CS247127B1 - Způsob výroby preparátů humánního transfer-faktoru - Google Patents

Abstract

fiešení se týká výroby standartního a imunologicky účinného preparátu humánního tranfer - faktoru, který v kombinaci s ostatními postupy zdokonaluje frakcionaci čerstvé neporušené krve. Diky tomu se získá racionálnější a méně nákladné využiti lidské krve. Spočívá ve využiti vedlejšího produktu, kromě klinicky použitelných základních produktů, jsou jako erytrocyty, kryoprecipitát a plazma, na vysoce jakostní terapeutický preparát. Postup spočívá v promývání a odstřeáovéni oddělující od leukocytární •vrstvy "buffy coats" s následním nejméně deeetlnásobním pomalým zmražením a ryohlým rozmrazováním.

Description

O&naCTh ΠρΗΜβΗβΗΗΗ Η3θ6ρεΤεΗΗΗ Η3θ6ρβτβΗΗβ KacaeTCH cnocoĎa naroTOBneHHH npenapaTOB nejioBenecKoro TpáHc-φβρ-φΒΚΤΟρβ H3 ΠβρΗφβρϊΜβΟΚΗΧ JieňKOItHTOB KPOBH 3flOpOBbIX, HeBbIĎopOHHbK flO-ΗοροΒ, npnueM nojiyqeHHMe npenapaTbi xapaKTepH3VioTCít BMcoKoň ημμυηο6ηοπογή-wecxoň aKTHBHOCTMO npH CTHMyjlHUHH KJieTOWHOH HMMyHHOH CHCTeMbl. IIoctohhho pacTymaa noTpeĎHocTb b KOHcepBHpoeaHHoň kpobh h npoBeneHHe οπτή-MaJihHoň reMOTepaimH npn μηηημηπβηομ pHcxe ρ,ηη 6οπβηογο npHBe.no yxe flaBHoκ Bce Ďoíiee BO3pacTa»meMy βΦΦθκτηβηομυ HcnonbaoBaHHio hohopckoh kpobh bynpexfleHHHX neperiHBaHHH kpobh h floHopcTBa ΓβΡ. B HacToamee BpeMH jamouKOHueHTpHpyioTCH Ha pa3pa6oTKe hobhx npenapaTOB H3 nenoBenecKoň uenbHoň κρο·bh, oco6eHHo npH Hcnonb3OBaHHH HenpHMeHHeMbix flo chx nop cocTaBHbix nacTeňkpobh h Ha 6onee pauHoHaJibHoň κομ6ηηβιχηη paaJiHHHbix cnocofioB npenapaijHH npHnoBboneHHH xauecTBa h KonmecTBa.

Bnaroflapn hobmm πο3Η3Ηηημ 06 HMMyHOAet}>HixHTHbix coctohhhhx, nonyneHHbíM aanocneflHne roflbí, h ece eme HeyfloBJíeTBopHTenbHoň CHTyauHH TepaneBTHnecKHxBO3MO3KHocTeň noBJíHHTh Ha 3TH naoTO yrpoxaionpie »H3Hh 3aĎoneBaHHH BO3HHKaeTHeoĎXOflHMOCTh pa3pa@0TKH COOTBeTCTBeHHO geňCTByiOn(HX MeflHKaMeHŤoB. Τβκημ TepaneBTHnecKHM npenapaTOM, CTHMyjiHpywmHM HMMyHHbie peaKnnn,3aBHcjnuneοτ Τ-ΠΗΜφομΗτοΒ, HBJíHeTCH TpaHcýep^aKTop. ΤρβΗοφβρ-φεκτορ βπηηθτ Ha Koppe-jihtu κηβτοΗΗοΓο HMMyHHTeŤa Ha jkhbom opiraHH3Me h b naĎopaTopHbix ycnoBHítx6ea Toro, ητοβω ĎbuiH noflpoĎHo H3BecTHbi ero fleňcTByronpie κομποηθητη h hx Me-XaHHSM fleiiCTBHH. Oh ČOCTOHT H3 CMeCH HHSKOMOJieKyjIHpHblX nOJIHnenTHflOB /MOJie-KynapHbiň eec < 10 000 flanbTOH/ c’ po 12 βμηηοκηοποτβμη h o^hoh flojieií pHĎo-HyKJieHHOBoň rhcjiotu c 2 - 3 HyKJteoTHflHbWH menonaMH. ΤρΗΗΟφερ-φβκτορ hbjih-eTCH TennocToňKHM npn 37°C Ha 6 nacoB h HenyBCTBHTejibHbíM npH BO3fleňCTBHHPH6oHyKJiea3bi, HesoKCHpHĎoHyKJieaabi h XHMOTpnncHHa, ho npH BoafleňcTBHH TeMne-paTyp >90°C η npoH£3M - paspymaeTca.

