CS224403B1 - Concentrated haemolyzing and transforming solution for leucocyte determination on automatic counter and for photoelectric colorimetric determination of haemoglobinein form of cyanomethaemoglobine - Google Patents

Concentrated haemolyzing and transforming solution for leucocyte determination on automatic counter and for photoelectric colorimetric determination of haemoglobinein form of cyanomethaemoglobine Download PDF

Info

Publication number
CS224403B1
CS224403B1 CS606281A CS606281A CS224403B1 CS 224403 B1 CS224403 B1 CS 224403B1 CS 606281 A CS606281 A CS 606281A CS 606281 A CS606281 A CS 606281A CS 224403 B1 CS224403 B1 CS 224403B1
Authority
CS
Czechoslovakia
Prior art keywords
determination
concentrated
solution
haemoglobinein
cyanomethaemoglobine
Prior art date
Application number
CS606281A
Other languages
Czech (cs)
Inventor
Jarmila Moziskova
Maxmilian Rndr Csc Mozisek
Original Assignee
Jarmila Moziskova
Mozisek Maxmilian
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Jarmila Moziskova, Mozisek Maxmilian filed Critical Jarmila Moziskova
Priority to CS606281A priority Critical patent/CS224403B1/en
Publication of CS224403B1 publication Critical patent/CS224403B1/en

Links

Landscapes

  • Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)

Description

Vynález se týká koncentrovaného hemolyzačního a transformačního roztoku určeného pro stanovení leukocytů automatickými počítači a pro fotokolorimetrické měření hemoglobinu ve formě kyanmethemoglobinu v naředěném vzorku krve.The invention relates to a concentrated hemolysis and transformation solution intended for the determination of leukocytes by automatic computers and for the photocolourimetric measurement of hemoglobin in the form of cyanmethemoglobin in a diluted blood sample.

K detekci krevních částic a měření jejich objemů se u samočinných počítačů využívá impulsů, vznikajících změnou elektrické vodivosti sloupce krve zředěné isotonickým roztokem chloridu sodného a proudící kapilárou v okamžiku průchodu částice kalibrovaným otvorem. Odlišný a méně častý princip funkce vychází z fotoelektrické registrace světelných impulsů v důsledku odstínění nebo odrazu koherentního záření laseru na procházejících částicích zředěné krve. Metodický postup stanovení počtu krevních částic, včetně doporučení vhodných činidel, je předepsán výrobci samočinných počítačů.For detecting blood particles and measuring their volumes, self-counting pulses are generated by varying the electrical conductivity of the blood column diluted with isotonic sodium chloride solution and flowing through the capillary at the time the particle passes through the calibrated orifice. The different and less frequent principle of operation is based on photoelectric registration of light pulses due to shielding or reflection of coherent laser radiation on the passing particles of diluted blood. The method for determining the number of blood particles, including recommendations for suitable reagents, is prescribed by the computer manufacturer.

Obsah hemoglobinu se měří fotokolorimetricky nejlépe v tomtéž naředěném vzorku krve, po konverzi hemoglobinu na kyanmethemoglobin. Rozhodnutím International Committee of Standardization in Haematology byla kyanmethemoglobinová metoda doporučena pro stanovení hemoglobinu v medzinárodním měřítku.The hemoglobin content is measured photocolourimetrically preferably in the same diluted blood sample after conversion of hemoglobin to cyanmethemoglobin. By decision of the International Committee of Standardization in Haematology, the cyanmethemoglobin method was recommended for the determination of hemoglobin internationally.

Kyanmethemoglobin (hemiglobinkyanid) je stabilní charakteristicky zabarvená sloučenina, poskytující široké absorpční spektrum s vrcholem při vlnové délce 540 nm, která je vhodná pro fotokolorimetrii. Dlouhodobá stabilita extinkce připravených roztoků kyanmethemoglobinu umožňuje porovnání výsledků různých pracovišť a zhotovení normálů pro standardizaci.Cyanomethemoglobin (hemiglobin cyanide) is a stable, characteristically colored compound, providing a broad absorption spectrum with a peak at 540 nm, which is suitable for photo-colorimetry. Long-term stability of extinction of prepared cyanomethemoglobin solutions allows comparison of results of different workplaces and production of standards for standardization.

