CS240483B1 - SpOsob ehromatografiekej izolácie'alditolov z ich zmesi - Google Patents

Description

240483

Vynález sa týká ehromatografickej izolá-cie alditolov z ich zmesí.

Prakticky všetky postupy delenia zmesíalditolov sú založené na Chromatografie -kých metódoch. Klasickou papierovou ale-bo stlpcovou chrom,atografiou, kde sa u-platňujú adsorpčné, rozdelovacie a perme-ačné efekty, sa vo vačšine prípadov dosa-huje len rozdelénie ich zmesí podlá počtuatómov uhlílka alditolov, [J. A. Cifoneli, F.Smith: Anal. Chem. 26, 1132 (1954); J. Cer-bulis: Anal. Chem. 27, 1 400 (1955); W. W.Binkley: Advan. Carbohyd. Chem. 10, 67(1955); M. G. Lambou: Anal. Chem. 29, 1449(1957); O. Samuelson, H. Stromberg: ActaChem. Scand. 22, 1252 (1968)]. Vel'mi čas-to používaná vyvíjacia sústava v papierovejchromatografii sacharidov je zmes 1-buta-nol-etanol- voda v různých objemových po-meroch [G. N. Kowkabany: Advan. Carbo-hyd. Chem. 9, 303 (1954); R. G. Spiro: Me-thods Enzymol. 8, 26 (1966)]. Rozdeleniezmesí niektorých enanciomérov alditolovvyužívajúce aj chemisorpčné efekty sa do-sahuje pri aplikácii boritanových iónov. Akozložku elučného systému leh využívá pa-pierová chromatografia [G. R. Barker, D. C.C. Smith: Chem. Ind. 19 (1954); E. Stanko-vič, V. Bílik, M. Fedoroňko, J. KOnigstein:Chem. Zvěsti 29, 685 (1975); J. F. Robyt:Carbohyd. Res. 40, 373 (1975)], stlpcováchromatografia [S. A. Barker, E. J. Bouřné,O. Theander: J. Chem. Soc. 4276 (1955)] aelektroforéza na papieri [S. Takasaki, A.Kobata: Methods Enzymol. 50, Part C, 50(1978)]. Ako zlóžka. nosiča boli boritanovéióny využité pri chromatografii na stípcochaneirových živíc v boritanovom cykle pri e-lúcii boritanovými puframi [A. B. Foster:Advan. Carbohyd. Chem. 12, 114 (1957)] ana O-(2-dietylaminoetyl)celulózovom papie-ri v boritanovom cykle s využitím vyvíjacejsústavy etylacetát —· pyridin — 5 mrnol. 1_1kyselina bóritá v objemovom pomere 3:2::1 (Η. E. Conrad, S. E. Varboncouer, Μ. E.Jo,nes: Anal. Biochem. 51, 486 (1973)]. Roz-delenie zmesí niektorých, resp. všetkých al-ditolov s rovnakým počtom atómov uhlíka,opᣠs využitím chemisorpčného efektu de-lenia, bolo dosiahnuté pri ich stípcovejchromatografii na katexových živiciach vbarnatom cykle [J. K. N. Jones, R. A. Wall:Can. J. Chem. 38, 2290 (1960)], vápenatomcykle [A. J. Melaja, L. Hamalainen: Chem.Abstr. 82, 73 397 (1975); S. J. Angyal, G.S. Bethell, R. J. Beveridge: Carbohyd. Res.73, 9 (1979)], resp. lantanitom cykle [L.Petruš, V. Bílik, E Kuniak, E Stankovič:Chem. Zvěsti 34, 530 (1980)]; uvedené po-stupy však neumožňujú rozdělit pentitolyod hexitolov s podobnou stereochémiou,napr. xylitol od glucitolu.

