CS259704B1 - Method of immunological fuctional fractions preparation from inbred mouse strains' serum - Google Patents
Method of immunological fuctional fractions preparation from inbred mouse strains' serum Download PDFInfo
- Publication number
- CS259704B1 CS259704B1 CS84452A CS45284A CS259704B1 CS 259704 B1 CS259704 B1 CS 259704B1 CS 84452 A CS84452 A CS 84452A CS 45284 A CS45284 A CS 45284A CS 259704 B1 CS259704 B1 CS 259704B1
- Authority
- CS
- Czechoslovakia
- Prior art keywords
- load
- fractions
- serum
- sediment
- sucrose
- Prior art date
Links
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 title claims description 8
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 6
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title claims description 4
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 title description 2
- 241000700605 Viruses Species 0.000 claims description 18
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 claims description 8
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 claims description 8
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 claims description 8
- 239000013049 sediment Substances 0.000 claims description 8
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 claims description 8
- 239000000872 buffer Substances 0.000 claims description 7
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 claims description 7
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M sodium chloride Inorganic materials [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 7
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 claims description 7
- 108010044467 Isoenzymes Proteins 0.000 claims description 5
- 238000005227 gel permeation chromatography Methods 0.000 claims description 5
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 claims description 5
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 claims description 4
- 210000002381 plasma Anatomy 0.000 claims description 4
- HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N Heparin Chemical compound OC1C(NC(=O)C)C(O)OC(COS(O)(=O)=O)C1OC1C(OS(O)(=O)=O)C(O)C(OC2C(C(OS(O)(=O)=O)C(OC3C(C(O)C(O)C(O3)C(O)=O)OS(O)(=O)=O)C(CO)O2)NS(O)(=O)=O)C(C(O)=O)O1 HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- WOBHKFSMXKNTIM-UHFFFAOYSA-N Hydroxyethyl methacrylate Chemical compound CC(=C)C(=O)OCCO WOBHKFSMXKNTIM-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 claims description 3
- 229920001577 copolymer Polymers 0.000 claims description 3
- 229960002897 heparin Drugs 0.000 claims description 3
- 229920000669 heparin Polymers 0.000 claims description 3
- 125000004029 hydroxymethyl group Chemical group [H]OC([H])([H])* 0.000 claims description 3
- 239000000725 suspension Substances 0.000 claims description 3
- 230000005526 G1 to G0 transition Effects 0.000 claims description 2
- 102000003855 L-lactate dehydrogenase Human genes 0.000 claims description 2
- 108700023483 L-lactate dehydrogenases Proteins 0.000 claims description 2
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 claims description 2
- 239000008280 blood Substances 0.000 claims description 2
- STVZJERGLQHEKB-UHFFFAOYSA-N ethylene glycol dimethacrylate Chemical compound CC(=C)C(=O)OCCOC(=O)C(C)=C STVZJERGLQHEKB-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 230000007717 exclusion Effects 0.000 claims description 2
- 239000007863 gel particle Substances 0.000 claims description 2
- 238000001738 isopycnic centrifugation Methods 0.000 claims description 2
- QXNVGIXVLWOKEQ-UHFFFAOYSA-N Disodium Chemical class [Na][Na] QXNVGIXVLWOKEQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 claims 1
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 9
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 8
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 4
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 4
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 4
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 3
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 3
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 3
- 208000010125 myocardial infarction Diseases 0.000 description 3
- 229920002477 rna polymer Polymers 0.000 description 3
- 201000000980 schizophrenia Diseases 0.000 description 3
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 2
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 2
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 description 2
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 description 2
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 2
- BDOYKFSQFYNPKF-UHFFFAOYSA-N 2-[2-[bis(carboxymethyl)amino]ethyl-(carboxymethyl)amino]acetic acid;sodium Chemical compound [Na].[Na].OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O BDOYKFSQFYNPKF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KFDNQUWMBLVQNB-UHFFFAOYSA-N 2-[2-[bis(carboxymethyl)amino]ethyl-(carboxymethyl)amino]acetic acid;sodium Chemical compound [Na].[Na].[Na].[Na].OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KFDNQUWMBLVQNB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000024172 Cardiovascular disease Diseases 0.000 description 1