Stanovení erythrocytů a leukocytů s využitím samočinných počítačů a hemoglobinu fotokolorimetricky ve formě kyanmethemoglobinu ve zbylém objemu naředěného vzorku krve má vzhledem k vysoké efektivnosti přednost před ostatními postupy. Tato racionální metodika však vyžaduje hemolyzační a transformační roztok o vysoké účinnosti, dlouhodobé skladovatelnosti a stabilitě. Mezi hlavními požadavky je třeba uvést minimální dávkování činidla do vzorku krve předepsaného zředění, neměřitelnou absorpci činidla v oblasti vlnové délky 540 nm, nepřítomnost pevných suspendovaných částic větších než 2 nm, rychlou hemolýzu erythrocytů před měřením leukocytů samočinnými počítači a zachování původního objemu leukocytů. Roztok činidla musí dále zabezpečit transformaci na kyanmethemoglobin do dvou minut s rezervou pro případy zvýšeného obsahu hemoglobinu v krvi pacientů, zabránit koagulaci proteinů krevní plasmy a srážení lipidů, vyloučit agregaci stromat erythrocytů a vznik opalescence i po dlouhé době skladování fotokolorimetricky proměřených vzorků kyanmethemoglobinu.Determination of erythrocytes and leukocytes using automatic computers and hemoglobin photocolourimetrically in the form of cyanmethemoglobin in the remaining volume of the diluted blood sample has priority over other procedures due to its high efficiency. However, this rational methodology requires a haemolysis and transformation solution of high efficiency, long-term shelf-life and stability. Among the main requirements are the minimum dosing of the reagent in a blood sample of the prescribed dilution, non-measurable absorption of the reagent at 540 nm, the absence of solid suspended particles greater than 2 nm, rapid erythrocyte hemolysis prior to leukocyte self-counting. The reagent solution must also ensure transformation to cyanmethemoglobin within two minutes with a margin in case of increased hemoglobin content in the patient's blood, prevent coagulation of blood plasma proteins and lipid clotting, eliminate erythrocyte stromal aggregation and opalescence even after prolonged storage of cyanomethemoglobin photocolourimetrically measured samples.

Hemolyzační a transformační koncentrované roztoky pro uvedené účely jsou dodávány výrobci samočinných počítačů krevních částic. Jak bylo 1 zjištěno, dochází často skladováním komerčních , roztoků ke žloútnutí, které je zřejmě způsobeno t oxidací alkalických kyanidů na dikyan. Tyto změny i mají za následek pokles reaktivity a zvýšení extinkce v oblasti vlnové délky 540 nm, tedy v místě absorpčního maxima, příslušejícího kyanmethemoglobinu po přidání činidla, a tím systematickou odchylku naměřených hodnot. Za běžných teplot prostředí byla rovněž v řadě případů pozorována tvorba krystalů v nasyceném roztoku činidla s nepříznivými důsledky pro jeho funkci. Hemolyzačně-transformační koncentrované roztoky výrobců samočinných počítačů činí jejich využití závislým na zahraničních dodávkách a vysoká cena nepříznivě ovlivňuje ekonomiku provozu hematologických laboratoří.Hemolysed and transformed concentrated solutions for these purposes are supplied by manufacturers of automatic blood particle counters. As one found, it is often of commercial storage, solutions of yellowing, which is probably due to oxidation of the t alkali cyanide to cyanogen. These changes result in a decrease in reactivity and an increase in extinction at the wavelength of 540 nm, i.e. at the site of the absorption maximum associated with cyanomethemoglobin after addition of the reagent, and thus a systematic deviation of the measured values. At normal ambient temperatures, crystal formation in a saturated reagent solution has also been observed in many cases with adverse consequences for its function. Hemolysing-transformation concentrated solutions of automatic computer manufacturers make their use dependent on foreign supplies and high price adversely affects the economy of operation of hematology laboratories.

