CS210467B1 - Stabilní enzymový přípravek pro stanovení močoviny - Google Patents
Stabilní enzymový přípravek pro stanovení močoviny Download PDFInfo
- Publication number
- CS210467B1 CS210467B1 CS818579A CS818579A CS210467B1 CS 210467 B1 CS210467 B1 CS 210467B1 CS 818579 A CS818579 A CS 818579A CS 818579 A CS818579 A CS 818579A CS 210467 B1 CS210467 B1 CS 210467B1
- Authority
- CS
- Czechoslovakia
- Prior art keywords
- urea
- weight
- enzyme preparation
- urease
- enzyme
- Prior art date
Links
- XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N Urea Chemical compound NC(N)=O XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 title claims description 13
- 239000004202 carbamide Substances 0.000 title claims description 13
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 title claims description 11
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 title claims description 11
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title claims description 9
- 108010046334 Urease Proteins 0.000 claims description 15
- PXIPVTKHYLBLMZ-UHFFFAOYSA-N Sodium azide Chemical compound [Na+].[N-]=[N+]=[N-] PXIPVTKHYLBLMZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 claims description 5
- 230000003139 buffering effect Effects 0.000 claims description 5
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims description 5
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 claims description 5
- 239000011734 sodium Substances 0.000 claims description 5
- 229910052783 alkali metal Inorganic materials 0.000 claims description 4
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N Potassium Chemical compound [K] ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- MGFYIUFZLHCRTH-UHFFFAOYSA-N nitrilotriacetic acid Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CC(O)=O MGFYIUFZLHCRTH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 229910052700 potassium Inorganic materials 0.000 claims description 3
- 239000011591 potassium Substances 0.000 claims description 3
- -1 alkali metal azide Chemical class 0.000 claims description 2
- 229910000318 alkali metal phosphate Inorganic materials 0.000 claims description 2
- 150000001340 alkali metals Chemical class 0.000 claims description 2
- 239000008247 solid mixture Substances 0.000 description 8
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 7
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 5
- 238000006911 enzymatic reaction Methods 0.000 description 5
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 5
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N Ammonia Chemical compound N QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 4
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 3
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 3
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 3
- 229910001385 heavy metal Inorganic materials 0.000 description 3
- CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N Carbon dioxide Chemical compound O=C=O CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- QXNVGIXVLWOKEQ-UHFFFAOYSA-N Disodium Chemical class [Na][Na] QXNVGIXVLWOKEQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- ZGTMUACCHSMWAC-UHFFFAOYSA-L EDTA disodium salt (anhydrous) Chemical compound [Na+].[Na+].OC(=O)CN(CC([O-])=O)CCN(CC(O)=O)CC([O-])=O ZGTMUACCHSMWAC-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 2
- 229910021529 ammonia Inorganic materials 0.000 description 2
- 150000001540 azides Chemical class 0.000 description 2
- 150000002923 oximes Chemical class 0.000 description 2
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 2
- 238000009007 Diagnostic Kit Methods 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 239000012620 biological material Substances 0.000 description 1
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 1
- 229910002092 carbon dioxide Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001569 carbon dioxide Substances 0.000 description 1
- 239000007795 chemical reaction product Substances 0.000 description 1
- 238000011109 contamination Methods 0.000 description 1
- BNIILDVGGAEEIG-UHFFFAOYSA-L disodium hydrogen phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].OP([O-])([O-])=O BNIILDVGGAEEIG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 1
- 238000001952 enzyme assay Methods 0.000 description 1
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 1
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 1
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 1
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 1
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 1
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 238000000034 method Methods 0.000 description 1
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 1
- 230000022558 protein metabolic process Effects 0.000 description 1
- 239000002994 raw material Substances 0.000 description 1
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
Landscapes
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
Description
Předmětem vynálezu je stabilní enzymový přípravek pro stanovení močoviny.
Stanovení močoviny má značný analytický, ale zejména klinický význam, nebot močovina je nejdůležitějším konečným produktem metabolismu bílkovin.
V' klinické biochemii je stanovení močoviny v biologickém materiálu prováděno nejčastěji fotometricky, například reakcí s alfa-diketony a jejich oximy. V poslední době často enzymovou metodou, kdy je močovina specificky hydrolysována enzymem ureasou na kysličník uhličitý a amoniak, který se pak stanovuje vhodnou analytickou reakcí, například jako barevný indofenol. Enzymové stanovení močoviny je specifické a ná rozdíl od reakce močoviny s alfa-diketony nebo jejich oximy nevyžaduje zahřívání na vysokou teplotu. Vlastní enzymová reakce močoviny s ureasou probíhá s optimální efektivitou ve vodných roztocích o pH 6,0 až 8,5. Tyto roztoky musí být vhodným způsobem puf ro vány, aby bylo zaručeno optimální pH enzymové reakce i po přidání analysovaného vzorku, a aby byly vyloučeny i změny pH amoniakem resultujícím při hydrolyse močoviny.
