤpaTHbiň cTa6nnH3aTop. Cpaey nocne c6opa KpoBb ΑβΗτρκφνΓΗρνιοτ πρκ5000g β τεηεΗΗε 10 MHHyT npH 4*0 c flenbio OTfleneHHH tina3Mbi οτ apHTpoflHTap- HOň Maccbi. nocne yflaneHHH nna3Mbi co6Hparor BepxHHe 30% oSteMa spHTpoflHTapHoň

Maccbi h pecycneHflHpyroT β 3 o&amp;beMa. 0,80% NH^Cl, ΑβΗτρκφνΓΗρνιοτ ripn 250g bTeneHHe 20 MHHyr h ocafloK neňKOflHTOB pecycneHRHpyioT ποΒτορΗΟ b 10 oCteMax0,83% NH^Cl. JleftKÓflHTbi ocaacflawT ΑβΗτρκφνΓΗροΒβΗΗεΜ πρκ 150g b Tenemie 20 MH-HyT h pecycneHflHpyroT b nHTaTenbHOň cpefle.'Bbixofl neňKOflHTOB c 1 nHTpa kpobhcoc.TaBnneT ,5 xlO9 κηβτοκ ηπη 80% οτ hx osmero coflepacaHHH b flenbHOň kpobh.HHflyKflHio η 6ηοοηητθ3 ΗΗΤβρφβροΗβ προβοαητ tak ace KaK β npHMepe 1. A6conroTHbiň BbiKpfl ΗΗΤβρφβροΗβ c 1 nHTpa kpobh cocTasnaeT 3xlOe ME,npeflnoMeHHbiň cnoco© πο3Βθππβτ hobmchtL· Bbixofl fleneBoro npoflyKTa flo 10- 12*· l0tf ME/n KpOBH ΠΟ CpaBHeHHIO C HSBeCTHblM CnOCOSOM 4'10* ME/Λ KpOBH.

ΦΟΡΜΥΕΑ H30BPETÉHHH «

Cnoco6 nonyneHHH HenosenecKoro neňKoflHTapHoro ΗΗτερφεροΗβ nyTGM ιχβΗτρΗ-^yrHpoeaHHH flOHopcKoň kpobh, OTfleneHHH neňKOflHTOB, reMonH3a ocTaroMHbix 260968 -4- apHTpoqHTOB xnopucTbiM θμμοηηθμ, pecycneHflHpoBaHHH ocaflKa neňKOflHŤOB b πητη—TenbHoň cpefle Hrna, BbifleneHHH neneBoro npoflyKTa, OTnHnatomHňcH τβΜ, ητο, cuejibio noBbnueHHB Bbixofla peneBoro npoflyKTa, iíeHTpmjjyrupoBaHHG penbHoíí kpobhocymecTBjíHioT πρκ 1500-5000g b TeneHHe 35-45 MHHyT, oT6nparoT 30-75% o6i>eMaBepxHeft nacTH ňeňKOflHTCoflepxcameň apHTpouHTHoň Maccbi, reMonH3 ocymecTBnntoT0,80-0,84% pacTBopoM xnopHfla ημμοηηη πρκ cooTHomeHHH 1:(3-50). HCTOHHHKH ΗΗφορΜΗΐχΗΗ, npHHHTbie BO BHHMaHHe πρκ 3KcnepTH3e: 1. AHanor-ConoBbeB B.fl., ΕβκτβΜΗροΒ Γ.Α. "ΗϋτερφβροΗ b τεορκπ h npaKTHKeMeflHyHHbí", M. , 1970. 2. ΠροτοτΗΠ In: Human Interferon Kauppinen H.-U., Myllyly'' G,, - 6, 1978p. 1-13.

P E Φ E P A T

CnOCOE ΠΟΗΥΗΕΗΗΗ HEJIOBEHECKOrO ΠΕΗΚΟΗΗΤΑΡΗΟΓΟ ΗΗΤΕΡΦΕΡΟΗΑ

HacToainee Η3θ6ρετβΗΗε othochtch k oSnacTH npoMbmmeHHoft ©ηοπογηη.

CnocoS nonyneHHH nenoBenecKoro neňKopHTapHoro ΗΗτερφθροΗΗ coctoht b fleHT p^yrHpoBaHHH ROHopcKoň kpobh, oT/jejieHHH JieňKouHTOB, reM0JiH3e ocTaTonHbixSpHTpOflHTOB XflOpHCTbIM aMMOHHeM, pecycneHflHpOBaHHH ocaflKa neňKOflHŤOB B ΠΗΤ3-TenbHoň cpefle Hrna, BbifleneHHH peneBoro npoflyKTa, Hobmm ΗΒηπετοΗ το, ητοΗεΗτρκφνΓΗροΒ3Ηκβ HenbHoň kpobh ocyinecTEnnioT πρκ 1500-5000g b TeneHHe 35-45 MHHyT, oTSHpaiOT 30-75% oSteMa BepxHeft nacTH neňKOflHTCoflep®ameft spHTpoflHT·I hoh Maccbi, reMonH3 . ocymecTBnntoT 0,80-0,84% pacTBopoM xnopnfla ημμοηηη πρκjcooTHomeHHH 1:(3-50). IIpH3HaHo H3o6peTeHHeM no pe3ynbraTaM 3KcnepTH3bi, ocymecTBneHHoft FocypapcT-BeHHbíM ΚοΜΗΤβτοΜ CCCP nó .nenaM H3o6peTeHHň η οτκρΜτκή, 260968

Claims (1)

1. -5- pSeDMŽT vynálezu Způsob výroby lidského leukocytárního interferonu odstře-děním dárcovaké krve» oddělením leukooytů hernolýzou zbývají-cích erytrocytů chloridem amonným, resuspendování usazenýohleukooytů v živné půdě podle Eagla oddělením cílového pro-duktu, vyznačující se tím, že za účelem zvýšení výtěžku pro-duktu se provede odstředění použité krve při 1500 až 5000 gpo dobu 35 až 45 minut odebírání 30 až 75 % objemu vrchníčásti leukooyty obsahující hmoty erytrocytů, provede se he-rno lýza 0,80 až 0,84 % roztokem chloridu amonného při poměru1 : /3 až 50/. 260968