CS239980B1 - Inaktivovaná vakcina proti paramyxovirové infekci holubů a způsob její přípravy - Google Patents

Abstract

Inaktivovaná vakcina proti paramyxovirové infekci holubů se připravuje ze dvou paramyxovirů sérotypu 1, velogenního kmene viru pseudomoru drůbeže NDV/Bratislava 76-100/80 CAPM V 284, izolovaného z kuřice, a z mezogenního kmene holubího paramyxovirů PMV-1/Nitra 3/4821/83 CAPM V 285, které jsou pomnoženy v alantoické tekutině kuřecích zárodků, inaktivovány formaldehydem, adsorbovány na gel hydroxidu hlinitého a smíchány stejným dílem. Jako adjuvant se přidávají minerální oleje. Vakcina se používá k ochrannému očkování poštovních a okrasných holubů ve věku od 6 týdnů. Podává se podkožním vpichem v dávce 0,2 ml na kus. Vakcina je neškodná a nevyvolává místní ani celkové postvekcinační poruchy. Doporučuje se kombinovat očkování živou a inaktivovanou vakcinou. Odolnost proti infekci vzniká do 14 dní a trvá nejméně 6 měsíců.

Description

Vynález se týká ínaktivované vakciny proti paramyxovirové infekci holubů a způsobu její přípravy z kmenů viru izolovaných na Slovensku.

Paramyxovirové onemocnění holubů vyvolává hemaglutinující virus, který byl identifikován jako paramyxovirus 1, virus pseudomoru drůbeže mezogenního typu /Černík, K.a j. Yet.Med. /Praha/, 30, 1985, č.2 /. Nákaza se šířila v Evropě od roku 1981 a v roce 1983 postihla domácí, poštovní' i okrasné, a volně žijící holuby na celém území ČSSR. Onemocnění se projevuje snížením chuti k přijímání potravy, vodnátými průjmy, polyurií, nervovými příznaky / trernor, tortikolis, parézy / a ztrátou rovnováhy a schopnosti orientace. Morbidita dosahuje 80 až 100 %, mortalita 50 %. Pitevně se zjišlují enteritidy a encefalitidy. Medikamentózní léčebný zásah je bezúspěšný. K ochraně ch-ovů v zahraničí i v ČSSR se používají živé vakciny proti pseudomoru drůbeže z lentogenních kmenů / V i a e n e, N. - a j., Vlaams Diergeneesk.Tijdschr., 52, 1983, č.4, s. 278; Novotná ,L. Č e r n í k, K., Chovatel, 23, 1984, č.3, s. 60 /, v zahra239 980 ničí se podává také inaktivovaná vakcina, určená pro hrabavou drůbež /Richter, R. - a j., Prakt.Tierarzt, 64, 1983, s. 915i K a 1 e t a , E. F. - a j., Die Brieftaube, 100, 1983, s. 1859 A

Kmen viru pseudomoru drůbeže NDV/Bratislava 76-100/80 byl izolován v roce 1980 v kuřecích zárodcích z plic kuřice postižené viscerotropním typem pseudomoru drůbeže. Totožnost viru byla prokázána serologickými testy· proti pozitivním sérům. Podle patogenity viru pro kuřecí zárodky / střední doba úhynu / a jednodenní kuřata / intracerebrální patogenní index / a jeho termo rezistence při teplotě 56°C byla dokázána jeho velogenní povaha.

Kmen holubího paramyxoviru PMV-l/Nitra 3/4821/83 byl izolován v kuřecích zárodcích z mozku holuba postiženého paramyxovirovou nákazou. Totožnost viru a jeho příslušnost k prvnímu sérotypu paramyxoviru byla dokázána serologickými testy proti pozitivním sérům. Podle výsledků testu patogenity pro kuřecí zárodky a jednodenní kuřata je virus mezogenní povahy, termorezistence při teplotě 56°G ho charakterizuje jako velogenní virus.

