CS209960B1 - Spósob separácie ( I)-L-tyroxínu zo zmesi po rádiojodácii Obor: nukleárna analytická chémia ňalšie obory využitia: nukleárna medicína, rádioimunoanalýza, biochémia - Google Patents

Description

3 209 96 125

Vynález 8a týká sposobu separácie ( I)-L-tyroxínu z reakčnej zmesi po značení toho-to hormónu 125-jódom. 125 ( I)-L-tyroxín má použitie v nukleárnej medicíně při stanovení poruchy štítnej žlá-zy pomocou etanovenia obsahu tyroxínu v sére rádioimunoanalyticky. Doposial sa pre jeho separáciu po rádiojodácii používala vačšinou papierová chromatografia, chromatografia na tenkej vrstvě a gélové filtrácia, respektive kombinácia týchto metod. Nevýhodou papierovejchromatografie bol dlhý čas elúcie a vymývanie produktov z papiera nebolo dostatočne kvan- titatívne. Pri použití gélovej filtrácie bud dochádza k nedostatečnému oddeleniu ( ~ I)-L- 1 o κ z z z tyroxínu od ( ‘"I)-L-3,5,3 -trijodtyronínu, alebo sa tieto hormony oddelia dobré, ale poseparácii je ( *" I)-L-tyroxín v poměrně velkých elučných objemoch, čo móže mať vplyv po jeho nariedení na priebeh vlastnej rádioimunoanalý^y. Často sa doporučuje kombinácia papierovej alebo tenkovrstvej chromatografie s dočištěním značeného hormónu gélovou chromatogra-fiou pomocou 0,1 M fosfátového tlmivého roztoku s pH=7,5 a zmesi metanol-konc.amoniak (99:1 obj. dielov), resp„ konc. etanolu. Táto kombinácia je nevýhodná, lebo sa skládá195 z dvoch krokov, pričom eluát ( “ I)-L-tyroxínu je potřebné zahustiv, alebo odpařiv podprúdom dusíka a opaV rozpustiv v 50 %-nom vodnom roztoku 1,2-propándiolu, ktorý sa pre značený tyroxín používá ako ochranné médium a v ktorom je pri 4 °C stály (^25I)-L-tyroxín až7 týždnov. pc

Uvedené nedostatky je možné odstróniV spósobom separácie ( I)-L-tyroxínu zo zmesipo rádiojodácii, ktorá obsahuje (^-5I)-L-tyroxín, (^25I)-L-3,5,3,-trijódtyronín a 125-jo-did, pomocou gélovej filtrácie na kolónke naplnenej gélom nepolárného charakteru typu po-lydextrénu s veTkosťou částice 25-100 ^um, podlá vynálezu, ktorého podstatou je to, žeelučnými zmesami sú 1,2-propándiol-dest.voda-konC.vodný roztok amoniaku (26 %), ktoré ob-sahujú v 100 obj. dieloch 25-35 obj. dielov 1,2-propándiolu, 64-74 obj. dielov dest. vody,1-5 obj, dielov konc. vodného roztoku amoniaku (26 %), alebo 90-98 obj. dielov 1,2-propán-diolu, 1-9 obj. dielov dest. vody, 1-5 obj. dielov konc. vodného roztoku amoniaku (26 %),respektive 1,2-propéndiol-konc.vodný roztok amoniaku (26 %), ktorý v 100 obj, dieloch ob-sahuje 95-99 obj. dielov 1,2-propándiolu a 1-5 obj. dielov konc. vodného roztoku amoniaku(26 %), s nasledujúcou úpravou koncentrácie eluátu, v ktorom je ( I)-L-tyroxín, pomocou dest, vody tak, aby koncentrácia 1,2-propándiolu bola 50 % objemových.

