CS231687B1

CS231687B1 - Fermenting device multiplying of microbe culture

Info

Publication number: CS231687B1
Application number: CS831943A
Authority: CS
Inventors: Vladimir Simon; Slavomir Hala; Pavla Horavova
Original assignee: Vladimir Simon; Slavomir Hala; Pavla Horavova
Priority date: 1983-03-22
Filing date: 1983-03-22
Publication date: 1984-12-14
Also published as: CS194383A1

Abstract

Vynález Je určen k množeni mikróbů obtížně rostoucích τ tekutém kultivačním médiu. Množení těchto mikróbů se doeahuje na polopropustné membráně a v difuzátu ve fermentačnim zařízeni, skládajícím se z nádoby ve tvaru válce s víky a z dialyzačnich trubic, které lze nahradit celofánovými řasenými střevy. Dialyzačni trubice nebo celofánová rašená střeva se plní kultivačním médiem a nádoba difúzetem. Vynález může být využít ve veterinárním lékařství.The invention is intended for the propagation of microbes difficult to grow τ liquid cultivation medium. The multiplication of these microbes is delayed on a semipermeable membrane and in a diffuser in a fermentation apparatus comprising from a cylinder-shaped container with lids and dialysis tubes that can be replaced with cellophane draped intestines. Dialyzačni tubes or cellophane sprouts is filled with culture medium and the vessel is diffused. The invention can be used in veterinary practice medicine.

Description

Vynález se týká dialyzačního zařízení k množení mikroorganizmů.The invention relates to a dialysis device for the multiplication of microorganisms.

Mikrobiální suspenze k přípravě imunopreparátů se obvykle získávají bučí množením mikrobů v tekutých kultivačních médiích nebo spláchnutím mikrobiálního nárůstku s povrchu pevných kultivačních půd. V prvním případě se bu3 užívá kultura včetně kultivačního média s nevýhodou značného obsahu balastnich látek, nebo se mikroby oddělují a promývají s nevýhodou možného narušeni a odplavení povrchových struktur, např. fimbrií. V druhém případě jsou tyto nevýhody pominutelné, ale pěstování mikrobů na pevných půdách je ve velkovýrobě pracné a nákladné. Použití tekutých kultivačních médií je problematické u mikroorganizmů, které se v nich množí velmi slabě, např. baktérie Moráxella bovis (HENRIKSEN, S.Microbial suspensions for the preparation of immunopreparations are usually obtained either by propagating microbes in liquid culture media or by flushing the microbial growth from the surface of solid culture broths. In the first case, either the culture, including the culture medium, is used with the disadvantage of a high ballast content, or the microbes are separated and washed with the disadvantage of possible disruption and flushing of surface structures, such as fimbriae. In the latter case, these disadvantages are negligible, but growing microbes on solid soils is laborious and costly in mass production. The use of liquid culture media is problematic in microorganisms that reproduce very poorly, eg Moráxella bovis (HENRIKSEN, S.

D,: Moraxella, Acinotobacter, and the Mimeae. Bact. Rev,, 37, 1973,D, Moraxella, Acinotobacter, and the Mimeae. Bact. Rev. 37, 1973,

S. 522 - 561; PUGH, G.W. - HUGHES, D.E. - McOONALD, T.O.: The isolation and characterization of Moraxella bovis. Am. 3. vet. Res., 27, 1966, s. 957 - 962). K přípravě pokusných vakcín z tohoto bakteriálního druhu se v zahraničí pomnožuje Moraxella bovis na tuhých kultivačních médiích (PUGH, G.W. - McDONALD, T.O. - KOPECKÝ,S. 522-51; PUGH, G.W. - HUGHES, D.E. - McOONALD, T.O .: The Isolation and Characterization of Moraxella bovis. Am. 3. vet. Res., 27, 1966, 957-962). To prepare experimental vaccines from this bacterial species, Moraxella bovis is propagated abroad on solid culture media (PUGH, G.W. - McDONALD, T.O. - KOPECKÝ,