Velkou nevýhodou dosud známých činidel obsahujících enzym ureasu je jejich nízká stabilita, neboť zejména ve vodných róz210467 tocích je ureasa rychle inhibována, a to již stopami těžkých kovů. Podobně jsou málo stabilní i činidla obsahující enzym ureasu v pevném stavu, jsou-li vystavena účinkům atmosférické vlhkosti.
Nežádoucí těžké kovy mohou být do reakční směsi vnášeny jako stopové nečistoty spolu s látkami užívanými jako pufry nebo v analysovaném materiálu.
K odstranění shora uvedených nedostatků směřuje stabilní enzymový přípravek podle vynálezu, jehož podstata spočívá v tom, že obsahuje 0,05 až 40 dílů hmotnostních ureasy o specifické aktivitě 1000 až 1500 000 U/g, 1 až 10 dílů hmotnostních pufrující složky, například 5,5’-diethylbarbituranu alkalického kovu, fosforečnanů alkalických kovů, například sodíku nebo draslíku, 1 až 20 dílů hmotnostních komplexanu, například ve formě volné kyseliny nitrilotrioctové, ethylendiamintetraoctové nebo její dvojsodné soli a popřípadě 90 až 99,9 procenta hmotnostních dílů vody. Přípravek dále obsahuje 3 až 120 dílů hmotnostních azidu alkalického kovu, například azidu sodného.
Stabilní enzymový přípravek podle vynálezu obsahuje současně enzym ureasu i pufr, který nastavuje nejen pH optimální pro enzymovou reakci, ale současně stabilizuje en210487 zym, jak v pevné směsi, tak i v roztoku.
Kombinací pufrující složky s komplexanem ve formě volné kyseliny s azidem sodným je dosaženo dokonalé stability přípravku nejen ve formě pevné směsi, ale i ve formě vodného roztoku pro přímé použití. Na rozdíl od dosud známých a průmyslově vyráběných forem ureasy v diagnostických soupravách, tj. suspensí s omezenou stabilitou nejvýše 6 měsíců za snížené teploty, obsahuje enzymový přípravek podle vynálezu enzym spolu s pufrem a stabilisujícími látkami a může být použit přímo pro enzymovou reakci, aniž je nutné dodatečně upravovat její reakční podmínky.
Enzymový přípravek 'může být užíván buď v pevném stavu a do reakce se dávkuje například ve formě tablety, nebo odměřením dávky prášku, nebo jako roztok. V obou případech se dávkuje do reakční směsi v takovém množství, aby reakční směs obsahovala vhodné množství enzymu ureasy, nejlépe 0,5 až 5 U. Za těchto podmínek má současně reakční směs pH optimální pro enzymovou reakci.
Jak bylo experimentálně ověřeno, je pevná směs přípravku podle vynálezu stabilní prakticky neomezeně, vodný roztok několik měsíců. Roztok tlumiče na bázi pufrující složky a komplexanu nebo i azidu eliminuje vliv těžkých kovů kombinovaných účinkem a současně v případě azidu eliminuje inhibici enzymu případnou bakteriální kontaminací. Výhodná je současně i pufrovací kapacita a z toho vyplývající nastavení optimálního pH. Činidlo podle vynálezu je možno připravit jednoduchým způsobem z levných a dostupných surovin.
Přikladl
Připraví se pevná směs, obsahující 50 U ureasy, 0,04 g 5,5’-diethylbarbituranu sodného, 0,03 g dvojsodné soli kyseliny ethylendiaminotetraoctové a 0,03 g azidu sodného. Pro vlastní stanovení močoviny se do reakční směsi dávkuje 0,01 g přípravku.
Příklad 2
Připraví se pevná směs 500 U ureasy, 2,8 gramu 5,5’-diethylbarbituranu draselného a 1 g ethylendiamintetraoctové kyseliny. Pro stanovení se dávkuje 0,006 g nebo se suchá směs rozpustí v 0,25 kg vody a pro stanovení dávkuje 0,5 ml.
Příklad 3
Připraví se pevná směs, obsahující 247500 U ureasy o specifické aktivitě minimálně 15 000 U/g, 50 g 5,5’-diethylbarbituranu sodného a 100 g dvojsodné soli ethylendiamintetraoctové kyseliny. Pro stanovení se dávkuje 0,0044 g směsi.
