CS252603B1 - Průmyslový kmen houby Claviceps purpurea (Fr.) Tul. 59 CC 5/86 - Google Patents
Průmyslový kmen houby Claviceps purpurea (Fr.) Tul. 59 CC 5/86 Download PDFInfo
- Publication number
- CS252603B1 CS252603B1 CS861707A CS170786A CS252603B1 CS 252603 B1 CS252603 B1 CS 252603B1 CS 861707 A CS861707 A CS 861707A CS 170786 A CS170786 A CS 170786A CS 252603 B1 CS252603 B1 CS 252603B1
- Authority
- CS
- Czechoslovakia
- Prior art keywords
- strain
- alkaloids
- chanoclavin
- aldehyde
- tul
- Prior art date
Links
- 241000221751 Claviceps purpurea Species 0.000 title claims abstract description 8
- 229930013930 alkaloid Natural products 0.000 claims abstract description 20
- SAHHMCVYMGARBT-UHFFFAOYSA-N Isochanoclavine I Natural products C1=CC(C(C(NC)C2)C=C(C)CO)=C3C2=CNC3=C1 SAHHMCVYMGARBT-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 7
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 claims abstract description 5
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 claims abstract description 5
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims abstract description 4
- 244000005700 microbiome Species 0.000 abstract description 4
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 abstract description 3
- 229920002444 Exopolysaccharide Polymers 0.000 abstract description 2
- 241000233866 Fungi Species 0.000 abstract 1
- SAHHMCVYMGARBT-HEESEWQSSA-N chanoclavine-I Chemical compound C1=CC([C@H]([C@H](NC)C2)\C=C(/C)CO)=C3C2=CNC3=C1 SAHHMCVYMGARBT-HEESEWQSSA-N 0.000 abstract 1
- 230000002349 favourable effect Effects 0.000 abstract 1
- DAVNRFCJMIONPO-UHFFFAOYSA-N (7-methyl-6,6a,8,10a-tetrahydro-4h-indolo[4,3-fg]quinoline-9-yl)methanol Chemical compound C1=CC(C2C=C(CO)CN(C2C2)C)=C3C2=CNC3=C1 DAVNRFCJMIONPO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 4
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 4
- 150000003797 alkaloid derivatives Chemical class 0.000 description 4
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 4
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 3
- 239000000049 pigment Substances 0.000 description 3
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 2
- 230000035784 germination Effects 0.000 description 2
- 238000000034 method Methods 0.000 description 2
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 2
- 238000005507 spraying Methods 0.000 description 2
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 2
- BGNGWHSBYQYVRX-UHFFFAOYSA-N 4-(dimethylamino)benzaldehyde Chemical compound CN(C)C1=CC=C(C=O)C=C1 BGNGWHSBYQYVRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- XJOOMMHNYOJWCZ-UHFFFAOYSA-N Agroclavine Natural products C1=CC(C2C=C(C)CN(C2C2)C)=C3C2=CNC3=C1 XJOOMMHNYOJWCZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000221760 Claviceps Species 0.000 description 1
- 241000207782 Convolvulaceae Species 0.000 description 1
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 1
- 229920001503 Glucan Polymers 0.000 description 1
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 235000005811 Viola adunca Nutrition 0.000 description 1
- 240000009038 Viola odorata Species 0.000 description 1
- 235000013487 Viola odorata Nutrition 0.000 description 1
- 235000002254 Viola papilionacea Nutrition 0.000 description 1
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 1
- 238000009395 breeding Methods 0.000 description 1
- 230000001488 breeding effect Effects 0.000 description 1
- 238000004737 colorimetric analysis Methods 0.000 description 1
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 1
- 238000000326 densiometry Methods 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 229960003133 ergot alkaloid Drugs 0.000 description 1
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 1
- 230000003400 hallucinatory effect Effects 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 238000009776 industrial production Methods 0.000 description 1
- 238000010565 inoculated fermentation Methods 0.000 description 1
- 239000002054 inoculum Substances 0.000 description 1
- 238000011835 investigation Methods 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 238000004811 liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 1
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 1
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 1
- 230000000144 pharmacologic effect Effects 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 230000028070 sporulation Effects 0.000 description 1
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 238000000825 ultraviolet detection Methods 0.000 description 1
- 238000009281 ultraviolet germicidal irradiation Methods 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
Landscapes
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Řešení se týká nového průmyslového
kmene houby Claviceps purpurea (Fr.)
