CS202959B1 - Způsob přípravy imobilisovaných buněk Saccharomyces paradoxus - Google Patents
Způsob přípravy imobilisovaných buněk Saccharomyces paradoxus Download PDFInfo
- Publication number
- CS202959B1 CS202959B1 CS298079A CS298079A CS202959B1 CS 202959 B1 CS202959 B1 CS 202959B1 CS 298079 A CS298079 A CS 298079A CS 298079 A CS298079 A CS 298079A CS 202959 B1 CS202959 B1 CS 202959B1
- Authority
- CS
- Czechoslovakia
- Prior art keywords
- cells
- gel
- saccharomyces paradoxus
- immobilised cells
- preparing
- Prior art date
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 9
- 241001123228 Saccharomyces paradoxus Species 0.000 title claims description 4
- -1 glycyl- Chemical group 0.000 claims description 8
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 8
- NAQMVNRVTILPCV-UHFFFAOYSA-N hexane-1,6-diamine Chemical group NCCCCCCN NAQMVNRVTILPCV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 5
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 5
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 210000001822 immobilized cell Anatomy 0.000 description 3
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 2
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 2
- SXRSQZLOMIGNAQ-UHFFFAOYSA-N Glutaraldehyde Chemical compound O=CCCCC=O SXRSQZLOMIGNAQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- CERQOIWHTDAKMF-UHFFFAOYSA-M Methacrylate Chemical compound CC(=C)C([O-])=O CERQOIWHTDAKMF-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- LRHPLDYGYMQRHN-UHFFFAOYSA-N N-Butanol Chemical compound CCCCO LRHPLDYGYMQRHN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 2
- 125000000217 alkyl group Chemical group 0.000 description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 2
- 125000002768 hydroxyalkyl group Chemical group 0.000 description 2
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 2
- 230000000707 stereoselective effect Effects 0.000 description 2
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 2
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- HORQAOAYAYGIBM-UHFFFAOYSA-N 2,4-dinitrophenylhydrazine Chemical compound NNC1=CC=C([N+]([O-])=O)C=C1[N+]([O-])=O HORQAOAYAYGIBM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- SLXKOJJOQWFEFD-UHFFFAOYSA-N 6-aminohexanoic acid Chemical compound NCCCCCC(O)=O SLXKOJJOQWFEFD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BRLQWZUYTZBJKN-UHFFFAOYSA-N Epichlorohydrin Chemical compound ClCC1CO1 BRLQWZUYTZBJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 1
- QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N L-alanine Chemical compound C[C@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 1
- 235000014680 Saccharomyces cerevisiae Nutrition 0.000 description 1
- 244000180577 Sambucus australis Species 0.000 description 1
- 235000018734 Sambucus australis Nutrition 0.000 description 1
- 235000004279 alanine Nutrition 0.000 description 1
- 229960002684 aminocaproic acid Drugs 0.000 description 1
- 238000004873 anchoring Methods 0.000 description 1
- 230000004888 barrier function Effects 0.000 description 1
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 1
- 238000009792 diffusion process Methods 0.000 description 1
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 1
- 238000006911 enzymatic reaction Methods 0.000 description 1
- 125000003630 glycyl group Chemical group [H]N([H])C([H])([H])C(*)=O 0.000 description 1
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 125000000468 ketone group Chemical group 0.000 description 1
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 1
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 229920002401 polyacrylamide Polymers 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 125000002345 steroid group Chemical group 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
Landscapes
- Immobilizing And Processing Of Enzymes And Microorganisms (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Description
Vynález se týká způsobu přípravy imobilisovaných buněk Saccharomyces paradoxus VKMu-481, schopných mikrobiální asymetrisace steroidního skeletu, která je založena na stereospecifické redukci jedné z keto-skupin. 3-Methoxy, Δ » 5/1 0/, 9/1 1/_g , .j 4_seco_es tr atetr aen-3-ol-1 4,1 7 ~
-dion je touto cestou v intracelulárním prostředí buňky uvedeného kmene konvertován na 3-methoxy, Δ. ’ $ > ^/10/ » 9/1 l/.g* j 4-seco-es tr ate traendiol-3 , 1 7 J5,on-14.
