CS248586B1 - Inactivated vaccine against ovine listeriosis - Google Patents

Description

248 588

Vynález sa týká inaktivovanej očkovaoej látky z vyhřátýchvirulentnýoh kmeňov mikroorganizmu Listeria monooytogenes izo-lovanýoh z ntozgovej tkáně ovieo postihnutých listeriokou me-ningitídou, ktorá vyvolává u očkovancov stav špeoif lokej chrá-nenosti proti klinicky manifestnej formě ochorenia a ktorá jemožná použit’ pre imunoprofylaxiu listeriózy ovieo.

Listerióza, ako infekČné nekontagiózne ochorenie Pudía zvierat vyvolaná mikroorganizmom Listeria monooytogenes sastala v posledných rokoch jednou z hlavnýoh přičiň ekonomic-kých strát v chovoch ovieo. Výskyt tohoto ochorenia nevytvXralen vážný zveroždravotný problém, ale aj vážný problém z hra-diska všeobecného zdravia. Z jednotlivých kategorií hospodářských zvierat sú najviacpostihované týmto ochorenim ovce. V chovoch týchto zvieratspésobuje ochorenie vážné, .ekonomické straty v dósledku vyso-koj mortality, výskytu abortov, spomalením rastu u jahniatv intenzívnom výkrme, zvýšením nákladov na epizootologickéopatrenia a terapeutické zásahy, Všeobecne sá v terapii ochorenia používané rožne druhyantibiotik a sulfonamidoV alebo ich rožne kombinácie. SCHELD,Tí.Il., FLETCHER, D.D., FINK, F.IST. , SANDE, M.A. : Response totherapy in an experimental rabbit model of meningitis due toListeria monooytogenes, /J.Infect.Dis., ΐ4θ, 1979, s.287-291/stanovili v králičom modeli, že najáčinnejšou terapiou prelisterická meningitídu je parenterálna aplikácia antibiotikampicilínu a gentamycínu. Avšak antftLotická terapia méže byt’úspěšná len po určité klinické štádium oohorenia t.j. pokial’nie sú manifestne vytvořené nervové příznaky ochorenia. Okremtoho používáni© antibiotik vytvára pozitivny selekčný tlakna výskyt rezistentných kmeňov tohoto mikroorganizmu.

Vysoké náklady spojené s likvidáciou tohoto infekčnéhoochorenia znižujú ekonomická efektivnost’ v chove ovieo. Zatolioto stavu sa ako najefektívnejšie opatrenia v boji protilisterióze ovieo javí zavedenie špeoifiokého imunogénu, ktorýby po aplikáoii u očkovaných zvierat vytvořil dostatočná 2 - 248 588 chránenosť proti klinicky manif estnej formě listeriozy. V sú- časnosti sa u-nás komerčně nevyrába špecifioký imunogén a vše- obeone je len veleni málo odborných práo zaoberajáoioh sa lmuno profylaxiou tohoto ochorenia pri ovciach. V roku 1981 publikoval KEMPSKI,W. správu o tlmení liste-riŠzy ovieo za použitia inaktivovaných autoohtonnýoh vakoln/Proby zwalezania listeriozy owiec przy uzyciu autoszpzepionekZycie Weterinaryjne 5» s.l4l—144/, YALCIN, N., GREMILLET,J.P.:Contribution a l*etude de 1’ immunoprophylaxie antilisteriennechez les ovine. /Probléme of Listeriosis, Prooeedings of thesewenth International symposium, Sofia, 1979» s.334-338/, pou-žívali k Speoifiekej profylaxi! tohoto ochorenia inaktivovanúvakoinu, ktorá obsahovala Standardně kmene sérotypov I a IV doplněné o autoohtonné kmene, ktoré boli izolované z chovov s a-kútnym výskytom ochorenia. Okrem použitia inaktivovanýoh auto-clufconnýoh vakoín v imunoprofylaxii tohoto ochorenia bola při-pravená aj živá atenuovaná vakcína z kmeňov Listeria monocyto-genes sérotypov 1 a 4b /IVANOV, I., DRAGANOV, M., DIKOVA,Ts.:Study on the aotive immunoprophylaxis of sheep listeriosis.Prohlems of listeriosis, Prooeedings of the sewenth Interna-tional symposium, Sofia, 1979» s.324-333/·

