CS227588B1 - Method of preparing universal testing pellets for determining proteolytic enzym activity - Google Patents
Method of preparing universal testing pellets for determining proteolytic enzym activity Download PDFInfo
- Publication number
- CS227588B1 CS227588B1 CS807282A CS807282A CS227588B1 CS 227588 B1 CS227588 B1 CS 227588B1 CS 807282 A CS807282 A CS 807282A CS 807282 A CS807282 A CS 807282A CS 227588 B1 CS227588 B1 CS 227588B1
- Authority
- CS
- Czechoslovakia
- Prior art keywords
- chromolytic
- weight
- tablets
- protein
- substrate
- Prior art date
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 11
- 230000000694 effects Effects 0.000 title claims description 8
- 230000002797 proteolythic effect Effects 0.000 title claims description 5
- 239000008188 pellet Substances 0.000 title 1
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 claims description 20
- 239000000758 substrate Substances 0.000 claims description 19
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 claims description 18
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 18
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 18
- 102100037486 Reverse transcriptase/ribonuclease H Human genes 0.000 claims description 13
- 229920000168 Microcrystalline cellulose Polymers 0.000 claims description 9
- 235000019813 microcrystalline cellulose Nutrition 0.000 claims description 9
- 239000008108 microcrystalline cellulose Substances 0.000 claims description 8
- 229940016286 microcrystalline cellulose Drugs 0.000 claims description 8
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 claims description 7
- 239000000454 talc Substances 0.000 claims description 7
- 229910052623 talc Inorganic materials 0.000 claims description 7
- 239000004365 Protease Substances 0.000 claims description 6
- 239000002245 particle Substances 0.000 claims description 6
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 5
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 claims description 4
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 4
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 4
- 229940024999 proteolytic enzymes for treatment of wounds and ulcers Drugs 0.000 claims description 4
- 108091005658 Basic proteases Proteins 0.000 claims description 3
- 108091005507 Neutral proteases Proteins 0.000 claims description 3
- 239000005018 casein Substances 0.000 claims description 3
- BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N casein, tech. Chemical compound NCCCCC(C(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CC(C)C)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(C(C)O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(COP(O)(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(N)CC1=CC=CC=C1 BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 235000021240 caseins Nutrition 0.000 claims description 3
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 claims description 3
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 claims description 2
- 239000013060 biological fluid Substances 0.000 claims description 2
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 claims description 2
- 238000006911 enzymatic reaction Methods 0.000 claims description 2
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 claims description 2
- 239000007787 solid Substances 0.000 claims description 2
- 239000008187 granular material Substances 0.000 claims 2
- 108091005508 Acid proteases Proteins 0.000 claims 1
- AFCARXCZXQIEQB-UHFFFAOYSA-N N-[3-oxo-3-(2,4,6,7-tetrahydrotriazolo[4,5-c]pyridin-5-yl)propyl]-2-[[3-(trifluoromethoxy)phenyl]methylamino]pyrimidine-5-carboxamide Chemical compound O=C(CCNC(=O)C=1C=NC(=NC=1)NCC1=CC(=CC=C1)OC(F)(F)F)N1CC2=C(CC1)NN=N2 AFCARXCZXQIEQB-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 102000035092 Neutral proteases Human genes 0.000 claims 1
- 108010058846 Ovalbumin Proteins 0.000 claims 1
- 238000013019 agitation Methods 0.000 claims 1
- 239000012736 aqueous medium Substances 0.000 claims 1
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 claims 1
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 claims 1
- 235000010980 cellulose Nutrition 0.000 claims 1
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 claims 1
- 238000012258 culturing Methods 0.000 claims 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 claims 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 claims 1
- 239000002532 enzyme inhibitor Substances 0.000 claims 1
- 238000000265 homogenisation Methods 0.000 claims 1
- 238000007873 sieving Methods 0.000 claims 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims 1
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 2
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000000061 acid fraction Substances 0.000 description 1
- 239000011324 bead Substances 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 230000006835 compression Effects 0.000 description 1
- 238000007906 compression Methods 0.000 description 1
- 238000004132 cross linking Methods 0.000 description 1
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 description 1
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 description 1
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 1
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 1
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 1
- -1 ovoalbumin Proteins 0.000 description 1
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 1
- 239000000344 soap Substances 0.000 description 1
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 1
- YNJBWRMUSHSURL-UHFFFAOYSA-N trichloroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(Cl)(Cl)Cl YNJBWRMUSHSURL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Landscapes
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Description
ČESKOSLOVENSKÁSOCIALISTICKÁREPUBLIKA( 19 ) POPIS VYNALEZU K AUTORSKÉMU OSVEDČENIU 227588 (11) (Bl) (61) (51) Int. Cl.3 C 12 Q 1/38 w (23) Výstavná priorita(22) Přihlášené 12 11 82(21) PV 8072-82 ÚŘAD PRO VYNÁLEZY A OBJEVY (40) Zverejnené 26 08 83 . (45) Vydané (75)
Autor vynálezu KUNIAK LUDOVÍT ing. CSc., BRATISLAVA,
ZEMEK JIŘÍ ing. CSc., LEHNICE (54) Spósob přípravy univerzálnych testovacích tabliet na stanovenie proteolytic·kej enzýmovej aktivity
Vynález sa týká spósobu přípravy univerzálnychtestovacích tabliet na stanovenie proteázovej enzý-movej aktivity v biologických tekutinách a fermen-tačných pódach.