j Zmíněné nevýhody odstraňuje koncentrovaný hemolyzační a transformační roztok pro stanovení ’ leukocytů automatickými počítači a hemoglobinu , fotokolorimetricky ve formě kyanmethemoglobinu, jehož podstata spočívá podle vynálezu v tom, že v redestilované vodě obsahuje 5 až 80 g/1 hemolyzačních a současně oxidačních činidel ze skupiny ! alkyltrimethylamoniumhalogenidů, například do- * decyltrimethylamoniumbromid, tetradecyltrimethylamoniumbromid a/nebo hexadecyltrimethylamoniumbromid; 5 až 80 g/1 neionogenního tensidu jako solubilizátoru hemolyzačního činidla, proteinů a lipidů krevní plazmy, například oxyethylované nasycené alifatické alkoholy s počtem C od 10 do 20 a/nebo oxyethylované estery nasycených alifatických monokarboxylových kyselin s počtem C od 10 do 20; 0,6 až 10 g/1 alkalického kyanidu, přeměňujícího hemiglobin na hemiglobinkyanid.The aforementioned disadvantages are eliminated by a concentrated hemolysing and transformation solution for the determination of leukocytes by automatic computers and hemoglobin, photocolourimetrically in the form of cyanomethemoglobin, which is based on the invention in that it contains 5 to 80 g / l of hemolysing and oxidizing agents of the group. alkyltrimethylammonium halides, for example dodecyltrimethylammonium bromide, tetradecyltrimethylammonium bromide and / or hexadecyltrimethylammonium bromide; 5 to 80 g / l of a non-ionic surfactant as a solubilizer of hemolysing agent, blood plasma proteins and lipids, for example oxyethylated saturated aliphatic alcohols having a C number of from 10 to 20 and / or oxyethylated esters of saturated aliphatic monocarboxylic acids having a number of C of 10 to 20; 0.6-10 g / l of an alkaline cyanide converting hemiglobin to hemiglobin cyanide.

S výhodou může roztok podle vynálezu obsahovat 5 až 50 g/1 alifatického alkoholu, například izopropylalkoholu nebo izobutylalkoholu, jako odpěňovací přísadu. ,Advantageously, the solution according to the invention may contain 5 to 50 g / l of an aliphatic alcohol, for example isopropyl alcohol or isobutyl alcohol, as an antifoaming agent. ,

Mezi výhody navrhovaného řešení patří nepřítomnost měřitelného zbarvení roztoku v oblasti vlnové délky 540 nm i po dlouhodobém skladování, vysoká reaktivita, a tím rychlá oxidace hemoglobinu a přeměna na hemiglobinkyanid za 1 až 2 min., při dávkování 0,5 %, tj. 3 kapky na 10 ml vzorku krve ředěného pro samočinný počítač Coulter Counter DN nebo FN a s dostatečnou reservou pro zvýšený obsah hemoglobinu v krvi. Pro počítač Coulter Counter typu S je předepsáno jiné dávkování.The advantages of the proposed solution include the absence of measurable coloration of the solution in the wavelength of 540 nm even after long-term storage, high reactivity, and thus rapid oxidation of hemoglobin and conversion to hemiglobinkyanide in 1 to 2 minutes, at 0.5%, ie 3 drops per 10 ml blood sample diluted for Coulter Counter DN or FN and with sufficient reserve for increased hemoglobin in the blood. A different dosage is prescribed for the Coulter Counter Type S.

Další předností roztoku podle vynálezu je skutečnost, že jeho komponenty nezpůsobují oxidaci alkalického kyanidu na dikyan, a tím zbarvování do žlutá ani po dlouhé době.A further advantage of the solution according to the invention is that its components do not cause the oxidation of the alkali cyanide to dicyanide and hence the coloration to yellow even after a long time.

