CS242808B1 - Způsob stanovení složení a aktivity insulinu - Google Patents
Způsob stanovení složení a aktivity insulinu Download PDFInfo
- Publication number
- CS242808B1 CS242808B1 CS8410293A CS1029384A CS242808B1 CS 242808 B1 CS242808 B1 CS 242808B1 CS 8410293 A CS8410293 A CS 8410293A CS 1029384 A CS1029384 A CS 1029384A CS 242808 B1 CS242808 B1 CS 242808B1
- Authority
- CS
- Czechoslovakia
- Prior art keywords
- insulin
- mobile phase
- sample
- activity
- acetonitrile
- Prior art date
Links
- NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N insulin Chemical compound N1C(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(NC(=O)CN)C(C)CC)CSSCC(C(NC(CO)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CCC(N)=O)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CSSCC(NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2C=CC(O)=CC=2)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(C)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2NC=NC=2)NC(=O)C(CO)NC(=O)CNC2=O)C(=O)NCC(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)NC(C(C)O)C(=O)N3C(CCC3)C(=O)NC(CCCCN)C(=O)NC(C)C(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(O)=O)=O)NC(=O)C(C(C)CC)NC(=O)C(CO)NC(=O)C(C(C)O)NC(=O)C1CSSCC2NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CC(N)=O)NC(=O)C(NC(=O)C(N)CC=1C=CC=CC=1)C(C)C)CC1=CN=CN1 NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 title claims abstract description 76
- 102000004877 Insulin Human genes 0.000 title claims abstract description 36
- 108090001061 Insulin Proteins 0.000 title claims abstract description 36
- 229940125396 insulin Drugs 0.000 title claims abstract description 36
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 20
- 230000000694 effects Effects 0.000 title claims description 12
- 239000000203 mixture Substances 0.000 title claims description 10
- 238000010828 elution Methods 0.000 claims abstract description 6
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 21
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N Phosphoric acid Chemical compound OP(O)(O)=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 12
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 7
- LTHNHFOGQMKPOV-UHFFFAOYSA-N 2-ethylhexan-1-amine Chemical compound CCCCC(CC)CN LTHNHFOGQMKPOV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 229910000147 aluminium phosphate Inorganic materials 0.000 claims description 6
- 239000012062 aqueous buffer Substances 0.000 claims description 5
- 239000007900 aqueous suspension Substances 0.000 claims description 2
- 125000004432 carbon atom Chemical group C* 0.000 claims description 2
- 238000001514 detection method Methods 0.000 claims description 2
- 150000003141 primary amines Chemical class 0.000 claims description 2
- 239000002904 solvent Substances 0.000 claims description 2
- 238000004811 liquid chromatography Methods 0.000 claims 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 abstract description 11
- 101001011741 Bos taurus Insulin Proteins 0.000 abstract description 5
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 abstract description 4
- IXIBAKNTJSCKJM-BUBXBXGNSA-N bovine insulin Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H]1CSSC[C@H]2C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@H](C(N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)N[C@@H](CSSC[C@H](NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC=3C=CC(O)=CC=3)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC=3NC=NC=3)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)CNC1=O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O)=O)CSSC[C@@H](C(N2)=O)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CN)[C@@H](C)CC)C(C)C)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C(C)C)C1=CN=CN1 IXIBAKNTJSCKJM-BUBXBXGNSA-N 0.000 abstract description 4
- 108010005991 Pork Regular Insulin Proteins 0.000 abstract description 3
- 239000012675 alcoholic extract Substances 0.000 abstract description 3
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 abstract description 3
- 230000008719 thickening Effects 0.000 abstract 1
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 16
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 8
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 7
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 6
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 5
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 5
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 5
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 4
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 4
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 3
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 3
- 239000012620 biological material Substances 0.000 description 3
