CS220409B1 - Method of separating l-tryptophan out of solution - Google Patents
Method of separating l-tryptophan out of solution Download PDFInfo
- Publication number
- CS220409B1 CS220409B1 CS73678A CS73678A CS220409B1 CS 220409 B1 CS220409 B1 CS 220409B1 CS 73678 A CS73678 A CS 73678A CS 73678 A CS73678 A CS 73678A CS 220409 B1 CS220409 B1 CS 220409B1
- Authority
- CS
- Czechoslovakia
- Prior art keywords
- tryptophan
- solution
- sorption
- elution
- eluate
- Prior art date
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
- C07D209/00—Heterocyclic compounds containing five-membered rings, condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom
- C07D209/02—Heterocyclic compounds containing five-membered rings, condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom condensed with one carbocyclic ring
- C07D209/04—Indoles; Hydrogenated indoles
- C07D209/10—Indoles; Hydrogenated indoles with substituted hydrocarbon radicals attached to carbon atoms of the hetero ring
- C07D209/18—Radicals substituted by carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals
- C07D209/20—Radicals substituted by carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals substituted additionally by nitrogen atoms, e.g. tryptophane
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Indole Compounds (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Description
(54) Způsob oddělování L-tryptofanu z roztoků(54) A method for separating L-tryptophan from solutions
L-tryptofan se z roztoku odděěí sorpcí na iontoměniče na lázi prystyřic, s následujícími desorpcemi a krystalizací.The L-tryptophan is separated from the solution by sorption on ion exchange exchangers on a prystyme basis, followed by desorption and crystallization.
Způsob podle vynálezu spočívá v tom, že se L-tryptofan sorlbje na slabě bazický aniontoměnič a po desorpci z aniontoměniče se L-tryptofan ze získaného elbátb sorlbje na sblfokatinnooéám měnnči v H-formě s následující dej^<^zrp<^:í L-tryptofanu z kat.íť^no^mě^iče.The process according to the invention is characterized in that L-tryptophan is sorbed onto a weakly basic anion exchanger and, after desorption from the anion exchanger, L-tryptophan from the obtained sorbate elution is carried out on the H-form of the phosphate derivative as follows: Tryptophan from the catalyzer.
Desorpce L-tryptofanu z aniontoměniče se provádí odseknou vodou nebo vodným roztokem 0,1 až 0,5 N mineeální kyseliny při teplotě 10 až 25 °C a desorpce L-tryptofanb z kationioměničd se provádí 1,5 až 3,0%' rozookem amoolaku ve vodném roztoku ethanolu při tdplitě_40 až 70 °C. _____Desorption of L-tryptophan from the anion exchange is performed retort water or an aqueous solution of 0.1 to 0.5 N mineeální acid at 1 0 and 25 ° C and the desorption of L p -try tofanb kationioměničd is carried out from 1.5 to 3.0 % amoolac solution in aqueous ethanol at 40-70 ° C. _____
K?ystalizaid L-tryptofanu z arnooiak-alkoholových eluátů se provádí okyselením eluátů kyselinou octovou a současným ochlazením na teplotu 0 až 5 °C.The crystallization of L-tryptophan from the amino alcohol-eluates is carried out by acidifying the eluates with acetic acid and cooling to 0-5 ° C.
Způsobem podle vyrálezu se získá' L-tryptofan ve 70% výtěžcích, s obsahem základní látky 99 %.The process of the invention gave L-tryptophan in 70% yield, with a base content of 99%.
Vynález se týká způsobu oddělování L-tiyptoOrnu z rozotků. L-tryptofen je jednou z hlavních oninokyseein a hraje důležitou úlohu v procesech metabolismu lidí a zvířat.The present invention relates to a process for separating L-thiypto-rins from solutions. L-tryptofen is one of the major onino-cysteine and plays an important role in human and animal metabolism.
Nyní se L-tryptofan používá v meddcíně jako složka směsi pro pja^ennerální výživu, jakož i v potravnnásském průmslu a v zeměědlství k vyrovnání aminokyselinového složení potravin a krmiv. Potřeba L-tryptofanu k meedcinálním účelům jako součást potravin a krmiv každým rokem neustále roste.Now, L-tryptophan is used in meddcin as a component of a mixture for peanut nutrition, as well as in the food industry and in agriculture to balance the amino acid composition of food and feed. The need for L-tryptophan for meedcinous purposes as part of food and feed is steadily increasing every year.
Převážná větSina známých způsobů oddělování L-tryptofanu z fermentačního prostředí a bílkovnnných hydrol^át.ů spoěívá na sorpci шěinokystdioy bu3 áttivním uW-ím, nebo syntetidými iuotuiěsCδi, které maaí skupiny s vysokým disociačním stupněm (US patentové' spisy 2 700 672, 3 456 712, čs. autorské osvědčení č. 154 425). *The vast majority of the known methods of separating the L-tryptophan from the fermentation broth Bílkov nných hydrolyzate n ^ á át.ů spoěív sorption шěino to YST d ioy b u3 áttivním UW IM or syntetidými iuotuiěsCδi which maai group with a high dissociation degree (U.S. Patent No. 2 700 672, 3 456 712, Czechoslovakian author's certificate No. 154 425). *
K hlavním nevýhodám způsobu oddělování L-tryptofanu pomoci aktivního uilí náleží nízká seeeettvita jmenovaného sorpčního prostředku vůči tryptofanu a nemoonost účinné desorpce tryptofanu z aktivního uhí, jakož i vážné obtíže spojené s provozem a regenerací jmenovaného sorpčníh^o prostředku.The main disadvantages of the method of separating L-tryptophan by active agent include the low segregation of said sorption agent to tryptophan and the lack of effective desorption of tryptophan from activated charcoal, as well as serious difficulties associated with the operation and regeneration of said sorption agent.
Z^láSt podstatnými nevýhodami způsobu oddělování L-tryptofanu pomocí syntetických., silně bazických a silně kyselých iontoměničů jsou nízká tedeetivith jmenovaných sorpčních prostředků vůči tryptofanu pří jeho sorpci z roztoků obsahujících mlnex^iáXnX sooi, cizí шěinokyssdioy a barevné sloučeniny, nedostatečná desorpce tryptkfhou, způsobená blokováním sorbovaných mooekul ěoOekulhmi jCrých organických sloučenin, pracovně náročná regenerace iontoměničů použitých za jmenovaných sorpčních podmínek, ztráta sorpční sch^pnos! iontoměniče v důsledku ireversibilního přijímání organických příměsí.The major disadvantages of the method for separating L-tryptophan using synthetic, strongly basic and strongly acidic ion exchangers are the low tedithivith of the sorbents to tryptophan when it is sorbed from the solutions containing mlexoxin salts, foreign resins and colored compounds, insufficient desorption of the tryptophan. by blocking the sorbed moieties of some organic compounds, labor-intensive regeneration of ion exchangers used under the mentioned sorption conditions, loss of sorption capacity. ion exchangers due to irreversible uptake of organic impurities.