Tím je vyloučen pokles reaktivity a chybné čtení extinkcí ve fotokolorimetrickém stanovení hemoglobinu. Vzhledem k přítomnosti solubilizátoru nedochází ani dlouhodobým skladováním při různých teplotách prostředí ke vzniku zákalu vysrážením rozpuštěných substancí. Solubilizační přísada má rovněž antiflokulační účinek pro stromata erythrocytů.This eliminates the decrease in reactivity and misinterpretation of extinctions in the photocolourimetric hemoglobin assay. Due to the presence of the solubilizer, even a long-term storage at different ambient temperatures does not cause turbidity by precipitation of dissolved substances. The solubilizing agent also has an anti-flocculating effect for erythrocyte stroma.

Roztok podle předloženého popisu lze připravit za podstatně výhodnějších cenových relací než srovnatelné zahraniční výrobky. Tím se také dosáhne zlepšení provozní ekonomiky hematologických pracovišť vybavených samočinnými počítači.The solution of the present disclosure can be prepared at substantially more advantageous prices than comparable foreign products. This will also improve the operational economy of hematology workplaces equipped with automatic computers.

V průběhu vývoje a pro účely ověření funkce hemolyzačního a transformačního roztoku podle vynálezu v provozu hematologické laboratoře bylo ke stanovení počtu leukocytů využíváno počítačů Coulter Counter typů DN a FN; rozsáhlý soubor hódnot byl statisticky vyhodnocen a prokázány výhodné užitné vlastnosti roztoku podle vynálezu. Kinetika oxidace hemoglobinu a transformační reakce na hemiglobinkyanid byla studována spektrofotometricky přístrojem UNICAM SP.800 za různých koncentrací hemolyzačně-transformaění- , ho roztoku. Laboratorní stanovení hemoglobinu fotokolorimetricky ve formě kyanmethemoglobi- , nu bylo odzkoušeno s dobrými výsledky na fotokolorimetrech Linson Junior, Linson LK 540 a Hemoglobinometer Coulter. Bylo zjištěno, že v průběhu jednoročního skladování se užitné vlastnosti roztoku nemění, stárnutím se jeho funkce naopak stabilizuje.In the course of development and in order to verify the function of the haemolysis and transformation solution according to the invention in the hematology laboratory operation, Coulter Counter types DN and FN were used to determine the number of leukocytes; an extensive set of values has been statistically evaluated and the advantageous utility properties of the solution according to the invention have been demonstrated. The kinetics of hemoglobin oxidation and transformation reaction to hemiglobinkyanide were studied spectrophotometrically with UNICAM SP.800 instrument at various concentrations of hemolysis-transforming solution. Laboratory determination of hemoglobin photocolourimetrically in the form of cyanmethemoglobin has been tested with good results on Linson Junior, Linson LK 540 and Hemoglobinometer Coulter photocolorimeters. It was found that during one-year storage the utility properties of the solution do not change, but its function stabilizes by aging.

Příprava koncentrovaného hemolyzačního a transformačního roztoku pro stanovení leukocytů automatickými počítači a pro stanovení hemoglobinu fotokolorimetricky ve formě kyanmethemoglobinu vysvítá z dále uvedených příkladů.The preparation of a concentrated hemolysis and transformation solution for the determination of leukocytes by automatic computers and for the determination of hemoglobin in the form of cyanmethemoglobin photocolourimetrically is explained in the examples below.

