Riešenie sa týlka sposobu výběru bachorových mikroorganizmov, najma laktohacilov, streptOkokov a stafylokokov. Vyznačuje sa tým, že sa kmene s najvhodnejšou ikombináciou maximálnej adherentnej bakteriocinogénnej, plazmiid inhibičnej, amylolytiokej, resp. ureolytrckej aktivity viacnásobne kultivačně pasážujú za přítomnosti plazmid ediminačných' látok. 248207 248207The solution to the method of selection of rumen microorganisms, in particular lactoacids, streptococci and staphylococci. It is characterized in that the strains with the most suitable combination of maximum adherent bacteriocinogenic, inhibitory plasmid, amylolytic, respectively. ureolytic activities are passaged in culture in the presence of plasmid edinating agents multiple times. 248207 248207
Vynález sa týká sposobu výběru amylolytických a ureolytiekých adherentných bachorOvých mikroorganizmov, najma lalktobacilov, streptokokov a stafylokokov. U mláďat prežúvavcov s funkčně latentným bachorom sú významné zastúpené mikroorganizmy s amylolytitíkou a ureolytickou aktivitou. Z hradiska interakci! medzi mikroorganizmami v bachore vefkú úlohu hrá najma ich schopnost adherovať sa na epiteliálne buňky bachorovej steny, ako aj schopnost produkovat bakteriocíny. Pretože pri neonatálnej hnačike mláďat prežúvavcov existuje vysoká frekvencia šírenia sa plazmidov rezistencie a viruilencie mechanizmom horizontálneho přenosu medzi potenciálně patogénnymi enterobaktériami, určitú úlohu pri jeho Obmedzovani možu zohrávať aj také kmene bachorových baktérií, (ktoré inhibujú konjugačný přenos plazmidov. V posledných rolkoch sa pre výběr kmeňov pre přípravu kolonizačných preparátov používá ako hlavný selekčný znak schopnost homofermentatívnej produkcie kyseliny mliečnej, pričom sa zaibúda najma na jav špecificity aďherencie baktérií na epiteliálne buňky gastrointestinálneho traktu. Podobné nie je zohladnená ani enzymatická aktivita mikroorganizmov. Ureolytická a amylolytická aktivita sa však u niektorých bachorových mikroorganizmov po suhkultiváciách stráca. Uvedené nevýhody odstraňuje riešenie podta vynálezu.The invention relates to a method for selecting amylolytic and ureolytic adherent ruminal microorganisms, in particular lactobacilli, streptococci and staphylococci. In the case of ruminant pups with functionally latent rumen, the microorganisms with amylolytic activity and ureolytic activity are significant. From the hillfort interaction! Among the rumen microorganisms, their ability to adhere to the epithelial cells of the rumen wall, as well as the ability to produce bacteriocins, plays a major role. Since the neonatal diarrhea of ruminant pups has a high frequency of spreading resistance and viruilence plasmids through the mechanism of horizontal transfer between potentially pathogenic enterobacteria, rumen bacteria strains (which inhibit conjugation of plasmids) may also play a role in its limitation. for the preparation of colonization preparations, it uses as the main selection feature the ability of homofermentative lactic acid production, with the particularity of specificity and bacterial adherence to the epithelial cells of the gastrointestinal tract being similar, but the enzymatic activity of the microorganisms is similar. These disadvantages are eliminated by the solution of the invention.
Podstata vynálezu spočívá v tom, že kmene po otestovaní na adherenciu, bakteriocinogénnu, plazmid inhibičnú, amylolytickú a ureolytickú aktivitu sa selektujú na najvhodnejšiu kombináciu maximálnych aktivit a viacnásobné kultivačně pasážujú za přítomnosti plazmid elimlnačných látok, ako je například akridín oranž, dodecysulfát sodný, resp. ethídium bromid, čím sa získajú vyštachtené mikroorganizmy so stabilnou produkciou. PříkladSUMMARY OF THE INVENTION The strains of the present invention are characterized in that the strains tested for adherence, bacteriocinogenic, plasmid inhibitory, amylolytic and ureolytic activity are selected for the most suitable combination of maximum activities and passaged in multiple culture in the presence of plasmid eluting agents such as acridine orange, sodium dodecysulfate and the like. ethidium bromide, thereby obtaining depleted microorganisms with stable production. Example
Kmene baktérií izolované od prežúvavcov sa otestujú na adherenčnú schopnost na epiteliáílne buňky bachorovej steny, dalej na bakteriocinogénnu aktivitu metodou dvojvrstvového agaru, plazmid inhibičnú aktivitu metodou inhibície konjugačného přenosu plazmidov a napekou na ureázovú a amylázovú aktivitu ikomerčnými testami. Kmene s najvhodnejšou kombináciou maximálnych aktivit sa ďalej mnohonásobné kultivačně pasážujú v tekutej živnej pode, napr. v Todd-Hewittovom bujóne za přítomnosti 0,5 (Ug/rol akridín oranže, čím sa vyselektujú geneticky stabilně kmene. iVynález má použitie pri výbere bachorových kmeňov mikroorganizmov pre přípravu kolonizačných preparátov pre mláďata prežúvavcov.Bacterial strains isolated from ruminants are tested for adherence to rumen wall epithelial cells, bacteriocinogenic activity by double-layer agar, plasmid inhibitory activity by conjugative plasmid transfer inhibition and fusion to urease and amylase activity by icomeric assays. Further, strains with the most suitable combination of maximum activity are multiple-passively passaged in a liquid nutrient broth, e.g., in Todd-Hewitt broth in the presence of 0.5 (Ug / rol acridine orange to select genetically stable strains. The invention has utility in the selection of rumen strains of microorganisms). for the preparation of colonization preparations for ruminant juveniles.