Uvedené nevýhody jsou v plné míře vlastní jednomu ' ' ze způsobů oddělování L-typtofacu za pouuití synCdtictýcU iontoměničů. Podle jmenovaného způsobu se oddělování ' tryptofEnu z roztoků obsa^uuící^ sm^ aminotys^io a z ferientaČnícu. roztok uskute^uje ^ovád^ím těchto silně bazickým hnionOoiSniδei nebo silně kyselým УatOonUoiěnieei a následiým působením na iuotuěSnič roztoky anorganických toU:í k odstranění ostatcích a^ii^c^^sseio z pryskySice, načež se pryskyřice' promývá vodou a L-tryp^^n se eluuje v případě УationUoiěoiČe vodným rozookem hmokihУu a v případě aniontoiSniče kyselinou chlurovodíУuvuu. Podstata posuzovaného způsobu spočívá v oddělování L-tryptofaou pouze od híinokysseio, které jej a to podstatně kmieujd io0nousi jmenovaného a jemu podobných způsobů k oddělování L-tryptofaou.These disadvantages are inherent in one of the methods of separating L-typtofac using synthetic ion exchangers. According to said process the separating 'tryptofEnu from solutions contained uuící ^ ^ sm ^ io ^ aminotys erientaČníc to f u. the solution carrying out these strongly basic propionic or strongly acidic solutions followed by treatment with an inorganic solution solution to remove the remains and resin from the resin, whereupon the resin is washed with water and L-tryp. The solution is eluted in the case of aqueous solution with water and, in the case of anionic agent, with hydrochloric acid. The essence of the method in question consists in separating L-tryptopoeia only from the amino acid, which substantially and inherently separates it from the aforementioned methods similar to L-tryptopoeia.
Je znám způsob oddělování L-tryptofanu, který spočívá na sorpci ^^t^j^s^p^o^i^E^ou slabě bazickým hniknUoiěniδem a následné desorpci vodou. Vodný eluát se odppaí, působí se na oěj barytovou vodou a filtuuje se.A method for separating L-tryptophan is known, which consists of the sorption of weakly basic alkali and subsequent desorption with water. The aqueous eluate was evaporated, treated with barite water and filtered.
Se získprým f^zlt^se popsaný technologický cyklus opakuje tím, že se pkuužje kolona se sterým s^pčním prostdsdkei. K odstranění baryových iontů se pouužje sulfuУhtiuotuvý m^r^č-č v H-formě. Z vodného roztoku se tryptofao extrahuje ^ι^^ΙεΙ^ holém, extrakt se odpí^í a potom se odáděl krystalický L-trsptufhO. Jmenovaný způsob oe velmi zdlouhavý a vícestupňový, což značně snižuje výtěžek krystalcktého produktu.The technological cycle described above is repeated with the aid of a sterile sterile column. Sulfuric acid in the H-form is used to remove barium ions. The aqueous solution was extracted with tryptophan, the extract was evaporated, and then crystalline L-trsptuff was removed. Said process is very lengthy and multistage, which greatly reduces the yield of the crystalline product.
Společnou nevýhodou vSdch známých způsobů oddělování L-tryptofacu je nutnost vícestupňového odpařování roztoků tryp^í^o, což je spojeno se značnými energetickými náklady. Dále vede delSÍ var k částečnému rozkladu, tryptofeou a ke vzniku příměsí.A common disadvantage of the known methods of separating L-tryptofac is the need for multi-stage evaporation of the tryptic solutions, which entails considerable energy costs. Further, longer boiling leads to partial decomposition, tryptophy and admixture.
Účelem vynálezu je odstranění jmenovaných nevýhod.The purpose of the invention is to overcome the aforementioned disadvantages.
Úkolem vynálezu je vyvinout ^ιηΐήηθοί vlastností sorpčního prostředku selektivního pro L-tryp^í^ a vlastností turpčníhu prostředku, vykahzjícíUu po L-tryptofaou větší kapsa^u, způsob, který by umo0noкal oddělování УrysthlCtkéUu L-tryptofaou za technických podmínek, bez odpařování, s vysokou čistotou a s vysokým výtěžkem.SUMMARY OF THE INVENTION It is an object of the present invention to provide an L-tryptic selective sorption agent and a turpentizing agent having a larger pocket after the L-tryptic process, a method which allows separation of the crystalline L-tryptic process under technical conditions without evaporation. high purity and high yield.
Nevýhody odstraňuje způsob oddělování L-tryptofanu z vodných roztoků sorpcí L-tryptofanu na pryskyřičných iontoměničích a jeho desorpcí a krystalizací podle vynálezu, jehož podstatou je, že se sorpce L-tryptofanu provádí ve dvou stupních, přičemž se v prvním stupni L-tryptofan sorbuje na slabě basickém měniči aniontů polykondenzačního typu a potom se L-tryptofan eluuje a ve druhém stupni se L-tryptofan ze získaného eluátu sorbuje na sulfokationtoměniči v H-formě.Disadvantages are eliminated by the method of separating L-tryptophan from aqueous solutions by sorption of L-tryptophan on resin ion exchangers and its desorption and crystallization according to the invention, which consists in that the sorption of L-tryptophan is carried out in two stages. the weakly basic anion exchanger of the polycondensation type, and then L-tryptophan is eluted and in the second step L-tryptophan is sorbed from the obtained eluate on the sulfocation exchanger in the H-form.
Provádění způsobu podle vynálezu umožňuje získávat krystalický L-tryptofan s obsahem základní látky 99 % 8 výtěžkem 50 až 70 %.The process according to the invention makes it possible to obtain crystalline L-tryptophan with a base content of 99% 8 in a yield of 50 to 70%.
Eluace L-tryptofanu ze slabě basického aniontoměniče polykondenzačního typu se účelně provádí tfodou zbavenou solí nebo vodným roztokem 0,1 až 0,5 N minerálních kyselin.The elution of L-tryptophan from the weakly basic anion exchanger of the polycondensation type is conveniently carried out with a salt-free or aqueous solution of 0.1 to 0.5 N mineral acids.
Použití tohoto elučního prostředku umožňuje desorbování L-tryptofanu prakticky beze zbytku, přičemž se získaný eluát přivádí do následných stupňů, aniž by jej bylo nutno nějak navíc zpracovávat.The use of this eluent makes it possible to desorb the L-tryptophan practically without any residue, and the eluate obtained is fed to subsequent stages without any further treatment.
Desorpce L-tryptofanu ze silně kyselého kationtoměniče se účelně provádí 1,5 až 3,0% roztokem amoniaku ve 30 až 50% vodném roztoku ethanolu při teplotě 50 až 70 °C. Získají se amoniak-alkoholové eluáty, které obsahují L-tryptofan.The desorption of L-tryptophan from the strongly acidic cation exchanger is conveniently carried out with a 1.5 to 3.0% ammonia solution in a 30 to 50% aqueous ethanol solution at a temperature of 50 to 70 ° C. Ammonia-alcohol eluates containing L-tryptophan are obtained.
Taková eluace umožňuje desorbovat L-tryptofan prakticky beze zbytku, zabránit jeho krystalizací v koloně se sorpčním prostředkem a současně dosáhnotu velmi vysoké koncentrace L-tryptofanu v eluátu.Such elution allows the desorption of L-tryptophan practically without residue, preventing its crystallization in the sorbent column and at the same time achieving a very high concentration of L-tryptophan in the eluate.
V případě desorpce L-tryptofanu roztokem amoniaku ve vodném roztoku ethanolu se krystalizace účelně provádí okyselením eluátu, obsahujícího L-tryptofan, kyselinou pctovou na hodnotu pH 3,5 až 4,5 za současného ochlazení na teplotu 0 až 5 °C.In the case of desorption of L-tryptophan with a solution of ammonia in an aqueous ethanol solution, the crystallization is conveniently carried out by acidifying the eluate containing L-tryptophan with acetic acid to a pH of 3.5 to 4.5 while cooling to 0 to 5 ° C.