IloKaaaHHHMH pnn JieqeĎHoro πρΗΜβκβΗΗΗ τρεΗοφερ-φβκτορβ ηβπηιοτοη nepBHHHbie HMMyHHbie ΑβφεκτΜ,Η3πρΗΜβρ, npH araMMarnoCyjiHHeMHH niBeífrjapcKoro THna, chhh- 247127 2- poMe dí-Gíorgío, 6one3HH Nezelof, cHHflpoMe Wiskott-Aldrich, aTaKCHH pacniH-peHHH KanuJiJiHpoB h apTepnoJi, npHoSpeTeHHbie ημμυηηηθ ,ηβφεκτΒΐ πρκ pa3JiHHHbixochobhhx 6ojie3HHX, HanpHMep, npH capKomo3e, 6one3HH Γοηκηηη, 3noKanecTBeHHbIX JIHMifcoiíHTOMaX, paKaX, npH JieneHHH HMMyHOflenpeCCaHTaMH H ΙζΗΤΟΟΤ3ΤΗΚ3ΜΗ,a Tax»e πρκ ΗΗφβκμΗηχ, Bbi3BaHHbix SaKTepnaMH, BHpycaMH η ΓρκβκβΜΗ, HanpH-Mep, npH o6tneň peaKiíHH opraHH3Ma Ha πρηβηβκη, cHHerHoňHbix ηηΦθκιΙηηχ h k3H—flHflaMHKO3aX. ΠρθΤΗΒΟΠΟΚ333ΗΗΗ nOKa ΗβΗ3ΒβΟΤΗΗ Η ΗΘ OIKHflatOTCH .

XapaKTepHCTHxa H3BecTHbix TexHHnecKHx pemeHHft flo HacToamero BpeMeHH npenapaTbi τρΒΗοφερ-φΒκτορβ ,no6biBaJiHCb TOJibKo b bweflHHHUHbIX npHrOTOBJíeHHÍÍ HJIH MaJlblX CKOnJieHHft -QT 10 flO 20 ΛΟΗΟΡΟΒ ΠρΗ ΠΟΜΟΠζΗκπβτοΗΗοή cenapauHH y noHopa ηπη πρκ πομοπ{η Φρβκηηοηηροβηηηη uenbHoň κρο-bh, opHeHTHpywmeroca HCKraoHHTeJibHo Ha MaKCHMaJibHoe nonyneHHe πβϋκοιχκτοΒ.3TOT BHfl Η3ΓΟΤΟΒΠΘΗΗΗ ΤρΗΗϋφθρ-φβΚΤΟρβ ΗΒΠΗβΤΟΗ. Ηβ3φφβΚΤΗΒΗΗΜ Β ΟΤΗΟΙΠβΗΗΗΟΠΤΗΜβΠΒΗΟΓΟ HCnOJIh3OBaHHH ΐχβΗΗΟΓΟ βΗΟΠΟΓΗΗβΟΚΟΓΟ CbipbH IjejIbHOň ΚρΟΒΗ,Tpe6yeT TexHHnecKH 6οπβπιηχ 3aTpaT h pacxoflOB. IIosTOMy Taxate He Moryr 6μτβ npe-BbuneHM Manbie cKonneHHa, hto oKa3biBaeTca ΗβοβχοηκΜΜΜ nna nenenanpaBneHHoroUJiHTenbHoro JieneHHH npenapaTOM b Bbicmeň Mepe. CTaHAapTH3HpoBaHHbiM h oflHo-pOflHbtM. flna Bcex flO CHX nop H3BeCTHbK npenapaTOB Τρ3Ηθφβρ-φ3ΚΤθρ8 BCJiefl-CTBHe Manbix cKonneHHň He μογπη 6μτβ yxasaHbí hh oflHopoflHMň cocraB'HH KaKHe*ίη6ο napaMeTpbi, nocTaTouHo xapaKTepH3yiomHe HMMyHonorHnecKoe neftcTBHe bnaSopaTopHbix ycnoBHax. fleňKouHTapHbie ππθηκη "buffy coats" KOHcepBHpoBaHHoft kpobh, CMecb πβήκομκ-γοβ η τροΜδοιριτοΒ, Hbjiíhotch b HacToamee BpeMH. HeacenaTejibHbíMH, MemaiomHMHφ3ΚΤΟρ3ΜΗ B KOHIjeHTpaTaX 3pHTpOU(HTOB, T3K K3K OHH MOryT ΠρΗΒβΟΤΗ K HMMyHH-3HpoBaHHio b cHCTeMe HLA h aa cneT o6pa3OBaHHa ΜΗκρο h MaxpoarperaTOB κ3HanHTejibHOMy cHHaceHHK) ycnexa nepenHBaHHa. JIene6Hoe HcnonbsoBaHne sthxjieÉKOHHTapHbix raieHoK "buffy coats" hq chx nop 6bino HeBosMoacHo. flna H3ro-TOBJíeHHH KOHUeHTpaTOB JieňKOUHTOB H TpOMÓOUHTOB 3TH nobOHHhie npOflyKTbl He-npnrOflHbl. fljIH 3THX 3£Η3ΗβΗΗΜΧ ΚΠΘΤΟΗΗΜΧ ΚΟΗΗ,βΗΤρβΤΟΒ TpeSyiOTCH eflHHHHHbienpHroTOBJíeHHH b CHCTeMe HLA πρκ ποΜοηπ .cenapaTopoB kpobh.

