CS215276B1 - Polypeptidy s vysokou jejich přípravy a specifickou antidiurétickou aktivitou a způsob - Google Patents

Polypeptidy s vysokou jejich přípravy a specifickou antidiurétickou aktivitou a způsob Download PDF

Info

Publication number
CS215276B1
CS215276B1 CS793736A CS373679A CS215276B1 CS 215276 B1 CS215276 B1 CS 215276B1 CS 793736 A CS793736 A CS 793736A CS 373679 A CS373679 A CS 373679A CS 215276 B1 CS215276 B1 CS 215276B1
Authority
CS
Czechoslovakia
Prior art keywords
amide
agp
gly
polypeptides
bzl
Prior art date
Application number
CS793736A
Other languages
English (en)
Inventor
Milan Zaoral
Frantisek Brtnik
Viktor Krchnak
Martin Flegel
Original Assignee
Milan Zaoral
Frantisek Brtnik
Viktor Krchnak
Martin Flegel
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Milan Zaoral, Frantisek Brtnik, Viktor Krchnak, Martin Flegel filed Critical Milan Zaoral
Priority to CS793736A priority Critical patent/CS215276B1/cs
Publication of CS215276B1 publication Critical patent/CS215276B1/cs

Links

Landscapes

  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)

Description

Vynález se týká polypéptidů s vysokou a specifickou antidiurétickou aktivitou a způsobu jejich přípravy.
Pro vasópresiny, hormony zadního laloku hypofýzy, je typická antidiuretická a presorická aktivita. Těchto účinků je využíváno v lékařské praxi, prvého při potřebě snížit vylučování moče, druhého při udržování krevního tlaku. Při substituční terapii diabetes insipidus a adjuvantní terapii enuresis nocturna a Bratterova syndromu je žádoucí pouze účinek antidiuretický, poměrně vysoká presorická aktivita vasopresinů má za následek jejich špatnou snášenlivost. Od objevení vasopresinů bylo vynaloženo značné úsilí na přípravu analogů s antidiurétickou aktivitou vysokou a současně, specifickou.
Podstatou tohoto vynálezu jsou tedý nové, dosud neznámé polypeptidy s vysokou a specifickou antidiurétickou aktivitou obecného-vzorce I:
Mpr-Tyr-Phe-Gln-Asn-cýs-Pro-X-Gly-NH2 I, kde X = L-Agp nebo D-Agp.
Těchto účinků bylo dosaženo tím, že v molekule ařginin-vasopresinu byl cystein v poloze 1 nahrazen kyselinou /?-merkapto-propionovou (Mpr) a arginin v poloze 8 kyselinou L- nebo D- a-amiηο-β -guanidopropionovo.u (Agp).
Vynález se, rovněž tyká způsobu přípravy těchto peptidů, jehož podstatou je, že se amid obecného vzorce II:
Mpr (Bzl)-Tyr-Phe-Gln-Asn-Cys (Bzl)-Pro-Y -Gly-NH2 II, kde Y = L-A2pr(Z) nebo D-A2pr(Z), nechá reagovat s 15—40 % roztokem bromovodíku v kyselině octové' a získaný volný amid se nechá reagovat s nitrátem l-guanyl-3,5-dimethylpyrazolu na guanidovaný peptiď, u něhož se benzylové chránící skupiny odštěpí působením alkalických kovů v kapalném amoniaku, načež produkt odštěpení se oxiduje roztokem ferrikyanidu draselného.
Vedle uvedeného způsobu přípravy těchto polypéptidů je možno je získat tím, že scazid β -benzylthiopropionyl-tyrosyífenylalanyl-glutaminyl-asparaginyl-S-benzylcysteinu kondenzuje s amidem obecného vzorce III:
H-Pro-X,-Gly7NH2 III, kde Xj je L-Agp (NO2) nebo Ď-Agp(NO2), na lineární peptid, ze kterého se odštěpí chránící skupiny působením kapalného fluorovodíku za přítomnosti anisolu.