Příklad 4
Připraví se pevná směs, obsahující 1 g dvojsodné soli kyseliny ethylendiamintetraoctové, 0,1 g hydrofosforečnanu dvojsodného a 45 000 U ureasy. Pro vlastní stanovení se rozpustí směs ve 450 ml destilované vody a pro analysu se odměří 1,0 ml tohoto roztoku.
P ř í k 1 a d 5
Připraví se pevná směs ureasy (500 UJ, 2,8 g 5,5’-diethylbarbituranu sodného a 0,7 gramu kyseliny nitrilotrioctové. Pro stanovení se dávkuje 0,006 g této směsi.
Claims (2)
1 až 10 dílů hmotnostních pufrující složky, například 5,5’-diethylbarbituranu alkalického kovu, fosforečnanů alkalických kovů, například sodíku nebo draslíku, 1 až 20 dílů hmotnostních komplexanu, například ve vynalezu formě volné kyseliny nitrilotrioctové, ethylendiamintetraoctové nebo její dvojsodné soli a popřípadě 90 až 99,9 % hmotnostních vody.
1. Stabilní enzymový přípravek pro stanovení močoviny, vyznačený tím, že obsahuje 0,05 až 40 dílů hmotnostních ureasy o specifické aktivitě 1 000 až 1 500 000 U/g,
2. Stabilní enzymový přípravek pro stanovení močoviny podle bodu 1, vyznačený tím, že obsahuje 3 až 120 dílů hmotnostních azidu alkalického kovu, například azidu sodného.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CS818579A CS210467B1 (cs) | 1979-11-28 | 1979-11-28 | Stabilní enzymový přípravek pro stanovení močoviny |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CS818579A CS210467B1 (cs) | 1979-11-28 | 1979-11-28 | Stabilní enzymový přípravek pro stanovení močoviny |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CS210467B1 true CS210467B1 (cs) | 1982-01-29 |
Family
ID=5432079
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CS818579A CS210467B1 (cs) | 1979-11-28 | 1979-11-28 | Stabilní enzymový přípravek pro stanovení močoviny |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CS (1) | CS210467B1 (cs) |
-
1979
- 1979-11-28 CS CS818579A patent/CS210467B1/cs unknown
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Melchior Jr et al. | Ethoxyformylation of proteins. Reaction of ethoxyformic anhydride with. alpha.-chymotrypsin, pepsin, and pancreatic ribonuclease at pH 4 | |
| US3413198A (en) | Reagents and method for assaying biological samples | |
| Krebs | Quantitative determination of glutamine and glutamic acid | |
| EP0034213B1 (en) | A stabilized aqueous coenzyme solution for use in a clinical assay, a method of stabilizing a labile coenzyme in an aqueous clinical assay solution and a kit for use in said clinical assay | |
| Weil-Malherbe et al. | Ammonia formation in brain. 1. Studies on slices and suspensions | |
| US3997470A (en) | Surfactant containing reagent formulations for assaying biological specimens and methods of preparing same | |
| US3540984A (en) | Reagent material and method for creative kinase assay | |
| US3527674A (en) | Reagent material and method for urea assay | |
| Anderson et al. | [22] Carbamyl phosphate synthetase (Escherichia coli) | |
| Kirsch et al. | Evidence for conformational restrictions within the active site of acyl papains which influence the rates of hydrolysis | |
| Jakubowski | Synthesis of diadenosine 5', 5'''-P^ 1, P^ 4-tetraphosphate and related compounds by plant (Lupinus luteus) seryl-tRNA and phenylalanyl-tRNA synthetases | |
| US4189536A (en) | Reagent systems, enzymatic assays and compositions therefor | |
| US3950133A (en) | Reagent formulations for assaying biological specimens and methods of preparing and using same | |
| Williamson et al. | Effect of sulfhydryl group modification on the activities of 5-oxo-L-prolinase. | |
| US4339533A (en) | Stabilization of creatine kinase (CK) and its application as a reference standard | |
| CS210467B1 (cs) | Stabilní enzymový přípravek pro stanovení močoviny | |
| Pollak et al. | The transport and accumulation of adenine nucleotides during mitochondrial biogenesis | |
| Goldstein et al. | Increased activity of renal glutaminases in guinea pig following prolonged administration of acid or alkali. | |
| Greenberg et al. | Mechanism of djenkolic acid decomposition by cystathionase | |
| Hynie et al. | Determination of phosphodiesterase I activity in human blood serum | |
| US3527331A (en) | Reagent for assaying aldolase | |
| US3539453A (en) | Reagent and method for assaying lactate dehydrogenase | |
| Tower | [8] Enzymatic determination of glutamine and asparagine | |
| US3528888A (en) | Reagent and method for assaying alpha-hydroxybutyrate dehydrogenase | |
| US3546074A (en) | Reagent for assaying glutamate oxaloacetate transaminase |