Hejib H3o6peTeHHH denbio H3o6peTeHHH aBnaeTca paiíHOHantjibíM cnocočoM Η3Γοτοβητβ· ne HMeioupiftcab HacToamee BpeMa b pacnopaaceHHH 3φφεκτΗΒΗΜίι HMMyHo6HonorHnecKHft npenapaT£VIH BO3fleHCTBHH Ha CnOCOĎHOCTb peaKIJHH, 3aBHCHmeň OT T—ΠΗΜφΟΙξΗΤΟΒ npH npH-ΜβΗβΗΗΗ HeHcnoJib3yeMbK no chx nop cocTaBHHx nacTeft kpobh β φορΜβ Tax Ha-3biBaeMbix neHKOHHTapHbix ruieHOK "buffy coats", κοτορΜϋ BcnejjcTBHe oneHb60JIbWHX HCXOflHbIX CKonneHHň ΗΒΠΗβΤΟΗ . OflHOPOflHblM Η ΠΟ CBOHM fleftCTByiOIUHM cy6-CTaHUHHM CTaHfíapTH3HpoBaHHbIM Η 3THM C03flaeT SjíaronpHHTHbie yCJIOBHH flUHycnfemHoro npoBefleHHa neuenHa. Πρκ stom, Η3ΓοτοΒΠβΗΗΗίί no 3TOMy Η3θ6ρβτβΗ-HOMy cnocoby npenapaT τρβΗοφβρ-φΗκ'τορβ οτηοοητθπβηο ero oflHopoflHocTH nococTaBy h ero KonHnecTBeHHoň HMMyHonorHnecKoft ηκτηβηοοτη b nabopaTopHbixycnoBHax, flonaceH cwaTbea co οτρογημη MacnrraSaMH φ3ρΜ3ηεΒΤΗΗβοκοΓο 3aKo-HonaTejibCTBa, flanee stot cnocob πρηγοτοβπθηηη τρβΗοφβρ-φΒκτορΒ flonaceHitejibHo BKjnonaTbca b HMeiomyioca 3aflany nepenHBaHHa kpobh h floHopcTBa, bkjiio-naa yace npaKTHKyionpieca cnocobH Φρπκηηοηηροββηηη flenbHoft kpobh. 247127

-3-

H3JlO»éHHe ČyiUHOCTH H3p6peTeHHH

OnMcaHHbie b xapaKTepHCTHKe H3BecTHbix pemeHHH HenocTaTKH ο6έ>ηοηηκ>τοη cnenym*-npiMH ΠρΗΗΗΗβΜΗ : IIpoBOflHMoe no chx nop eflHHKHHoe npHFoTOBJíeHHe TpaHcýep-ibaKTopa πρπ ποΜοπριKJieTouHoň cenapaixHH Ha floHope hjih npHMeHeHHe Manux CKonneHHH Ηβ npHBenoκ oflHopo«HOMy h cTaHflapTH3HpyeMOMy npenapaTy, ντο Tpe6yeTca nnH unaHoMep-Horo h itejieHanpaBJíeHHoro neneHHH. flanee ece pio chx nop H3BecTHbie cnocočw6binn HanpaBJíeHbí Ha MaKCHManbHoe nonyneHHe ηβήκοηκτοΒ xas. rnaBHyio nenbφραΚίρίΟΗΗρΟΒβΗΗΗ nenbHOÍi KpOBH, ΠρΗΗβΜ, 6β3 ΤΟΓΟ, UTOČbl BO3HHKai0IHHe npHňpyrnx cpocoóax Φρηκηηοηηροββηηη κθκ HeHcnoJib3yeMbie cocTaBHhie uacTH kpobhneňKoitHTapHue nneHKH "buffy coats" μογΛη 6biTb npHBenenbi κ ηρΗΜβΗβκΗΐο bxauecTBe ηοχοηηογο MaTepnana μπχ πρηγοτοβηθηκη τρεΗοφβρ-φβκτορβ. flrta Toro, hto6m yctpaHHTb sth npnnHHbí, ΗβοδρβτβΗΗΐο 6bina nocTaBJíeHa aanana,paapaboTaTb cnoco6, πρκ κοτ.οροΜ npH ΒκηιοηβΗΗΗ b TexHonorHnecKHň nponeccοβρββοτκΗ cBexeň KoHcepBHpoBaHHoň nenoBenecKoft ipiTpaTHoft kpobh, KoHcepBH-poBaHHoň nejioBenecKoft μητρετΗοή kpobh Ha AG ηπη renapnHOBoň nenoBenecKoňKPOBH B KJIHHHneCKH HCnOJIbSyeMbie SpHTpOlíHTHbie OCaflKH, ΚρΗΟΠρβηΗΠΗΤ3Τ HnnasMy nonyvHTt, neňxonHTapHbie nneHKH "buffy coats", no chx nop HexenaeMbieh oTópacbiBaeMbie, b nonycTHMOM KonnuecTBe h bmcokoA nacTOTe b βηηθ ποδοη-Horo npoflyKTa h hcxoahoio MaTepnana χριπ naroTOBneHHH τρβΗοφβρ-φβκτορβ. 3a cneT HHTerpaiíHH npaKTHxyionpixcH b HacTonmee BpeMH nponeccoB φρεκηΗοΗΗρο-saHHH uenbHoň kpobh ηβΗΚοιχητω nonyuaioTCH He kbk enHHCTBeHHbie, a khk no-ČovHbiň nponyKT Η 3THM ynaeTCH Η3Γοτοβητβ τρβΗΟφθρ-φβκτορ TeXHOnorHVeCKHnopasHTenbHo προοτο h c ManbíMH eaTpaTaMH.