Na stanovenie proteolytickej aktivity sa v zásaděpoužívajú dve metody. Staršia metoda, ale eštedosť používaná je založená na tom, že sa meriamnožstvo uvolněného proteinu v priebehu proteo-lytickej hydrolýzy, ktoré sa stanovuje ako rozpust-ná řrakcia v kyselme trichlóroctovej [M. Kunitz: J.Gen. Physiol. 30, 291 (1947)], připadne pomocoupozitívnej reakcie s fenolovým reagens podláFolína [M. L. Anson: J. Gen. Physiol: 22, 79(1938)].
Druhá metoda, novšia, je založená na využitíchromolytického substrátu na báze kazeinu, nie jebežne dostupná pre pomeme zložitú přípravuazokazeinu [S. Beiman a spol.: Proč. Exptl. Biol.Med. 107, 798-83 (1961)].
Velmi citlivý chromolytický substrát možno při-pravit’ podlá (Aut. osv. č. 194 592) založený nasieťovaní a farbení rónych typov proteinu. Vyžadu-je však lyofilizáciu vyfarbeného a premytého pro-teinu, čo je pomeme náročná technologická ope-rácia.
Podstatné výhodnější je spósob přípravy chro-molytického preteinového substrátu podlá PV3546-81, ktorý už nevyžaduje lyofilizáciu premy- tého proteinového substrátu ale je možné ho sušit’i alkoholom.
Pri sériových analýzach je prášková forma chro-i molytického substrátu nie výhodná, pretože jepotřebné pre každú analýzu zvlášť navazovat’ chro-molytický substrát, čo znižuje produktivitu práce.Uvádzané nedostatky rieši nová přihláška vynále-zu, ktorá umožňuje připravit’ tabletová formuchromolytického proteinového substrátu, takžepre analýzu nie je potřebné chromolytický substrátjednotlivo navažovať ale použit’ hotová testovaciutabletu.
Podstata vynálezu spočívá v tom, že suchýchromolytický proteinový substrát připravenýz hovádzieho sérového albuminu, ovoalbumínu,kazeinu alebo ich zmesí sa v prvom stupni zomeliena gulovom mlýne, presituje cez šito o velkosti ók0,1 až 0,2 mm, načo sa v druhom stupni zmiešav mikrokryštalickou celulózou o priemere velkostičastíc 0,06 až 0,1 mm v množstve 70 až 100 %hmot. na hmotnost’ suchého proteinu a mastencomv množstve 2 až 3 % hmot. na hmotnost’ tabletovejzmesi a treťom stupni sa zhomogenizovaná zmestabletuje na tabletovacom stroji na tablety požado-vanej hmotnosti s presnosťou ± 5 % hmot.