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 3
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 3
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 2
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 2
- 239000000047 product Substances 0.000 description 2
- 241000167854 Bourreria succulenta Species 0.000 description 1
- 238000012369 In process control Methods 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 1
- 101000993800 Sus scrofa Insulin Proteins 0.000 description 1
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 1
- 230000001476 alcoholic effect Effects 0.000 description 1
- 239000003181 biological factor Substances 0.000 description 1
- 238000009395 breeding Methods 0.000 description 1
- 230000001488 breeding effect Effects 0.000 description 1
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 1
- 235000019693 cherries Nutrition 0.000 description 1
- 238000013375 chromatographic separation Methods 0.000 description 1
- 238000000354 decomposition reaction Methods 0.000 description 1
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 1
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 description 1
- 239000002552 dosage form Substances 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 238000010812 external standard method Methods 0.000 description 1
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 1
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 1
- 238000010965 in-process control Methods 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 1
- 210000000496 pancreas Anatomy 0.000 description 1
- 229940062190 pancreas extract Drugs 0.000 description 1
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 1
- 235000015277 pork Nutrition 0.000 description 1
- 229940119528 pork insulin Drugs 0.000 description 1
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 1
- 230000002335 preservative effect Effects 0.000 description 1
- 238000000275 quality assurance Methods 0.000 description 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 1
- 125000004079 stearyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 1
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 1
- 238000000825 ultraviolet detection Methods 0.000 description 1
Landscapes
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
Abstract
Analyzovaný vzorek se za vhodných
chromatografických podmínek rozdělí na
hovězí a vepřový insulin a jejich monodesamidoderiváty
a z příslušných elučních
křivek se vypočítá jejich procentuální
zastoupení. Porovnáním s vhodným standartem
se zjistí biologická aktivita analyzovaného
vzorku insulinu. Způsob je rovněž
vhodný pro operativní stanovení insulinu
během výroby, počínaje prvním zahuštěním
alkoholického extraktu.
Description
Vynález se týká způsobu stanovení složení a aktivity insulinu vysokoúčinnou kapalinovou chromátografií.
Jedním z dosud používaných technologických postupů při výrobě insulinu je jeho izolace ze zvířecího pankreasu, nejčastěji hovězího nebo vepřového původu. Podle toho, jaký biologický materiál je brán do výroby, je možno získat buS monokomponentní např. hovězí nebo vepřový insulin, nebo směsný insulin, obsahující oba druhy insulinu. Procentuální zjištění obsahu hovězího nebo vepřového insulinu a odpovídajících monodesamidoderivátů, vznikajících při výrobě jako rozkladné produkty, má velký význam při sledování efektivnosti výroby z různě kvalitního biologického materiálu i při hodnocení kvalitativního složení a účinnosti získaných substancí insulinu a z nich vyráběných lékových forem.
Současný způsob stanovení insulinu, především v substancích a lékových formách, je založen na biologických testech na živých králících nebo myších. Tento způsob hodnocení insulinových přípravků je materiálně a časově náročný (jedno stanovení vyžaduje pokusy na nejméně 40 králících a trvá 7 dní; pro zkoušky na myších je nutno pro jedno stanovení 96 myší), je pracný, málo přesný (získaný výsledek má povolenou odchylku ±10%), neposkytuje žádné informace o kvalitativním složení vzorků a není ho možno použít pro operativní zjišťování kvality právě vyráběného insulinu.
Uvedené nevýhody odstraňuje způsob stanovení složení a aktivity insulinu vysokoúčinnou kapalinovou chromátografií za použití mobilní fáze tvořené směsi rozpouštědel typu acetonitrilu a vodného pufru při teplotě kolony 35° až 45°G a průtoku mobilní fáze 0,3 až 0,5 ml/min, podle vynálezu, který se vyznačuje tím, že se do mobilní fáze přidá pufr, připravený z modifikátoru typu primárního aminu o 6 až 12 atomech uhlíku v množství 0,15 až 2 ml/1000 ml vody, přičemž vzniklá vodná suspenze se rozpustí
-2242 808 úpravou pH na hodnotu 2,G až 3,0 přídavkem kyseliny fosforečné a stanovení se provede porovnáním změřených ploch elučních křivek rozdělených složek insulinu zkoumaného vzorku a standardu.