CornacHo Η3οδρβτβΗΗΐο sth flocTHraeTca τθμ, ητο CBexeKOHcepBHpoBaHHaH κροΒΒueHTp^yrHpyeTCH npH 1800 o6/mhh npononxHTenbHocTbio b 10-40 MHHyT npHTeMnepaType +8° no +15°C, τηκ ντο τοηπκο apHTponHTbi ocenaioT b noeTaTouHoiínnoTHocTH h Ha apHTpoipiTax He o6pa3yeTCH KpoMKa neňKonHTapHoň πηθηκη"buffy coats". Ena3Mbi ot nsyx KOHcepsaTOB CKannHBaroTCH nocpencTBOM τθχηηκηΗ36μτομηογο HasneHHH asoTa h ^eHτpHφy rapyjoi ch 20 - 60 MHHyT πρκ 1800 no2000 o6/mhh η πρκ TeMnepaType ot +8° no +15°C, TaK ητο nonynaeTcn Hanoca-flOHHaa SecKneTowHaa nna3Ma. Ha Kaxfloe CKonneHHe no6broaeTCH ok. 4.10® no2.1Ó9 neňKOHHTOB b neňkonHTapHoft ππβΗκβ "buffy coats" nnn Η3ΓοτοβπθηηητρΒΗοφερ—φθκτορθ, IIocne oTfleneHHH csexceň nnaaMbi μηα ηβγοτοβπθηηη KpnonpeijHnHTaTa neňKonHTap-Hbie iineHKH "buffy coats" coxpaHjnoTca b κροΜκβ nna3Mbi b acenTHuecKHx ycno-bhhx flo τβχ nop, noxa He nonyveHbí peaynbTaTM 3ηεκτροφορβ38 Ha Au/SH, on-pefleneHHa b cbiBopoTKe kpobh TpaHcaMHHasbi rnwTaMHHa h nHpyeaTa h Hccnenoea-hhh Ha cutfrunuc. 3το BpeMH xpaHeHHH He AonxHo npeBbtmaTb 24 uaca, vto6h hs-6exaTb noTepb 3kthbhocth· IIpoflonxHTenbHbie nabopaTopHbie nanHbie aHannaa ot-COPTHpOBblBaiOTCH, ΤβΚΧβ npH BO3MOXHO ΠΟΒΤΟΡΗΜΧ HCCHeflOBaHHHX.

JleňKoipiTapHbie nneHKH "buffy coats" pecycneH3HpytoTCH c 30 - 50 μπ H3otohh-uecKoro HHbeKnnoHHoro pacTBopa NaCl h pecycneH3HH ot 15 no 20 CKonneHHftOÓbeflHHHWTCH. 3aTeM κρβΤΚΟΒρβΜβΗΗΟ ^eHTpHφyΓHpylOTCH CKOIUieHHH npH 800 -1000 o6/mhh, TeMnepaType +4°, ητοδω ocanHTb 6onbmyto vacTb BHeceHHbix apHTpo-UHTOB. Πρκ 3ΤΟΜ, ΠΟύΗβ ΐχβΗΤρΗφνΓΗρΟΒβΗΗΗ Ha SpHTpOIJHTaX He nonxeH očpaso-BaTbCH cnoň neňKonHTapHoň nneHKH "buffy coats". Hto6m ynanHTb MemarotuHeδβπκΗ nna3Mbi, cycneH3HH ot 30 no 60 MHHyT ηβΗτρκφνΓΗργτοτοΗ πρκ 1800 μο 247127 -4- 2000 o6/mhh. h BbicTynaioqHň pacTBop oT6pacbiBaeTCH. JleňKonHTHbie ocanKHpecycnBH3Hpy!0TCH B 50 flO 100 ΜΠ 6HnHCTHJTJIHpOBaHHOň BOflbl flJTH HHteKUHň H3aMopaxHBaioTCH npH -40°C, JJnn pa3pyineHHB κπβτοκ cycneH3HH JieňKoiiHTOB 3aMopaxHBaioTCH MHHHMyM 10 -15 pa3 MewieHHo npn -20° no cnocočy shell freezíng h 6hctpo οττηηβηιοτοηnpn TeMnepaType +30 °C. 3th nponeccbi MenneHHoro 3aMopa»HBaHHH h 6bicTporooTTaHBaHHH CnaronpHHTCTBywT ocBo6o»w'eHHio TpaHc$ep-4>aKTopa H3 κηετοκ. IlocnepaapymeHHB κηετοκ κτβτοηΗΜβ oÓjiomkh ocascnaroTcn yeHTpuýyrupoBaHHeM ot 30 ·no 60 MHHyT npn 1800 - 2000 o6/mhh. npn +4°C h HHCTbift hhh cnerKa MyTHbiňpacTBop, coflepatainHií CKonneHHbiň ηεήκομΗΤΗΜΗ aKCTpaKT ot ok. 500 - 1000 nop-HHft KOHcepBHpoBaHHoň kpobh, noflBepraeTCH ynbTpa$HJibTpauHH nna τογο, ητο6μoTflejiHTb BbicoKOMOJieKyjiapHbie cocTaBHbie nacTH, EecuBeTHbiň hjih cnerKa οκρβ-meHHbiň b xejiTbift ηβθτ yjibTpaýHJibTpaT cTepHjibHo (JiHJibTpyeTCfi uepes δβκτβρΗο-φΗΗΒτρ /pa3Mep πορΟ,2μΜ/ h b aCenTHnecKHx ycnoBHHX pa3nenneTCH Ha ποριχΗΗ.