Oba virové kmeny se množí v alantoické tekutině kuřecích zárodků a v kulturách kuřecích embryonálních buněk s cytopatickým účinkem. Kmeny jsou uloženy v Čs. sbírce mikroorganismů, Sbírka zoopatogenních mikroorganismů, Výzkumný ústav veterinárního lékařství, Brno - Medlánky, Hudcova 70, pod čísly: NDV/Bratislava 76-100/80 CAPM V 284 a PMV-l/Nitra 3/4821/83 CAPM V 285.

Podstata vynálezu spočívá v tom, že vakcina se připravuje ze dvou kmenů paramyxoviru sérotypu 1: viru pseudomoru

239 980 drůbeže NDV/Bratislava 76-100/80 GAPM V 284, velogenníh© viscerotropního viru izolovaného z kuřice, a holubího paramyxoviru PMV-l/Nitra 3/4821/83 GAPM V 285» mezogenního viru izolovaného z holuba, zastoupených ve vakcině stejným dílem. Vakcinační kmeny se množí v alantoické tekutině kuřecích zárodků a titrují se v kuřecích zárodcích nebo v kulturách kuřecích embryonálních buněk tak, aby se dosáhly minimální, infekční titry viru ΕΙϋ^θ 9,0 log^Q.ml¹ nebo TKID^q 8,5 1°δχο· ml“¹. Virus obsažený v alantoických tekutinách se inaktivuje formaldehydem při teplotě 37°G a adsorbuje se na gel hydroxidu hlinitého jako minerální nosič. Suspenze adsorbovaného viru se mísí s minerálními oleji v poměru 4 ϊ 1 tak, aby vznikla stabilní emulze.

Příklad provedení 1

Udržování výrobního kmene

Výrobní kmeny, virus pseudomoru drůbeže NDV/Bratislava 76-100/80 GAPM V 284 a holubí paramyxovirus PMV-l/Nitra 3/ 4821/83 CAPM V 285 se udržují v lyořilizováném stavu v ampulkách zatavených pod vákuem při + 4 až + 8°C. Pasáž, v kuřecích zárodcích se provádí jednou za rok. Desetidenní kuřecí zárodky se inokulují dávkou 0,1 ml viru, obsahující 10¹ až 10^ infekčních dávek. Po 48 h inkubace kuřecích zárodků se odebírají alantoamhiotické tekutiny obsahující virus a titrují se v kuřecích zárodcích nebo v kulturách kuřecích embryonálních buněk. Infekční titr viru musí být nejméně 10⁹ EID₅₀. ml¹ nebo 1O⁸’⁵ TKID^.ml¹. Po kontrole bakteriální sterility se kmenový materiál lyofilizuje s přídavkem 20 % lyofilního média, obsahujícího 3 díly 30% roztoku

239 980 sušeného odtučněného mléka a 1 díl 40% roztoku sacharózy, nebo se uchovává ve zmrazeném stavu při - 20°C a používá se: k inokulaci kuřecích zárodků při výrobě vakciny.

Příklad provedení 2

Příprava a zkoušení vakciny

Desetidenní kuřecí zárodky se inokulují intraalantoicky zásobním kmenovým materiálem, virem pseudomoru drůbeže NDV/ Bratitiava 76-100/80 CAPM V 284 nebo holubím paramyxovirem PMV-l/Nitra 3/4821/83 CAPM V 285 dávkou 10³ až 10⁴ infekčních dávek v 0,1 ml. Kuřecí zárodky se inkubují při teplétě 37,7°C. Kuřecí zárodky uhynulé do 24 h inkubace se vyřadí.

Z ostatních se po 48 h inkubace odeberou sterilně alantoamniotické tekutiny a obsah viru se stanoví titrací v kuřecích zárodcích nebo v kulturách kuřecích embryonálních buněk. Bakteriologicky sterilní tekutiny se inaktivují formaldehydem v koncentraci 0,2 % po dobu 5 h při teplotě 37°C při pravidelném míchání. Účinnost inaktivace se kontroluje třemi po sobě následujícími slepými pasážemi neředěné inaktivovaná virové suspenze, v kuřecích zárodcích. V žádném případě nesmí být prokazatelný specifický úhyn kuřecích zárodků a heipaglutinující virus v alantoamniotických tekutinách. Inaktivovaný vinss· se adsorbuje při chladničkové teplotě na sterilní gel hydroxidu hlinitého, přidaný v poměru 1 díl hydroxidu hlinitého na 3 díly suspenze. Jako konzervační prostředek se přidává mertiolát sodný, čistý, do konečné koncentrace 0,01 %. Inaktivovaná a adsorbovaná virová suspenze se emulguje s 20 obj. % sterilní směsi minerálních olejů, obsahující parafinový olej· / ČsL 3 /» Arlacel A / mannitan monooleát /