Tul 59 pro přípravu alkaloidů chanoklavinu
a chanoklavin-1-aldehydu submersní
fermentací, který je uložen ve sbírce
mikroorganismů Mikrobiologického ústavu
ČSAV v Praze pod označením CC 5/86. Kmen
v podmínkách hloubkové kultivace produkuje
vysoká množství klavinových alkaloidů
s výhodným zastoupením chanoklavinu
a chanoklavin-l-aldehydu při nízké hladině
průvodních klavinových alkaloidů
a zanedbatelné tvorbě exopolysacharidů.
Description
Vynález se týká nového průmyslového kmene houby Claviceps purpurea (Fr.) Tul. 59, uloženého ve sbírce mikoorganismů Mikrobiologického ústavu ČSAV v Praze pod označením CC 5/86, vyznačujícího se při submersní kultivaci vysokou produkci alkaloidů chanoklavinu strukturního vzorce I
a chanoklavin-l-aldehydu strukturního vzorce II
Oba zmíněné alkaloidy se u divokých i průmyslových kmenů rodu Claviceps vyskytují pouze ve stopových množstvích. Z těchto důvodů nebyly dosud stanoveny jejioh farmakologické účinky. U chanoklavinu se předpokládá halucinogenní účinek ve směsí s dalšími klavinovými alkaloidy produkovanými rostlinami čeledi Convolvulaceae.
Chanoklavin-l-aldehyd lze považovat za vhodný substrát pro přípravu nových polosyntetických derivátů námelových alkaloidů. Zevrubné sledování biologických účinků obou alkaloidů a přípravu jejich polosyntetických derivátů umožní vynález.
Výhodami nového kmene podle vynálezu jsou: vysoká submersní produkce klavinových alkaloidů (3 až 6 g/L), bohaté zastoupení chanoklavinu (40 až 60 %) a chanoklavin-l-aldehydu (20 až 30 %), nízký obsah průvodních alkaloidů (10 až 15 % elymoklavinu, 5 až 10 % agroklavinu), intenzívni sporulace, nízký výskyt exopolysacharidů.
Charakteristika nového kmene C. Purpurea 59
Patentem chráněný kmen 59 tvoři na agarovém živném mediu T2 (C. Spalla, in Genetics of Industrial Microorganisms, eds. Z. Vaněk, Z. Hošfálek, J. Cudlín, Elsevier, Amsterdam 1973, p. 393) souvislou místy hrudkovité zvrásněnou plochou vrstvou šedobéžového myoelia s kapkami světlehnědéhp exudátu na povrchu kultury.
Do agarové půdy vylučuje hnědý pigment. Vzdušné mycelium kultury bohatě sporuluje. Převážně tvoří mokrokonidie. Submersní kultury se vyznačují kratšími hyfami větveného mnohobuněčného mycelia zpočátku sestávajícího ze sfaceliálnich buněk.
Výboj kultury v podmínkách submersní inkubace je provázen tvorbou makro- a mikrokonidií. Mycelium starší submersní kultury (nad 10 až 12 dnů) tloustne a rozpadá se na arthrospory a chlamydospory. Tvorbu klavinových alkaloidů provází vlnově červený exocelulární pigment, který ve starších kulturách přechází do černé barvy.
Původ nového kmene
Nový produkční kmen 59 byl vyšlechtěn z průmyslového kmene C. purpurea 35 (AO 246 704), odvozeného z průmyslového kmene CP7 (AO 204 301), mutací UV světlem ve třech krocích. Veškeré kultivace při šlechtění kmenů probíhaly v temnu při 24+1 °C. Spory mateřské kultury kmene
35, která byla kutlivována 3 až 4 týdny v Endo zkumavkách na šikmé agarové půdě T2, byly suspendovány ve fyziologickém roztoku.
