CS226097B1 - Živné prostředí pro buněčné a tkáňové kultury obsahující růstové proteiny krevního séra - Google Patents
Živné prostředí pro buněčné a tkáňové kultury obsahující růstové proteiny krevního séra Download PDFInfo
- Publication number
- CS226097B1 CS226097B1 CS318982A CS318982A CS226097B1 CS 226097 B1 CS226097 B1 CS 226097B1 CS 318982 A CS318982 A CS 318982A CS 318982 A CS318982 A CS 318982A CS 226097 B1 CS226097 B1 CS 226097B1
- Authority
- CS
- Czechoslovakia
- Prior art keywords
- serum
- cell
- growth
- proteins
- blood serum
- Prior art date
Links
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 title claims description 29
- 230000012010 growth Effects 0.000 title claims description 25
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 title claims description 20
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 title claims description 20
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 title description 5
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 claims description 7
- 108010088751 Albumins Proteins 0.000 claims description 4
- 102000009027 Albumins Human genes 0.000 claims description 4
- 102000004506 Blood Proteins Human genes 0.000 claims description 4
- 108010017384 Blood Proteins Proteins 0.000 claims description 3
- 102000004895 Lipoproteins Human genes 0.000 claims description 3
- 108090001030 Lipoproteins Proteins 0.000 claims description 3
- 239000003104 tissue culture media Substances 0.000 claims description 3
- 102000002572 Alpha-Globulins Human genes 0.000 claims description 2
- 108010068307 Alpha-Globulins Proteins 0.000 claims description 2
- 102000006734 Beta-Globulins Human genes 0.000 claims description 2
- 108010087504 Beta-Globulins Proteins 0.000 claims description 2
- 239000006143 cell culture medium Substances 0.000 claims description 2
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 19
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 14
- 244000309466 calf Species 0.000 description 8
- 239000000047 product Substances 0.000 description 8
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 7
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 4
- 239000012888 bovine serum Substances 0.000 description 4
- 230000010261 cell growth Effects 0.000 description 4
- 230000001605 fetal effect Effects 0.000 description 4
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 4
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 3
- 239000012894 fetal calf serum Substances 0.000 description 3
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 3
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 3
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 3
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 3
- YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N (+)-Biotin Chemical compound N1C(=O)N[C@@H]2[C@H](CCCCC(=O)O)SC[C@@H]21 YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N 0.000 description 2
- 239000001763 2-hydroxyethyl(trimethyl)azanium Substances 0.000 description 2
- ALYNCZNDIQEVRV-UHFFFAOYSA-N 4-aminobenzoic acid Chemical compound NC1=CC=C(C(O)=O)C=C1 ALYNCZNDIQEVRV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 235000019743 Choline chloride Nutrition 0.000 description 2
- 241000287828 Gallus gallus Species 0.000 description 2
- DHCLVCXQIBBOPH-UHFFFAOYSA-N Glycerol 2-phosphate Chemical compound OCC(CO)OP(O)(O)=O DHCLVCXQIBBOPH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L Magnesium sulfate Chemical compound [Mg+2].[O-][S+2]([O-])([O-])[O-] CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- DFPAKSUCGFBDDF-UHFFFAOYSA-N Nicotinamide Chemical compound NC(=O)C1=CC=CN=C1 DFPAKSUCGFBDDF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- SUHOOTKUPISOBE-UHFFFAOYSA-N O-phosphoethanolamine Chemical compound NCCOP(O)(O)=O SUHOOTKUPISOBE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- WCUXLLCKKVVCTQ-UHFFFAOYSA-M Potassium chloride Chemical compound [Cl-].[K+] WCUXLLCKKVVCTQ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- RADKZDMFGJYCBB-UHFFFAOYSA-N Pyridoxal Chemical compound CC1=NC=C(CO)C(C=O)=C1O RADKZDMFGJYCBB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- AUNGANRZJHBGPY-SCRDCRAPSA-N Riboflavin Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)CN1C=2C=C(C)C(C)=CC=2N=C2C1=NC(=O)NC2=O AUNGANRZJHBGPY-SCRDCRAPSA-N 0.000 description 2
- UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M Sodium bicarbonate Chemical compound [Na+].OC([O-])=O UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N Thymidine Chemical compound O=C1NC(=O)C(C)=CN1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)C1 IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N 0.000 description 2
- DRTQHJPVMGBUCF-XVFCMESISA-N Uridine Chemical compound O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1N1C(=O)NC(=O)C=C1 DRTQHJPVMGBUCF-XVFCMESISA-N 0.000 description 2
- BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N ammonium sulfate Chemical compound N.N.OS(O)(=O)=O BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229910052921 ammonium sulfate Inorganic materials 0.000 description 2
- 235000011130 ammonium sulphate Nutrition 0.000 description 2
- 210000004381 amniotic fluid Anatomy 0.000 description 2
- UCMIRNVEIXFBKS-UHFFFAOYSA-N beta-alanine Chemical compound NCCC(O)=O UCMIRNVEIXFBKS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229960003178 choline chloride Drugs 0.000 description 2
- SGMZJAMFUVOLNK-UHFFFAOYSA-M choline chloride Chemical compound [Cl-].C[N+](C)(C)CCO SGMZJAMFUVOLNK-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 2
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 2
- 210000002950 fibroblast Anatomy 0.000 description 2
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 2
- 239000003102 growth factor Substances 0.000 description 2
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 2
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 2
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 2
- 239000013028 medium composition Substances 0.000 description 2
- 239000008267 milk Substances 0.000 description 2
- 210000004080 milk Anatomy 0.000 description 2
- 235000013336 milk Nutrition 0.000 description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 2
- 229910021653 sulphate ion Inorganic materials 0.000 description 2
- XOAAWQZATWQOTB-UHFFFAOYSA-N taurine Chemical compound NCCS(O)(=O)=O XOAAWQZATWQOTB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- LWIHDJKSTIGBAC-UHFFFAOYSA-K tripotassium phosphate Chemical compound [K+].[K+].[K+].[O-]P([O-])([O-])=O LWIHDJKSTIGBAC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 2
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- GVJHHUAWPYXKBD-IEOSBIPESA-N α-tocopherol Chemical compound OC1=C(C)C(C)=C2O[C@@](CCC[C@H](C)CCC[C@H](C)CCCC(C)C)(C)CCC2=C1C GVJHHUAWPYXKBD-IEOSBIPESA-N 0.000 description 2
- JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 2-[4-(2-hydroxyethyl)piperazin-1-yl]ethanesulfonic acid Chemical compound OCC[NH+]1CCN(CCS([O-])(=O)=O)CC1 JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- MKPCNMXYTMQZBE-UHFFFAOYSA-N 7h-purin-6-amine;sulfuric acid;dihydrate Chemical compound O.O.OS(O)(=O)=O.NC1=NC=NC2=C1NC=N2.NC1=NC=NC2=C1NC=N2 MKPCNMXYTMQZBE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 description 1
- DWRXFEITVBNRMK-UHFFFAOYSA-N Beta-D-1-Arabinofuranosylthymine Natural products O=C1NC(=O)C(C)=CN1C1C(O)C(O)C(CO)O1 DWRXFEITVBNRMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 1
- UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L Calcium chloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Ca+2] UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 241000282693 Cercopithecidae Species 0.000 description 1
- AUNGANRZJHBGPY-UHFFFAOYSA-N D-Lyxoflavin Natural products OCC(O)C(O)C(O)CN1C=2C=C(C)C(C)=CC=2N=C2C1=NC(=O)NC2=O AUNGANRZJHBGPY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- AEMOLEFTQBMNLQ-AQKNRBDQSA-N D-glucopyranuronic acid Chemical compound OC1O[C@H](C(O)=O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1O AEMOLEFTQBMNLQ-AQKNRBDQSA-N 0.000 description 1
- 102000009024 Epidermal Growth Factor Human genes 0.000 description 1
- 101800003838 Epidermal growth factor Proteins 0.000 description 1
- 102000016359 Fibronectins Human genes 0.000 description 1
- 108010067306 Fibronectins Proteins 0.000 description 1
- IAJILQKETJEXLJ-UHFFFAOYSA-N Galacturonsaeure Natural products O=CC(O)C(O)C(O)C(O)C(O)=O IAJILQKETJEXLJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- 239000007995 HEPES buffer Substances 0.000 description 1
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 1
- LEVWYRKDKASIDU-IMJSIDKUSA-N L-cystine Chemical compound [O-]C(=O)[C@@H]([NH3+])CSSC[C@H]([NH3+])C([O-])=O LEVWYRKDKASIDU-IMJSIDKUSA-N 0.000 description 1
- AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N L-threonine Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N 0.000 description 1