Na základe uvedeného je v súčasnosti potřebné zavedenievhodnéj vakoíny pre imunoprof-ylaxiu listeriozy ovieo. Apliká-cia vakoíny vyhovuje praktickým chová tel’ským podmienkam a md-že byt’ použitá na ochranné očkovanie v endemioky zamořenýchchovooh ovieo s opakovaným výskytom listeriozy, ako aj v oho-voch prostýoh klinioky manifestnej formy ochorenia. Sálej jevakoinu možné núdzove použit* v ohnisku nákazy pri doporučenínasledovnýoh opatření: choré jedince s klinioky manif estnýmipriznakmi listerickej encefalitidy sa odporazia, ostatně saSpeoifidky terapeutioky ošetria a súčasne sa vykoná vakoiná-oia a revakoinácia.

Vakcína připravená podlá vynálezu nróže nájsť široké prak-tické využitie v živočišnéj výrobě v ohovooh ovieo, kde v pod-statné j miere přispěje k zníženiu výskytu listeriozy a týmzlepší ekonomická efektivnost* v ohovooh ovieo. - 3 - 248 588

Vakcína podl’a vynálezu obsahuje 4 až 6 x ΙΟ^θ zmesi inak-tivovaných bakteriálnyoh tlel mikroorganizmu Listorla monocyto-genes piatich kmeňov v 1 ml v rovnakom objemovom pomere, emul-govaných v adjuvantnej látke, ktorou je gél hydroxidu hlinité-ho, alebo zmes adjuvantnýoh olejov.

Podl’a námi uvedených pokusov bolo dokázané, že je možnévyrobit’ inaktivovanú očkovaciu látku proti listerióze oviecz bakteriálnej kultury pripravenej kultiváoiou virulentnýchkmeňov mikroorganizmu Listeria monooytogenes, ktoré boli autor-mi izolované z mozgu jahniat a oviec postihnutých akútnou me-ningo-enoefalitiokou formou ochorenia. Tieto kmene boli uloženév čs.zbierke mikroorganizmov Univerzity J.E.Purkyne v Brně,tř. Obránců miru 10. Emeňom boli přidělené nasledovné depozit- ně čísla : CCM 3847, CCM 3848, CCM 3849, CCM 3850, CCM 3851.Kmene boli testované z hl’adiska ich sórotypovej příslušnostia virulencie. Charakteristika jednotlivých kmeňov: CCM 3847 sérotyp l/2a, pre myš l,OSOxlO8# CCM 3848 sérotyp 4b , 11>^θ pre myš 2,797x10?,· CCM 3849 sérotyp l/2a, ,ΙΒ^θ P^o myš 4,743x10^; CCM 3850 sérotyp 4a , 11>5θ pro myš 5,633χίθ*^» CCM 3851 sérotyp l/2a, pre myš 2,649x10?.

Minimálna infekčná dávka pre ovcu po intravenoznej aplikáciibola 3,3χίΟ^θ a maximálna infekčná dávka 2,7x10^ kolonie tvo-riacioh* zárodkov.

Vakcína připravená & uvedených kmeňov má dobrý Specifickýimunostimulačný účinok u oviec proti čelenžnej intravenoznejinfekci! s virulentnýtn kmeňom mikroorganizmu Listeria rnonocyto-genes.

