CS200771B1 - Process for improving microorganisms for increasing production of polysaccharid-hydrolases - Google Patents

Process for improving microorganisms for increasing production of polysaccharid-hydrolases Download PDF

Info

Publication number
CS200771B1
CS200771B1 CS437978A CS437978A CS200771B1 CS 200771 B1 CS200771 B1 CS 200771B1 CS 437978 A CS437978 A CS 437978A CS 437978 A CS437978 A CS 437978A CS 200771 B1 CS200771 B1 CS 200771B1
Authority
CS
Czechoslovakia
Prior art keywords
passage
production
passaged
gel
days
Prior art date
Application number
CS437978A
Other languages
English (en)
Slovak (sk)
Inventor
Juraj Zemek
Ludovit Kuniak
Jozef Augustin
Original Assignee
Juraj Zemek
Ludovit Kuniak
Jozef Augustin
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Juraj Zemek, Ludovit Kuniak, Jozef Augustin filed Critical Juraj Zemek
Priority to CS437978A priority Critical patent/CS200771B1/cs
Publication of CS200771B1 publication Critical patent/CS200771B1/cs

Links

Landscapes

  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Enzymes And Modification Thereof (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)

Description

ČESKOSLOVENSKASOCIALISTICKÁREPUBLIKA< 19 )
POPIS VYNÁLEZU
K AUTORSKÉMU OSVEDČENIU I200 771
JliUBl) -
(61) (23) Výstavná priorita(22) Přihlášené 03 07 78(21) PV 4379-78 (51) Int.Cl.3 C 12 N 9/24
ÚŘAD PRO VYNÁLEZY
A OBJEVY (40) Zveřejněné 31 01 80(45) Vydané 30 g2
Autor vynálezu ZEMEK JURAJ ing. CSc., LEHNICA, KUKIAK tOTOVÍT,ing. CSc. a AUGUSIÍN J0ZEF Phlffi.,BRATISLAVA (54) SpĎsob šlachtenia mikroorganizmov za účelom zvýšenej produkcie polysacharid-hydroláz 1
Vynález aa týká spOsobu šlachtenia mikroorganizmov (baktérií, kvaainiek, nižších avyšších húb) za účelom zvýšenia produkcie enzýmov hydrolyticky štiepiacich polySacharidy,
Glykán-glykánohydrolázy sú hydrolázy schopné štěpit polyaacharidy (připadne oligosa-charidy) endo-mechanizmom vo vnútornej časti reťazcov glykánu, zatialčo glykozidázy sú hyd-rolázy, štepiace polysaeharidy (připadne oligosacharidy) z ich neredukujúeich koncov. Via-ceré polysacharidyhydrolázy, predovšetkým glykán-glykánohydrolázy, pSeobiace na polysacha-ridový polymér endo-mechanizmom, ako eA-amyláza (eC-l,4-glukán glukánohydroláza EC 3.2.1.1),celuláza (ji -1,4-glukán-glukánohydroláza EC 3.2.1.4), xylanáza (/3-1,4-xylán xylánohydrolá-za EC 3.2.1.8), lichenáza (/3-1,3(4) glukán glukánohydroláza EC 3.2.1.6), pullulanáza (bak-teriálny R-enzým EC 3.2.1.9) a mananáza, sú ddležité enzýmy z hlediska priemyselného použi-tia (pivovarnictvo a eladovníctvo, potravinářsky, krmovinársky a textilný priemysel, spra-covánie polysacharidových odpadov). Preto je dóležitým problémom technickéj mikrobiologienielen výběr vhodných produkčných mikroorganizmov, ale aj možnosti udržania, připadne 3al-šieho zvýšenia produkčných vlastností vybraného kmeňa pre produkciu glykán-glykáno-hydrolázy.