Krystálizасе provedená tímto způsobem umožňuje získání čistého krystalického produktu, aniž by se muselo použít několikanásobného odpařování. Použití kyseliny octové vede к úplné krystalizací. Kyselinu octovou je dále možno z krystalického produktu snadno odstranit při sušení.The crystallization carried out in this way allows a pure crystalline product to be obtained without having to use multiple evaporations. The use of acetic acid leads to complete crystallization. Furthermore, acetic acid can be easily removed from the crystalline product upon drying.
Způsob podle vynálezu dovoluje oddělovat L-tryptofan z různorodých roztoků, mezi nimi, i z tak komplikovaně složených roztoků, jako je kapalina pro kultury, které vedle L-tryptofanu obsahují zpravidla jiné aminokyseliny, složky živných roztoků nespotřebované při biosyntéze (například cukry, růstové faktory, minerální sole) a zabarvené látky.The method according to the invention allows the separation of L-tryptophan from various solutions, among them, as well as from complicated solutions such as liquid for cultures, which usually contain other amino acids besides L-tryptophan, nutrient solution components not consumed in biosynthesis (e.g. sugars, growth factors, mineral salts) and colored substances.
Způsob oddělování L-tryptofanu podle vynálezu se provádí následovně.The process for separating L-tryptophan according to the invention is carried out as follows.
Kulturová kapalina obsahující L-tryptofan se vede kolonou se slabě bazickým aniontoměničem polykondenzačního typu na bázi m-fenylendiaminu a formaldehydu s přísadou fenolu nebo resorcinu.The L-tryptophan-containing culture liquid is passed through a column with a weakly basic polycondensation type anion exchanger based on m-phenylenediamine and formaldehyde with the addition of phenol or resorcinol.
L-tryptofan se na pryskyřici jmenovaného typu podle molekulárního mechanismu sorbuje následkem existence aromatického, a to indolového jádra ve své molekule, zatímco minerální sole, jiné aminokyseliny a neionogenní složky živného prostředí, které nemají aromatickou strukturu a neukazují tedy sklon к disperznímu vzájemnému působení, se sorpčním prostředkem nesorbují.L-tryptophan is adsorbed to a resin of the type indicated by the molecular mechanism due to the existence of an aromatic indole nucleus in its molecule, while mineral salts, other amino acids and non-ionic nutrients that do not have an aromatic structure and thus do not exhibit dispersive interactions they do not absorb by the sorption agent.
lýp zvoleného sorpčního prostředku umožňuje provádění sorpce L-tryptofanu z roztoků jak po oddělení biomasy, tak také bez předchozího oddělení mikrobních buněk a jiných suspendovaných částic. V posledním případě se mikrobní buňky a jiné suspendované částice pryskyřicí rovněž nesorbují. К zabránění zabahnění sorpčního prostředku a sedimentace mikrobních buněk v koloně vede se roztok do kolony ve směru zdola nahoru. Tímto postupem přivádění roztoku se zabrání shlukování pryskyřice a dynamika sorpce L-tryptofanu se zlepší.The lip of the selected sorbent allows sorption of L-tryptophan from the solutions both after biomass separation and without prior separation of microbial cells and other suspended particles. In the latter case, microbial cells and other suspended particles are also not adsorbed by the resin. In order to prevent the sorbent from becoming muddy and sedimenting the microbial cells in the column, the solution is fed into the column in a bottom-up direction. This solution delivery procedure prevents resin agglomeration and improves the sorption dynamics of L-tryptophan.
220409 4220409 4
Zkoušky sorpce L-tryptofanu na sorpčních prostředcích jmenovaného typu z modelových roztoků obsaahjících sacharozu, močovinu a anorganické sole ukázaly, že jmenované sloučeniny sorpci L-tryptofanu ovlivňují nepodetatně.L-tryptophan sorption tests on sorbents of the said type from model solutions containing sucrose, urea and inorganic salts have shown that said compounds affect the sorption of L-tryptophan negligibly.
L-tryptofan se jmenovaným typem sorpčního prostředku dobře sorbuje v širokém rozsahu hodnoty pH na rozddl od silně bazických a silné kyselých iontoměničů, což je jednou z výhod způsobu podle vynálezu. Pro sorpci L-tryptofanu je optimální rozsah hodnoty pH 7,0 až 1,0.L-tryptophan with said type of sorbent absorbs well over a wide pH range in contrast to strongly basic and strong acidic ion exchangers, which is one of the advantages of the process of the invention. For sorption of L-tryptophan, the optimum pH range is 7.0 to 1.0.
Sorpční prostředky uvedeného typu se mohou ve·stupni sorpce tryptofanu ' z kulturové kapaliny používat v různých iontových formách (hydrologové, chloridové, sulfátové formě). Lepší výsledky při sorpci L-tryptofanu se však získaaí na fdsfoleδnanové formě pryskyřice. K převedení pryskyřice na fosfolčδnanoldu formu se na pryskyřici musí půsooit roztokem moouзubtijuováného fosforečnanu alУaliУkéhd kovu nebo fosforečnanu amonného.Sorbents of this type may be used in various ionic forms (hydrologic, chloride, sulfate) in the tryptophan sorption step of the culture liquid. However, better results in the sorption of L-tryptophan are obtained on the phosphinolefin form of the resin. In order to convert the resin into the phospholonate form, the resin must be treated with a solution of a monosubstituted phosphate or a metal or ammonium phosphate.
Po ukončení sorpce se kolona se sorpčním prosteddkem promývá vodou. V případě výskytu L-tryptofanu v Huátu, vede se roztok· vystupuuící z kolony na druhou kolonu se stejým sorpčním prostředkem.After the sorption is complete, the column is washed with water with the sorbent. If L-tryptophan is present in the Huate, the solution exiting from the column is fed to a second column with the same sorbent.
Eluace L-tryptofanu z aniontoméniče jmenovaného typu se provádí odsolenou vodou nebo vodným roztokem 0,1 až 0,5 N minerální kyseliny chlorovodíkové, sírové, fosforečné H-^PO^. Při příoomnooti zbarvených příměsí se lepších výsledků dosáhne eluací vodou. V tomto případě se L-tiyptofan descr^je méně intenzívně, ale prakticky úplné, zatímco zbarvené příměsi pry silicí sorbované se vyi^vv^í mnohem méně než v případě vymývání kyselinami. Detrducl L-tryptofanu se může provádět jak při teplotě mís^oU, tak i při zvýšené teplotě. V · posledním případě vzrůstá deso^^í rychlost L-tryptofanu, vzrůstá však přloom ve větším stupni deso^ce zbarvených příměsí. V důsledku toho je provádění eluace optimální při t^eplotách 10 až 25 °C.The elution of L-tryptophan from the anion exchanger of the aforementioned type is carried out with desalinated water or an aqueous solution of 0.1 to 0.5 N of mineral hydrochloric acid, sulfuric acid, phosphoric acid. With admixtures colored, better results are obtained by elution with water. In this case, the L-thyptophan descr is less intensely but practically complete, while the colored impurities absorbed by the silica sorbed are much less developed than in the case of acid washes. The detrducl of L-tryptophan can be carried out at both room temperature and elevated temperature. In the latter case, the desiccation rate of L-tryptophan increases, but the breakthrough increases in a greater degree of the tens of colored admixtures. As a result, elution is optimal at temperatures of 10-25 ° C.