Pro tento účel byly dosud imobilísovány buňky Saccharomyces cerevisiae VKMu-488, a to zachycením v polyakrylamidovém gelu. Obecným nedostatkem tohoto způsobu imobilisace je, že příslušná enzymatická aktivita zakotvených buněk je negativně ovlivněna difusní barierou, kterou vytváří použitý gel.
Uvedené nedostatky odstraňuje podle vynálezu způsob přípravy imobilisovaných buněk Saccha romyces paradoxus, jehož podstata spořívá v tom, že se buňky kovalentní vazbou zakotví na glycyl-, β-alanyl- nebo £-aminokaproyl- derivát hydroxyalkylmethakrylátového gelu.
Základní účinek způsobu přípravy imobilisovaných buněk podle vynálezu spočívá v operačním zjednodušení postupu a vypuštění isolace a purifikace enzymu. Zachováním enzymu v extracelulárním prostředí buňky je zároveň stabilisována jeho aktivita, a to při dodržení optimálních podmínek enzymatické reakce.
Způsob podle vynalezu je vysvětlen na následujících příkladech provedení.
Příklad 1
Hydroxylakylmethakrylátový gel /32-40 ^m/ zpracovaný epichlorhydrinem, byl modifikován vazbou hexamethylendiaminu podle následujícího postupu*. 1 g gelu byl suspendován v 10 ml 1 M hexamethylendiaminu /pH 12,0/. Po 72 hod míchání za laboratorní teploty byla suspenze převedena do kolonky a gel promyt desetinásobným objemem vody, ethanolu, butanolu a opět ethanolu. Obsah hexamethylendiaminu, stanovený na základě dusíku odpovídá 753^mol/g suchého gelu.
Příklad 2
Hydroxylakylmethakrylátový gel /100 mg/, modifikovaný postupem popsaným v příkladu 1 byl suspendován ve 2 ml 50 mM fosfátového pufru /pH 5,5/ obsahujícího 50 mg glycinu. Směs byla vystavena 24 hod účinku 100 mg N-ethyl-N-/3-dimethylaminopropyl/karbodÍímidu při laboratorní teplotě. Získaný glycyl-derivát daného gelu /100 mg/ byl suspendován v 0,5 ml 5 2 roztoku glutaraldehydu. Po 24 hod mícháni byl gel převeden do kolonky a promýván vodou do negativní reakce a 2,4-dinitrofeny1 hydrazinem. Po vymytí glutaraldehydu byl gel promyt 300 ml 50 mM fosfátového pufru 5,5.
Příklad 3
Hydroxyalkylmethakrylátový gel modifikovaný způsobem popsaným v příkladě 1 byl suspendován ve 2 ml 50 mM fosfátového pufru /pH 5,5/, obsahujícího 50 mg />-alaninu. Příprava i aktiva· ce fi -alanyl-derivátu byla dále provedena postupem popsaným v příkladě 2.
Přikládá
Hydroxyalkylmethakrylátový gel modifikovaný způsobem popsaným v příkladě 1, byl suspendo ván ve 2 ml 50 mM fosfátového pufru /pH 5,5/, obsahujícího 50 mg kyseliny £-amin.okapronové. Příprava i aktivace £-aminokaproyl-derivátu byla dále provedena postupem popsaným v příkladě 2.
Příklad 5
Směs obsahující 10 buněk na 100 mg nosiče připraveného způsobem uvedeným v příkladech 2 až 4 v 50 mM fosfátového pufru /pH 5,5/ byla míchána při laboratorní teplotě, V případě uvedených nosičů dochází po 120 hod k imobilisaci 30 mg suché hmotnosti buněk na 1 g nosiče. Schopnost zmíněné stereospecifické redukce takto imobilisovaných buněk je přibližně o 25 Z nižší než schopnost stejného množství nezakotvených buněk.