- 101710088194 Dehydrogenase Proteins 0.000 description 1
- 206010014733 Endometrial cancer Diseases 0.000 description 1
- 206010014759 Endometrial neoplasm Diseases 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- 102000004316 Oxidoreductases Human genes 0.000 description 1
- 108090000854 Oxidoreductases Proteins 0.000 description 1
- 230000006819 RNA synthesis Effects 0.000 description 1
- 230000024932 T cell mediated immunity Effects 0.000 description 1
- 230000006978 adaptation Effects 0.000 description 1
- 239000011543 agarose gel Substances 0.000 description 1
- 239000003708 ampul Substances 0.000 description 1
- 230000005875 antibody response Effects 0.000 description 1
- 230000023555 blood coagulation Effects 0.000 description 1
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 description 1
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 238000002512 chemotherapy Methods 0.000 description 1
- 230000002559 cytogenic effect Effects 0.000 description 1
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- 241001493065 dsRNA viruses Species 0.000 description 1
- 238000013399 early diagnosis Methods 0.000 description 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 1
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 230000008030 elimination Effects 0.000 description 1
- 238000003379 elimination reaction Methods 0.000 description 1
- -1 ethylene dimethyl methacrylate Chemical compound 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 210000003754 fetus Anatomy 0.000 description 1
- 238000010353 genetic engineering Methods 0.000 description 1
- 108091008039 hormone receptors Proteins 0.000 description 1
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 1
- 238000009399 inbreeding Methods 0.000 description 1
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 230000002458 infectious effect Effects 0.000 description 1
- 238000001155 isoelectric focusing Methods 0.000 description 1
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 1
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 1
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 1
- 244000045947 parasite Species 0.000 description 1
- 230000010076 replication Effects 0.000 description 1
- 230000004044 response Effects 0.000 description 1
- 230000000698 schizophrenic effect Effects 0.000 description 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 1
- 239000002002 slurry Substances 0.000 description 1
- 238000010257 thawing Methods 0.000 description 1
Landscapes
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Description
Vynález se týká způsobu přípravy imunologicky funkční frakce získané ze séra inbredních kmenů laboratorních myší, např. infikovaných virem zvyšujícím izoenzym laktátdehydrogenázu. Výsledkem je imunologicky účinná frakce.The invention relates to a method for the preparation of an immunologically functional fraction obtained from the serum of inbred strains of laboratory mice, e.g., infected with the isoenzyme lactate dehydrogenase virus. The result is an immunologically active fraction.
Autoři vynálezu se zabývali stanovením izoenzymu LDH (1.1.1.27 L-iactate: NAD oxidoreduktázy) u experimentálních i lidských nádorů) ve vztahu k chemoterapii. Pokud se používalo v experimentálním studiu myší různých, kmenů, autoři zjistili, že izoenzym 'LDII jo ojediněle v myším séru významně zvýšen ještě před pokusem. Toto zvýšení způsobuje LDH virus, „perfektní“ parazit u myší. LDH virus (Rileyův virus, LDVJ je zařazen mozi neklasifikované „pomalé“ RNA viry. Jeho replikace nevyžaduje DNA-dependentní syntézu ribonukleové kyseliny. Jeho reservoárem je populace divokých myší, jimž působí doživotní onemocnění. Autoři sledovali tento jev dále a po rozvinutí gelové chromatografie a některých imunologických metod se pokusili o detekci protilátkové odpovědi na toto agens i u lidských pacientů. K ověření zvolili takové choroby, u nichž byla již dříve popsána zvýšená aktivita izoenzymu LDH.The present inventors investigated the determination of the LDH isoenzyme (1.1.1.27 L-iactate: NAD oxidoreductase) in both experimental and human tumors) in relation to chemotherapy. When used in experimental studies of mice of different strains, the authors found that the isoenzyme 'LDII is sporadically elevated in mouse serum prior to the experiment. This increase causes LDH virus, the "perfect" parasite in mice. LDH virus (Riley's virus, LDVJ is classified as the brain of unclassified "slow" RNA viruses. Its replication does not require DNA-dependent ribonucleic acid synthesis. Its reservoir is a population of wild-type mice with life-threatening disease.) Some immunological methods have attempted to detect antibody responses to this agent in human patients and have selected diseases in which an increased activity of the LDH isoenzyme has been previously described.