JlHO$HJiH3anHH npenapaTOB, 3aMOpoweHHbtx no cnocoóy shell freezíng ocymecTB-jineTca HaHHHaa npn -15 no -10°C b BaxyyMe ot 0,1 no 0,3 τορρ no κοΗβΗΗοήTeMnepaTypw 4°C Bbnne 24 nacoB.

OflHa $acoBKa jiHo$HJiH3HpoBaHHoro npenapaTa conepatHT 5 epfimas, τρβκοφερ-φβκ- .Topa, cooTBeTCTBeHHo neííKonHTHoMy sKCTpaKTy 10 x 400 mji nenbHoň kpobh, M3-'roTOBJíeHHbiň no 3TOMy cnoco6y τρβΗοφβρ-φΒκτορ HBJíaeTCH CTepHJibHbíM h Ďecnnpo*reHHblM H flJIH BHyTpHMbnnenHOrO Η ΠοηΚΟΧξΙΟΓΟ ηρΗΜβΗβΗΗΗ paCTBOpneTCH B COOT“ΒβΤΟΤΒβΗΗΟ 5 MJI H «JIH BHyTpHBeHHOro ΠρΗΜβΗβΗΗΗ - B 30 MJI Η3ΟΤΟΗΗΗβΟΚΟΓΟHHbeKiyioHHoro pacTBopa NaCl. JIpenapaT CBo6oneH ot cyĎCTaHUHíí rpynn kpobh,rHCTOCOBMeCTHMblX ΗΗΤΗΓβΗΟΒ Η B ΗβΜ He oSHapyjKHBaeTCH ΓβΠ3ΤΗΤΗΟ aCCOHHHpO“BaHHblH ΒΗΤΗΓβΗ,

XpaHenne ηΗοφΗηΗ3ΗροΒβΗΗοΓο npenapaTa b TeneHHe 6 MecnneB no pa3pemeHHHHa BbinycK rapaHTnpyeT enaronanexHocTB b οτηοπιθηκη nepeHoca οηβοροτοηηογοrenaTHTa cooTBeTCTBeHHo npennHcaHHoň 33κοηομ o6«3aTejibHoň perHCTpanHH npnβο3ηηκηοβθηηη renaTHTa y noHopoB.

Kaxnbiň BbinycK τρεποφερ-φεκτορΑ npoBepneTcn b οοοτβ6τοτβηη c npenycMOT-peHHtiMH rocynapcTBeHHbíMH npoBepxaMH Ha φΗ3κκο h 6HoxHMHnecKHe napaMerpa hHa ero HMMyHOJiorHnecKoe neňcTBHe. Οοτβτοηηβη BJiara ηΗοφΗηΗβκροΒβΗΗοή cy6-CTaHlIHH MOHieT COCTaBJIHTb 5 7o Maccbl ňpH npOHOJEKHTertbHOCTH ΠρΗΜβΗΗβΜΟΟΤΗ12 MecnneB. 3HaneHHe.pH τρβΗοφβρ-φεκτορε, pacTBopeHHoro b H3OTOHHnecKoMΗΗΐεκηΗΟΗΗΟΜ pacTBope NaCl, noniKHO HaxonHTbCH b npenejiax 5,8 - 6,5. IlocnepaCTBOpeHHH B nUCTHJUIHpOBaHHOÍi Bone COOTHOmeHHe onTHHeCKOfi bjiothocth npn260 HM H 280 HM nOJDKHO COCTaBJIHTb 2,21 t 0,20.

ConepwaHHe ph6o3m op,noň Φηοοβκκ nonxHo HaxonHTbCH b npenenax ot 1,0 no5,0. mji, npennoHHTejibHo - ot 1,2 no 2,5 μγ h conepacaHHe nenTHna - b npene-nax ot 1,0 no 10,0 μγ, npennonTHTenbHo - ot 1,0 no 3,0 μγ. HMMyHonorHnec-K3H aKTHBHOCTb ΚβΧηΟΓΟ BbHiyCKa ΤρηΚΟφερ-φηΚΤΟρβ HCCJienyeTCH B peaKHHH MHK-ρθΤρ3ΗϋφθρΜ3ΙΙΗΗ ΙΙΗΜφομΗΤΟΒ (LTT) Η B HCnbITaHHH Ha E“pO3eTKOo6pa3OBaHHe.HHneKC ycHJieHHH, kbk Mepa fínn ποβηπιθηηοη τρεΗοφβρ-φεκτοροΜ CTHMynnnHH jihm-φοηΗΤΟΒ ΠΟ OTHOmeHHK) Κ HHnynHpOBaHHOMy CTHMyJIHTOpy φΗΤΟΓβΜΒΓΓηΐΟΤΗΗΗΗ3/PHA/ npH noóaBKe 1 μ,η PHA nonaceH COCTaBJIHTb MHHHMyM 1,4. Πρπ ηοπμτηηηηHa E-po3eTKoo6pa3OBaHHe npH noSaBKe· τρ3Ηθφβρ-φ8κτορ3 nonatHo 6biTb ycT.aHOB-neHo xapaKTepHoe noBbnneHHe ηοηκ po3eTKOo6pa3yioinHXcn πημΦοιχητοβ. 247127

