CS209335B1 - Způsob dělení a stanovení poměru dihydro-alfa-ergokryptinu a dihydro-beta-ergokryptinu - Google Patents
Způsob dělení a stanovení poměru dihydro-alfa-ergokryptinu a dihydro-beta-ergokryptinu Download PDFInfo
- Publication number
- CS209335B1 CS209335B1 CS436479A CS436479A CS209335B1 CS 209335 B1 CS209335 B1 CS 209335B1 CS 436479 A CS436479 A CS 436479A CS 436479 A CS436479 A CS 436479A CS 209335 B1 CS209335 B1 CS 209335B1
- Authority
- CS
- Czechoslovakia
- Prior art keywords
- ergocryptine
- dihydro
- beta
- alpha
- ratio
- Prior art date
Links
Landscapes
- Investigating Or Analyzing Non-Biological Materials By The Use Of Chemical Means (AREA)
Abstract
Způsob dělení a stanovení poměru dihydřo-alfa-ergokryptinu a dihydro-beta-ergokryptinu. Vynález řeší dělení a stanovení poměru dihydro-alfa-rergokryptinu a dihydro-beta- -ergokryptinu ve směsi a dihydroergokrlatinem a dihydroergocorninem. Způsob stanovení je založen ha oddělení dihydro-alfa-ergokryptinu, dihydro-beta- -ergokryptinu, dihydroergooorninu a dihydroergokristinu ehromatograficky na tenké vrstvě silikagelu Polygram SIL-HHR s použitím dvojnásobného vyvíjení eluoní soustavou voda-diethylamin 100t4 a methanol-roztok o pH 9 50j40, detekci oddělených látek roztokem p-dimethylaminobenzaldehydu a vyhodnocení poměru intenzit skvrn denzitometricky
Description
(54) Způsob dělení a stanovení poměru dihydro-alfa-ergokryptinu a dihydro-beta-ergokryptinu
Způsob dělení a stanovení poměru dihydřo-alfa-ergokryptinu a dihydro-beta-ergokryptinu.
Vynález řeší dělení a stanovení poměru dihydro-alfa-rergo krypt inu a dihydro-beta-ergokryptinu ve směsi a dihydroergokrlatinem a dihydroergocorninem.
Způsob stanovení je založen ha oddělení dihydro-alfa-ergokryptinu, dihydro-beta-ergokryptinu, dihydroergooorninu a dihydroergokristinu ehromatograficky na tenké vrstvě silikagelu Polygram SIL-HHR s použitím dvojnásobného vyvíjení eluoní soustavou voda-diethylamin 100t4 a methanol-roztok o pH 9 50j40, detekci oddělených látek roztokem p-dimethylaminobenzaldehydu a vyhodnocení poměru intenzit skvrn denzitometricky.
2Ο9 335
Vynález se týká dělení a stanovenipoměru dihydro-alfa-ergokryptinu a dihydro-beta ergokryptinu ve směsi s dihydroergokristinem a dihydroergokorninem (v dihydroergotoxinu). Podle nejnovějších poznatků je z hlediska farmakológiokých účinků důležité přesné nastavení poměru nejep dihydroergokristinu/ dihydroergokorninu a dihydroergokryptinu, ale také přesné nastavení poměru dihydro-alfa-ergokryptinu a dihydro-beta-ergokryptinu. Velice důležitá je tedy vhodná metoda umožňující sledování tohoto poměru, jak při mezioperační provozní kontrole meziproduktů, tak při konečném nastavování žádaného poměru ve finálním výrobku.
Ke stanovení poměru dihydro-alfa-ergokryptinu a dihydro-beta-ergokryptinu se dosud používá pouze přístrojově náročná kapalinová ohromatografie. Jinými metodami se doposud dihydro-alfa-ergokryptin od dihydro-beta-ergokryptinu a dihydroergokristinu a dihydroergokorninu oddělit nepodařilo.