Autoři zjistili, že u pacientů s nejrůznějšími druhy zhoubných nádorů a prekance2 roz existuje významná imunologická odpověď lidského leukocytu v různých imunologických testech na frakce získané z myšího LDH viru. Též jsou na tyto frakce citlivé leukocyty pacientů s infarktem myokardu, pacientek, které spontánně potrácejí bez gynekologické příčiny a u nichž je vyloučeno onemocnění Jinými virozami nebo antropozoonozami a konečně pacientů se schizofrenií.The authors have found that there is a significant immunological response of human leukocyte in various immunoassays to fractions derived from mouse LDH virus in patients with a variety of cancers and precancers2. Also leukocytes of patients with myocardial infarction, patients who spontaneously abort without a gynecological cause and who are excluded from other viral or anthropozoonotic diseases, and finally patients with schizophrenia, are also sensitive to these fractions.
Způsob přípravy imunologicky funkční frakce získané ze séra inbreidních kmenů laboratorních myší, např. C3H, infikovaných virem zvyšujícím izoenzym laktátdehydrogenázu spočívá podle vynálezu v tom, že myší plazma získaná z krve upravené heparinem se podrobí nejméně dvojnásobné centrifugám po dobu 20 až 30 min. při zatížení 3 až 3,5 X 101 * 3 g, odebraný supernatant se čeří 1 až 2 min. při 9 až 11 X 1O3 g, získaný supernatant se podrobí další centrifugám po dobu 50 až; 70 min. při zatížení 50 až 100 X 103 g, získaný sediment se suspenduje v pufru majícím pH 7 až 7,4 sestávajícím z tris (hydroxymethyl)-aminomethan-NaCl (Tris-NaCIJ a dvojsodné soli ethylendiamintetraoctové kyseliny v minimálním objemu maximálně 1 ml s rovnovážnou centrifugací v sacharozovém hustotním gradientu se rozdělí a oblast odpovídající 32 až 38 % hmot. sacharózy s maximem 35 % hmot. sacharózy se odebere a po neředění výše uvedeným pufrem v objemovém poměru 1 : 0,5 až 1,5 se podrobí centrifugaci při zatížení 50 až 100 x 103 g, 50 až 70 min. přičemž manipulace s krevní plazmou až po získání posledního sedimentu se provádí při 2 až 6 C, získaný sediment se rozpustí v 1,5 až 3,0 ml fyziologického roztoku a podrobí se vysokotlaké gelové chromatografii, frakce odpovídající molekulové hmotnosti 3 .105 až 1,5 . 104 jsou imunologicky aktivní. Rovnovážná centrifugace se provádí po dobu 180 až 210 min při zatížení 150 až 180 X X 103 g. Jako stacionární fáze pro vysokotlakou gelovou chromatografii se použije Seiparon Herna — glcR, který je suspenzním kopolymerem 2-hydroxyethylmethakrylátu s ethylendlmethakrylátem s vylučovacím limitem kolony vyjádřeným molekulovou hmotností 3 X 105, velikost partikulí gelu je 32 až 40 fim, k detekci se používá diferenciální refraktometr a UV spektrofotometr s variabilní vlnovou délkou. Jako mobilní fáze se používá fyziologický roztok a jímá se frakce při vínové délce 340 nm.The method for preparing an immunologically functional fraction obtained from serum of inbreeding strains of laboratory mice, e.g. C3H, infected with the lactose dehydrogenase isoenzyme-enhancing virus is according to the invention, comprising subjecting mouse plasma derived from heparin-treated