239 980

- 5 a Tween 80 / polyoxyetylén sorbitan monooleát / intenzivním mícháním dvakrát po dobu 5 minut s přestávkou 10 minut. Vakcina se plní do sterilních lékovek uzavřených gumovou propichovací zátkou.

Příklad provedeni 3

Adsorbovanou inaktivovanou virovou suspenzi obou kmenů je možno před emulgací s minerálními oleji zahustit slitím čirého supernatantu na 2/3 původního objemu suspenze.

Vakcina se aplikuje podkožním vpichem v dávce 0,2 ml na kus. Očkují se holoubata 4 až 6 týdnů po primovakcinaci živou vakcinou proti pseudomoru drůbeže a revakcinují se holubi před letovou a výstavní sezonou, nejpozději 14 dní před zahájením cvičných letů. Odolnost vzniká do 14 dní po vakcinaci a trvá nejméně 6 měsíců. Vakcina je neškodná, nevyvolává nepříznivé místní ani celkové postvakcinační reakce a nesnižuje letovou schopnost holubů. Při laboratorním ověřo vání vakciny po primovakcinaci negativních holubů inaktivovanou vakcinou reagovalo 60 % zvýšením titrů hemaglutinačně inhibičních protilátek proti paramyxoviru 1 na 1 : 16 až.

: 64. Očkováním inaktivovanou vakcinou po primovakcinaci živou vakcinou proti pseudomoru drůbeže se zvýšila průměrná hladina hemaglutinačně inhibičních protilátek do 3 týdnů na více než 1 : 128 a na této úrovni se udržela 14 týdnů po vakcinaci. Revakcinace zvýšila průměrné titry protilátek dvojnásobně. V terénních podmínkách v chovech očkovaných živou vakcinou proti pseudomoru drůbeže se zvýšily průměrné titry hemaglutinačně inhibičních protilátek do 3 týdnů po očkování inaktivovanou vakcinou z 1 : 10 na 1 : 143·

Claims (5)

1. PŘEDMĚT VYNÁLEZU

   1. Inaktivovaná vakcina proti paramyxovirové infekci holubů, vyznačující se tím, že obsahuje dva paramyxoviry serotypu 1 a to virus pseudomoru drůbeže, kmen NDV/Bratislava 76-100/80 CAPM V 284 a holubí paramyxovlrua, kmen PMV-l/Nitra 3/4821/83 CAPM V 285 oba zastoupené stejným dílem.
2. 2. Způsob přípravy vakciny podle bodu 1, vyznačující se tím, že kmeny paramyxoviru CAPM V 284 a CAPM V 285 se pomnožují samostatně v alantoické tekutině kuřecích zárodků po dobu 48 hodin, kde se dosahuje minimální infekční titr viru TKID^q 8,5 log-^θ.πιΐ“^ a následně se inaktivují, adsorbují a míchají s adjuvantem.
3. 3. Způsob přípravy vakciny podle bodu 2, vyznačující se tím, že viry jsou inaktivovány formaldehydem při teplotě 37°C.
4. 4. Způsob přípravy vakciny podle bodu 2, vyznačující se tím, že inaktivované viry jsou adsorbovány na gel hydroxidu hlinitého jako minerální nosič.
5. 5. Způsob přípravy vakciny podle bodu 2, vyznačující se tím, že k adsorbovaným virům se přidávají jako adjuvant minerální oleje, které se míchají s virovou suspenzí v takovém poměru, aby vznikla stabilní emulze.

   Vytiskly Moravské tiskařské závody, střed. 11 100, tř.Lidových milicí 3, Olomouc

   Cena: 2,40 Kčs