Imunoprofylakticky je možné vakcínu použit’ u všetkých vě-kových kategorií oviec a pre jej praktická aplikáciu bola vy-pracovaná optimálna imunizačná schéma, která respektuje súčasnýstav poznátkov v oblasti etiopatogenézy tohoto ochorenia. Pou-žitie uvedenej vakcíny v chovoch oviec v podstatnej miere zní-ži výskyt klinicky manifestných foriem listeriozy, v důsledkučoho sa zvýši ekonomická efektivnost’ chovu tohoto druhu hospo-dářských zvierat. - 4 - Příklad 248 Μβ

Kmene Listeria monooytogenes CCM 3θ47, CGM 3848, CCM 3θ49,CCM 3θ5θ, CCM 3351 sú pomnožené v sterilnom sojovou médiu,predstavujúcom roztok aminokyselin získaný enzymatickou hydro-lýzou delipidizovanej sojovej múky, ktoré je obohatené o 1 jíobjemového 40 $ roztoku glukózy a vytemperované na teplotu37 °C, Každý kmeň tohoto mikroorganizmu je pomnožovaný separát-ně. Po 18 h kultiváoie pri 37 °C sa testuje vzorka každého kme-ňa pre stanovenie optickej denzity, pH bakteriálnej masy a ste-rility. Výsledná denzita musí byt’ dosiahnutá minimálně 30 $a pil nesmi.e klesnúť pod hodnotu 7» 2 - 7*4. Získaná bakteriálna masa je ohemicky inaktivovaná přidáním10 Jj-ného formaldehydu tak, aby výsledná konoentrácia formalde-hydu nepřekročila maximum 1,6 mg/ml. Xnaktivované bakteriálněkultury sú následné egalizované za použitia rovnakýoh objemovbakteriálnyóh kultúr jednotlivýoh vakcinačných kmeňov. Výslednákonoentrácia inaktivovaných raikroorganizmov v egalizovanej bak-teriálnej mase je 4 až 6 x 10^ .

Takto připravený zmesný bakterín je naviazaný na adjuvan-tuú látku, ktorou mOže byť A.l/OR/ysělt alebo zmes adjuvantnýoholejov. Pri použiti Al/OH/ygélu sa tento přidává do výslednéjkoncentráoie 800 g/100 ml v inaktivovanom bakteríne. Pri použi-ti adjuvantnýoh olejov sa tieto emulgujú v pomere tak, že k 4dielom inaktivováného bakterínu je přidaný 1 diel adjuvantnýoholejov.

Vakoína je vyhovujúca, ak je prostá bakteriálnej a pliesňovej kontaminácie, je neškodná, ak po podkožněj aplikácii 0,3 mlvakoíny neuhynie v priebehu 8 dní po aplikácii ani jedna z oč-kovaných myší a po subkutánnej aplikácii králikom 2 x 1,5 mlv rozmedzí l4 dní, vyvolá titer Specifických aglutinačnýohprotilátok v rozsahu 1:80 až 1:120. - 5 - 248 586

Xmunogénna hodnota inaktivovanej očkovaoej látky stanove-ná indexom mortality po infekoii jo 0,11 u imunizovaných ovioo,oproti 1,705 u oviec neimunizovanýoh v laboratornych podm i eti-ka ch. Efektivnost’ inaktivovanej očkováooj látky v chovoch oviooso átaoionárnym výskytom listeriozy bola stanovená na základepodiolu poklesu úhynu s diagnózou listerioza u očkovaných zvie-rat oproti naočkovaným. Priememý 1/ [ni Hie*# **

Claims (3)

1. - 6 - PRBDMET VYNÁLEZU 248 588 1« Inaktlvovaná očkovaoia látka proti listerioze ovleo vyznaču-je sa týmy že obsahuje 4 až 6 x ΙΟ^θ zmesi-lnaktlvovanýohbalcterlálnyoh tlel mikroorganizmu Llsterla monooytogeneskraeňov CCM 3847, CCM 3848, CCM 3849, CCM 3850, CCM 3851v 1 ml v rovnakom objeraovom poměre, emulgované v adjuvantnejlátke·
2. 2, Inaktlvovaná očkovaoia látka podlit bodu 1, vyznačuje sa tým,že adjuvantnou látkou je gél hydroxidu hlinitého, alebozmes adjuvantnýoh olejov. Vytiskly Moravské tiskařské závody, střed. 11 100, tř.Lidových milicí
3. 3, Olomouc Cena: 2,40 Kčs