blood to at least two-fold centrifuges for 20-30 min. at a load of 3 to 3.5 X 10 1 * 3 g, the supernatant collected is clarified for 1 to 2 min. at 9 to 11 X 10 3 g, the supernatant obtained is subjected to further centrifugations for 50 to; 70 min. at a load of 50 to 100 X 10 3 g, the sediment obtained is suspended in a buffer having a pH of 7 to 7.4 consisting of tris (hydroxymethyl) -aminomethane-NaCl (Tris-NaClJ and disodium ethylenediaminetetraacetic acid disodium in a minimum volume of 1 ml with equilibrium by centrifugation in a sucrose density gradient, the area corresponding to 32-38% by weight of sucrose with a maximum of 35% by weight of sucrose is collected and subjected to centrifugation at a load of 50 after dilution with the above-mentioned buffer in a volume ratio of 1: 0.5 to 1.5. up to 100 x 10 3 g, 50 to 70 min, wherein the manipulation of blood plasma to the last sediment is carried out at 2 to 6 C, the sediment obtained is dissolved in 1.5 to 3.0 ml of saline and subjected to high pressure gel chromatography, fractions corresponding to molecular weight 3.10 5 to 1.5 10 4 are immunologically active Equilibrium centrifugation is carried out for 180 to 210 min under load 150-180 XX 10 3 g. As a stationary phase for high pressure gel chromatography, Seiparon Herna-glc R , which is a suspension copolymer of 2-hydroxyethyl methacrylate with ethylene dimethyl methacrylate having an elimination limit of the column of molecular weight 3 X 10 5 , gel particle size is 32 g. up to 40 [mu] m, a differential refractometer and a variable wavelength UV spectrophotometer are used for detection. Saline is used as the mobile phase and the fraction is collected at 340 nm.
Popsaným způsobem zhotovené frakce jsou použitelné v různých imunologických testech, testech pro buňkami médiovanou imunitu, pro protisměrnou elektroforézu na agarozovém gelu, elektrofokusaci, pro značení radioizotopy, pro studium hormonálních receptorů, pro experimentální ipráce v cytogenetice a genetickém inženýrství s cílem stanovit včasnou diagnostiku a monitorování níže uvedených onemocnění. Získané frakce jsou velice časnými (až několik let před vypuknutím onemocnění) pozitivními marketv lidskému tělu cizí ribonukleové kyseliny, která pravděpodobně kontaminuje lidské i zvířecí nádory, šedou kůru mozkovou schizofreniků a srdeční sval postižený infarktem myokardu, jakož i endometrium žen, které potrácejí z gynekologicky nezjistitelné příčiny a u nichž nebylo zjištěno jiné virové onemocnění.The fractions described herein are useful in various immunoassays, cell mediated immunity assays, agarose gel counter electrophoresis, electrofocusing, radioisotope labeling, hormone receptor study, experimental cytogenetics and genetic engineering to determine early diagnosis and monitoring the diseases listed below. The obtained fractions are very early (up to a few years before the onset of the disease) positive market in the human body for foreign ribonucleic acid, which is likely to contaminate human and animal tumors, gray cortex schizophrenics and causes and in which no other viral disease was detected.