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 1
- 206010029260 Neuroblastoma Diseases 0.000 description 1
- BELBBZDIHDAJOR-UHFFFAOYSA-N Phenolsulfonephthalein Chemical compound C1=CC(O)=CC=C1C1(C=2C=CC(O)=CC=2)C2=CC=CC=C2S(=O)(=O)O1 BELBBZDIHDAJOR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L Sulfate Chemical compound [O-]S([O-])(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- JZRWCGZRTZMZEH-UHFFFAOYSA-N Thiamine Natural products CC1=C(CCO)SC=[N+]1CC1=CN=C(C)N=C1N JZRWCGZRTZMZEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000004338 Transferrin Human genes 0.000 description 1
- 108090000901 Transferrin Proteins 0.000 description 1
- 229940087168 alpha tocopherol Drugs 0.000 description 1
- 229960004050 aminobenzoic acid Drugs 0.000 description 1
- 239000001166 ammonium sulphate Substances 0.000 description 1
- 210000004102 animal cell Anatomy 0.000 description 1
- 229960001230 asparagine Drugs 0.000 description 1
- WDIHJSXYQDMJHN-UHFFFAOYSA-L barium chloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Ba+2] WDIHJSXYQDMJHN-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229910001626 barium chloride Inorganic materials 0.000 description 1
- IQFYYKKMVGJFEH-UHFFFAOYSA-N beta-L-thymidine Natural products O=C1NC(=O)C(C)=CN1C1OC(CO)C(O)C1 IQFYYKKMVGJFEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- DRTQHJPVMGBUCF-PSQAKQOGSA-N beta-L-uridine Natural products O[C@H]1[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@@H]1N1C(=O)NC(=O)C=C1 DRTQHJPVMGBUCF-PSQAKQOGSA-N 0.000 description 1
- 229940000635 beta-alanine Drugs 0.000 description 1
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 1
- 229960002685 biotin Drugs 0.000 description 1
- 235000020958 biotin Nutrition 0.000 description 1
- 239000011616 biotin Substances 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 1
- 239000001110 calcium chloride Substances 0.000 description 1
- 229910001628 calcium chloride Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000005779 cell damage Effects 0.000 description 1
- 210000001612 chondrocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000001684 chronic effect Effects 0.000 description 1
- 230000007812 deficiency Effects 0.000 description 1
- 230000002950 deficient Effects 0.000 description 1
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 description 1
- 210000001840 diploid cell Anatomy 0.000 description 1
- 229940116977 epidermal growth factor Drugs 0.000 description 1
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 1
- 229940097043 glucuronic acid Drugs 0.000 description 1
- CDAISMWEOUEBRE-GPIVLXJGSA-N inositol Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)[C@@H]1O CDAISMWEOUEBRE-GPIVLXJGSA-N 0.000 description 1
- 229960000310 isoleucine Drugs 0.000 description 1
- 210000003292 kidney cell Anatomy 0.000 description 1
- 229910052943 magnesium sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019341 magnesium sulphate Nutrition 0.000 description 1
- 238000012423 maintenance Methods 0.000 description 1
- 238000000034 method Methods 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- 210000004498 neuroglial cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000002569 neuron Anatomy 0.000 description 1
- 229960003966 nicotinamide Drugs 0.000 description 1
- 235000005152 nicotinamide Nutrition 0.000 description 1
- 239000011570 nicotinamide Substances 0.000 description 1
- 229940014662 pantothenate Drugs 0.000 description 1
- 239000011713 pantothenic acid Substances 0.000 description 1
- 229960003531 phenolsulfonphthalein Drugs 0.000 description 1
- 239000001103 potassium chloride Substances 0.000 description 1
- 235000011164 potassium chloride Nutrition 0.000 description 1
- 229910000160 potassium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011009 potassium phosphates Nutrition 0.000 description 1
- 239000012460 protein solution Substances 0.000 description 1
- 229960003581 pyridoxal Drugs 0.000 description 1
- 235000008164 pyridoxal Nutrition 0.000 description 1
- 239000011674 pyridoxal Substances 0.000 description 1
- 238000011158 quantitative evaluation Methods 0.000 description 1
- 229960002477 riboflavin Drugs 0.000 description 1
- 235000019192 riboflavin Nutrition 0.000 description 1
- 239000002151 riboflavin Substances 0.000 description 1
- CDAISMWEOUEBRE-UHFFFAOYSA-N scyllo-inosotol Natural products OC1C(O)C(O)C(O)C(O)C1O CDAISMWEOUEBRE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000013049 sediment Substances 0.000 description 1