Příklad 1Example 1

Koncentrovaný hemolyzační a transformační roztok se připraví postupným rozpouštěním 30 g oxyethylovaného vyššího mastného alkoholu s obsahem 75 % ethylénoxidu, 30 g hexadecyltrimethylamoniumbromidu a 3 g kyanidu draselného v 800 ml redestilované vody o teplotě 35 až 40 °C za stálého míchání. Po ochlazení na teplotu asi 20 °C se roztok doplní na objem 1000 ml a přefiltruje membránovým filtrem hustoty 2 až 4 nm. Podle výsledků kontrolních měření se upraví jeho hodnota pH, osmolalita a opakuje filtrace. Koncentrovaný hemolyzačně-transformaění roztok se plní do zásobních kapacích lahviček z plastické hmoty a přechovává při teplotě místnosti. Osvětlení rozptýleným umělým či denním světlem není na závadu. Lahvičky je třeba po odměření potřebného objemu těsně uzavřít.A concentrated hemolysis and transformation solution is prepared by successively dissolving 30 g of oxyethylated higher fatty alcohol containing 75% ethylene oxide, 30 g of hexadecyltrimethylammonium bromide and 3 g of potassium cyanide in 800 ml of distilled water at 35-40 ° C with stirring. After cooling to about 20 DEG C., the solution is brought to a volume of 1000 ml and filtered through a membrane filter having a density of 2-4 nm. Its pH, osmolality and filtration are adjusted according to control results. The concentrated haemolysis-transformation solution is filled into a plastic dropper vial and stored at room temperature. Lighting by diffuse artificial or daylight is not a problem. The vials should be tightly closed after measuring the required volume.

Příklad 2Example 2

Koncentrovaný hemolyzační a transformační roztok se získá rozpouštěním 30 g oxyethylovaného vyššího mastného alkoholu s obsahem 75 % ethylénoxidu, 10 g dodecyltrímethylamoniumbromidu, 20 g hexadecyltrimethylamoniumbromidu a 3 g kyanidu draselného v redestilované vodě o teplotě 35 až 40 °C. Po ochlazení na teplotu 20 °C se objem roztoku doplní na 1000 ml a přefiltruje membránovým filtrem hustoty 2 až 4 nm. Po ověření vlastností, úpravě hodnoty pH, osmolalityThe concentrated haemolysis and transformation solution is obtained by dissolving 30 g of oxyethylated higher fatty alcohol containing 75% ethylene oxide, 10 g of dodecyltrimethylammonium bromide, 20 g of hexadecyltrimethylammonium bromide and 3 g of potassium cyanide in redistilled water at 35-40 ° C. After cooling to 20 [deg.] C., the volume of the solution is made up to 1000 ml and filtered through a membrane filter having a density of 2-4 nm. After checking the properties, adjusting the pH, osmolality

Claims (2)

PŘEDMĚTSUBJECT 1. Koncentrovaný hemolyzační a transformační roztok pro stanovení leukocytů automatickými počítači a hemoglobinu fotokolorimetricky ve formě kyanmethemoglobinu v naředěném vzorku krve, vyznačený tím, že v redestilované vodě obsahuje 5 až 80 g/1 hemolyzačních a současně oxidačních činidel ze skupiny alkyltrimethylamoniumhalogenidů, například dod^cyltrimethylamoniumbromid, tetradecyltrimethylamoniumbromid a/nebo hexadecyltrimethylamoniumbromid, 5 až 80 g/1 neionogenního tensidu jako solubilisátoru a opakované filtrací se plní do zásobních lahviček s dobře těsnícím uzávěrem.Concentrated hemolysis and transformation solution for the determination of leukocytes by automatic computers and hemoglobin photocolourimetrically in the form of cyanmethemoglobin in a diluted blood sample, characterized in that it contains 5 to 80 g / l of hemolysing and simultaneously oxidizing agents from the alkyltrimethylammonium halides group. , tetradecyltrimethylammonium bromide and / or hexadecyltrimethylammonium bromide, 5 to 80 g / l of a nonionic surfactant solubilizer, and are repeatedly filled into well-sealed vials. VYNÁLEZU hemolyzačního činidla, proteinů a/nebo lipidů krevní plasmy, například oxyethylované nasycené alifatické alkoholy o počtu C od 10 do 20, a/nebo oxyethylované estery nasycených alifatických monokarboxylových kyselin s počtem C od 10 do 20, 0,6 až 10 g/1 alkalického kyanidu.OF THE INVENTION hemolysing agent, blood plasma proteins and / or lipids, for example, oxyethylated saturated aliphatic alcohols having a C number from 10 to 20, and / or oxyethylated esters of saturated aliphatic monocarboxylic acids having a C number from 10 to 20, 0.6 to 10 g / l alkali cyanide. 2. Koncentrovaný hemolyzační a transformační roztok podle bodu 1, vyznačený tím, že jako přísadu potlačení vzniku vzduchových bublinek obsahuje 5 až 50 g/1 alifatického alkoholu, například izopropylalkoholu nebo izobutylalkoholu.2. Concentrated hemolysis and transformation solution according to claim 1, characterized in that it contains from 5 to 50 g / l of an aliphatic alcohol, for example isopropyl alcohol or isobutyl alcohol, as an air bubble suppressant.
CS606281A 1981-08-13 1981-08-13 Concentrated haemolyzing and transforming solution for leucocyte determination on automatic counter and for photoelectric colorimetric determination of haemoglobinein form of cyanomethaemoglobine CS224403B1 (en)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CS606281A CS224403B1 (en) 1981-08-13 1981-08-13 Concentrated haemolyzing and transforming solution for leucocyte determination on automatic counter and for photoelectric colorimetric determination of haemoglobinein form of cyanomethaemoglobine