Způsob podle vynálezu se dále vyznačuje tím, že se vodný pufr, připravený z 1,6 ml 2-ethylhexylaminu v 1000 ml vody, po úpravě kyselinou fosforečnou na hodnotu pH 2,2, přidá do mobilní fáze v poměru 72,8% obj. : 27,2% obj. acetonitrilu a stanovení se provede ultrafialovou detekcí při višňové délce 280 nm.
Způsobem podle vynálezu je zkoumaný insulinový vzorek chromatograficky rozdělen na jednotlivé složky. Toto rozdělení je možné přítomností 2-ethylhexylaminového pufru o pH 2,2 v mobilní fázi. Plochy elučních křivek rozdělených složek insulinu odpovídají jejich hmotnostnímu zastoupení v analyzovaném vzorku a je možno z nich vypočítat i jejich procentuální obsah. Porovnáním součtu ploch elučních křivek všech oddělených složek zkoumaného insulinu s plochou změřenou u vzorku insulinu o známé biologické aktivitě (např. u národního standardu) je možno stanovit biologickou aktivitu měřeného insulinového preparátu.
Největší výhoda způsobu podle vynálezu je v tom, že stanovení složení a aktivity insulinu není závislé na biologickém faktoru. Tím přináší způsob podle vynálezu velkou časovou úsporu a umožňuje operativní stanovení insulinu do 1 hodiny, nemluvě o ušetřených nákladech při jinak nutném chovu králíků a myší pro biologické testy. Neméně důležitá je skutečnost, že způsobem podle vynálezu se jednoduchou metodou dosáhne přesných výsledků (průměrná odchylka stanovení byla Í3%)/a tím se umožní přesná a rychlá mezioperační kontrola aktivity substance před výrobou insulinových injekčních forem, poskytující tak možnost přesného nastavení obsahu insulinu na požadovaných 40 m.j. v 1 ml injekčního roztoku. Možnost zjišťovat složení insulinových substancí včetně rozkladných produktů, má rovněž velký význam při nákupu či prodeji insulinu. Způsob podle vynálezu byl též s úspěchem použit pro kontrolu zahuštěného extraktu z biologického materiálu a dalších technologických stupňů při výrobě insulinu; tak lze sledovat ztráty vznikající během výroby a optimalizovat technologické postupy dosud používané při výrobě insulinu.
i Způsob podle vynálezu je názorněji vysvětlen na přiložených výkresech. Na obr.l je znázorněna separace
- 3 242 808 standardního roztoku insulinu připraveného podle bodu za podmínek uvedených v bodě E/ v závislosti na časové ose t (v minutách). Na obr.2 je uveden příklad chromatografické separace vzorku injekčního roztoku insulinu připraveného postupem uvedeným v příkladu 2 v závislosti na časové ose t (v'minutách) a na obr.3 je příklad separace vzorku alkoholického extraktu z výroby insulinu připraveného postupem uvedeným v příkladu 3 opět v závislosti na časové ose t (v minutách).
Na těchto obrázcích znamenají vrcholy elučních křivek toto:
- hovězí insulin
- desamidohovězí insulin
- vepřový insulin
- desamidovepřový insulin
- konzervační činidlo
Následující příklady provedení způsob podle vynálezu pouze dokládají, ale nijak neomezují.
Příklad 1
A/ Příprava 2-ethylhexylaminového pufru
Do 1000 ml kádinky odměříme asi 950 ml destilované vody, z dě lené pipety přidávkujeme 1,6 ml 2-ethylhexylaminu a za míchání a kontroly pH přidáváme zředěný roztok kyseliny fosforečné až do výsledné hodnoty pH 2,2. Destilovanou vodou pak doplníme roztok na 10Ó0 ml objemu.