Podstata vynálezu spočívá v tom, že viacnásobným pasážovaním vybraného kmeňa, produku-júceho polyaacherid hydrolázovú enzýmovú aktivitu na raatových pĎdach s hydrofilným gélompříslušného polysacharidu ako jediného zdroje uhlíka upraveného sietovaním 8 epichlorhydrí-nom, získá sa vyšlechtěný mikroorganizmus schopný za rovnakých podmienok kultivácie produ- 200 771 200771 kovat 1,5 až 5-krát viac polysacharid-hydrolázového enzýmu v porovnaní a nevyšl’achtenýmmikroorganizmom. Qél připravený aieťovanim daného typu polysacharidu bifunkčným činidlom o vhodnom stup-ni sieťovania má zachované substrátové vlastnosti predověetkým pre hydrolázy pfisobiace endo-mechanizmom, štepiaee reťazce polyaacharidu z ich vnútornej časti. Substrátové vlastnostisletovaných polysacharidov pre hydrolázy, ktoré pčsobia exo-mechanizmom sú podstatné zhor-šené voči polysacharidom modifikovaným. Tak aieťovaním makromolekulárneho polyaacharidu160 priečnymi hydroxypropánovými mdstikmi zhoršia se substrátové vlastnosti tak modifiko-vaného polyaacharidu voči východziemu pdvodnému polysacharidu až na 0,6 %, čo představujev případe polysacharidu o mol. hmotnosti 10&amp;, 76 glykozylových jednotiek pripadajúcich najednu priečnu vSzbu a substrátové vlastnosti pre hydrolázy pdsobiace exo-mechanizmom súobmedzené maximálně na 37 glykozylových jednotiek pri neprodukujúcich koncoch reťazcov po-lysacharidu. Pasážovením mikroorganizmov na géloch sletovaného polysacharidu dochádzak pomnoženiu a tým k relativnému obohateniu kultúry populáciou schopnou utilizovat taktomodifikovaný polysacharid, a to predovSetkým primárným účinkom glykán-glykánohydroláz.Oligosacharidové produkty účinku příslušných glykán-glykánohydroláz na ich modifikovanépolysacharidy můžu byt Sálej utilizované exo-enzýmami daného typu až na úroveň monosacha-ridu. Výhodou uvedeného postupu šlachtenia je skutočnost, že množstvo produkovanej glykán--glykánohydrolázy v jednotlivých pasážach za použitia gélov tvarovaných v átandardnom tva-re povrchu a o Standardnej sušině sa indikuje dížkou časového intervalu potřebného k steku-teniu vzorky gélu pri zachovaní štandardného inokula. Mikroorganizmy vyšlechtěné uvedenýmpostupom si ponechávajú zvýšené produkčné vlastnosti pre daný typ glykán glykánohydrolázypo dobu niekolkých mesiacov až jedného roku. Příklad 1
Bacillus subtilis CCM 1718 sa pasážoval 8-krát na pdde Yeast Nitrogen Base YNB(0,6 g/100 ml) s gélom sietovanej amylozy trojúhelníkového tvaru (dížka strany 1,5 cm,výška gélu 0,4 cm), pri inokulum 10buniek sa stekucovala štandardná vzorka gélu (o su-chej hmotnosti 150 mg amylo'zy) v priebehu prvej pasáže za 3 dni, v priebehu 4. pasáže za15 hodin, v priebehu 8. pasáže za 10 hodin. Produkcia enzýmu ct-amylázy s Bacillus subti-lis (0,3 g biomasy) sa prevádzala na p6de obsahujúcej 30 g kukuřičného výluhu a 7,5 g škro-bu na 1,5 litre vody (pH 7,8). Po 20 hodinách fermentačného procesu sa biomasa Bacillussubtilis oddělí centrifugáciou a extracelulárna ot-amyláza se získá v surovom stave z pro-dukčného média jeho zahuštěním, alebo v purifikovanom stave uplatněním afinitného postupuzachytenia ot-amylázy na sletovaný škrob (J. Zemek, t. Kuniak, J. Burianek a P. Zajac:
Spdsob izolácie ot-amylázy, čs. patent 157 955 (197?)). Získaná aktivita «(.-amylázy184 m.j./l pddy u nepasážovaného kmeňa 813 m.j./l u kmeňa 8-krát pasážovaného cez gél při-pravený zo sietovanej amylozy. v Příklad 2
Aureobasidium pullulans CCY 27-1-36 sa pasážoval na p6de YNB (0,6 g/100 ml) s gélom