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000017557 sodium bicarbonate Nutrition 0.000 description 1
- 229910000030 sodium bicarbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 239000001488 sodium phosphate Substances 0.000 description 1
- 229910000162 sodium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 1
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 1
- -1 sulphate ions Chemical class 0.000 description 1
- 239000008399 tap water Substances 0.000 description 1
- 235000020679 tap water Nutrition 0.000 description 1
- 229960003080 taurine Drugs 0.000 description 1
- 235000019157 thiamine Nutrition 0.000 description 1
- KYMBYSLLVAOCFI-UHFFFAOYSA-N thiamine Chemical compound CC1=C(CCO)SCN1CC1=CN=C(C)N=C1N KYMBYSLLVAOCFI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960003495 thiamine Drugs 0.000 description 1
- 239000011721 thiamine Substances 0.000 description 1
- 229940104230 thymidine Drugs 0.000 description 1
- 229960000984 tocofersolan Drugs 0.000 description 1
- 239000012581 transferrin Substances 0.000 description 1
- RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K trisodium phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[O-]P([O-])([O-])=O RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- DRTQHJPVMGBUCF-UHFFFAOYSA-N uracil arabinoside Natural products OC1C(O)C(CO)OC1N1C(=O)NC(=O)C=C1 DRTQHJPVMGBUCF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940045145 uridine Drugs 0.000 description 1
- VBEQCZHXXJYVRD-GACYYNSASA-N uroanthelone Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O)C(C)C)[C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC=1NC=NC=1)NC(=O)[C@H](CCSC)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CNC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@H](CS)NC(=O)CNC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O)C(C)C)[C@@H](C)CC)C1=CC=C(O)C=C1 VBEQCZHXXJYVRD-GACYYNSASA-N 0.000 description 1
- 239000004474 valine Substances 0.000 description 1
- 239000002076 α-tocopherol Substances 0.000 description 1
- 235000004835 α-tocopherol Nutrition 0.000 description 1
Landscapes
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
Description
Vynález se týká živného prostředí pro buněčné a tkáňové kultury obsahujícího růstové proteiny krevního séra. !
Součástí většiny živných prostředí pro živočišné buněčné a tkáňové kultury je krevní sérum. Bezsérová prostředí lze zatím užívat jen omezeně pro pěstování stabilních linií; složky těchto prostředí, např. fibronektin, transferin a epidermální růstový faktor jsou zároveň velmi drahé. Sérum obsahuje ovšem řadu složek, zejména ze skupiny lipoproteinů, které inhibují růst buněk nebo buňky morfolo‘ gicky či fysiologicky poškozují. Většinou lze užít k pěstování fysiologicky nepoškozených buněk i ; mimo organismus pouze živné prostředí s fetálním | i sérem, které obsahuje jen stopy inhibujících komi ponent. Celosvětově i u nás je ale nejdostupnějšího z fetálních sér — telecího séra plodu — chronický i nedostatek i přes to, že je velmi drahé.
» Růstové proteiny telecího séra se podobají í obsahem vysokomolekulámích růstových faktorů | [ fetálnímu séru; předpokladem ovšem je, aby bylo 3 i při jejich výrobě užito jako výchozí suroviny sérum sajících telat ve stáří do 6 týdnů, které má minimální obsah inhibujících složek. Dnes taková ; zvířata nejsou a nebudou k dispozici. Sérum i starších zvířat obsahuje již značná množství inhibi‘ torů, které dosud používanou technologií odstranit i nelze. Kolísání obsahu a kvality inhibitorů v séru užívaném k přípravě růstových proteinů se pak projevuje získáváním nestandardního produktu, který nemůže být často ani komerčně distribuován. Živné prostředí, které je z růstových proteinů i vyráběno a komerčně distribuováno, obsahuje zároveň hydrolysát mléčného albuminu, který je mimořádně nestandardní složkou, protože každá šarže má jiné složení.
Podstata živného prostředí pro buněčné a tkáňové kultury s růstovými proteiny krevního séra spočívá v tom, že obsahuje pouze ty vysokomolekulámí složky, které jsou nezbytnými růstovými faktory buněk a tkání pěstovaných mimo organismus. Jde tedy o živné prostředí pro buněčné a tkáňové kultury obsahující růstové proteiny i krevního séra a ostatní běžné nízkomolekulární i složky chemičky definovaného živného prostředí, ! vyznačující se tím, že obsahuje 0,4 až 10,0 hmot.