Jestliže jsou frakce získané z LDH viru v libovolném z výše uvedených testů u pacienta pozitivní, lze konstatovat, že je v těle přítomen tzv. univerzální rizikový faktor a je nutno dále testovat stejnou metodou citlivost jednotlivých orgánů, zda nejsou napadeny. V tom případě se použijí antigeny připravené z těchto orgánů podle AO 254 706. Pozitivní orgánová odpověď bývá přítomna 3,5 i více len před výskytem prekancerózy a 10 i více let před výskytem nádoru.If the fractions obtained from the LDH virus are positive in any of the above tests in the patient, it can be stated that the so-called universal risk factor is present in the body and it is necessary to further test the sensitivity of individual organs for attack. In this case, antigens prepared from these organs according to AO 254 706 are used. A positive organ response is present 3.5 or more only prior to the occurrence of precancerosis and 10 or more years before the tumor.
U infarktu myokardu lze analogicky použít k testování frakce získané z LDH viru a jsou-li pozitivní, pak frakce získané ze srdce postiženého infarktem myokardu.In myocardial infarction, the fractions obtained from LDH virus can be used analogously and, if they are positive, fractions obtained from the heart affected by myocardial infarction.
U onemocnění schizofrenií lze použít k testování frakce získané z LDH viru a jsou-11 pozitivní, pak frakce získané ze šedé kůry mozkové.In schizophrenia diseases, fractions obtained from LDH virus can be used to test and are positive, then fractions obtained from gray cortex.
U žen potrácejících z gynekologicky nezjistitelné příčiny, u nichž je vyloučeno jiné virové onemocnění, ev. antropozoonóza, lze použít k testování frakce získané z LDH viru a jsou-li pozitivní (nutno testovat i jejich partnery], ipak u ženy frakce získané z lidského karcinomu endometria.In women aborting for gynecologically undetectable causes in whom other viral disease is excluded, ev. anthropozoonosis, can be used to test the fraction derived from LDH virus and if they are positive (also need to be tested by their partners), but in women the fraction derived from human endometrial cancer.
Statisticky významné pozitivní výsledky se získají také u tzv, kontaktů, to jest u osob, které žijí s výše uvedenými nemocnými ve společné domácnosti. Nejčastěji mají takové osoby pozitivní testy na frakce získané z LDH viru, ale také na orgánový antigen většinou stejný jako nemocný, 1 když se cítí zdrávy.Statistically significant positive results are also obtained in the so-called contacts, i.e. in people living together with the above-mentioned patients in the same household. Most often, such persons have positive tests for fractions derived from LDH virus, but also for organ antigen, mostly the same as the patient 1 when they feel healthy.
Stanovení tzv. rizikového faktoru, to jest frakcí získaných z LDH viru, má význam proto, že se hodí jako levný časný markér lidskému tělu cizí ribonukleové kyseliny, k vytypování a monitorování skupiny obyvatelstva, z níž později pocházejí v časovém pořadí ženy potrácející z gynekologicky nezjistitelné příčiny, nemocní kardiovaskulárními chorobami, schizofrenií, nemocní zhoubnými nádory.Determination of the so-called risk factor, i.e. fractions derived from the LDH virus, is important because it is suitable as a cheap early marker for the human body of foreign ribonucleic acid to identify and monitor the population group from which women aborting gynecologically undetectable causes, patients with cardiovascular diseases, schizophrenia, patients with malignant tumors.
Význam stanovení spočívá v kombinaci vytypovaných antigenů a v jejich pravidelném sledování u rizikových skupin, protože se zdá, že adaptace lidského organismu na LDH virovou ribonukleovou kyselinu může být mírou zdraví jedince a naopak, že včasnými zásady do obranyschopnosti by k některým onemocněním nemuselo dojít. V tétm souvislosti doporučujeme provést vyšetření na LDH virus u partnerů před početím dítěte. Jsou-li oba pozitivní, je plod ohrožen.The significance of the assays lies in the combination of selected antigens and their regular monitoring in risk groups, because it seems that the adaptation of the human organism to LDH viral ribonucleic acid may be a measure of individual health and vice versa that some diseases may not occur by early principles. In this context, it is recommended to perform an LDH virus test with partners before conception. If both are positive, the fetus is at risk.