Spósobom separácie podlá vynálezu je možné získaV vysoko imunoreaktívny (125I)-L-ty-roxín, ktorý má tie výhody, že jednoduchou úpravou koncentrácie sa nachádza vo svojomochrannom médiu - v 50 %-nom vodnom roztoku 1,2-propándiolu, je v relativné malom objeme,maximálně 0,5 ml, čo má význam pri jeho použití pre rádioimunoanalýzu, nepoužívá sa kombi-nácia dvoch separačných metod, čo zvyšuje jeho výťažok a zjednodušuje sa manipulácia s rá-dioaktívnym materiálom. 4 209 960 P R í K L A D 1 Gél nepolárného charakteru typu polydextránu s veřkosťou častíce 25-100 /iim bol ekvi- librovaný 24 hodin vodou. V sklenenej kolónke priemeru 8 mm a výšky 250 mm bol připravený 80 mm štipec gélu, ktorý bol 1 hodinu premývaný 0,08 M barbitálovým tlmivým roztokom s pH· »8,6. Na kolonku bola nanesená reakčná zmes po rádiojodácii (asi 74 MBq), ktoré obsahovala125 z * 125 125-jodid, ( l)-L-3,5,3 -trijodtyronín a ( I)-L-tyroxín (ako hlavný produkt), pomocou mikropipety s polypropylénovou hadičkou dlhou 150 mm. K separácii sa použila zmes 1,2-pro-pándiol-dest.voda-konc.vodný roztok amoniaku (26 %) (30:69:1 obj. dielov), ktorou bol na-plněný celý štipec kolonky nad gélom. Čas separácie bol 400 minút a frakcie boli zberané po 10 minútach. Došlo k dobrému oddeleniu komponeht zmesi, z kolonky vytiekla najprv frak-1 °5 z z cia 125-jqdidu (1 ml), pdtom ( I)-L-3,5,3 -trijodtyronínu (2 ml) a nakoniec frakcia 1^5 ( * I)-L-tyroxínu (2,5 ml). Určitou nevýhodou je relativné vščší objem frakcie. P R 1 K L A 0 2 K separácii frakcie (l25I)-l~-tyroxínu sa použila elučná zmes 1,2-propándiolu s konc.vodným roztokom amoniaku (26 %) (99:1 obj. dielov). V tejto ale nedochádza k oddeleniu(l25I)-L-tyroxínu od (^25I)-L-3,5,3*- trijodtyronínu. Preto sa najprv postupovalo postupompodlá příkladu 1. Reakčná zmes sa eluovala roztokom 1,2-propándiol-dest.voda-konc.vodnýroztok amoniaku (26 %) (30:69:1 obj. dielov) až dovtedy, pokiaí sa z kolónky nevymyl 125--jodid a (l25I)-L-3,5,3'-trijódtyronín (200 minút). Z kolonky nad stlpcom sg potom odstrá-nila táto elučná zmes a přidala sa elučná zmes 1,2-propándiol-konc.vodný roztok amoniaku(99:1 obj. dielov). V tejto zmesi z kolonky vytéká (125I)-L-tyroxín a zberajú sa jednotli-vé frakcie po 10 minútach (objem 1 frakcie cca 0,03 ml). Po separácii sa frakcie zlejú,ichobjem je okolo 0,2 ml. Tento roztok aa prevedie do polypropylénové} nádobky, zistí sa objemelučnej zmesi vážením 0,23 ml) a koncentrácia 1,2-propándiolu sa upravila přidáním 0,23 mldest. vody na přibližné 50 obj. %. (l25I)-L-tyroxín, ktorý bol získaný týmto postupom, ob-sahoval menej ako 3 % (l25I)-L-3,5,3'-trijódtyronínu a menej ako 3 % 125-jodidu. Čas sepa-rácie bol 400 minút a produkt bol pqužitelný pre rádioimunoanalýzu. Pri 4 °C bol (^<"5X)-L-tyrixín v 50 %-nom vodnom roztoku 1,2-propándiolu stabilný 8 týždňov. PR1KLAD3

Postupuje sa ako v příklade 2. K elúcii 125-jodidu a (125I)-L-3/5/3'-trijódtyronínusa použila elučná zmes 1,2-propándiol-dest.voda-konc.vodný roztok amoniaku (26 %), ktorý obsahoval v 100 obj. dieloch 30 obj. dielov 1,2-propándiolu, 65 obj. dielov dest. vody 125 a 5 obj. dielov konc. amoniaku (26 %). Elučný roztok bol odstráneny a (I)-L-tyroxín sa eluoval roztokom 1,2-propándiol-voda-konc.vodný roztok amoniaku (26 %) (90:5:5 obj. dielov) ňalej bola koncentrácia eluátu upravená podobné ako v přiklade 2.

Claims (1)

1. 5 209960 PŘED MET VYNÁLEZU Spósob aeparácie (li5I)-L-tyroxín zo zmesi po rádiojodácii, ktorá obsahuje (125I)-L-tyroxín, (A °I)-L-3,5,,3z-trÍjódtyronín a 125-jodid, pomocou gélovej filtrácie na kolónkenaplnenej gélom nepolárného charakteru typu polydextránu a velkosťou částice 25-100 ^um,vyznačujúci sa, že elučnými zmesami sú 1,2-propándiol-dest. voda-konc.vodný roztok amonia-ku (26 %), ktorá obaahujú v 100 obj. dieloch 25-35 obj. dielov 1,2-propándiolu, 64-74 obj.dielov dest, vody, 1-5 obj. dielov konc. vodného roztoku amoniaku (26 %), alebo 90-98 obj.dielov 1,2-propándiolu, 1-9 obj. dielov dest. vody, 1-5 obj, dielov konc. vodného roztokuamoniaku (26 %), respektive zmesou 1,2-propándiol-konc.vodný roztok akomiaku (26 %), ktorýv 100 obj. dieloch obsahuje 95-99 obj. dielov 1,2-propándiolu a 1-5 obj. dielov konc. vod-ného roztoku amoniaku (26 %), a nasledujúcou úpravou koncentrácie eluátu, v ktorom je( “KI)-L-tyroxín, pomocou dest. vody tak, aby koncentrácia 1,2-propándiolu vo vodě bola30 obj. %,