B/ Příprava standardního roztoku insulinu (například z národního standardu)
Na mikrováhách navážíme do malé uzavíratelné lékovky několik mg standardu insulinu a z přesné mikrobyrety přidáme takový objem 20% roztoku okyseleného acetonitrilu, aby konečná koncetrace byla 1 mg standardu v 1 ml roztoku. Po dokonalém rozpuštění dávkujeme 25/ul roztoku na chromatografickou kolonu.
C/ Příprava vzorku zkoumaného insulinu (substance)
Vzorek připravíme podle předchozího postupu B a na chromatografickou kolonu dávkujeme též 25/Ul roztoku.
D/ Příprava 20% roztoku acetonitrilu
Do 20 ml acetonitrilu ve 100 ml odměrné baňce doplníme ke
242 808 ~ 4 značce 0,1% roztok kyseliny fosforečné v destilované vodě.
E/ Chromatografie
Kapalinový chromatograf s kolonou o rozměrech 25 x 0,3 cm nebo 30 x 0,4 cm plněnou silikagelem o velikosti částic 5 nebo 10/um modifikovaným oktadecylovými zbytky a teplotou kolony 40°C. Jako mobilní fáze byl použit roztok 27,2% obj. acetonitrilu a 72,8% obj. vodného 2-ethylhexylaminového pufru. UV fotometrická detekce byla provedena při vlnové délce 280 nm a citlivosti 0,01 absorbanční jednotky. Vyhodnocení chromatografického záznamu bylo provedeno integrátorem i ruční triangulací. Na kolonu bylo dávkováno 25/Ul roztoku insulinu (viz obr.l).
Výpočet aktivity vzorku substance (m.j./mg):
aktivita vzorku = -9^iÍYÍl§-SÍSQŠ!ardu_x_suma_Bloch-vzorku-_ suma ploch standardu
Příklad 2
Příprava vzorku zkoumaného insulinu (injekce)
Celý obsah ampule kvantitativně přeneseme do uzavíratelné skleněné nádobky, přidáme 10,0 ml okyseleného roztoku 20% acetonitrilu (připraveného podle Příkladu 1) a dobře protřepeme. Na kolonu dávkujeme 25/ul, podmínky chromatografie jako v příkladu 1, graf viz obr.2.
Výpočet aktivity injekčního roztoku (m.j./ml):
aktivita standardu x suma ploch vzorku aktivita inj. roztoku ---------------------------------------x 2 suma ploch standardu
Příklad 3
Příprava vzorku alkoholického extraktu z výroby insulinu
Vzorek zahuštěného alkoholického extraktu pankreasu zfiltrujeme přes skleněnou fritu G2 a 25yul filtrátu dávkujeme na kolonu. Aktivitu vzorku v m.j./ml tohoto roztoku změříme metodou vnějSího standardu. Podmínky chromatografie jako v příkladu 1, graf viz obr.3.
Claims (2)
- PŘEDMĚT VYNÁLEZU242 8081. Způsob stanovení složení a aktivity insulinu kapalinovou chromatografií za použití mobilní fáze tvořené směsí rozpouštědel typu acetonitrilu a vodného pufru při teplotě kolony 35° až 45°G a průtoku mobilní fáze 0,3 až 0,5 ml/min, vyznačující se tím, že se do mobilní fáze přidá vodný pufr, připravený z modifikátoru typu primárního aminu o 6 až 12 atomech uhlíku, v množství 0,15 až 2 ml/1000 ml vody, přičemž vzniklá vodná suspenze se rozpustí úpravou pH na hodnotu 2,0 »ž 3,0 přídavkem kyseliny fosforečné a stanovení se provede porovnáním. změřených ploch elučních křivek rozdělených složek insulinu zkoumaného vzorku a standardu.
