CS224511B1 - Způsob odstranění desoxyribonukleové kyseliny ze subvirové vakcřny proti viru herpes simplex - Google Patents
Způsob odstranění desoxyribonukleové kyseliny ze subvirové vakcřny proti viru herpes simplex Download PDFInfo
- Publication number
- CS224511B1 CS224511B1 CS895081A CS895081A CS224511B1 CS 224511 B1 CS224511 B1 CS 224511B1 CS 895081 A CS895081 A CS 895081A CS 895081 A CS895081 A CS 895081A CS 224511 B1 CS224511 B1 CS 224511B1
- Authority
- CS
- Czechoslovakia
- Prior art keywords
- herpes simplex
- subvirus
- dna
- vaccine against
- lectin
- Prior art date
Links
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 title claims description 17
- 102000053602 DNA Human genes 0.000 title claims description 14
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 title claims description 6
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 5
- 208000009889 Herpes Simplex Diseases 0.000 title description 2
- 241000700605 Viruses Species 0.000 title description 2
- 102000004856 Lectins Human genes 0.000 claims description 9
- 108090001090 Lectins Proteins 0.000 claims description 9
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims description 9
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims description 9
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims description 9
- 239000002523 lectin Substances 0.000 claims description 9
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 claims description 6
- 239000008351 acetate buffer Substances 0.000 claims description 4
- 239000011324 bead Substances 0.000 claims description 4
- 229920000936 Agarose Polymers 0.000 claims description 3
- 241000700584 Simplexvirus Species 0.000 claims description 3
- 239000000284 extract Substances 0.000 claims description 2
- 108010045649 agarase Proteins 0.000 claims 1
- ATDGTVJJHBUTRL-UHFFFAOYSA-N cyanogen bromide Chemical compound BrC#N ATDGTVJJHBUTRL-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N Formaldehyde Chemical compound O=C WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 8
- 102000003886 Glycoproteins Human genes 0.000 description 6
- 108090000288 Glycoproteins Proteins 0.000 description 6
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 6
- 241001529453 unidentified herpesvirus Species 0.000 description 5
- 102000016911 Deoxyribonucleases Human genes 0.000 description 4
- 108010053770 Deoxyribonucleases Proteins 0.000 description 4
- 238000005199 ultracentrifugation Methods 0.000 description 4
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 3
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 3
- 241000609499 Palicourea Species 0.000 description 2
- 108020005202 Viral DNA Proteins 0.000 description 2
- 238000001042 affinity chromatography Methods 0.000 description 2
- AIYUHDOJVYHVIT-UHFFFAOYSA-M caesium chloride Chemical compound [Cl-].[Cs+] AIYUHDOJVYHVIT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 2
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 2
- 239000013049 sediment Substances 0.000 description 2
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 1
- 210000003855 cell nucleus Anatomy 0.000 description 1
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 1
- 238000005265 energy consumption Methods 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 1
- 238000000464 low-speed centrifugation Methods 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 229920002113 octoxynol Polymers 0.000 description 1
- 238000012856 packing Methods 0.000 description 1
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 229940104230 thymidine Drugs 0.000 description 1
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 1
- 239000011534 wash buffer Substances 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
Landscapes
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
Description
Vynález se týká přípravy subvirové vakcíny proti viru herpes simplex. ŘeSí odstranění desoxyribonukleové kyseliny (DNK) z antigenních směsí připravených z buněk infikovaných virem, herpes simplex (HSV).
Vzhledem k tomu, že jak HSV, tak sama virová DNK jsou schopny vyvolávat nádorovou transformaci buněk, je nepřítomnost desoxyribonukleové kyseliny v preparátu jedním ze základních požadavků na subvirovou vakcínu proti viru herpes simplex. Pro odstraňování DNK z vyvíjených HSV subvirových vakcím se v cizině prozatím používá ultracentrifugace v gradientech CsCl nebo eacharózy v kombinaci s opracováním preparátů enzymem desoxyribonukleázou (DNázou) a formaldehydem (Cappel, 1976, Arch. Virol. 52, 29-35; Cappel a spol. 1978, Dev. Biol. Standard. 43, 381-385; Cappel a spol., 1980, Arch. Virol 65, 12-23; Conard a spol. 1980, Internát. Confer. Humen Herpesviruses, Atlanta, USA; Kitces a spol., 1977, Infect. Immun.