Podstata vynálezu spočívá v tom, že vprvom kroku sa 0-(karboxymetyl)celulézo-vý papier zmáčaný vodným roztokom oc-tanu lantanitého, alebo octanu vápenatéhoalebo octanu bárnatého, vymyje vodou do neutrálnej reakcie eluátu a po vysušení sana takto získanom O-(karboxymetyl)celuló-zovom papieri v lantanitom alebo· vápena-tom alebo· bárnatom cykle v druhom kro-ku chromatbgrafuje zmes troj- až šesťuhlí-katých alditolov za použitia zmesi rozpúš-fadiel 1-butanoí-etanoí-voda v objemovompomere 10 : 1. : 2 ako vyvíjacej sústavy. Výhodou navrhovaného sposobu chromá-tografickej izolácie alditolov z ich zmesí je,že súčasne sa tu uplatňujú adsorpčné, roz-defovacie, permeačné a chemisorpčné efek-ty, čo umožňuje maximálně pri kombináciidvoch foriem O-(karboxymetyl)-celulózové-ho papiera, najprv na papieri v lantanitomcykle a potom (ak je to podl'a zloženiázmesi alditolov potřebné) rechromatogra-fiou napr. na papieri vo, vápenatom cykle,účinné rozdělit iubovolné zmesi troj- ažšesťuhlíkatých alditolov. Keďže na přípravuvyvíjacej sústavy sa nevyužívajú pufrova-cie roztoky, ale len čisté rozpúštadlá, od-straňuj1! sa tu aj dodatečné odsolovacieprocedúry (které sú nevyhnutné pri apli-kácii boritanových iónov), čo- umožňuje po,elúcii zón alditolov z papiera a odpařeníextrakčného, rozpúšťadla získat čisté jed-notlivé alditoly. Celkove je postup velmijednoduchý a reprodukovatelný. Přikladl

Cez O-(kai’boxymetyl)celulózový papier(Whatman CM 82) sa technikou zostupnejchromatografie nechá přetékat 0,1 mol .1_1vodný roztok octanu lantanitého· pečas 24hodiny. Potom sa v zásob,nej nádobě vyměníroztok za vodu a papier sa ďalej premýva2 dni. Po vysušení pri teplete 25 °C sa tak-to získá O-(karboxymetyl Jcelulózový papierv lantanitom cykle. Na ten sa potom bodo-vo nanesú 2 % hmot. vodné roztoky obsa-hujúce glycerol (0,2 mg), erytritol (0,1 mg),D-treitol (0,1 mg), D- alebo L-arabinitol(0,1 mg), ribitlol (0,1 mg), xylitol (0,1 mg),alitol (0,05 mg), D-altritol (0,05 mg), galak-titol (0,05 mg), D-glucitol (0,05 mg), L-idi-tol (0,05 mg) a D-manitol (0,05 mg) a pa-pier sa nechá pretekať technikou zostupnejchromatografie zmesou rozpúšťadiel 1-buta-nol—etanol—voda v objemovom pomere10:1:2 počas 2 dní (glycerol, tetiritoly),resp. 6 dní (pentitoly) alebo 7 dní (hexito-iy)·

Po vysušení chomatogramov sa alditolydetegujú postrekom čerstvo připravenouzmesou vodných roztokov 2 % hmot. man-ganistanu draselného, 2 % hmot. jodistanusodného a 4 % hmot. uhličitanu sodného vobjemovom pomere 8:1:1. Relativné po-hyblivosti jednotlivých alditolov vztahovanéna pohyblivost D-glucitolu (1,00] sú preglycerol 8, erytritol 4,5, D-treitol 4,0, ribi-tol 2,8, D- alebo L-arabinitol 2,4, xylitol 1,64,alitol 2,0, D-altrit!ol 1,60, D-manitol 1,58, ga-laktitol 1,38 a L-iditol 0,81.

Claims (5)