Proto se podle způsobu podle vynálezu ve stupni deso^ce vytvářej mírnější podmínky provádění procesu, což hraje důležitou roli v případě oddělováni L-tryptofanu vzhledem k jeho labilitě. 'Jím klesají ztráty L-tryptofanu v těchto a následnících stupních a zabraňuje se tím vzniku veddejších produktů L-tryptofanu.Therefore, according to the process of the invention, milder process conditions are created in the plate step, which plays an important role in the separation of L-tryptophan due to its lability. This reduces the losses of L-tryptophan in these and subsequent steps and prevents the formation of L-tryptophan by-products.
Eluát z aniontoměniče obsahuje L-tryptofan v končennraci až 3,0 g/1 a nepodstatné mnnossví zbarvených a jniých příměsí.The anion exchanger eluate contains L-tryptophan at a concentration of up to 3.0 g / L and insignificant amounts of colored and other impurities.
Aby se dosáhlo vysokokoncentrovaného roztoku L-tryptofanu, provádí se sorpce L-tryptofanu z eluátu na sulfokationooměnnči v H-formě za následné desorpce.In order to obtain a highly concentrated solution of L-tryptophan, sorption of L-tryptophan from the eluate is carried out on the sulfocation exchange in H-form followed by desorption.
Pi nepřítomnoo^ solných kationů so^ní sorpční prostředky uvedeného typu L-tryptofan · s vysokou účinností. Současně s koncentrováním dochází k dalšímu čištění L-tryptefanu, poněvadž část zbarvených příměsí prochází kolonou, aniž by byly so^ovány. Jako kationtoměnič pii.cházeeí v úvahu polřttřrnosulfokat0jn0ooéničn s různým stupněm zesstění. Nelepších výsledků se dosáhne v případě iontoměničů, které obsaahuí 4 až 8 hrnoonnotních procent zesilovacího prostředku. Pi sorpci L-tryptofanu na těchto Уationtooěnjčích jsou zajištěny optimální podmínky pro oddělování L-tryptofanu od zbarvených příměsí a příznivé kinetické podmínky pro sorpci L—trypto^enu.In the absence of salt cations, sorption agents of the above-mentioned type L-tryptophan are highly effective. Concurrently with concentration, further purification of L-tryptophan occurs as some of the colored impurities pass through the column without being salted. Suitable cation exchangers are semi-sulfosulfates having varying degrees of crosslinking. The best results are obtained with ion exchangers which contain 4 to 8 hours per cent of the crosslinker. Optimum conditions for separating L-tryptophan from colored admixtures and favorable kinetic conditions for sorption of L-tryptophan are ensured when L-tryptophan is adsorbed on these ions.
Ke zkrácení trvání procesu podle vynálezu se eluát z ajiontoměničn ihned přivádí do kolony s kat0on0ooénineo bez pouužtí oenináádží. Jo sebou přináší určitá omezení vzhledem k poměrům objemu kolony s katoonooměničem a r^aiosl! provádění roztoku touto kolonou. Vyšší sorpění m^o^r^0£^lt ka^o^cměm^ opuo0i aniun.tuoíějδi jmenovaného typu umooňuje pouužlvat pro kationooměnič kolonu o menším objemu než pro aniuntoíёnjč. V tomto případě se 'však ukazuje, ře rychlost eluace L-tryptofanu, která je pro aniont (měnič optimální, pro Уatiootuměnič je příliš vysoká. Ochranný účinek posledního klesá a tím klesá i účinnost provozu kationtoměniče. Při poměru sorpční schopnosti aniontoměniče к sorpční schopnosti kationtoměniče 1 : 10 je optimální poměr objemu kolony s pryskyřicemi 3 : I.In order to reduce the duration of the process according to the invention, the eluate from the anion exchange material is immediately fed to a catalyzed column without the use of a charge. This entails certain limitations with respect to the ratios of the column size with the cathodo-exchanger and the? making the solution through this column. The higher sorption of the catalyst of the type mentioned above allows the use of a column of smaller volume for the cation exchanger than for the catalyst. In this case, however, it appears that the elution rate of L-tryptophan, which is too high for the anion (the transducer is optimal, is too high for the ion exchanger. The protective effect of the latter decreases and thus the efficiency of the cation exchanger decreases). 1: 10 is the optimal volume ratio of resin column 3: I.
Pro zvýšení Čistoty konečného produktu se kationtóměnič v koloně promývá horkou vodou při teplotě 50 až 90 °C. Tímto opatřením se odstraní podstatná část zbarvených příměsí sorbovaných na kationtoměniči, zatímco L-tryptofan se prakticky nesorbuje.To increase the purity of the final product, the cation exchanger in the column is washed with hot water at a temperature of 50-90 ° C. By this measure a substantial part of the colored impurities sorbed on the cation exchanger is removed, while L-tryptophan is practically not absorbed.
Konvenční metodou eluce tryptofanu ze silně kyselého kationměniče je dosorpce vodným roztokem amoniaku při teplotě místnosti. Znám je též způsob, podle něhož se tryptofan desorbuje ze sulfokationtoměničů vodné-alkoholickým roztokem amoniaku při teplotě místnosti (čs. autorské osvědčení č. 154 425)· Avšak v popsie tohoto způsobu není uveden účel přítomnosti ethanolu v elučním roztoku. Z tohoto důvodu nejsou přednosti při použití vodně-alkoholického roztoku vůči čistě vodnému roztoku amoniaku zcela zřejmé.A conventional method of eluting tryptophan from a strongly acidic cation exchanger is by adsorption with an aqueous ammonia solution at room temperature. There is also a method in which tryptophan is desorbed from sulfocation exchangers with aqueous-alcoholic ammonia solution at room temperature (cf. No. 154,425). For this reason, the advantages of using an aqueous-alcoholic solution over a pure aqueous ammonia solution are not entirely clear.
Podstatný rozdíl mezi způsobem podle vynálezu a známými způsoby je v tom, že sulfokationtoměnič je relativně méně znečištěn tryptofanem, barvivý a jinými přimíšeninaml, protože byl v předcházejících stupních tryptofan důkladně čištěn.An essential difference between the process of the invention and the known methods is that the sulfocation exchanger is relatively less contaminated with tryptophan, dye, and other admixtures since it has been thoroughly purified in the preceding steps of tryptophan.
Desorpce tryptofanu bazickým roztokem může být současně provázena krystalizací tryptofanu přímo v odebíraných frakcích. U známých způsobů však přítomnost zpravidla značného množství příměsí na sulfokationtoměniči silně omezuje účinnost bazické eluce, a to zne* možňuje krystalizací tryptofanu po jeho desorpci ze sorbentu.At the same time, desorption of tryptophan with a basic solution may be accompanied by crystallization of tryptophan directly in the collected fractions. In the known methods, however, the presence of a generally large amount of impurities on the sulfocation exchanger severely limits the efficiency of the basic elution, making it impossible to crystallize tryptophan after desorption from the sorbent.
nby se zabránilo krystalizací tryptofanu ve sloupci a současně aby se zajistila dostatečné krystalizace v odebíraných frakcích, elu^je se podle vynálezu tryptofan ze sulfokar* tiontoměniče vodně-alkoholickým roztokem amoniaku za zvýěené teploty, přičemž složení a teplota elučního roztoku jsou vzájemně upravené a podmíněné. Ethanol se do elučního roztoku přidává proto, aby byla umožněna dostatečná krystalizace tryptofanu v odebíraných frakcích, aniž se musí eluát odpařovat (z vodně-amoniakálního eluátu krystalizuje tryptofan po ochlazení roztoku buď špatně nebo vůbec ne). Aby se zabránilo krystalizací ve sloupci, provádí se eluce tryptofanu ze sulfokationtoměniče při zvýšené teplotě. Tím se též vysvětluje relativně malá koncnetrace amoniaku v elučním roztoku.In order to prevent crystallization of tryptophan in the column and at the same time to ensure sufficient crystallization in the collected fractions, according to the invention, tryptophan is eluted from the sulfocarboxylation exchanger with an aqueous-alcoholic ammonia solution at elevated temperature, the composition and temperature of the elution solution being interrelated and conditioned. Ethanol is added to the elution solution to allow sufficient crystallization of tryptophan in the collected fractions without the eluate having to evaporate (tryptophan crystallizes from the aqueous-ammoniacal eluate either poorly or not at all upon cooling). To avoid column crystallization, tryptophan is eluted from the sulfocation exchanger at elevated temperature. This also explains the relatively low concentration of ammonia in the elution solution.