16, 955-960; Lehman a spol., 1980, Internát. Confer. Human Herpesviruses, Atlanta, USA; Salerno a spol., 1980, Internát. Confer. Human Herpesviruses, Atlanta, USA; Skinner a spol., Í978, Med. Microbiol. Imunol. 166, 119-132; Skinner a spol., 1980, Med. Microbiol. Immunol. 169, 39-51; Thomson a spol., 1980, Internát. Confer. Human Herpesviruses, Atlanta, USA).
Ultracentrifugace v hustotních gradientech je nevýhodná kvůli nutnosti dlouhodobé centrifugace a velkých ztrát v důsledku nehomogenity preparátů a inaktivece antigenů centrifúgačním médiem. Opracování DNázou u subvirových preparátů obsahujících větěí množství DNE v naěich pokusech nikdy nevedlo k úplnému odstranění frakce DNK nerozpustné v kyselinách.
Vzhledem k tomu, že pro přípravu vakcíny by bylo nutno používat DNázy čiStěné a tedy dražěl, vedlo by to k podstatnému zvýěení výrobních nákladů. Použití samotného formaldehydú bez désoxyribonukleázy je sporné, nebol kontrola likvidace biologické aktivity DNK pomocí formaldehydú je dlouhodobá a značně nestandardní.
Výše uvedené nedostatky jsou odstraněny užitím kombinace rychlostní centrifugace a afi nitní chromatografie. Při rychlostní ultracentrifugeci sedimentuje většina DŇK do peletu, zatímco antigén zůstává v supernatantu. DNK zbývající v supernatantu je z preparátu odstraněna při afinitní chromatografii na sloupci gelu tvořeného kuličkami GNBr-ektivovené agarozy s navázaným lektinem (velikost kuliěek 60 až 140/im, agarézová koncentrace 4%, koncentrace vázaného lektinu 2 až 8 mg/ml gelu). V několika pracích bylo využito vazebnosti glykoproteinovýeh antigenů HSV na lektin pro izolaci glykoproteinů (Lehman a spol., Salerno a spol., Thomson a spol., - 1980, Internát. Conf. Humen Herpesviruses, Atlanta, USA;
Zwernik a spol., 1981, Infect, Immun. 31, 267 až 275). Zjistili jsme, že za stejných podmínek DNK s lektinem ani s egerózou nereaguje a kolonou volně protéká.
Použití rychlostní centrifugace je výhodnější než ultracentrifugace v hustotních gradientech z důvodů Sašových a ekonomických (meněí opotřebování centrifug, nižší spotřeby energie, nižší ztráty antigenů). Vzhledem k tomu, že lektin vázaný ne agBrózu je používán při další izolaci protektivních antigenů (které jsou glykoproteinové povahy), lze odstranění DNK docílit pouhým důkladným proplachováním sloupce gelu s vázanými glykoproteiny acetátovým pufrem bez použití dalších chemikálií nebo procedur. Náplň kolony je možno mnohonásobně regenerovat.
Popis konkrétního provedení
Extrakty připravené z buněk infikovaných HSV jsou zbaveny buněčných jader nlzkoobrátko vou centrifUgací a pek centrifugovány při 60 až 150 000 x g při 0 až 10 °C 1 až 2 hod.
(s výhodou 1 hod. při 100 0.00 x g a 4 °C). Supernetanty se opatrně odeberou, přičemž se nad sedimentem nechává 1/12 objemu původního materiálu, aby se vyloučila možnost kontaminace supernatantu sedimentovanou DNK, Antigenni směs, která po tomto zpracování obsahuje 0,2 až 1 % DNK, se 1/2 až 5 hodin inkubuje při pokojové teplotě nebo při 0 až 10 °C s agarózou s vázaným lektinem (buň na koloně nebo Bádkovš).
Po skončení., inkubace se z gelu připraví kolona, která se při uvedených teplotách důkladně propláchne acetátovým pufrem pH 5,5 až 6,5 (s výhodou pH 6,0) obsahujícím 0,2 % Triton X 100. Objem vyplachovacího pufru závisí na množství DNK zbylé po ultrecentrifugaci. Běžně se‘používá 5 až 20 ml ecetátováho pufru na 0,1 ml gelu. Glykoproteinová směs, která je v další fázi uvolňována z lektinu pomocí α -metyl manosidu nebo jiného cukru, je prosta DNK. Účinnost procedury se monitoruje na paralelním vzorku, ve kterém byla DNK HSV označena ^H-thymidinem.