Zistili sme, že chromolytický proteinový substrát sa tabletovat’ na tabletovacom stroji nedá, pretože pri nízkých tlakoch sá tablety z hradiska mechanic- 227588
Claims (3)
1 kých vlastností nevyhovujúce, nakolko sa rozpada-jú, zatial čo pri vyšších lisovacích tlakoch sú tabletyvelmi pevné a vo vodě sa velmi zle rozpadajú.Ukázalo sa výhodné chromolytický protein table-tovat: s prídavkom 70 až 100 % hmot. mikrokryšta-lickej celulózy na hmotnost’ proteinu. Za týchtoí okolností sú připravené tablety dostatočne pevnéa čo je dóležité velmi dobré sa pri analýze vovodnom prostředí rozpadajú, takže přítomný pro-teázový enzým má hned na začiatku reakciedostatočne přístupný chromolytický substrát v pře-bytku na enzýmovú reakciu. Optimálna velkost' častíc chromolytického pro-, teinu sa ukýzala byť do 0,2 mm. Váčšie částice ako0,2 mm by zhoršovali homogenitu tablet pri* table-tovaní. Vďaka tomu, že mikrokryštalická celulózamá vysoké samomazacie vlastnosti pri práci natabletovacom stroji nie je potřebné dávať\ dotabletovacej zmesi viac mastenca (ako mážadla)ako 2 až 3 % hmot. Mastenec ani mikrokryštalická‘ celulóza, ktoré sú súčasťou testovacej tablety nie súi inhibitory proteázových enzýmov, takže ich prí-ζ tomnosť v reakčnej zmesi neovplyvňuje proteázo-vú aktivitu. - Vzhladom na to, že stanovenie proteázovejenzýmovej aktivity prebieha za přítomnosti pře-bytku proteázového substrátu nie je potřebnévyžadovat’ vyššiu přesnost’ pri dodržiavaní hmot-nosti vyrábaných' testovacích tabliet ako ± 5 %hmot. Kedže proteázové enzýmy majú velmi rozdielnepH optimá, testovacia tableta neobsahuje zložkytlmivého roztoku aby ju bolo možné použiť v tom.rozsahu pH a to tak pre kyslé, tak aj pre neutrálněa alkalické proteázy. Výhodou nového spósobu přípravy chromolytic-kých testovacích tabliet na stanovenie proteolytic-kej aktivity je predovšetkým to, že substrát nie je.třeba navažovať pre jednotlivé analýzy, čo zvyšujeproduktivitu práce najma pri sériových analýzachči už v priemysle pri kontrole výroby proteolytic-kých enzýmov, alebo v klinickej niochémii. Ďalšouvýhodou tabletovej formy je, že sa móže dlhšiu PREDMET Spósob přípravy univerzálnych testovacích tab-liet na stanovenie proteolytickej enzýmovej aktivi-ty z chromolytického proteinového substrátu vy-značený tým, že chromolytický proteinový substrátsa v prvom stupni zomelie na guíovom mlýnea presituje cez šito o velkosti ók 0,1 až 0,2 mm,načo sa v druhom stupni zmieša s mikrokryštalic- 227588 dobu chromolytický substrát v nej obsiahnutý iskladovat’ bez změny fyzikálno-chemických vlast-ností. Ďalšie přednosti nového postupu sú zřejméz nasledovných príkladov, ktoré nie sú vyčerpáva-júce ale len ilustrativně. Příklad 1 2 kg suchého chromolytického proteinu připra-veného z hovadzieho sérového albuminu sa zome··lie na guíovom mlýne, presituje sa cez šito o vel-kosti ók 0,2 mm a zmieša sa s 2 kg mikrokryštalic-kej celulózy o priemere častíc 60 až 100 mikrónova 80 g mastenca ktorá zmes sa homogenizujemiéšaním po dobu 2 hodin. Po homogenizácii sasuchý granulát tabletuje na tabletovacom stroji natablety o priemere 7 mm a hmotnosti 100 mgs presnosťou ± 5 % hmot. Tablety majú dostatoč-nú pevnosť, takže sa pri manipulácii nedrobia a vovodě sa rozpadajú po dobu do 15 sekúnd. Súvhodné a vysoko citlivé naj má na kyslé proteázy. Příklad
2 Postup podlá příkladu 1 s tým rozdielom, že akoprotein použijeme chromolytický vaječný albuminv množstve 2 kg, 1,4 kg mikrokryštalickej celulózya 100 g mastenca. Připravené testovacie tabletymajú podobné mechanické vlastnosti ako tabletypřipravené podlá příkladu 1, ale sú citlivejšiepredovšetkým na neutrálně a alkalické proteázy,menej citlivé na kyslé protázy. Příklad