Bylo zjištěno, že tato vasopresinová analoga /1 -kyselina /J-merkaptopr opionová, 8-kyselina a -amino-/? -guanidopropionová/vasopresin a ,/1-kyselina β-merkaptopropionová 8-D-a-amino-/?-guanidopropionová/vasoprešin mají vysoký a při tom specifický antidiuretický účinek, což je překvapivé zvláště u prvé z uvedených látek, v jejíž molekule jsou obsaženy pouze aminokyseliny konfigurace L. Druhá sloučenina je souměřitelná s /1 -kyselina- /J-merkaptopro215276 pionová, 8-D-arginin/vasopresinem (DDAVP), jak co do velikosti antidiuretického účinku, tak co do jeho specifičnosti. Obě analoga mají význam jako možná náhrada DDAVP v případech, kdy proti tomuto preparátu vznikne u pacientů rezistence a jako výchozí látky pro přípravu vasopresinových analogů.
K přípravě peptidů podle vynálezu bylo použito dvou metod, A a B. Metoda A spočívá v zavedení guanidinové skupiny do parciálně chráněného lineárního prekursoru, metoda B v přípravě chráněného lineárního prekursoru za použití kyseliny a -amino- β -nitroguanidopropionové.
Metoda A („guanidační“).
Známým způsobem se připravil amid /?-benzylthiopropionyl-tyrosyl-fenylalanyl-glutaminyl-asparaginyl-S-benzylcysteinyl-prolyl-N- j8-benzyloxykarbonyl- a; β -diaminopropionyl-glycinu Mpr (Bzl) -Tyr-Phe-Gln-Asn-Cys (Bzl) -Pro-A2pr(Z)-Gly-NH2. (Flegel M., kandidátská ' disertační práce: Vasopresinové a oxytocínové peptidy, str. 108, knihovna Ústavu organické chemie a biochemie ČSAV, rok 1972, Praha).
Benzyloxykarbonylový zbytek byl odštěpen reakcí s bromovodíkem v kyselině octové a získaný produkt Mpr (Bzl)-Tyr-Phe-Gln-Asn-Cys (Bzl)-Pró-A2pr-Gly-NH2 se guanidoval nitrátem l-guanyl-3,5-dimethylpyrazolu (Habeeb tem l-guanyl-3,5-dimethylpyrazolu [Habeeb A. F. S. A. Biochim. Biophys. Acta 34, (1959), 294]. Z amidu benzylthiopropionyl-tyrosyl-phenylalanyl-glutaminyl-asparaginyl-tS-benzylcysteinyl-prolyl-a -amino- β-guanidopropionylglycinu Mpr (Bzl) -Tyr-Phe-Gln-Asn-Cys (Bzl) Pro-Agp-Gly-NH2 se odštěpily benzylové — chránící skupiny sodíkem v kapalném amoniaku a získaný lineární peptid s volnými thiolovými skupinami Mpr-Tyr-Phe-Gln-Asn-Cys-Pro-AgpGly-NH2 se bez izolace cyklizoval oxidací ferikyanidem draselným, čímž sě získalo žádané t vasopresinové analogon Mpr-Tyr-Phe-Gln-Asn-Cys-Pro-Agp-Gly-NH2, které se čistí kontinuální beznosičovou elektroforézou, geloyou- filtrací na Sephadexu G-25 apod.
Metoda B.
Známým způsobem se připravil azid Mpr (Bzl) -Tyr-Phe-Gln-Asn-Cys (Bzl) -N 3 [Zaořal Mi, Kole J., Šorm F., Coll. Czechoslov. Chem. Commun. 32, (1967), 1250], který se kondenzoval s amidem prolyl-a-amino-^-nitroguanidopropionyl-glycinu [Brtník F., Zaoral M., Coll. Czechoslov. Chem. Commun; 41, (1976) 2965] na amid Mpr (Bzl)-Tyr-Phe-Gln-Asn-Cys (Bzl)Pro-Agp(NO2)-Gly-NH2. Z tohoto amidu se odštěpily chránící skupiny kapalným fluorovodíkem a získaný dithiol se oxidoval ba analog vzorce I, kde X = -L-Agp, který se čistí jak je uvedeno sub A.
Peptidové sloučeniny podle vynálezu, tj. 1-kyselina 0-merkaptopropionová, 8-kyselina a -amino--guanidopropionová/vasopresin a /1-kysélina a -merkapto-propionová, 8-kyselina D- a -amino- /1-guanidopropionová/vasopresin mohou být užity jako volné báze nebo ve formě soli s vhodnými kyselinami (např. kyselinou octovou, citrónovou, vinnou, chlorovodíkovou, boritou) i s přídavkem pomocných látek (např. stabilizačních a konzervačních přísad jako chloridem sodným, taninem nebo sladidel, aromatizujících látek, smáčedel apod. jako např. laktózou, maltózou, metanolem atd.) pro přípravu lékových forem vhodných pro parenterální, intranasální, intramuskulární a intravenosní použití při substituční terapii diabetes insipidus, adjuvantní terapii enuresis nocturna a Bratterova Syndromu.