Výsledná suspense obsahovala 3,9 . 107 spór/ml. Z isolátů po ozáření UV světlem dávkou 2
000 erg/mm byl vybrán kmen 41, který tvořil ploché kolonie, dobře spoluroval, a klíčivost jehož spor byla 67 %. V podmínkách submersní fermentace produkoval 3 až 4 g/1 alkaloidů.
Ve spektru těchto alkaloidů převládl, stejně jako v případě rodičovského kmene 35, agroklavin.
Mutací spor kmene 41 dávkou UV světla 2 000 erg/mm výše uvedeným postupem byl získán isolát 37 se spektrem alkaloidů změněným ve prospěch chanoklavinu a chanoklavin-l-aldehydu „ 2 s výtěžkem 2 až 3 g/1. Mutací spor kmene 37 dávkou UV světla 2 000 erg/mm byl získán kmen 59 s vyšší produkcí celkových alkaloidů (3 až 6 g/1). Srovnání nového kmene 59 s výchozími kmeny je uvedeno v Tab. 1.
Způsob kultivace nového kmene C. purpuréa 59 pro získání výchozí suroviny k isolaci chanoklavinu a chanoklavin-l-aldehydu a k následné výrobě finálních produktů a léčebných preparátů je doložen v příkladu použití, aniž by se tímto příkladem jakkoliv omezovaly vlastnosti nového kmene, způsob jeho kultivace a použití při průmyslové výrobě.
Příklad 1
Krátkodobě je nový kmen 59 uchováván v temnu při 4 °C se zabezpečením proti vysychání media a to ve formě 21denních kultur vyrostlých na šikmém agarovém mediu T2 v Endo zkumavkách při 24-1 °C. Uchovávané kultury jsou pravidelně přeočkovávány v tříměsíčních intervalech. Dlouhodobě je kmen 59 uchováván specifickým lyofilizačním postupem.
Výchozí inokulum pro submersní fermentaci klavinových alkaloidů je připraveno smytím spor maximálně čtyřtýdenní kultury kmene 59 vyrostlé na agarovém mediu T2. Z této suspense 7 je přeneseno cca 5.10 spor v objemu 2 ml do 60 ml tekuté živné půdy Tl (Spalla C. , in Genetics of Industrial Microorganisms, eds. Z. Vaněk, Z. Hošřálek, J. cudlín, Elsevier, Amsterdam 1973, p. 393) v Erlenmayerových baňkách (300 ml).
Zaočkované medium je inkubováno 10 dnů v temnu při 26 - 1 °C na rotačním třepacím stroji (240 ot./min, excentr 5,5 cm). Z takto získaného inokula je 4,5 ml přeneseno do do Erlenmayerových baněk (300 ml) obsahujících vždy 60 ml fermentačního media CS2 (AO 199 986). Zaočkované fermentační medium je inkubováno 21 dnů v temnu při 26 - 1 °C na rotačním třepacím stroji (240 ot./min , excentr 5,5 cm).
Alkaloidy vyloučené do fermentačního media jsou stanoveny kolorimetricky (G. J. Banks et al., J. Gen. Microbio. 82, 345, 1974) a složení alkaloidové směsi densitometricky, tj. chromatografií tekutiny ve vyvíjecí směsi chloroform-methanol-NH^ (8:2:0,02) na plotnách Silufol bez UV detekce. Po postřiku chromatogramu Ehrlichovým roztokem a vysušení horkým vzduchem byly skvrny analyzovány na densitometru Shimadzu při vlnové délce 585 nm.
| Tab. 1: | Srovnání nového kmene | C. purpuréa (Fr. | ) Tul 59 s | výchozími kmeny | 35, 41 a 37 |
| Kultura | Znak | 59 | 37 | 41 | 35 |
| povrchové | šedobílé | šedobílé | šedobílé | šedobílé | |
| mycelium | ploché | ploché | ploché | zvrásněné | |
| x0 > 0 h (0 | pigment | hnědý | červenohnědý červenohnědý | červenohnědý | |
| tJi | konidiace | dobrá | dobrá | dobrá | dobrá |
| klíčivost | |||||
| konidií (%) | 10 | 25 | 67 | 10 |
pokračování tabulky 1
| Kultura | Znak | 59 | 37 | 41 | 35 |
| Celkové alkaloidy (14 d/ mcg/ml) | 3 760 | 2 500 | 4 850 | 2 800 | |
| Ή | dominantní | chanoklavin | chanoklavin | agroklavin | agroklavin |
| (0 | alkaloidy | chanoklavin-l- | chanoklavin- | elymoklavin | elymoklavin |
| i | -aldehyd | -1-aldehyd | |||
| ω | ' exocelulární | ||||
| glukany | stopy | stopy | 10 | 12 | |
| g/1 pigment | vínový až černý | červenohnědý | červenohnědý | červenohnědý |
Chanoklavin-l-aldehyd má po postřiku Ehrlichovým reagens barvu azurově (zelenavě) modrou, čímž se odlišuje od modrofialovýoh skvrn ostatních klaviňových alkaloidů.