V následujícím je předmět vynálezu osvětlen na příkladu, který však nijak neomezuje jeho rozsah:In the following, the invention is illustrated by way of example but not limiting:
Příprava imunologicky funkčních frakcí získaných ze séra myší infikovaných LDH virem.Preparation of immunologically functional fractions obtained from serum of mice infected with LDH virus.
Myši týden inokulované sérem obsahujícím infekční LDH virus se vykrvácí podstřižením, krev po sražení a 30 min stání při teplotě místnosti se podrobí centriíugování při zatížení 2.1Ό3 g 20 min. Sérum se upraví heparinem a podrobí se dvakrát centrifugování při zatížení 3,5 . 103 g po dobu 25 min při teplotě -j- 4 °C. Získaný supernatant se po dobu 2 min při teplotě -j- 4 °C podrobí další centrifugaci při zatížení 104 g. Získaný spernatant se opět centrifuguje při zatížení 5.104 při + 4 °C 60 min. Obdrží se sediment, který obsahuje virus. Suspenduje sé v max. 1 cm3 pufru o pH 7 až 7,4. Pufr sestává z tris (hydroxymethylj-aminomethan-NaCl (Tris-NaCl) a dvojsodné soli ethylendiamintetraoctové kyseliny.Mice inoculated week LDH serum containing infectious virus podstřižením bleed, blood clotting, and after 30 minutes standing at room temperature is subjected at the load centriíugování 2.1Ό 3 g for 20 min. The serum is treated with heparin and subjected to centrifugation twice at 3.5 loading. 10 3 g for 25 min at 4 ° C -J-. The supernatant obtained after 2 min at 4 ° C -J- subjected to further centrifugation at a load of 10 4 g. Spernatant obtained was again centrifuged at a load of 10.05 4 at + 4 ° C for 60 min. The sediment containing the virus is received. It is suspended in a maximum of 1 cm 3 of buffer at pH 7 to 7.4. The buffer consists of tris (hydroxymethyl) -aminomethane-NaCl (Tris-NaCl) and disodium ethylenediaminetetraacetic acid.
Suspenze se navrství na sacharózový hustotní gradient 15 až 50 % hmot. a centrifuguje se při zatížení 105 g 4 h nebo při 5.104 g přes noc při + 4 °C.The slurry was layered to a sucrose density gradient of 15 to 50 wt%. and centrifuged at 10 5 g for 4 h or at 5 x 10 4 g overnight at + 4 ° C.
Gradient se rozdělí a bere se frakce v oblasti 35 % sacharózy, obsahující virus.The gradient is separated and a fraction in the region of 35% sucrose containing virus is collected.
Naředí se výše uvedeným pufrem 1:1a znovu se centrifuguje při zatížení 5 .104 g 1 h při + 4 °C. Získaný sediment se rozpustí ve 2 cm3 fyziologického roztoku a zataví se do ampulí. Uchovává se ve zmrazeném stavu.Dilute with the above 1: 1 buffer and centrifuge again at 5.10 4 g / h at + 4 ° C. The sediment obtained is dissolved in 2 cm 3 of saline and sealed into ampoules. It is stored frozen.
Obsah ampule se po rozmražení injukuje do kolony po 1 ml a dělí se pomocí vysokotlaké gelové chromatografie. Kolona je naplněna suspenzním kopolymerem 2-hydroxyethyl-methakrylátu a ethylendimethakrylátu s vylučovacím limitem 3.105. Detekce se provádí diferenciálním refraktometrem R 043 a UV průtokovým spektrofotometrem s variabilní vlnovou délkou. Jako mobilní fáze se používá fyziologický roztok a jímá se frakce při vlnové délce 340 nm s molekulovou hmotností 105 až 1,5 . 104.The contents of the ampoule are injected into the 1 ml column after thawing and separated by means of high pressure gel chromatography. The column is packed with a suspension copolymer of 2-hydroxyethyl methacrylate and ethylene dimethacrylate with an exclusion limit of 3.10 5 . Detection is performed by differential refractometer R 043 and UV flow spectrophotometer with variable wavelength. Saline is used as the mobile phase and the fraction is collected at 340 nm with a molecular weight of 10 5 to 1.5. 10 4 .