1. 240483 Příklad
2. 2 Postupuje sa ako v příklade 1, s tým roz-dielom, že na aktiváciu chromatografické-ho papiera (Whaťjnan CM 82) sa použije0,15 mol. I"1 vodný roztok octanu vápena-tého, čím sa získá O-(karboxymetyl)celuló-zový papier vo vápenatom cykle. Potom re-lativné pohyblivosti jednotlivých alditolovvztahované na pohyblivost D-glucitolu(1,00) sú pre glycerol 6, erytritol 3,7, D-tre-itol 3,1, ribitol 2,4, D- alebo L-arabinitol 2,1,xylitol 1,69, alitol 1,56, D-altritol 1,31, D-ma-nitol 1,20, galaktitol 1,05 a L-iditol 0,85. P r í k 1 a d
3. 3 Postupuje sa ako v příklade 1, s tým roz-dielom, že na aktiváciu chromatografické-ho papiera (Whatman CM 82) sa použije0,15 mol. 1_1 vodný roztok octanu bárnaté-ho, čím sa získá O-(karboxymetyl)celulózo-vý papier v bárnatom cykle. Potom relativ-né pohyblivosti jednotlivých alditolov vzta-hované na pohyblivost D-glucitolu 1,00 súpre glycerol 6, erytritol 3,6, D-treitol 3,3,ribitol 2,2, D- alebo L-arabinitol 1,94, xyli-tol 1,64, alitol 1,46, D-altritol 1,29, D-mani-tol 1,22, galaktitol 1,02 a L-iditol 0,81. Příklad
4. 4 Zmes alditolov připravená zo zmesi D--[U-WC]glukózy (465 Bq, 0,2 mg), D-[U-«C]-galaktózy (506 Bq, 0,2 mg), D-[U-14C]manó-zy (375 Bq, 0,2 mg) a D-[U-14C]arabinózy(270 Bq, 0,2 mg) redukciou v zmesi vody(5 ^1), 1 mol. _1 karbonátového pufru (5 μΙ)a 0,5 mol. I ’1 hydridu boritosodného v 0,1mol. I“1 hydroxide sodnom (5 <ul) pri teplo-tě 50 °C po dobu 30 min, deionizáciou nakolóne s priemerom 1 cm a výškou 5 cmionomeniča s funkčnými sulfoskupinami priprietoku 0,25 ml . min-1, odpařením eluátu(15 ml) na odparke pri tlaku 5 kPa a teplo-tě 35 až 40 °C, skoncentrovaním zvyšku od-pařením z vody (3krát 2 ml) a dalším od-pařením z metanolu (5krát 2 ml) sa roz-pustí vo vodě (0,2 ml), nanesie na O-(kar-boxymetyljcelulózový papier v lantanitomcykle (šířka pásu nanášky 3 cm) a chroma- 6 tografuje podlá příkladu 1 počas 7 dní. Elúciou jednotlivých zón papiera vodoua odpařením eluátov sa získajú čisté D--[U-14C]glucitol (431 Bq, 92 %), [U-44Cj ga-laktitol (459 Bq, 90 %), D-[U-l4C]manitol(335 Bq, 89 %) a D-[U-14C]arabinitol (239Bq, 88%). P r í k 1 a d
5. 5 Postupuje sa ako v příklade 4, s tým roz-dielom, že sa vychádza zo zmesi D-[U-14C]-glukózy (465 Bq, 0,2 mg), D-[U-44C]manózy(375 Bq, 0,2 mg), D-[U-44C]xylózy (435 Bq,0,2 mg) a D-[U-14Cjarabinózy (270 Bq, 0,2miligramu), a že získaná zmes alditolov sananesie na 0-(karboxymetyl)celulózový pa-pier vo vápenatom cykle. Postupom sa zís-kajú čisté D-[ U-14C ] glucitiol (445 Bq, 95 %),D-[U-14C]manitol (344 Bq, 91 %), [U-14Cj-xylitol (390 Bq, 89 %) a D-[U-14C]arabinitol(238 Bq, 88%). Příklade Postupuje sa ako v příklade 4, s tým roz-dielom, že sa vychádza zo zmesi D-(U-14C]-glukózy (465 Bq, 0,2 mg), D-[U-14C]galak-tózy (506 Bq, 0,2 mg), D[U-14C]manózy(375 Bq, 0,2 mg), D-[U-14C]xylózy (435 Bq,0,2 mg) a D-[U-14C]arabinózy (270 Bq, 0,2miligramu). Postupom sa získajú čisté D--[U-14Cjglucitol (428 Bq, 92 %), [U-44Cjga-laktitol (466 Bq, 92 %) a D-[U-14C]arabini-tol (232 Bq, 85 %) a zmes D-[U-14C]manito-lu a [U-14]xylitolu (730 Bq), z ktjorej sa re-chromatografiou na O-(karboxymetyl)celu-lózovom papieri vo vápenatom cykle podlápříkladu 5 získajú čisté D-[U-14C]manitol(303 Bq, 80 %) a [U-44Cj xylitol (358 Bq,82%). Vynález má význam pri príprave a izolácii1'ubovoTne izotopicky značených alditolov,ktoré takto možno získat po redukci! lu-bovoTných zmesi aldóz, ketóz a ich oxidač-ných derivátov připravených roznymi che-mickými i biochemickými přeměnami sacha-ridov, ako i v analytickej chemii sachari-dov, predovšetkým pri štrukturálnych štú-diach oligo- a polysacharidov. PREDMET Sposob chromatografickej izolácie aldito-lov z ich zmesi na O-(karboxymetyl)celuló-zovom papieri s použitím vyvíjacej sústavy1-butanol—etanol—voda v objemovom po-měre 10 :1: 2, vyznačujúci sa tým, že v pr-vom kroku sa O-(karboxymetyl)celulózovýpapier zmáča vodným roztokom octalnu lan-tanitého alebo octanu vápenatého alebo VYNALEZU octanu bárnatého, vymyje vodou do neutrál-nej reakcie eluátu a po vysušení sa na tak-to: získanou! O-(karboxymethyl)eelulózovompapieri v lantainitom alebo vápenatom ale-bo bárnatom cykle v druhom kroku chro-matografuje zmes troj- až šesťuhlíkatých al-ditolov.