Způsobem podle vynálezu se tedy eluce L-tryptofanu ze sulfokationtoměniče provádí 1,5 až 3% roztokem amoniaku v 30 až 50% vodném roztoku ethanolu při teplotě 50 až 70 °C. Vedle výše vyjmenovaných výhod má tato eluční varianta řadu dalších výhod proti známým způsobům. Dosáhne se totiž vyšší koncentrace L-tryptofanu v eluátu, zvýšenou teplotou stoupá rychlost desorpce a klesá přiměřeně objem eluátu obsahujícího L-tryptofan, doba elučního procesu a spotřeba reagencií pro eluci.Thus, according to the process of the invention, the elution of L-tryptophan from the sulfocation exchanger is carried out with a 1.5 to 3% ammonia solution in a 30 to 50% aqueous ethanol solution at a temperature of 50 to 70 ° C. In addition to the advantages mentioned above, this elution variant has a number of other advantages over the known methods. In fact, a higher concentration of L-tryptophan in the eluate is achieved, the desorption rate increases with increased temperature and the volume of the eluate containing L-tryptophan, the time of the elution process and the consumption of elution reagents decrease accordingly.
Eluát obsahující tryptofan se sbírá po frakcích. Ve frakcích s obsahem L-tryptofanu větším než 10 g/1 po ochlazení na teplotu 0 až 5 °C dochází zpravidla ke krystalizací L-tryptofanu. Dodatečná krystalizace nastává okyselením těchto frakcí ledovou kyselinou octovou na hodnotu pH 3,5 až 4,5. Po neutralizaci roztoku amoniaku kyselinou octovou vypadnou krystaly L-tryptofanu jakož i charakteristické krystaly, které obsahují L-tryptofan, kyselinu octovou a vodu (US patentový spis 27 79 684, 1957). Při sušení jmenovaných krystalů ve vakuu se kyselina octová a voda, jakož i příměsi octěnu amonného, odstraní sublimací a získá se krystalický L-tryptofan. Již v tomto stupni umožňuje způsob získat produkt s obsahem základní látky 99 % hmot, ve výtěžku 50 %.The tryptophan-containing eluate is collected in fractions. Fractions with an L-tryptophan content of more than 10 g / l upon cooling to 0-5 ° C generally crystallize L-tryptophan. The additional crystallization occurs by acidifying these fractions with glacial acetic acid to a pH of 3.5 to 4.5. After neutralization of the ammonia solution with acetic acid, the crystals of L-tryptophan, as well as the characteristic crystals containing L-tryptophan, acetic acid, and water, fall out (U.S. Pat. No. 2,779,684, 1957). When the crystals are dried under vacuum, acetic acid and water, as well as ammonium acetate, are removed by sublimation to give crystalline L-tryptophan. Already at this stage, the process makes it possible to obtain a product with a base content of 99% by weight, in a yield of 50%.
Tím se oddělí podstatná část krystalického L-tryptofanu bez předchozího odpařování amoniakálního eluátu, což výhodně působí na čistotu krystalického produktu. To je důležitou výhodou způsobu podle vynálezu a současně je navrhovaný způsob získání krystalického tryptofanu z bazického eluátu ve srovnání se známými způsoby zásadně nový.This separates a substantial portion of the crystalline L-tryptophan without prior evaporation of the ammoniacal eluate, which advantageously affects the purity of the crystalline product. This is an important advantage of the process according to the invention and at the same time the proposed process for obtaining crystalline tryptophan from the basic eluate is fundamentally new compared to the known processes.
Roztoky, které vedle L-tryptofanu obsahuj ·octan amonný (matečný louh a promývací voda), se vrací do stupně sorpce anionooméničem v nejblíže následujícím technologickém cyklu.· Frakce amniaaklního eluátu s obsahem L-tryptofanu menším než 10 g/1 se rovněž mohou vracet · do stupně sorpce, nebo se mohou zpracovat známým způsobem a tím se může získat krystalický prodat.Solutions containing ammonium acetate in addition to L-tryptophan (mother liquor and washing water) are returned to the anion exchange sorption step in the next technological cycle. · Amniacial eluate fractions containing less than 10 g / l of L-tryptophan may also be returned · To the degree of sorption, or they can be worked up in a known manner and thereby obtain a crystalline sell.
Krystaly L-tryptofanu získané tímto způsobem obsahtuí 90 až 95 % hmot, základní látky. Přioom stoupl celkový výtěžek produktu na 60 až 70 %.The L-tryptophan crystals obtained in this way contain 90 to 95% by weight of the base material. At the same time, the overall yield of the product increased to 60-70%.
V případě potřeby se může, krystalický produkt poddoObt dodatečnému čištění známými metodami, působením aktivního uh.í a překrystaOováním z vodně-ethanonickýcU roztoků.If desired, the crystalline product may be subjected to post-purification by known methods, treatment with activated carbon and recrystallization from aqueous-ethanolic solutions.
Při oddělování L-tryptofanu z kult ořové kapaliny umoOnuje způsob podle vynálezu ve spojení s dodatečným čištěním uvedenou metodou, získávat L-tryptofan s· hodnotami: obsah základní ldky nejméně 99 · · specifická oplti.ckré stáčení (+3°) až (+3D° (C = 1,.H^2°); vlhkost nejvýše 1 %· U^oo.; obsah popele (obsah sulfátového popele) nejvýše 0,1 % UnoO.; obsah příměsí: sulfáty nejvýše 0,01 % U^oO., cU-oridy nejvýše 0, 01 56 U^oO., železo nejvýše 0,001 % U^oO., těžké kovy (olovo) nejvýše 0,001 % hmot. Prodat neobsahuje žádné příměsi jiných aoinonyseein, není toxický ani pyrogenní.In the separation of L-tryptophan from cult ořové liquid umoOnuje method of the invention in combination with additional purification mentioned method, obtaining L-tryptophan · s values: the content of the plated KLA d ldky least 99 · specific oplti.ckré yaw (+ 3 °) to ( + 3D ° ( C = 1 , .H ^ 2 ° ); humidity not more than 1% · U ^ oo; ash content (kraft ash content) not more than 0.1% UnoO .; impurity content: sulphates not more than 0.01 % U2O3., CU-orides not more than 0.016 U2O., Iron not more than 0.001% U2O., Heavy metals (lead) not more than 0.001% by weight. Sell does not contain any admixtures of other aoinonyseein, is neither toxic nor pyrogenic.