Claims (1)

  1. 3 200 771 sletovaného β-xylánu (xylán z bukového dřeva). Tvar gélu a inokulum tak ako je uvedenév příklade 1. Suchá hmotnost gélu 150 mg xylánu. Stekutenie gélu v 1. pasáži přeběhlo za3 dni, v 2, pasáži za 2 dni, v 3. pasáži za 30 hodin a v 4. pasáži do 24.hodin. Produkciaenzýmu xylanázy sa prevádzala na médiu, obsahujúcom 30 g kukuřičného výluhu, 5 g neprečis-teného xylánu, 2 g síranu amonného a 2 g kyslého fosforečnanu draselného, 4 g biomasy Aureo-basidium pullulans na 1,5 litra fermetačnej p6dy (ph 7,0). Po 4 dnovéj submerznej fermentá-cii na reciprokej trepačke sa biomasa Aureobasidium pullulans oddělí centrifugáciou a fil-tráciou a extraeelulárna xylanáza sa získá v surovom stave z produkčného média vyzrážanímsíranom amonným (700 g/liter) s následnou dialýzou a lyofilizáciou. Získaná aktivita xyla-názy 27,1 m.j./l u nepasážovaného kmeňa; u kmeňa 4-krát pasážovaného 112,S m.j./l. Příklad 3 Tak ako je uvedené v příklade 2, a tým rozdielom, že sa Aureobasidium pullulans CCX27-1-36 pasážuje cez gél, připravený zo sietov^nej hydroxyetylcelulozy (ponořený v XNB pdde(0,6 g/100 ml)). 6-násobným pasážovaním sa zvýšila produkcia celulázy (Οχ) o 240 %, Pro-dukčná p6da obsahovala 5 g kvasničného autolyzátu, 20 g hydroxyetylcelulozy, 2 g síranuamonného a 2 g kyslého fo3fbrečnanu draselného a 4 g biomasy Aureobasidium pullulans na 1,5 litra vody (pH 6,5). Výťažok celulázy u nepasážovaného kmeňa 45,2 m.j./l, po 6-násob-nom pasážovaní 108,5 m.j./l. \ Příklad 4 Bacillus licheniformis CCM 2145 sa pasážoval 5-krát na pdde XNB (0,6 g/100 ml) s gélomsletovaného lichenínu ze podmienok opísaných v příklade 1. Standardná vzorka gélu připrave-ného zo sletovaného lichenínu (o suchej hmotnosti lichenínu 180 mg) sa stekutila v priebe-hu 1. pasáže za 3 dni, v priebehu 2. pasáže za 1,5 dna, v priebehu 3. pasáže za 1 deň,v prie běhu 4. a 5. pasáže do 24 hodin. Produkcia enzýmu lichenázy sa prevádzala na pddeobsahujúcej 10 g kukuřičného výluhu, 10 g žitného Šrotu, 2 g síranu amo'nneho a 2 g kyslé-ho fosforečnanu draselného a 0,5 g biomasy Bacillus licheniformis na 1 liter vody (pH 6,2).Po oddělení biomasy centrifugáciou sa extraeelulárna lichenáza získá z produkčného médiav surovom stave jeho zahuštěním. Získaná aktivita lichenázy 58,4 m.j./l u nepasážovanéhokmeňa, 187,6 m.j./l u kmeňa 5-krát pasážovaného. Vynález má použitie pri šlechtění priemyselných kmeňov mikroorganizmov produkujúcich,polysacharid-hydrolázové enzýmy, nakolko mikroorganizmy vySIachtené podl’a vynálezu sa vy-značujú niekoTkonásobne vyššou produkciou polyeacharid-hydroláz za rovnakých kultivačnýchpodmienok. PB E D MET VXNÁLEZU Spdsob šlechtěnia mikroorganizmov na zvýšená produkciu polyeacharid hydroláz, vyzna-čujúci sa tým, že vybraný kmeň, produkujúci polyeacharid hydrolázovú enzýmová aktivitu saviacnásobne pasážuje na rastových pddach s hydrofilným gélom odpovedajúceho sletovanéhopolysecharidu ako jediného zdroje uhlíka a epichlorhydrínom.
CS437978A 1978-07-03 1978-07-03 Process for improving microorganisms for increasing production of polysaccharid-hydrolases CS200771B1 (en)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CS437978A CS200771B1 (en) 1978-07-03 1978-07-03 Process for improving microorganisms for increasing production of polysaccharid-hydrolases