Níže jsou popsány příklady zmíněných způsobů přípravy obou póly peptidů podle vynálezu.
Je užito zkratek a symbolů obvyklých v chemii peptidů, jež jsou ve shodě s mezinárodním chemickým názvoslovím. Jiné užité zkratky jsou: Mpr, kyselina β -merkaptopropionová A2pr kyselina a , β -diaminopropionová, Agp kyselina «-amino- β -guanidopropionová.
Příklad 1 ,
Amid β -benzylthiopropionyl-tyrosyl-fenylalanyl-glutaminyl-asparaginyl-S-benzylcysteinylprolyl- a -amino- β -guanidopropionyl-glycinu.
Amid β -benzylthiopropionyl-tyrosyl-feťíylalanyl-glutaminyl-asparaginyl-S-benzylcysteinylprolyl- β -benzyloxykarbonyl- a, β -diaminopropionyl-glycinu (1 g, 0,76 mmol) byl rozpuštěn, ve 2 ml kyseliny octové, k roztoku přility 2 ml 35 % bromovodíku v kyselině octové. Reakční směs byla udržována při 60 °C 15 min, odpařena za sníženého tlaku. Odparek byl protřen nasyceným roztokem NaHCO3. Výtěžek 0,5 gramu (56 %). Vysušený produkt (0,425 g, 0,36 mmol) byl rozpuštěn v 7 ml dimethylformamidu, k roztoku přidáno za míchání 0,55 g (2,7 mmol) nitrátu l-guanyl-3,5-dimethylpyrazolu. pH roztoku bylo nastaveno triethylaminem na 9 a reakční směs ponechána 4 dny při laboratorní teplotě. Po neutralizaci kys. octovou a odpaření rozpouštědla za sníženého tlaku bylo získáno 0,36 g (85 %) amidu (3-benzylthipropionyl-tyrosyl-fenylalanyl-glutaminyl-asparaginyl-S-benzylcysteinyl-prolýl- a -amino- (3-guanidopropionyl-glycinu o 1.1. 189 až 191 °C a [a]n až 35,8° (c 1, dimethylformamid).
Příprava /1-kyselina β-merkaptopropionová, 8-kyselina a -amino-β -guanidopropionová/ vasopresinu působením sodíku v kapalném amoniaku.
350 g amidu /J-benzylthiopropionyl-tyrosyl-fenylalanyl-glutaminyl-asparaginyl-S-benzylcysteinyl-prolyl- a -amino- β -guanidopropionylglycinu bylo rozpuštěno v 500 ml kapalného amoniaku. K roztoku byl přidáván sodík do vzniku modrého zbarvení, trvajícího 30 s. Roztok byl odbarven přídavkem ledové kyseliny octové a amoniak odpařen za sníženého tlaku. Odparek rozpuštěn v 500 ml 2,5 % kyseliny octové a roztok extrahován etherem prostým peroxidů, pH nastaveno hydroxidem amonným na pH 6,75 a oxidováno roztokem 0,01 M ferikyanidu draselného, pH reakční směsi nastaveno na 4 kyselinou octovou, roztok odsolen filtrací sloupcem Amber litu IRC 50 (25 ml) a promytím kolony 260 mi 0,25% kyseliny octové. Surový produkt byl vymyt ze sloupce kyselinou octovou a efluenty lyofilizovány. Lyofilizát byl čištěn kontinuální beznosičovou elektroforézou (3500 V, 180 mA). Roztok lyofilizátu byl čerpán do pracovního prostoru přístroje rychlostí 0,6 ml/h. Přítomnost čisté látky byla zjištěna spektrofotmetrickou kontrolou (275 mm) a papírovou elektroforézou.
Frakce obsahující čistou látku byly spojeny a lyofilizovány. Bylo získáno 30 mg lyofilizátu Wd20)^ (c θ,θ5 voda).
Příklad 2
Amid β -benzylthiopropionyl-tyrosyl-fenylalanyl-glutaminyl-asparaginyl-S-benzylcysteinyl-prolyl-D- a-amino-/?-guanidopropionyl-glycinu.
Stejným postupem jako předešlé bylo získáno z 1 g (0,76 mmol) amidu /?-benzylthiopropionyl-tyrosyl-fenylalanyl-glutaminyl-asparaginylS-benzylcysteinyl-prolyl-N-/? -benzyloxykarbonyl-D-α, /?-diaminopropionylglycinu 0,5 g amidu β -benzylthiopropionyl-ty rosyl-fenylalanylglutaminyl-asparaginyl-S-benzylcysteinyl-prolyl-a -amino-^-guanidopropionyl-glycinu o t. t. 191 —193°, [α]β-·26,8 0 (c 1, dimethylformamid).