Způsob podle vynálezu dělení L-tryptofanu má určité technické výhody, pro které je účelné jeho používání ve velkém technickém měřítku. Způsob je jednoduchý a technologicky na výši. Vyznačuje se vysokou účinností oddělování krystal^kého L-tryptofanu z pramenů různého druhu, včetně kulturovýcU CippIíí. Způsob um^O^r^u;je oddělování krystal^kého produktu bez odpařování. Způsob umoOnuje vícenásobné poožiií sorpčnícU prostředků bez podssat- * néUo zhoršení jejich vlastnost. Oddděování krystal^kého produktu způsobem podle vynálezu se provádí s vysokým výtěžkem (kolem 70 %, získaný produkt má vysokou čistotu a může obsahovat přes 99 % hm^O, základní látky.The process according to the invention for the separation of L-tryptophan has certain technical advantages for which its use on a large technical scale is expedient. The method is simple and technologically high. It is characterized by high efficiency in the separation of crystalline L-tryptophan from strands of various kinds, including culture crops. The process is to separate the crystalline product without evaporation. The method allows for multiple ingestion of the sorbent compositions without substantially impairing their properties. Separation of the crystalline product by the process of the invention is carried out in high yield (about 70%, the product obtained is of high purity and may contain over 99% by weight of the basic material.
K· lepšímu porozumění vynálezu se dále uvádět konkrétní příklady, které způsob podle vynálezu ilustrují.In order to better understand the invention, further examples are given to illustrate the process of the invention.
Příklad 1 litry roztoku, který obsahuje 16 g L-ttrypttflnU) 8,4 g L-iIiíííu, 5,6 g glycinu, 7,0 g L-valinu, 10·g lysiiliUltrUyírltž a 4 g kyseliny gluaiminové se přivádí do kolony se slabě bazickým makroporézním lniontoměniδem poly/kondenzačního typu na bázi m-fen^lendiaminu a formaH eUydu s přídavkem resorcinu (objem pryskyřice 0,45 1) ve · směru zdola nahoru, rychlostí 0,5 1/U. Po důkazu L-tryptofanu ve fittrátu (provedeno 1,85 1) se filtrát vede do druhé kolony se starým sorpčnim prnttřídkem (objem pryskyřice činí 0,1 1).EXAMPLE 1 liter of a solution containing 16 g rypttflnU Lt t), 8.4 g of L-IIIIIII, 5.6 g of glycine, 7.0 g L-valine and 10 g · lysiiliUltrUyírltž and 4 g gluaiminové is fed into the column with weakly basic macroporous poly / condensation-type m-phenolendiamine-based ion exchange resin and eudyd form with addition of resorcinol (0.45 L resin volume) in the upward direction at a rate of 0.5 L / U. After L-tryptophan was detected in the filtrate (made 1.85 L), the filtrate was fed to a second column with an old sorption class (resin volume 0.1 L).
Kolony se promyyí 0,85 1 vody (až do důkazu L-trypttfliu u východu z druhé kolony) a eluace obou kolon se provádí 0,2 N roztokem kysedny chlorovodíkové tím, že se roztok vede shora dolů rychlostí 0,35 1/U. Současně se eluát vede do kolony se sulfokationOoměničem polyttyéinovéUt typu v H-formě s obsahem íivinybeenzcnu 8 % (objem prystyřice 110 ο.) ve směru zdola nahoru, Po průtoku 7,0 1·roztoku se eluace kyselinou přeruší. Pak se siufokatiO^nOMiěnčeem vedou 2 li.tn^y vody při teplo.ě 50 °C. Eluace ^t-rypitofanu ze sul^kati^to měnde se provádí 256 roztokem lmonilku v 5°% vodném rozt.du eWanolu při teplot 63 °C> tím že se roztok vede shora dolů rychlostí 80 Ol^U. První frakce eluátu objemu 90 ml se vyhodí; na druhou frakci objemu 250 ml o konceenraci L-tryptofanu více než 70 g/1 se působí 20 ml ledové kyseliny · octové, až se dosáhne hodnoty pH 4,5 a 20 hodin se cUladí při teplotě 3 až 5 °C. Vypadlé krystaly se oOdfltrují, proimJi ochlazeným ethanolem a suší se při teplotě 40 °C.The columns were washed with 0.85 L of water (until L-tryptile was detected at the exit of the second column) and both columns were eluted with a 0.2 N hydrochloric acid solution by passing the solution from top to bottom at a rate of 0.35 L / U. At the same time, the eluate is fed to an H-form poly (ethylene-benzene) sulfocation exchanger column with an 8% vinylene-benzene content (110 µm volume) in the upward direction. Then siufokandtandThey are led by 2li.tn ^y vody at heat.50 Deň: 32 ° C. Elution of β-t-rypitophan from sulphate měnde sepeqanddí 256 solution of monocill in 5 °% aq63 °Cby conducting the solution from top to bottom at a rate of 80 µL. Discard the first 90 ml eluate fraction; a second 250 ml fraction having a L-tryptophan concentration of more than 70 g / l was treated with 20 ml of glacial acetic acid until a pH of 4.5 was reached and cooled at 3 to 5 ° C for 20 hours. The precipitated crystals are filtered, washed with cooled ethanol and dried at 40 ° C.
Získá se 11,9 g cUttmalooгrficky čistého krystal^kého L-tryptofanu s obsahem základní látky přes 99 % hmot.11.9 g of crystalline crystallo-crystalline L-tryptophan with a base content of over 99% by weight are obtained.
Příklad 2Example 2
Výchozí roztok obsahující L-tryptofan má složení, podobné složení uvedenému v příkladuThe starting solution containing L-tryptophan has a composition similar to that of the example
1. Odddlování L-tryptofanu se provádí analogicky příkladu 1 s výjimkou, že se při desorpci L-tryptofanu z aniontoměniče pouuije 0,42 N kyselina sírová, při desorpci z kationtoméniče 2,6% roztok amoniaku v 30% vodném roztoku ethanolu, eluace z katoonooměniče se provádí při topLot-é 66 °C ďkyselování letovou kyselinou octovou se provádí to hodnoty pH 3,7 a okyselený eluát se odladí na tepltou 2 °C.1. The separation of L-tryptophan is carried out analogously to Example 1 except that 0.42 N sulfuric acid is used for the desorption of L-tryptophan from the anion exchanger, 2.6% of ammonia in 30% aqueous ethanol for desorption from the cation exchanger, katoonooměniče topLot is carried out at-66 ° C é ďkyselování flight acetic acid, p rovádí the p H value of 3, 7 and the acidic eluate to tepltou algorithm as 2 ° C.
Získaný krystalický produkt obsahuje přes 99 % Umoo. L-tryptofanu. Výtěžek krystalCkkéUo produktu je 68 %.The crystalline product obtained contains over 99% Umoo. L-tryptophan. The yield of the crystalline product is 68%.