Nově byla vypracována jednoduchá metoda jejíž podstata spočívá v ‘rozdělení všech čtyř složek dihydroergotoxinu nově vyvinutou chromatografií ha tenké vrstvě silikagelu, s použitím nových elučníoh soustav, v detekci roztokem'p-diiauthylaminobenzaldehydu s konečným denzitometrickým vyhodnocením.
Jak je patrno je způsob stanovení podle vynálezu založen na ohromatografiekém oddělení všech čtyř složek dihydroergotoxinu chromatografií na tenké vrstvě silikagelu. Nutným předpokladem pro úspěšné rozdělení je použití chroraatografických desek,PÓLYGRAM S1L-NHR fy Macherey Nagel, NSR, nebaž na jiných vrstvách buí k dělení nedochází nebo se vrstvy rozlepí. Použitím eluční soustavy voda-diethylamin 100:4 bylo dosaženo výborného í‘ rozdílu Rj hodnot dihydro-alfa-ergokryptinu, dihydro-beta-ergokryptinu i dihydroergókorninu (Rj, = 0,125» 0,23; 0,31). Dihydřoergokristin má v této soustavě stejné R? jako dihydro -beta-ergokryptin. Použitím druhého vyvíjení soustavou methanol-roztok o pH 9 50:40 se dosáhne i oddělení dihydroergokristinu a tím oddělení všech čtyř ergotoxinovýoh alkaloidů. Oddělené alkaloidy tvoří kulaté skvrny dobře denzitometricky hodnotitelné. Doprovodné alkaloidy ostatních skupin či rozkladné produkty mají yyšší Rp a stanovení neruší. Mezi nevýhody patří doba chromatografického dělení, nebož dělení každou soustavou trvá cca 3 až 3 1/2 hodiny. Oddělení všech Čtyř alkaloidů s menším rozdílem R^ hodnot oproti dvojímu vyvíjení lze dosáhnou také s použitím jedné soustavy methanol-octan amonný 0,1 M roztok-diethylamin 20:20:1. Vzhledem k menším rozdílům Rp hodnot však nelze provést denzitometrické vyhodnocení, ale pouze semikvantitativní vizuální odhad.
Metoda tedy představuje především novou, jednoduchou metodu identifikace dihydroalfa-ergokryptinu· a dihydro-beta-ergokryptinu a zpřístupnění ověření totožnosti a semikvantitativního poměru dihydro-alfa-ergokryptinu a dihydro-beta-ergokryptinu všem průměrně vybaveným laboratořím. Denzitometrické vyhodnocení poměru lze provést s dostatečnou přesností až do poměru dihydro-alfa-ergokryptinu : dihydro-beta-ergokryptinu 20:1 či. 1:20.
Další podrobnosti vyplývající z následujících příkladů provedení :
Příklady provedení :
Příklad 1 s
Připraví se takový roztok zkoumané substance ve směsi chloroform-methanol 9 : 1 tak, aby podle předpokládaného množství dihydroergokryptinu bylo v 5 ,ul maximálně 2 ug každého dihydroergokryptinu. /Např.: pro dihydroergotoxin mésylát s poměrem alkaloidů 1:1:1 a s poměrem dihydroergokryptinů 2:1 to je <? 0,18 % roztok/. Na tenkou vrstvu silikagelu Polygram SIL NH-R /fy Macherey Nagel, NSR/ se potom nanese z tohoto roztoku na 3 starty,' ve vzdálenosti alespoň 2 cm, třikrát 5 ,ul. Vyvíjí se v naaycetíé komoře eluční soustavou voda-diethylamin 100 : 4 do vzdálenosti 10 - 12 Cm. Potom se deska odvětrá v proudu studeného vzduchu do oschnutí a vyvíjí se v nasycené komoře eluční soustavou methanol-rroztok o pH 9 /příprava : 1,24 g kyseliny bořité se rozpustí ve 100 ml 1 N NaOH a přidá