- 2. Způsob podle hodu 1, vyznačující se tím, že se vodný pufr, připravený z 1,6 ml 2-ethylhexylaminu v 1000 ml vody, po úpravě kyselinou fosforečnou na hodnotu pH 2,2, přidá do mobilní fáze v poměru 72,8% obj. : 27,2% obj. acetonitrilu a sta novení se provede ultrafialovou fotometrickou detekcí při vlnové délce 280 nm.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CS8410293A CS242808B1 (cs) | 1984-12-22 | 1984-12-22 | Způsob stanovení složení a aktivity insulinu |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CS8410293A CS242808B1 (cs) | 1984-12-22 | 1984-12-22 | Způsob stanovení složení a aktivity insulinu |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CS1029384A1 CS1029384A1 (en) | 1985-08-15 |
| CS242808B1 true CS242808B1 (cs) | 1986-05-15 |
Family
ID=5448556
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CS8410293A CS242808B1 (cs) | 1984-12-22 | 1984-12-22 | Způsob stanovení složení a aktivity insulinu |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CS (1) | CS242808B1 (cs) |
-
1984
- 1984-12-22 CS CS8410293A patent/CS242808B1/cs unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CS1029384A1 (en) | 1985-08-15 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Oates et al. | Quantitative amino acid analysis of individual snail neurons by open tubular liquid chromatography | |
| Takatera et al. | Speciation of iodo amino acids by high-performance liquid chromatography with inductively coupled plasma mass spectrometric detection | |
| Dueker et al. | Determination of blood folate using acid extraction and internally standardized gas chromatography–mass spectrometry detection | |
| Bergqvist et al. | Effect of use of gel-barrier sampling tubes on determination of some antiepileptic drugs in serum. | |
| Roth | Rapid, sensitive and fully automated high-performance liquid chromatographic assay with fluorescence detection for sulmazole and metabolites | |
| DE60307836T2 (de) | Durchfluss enzymassay mit einem massenspektrometrischen nachweis | |
| Lambert et al. | Liquid-chromatographic measurement of riboflavin in serum and urine with isoriboflavin as internal standard. | |
| McLaughlin et al. | Determination of corticosterone and 17-hydroxycorticosterone in human plasma | |
| Watson | Clavulanate-potentiated ticarcillin: high-performance liquid chromatographic assays for clavulanic acid and ticarcillin isomers in serum and urine | |
| Coleman et al. | Development and validation of a high‐throughput online solid‐phase extraction–liquid chromatography–tandem mass spectrometry method for the detection of gonyautoxins 1&4 and gonyautoxins 2&3 in human urine | |
| Derks et al. | Gas-chromatographic determination of cholesterol in serum: candidate reference method. | |
| Smith Jr et al. | A universal HPLC determination of insulin potency | |
| CS242808B1 (cs) | Způsob stanovení složení a aktivity insulinu | |
| CN102841169A (zh) | 一种高效液相色谱梯度法测定左亚叶酸钙有关物质的方法 | |
| Asmus et al. | Liquid chromatographic determination of lincomycin in fermentation beers | |
| Xing et al. | Determination of nitrophenolate sodium in aquatic products by HPLC–MS/MS with atmospheric pressure chemical ionization | |
| Smith et al. | Application of retention indices based on the alkylarylketone scale to the separation of the local anaesthetic drugs by high-performance liquid chromatography | |
| Brown et al. | Determination of trace levels of oxytocin in pharmaceutical solutions by high-performance liquid chromatography | |
| Yi et al. | High-throughput carbonyl content method of therapeutic mAb using size-exclusion chromatography with ultraviolet and fluorescence detection | |
| Boison et al. | Improvement in the multiresidue liquid chromatographic analysis of residues of mono-and dibasic penicillins in bovine muscle tissues | |
| Kirchmeier et al. | Simultaneous determination of vancomycin, anisomycin, and trimethoprim lactate by high pressure liquid chromatography | |
| White et al. | Development of gel filtration and specific analyses of urinary carbohydrate and protein material | |
| Mujewar et al. | A review on bioanalytical method development and various validation stages involved in method development using RP-HPLC | |
| Block | Amino acid analysis of protein hydrolysates | |
| Wang et al. | High-performance liquid chromatography–atmospheric pressure chemical ionization/tandem mass spectrometry for the determination of a thiol compound in plasma |