Příprava (1-kyselina β -merkaptopropíonová, 8-D- a -amino-β -guanidopropionová) vasopresinu působením sodíku v kapalném amoniaku.
' Z 0,5 g (0,37 mmol) /?-benzylthiopropionyltyrosyl-fenylalanyl-glutaminyl-asparaginyl-Sbenzylčysteinyl-prolyl-D- a -amino- β -guanidopropionyl-glycinu bylo získáno jako v příkladu 1 34 mg čistého analogu s [α]ρ až 44 ° (c 0,05 voda).
Příklad 3
Amid β -benzylthiopropionyl-tyrosyl-fenylalanyl-glutaminyl-asparaginyl-S-benzylcysteinyl-prolyl- a -amino- β -nitroguanidopropionylglycinu.
1,43 g (1,5 mmol) hydrazidu /?-benzylthiopropionyl-tyrosyl-fenylalanyl-glutaminyl-asparaginyl-S-benzylcysteinu [Zaoral M., Kole J., Šorm F., Collect. Czechoslov. Chem. Commun. 32, (1967), 1250] bylo rozpuštěno v 15 ml dimethylformamidu a přidáno 0,8 ml 4N HC1 v dioxanu. Roztok byl ochlazen na —20 °, přidáno 0,175 g (1,5 mmol), amylnitritu v 1 ml dimethylformamidu. Po 20 min (průběh reakce kontrolován reakcí s Griessovým činidlem) byla reakční směs ochlazena na —40 °, neutralizována triethylaminem a přidán předchlazený (—10 °) roztok 0,753 g (2,25 mmol) hydrobromidu amidu prolyl- a -amino- β -nitroguanidopropionyl-glycinu v 5 ml dimethylformamidu s 0,32 ml triethylaminu. Reakční směs byla ponechána 3 dny při 0 0 a 3 h při pokojové teplotě, odpařena za vakua a destilační zbytek přelit 200 ml 1 % kyselinou chlorovodíkovou. Po 30 min stání při 3 ° byla vyloučená sraženina odfiltrována, promyta a 2X50 ml 5 % kyselého uhličitanu sodného a 50 ml teplé vody. Po vysušení nad kysličníkem fosforečným bylo získáno 2 g surového produktu, který byl krystalován z dimethylformamidu-vody a získáno 1,8 g oktapeptidu a t. t. 201 až 203 0 a [a]£,3 -38,1 (c 0,9 dimethylformamid).
Příprava (1-kyselina β -merkaptopropíonová, 8kyselina a -amino-β -guanidopropionová) vasopresinu působením kapalného fluorovodíku.
Ke 400 mg β-benzylthiopropionyl-tyrosyl-fenylalanyl-glutaminyl-asparaginyl-S-benzylcysteinyl-prolyl-«-amino-· β -nitroguariidopropionylglycinu bylo přidáno 20 ml bezvodého fluorovodíku a 0,4 ml anisolu a mícháno 30 min za laboratorní teploty. Fluorovodík byl odpařen za vakua vodní vývěvy a destilační zbytek evakuován olejovou vývěvou 2 h. Poté byl rozpuštěn v 500 ml 2,5 % ní kyselině octové, extrahován 5 X 50 ml éteru a pH upraveno roztokem amoniaku na 6,75. Oxidace a čištění bylo provedeno jak je popsáno v příkladě 1. Bylo získáno 27 mg čistého analogu s vlastnostmi identickými jak je uvedeno v příkladě 1.
Příklad 4 .
Amid β -benzylthíopropionyl-tyrosyl-fenylalanyl-glutaminyl-asparaginyl-S-benzylcysteinyl-prolyl-D- a -amino- β -nitroguanidopropionylglycinu.
Z 1,43 g (1,5 mmol) hydrazidu β -benzylthiopropionyl-tyrosyl-fenylalanyl-glutaminyl-asparaginyl-S-benzylcystein a 0,175 g (1,5 mmol) hydrobromidu amidu prolyl-D-a -amino-β-ηίtroguanidópropionyl-glycinu bylo získáno stejným způsobem jak je uvedeno v příkladu 3 1,7 g produktu o t. t. 200 až 204 a [a]o až 30,2 0 (c 1, dimethylformamid).
Příprava /1-kyselina β -merkaptopropíonová, 8-kyseIina D-α -arrtinó-/? -guanidopropionová/ vasopresiňu působením kapalného fluorovodíku.
Ze 180 mg amidu β -benzylthiopropionyl-tyrosyl-fenylalanyl-glutaminyl-asparaginyl-S-benzylcysteinyl-prolyl-D- a -amino- β -nitroguanidopropionyl-glycinu bylo stejným způsobem jako v příkladu 3 připraveno 18 mg čistého analogu s vlastnostmi stejnými, jak je popsáno v příkladě 2.