3 ' Postup podlá příkladu 1 s tým rozdielom, že akoprotein sa použije chromolytický kazein. Připrave-né tablety majú obdobné mechanické vlastnostiako u príkladov 1 a 2 ale sú rovnoměrně citlivé akona kyslé tak na neutrálně proteázy. Vynález má uplatnenie predovšetkým v klinickejbiochémii pri stanovovaní proteolytickčýh enzý-mov v biologických tekutinách ale i v priemyslovejaplikácii pri medzioperačnej kontrole kultivačnýchpód pri výrobě proteolytických enzýmov. VYNÁLEZU kou celulózou o priemernej velkosti častíc 60 až100 mikrónov v množstve 70 až 100 % hmot. nahmotnost’ suchého proteinu a mastencom v množ-stve 2 až 3 % hmot. na hmotnosť suchého granulá-tu a v treťom stupni sa tabletuje na tabletovacomstroji na tablety požadovanej hmotnosti s presnos-ťou ± 5 % hmot.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CS807282A CS227588B1 (en) | 1982-11-12 | 1982-11-12 | Method of preparing universal testing pellets for determining proteolytic enzym activity |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CS807282A CS227588B1 (en) | 1982-11-12 | 1982-11-12 | Method of preparing universal testing pellets for determining proteolytic enzym activity |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CS227588B1 true CS227588B1 (en) | 1984-04-16 |
Family
ID=5430843
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CS807282A CS227588B1 (en) | 1982-11-12 | 1982-11-12 | Method of preparing universal testing pellets for determining proteolytic enzym activity |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CS (1) | CS227588B1 (cs) |
-
1982
- 1982-11-12 CS CS807282A patent/CS227588B1/cs unknown
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| EP0377229B1 (en) | Use of specific properties of allergens from animal sources and methods for their isolation | |
| Lyons et al. | Characteristics of a 95-kDa matrix metalloproteinase produced by mammary carcinoma cells | |
| Jones et al. | Simplified endoproteinase assays using gelatin or azogelatin | |
| Halabi et al. | Elastin purification and solubilization | |
| CN115032402B (zh) | 一种基质金属蛋白酶-3胶乳检测试剂盒及其制备方法 | |
| US20130273048A1 (en) | Stabilizing agent and blocking agent | |
| US8012709B2 (en) | Method for determining if a subject having type II diabetes has a kidney disorder | |
| KR100788177B1 (ko) | 단백질 용액으로부터 인자 ⅶ을 활성화하는 프로테아제의활성을 측정하기 위한 방법 | |
| Siegel et al. | Evaluation of the Human Sperm Proacrosin-Acrosin System Using Gelatin-Sodium Dodecyl Sulfate-Polyacrylam ide Gel Electrophesis | |
| McEuen et al. | Guinea pig lung tryptase: localisation to mast cells and characterisation of the partially purified enzyme | |
| CS227588B1 (en) | Method of preparing universal testing pellets for determining proteolytic enzym activity | |
| DE68919338T2 (de) | Fibrinolytischer Test. | |
| CA1203153A (en) | Process for measuring the activity of the plasma factor xiii | |
| Mohler et al. | Distribution of urokinase among the common mammals | |
| Kennedy et al. | Preparation of a water-insoluble trans-2, 3-cyclic carbonate derivative of macroporous cellulose and its use as a matrix for enzyme immobilisation | |
| CN117054672B (zh) | 纤溶酶-α2纤溶酶抑制剂复合物测定试剂及其应用 | |
| Park et al. | Proteinase activity in muscle particles | |
| Yamamoto et al. | Probable involvement of cathepsin D in the degradation of β2-microglobulin in acidic urine | |
| Andrews | A new approach to the general detection and measurement of proteinase and proteinase inhibitor activities | |
| Celerier et al. | Isolation of the flavodehydrogenase domain of Hansenula anomala flavocytochrome b2 after mild proteolysis by an H. anomala proteinase | |
| Rothman | Association of bovine alpha-chymotrypsinogen and trypsinogen with rat zymogen granules | |
| Leiter et al. | Exocrine pancreatic insufficiency syndrome in CBA/J mice. II. Biochemical studies | |
| USHA et al. | Proteases of germinating winged-bean (Psophocarpus tetragonolobus) seeds: purification and characterization of an acidic protease | |
| Liu-Osheroff et al. | The enzymic properties of a modified ox heart myosin adenosine triphosphatase on covalent binding to an insoluble cellulose matrix | |
| Engel et al. | Studies of thrombin formation with an insoluble derivative of prothrombin |