K.E.: Experimental infectious bovine keratoconjunctivitis: Efficacy of a vaccine prepared from nonhemolytic strains of Moraxella bovis. Am. 0. vet. Res., 43, 1982, s. 1081 - 1084). V ČSSR se vyrábějí bakteriální vakcíny množením bakteriálních buněk nejčastěji v tekutých kultivačních médiích ve fermentorech a omezeně na tuhých kultivačních médiích. V současné i starší odborné literatuře není popsáno zařízeni k množeni mikrčbů na stěnách dialyzačních trubic nebo v difuzátu, i když v bakteriologických laboratořích ke kultivaci některých baktérií a k přípravě purifikovaných bakteriálních produktů je používáno polopropustných membrán, položených na povrch tuhého kultivačního média.K.E .: Experimental Infectious Bovine Keratoconjunctivitis: Efficacy of a vaccine prepared from nonhemolytic strains of Moraxella bovis. Am. 0. vet. Res., 43, 1982, pp. 1081-1084). In Czechoslovakia, bacterial vaccines are produced by multiplying bacterial cells most often in liquid culture media in fermenters and limited on solid culture media. There is no description in the current or prior art of the apparatus for multiplying microbes on dialysis tubing walls or in diffusate, although in bacteriological laboratories semipermeable membranes are applied to the surface of a solid culture medium to cultivate some bacteria and prepare purified bacterial products.

231 687231 687

Podstatou fermentačniho zařízení k množení mikrobiální kultury je nádoba uzavřená vlky s otvory, ve které jsou umístěny dialyzačni trubice, utěsněné v otvorech vík na jedné straně trubicemi a na druhé straně odnímatelnými uzávěry. Víko je déle opatřeno plnicím nebo vypouštěcím otvorem a otvory k případnému provzduěňování mikrobiální kultury, Dialyzační trubice jeou nahrazeny celofánovými řasenými střevy, Fermentační zařízeni se sterilizuje, dia lyzačni trubice se náplni kultivačním médiem, které má funkci retenátu a prostor nádoby difuzátem, jehož základem je např, fyziolo gický roztok soli, Difuzát se naočkuje suspenzi mikrobů a celé zařízeni ee inkubuje staticky nebo za provzdušnování při teplotě a po dobu potřebnou k pomnoženi děného mikrobiálního druhu. Tím, že mikroby využívají ke svému množeni plochu dialyzačnich trubic a difuzátu, se dosahuje ve fermentačním zařízeni množení mikrobiál nich druhů, které v tekutých kultivačních médiích rostou nedostatečně, Získaná mikrobiální suspenze obsahuje minimální množství balastnich látek kultivačního média.The essence of the fermentation apparatus for multiplying the microbial culture is a vessel closed by wolves with openings in which dialysis tubes are sealed in the lid openings on one side by tubes and on the other side by removable closures. The lid has been provided with a filling or drain hole and holes for possible aeration of the microbial culture. The physiological saline solution is inoculated with a microbial suspension and the whole device is incubated statically or under aeration at the temperature and for the time necessary to propagate the microbial species. By utilizing the area of dialysis tubes and diffusate to multiply, microbial species are grown in the fermentation apparatus that do not grow sufficiently in liquid culture media. The microbial suspension obtained contains minimal amounts of ballast substances of the culture medium.

Ňa výkresu je na obr, 1 naznačen v řezu přiklad provedení fermentačniho zařízení, na obr. 2 je zobrazeno víko v nárysu a na obr, 3 je nakreslena v řezu pryžová vložka ‘a na obr. 4 je znázorněno upevněni dialyzační trubice, případně celofánového řaseného střeva v otvoru víka.FIG. 1 shows a cross-sectional view of an embodiment of a fermentation apparatus, FIG. 2 shows a cover in front view, and FIG. 3 shows a rubber insert, and FIG. 4 shows a dialysis tube or cellophane shirring attachment. intestines in the lid opening.