-5- ΠρΗΜερ ocymecTBJíeHHH Η3ο6ρετεΗΗΗ

HaoSpeTeHne 6onee πο«ρο6ηο noncHHGTCH Hirace Ha HGCKOJJbKHX npHMepax. ΠρΗΜβρ 1 CBexeKOHcepBHpoBaHHan xpoBb Ha ACD-AG fu.e CTapme 4 nacoB/ «εΗτρΗφγΓκργετοΗb tghghhg 15 MHHyT πρκ 2000 o6/mhh h +8°C. EoraTbie jieňKOHHTaMH nna3Mbi otflByX KOHCepBaTOB CKaiUIHBaiOTCH Η «ΘΗΤρΗφγΓΗργίΟΤΟΗ npH 2000 o6/mHH B TGHGHHG40 MHHyT, npH 3TOM OCa«KH 3pHTpO«HTOB ΠΟΟΗΘ pecycneH3HH B KOHCepBHpyeMOMpacTBOpe Haxo«HT kjihhhhgckog πρΗΜθΗβΗΗε. Ποοπε οτ«επεΗΗΗ CBeaceft nnaeMbi,KOTopaa πρΗΜβΗΗβτοΗ «anae «jih Η3Γοτοβπβηηη κρΗοηρειχΗΠΗτβτε, Ha cjienyronpiň«GHb ποοπε pecycneH3HH b 30 mji ΗβοτοΗΗπεοκοΓΟ ΗΗΐ>εκ«ΗθΗΗθΓο pacTBopa NaClo6be«HHHioTCH no 15 JieňxoiJiHTapHbix iuighok "buffy coats” η «εΗτρκφγΓΗργιοτεΗ«JIH OT«eJieHHH eme HMGIOIHHXCH 3ΡΗΤΡΟ«ΗΤΟΒ npOflOJBKHTGnbHOCTbK) 5 MHHyT npH1000 o6/mhh. • B aaKJHOHeHHe JieftKo«HTHaH cycneH3HH cHJibHo «εΗτρκφγΓΗργετεΗ πρκ 2000 o6/mhhnpo«oJixHTejibHocTbio 40 MHHyT h ocaflox nocjie ycTpaHGHHH pacTBopa b 100 mji6H«HCTHJUiHpoBaHHoň Boflbí «JIH HHbeK«Hň pecycneH3HpyeTCH h 3aMopa»HBaeTCH.

Bcero 16 βγτωποκ CKonnaHHň /= 480 τρεΗθφγ3ΗθΗΗΜΧ g«hhh« «ejibHoň kpobh/ ot-TaHBawTCH 10 pa3 npH 30°C b TepMOCTaTax h 3aTeM mg«jighho 3aMopa«HBaioTCH.IlOCJie «βΗΤρΗφγΓΗρΟΒΒΗΗΗ ΠΡΗ 2000 OĎ/mHH paCTBOp 30 MHHyT γΤΙΒΤρβφΗΠΒΤργβΤ-ch, CTepHJibHo φΗΠΒτργετοπ h pasflejineTCH Ha nop«HH b 48 cocy«oB no 5 b«hhh«ίτρβΗΟφβρ-φβΚΤΟρβ. IloCJia ΠΗθφΗΠΗ38«ΗΗ npOBO«HTCH HCCJ18«OBaHHH Ha CTBpHJIh“HOCTb H nHporGHHOCTb·

HaroTOBJíGHHbiG no TaKOMy cnocoBy npanapaTbi cTGpnnbHbí η 6εεπΗροΓεΗΗω h hmgiotcJiG«yioinHG φΗ3Ηκο-XHMHHecKHe h HMMyHOJiorHHGCKOG napaMGTpbi: 3Han£HHe pH 5,9 ocTaTOHHaH BJiara 4,4%

OTHOniGHHG OnTHHGCKOft ΠΠΟΤΗΟΟΤΗ 260 K οπτΗΗεεκοϋ iuiothocth 280 2,12

Go«Gp»aHH£ πεπτΗ«ε 2,3 μγ ČO«fepwaHHG ρκ6θ3Μ 1,1 ΜΓ HH«y«HpOBaHHaH φΗΤΟΓβΜΒΓΓΠΙΟΤΗΗΗΗΟΜ /PHA/ CTHMynH«HH ΠΗΜφθ«ΗΤΟΒ B pcaK«HHΜΗΚρΟΤρεΗεφορΜβΠΗΗ ΠΗΜφθ«ΗΤΟΒ /LTT/ yCHJIHBaGTCH ΠρΗ «OČaBKG 1 "fAJl pacTBopaPHA 6jiaro«apfl τρΗΗεφερ-φβκτοργ b 2,9 pasa. ΠρΗΜβρ 2 H3rOTOBJlGHHe OCymGCTBJIHJlOCb aHanorHHHo cnoco6y, OnHCaHHOMy B ηρΗΜερε 1, B KaHGCTBG HCXOflHoro MHTGpHaJia CJiyjKHJIH 820 Τρ3Ηθφγ3ΗΟΗΗΜΧ G«HHH« «GJIbHOftKPOBH. B COOTBGTCTBHH C 3THM HOCHG pa3JIHHHbIX npO«CCCOB «εΗΤρΗφγΓΗροΒΗΗΗΗ,HHCTKH H npOMbIBKH, a ΤβΚΚΘ γΠΒΤΡ8φΗΠΒΤρ3«ΗΗ H CTepHJlbHOň φΗΠΒΤρΗ«ΗΗ 0ΜΠΗnojiynGHbí 82 cocy«a no 5 g«hhh« τρΒΗεφερ-φεκτορε xajKflbiíi.