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CS606281A CS224403B1 (en) 1981-08-13 1981-08-13 Concentrated haemolyzing and transforming solution for leucocyte determination on automatic counter and for photoelectric colorimetric determination of haemoglobinein form of cyanomethaemoglobine

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CS224403B1 true CS224403B1 (en) 1984-01-16

Family

ID=5406814

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CS606281A CS224403B1 (en) 1981-08-13 1981-08-13 Concentrated haemolyzing and transforming solution for leucocyte determination on automatic counter and for photoelectric colorimetric determination of haemoglobinein form of cyanomethaemoglobine

Country Status (1)

Country Link
CS (1) CS224403B1 (en)

Similar Documents

Publication Publication Date Title
USRE42143E1 (en) Consumable tube for use with a flow cytometry-based hematology system
US9891210B2 (en) Blood analyzer, blood analysis method and hemolytic agent
JP2863511B2 (en) Method and apparatus for automatic analysis
Wimer et al. Haematological changes associated with the McLeod phenotype of the Kell blood group system
EP0499693B1 (en) Method of differentiating erythroblasts from other cells by flow cytometry
EP0545313A1 (en) Reagent compositions and their use in shering cells
Riley et al. Reticulocyte analysis by flow cytometry and other techniques
EP2587262A2 (en) Detection method of activated neutrophils and apparatus therefor
SE518539C2 (en) Method and cuvette for quantitative hemoglobin determination in undiluted whole blood
JPH01199161A (en) Assay and identification of white corpuscle
US8802025B2 (en) Reagent kit for sample analysis and sample analysis method
US20040241769A1 (en) Multi-purpose reagent system and method for enumeration of red blood cells, white blood cells and thrombocytes and differential determination of white blood cells
Hall Clinical pathology of laboratory animals
JP2007518063A (en) Reference control for optical measurement of nucleated red blood cells in blood samples
JPH0511855B2 (en)
US3533749A (en) Method for the determination of total albumin
JPH10503285A (en) Quality control method for hematological instruments
Gamonet et al. How to quantify microparticles in RBCs? A validated flow cytometry method allows the detection of an increase in microparticles during storage
JPH10307135A (en) Method for detecting abnormal shape of erythrocyte
JP3759512B2 (en) Automated method for assaying body fluid samples such as cerebrospinal fluid and reagents therefor
SE445681B (en) REAGENT AND PROCEDURE FOR PHOTOMETRIC DETERMINATION OF BLOOD HEMOGLOBIN CONTENT
CS224403B1 (en) Concentrated haemolyzing and transforming solution for leucocyte determination on automatic counter and for photoelectric colorimetric determination of haemoglobinein form of cyanomethaemoglobine
JP2004513369A5 (en)
JP2004513369A (en) How to measure platelet activity
JP4873712B2 (en) How to use a reference control for the measurement of nucleated red blood cells