; % sérových proteinů zbavených lipoproteinů a po zůstávajících z 38,0 až 52,0 hmot. % albuminu,
12,0 až 22,0 hmot. % alfaglobulinů, 11,0 až 23,0 hmot. % betaglobulinů a 15,0 až 25,0 hmot. % gamaglobulinů. Nově vypracovaný technologický předpis přípravy růstových proteinů totiž zaručuje přípravu produktu, z něhož jsou odstraněny všechny vysokomolekulámí komponenty séra inhibující růst buněk a tkání. Metoda je tak účinná, že umožňuje využití nejen telecího, ale i hovězího séra. V tom spočívají hlavní výhody přípravy růstových proteinů krevního séra podle tohoto vynálezu: a) telecího séra je nedostatek, i když jde o séra zvířat poměrně starých a dokrmovaných; hovězího séra bude dostatek; b) kvantitativní i výtěžek produktu je v průměru asi o 1/4 vyšší při! užití hovězího séra ve srovnání se sérem telecím, j což se nutně musí projevit ve snížení výrobních nákladů nového výrobku; c) růstové proteiny hovězího séra není nutné kombinovat s hydrolysátem mléčného albuminu, jsou stejně účinné i v plně definovaném mediu, jako je např. minimální essenciální medium Eagle (MEM). 1
Příklad provedení (jako příklad uvedeno sérum I hovězí): I
Krev ze zdravých zvířat, ne starších 2 roky, se | odebere pokud možno asepticky a uchovává se: v chladnici až do přípravy séra. Sérum se oddělí v průtokové odstředivce a na 10 000 ml séra se přidá 3 000 g síranu amonného p. a. Po rozpuštění síranu amonného se směs nechá 20 hod. stát i v chladnici. Vzniklá sraženina se oddělí filtrací přes ; promyté, dvojité, papírové filtry; filtruje se i v chladnici. Sraženina se dialysuje nejprve proti proudící vodovodní vodě, později proti demineralizované vodě při 4 °C. Po dialyse musí být v rozto- ί ku proteinů zkouška na obsah síranů negativní při zkoušení chloridem bamatým. Roztok vychlazený na 4 °C se centrifuguje při 2 000 ot./min. 90 minut. Výsledný čirý roztok je součástí A produktu. Sediment se vyhazuje. Roztok zbývající po původní filtraci přes papírové filtry se sráží síranem amonným dále (na 10 000 ml 3 000 g), nechá se stát v chladnici 20 hod. a filtruje se již uvedeným způsobem. Sraženina se dialysuje stejně jako část A produktu, zkouší se na síranové ionty a je-li zkouška negativní a roztok zcela čirý, získává se část B produktu. Obě části se smíchají a výsledný roztok se lyofilisuje. Tím se získá produkt, který neztrácí biologickou aktivitu nejméně 2 roky při skladování při 4°C. Používá se v koncentraci 0,4-10,0% (hmotnost na objem) ve vhodném chemicky definovaném živném prostředí, obsahujícím pouze nízkomolekulámí složky a voleném podle typu pěstovaných buněk či tkání. Výhodné je také použití vysokokapacitního ústrojného roztoku, např. N-2-hydroxyetylpiperazin-N'-2-etansulfonát sodný (HEPES-Na) jako součásti média, neboť je tím zajištěno dlouhodobé udržování i optimální a konstantní hodnoty pH živného rozto- , ku. Základní médium s širokým rozsahem použití ί je založeno na definovaném roztoku MEM doplněném růstovými proteiny krevního séra j a HEPESem, jak je uvedeno v následujících l příkladech:
Příklad .složení média 1. Užívá se pro heteroploidní ljnie a pro čerstvě explantované dělivé buňky. ,
Ingredience mg i
Růstové proteiny 1 krevního séra 4 000,00
HEPES-Na 5 200,00
| 1-arginin. HO | 226097 ~ 126,98 |
| 1-cystin | 24,00 |
| 1-glutamin | 292,00 |
| Ϊ 1-histidin. HO. aq. | 41,98 |