Πρκ 3tom noJiynaioT cTGpHJíhHbiň η 6ccnHporcHHbtfí npcnapaT co cneflytoqHMH φΗ3Η-KO-XHMHHGCKHMH H HMMyHOJIOrHHGCKHMH napaMBTpaMHJ 3HaHGHHG pH 6,2 ocTaTOBHan BJiara 3,4% 247127 6 2,331,1 ΜΓ1,6 μγ oTHomeHHe οπτΗηβοκσΗ iuiothocth πρκ 260 hmk onranecKoň djiothocth πρκ 280 hm coflepacaHHe nenraflacoflep»aHHe ρκ6θ3Μ MHflyqHpoBaHHaH Φητογ6μβγγ.πκ>τηηηηομ /PHA/ CTHMyjiHipiH ΠΗΜφοη,ΗΤΟΒ b peaKUHHMaKpoTpaHc<J)opMaiíHH jihm<í>ol(htob /LTT/ ycmiHBaeTCH πρκ flo6aBKe 1 ^ji pacTsopaPHA 0JiaroflapH Tpanctbep-ftaKTopy b , 2.1 pa3a. H3 πρΗΜβροΒ ocymecTBBeHHH BMTeKaeT ocoGaa πρηγοαηοοτβ H3oopeTeHHoro cno-co6a ftJIH Η3ΓΟΤΟΒ.ΠβΗΗΗ CTaHflapTH3HpoBaHHoro H HMMyHOJlorHHeCKH «eňCTBytOmeronpenapaTa TpaHc<í>ep-<iiaKTopa, xapaKTepHsyromerocH KOMÓHHaiíHeň c flpyrHMH mara-mh cnocoSa ř(JiH (fcpaKnnoHHpoBaHHH yejibHoň κροΒΗ. Bjiaroflapa 3Toň CBH3H yqaeT-ch 6oJiee paijHOHajibHoe h 6onee BbiroflHoe no 3aTpaTaM HcnoJib3OBaHne HMetomeňcab pacnopHKeHHH b orpaHHneHHOM o6beMe hghhoh uejibHofi kpobh, npHneM, no cpaB-ΗβΗΗΐο c yxe H3BecTHbiMH TpaflHipioHHbíMH cnocoóaMH HMeeTca το npeHMymecTBo, HTO KpOMe KJIHHHUeCKH npHMeHHOMbK OCHOBHblX npOflyKTOB, T3KHX KBK OCaflKOBapHTponHToB, KpnonpennnnTaTa h nJia3Mbi, ro chx nop Bhi6pacbiBaeMbiň ποδοηκωβnpoflyKT npeo0pa3yeTca b BbicoKOKauecTBeHHbiň HMMyHHbiň TeparíeBTHuecKHH npe-napaT.

OopMyjia Η3θ6ρβΤβΗΗΗ

Cnoco6 noJiyneHHB eflHHbix no CBoeMy cocTaBy cBoóoflHbix ot cyĎCTampiň rpynnΚρΟΒΗ H riICTOCOBMeCTHMblX 3ΗΤΗΓβΗΟΒ. H TaKXe HCCJieflOBaHHblX Ha HMMyHOJiomnec-Koe fleňcTBne b JiaĎopaTopHbix ycjioBHax npenapaTOB τρβΗοφβρ-φβκτορΗ H3 nepH-φβρΗΗΘΟΚΗΧ JieíIKOIíHTOB UeJIOBe^eCKOň KpOBH, KOTOpbie MHHHMyM 1,4-KpaTHO yCH-jiHBawT HMMyHOJiornnecKoe neňcTBne HHflynHpoBaHHo# φΗΤ0ΓβΜ3ΓΓ\πκ>ΤΗΗΗΗ0Μ /PHA/CTHMyJlHUHH ΒΗΜφΟΙίΗΤΟΜ ΠρΗ floSaBKe 1 R JI paCTBOpa PHA B JiaČOpaTOpHbIX yCJIOBHHlih KOTOpbie noJiyneHbí npH HcxoflHOM CKonjieHHH kpobh 500 ro 1000 αοηοροβ, otjih-naromHÉCH T6M, hto Bbinaflaranne πρκ H3roTOBjieHHH KpHonpeipmuTaTa H3 ceexeňnejioBenecKoň kpobh jieííKoííHTapHbie πηθηκη "buffy coats" nocJie yflaneHHH 6eJi-KOBblX ΚΟΜΠΟΗ6ΗΤΟΒ njiaSMbl H SpHTpOIÍHTOB nOCpeflCTBOM ΙΠ3ΓΟΒ CenapaTHOÍÍ npOMblB-KH Η ρβΗΤρΗφγΓΗρΟΒβΗΗΗ ΠρΗ 800 flO 1000 o6/mHH H +4°C npOflOJDKHTeJIbHOCThlOot 5 «o 15 mhh, khk h nocjiefloBaTejibHo πρκ 1800 ro 2000· o6/mhh h +4°C ot 30 ro \60 mhh MHHHMyM 10-KpaTHbiM, a npeflnoHTHTenbHo 12- ro 15-xpaTHbiM, MefljieHHbíM3aMopa?KHBaHH6M h SbicTpbiM OTTaHBaHHOM paspymaioTCfl h nocne o.TnejieHHH oGjiom-kob κπβτοκ neHTp^yrapoBaHHeM πρκ 1800 ro 2000 o6/mhh npH +4eC ot 30 ro60 mhh noflBeprawTCH ζπΒτρηφκπΒτρΒίξΗΗ c nocneflyromeň CTepHJibHoíí φκπΒτρβιχΗβή,a 3aTeM cpa3y πρκ MeflJieHHOM BoapacTHHHH TeMnepaTypw b 3OHe Meacny -15 C h+4°C npn flaBJíeHHH ot 0,1 ro 0,3 τορρ πηοΦηπη3ηρ}γιοτοη,