Claims (2)
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CS84452A CS259704B1 (en) | 1984-01-19 | 1984-01-19 | Method of immunological fuctional fractions preparation from inbred mouse strains' serum |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CS84452A CS259704B1 (en) | 1984-01-19 | 1984-01-19 | Method of immunological fuctional fractions preparation from inbred mouse strains' serum |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CS45284A1 CS45284A1 (en) | 1988-03-15 |
| CS259704B1 true CS259704B1 (en) | 1988-10-14 |
Family
ID=5336608
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CS84452A CS259704B1 (en) | 1984-01-19 | 1984-01-19 | Method of immunological fuctional fractions preparation from inbred mouse strains' serum |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CS (1) | CS259704B1 (en) |
-
1984
- 1984-01-19 CS CS84452A patent/CS259704B1/en unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CS45284A1 (en) | 1988-03-15 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Hehlmann et al. | RNA in human leukemic cells related to the RNA of a mouse leukemia virus | |
| Krishnan et al. | Immunopathologic studies of systemic lupus erythematosus. II. Antinuclear reaction of γ-globulin eluted from homogenates and isolated glomeruli of kidneys from patients with lupus nephritis | |
| CA1052245A (en) | Detection of breast cancer | |
| Cooper et al. | In vivo release of glycoprotein I from the Ha subline of TA3 murine tumor into ascites fluid and serum | |
| EP0067646B1 (en) | In vitro method and test kit for determining cellular immunocompetence | |
| CA1211062A (en) | Sensitive tests for malignancies based on dna detection | |
| Bouma et al. | Presence of factor VIII-related antigen in blood platelets of patients with von Willebrand's disease | |
| Murphy et al. | Kinetics of the antibody response to Anaplasma marginale infection | |
| US4329331A (en) | Diagnostic method for detection of systemic lupus erythematosus | |
| EP0313156A1 (en) | SnRNP-A antigen and fragments thereof | |
| Hockmeyer et al. | A complement fixation test for visceral leishmaniasis using homologous parasite antigen I | |
| CS259704B1 (en) | Method of immunological fuctional fractions preparation from inbred mouse strains' serum | |
| Savolainen et al. | Enhanced IgE response to Candida albicans in postoperative invasive candidiasis | |
| Steward et al. | Circulating antigen-antibody complexes in onchocerciasis | |
| CN106199005A (en) | The method using CD137 expression detection lymphocyte anti-colorectal cancer activity | |
| RU2130615C1 (en) | Express method for diagnosing tuberculosis using latex agglutination reaction | |
| US4474876A (en) | Flow cytometric analysis of histamine receptors | |
| Malcolm et al. | Detection of a tumor-associated antigen on the surface of human myelogenous leukemia cells. | |
| RU2452962C2 (en) | Method and test system for detection of circulating immune complexes | |
| Fife Jr et al. | Isolation and characterization of a serologically active exoantigen of Schistosoma mansoni cercariae | |
| CN100519759C (en) | Method for preparing agglutination reagent for rapidly detecting typhoid fever | |
| Inami et al. | Micro-hemagglutination tests for detection of native and single-strand DNA antibodies and circulating DNA antigen | |
| Chenthamarakshan et al. | Diagnostic potential of fractionated Brugia malayi microfilarial excretory/secretory antigen for bancroftian filariasis | |
| RU2050003C1 (en) | Method for diagnosing keratoacanthoma transformation into scuamous cell carcinoma of the skin | |
| Watanabe et al. | Platelet antithrombins: Role of thrombin binding and the release of platelet fibrinogen |