Claims (1)
- PŘEDMĚT VYNÁLEZUZpůsob přípravy imobilisovaných buněk Saccharomyces paradoxus, vyznačený tím, že se buňky kovalentní vazbou zakotví na glycyl-, 3-alanyl- nebo £-aminokaproyl—derivát hydroxyalkylmethakrylátového gelu.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CS298079A CS202959B1 (cs) | 1979-04-28 | 1979-04-28 | Způsob přípravy imobilisovaných buněk Saccharomyces paradoxus |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CS298079A CS202959B1 (cs) | 1979-04-28 | 1979-04-28 | Způsob přípravy imobilisovaných buněk Saccharomyces paradoxus |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CS202959B1 true CS202959B1 (cs) | 1981-02-27 |
Family
ID=5368565
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CS298079A CS202959B1 (cs) | 1979-04-28 | 1979-04-28 | Způsob přípravy imobilisovaných buněk Saccharomyces paradoxus |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CS (1) | CS202959B1 (cs) |
-
1979
- 1979-04-28 CS CS298079A patent/CS202959B1/cs unknown
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Ramos et al. | The pH-dependent changes in proton: substrate stoichiometries during active transport in Escherichia coli membrane vesicles | |
| De Mello et al. | Ornithine and glutamic acid decarboxylase activities in the developing chick retina | |
| Fujimoto et al. | Hypoxanthine-guanine phosphoribosyltransferase deficiency: activity in normal, mutant, and heterozygote-cultured human skin fibroblasts | |
| Stadtman et al. | Cellular regulation of glutamine synthetase activity in Escherichia coli | |
| US4260678A (en) | Determining creatine kinase isoenzmes via immobilized antibody-isoenzyme complexes | |
| Larner | Insulin and glycogen synthase | |
| LaPorte et al. | Relationship between changes in the calcium dependent regulatory protein and adenylate cyclase during viral transformation | |
| Kaplowitz et al. | Nuclear phosphoproteins: III. Increase in phosphorylation during histone-phosphoprotein interaction | |
| Rossier | Acetyl-coenzyme A and coenzyme A analogues. Their effects on rat brain choline acetyltransferase | |
| Kahn et al. | Purification of alkaline phosphatase from extracellular vesicles of fracture callus cartilage | |
| Godchaux III et al. | The effect of chloramphenicol in intact erythroid cells | |
| Byrd et al. | Fluorine-19 nuclear magnetic resonance investigation of the ternary complex formed between native thymidylate synthetase, 5-fluoro-2'-deoxyuridylate, and 5, 10-methylenetetrahydrofolate | |
| Brewin et al. | Variations in the Amounts of 3', 5'-Cyclic AMP in Plant Tissues5 | |
| CS202959B1 (cs) | Způsob přípravy imobilisovaných buněk Saccharomyces paradoxus | |
| Kotyk et al. | Transport of D-xylose and sugar space in baker's yeast | |
| Mehta et al. | Ribitol and flavinogenesis in Eremothecium ashbyii | |
| Senior | [49] Oligomycin-sensitivity-conferring protein | |
| Reuveny et al. | A new assay for ATP sulfurylase based on differential solubility of the sodium salts of adenosine 5′-phosphosulfate and sulfate | |
| Klein | Activation of metabolic systems during tumor-cell formation | |
| Bayer et al. | [63] The biotin transport system in yeast | |
| Gunshore et al. | Inhibition of the catalytic subunit of phosphorylase phosphatase by oxalyl thioesters and its possible relevance to the mechanism of insulin action | |
| Pelley et al. | Enzymic binding of aminoacyl transfer ribonucleic acid to ribosomes in a Drosophila in vitro system | |
| Walker et al. | Amino acid transport and protein synthesis in energetically-stable calcium-tolerant isolated cardiac myocytes | |
| Takahashi et al. | CYCLIC NUCLEOTIDE‐DEPENDENT PROTEIN KINASES FROM SILKWORM EGGS: OCCURRENCE OF TWO CYCLIC NUCLEOTIDE‐DEPENDENT PROTEIN KINASES, CHANGES IN THEIR ACTIVITIES AND LEVELS OF CYCLIC NUCLEOTIDES DURING DEVELOPMENT OF THE EGGS | |
| Merrill Jr et al. | Preparation and properties of immobilized flavokinase |