se 1 N roztok HC1 do pH 9 /v poměru 50 : 40 do vzdálenosti o 2 cm větší než předchozí soustavou /12 - 14 cm/. Po skončeném vyvíjení se chromatogram vysuší v proudu teplého vzduchu do oschnutí a postříká'se detekčním činidlem /1 % roztok p-dimethylaminobenzaldehydu ve směsi methanol-konc. HC1 1 : 1/. Po postřiku se na desku přivádí’ihned teplý vzduch a případně se poetřik a vysoušení opakují do optimálního vybarvení skvrn. Hned po detekci se deska vystaví působení UV záření 366 + 254 nm po dobu 1 minuty /realizováno např. v přístroji Pluotest Universal fy Hanau, NSR/. Jednotlivé ergotoxinové alkaloidy mají tyto hodnoty Rj, ;
dihýdroergokřistin 0,31 dihydro-beta-ergokryptin 0,38 dihydro-alfa-ergokryptin 0,46 dihydroergokornin 0,58
Vyhodnocení chromatogramu se provede denzitometricky. Pro denzitometr ty OPTON platí tyto podmínky :
| vlnová délka | 580 mm |
| posun desky - | 50 mm/min |
| rychlost zapisovače | 30 cm/min |
| šířka štěrbiny | .0,02 mm |
| clona | 10 mm |
| zesílení | 17 |
Výpočet poměru dihydro-alfa-ergokryptinu a dihydro-beta-ergokryptinu se .provede z denzitometrického záznamu podle vztahu :
P alfa x = ---P beta kde ,: P alfa = průměrná hodnota plochy dihydro-alfa-ergokryptinu z denzitometrických záznamů ze tří stanovení *
P beta » průměrná hodnota plochy dihydro-beta-ergokryptinu z denzitometrického zámu ze tří stanovení.
.(
Příklad 2 :
Postupuje se jako v příkladě 1, jen s tím rozdílem, že se jakó vyvíjející soustava použije směs methanol-0,1 M roztok octanu amonného-diethylamin 20:20:1. Jednotlivé ergotoxinové alkaloidy mají tyto hodnoty Ry i dihydroergokristin 0,21 dihydro-beta-ergokryptin 0,28 dihydro-alfa-ergokryptin 0,33 dihydroergokornin ' 0,39
Neprovádí se denzito^etřické vyhodnocení, ale pouze, semikvantitativní vizuální odhad.
Přiklad 3 : . .
Postup je vhodný pouze pro vzorky vnichž není přítomen dihydroergokristin.
Postupuje se jako v příkladě 1, jen s tím rozdílem, že se jako vyvíjející soustava použije směs vodá-diethylamin 100:4. Jednotlivé ergotoxinové alkaloidy mají tyto hodnoty.Hg, :
| dihydroergokristin | 0,125 |
| dihydro-beta-ergokryp.tin | 0,125 |
| dihydro-ralfa-ergokryptin | 0,23 |
| dihydroergokornin | 0,31 |
Claims (3)
- PŘEDMĚT VYNÁLEZU:> ·· .1. Způsob dělení a stanovení poměru dihydro-alfa.ergokryptinu a dihydro-beta-ergokryptinu, vyznačující se tím, že se směs hydrogenovaných ergotoxinových alkaloidů rozpustí, nanese na start tenké vrstvy silikagelu Polygram SIL N-HR, rozdělí na dihydroergokristin, dihydro-alfa-ergokryptin, dihydro-beta-ergokryptin a dihydroergokornin chromatografioky s použitím buí dvojnásobného vyvíjení eluční soustavou voda-diethylamin 100:4 a methanol-roz.tok o pH 9 50:40, nebo s použitím eluční soustavy methanol-0,1 ií roztok octanu. amonného-diethylamjn 20.20:1, načež se zdetekuje roztokem p-dimethylaminobenzal-dehydu a poměr dihydro-alfa-ergokryptinu a dihydro-beta-ergokryptinu se vyhodnotí.
- 2. Způsob podle bodu 1 vyznačující se tím, že se vyhodnocení provádí denzitometricky.