Claims (3)

1. Polypeptidy s vysokou a specifickou antidluretickou aktivitou obecného vzorce 1:
Mpr-Tyr-Phe-Gln-Asn-Cys-Prt-X-Gly-NH2 I kde X je L-Agp nebo D-Agp.
2. Způsob přípravy polypeptidů podle bodu 1, vyznačený tím, že se amid obecného vzorce II: Mpr(Bzl)-Tyr-Phe-Gln-Asn-Cys(Bzl)-Pro-Y- L Gly-NH2 II kde Y je L-A2pr(Z) nebo Ď-A2pr(Z), nechá reagovat s 15 až 40 %ním roztokem bromovodíku v kyselině octové, čímž dojde k odštěpení berižyloxykarbonylové skupiny a získaný Smolný amid se nechá reagovat s nitrátem 1-guányl-3,5-dimethylpyrazolu na guanídovaný peptid,
YNÁLEZU . u něhož se benzylové chránící skupiny odštěpí působením alkalických kovů v kapalném amoniaku, načež produkty odštěpení se oxidují vodným roztokem ferikyanidu draselného.
3. Způsob přípravy polypeptidů podle bodu 1, vyznačený tím, že se azid β-benzylthioprdpionyl-tyrosyl-fenylalanyl-glutaminyl-asparaginyl-Sbenzylcysteinu kondenzuje s amidem obecného vzorce III:
H-Pro-X,-Gly-NH2 III kde ΧΊ je L-Agp (NO2)r nebo D-Agp (NO2) na lineární peptid, ze kterého se odštěpí chránící s,kupiny'působením kapalného fluorovodíku za přítomnosti anisolu.
CS793736A 1979-05-31 1979-05-31 Polypeptidy s vysokou jejich přípravy a specifickou antidiurétickou aktivitou a způsob CS215276B1 (cs)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CS793736A CS215276B1 (cs) 1979-05-31 1979-05-31 Polypeptidy s vysokou jejich přípravy a specifickou antidiurétickou aktivitou a způsob