AHHOTaiíHH H3o6peTeHHe KacaeTcn cnůcoSa HaroTOBJíeHHH npenapaTa nejioBenecKoro TpaHC-φβρ-φΗΚΤΟΡΗ H3 ΠβρΗφθρΗΗβΟΚΗΧ JieňKOUHTOB ΚροΒΗ 3flOpOBbIX, HeBbl6opÓHHbIX flo-HopoB, npHneM, noJiyneiiHbie npenapaTbi xapaKTepHayioTCfl oflHopoflHbSM cocTaBOMH BblCOKHM HMMyHOJIOrHneCKHM fleHCTBHeM. npH CTHMyjIHipiH ΚΠβΤΟΗΗοβ HMMyHHOÍÍ CHC~TeMbi. ΠρΗ 3TOM, b KauecTBe ncxoflHoro MaTepnana HaxoflHT npHMeHeHHe cocTaB-Hbie nacTH kpobh HexenaeMbie' h HeHcnoJibayeMbie npH flpyrnx cnocoĎax Φρηκαηοηη-pOBaHHH fleJIbHoň κροΒΗ B φορΜβ JieťÍKOflHTapHblX IUieHOK "buffy coate", T3K HTO3τοτ cnoco6 μοκθτ 6biTb oTHeceH κ fleňcTBywmeň 3aflane CJiyatČw kpobh h floHop-cTBa 6e3 ορηθητηροβκη Ha HcKjnonHTeJibHo MaKCHMaflbHoe noflyneHHe jieňKoflHTOB. 247127 7

Bnaronapn 3T0My oTHecemao κ yxe npaKTHKywmHMCH cnocoOaM φρβΚΑΗΟΗΗροΒβΗΗΗflOCTHraiOTCH HCXOflHbie CKOrtneHHH OT 500 AO 1000 AOHOPOB H 3THM MOHCeT 6blTb’nanyyeH οαηοροαημ# h no csoeMy HMMynonorHMecKOMy AeftcTBHio b JiaOopaTopHbixycnoBHflx CTaHAapTHSHpoBaHHUtt npenapaT, cooTBeTCTByiomHň ctpothm MacniTaSaMifcapMaAeBTHuecKoro aaKoHonaTenbCTBa κ b peaynbTaTe sToro co3qaeT 6naronpnHT-

Hbie yCAOBHA ΑΠΗ AJIHTejlbHOrO neHeHHH HMMyHHbtX 3a6oJieBaHHň. / IIpn3HaHo H9o6peTGHHeM no peďynbTaTaM sKcnepTHSM, ocymecTBneHHoň Βθαομοτβομno AanaM HBoCpeTeHHň η πβτβκτοΒ TflP. 247127

Claims (1)

1. pRbdmBt vynálezu 247 127 Způsob výroby preparátů humánního transfer-faktoru,zbavených složek krevních skupin a histokompatibilníchantigenů, zkoumaných na imunologický účinek v laborator-ních podmínkách z periferních leukocytů lidské krve, které,nejméně 1,4 násobně zesiluje imunologický účinek indukovanýfytohemaglutininem stimulace lymfocytem při přídavku 1 <el ,roztoku fytohemaglutininu v laboratorních podmínkách a kte-re jsou získány při výchozím spojení krve od 500 až do1000 dárců, vyznačující se tím, že oddělující se leukocy-tární vrstvy "buffy coats" se při výrobě kryoprecitátu zčerstvé lidské krve po oddělení bílkovinných složek plazmya erytrocytů postupem odděleného promývání a odstřelovánípři 800 až 1000 otáčkách/min a při + 4 °C po dobu 5 až 15minut, jakož i dále při 1800 až 2000 otáčkách/min a při+ 4 °C po dobu od 50 do 60 minut nejméně desetinásobným,výhodně 12 až 15 násobným pomalým zmražovánim a rychlým roz-mrazováním rozruší a pO odděleni částí buněk odstřeáenímpři 1800 až 2000 otáčkách/min při + 4 °C po dobu od 50 do60 minut se podrobí ultrafiltraci s následující sterilnífiltraci a dále se lyofilizuje při pomalém zvyšováni tep-loty od - 15 °C do + 4 °C za tlaku 15,53 až 59,99 Pa.