| 1-isoleucin | 52,00 |
| 1-leucin | 52,00 |
| 1-lysin. HO | 72,48 |
| 1-metionin | 15,00 |
| 1-fenylalanin | 32,00 |
| l-threoňin | 48,00 |
| 1-tryptofan | 10,00 |
| 1-tyrosiů | 36,00 |
| 1-valin | 46,0Ó |
| cholinchlorid | >1,00 |
| destilovaná + demineralizovaná voda do | 1 000,0 ml |
| Kys. listová | 1,00 |
| i-inositol | 2,00 |
| nikotinamid | 1,00 |
| i Ca-pantothenát | 1,00 |
| pyridoxal. HC1 | 1,00 |
| riboflavin | 1,00 |
| thiamin. HO | 1,00 |
| chlorid sodný | 8 000,00 |
| chlorid draselný | 400,00 |
| chlorid vápenatý | 140,00 |
| síran hořečnatý | 98,00 |
| fosforěčňan sodný sek. | 48,00 |
| fosforečňan draselný prim. | 60,00 |
| glukosa | 1 000,00 |
| kyselý uhličitan sodný | 750,00 |
| fenolová červeň | 10,00 |
| Příklad složení média 2. Pro čerstvě explantova- | |
| né diferencované buňky, náročné lidské diploidní | |
| linie, např. RS4, probuňky lidských plodových vod | |
| a pro další buňky náročné na výživu je nutné zvýšit | |
| koncentraci růstových proteinů krevního áéra na | |
| 10 000,0 mg na 1 litr a ve výjimečných případech | |
| až na 100,0 g na 1 litr. Médium je nutné současně | |
| doplnit 0 následující ingredience: 1-serin | mg 10,50 |
| 1-prolin* | 11,30 |
| 1-asparagin | 66,00 |
| beta-alanin | 8,90 |
| kys. glukuronová | 10,00 |
| uridin | 5,00 |
| thymidin | 2,50 |
| Na-pyruvát | 55,00 |
| biotin | 1,00 |
| adeninsulfát | 10,00 |
| kys. p-aminobenzoová | 1,00 |
| taurin | 1,00 |
| cholinchlorid | 9,00 |
| beta-glycerofosfát | 1,00 |
| 0-fosfoetanolamin | 2,00 |
| alfa-tokoferolfosfát-Na2 | 1,00 |
Vhodnost uvedeného živného prostředí byla í ověřována na 5 nezávislých pracovištích za použití těchto typů kultur: a) stabilní buněčné linie: HeLa, BHK, MDA, neuroblastom 0300; b) lidské diploidní linie: LEP 19 a RS4; c) čerství exulantova3 né buňky: kuřecí fibroblasty, chondroblasty, gliové buňky, neurony, buňky lidských plodových vod a buňky opičích ledvin. Pro každou z uvedených skupin je dále zaznamenán příklad kvantitativního vyhodnocení růstu buněk v médiu s růstovými proteiny a v médiu se sérem:
Hodnocení růstu lidských heteroploidních bulí něk HeLa (a) · .
Počet buněk v kultuře po 7 dnech růstu
| médium s růstovými proteiny | médium s 10 % telecího séra | |
| 1. pasáž 2. pasáž 3. pasáž | 4.1 X 107 4.2 X 107 4,4 X 107 | 4.5 X 107 4,3 X 107 4.6 X 107 |
Hodnocení růstu lidských diploidních buněk (b) Počet buněk v kultuře po 7 dnech růstu médium médium s 10 % s růstovými fetálního telecího proteiny séra
| 1. pasáž 2. pasáž 3. pasáž | 1.7 x 107 1,9 χ 107 1.8 X 107 | 1,9 x 107 1,9 χ 107 1,8 X 107 |
| Hodnocení růstu čerstvě explantovaných kuřecích fibroblastů (c) | ||
| Počet buněk v kultuře po 7 dnech růstu | ||
| médium s růstovými proteiny | médium s 10 % telecího séra | |
| 1. pasáž 2. pasáž | . 2,6 x lO7 1,6 X 107 | 2,3 X 107 1,5 x 107 |
Jak vyplývá z uvedených příkladů, jsou výsledky kultivace buněk v živném prostředí s růstovými proteiny krevního séra vyrobeném podle tohoto vynálezu prakticky shodné s výsledky kultivace buněk nejen v prostředí s telecím sérem, ale i s fetálním telecím sérem u náročnějších buněčných typů. Výrobní náklady prostředí s růstovými proteiny jsou však podstatně nižší než výrobní náklady živného prostředí s fetálním sérem. Zároveň lze růstové proteiny vyrobit v dlouhodobě skladovatelné formě a prakticky neomezeném množství.