Příklad 3 * Jako výchozí maateiH pro oddělování L-tryptofanu slouží fermentační m^<d:i^um získané í kultivací kmene Bac. subtilis Wllgenetika 3 557 na živném mOéiu, které obsahuje cukr, kukuřičný extrakt, močoovnu, sole fosforečnanu draselného, síran Uořeěnatý, chlorid sodný. Koncenerhce L-tryptofsnu je 6,20 g/1. 1 Litr kulturo vé kapsa-iny se vede kolonou se slabě bazickým makriporeseím heiie0oměeičem polykoedeezhčeíUo typu na bázi o-feny^^! aminu a firmhldeUydu s přídavkem, resor^nu objemu 0,25 1 zdola nahoru, rychlostí 0,3 1/U. Potom se kolona proplácíme 0,5 Litru vody ve stenném směru a stejnou rychlostí. Po průtoku prvnícU 0,2 1'vody a průkazu L-tiyrptofanu ve stopové kinceeerhci ve vystupujícím roztoku se vystuppuící roztok přivádí do druUé kolony se ste^rým sorpčním pristnddkeo (objem pryskyřice 0,25 litru).EXAMPLE 3 The fermentation broth obtained by cultivation of the Bac strain is used as the starting material for the separation of L-tryptophan. subtilis Welgenetics 3,557 on nutrient medium containing sugar, corn extract, urea, potassium phosphate salts, magnesium sulfate, sodium chloride. The L-tryptophan concentration is 6.20 g / l. A liter of culture capsule was passed through a column with weakly basic macriporesis using an o-phenylene-based polycoeethersheeter. amine and solids with addition, 0.25 L bottom-up volume, at a rate of 0.3 L / U. Then pass the column through 0.5 liter of wall water at the same rate. After flowing through the first 0.2 L of water and detecting L-thiyrptophan in trace cincurrence in the effluent, the effluent was fed to a second column with a sterile sorption column (0.25 L resin volume).
Desorpce L-tryptifteb z první kolony se provádí 3,0 1 odsolené vody, která se přivádí . rycU-ostí 0,2 1/U ve směru sUora dolů. Eluát · L-tryptifhe se vede stejnou iycUlittí kolonou, která obsahuje 80 ml polyttyrtetblfokhtieniooěeičt v K-formě, zdola nahoru. potom se kolona propUk^e 0,5 1 vody při teplotě 70 °C, rycMosto 0,2 1^.The desorption of L-tryptifteb from the first column was carried out with 3.0 L of desalinated water to be supplied. speed of 0.2 1 / U in the down direction. The L-tryptic eluate was passed through the same cyclic column containing 80 ml of bottom-up polyttyrtetblfochtienio-oesters. p Otom the column erupts e ^ 0, 5 1 of water at 70 ° C rycMosto 0.2 l1.
Eluace L-tryptofenu ze suLfikhtieniooěeičt se provádí 0,5 liru 1,5% roztoku amooehku v 50% vodném roztoku ^^οΐα při teplotě 58 °C. Eluít se sUrimažďujt po frakcícU. První frakce o objemu 100 ml obsahuje tryptofan v 0,15 g/1. Tato frakce se vede do stupně deso^ce na slabě bazickém hniietooěneči v následujícím cyklu. DruUá frakce o objemu 70 ml obsahuje trypsin v kincenerhci 48 g/1. Tato frakce se okysel ledovou kyselinou octovou (5,0 Oi) na Uodnotu pH 4,10 a ochladí se na teplotu 5 °C. VypiadLé krystaly se odpromj ttUhnileo a suší se ve vakuu. Získá se 3,02 g cUrooaaoigaficCy čiť^^^U^o kiytthlCckéUi tгyptc>faeb s ibshUnm základní látky 99 % Umot. Výtěžek trypti>faeb v krystalCkééo produktu je 48,4 %.The elution of L-tryptophene from the sulfenylthioelectric acid was carried out with 0.5 l of a 1.5% ammonium solution in a 50% aqueous solution at 58 ° C. Elute to collect fractions. The first 100 ml fraction contained tryptophan at 0.15 g / l. This fraction was fed to a desolation step on a weakly basic rotting plate in a subsequent cycle. The second 70 ml fraction contains trypsin at a cure of 48 g / l. This fraction was acidified with glacial acetic acid (5.0 ° C) to a pH of 4.10 and cooled to 5 ° C. The swollen crystals were washed off and dried under vacuum. 3.02 g of crystals are obtained with a 99% solids content of the basic substance. Proceeds will try p> faeb in krystalCkééo product is 48.4%.
V matečném louUu je koncentrace L-tryptohaeb 5,2 g/1, objem matečném louUu je 65 ml a spolu s promývací vodou 80 ml. Tenno roztok se po idddttiliv1eí alkoUolu vede do stupně desorpce na sl^a^bě bazickém v násLeduJício cyklu.In the mother liquor, the concentration of L-tryptohaeb is 5.2 g / l, the volume of mother liquor is 65 ml and, together with the washing water, 80 ml. This solution is passed to the desorption step on a slightly basic basis in the following cycle after the alcohol has been removed.
’ Třetí frakce objemu 350 ml obsahuje L-tryptofan v 4,2 g/1. Tato frakce se ve vakuu odpaří na objem 18 ml a ochlad se na teplotu 5 °C. Vypadlé krystoly L-tryptofanu se to^diJ-trují, promj ttUanolem a suší se. Získá se 1,15 g L-tryptifaeb s obsaUem 95 % Umoi. základní látky. Celkový výtěžek L-tryptofanu v krystalčckém produktu je 66 %.The third 350 ml fraction contained L-tryptophan at 4.2 g / L. This fraction was evaporated in vacuo to a volume of 18 ml and cooled to 5 ° C. The precipitated crystals of L-tryptophan are filtered, washed with methanol and dried. 1.15 g of L-tryptifaeb is obtained with a content of 95% Umo. basic substances. The total yield of L-tryptophan in the crystalline product is 66%.
Příklad 4Example 4
Kulturová kapalina má složení analogické složení popsanému v příkladu 2. Objem kulturové ^pea-iny je 2,0 1, objem slabé bazickém aeiontcměϊnLČe 0,5 1. PK^t^iínky sorpce, poppípadě des^^pce na aniintimёneči jsou analogické příkladu 2, s tím rozd^em, že se priplácUnutí kolony po sorpci provádí 1,0 1 vody a eluace tryptiιfaeb ze sirpčníUi prostředku 0,6 1 odsolené vody. Eluát se vede do kolony se 70 ml sulfokationtoměniče v H-formě, který obsahuje 4 % diviryieenzenu, rychlostí 0,2 1/h zdola nehoru. Po ukončené sorpci se kolonou se sulfokattontomёnieem vede 0,5 1 vody při teplotě 75 °C zdola nahoru stejnou rychlosti. 1 Eluace L-tryptofaou se provádí 1,7% roz^kem amoniaku v 50% vodném roztoku ethanolu, při tepot.é 63 °C. První frakce o o^emu 70 ml obsahhjící ^-tryptoffin v koncern^ci 0,2 g/1 ' se vede do stupně sorpce na slabě bazickém anitntomёn0či v následujícím cyklu. Druhá frakce eluátu o objemu 90 ml, obsah^jcí L-tryptofao v koncenOraci 80,5 g/1 se okysslí 4 až 5,5 ml ledové kyseliny octové na hodnotu pH 4,15 a ochladí se na teplotu 5 °C.The culture liquid has a composition analogous to that described in Example 2. The volume of the culture fluid is 2.0 L, the volume of the weak basic aionic exchange 0.5 L. The sorption and / or desorption descents are analogous to Example 2. except that the column is packed after the sorption with 1.0 L of water and the elution of the tryptic stream from the sorbent composition with 0.6 L of desalinated water. The eluate is fed to a 70 ml H-form sulfocation exchanger column containing 4% divirieenzene at a rate of 0.2 L / h from below. After completion of the sorption column is sulfokatton omёni t e em resulting in 0.5 1 of soil P s at 75 ° C from the bottom up at the same rate. The elution with L-tryptophase was carried out with a 1.7% solution of ammonia in 50% aqueous ethanol, at a temperature of 63 ° C. The first fraction oo ^ emu 70 ml obsahhjící ^ -tryptoffin within Group C ^ 0, 2 g / 1 'is fed to the sorption stage on a weakly basic anitntomёn0či next cycle. A second fraction of 90 ml of eluate containing L-tryptophao at a concentration of 80.5 g / l was acidified with 4 to 5.5 ml of glacial acetic acid to pH 4.15 and cooled to 5 ° C.