Uvedený postup je použitelný obecně pro přípravu jakékoliv subvirové vakcíny (připravované buň rozštípáním viru nebo infikovaných buněk), která má být proste virové DNK a u které jsou protektivní antigeny glykoproteinové povahy.
Claims (1)
- PŘEDMĚT VYNÁLEZUZpůsob odstraňování desoxyribonukleové kyseliny ze subvirové vakcíny proti viru herpes simplex vyznačený tím, že se antigenni extrakty 1 až 2 hodiny, s výhodou 1 hod. ultracentri fugují při 60 až 150 000 x g, s výhodou 100 000 x g a teplotě 0 °C až 10 °C e supernetanty zbavené centrifugací většiny DNK se inkubují s gelem tvořeným kuličkami CNBr-aktivované agarázy s navázaným lektinem při velikosti kuliček 60 až 140^um, agarózové koncentraci 4 % hm. a koncentraci vázaného lektinu 2 až 8 mg/ml gelu, přičemž se DNK z kolonky odstraní acetátovým pufrem pH 5,5 až 6,5.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CS895081A CS224511B1 (cs) | 1981-12-03 | 1981-12-03 | Způsob odstranění desoxyribonukleové kyseliny ze subvirové vakcřny proti viru herpes simplex |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CS895081A CS224511B1 (cs) | 1981-12-03 | 1981-12-03 | Způsob odstranění desoxyribonukleové kyseliny ze subvirové vakcřny proti viru herpes simplex |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CS224511B1 true CS224511B1 (cs) | 1984-01-16 |
Family
ID=5440771
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CS895081A CS224511B1 (cs) | 1981-12-03 | 1981-12-03 | Způsob odstranění desoxyribonukleové kyseliny ze subvirové vakcřny proti viru herpes simplex |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CS (1) | CS224511B1 (cs) |
-
1981
- 1981-12-03 CS CS895081A patent/CS224511B1/cs unknown
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Nagai et al. | Studies on the assembly of the envelope of Newcastle disease virus | |
| Siegel et al. | The isolation of defective tobacco mosaic virus strains | |
| Strauss Jr et al. | Identification of the membrane protein and" core" protein of Sindbis virus. | |
| Morgan et al. | A hemolysin associated with the mumps virus | |
| Pons | The inhibition of influenza virus RNA synthesis by actinomycin D and cycloheximide | |
| Bachmayer | Selective solubilization of hemagglutinin and neuraminidase from influenza viruses | |
| Burge et al. | Functional defects of temperature-sensitive mutants of Sindbis virus | |
| Radziwill et al. | The duck hepatitis B virus DNA polymerase is tightly associated with the viral core structure and unable to switch to an exogenous template | |
| Winocour | On the apparent homology between DNA from polyoma virus and normal mouse synthetic RNA | |
| Waterson et al. | The components of measles virus and their relation to rinderpest and distemper | |
| Planterose et al. | The purification of vaccinia virus from cell cultures | |
| Skehel et al. | Ribonucleic acid synthesis in chick embryo cells infected with fowl-plague virus | |
| Bader et al. | Characteristics of cores of avian leuko-sarcoma viruses | |
| Toneguzzo et al. | Characterization and translation of methylated and unmethylated vesicular stomatitis virus mRNA synthesized in vitro by ribonucleoprotein particles from vesicular stomatitis virus-infected L cells | |
| THOWENEL et al. | Evidence for polar reconstitution of TMV | |
| Jensik et al. | Polypeptides of mumps virus | |
| Norrby et al. | Separation of measles virus components by equilibrium centrifugation in CsCl gradients: II. Studies on the large and the small hemagglutinin | |
| Joss et al. | Ribonucleic acid and protein synthesis in chick embryo cells infected with fowl plague virus | |
| JP3082908B2 (ja) | リボ核酸の単離方法 | |
| US3975344A (en) | Interferon purification | |
| Schluederberg et al. | Comparative molecular weight estimates of measles and subacute sclerosing panencephalitis virus structural polypeptides by simultaneous electrophoresis in acrylamide gel slabs | |
| Nilsson-Tillgren | Studies on the biosynthesis of TMV: III. Isolation and characterization of the replicative form and the replicative intermediate RNA | |
| Anderson et al. | Effect of actinomycin D on measles virus growth and interferon production | |
| CS224511B1 (cs) | Způsob odstranění desoxyribonukleové kyseliny ze subvirové vakcřny proti viru herpes simplex | |
| Acheson et al. | Ribonuclease sensitivity of Semliki Forest virus nucleocapsids |