Claims (1)
- PŘEDMĚT VYNÁLEZUI Živné prostředí pro buněčné a tkáňové kultury, obsahující růstové proteiny krevního séra a ostatní běžné nízkomolekulární složky chemicky definovaného živného prostředí, vyznačující se tím, že obsahuje 0,4 až 10,0 hmot. % sérových proteinů zbavených lipoproteinů, pozůstávajících z 38,0 až 52,0 hmot. % albuminu, 12,0 až 22,0 hmot. % alfaglobulinů, 11,0 až 23,0 hmot. % betaglobulinů a 15,0 až 25,0 hmot. % gamaglobulinů.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CS318982A CS226097B1 (cs) | 1982-05-04 | 1982-05-04 | Živné prostředí pro buněčné a tkáňové kultury obsahující růstové proteiny krevního séra |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CS318982A CS226097B1 (cs) | 1982-05-04 | 1982-05-04 | Živné prostředí pro buněčné a tkáňové kultury obsahující růstové proteiny krevního séra |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CS226097B1 true CS226097B1 (cs) | 1984-03-19 |
Family
ID=5371269
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CS318982A CS226097B1 (cs) | 1982-05-04 | 1982-05-04 | Živné prostředí pro buněčné a tkáňové kultury obsahující růstové proteiny krevního séra |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CS (1) | CS226097B1 (cs) |
-
1982
- 1982-05-04 CS CS318982A patent/CS226097B1/cs unknown
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Matsumoto et al. | Staurosporine, a protein kinase C inhibitor interferes with proliferation of arterial smooth muscle cells | |
| Temin et al. | The role of serum in the control of multiplication of avian and mammalian cells in culture | |
| Kilberg et al. | Characteristics of an amino acid transport system in rat liver for glutamine, asparagine, histidine, and closely related analogs. | |
| Arrenbrecht | Specific binding of growth hormone to thymocytes | |
| US4443546A (en) | Process and composition for propagating mammalian cells | |
| Trowell | The culture of lymph nodes in synthetic media | |
| US5780299A (en) | Method of altering blood sugar levels using non-transformed human pancreatic cells that have been expanded in culture | |
| Waymouth | Construction of tissue culture media | |
| Sepúlveda et al. | Characterization of neutral amino acid uptake by cultured epithelial cells from pig kidney | |
| Woodman et al. | Glutamic acid, other amino acids and related compounds as substrates for cerebral tissues: their effects on tissue phosphates | |
| Choi et al. | The effect of serum on monolayer cell culture of mammalian articular chondrocytes | |
| Messer et al. | Growth of dissociated rat cerebellar cells using serum-free supplemented media and varied transferrin concentrations | |
| CS226097B1 (cs) | Živné prostředí pro buněčné a tkáňové kultury obsahující růstové proteiny krevního séra | |
| US4554251A (en) | Process and medium for culturing ant venom gland cells | |
| Ishikawa et al. | Utilization and formation of amino acids by chicken epiphyseal chondrocytes: Comparative studies with cultured cells and native cartilage tissue | |
| Parkes et al. | Insulin-like growth factors (IGF I and IGF II) mimic the effect of insulin on plasma protein synthesis and glycogen deposition in cultured hepatocytes | |
| JP7644527B2 (ja) | ペプチド、細胞増殖促進剤、タンパク質産生促進剤、培地、該ペプチドを用いた細胞増殖方法、及び、該ペプチドを用いたタンパク質産生方法 | |
| JPH0120867B2 (cs) | ||
| Child et al. | Right horn implantation in the common duiker | |
| Bader et al. | Sodium concentrations affect metabolite uptake and cellular metabolism | |
| US4229541A (en) | In vitro cultivation of horseshoe crab amebocytes | |
| Crisp et al. | A system for culture of human trabecular bone and hormone response profiles of derived cells | |
| Winfield et al. | Postnatal development of the synaptic organisation of the lateral geniculate nucleus in the kitten with unilateral eyelid closure | |
| EP2456871B1 (en) | Production of erythropoiesis stimulating protein using metal ions | |
| Myers et al. | Nutrient media for plant parasitic nematodes. V. Amino acid nutrition of Aphelenchoides rutgersi |