Na obr. 1 v nádobě _1 ve tvaru válce, uzavřené víky 2 pomocí přírubových spojů 3, jsou umístěny dialyzační trubice“*nebo jako náhrada za ně celofánová řasená střeva 4,4» která jsou protažena pryžovými vložkami 5 v otvorech 6 vík 2. Dialyzační trubice 4 nebo celofánová řasená střeva 4a jsou utěsněna v pryžových vložkách 5, otvorů 6 vík 2 zasunutými skleněnými trubicemi 7 na jedné straně a zasunutými odnímatelnými uzávěry v provedeni jako skleněné zátky 8 na protilehlé straně. Dialyzační trubice 4 nebo celofánová řasená střeva 4a jsou naplněna retenátem, který tvoří kultivační médium a prostor nádoby je naplněn difuzátem, jehož základem je např. fyziologický roztok soli. Do nádrže Ji ústi plnící a vypouštěci otvor 9, otvor 10 k zasunuti provzdušňovací trubice 11, k jejíž utěsnění ve víku 2 slouží pryžové těsnění 12, a otvor 13 k odvodu vháněného vzduchu. Skleněná trubice 7, ústící do dialyzačnich trubic 4 nebo celofánových řasených střev 4a a otvor plnící a vypouětěci 9, jsou uzavřeny pryžovými zátkami 14. Na obr. 2In FIG. 1, in a cylindrical vessel 1, closed by lids 2 by means of flange connections 3, dialysis tubes 3 or, in replacement of them, cellophane shirring casings 4, 4 ', which are passed through rubber inserts 5 in apertures 6 of lids 2, are placed. the tube 4 or the cellophane shirring casings 4a are sealed in the rubber inserts 5, the openings 6 of the lids 2 by the inserted glass tubes 7 on one side and the removable closures inserted as glass plugs 8 on the opposite side. The dialysis tube 4 or the cellophane shirring casings 4a are filled with a retentate which forms the culture medium and the vessel space is filled with a diffusate based on eg saline. The filling and discharge opening 9, the opening 10 for receiving the aeration tube 11, which is provided with a rubber seal 12 in the cover 2, and the opening 13 for discharging the blown air, open into the tank 11. The glass tube 7 opening into the dialysis tubes 4 or cellophane shirring casings 4a and the opening for filling and discharging 9 are closed by rubber stoppers 14. In Fig. 2

231 687231 687

- 3 je znázorněno víko 2 s otvory 6 k protažení díalyzačnich trubic 4 nebo celofánových řasených střev 4a, s otvorem plnícím nebo vypouštěcím 9, s otvorem 10 k zasunutí provzdušňovacího zařízení a s otvorem 13 k odvodu vháněného vzduchu· Otvory 6 jsou opatřeny pryžovými vložkami 5., otvor 10 je opatřen pryžovým těsněním 12,3 shows a lid 2 with openings 6 for extending the disintegration tubes 4 or cellophane shirred casings 4a, with a filling or discharging opening 9, with an opening 10 for receiving an aeration device and with an opening 13 for blowing out the blown air. The openings 6 are provided with rubber inserts 5. the opening 10 is provided with a rubber seal 12,

Při obvodu víka 2 je kruhové pryžové těsnění 15. Na obr. 3 je pryžová vložka 5. Na obr. 4 je znázorněno utěsněni díalyzačnich trubic 4 nebo celofánových řasených střev 4a v otvorech 6 vík 2 s pryžovými vložkami Í3, skleněnými trubicemi 7 a odnimatelnými uzávěry v provedení jako skleněné zátky .8.At the periphery of the lid 2 there is a circular rubber gasket 15. In Fig. 3 there is a rubber insert 5. Fig. 4 shows the sealing of the disintegration tubes 4 or cellophane shirring casings 4a in the openings 6 of the lids 2 with rubber inserts 13, glass tubes 7 and removable closures as glass stoppers .8.

Příklad č. 1:Example 1:

Fermentačni zařízení bylo užito k množeni bakteriálního druhu Moraxella bovis. Nádoba 1 ve tvaru válce byla zhotovena ze skla SIMAX, měla délku 400 mm, vnitřní průměr 150 mm a silu stěny 6 mm. Víka 2 byla zhotovena z nerezavějící oceli, pryžová kruhová těsnění 15 a pryžové vložky 5> z LUKOPRENu N 1725, přírubové spoje 3 byly komerčně dodávané. Místo díalyzačnich trubic 4 byla užita celofánová řasená střeva 4a o průměru 24 mm, která byla upevněna v 9 otvorech 6 každého víka 2 s pryžovými vložkami 5 skleněnými trubicemi 7 na jedné straně a odnimatelnými uzávěry v provedeni jako skleněné zátky 8 na straně druhé. Celofánová řasená střeva 4a a prostor nádoby 1. byl naplněn destilovanou vodou k vyzkoušeni těsnosti spojů. Po vypuštění vody byly skleněné trubice 7, ústící do celofánových řasených střev 4a, otvor plnící a vypouštěcí 9, skleněné provzdušňovací trubice 11 a otvor 13 k odvodu vháněného vzduchu uzavřeny vatovými zátkami a fermentačni zařízeni bylo sterilizováno autoklávováním při teplotě 130 °C po dobu 30 min. Po ochlazeni na teplotu laboratoře byla celofánová řasená střeva 4a naplněna kultivačním médiem. Skleněné trubice 7, ústící do celofánových řasených střev 4a, byly uzavřeny pryžovými zátkami 14. Nádoba 1. ve tvaru válce byla naplněna fyziologickým roztokem soli, jehož reakce byla upravena na pH = 7,2, plnící a vypouštěcí otvor 9 byl uzavřen pryžovou zátkou 14. Po 16 h dialýzy při teplotě laboratoře byl difuzát naočkován 20 ml bakteriální suspenze s počtem jednotek tvořících kolonie mikroorganizmů 10 / 1 ml. Po inkubaci po dobu 48 h při 37 °C bylo z nádoby JL získáno 6 000 ml bakteriální suspenze o obsahu mikroorganizmů 10⁷/ 1 ml kolonie tvořících jednotek.The fermenter was used to propagate the bacterial species Moraxella bovis. The cylindrical container 1 was made of SIMAX glass having a length of 400 mm, an inner diameter of 150 mm and a wall thickness of 6 mm. The lids 2 were made of stainless steel, the rubber ring seals 15 and the rubber inserts 5 of LUKOPREN N 1725, the flange joints 3 were commercially available. Instead of the disintegration tubes 4, a 24 mm diameter cellophane shirred casing 4a was used, which was fixed in 9 holes 6 of each lid 2 with rubber inserts 5 with glass tubes 7 on one side and removable closures in the form of glass plugs 8 on the other. The cellophane shirred casings 4a and the space of the container 1 were filled with distilled water to test for leaks. After the water was drained, the glass tubes 7 opening into the cellophane shirring casings 4a, the filling and discharge openings 9, the glass aeration tubes 11 and the blowing air opening 13 were closed with cotton plugs and the fermenter was sterilized by autoclaving at 130 ° C for 30 min. . After cooling to room temperature, cellophane shirring gut 4a was filled with culture medium. The glass tubes 7 opening into the cellophane shirring casings 4a were closed with rubber stoppers 14. The cylindrical vessel 1 was filled with physiological salt solution, whose reaction was adjusted to pH = 7.2, the filling and discharge opening 9 was closed with a rubber stopper 14 After 16 hours of dialysis at room temperature, the diffusate was inoculated with 20 ml of bacterial suspension with a number of 10/1 ml colony forming units. After incubation for 48 h at 37 ° C, 6000 ml of a bacterial suspension containing 10 ^7/1 ml of colony forming units was recovered from the JL vessel.

Příklad č. 2: 231 887Example 2: 231,887

Fermentačni zařízeni bylo sestaveno a připraveno způsobem popsaným v přikladu č. 1 s tim, že misto celofánových řasených střev 4a byly užity dialyzačni trubice 4 kalibru 40 výrobce Kalle-Wiesbaden. Dosažené výsledky odpovídaly výsledkům dosaženým s celofánovými řasenými střevy 4a. Výhodou celofánových řase ných střev je snadnější dostupnost·The fermentation apparatus was assembled and prepared as described in Example 1, with the use of dialysis tubes 4 of Kalle-Wiesbaden 40 caliber 40 instead of cellophane shirring casings 4a. The results obtained corresponded to those obtained with cellophane shirring 4a. The advantage of cellophane algae is easier accessibility ·

Claims

A fermentation apparatus for propagating a microbial culture, characterized in that dialysis tubes (4) mounted in the lid (2) on one side in the openings (6) by tubes (7) are located in the vessel (1) enclosed by the wolf (2). and on the other hand removable closures (8), the aeration device (11) mounted in the container (1) fixed in the opening (10) of the lid (2) and the lid (2) being provided with a filling or discharge opening (9) and an opening ( 13) air outlet ·

Fermentation plant according to claim 1, characterized in that the dialysis tubes (4) are replaced by cellophane shirring casings (4a).