- 3. Způsob podle bodu 1 vyznačující se tím, že se vyhodnocení provádí vizuálně.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CS436479A CS209335B1 (cs) | 1979-06-26 | 1979-06-26 | Způsob dělení a stanovení poměru dihydro-alfa-ergokryptinu a dihydro-beta-ergokryptinu |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CS436479A CS209335B1 (cs) | 1979-06-26 | 1979-06-26 | Způsob dělení a stanovení poměru dihydro-alfa-ergokryptinu a dihydro-beta-ergokryptinu |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CS209335B1 true CS209335B1 (cs) | 1981-11-30 |
Family
ID=5386184
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CS436479A CS209335B1 (cs) | 1979-06-26 | 1979-06-26 | Způsob dělení a stanovení poměru dihydro-alfa-ergokryptinu a dihydro-beta-ergokryptinu |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CS (1) | CS209335B1 (cs) |
-
1979
- 1979-06-26 CS CS436479A patent/CS209335B1/cs unknown
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Morse et al. | Thin-layer chromatographic separation of DNS-amino acids | |
| Pomerantz et al. | Photoaffinity labeling of a protein kinase from bovine brain with 8-azidoadenosine 3', 5'-monophosphate | |
| Spender et al. | Preclinical evaluation of AZ12601011 and AZ12799734, inhibitors of transforming growth factor β superfamily type 1 receptors | |
| FI881704A0 (fi) | En metod och apparat foer bestaemning av analytnivaon i ett helblodsprov. | |
| Peterson et al. | A paper chromatographic technique and its application to the study of new antibiotics | |
| Abe et al. | A new fluorometric method for the determination of spermidine and spermine in tissues by thin layer chromatography | |
| CS209335B1 (cs) | Způsob dělení a stanovení poměru dihydro-alfa-ergokryptinu a dihydro-beta-ergokryptinu | |
| Amin et al. | Quantitative thin-layer chromatographic analysis of ergotamine tartrate and caffeine in the nanogram range | |
| Owles | Identification of monensin, narasin, salinomycin and lasalocid in pre-mixes and feeds by thin-layer chromatography | |
| Russell et al. | Determination of 9-[(2-phosphonylmethoxy) ethyl] adenine in rat urine by high-performance liquid chromatography with fluorescence detection | |
| Guilbault et al. | A solid-surface fluorescence method for cholinesterase | |
| Foppiano et al. | Quantitative analysis of neomycin sulfate by thin‐layer chromatography | |
| Burce et al. | Quantitative determination of naltrexone and naltrexone prodrugs by electron-capture gas-liquid chromatography | |
| Keng et al. | High performance liquid chromatographic determination of tylosin in bovine muscle, kidney and liver | |
| Cook et al. | The fractionation and estimation of free amino acids in serum | |
| Korzun et al. | Thin‐layer chromatography of iodochlorhydroxyquin | |
| Belliveau et al. | pH sensitive fluorogenic spray reagents I. General discussion and investigation of 1, 2-dichloro-4, 5-dicyanobenzoquinone | |
| Pisternick et al. | High-performance thin-layer chromatographic determination of N-ethyl-3, 4-methylenedioxyamphetamine and its major metabolites in urine and comparison with high-performance liquid chromatography | |
| Chuan et al. | Determination of thioguanine in pharmaceutical preparations by paper substrate room temperature phosphorimetry | |
| Tyrer et al. | Thin-layer chromatography of tetrazolium salts and their formazans | |
| Smith et al. | Separation and identification of benzothiadiazines in commercial formulations by thin-layer chromatography and infrared spectroscopy | |
| Maddocks et al. | Separation and detection of picomole quantities of azathioprine metabolites | |
| Vinson et al. | Identification of street drugs by thin-layer chromatography and a single visualization reagent | |
| Gibbs et al. | Quantitative estimation of tryptophan in plasma and urine using thin-layer chromatography (TLC) and induced fluorescence | |
| ES2100900T3 (es) | Procedimiento para la determinacion de un ion con sensibilidad aumentada, utilizacion de sustancias apropiadas para ello y agente correpondiente. |