CS231222B1 - Spdsob detekcie bielkovín dělených v polyakrylanriidovom géli - Google Patents

Description

231222 2

Vynález sa týká zpOsobu detekcie bielkovín dělených v polyakrylamldovom géli. V súčasnej době sa na detekclu bielkovín používá 4-amino-5-hydroxy-3-(paranitrofenylazo)-6-(fenylazo-2,7) naftalendisulfonová kyselina, dvojsodná sor ako procentuálny roztokv roztoku kyseliny octovej, trichloroctovej alebo v iných rozpúBťadlách, čo je popísanév práčach monografického charakteru autora Daviaa D. A., Disc electrophoresie II, N 4 Acad. Sci, 1964 a autora Maurera H. R., Disc elektrophoresiá Theorie und Fraxix derdiskontinnierlicher Polyacrylamidgel-Elektrophorese, Walter de Gruyter and Co·, Berlín,,968. Tieto farbivá vykazujd krátkodobá trvanlivost v rozsahu niekďkých dní.

Uvedené nedostatky sú odstránené u zpOsobu detekcie bielkovín dělených v polyakrylami-dovom géli podl’a vynálezu, kterého podstatou je, že na elektroforeogramy sa detekujú na-sýtenýa roztokem 1:2 kovokomplexného azofarblva chrómu, kobaltu alebo železa bis (1-fenyl--3-alkyl-5-hydroxylpyrozolyl) dibenzoovej kyseliny vzorca I ch3-

CO

N=N z "n ~CH,

CO

(I) kde X je chróm, kobalt alebo železo v roztoku kyseliny octovej alebo trlchlóroctovej. Výhodou zpOsobu detekcie bielkovín dělených v polyakrylamldovom géli podl’a vynálezuje, že trvanlivost - stálost farbiva v závislosti na Sase za běžného osvetlenia a teplotypřesahuje dobu jedného roka. Spektrum poskytovaných farieb je výhodné pre vyhodnotenie / v elektroforeogramov na rOznych typoch denzitometrov pro rOznej vlnovej dlžke. UrSitý stupenrozdielnosti v selektivitě farbenie jednotlivých komponentov bielkovín umožňuje študovatkvalitativně aspekty delenia bielkovín. V důsledku substitúcie chrómu a metylových skupin inými radikájmi ako je kobalt aleboželezo vzniká Široké farebné spektrum. Farbivá tohoto typu sa úspěšně aplikovali na detekciubielkovín dělených elektroforeticky v polyakrylamldovom géli, nakol’ko v oblasti pH podizoelektrický bod molekule bielkoviny je kladné nabitá, čím sa vytvérajú podmienky pre via-zanie elektrostatickými amóniovými složkami farbiva.

Predmet vynálezu je ilustrovaný na příklade prevedenia. Příklad prevedenia'

Rastlinné bielkoviny, izolované zo zrna obilnin, boli delené elektroforetickoumetodou v polyakrylamldovom géli. Na priloženom obrázku je znázorněné farebné spektrumaplikovaných preparátor, farbených nasýtených-roztokom farbiva v 7 %-nej kyselině octovej.Farbenie sa uskutočnilo tak, že polyakrylamidové gély sa preniesli do kadišiek a farbivoma nechali stát po dobu 12 hodin. Potom sa prebytok detekSného činidla zlial a zvyšok činid-la sa odstránil viacnásobnou dekontamináciou roztokom 7 %-nej kyseliny octovej a destilova-nou vodou. Použilo se 1:2 kovokomplexné eroforbivo. -

Claims (1)

1. 231222 Spdsob pódia vynálezu je možné využit okrem naznačeného směru na rieženie problematiky stanovenia Specifických bielkovín, včítane enzýmov. PREDMET VYNÁLEZU Spdsob detekcie bielkovín dělených v polyakrylamidovom géli vyznačený tým, žeelektroforeogramy sa detekujú nasýteným roztokom 1:2 kovokomplexného azofarbiva chrómu,kobaltu alebo železa bis (l-fenyl-3-alkyl-5-hydroxyl pyrozolyl) dibenzoovej kyselinyvzorca I

   kde X je chróm, kobalt alebo železo v roztoku kyseliny octovej, alebo trichlórovej. 4