Claims (1)
- Průmyslový kmen houby Claviceps purpurea (Fr.)Tul. 59 CC 5/86 pro přípravu alkaloidů chanoklavinu a chanoklavin-l-aldehydu submersní fermentaci.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CS861707A CS252603B1 (cs) | 1986-03-12 | 1986-03-12 | Průmyslový kmen houby Claviceps purpurea (Fr.) Tul. 59 CC 5/86 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CS861707A CS252603B1 (cs) | 1986-03-12 | 1986-03-12 | Průmyslový kmen houby Claviceps purpurea (Fr.) Tul. 59 CC 5/86 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CS170786A1 CS170786A1 (en) | 1987-02-12 |
| CS252603B1 true CS252603B1 (cs) | 1987-09-17 |
Family
ID=5352121
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CS861707A CS252603B1 (cs) | 1986-03-12 | 1986-03-12 | Průmyslový kmen houby Claviceps purpurea (Fr.) Tul. 59 CC 5/86 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CS (1) | CS252603B1 (cs) |
-
1986
- 1986-03-12 CS CS861707A patent/CS252603B1/cs unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CS170786A1 (en) | 1987-02-12 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Khokhlov et al. | Effect of A‐factor on the growth of asporogenous mutants of Streptomyces griseus, not producing this factor | |
| RU2139874C1 (ru) | Полициклические соединения, способ и штамм для их получения, противопаразитная композиция и способ подавления паразитарных инфекций | |
| Tansey | Isolation of thermophilic fungi from alligator nesting material | |
| EP0427405A1 (en) | Yeasts and their use in astaxanthin production | |
| US3428526A (en) | Production of radicicol | |
| Ginterova | Dedikaryotization of higher fungi in submerged culture | |
| CS252603B1 (cs) | Průmyslový kmen houby Claviceps purpurea (Fr.) Tul. 59 CC 5/86 | |
| US20150079642A1 (en) | Fermentation process for the production of rapamycin | |
| US5861518A (en) | Phthalide compounds and their production process | |
| CZ397498A3 (cs) | Dibenzooxazepinové a -dioxepinové deriváty a jejich použití jako protinádorových prostředků | |
| US3314961A (en) | Heterocyclic carboxylic acids and their production | |
| GB2112776A (en) | New heterocyclic anti-tumor substances | |
| KR960004032B1 (ko) | 신균주 모나스커스 앵카 732y3(kccm10014) | |
| US3883561A (en) | Antibiotic lactones | |
| Malinka | Saprophytic cultivation of Claviceps | |
| US3898327A (en) | Antibiotic azdimycin | |
| Shirane et al. | Mineral salt medium for the growth of Botrytis cinerea in vitro | |
| Baráthová et al. | Antibiotic-induced changes of mycelial growth of Botrytis cinerea | |
| US3513232A (en) | Antibiotic sl 2052 | |
| US4753959A (en) | Antibiotic lactone compound | |
| US5236929A (en) | Compound uca1064-b | |
| JPH0246294A (ja) | ストレプトミセス属微生物からのアングサイクリノンおよびその製造方法 | |
| Ramm et al. | Biosynthesis of the phytotoxin tentoxin: I. Synthesis by protoplasts of Alternaria alternata | |
| CS253097B1 (cs) | Průmyslový kmen houby Claviceps fusiformis Loveless F 27 CC-4/85 | |
| CA1285514C (en) | Physiologically active substance fa-4283, its derivatives and production thereof |