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CS793736A CS215276B1 (cs) 1979-05-31 1979-05-31 Polypeptidy s vysokou jejich přípravy a specifickou antidiurétickou aktivitou a způsob

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CS215276B1 true CS215276B1 (cs) 1982-08-27

Family

ID=5378308

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CS793736A CS215276B1 (cs) 1979-05-31 1979-05-31 Polypeptidy s vysokou jejich přípravy a specifickou antidiurétickou aktivitou a způsob

Country Status (1)

Country Link
CS (1) CS215276B1 (cs)

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US5596078A (en) Synthesis of cyclic peptides
Yousefi-Salakdeh et al. A method for S-and O-palmitoylation of peptides: synthesis of pulmonary surfactant protein-C models
HU196227B (en) Process for producing new cyclic vasopressin antagonist peptides and pharmaceutics comprising the same
JPS6218560B2 (cs)
CN111378028A (zh) 酰化glp-1化合物及其修饰基团的合成
HU189757B (en) Process for producing peptides of psichopharmaceutical activity
Cheng et al. Synthesis and biological activity of ketomethylene pseudopeptide analogs as thrombin inhibitors
EP0269220B1 (en) Derivatives of alpha-hanp and their production
JPH0377178B2 (cs)
JPS6317839B2 (cs)
AU2003236080B8 (en) A method for producing a modified peptide
US4604378A (en) Basic V1 -vasopressin antagonists
FI78119C (fi) Foerfarande foer framstaellning av maenskligt insulin eller b-30-estrar daerav.
EP0417217A1 (en) Peptides with sulphate ester groups
CS215276B1 (cs) Polypeptidy s vysokou jejich přípravy a specifickou antidiurétickou aktivitou a způsob
EP1196429B1 (en) Process for the deprotection of protected thiols
US3870694A (en) Peptide synthesis with n-hydroxy-5-norbornene-2,3-dicarboximide
EP0185320B1 (en) Partially modified, retro-inverso neurotensin analogs
US3873510A (en) Peptides of ACTH activity containing {60 -aminooxy carboxylic acid on the N-terminal moiety, and a process for the preparation thereof
US3862111A (en) Peptides of acth activity containing alpha-aminooxy carboxylic acids on both terminals and a process for the preparation thereof
US3247178A (en) Synthesis of peptides containing alpha, omega-diamino acids protected by phthalyl and t-butyloxycarbonyl groups
EP0094815A2 (en) Oligopeptide prodrugs
US4684621A (en) Methods of producing vasodilation or antioxytocic activity
Morley et al. Polypeptides. Part IX. Variations of the methionyl position in the C-terminal tetrapeptide amide sequence of the gastrins
EP0266170A2 (en) Peptide derivative and its production