VypedXé krystaly se zpracují analogicky příkladu 1. Získá se 6,50 g clro□atttgafiiCy čistého krystaicckého L-tryptofaou s obsahem základní látky 99 % hmot. Výtěžek L-tryptofanu v kryst^aliké^m produktu je 51,2 %· Matečný louh s koncern^cí L-tryptofaou 5,1 g/1 a ' promý“ vací voda se po oddeesilování alkoholu vedou do stupně sorpce na v následujícím cyklu.The resulting crystals were worked up analogously to Example 1. 6.50 g of pure crystalline L-tryptophase having a base content of 99% by weight were obtained. The yield of L-tryptophan in the crystalline product is 51.2%. The mother liquor with the L-tryptophan concentration of 5.1 g / l and the wash water after distillation of the alcohol are led to the sorption degree on the next cycle. .
Třetí frakce eluátu objemu 315 ml s ^ocern^cí L-tryptofaou 6,5 g/1 se odpař*! na objem 30 ml, po . ochlazení se tteiltrují vypadlé krystaly, prolijí se ethanolem a suěí se.A third fraction of the 315 ml eluate with a 6.5 g / l black L-tryptophase was evaporated. to a volume of 30 ml, po. the cooled crystals are filtered through precipitated crystals, washed with ethanol and dried.
Získá se 1,98 g Crysthlického L-tryptofaou s obsahem základní látky 96 % hmo^ Celkový výtěžek L-tryptofanu v CrystalCckém produktu je 67,2 %.1.98 g of Crysthlyl L-tryptophan with a base content of 96% w / w are obtained. The total yield of L-tryptophan in the Crystal product is 67.2%.
Krystaly L-tryptofaou s obsahem 96 % hrnco. základní látky se přelcrsttlují. K tomu se 2,25 g získaného produktu za zadívání rozpussí ve 25 ml 50% ethanolu. K roztoku se přidá 0,4 g aktivního uhlí, horký roztok se filtruje, filtrát se ochladí a vypadlé krystaly L-tryptofanu se odstru jí, pro^yí ethantlem a suěí se. Získá se 1,56 g chttmettt;raficky čistého krystal^kého L-tryptofaou s obsahem základní látky 99 % hmot. Po překrystalování je výtěžek 72 %.Crystals of L-tryptophaou containing 96% pot. the base substances are recrystallized. To this end, 2.25 g of the product obtained are dissolved in 25 ml of 50% ethanol under reflux. 0.4 g of activated charcoal is added to the solution, the hot solution is filtered, the filtrate is cooled and the precipitated L-tryptophan crystals are stripped, washed with ethanol and dried. 1.56 g of crystalline pure L-tryptophan with a base content of 99% by weight are obtained. The yield after recrystallization is 72%.
Claims (4)
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| SU772450067A SU749889A1 (en) | 1977-02-03 | 1977-02-03 | Method of isolating l-tryptophan |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CS220409B1 true CS220409B1 (en) | 1983-04-29 |
Family
ID=20694621
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CS73678A CS220409B1 (en) | 1977-02-03 | 1978-02-03 | Method of separating l-tryptophan out of solution |
Country Status (6)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS53111061A (en) |
| CS (1) | CS220409B1 (en) |
| FR (1) | FR2379512A1 (en) |
| HU (1) | HU180541B (en) |
| PT (1) | PT67542B (en) |
| SU (1) | SU749889A1 (en) |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH0623198B2 (en) * | 1985-04-26 | 1994-03-30 | 味の素株式会社 | Purification method of tryptophan |
Family Cites Families (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| BE480943A (en) * | 1947-03-04 | |||
| US2700672A (en) * | 1950-04-24 | 1955-01-25 | Food Chemical And Res Lab Inc | Method for the preparation or removal of tryptophane and other substances from theirsolutions |
| GB1145512A (en) * | 1965-09-21 | 1969-03-19 | Kyowa Hakko Kogyo Company Ltd | Method for isolating tryptophan |
-
1977
- 1977-02-03 SU SU772450067A patent/SU749889A1/en active
-
1978
- 1978-01-18 PT PT6754278A patent/PT67542B/en unknown
- 1978-01-20 JP JP511078A patent/JPS53111061A/en active Pending
- 1978-02-02 FR FR7802895A patent/FR2379512A1/en active Granted
- 1978-02-03 CS CS73678A patent/CS220409B1/en unknown
- 1978-02-03 HU HUVE000860 patent/HU180541B/en unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| FR2379512B1 (en) | 1980-04-11 |
| SU749889A1 (en) | 1980-07-23 |
| JPS53111061A (en) | 1978-09-28 |
| HU180541B (en) | 1983-03-28 |
| FR2379512A1 (en) | 1978-09-01 |
| PT67542B (en) | 1979-06-15 |
| PT67542A (en) | 1978-02-01 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| NO834765L (en) | PROCEDURE FOR PURIFICATION OF ANTRA-CYCLINON GLUCOSIDES BY ADSORPTION OF RESIN | |
| JPS60199390A (en) | Obtaining of citric acid | |
| JP2012500822A (en) | Method for extracting glucosinolate from broccoli seeds | |
| SK64496A3 (en) | A method of recovering a desired amino acid and method of recovering l-lysine from an aqueous solution | |
| CN113135581B (en) | Process for preparing magnesium potassium sulfate and potassium sulfate by extracting potassium from corn soaking liquid | |
| CN102557970B (en) | Preparation method of anhydrous betaine | |
| CA1228601A (en) | Purification of l-phenylalanine | |
| CS220409B1 (en) | Method of separating l-tryptophan out of solution | |
| CN107032983B (en) | Method for extracting and separating succinic acid from fermentation liquor by using macroporous adsorption resin | |
| CN106279197A (en) | The purification of isosorbide reaction solution and crystallization processes | |
| CN1125037C (en) | Process for producing glutamic acid | |
| CN108586475A (en) | A kind of tetraodotoxin method for extraction and purification | |
| DE2906034A1 (en) | METHOD FOR OBTAINING AMINO ACIDS FROM PROTEIN HYDROLYSATES | |
| RU2410435C1 (en) | Method of extracting l-lysine from culture fluid | |
| CN100509757C (en) | Purification method of *N-L-arginine | |
| CN111487342B (en) | Preparation and purification method of glucuronic acid-ractopamine | |
| JPS624399B2 (en) | ||
| CN104313071B (en) | The biological synthesis method of high-purity L alpha amino acids | |
| SU1305156A1 (en) | Method for isolating l-tryptophan | |
| Przybylska et al. | Identification of γ-methylglutamic acid in Lathyrus maritimus | |
| CN113511967B (en) | Method for extracting quinic acid from ginkgo leaf extract chromatographic wastewater | |
| JPS6337635B2 (en) | ||
| CN106674037B (en) | A method of separating L-phenylalanine from Abbas's sweet tea synthesis mother liquid | |
| US3118908A (en) | Process for extracting gibberellins from fermentation liquids | |
| JPH02169524A (en) | Recovery of organic acid |