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CS437978A CS200771B1 (en) 1978-07-03 1978-07-03 Process for improving microorganisms for increasing production of polysaccharid-hydrolases

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CS200771B1 true CS200771B1 (en) 1980-09-15

Family

ID=5386398

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CS437978A CS200771B1 (en) 1978-07-03 1978-07-03 Process for improving microorganisms for increasing production of polysaccharid-hydrolases

Country Status (1)

Country Link
CS (1) CS200771B1 (cs)

Similar Documents

Publication Publication Date Title
JPS60500891A (ja) セルラ−ゼを大量生成する微生物
US7727755B2 (en) Enzyme and methodology for the treatment of a biomass
RU2361918C1 (ru) Штамм мицелиального гриба penicillium verruculosum - продуцент комплекса целлюлаз, ксиланазы и ксилоглюканазы и способ получения ферментного препарата комплекса целлюлаз, ксиланазы и ксилоглюканазы для гидролиза целлюлозы и гемицеллюлозы
Kovacs et al. Production of chitinolytic enzymes with Trichoderma longibrachiatum IMI 92027 in solid substrate fermentation
US5360608A (en) Fungicidal compositions comprising chitinase and enterobacter cloacae, and a method for stimulation proliferation of E. Cloacase
Gomes et al. Production of cellulases by a wild strain of Gliocladium virens: optimization of the fermentation medium and partial characterization of the enzymes
Dahot et al. Microbial production of cellulases by Aspergillus fumigatus using wheat straw as a carbon source
DE69219325T2 (de) Xylanase, bazillusstämme die xylanase produzieren und ihre verwendung
NEAGU et al. Trichoderma reesei cellulase produced by submerged versus solid state fermentations
Kremnický et al. Production of extracellular β-mannanases by yeasts and yeast-like microorganisms
US6946277B2 (en) Method for enhancing cellobiase activity of termitomyces clypeatus using a glycosylation inhibitor
CS200771B1 (en) Process for improving microorganisms for increasing production of polysaccharid-hydrolases
Beyer et al. The laminarinase system of Streptomyces sp., ATCC 11238
Karni et al. β-Xylanase production by Aureobasidium pullulans grown on sugars agricultural residues
Patel et al. Xylanase production by Cladosporium sp. from agricultural waste
JPH0787970A (ja) キシラナーゼの製造方法
Sandhu et al. Use of lytic enzymes for protoplast production in Trichoderma reesei QM9414
Binod et al. Chitinases
US6569646B2 (en) Process for the production of an enzyme preparation containing xylanase and carboxymethyl cellulase from termitomyces clypeatus having accession no 11CB-411
Haq et al. Optimization of cultural conditions for the production of xylanase by chemically mutated strain of Aspergillus niger GCBCX-20
Pitson et al. Production of β-glucan degrading enzymes by Acremonium and Cephalosporium species
RU2293115C1 (ru) Штамм гриба penicillium canescens - продуцент секретируемой эндо-(1-4)-бета-ксиланазы
RU2323254C2 (ru) ШТАММ МИЦЕЛИАЛЬНОГО ГРИБА PENICILLIUM FUNICULOSUM - ПРОДУЦЕНТ КОМПЛЕКСА КАРБОГИДРАЗ, СОДЕРЖАЩЕГО ЦЕЛЛЮЛАЗЫ, β-ГЛЮКАНАЗЫ, β-ГЛЮКОЗИДАЗЫ, КСИЛАНАЗЫ И КСИЛОГЛЮКАНАЗЫ, И СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ФЕРМЕНТНОГО ПРЕПАРАТА КОМПЛЕКСА КАРБОГИДРАЗ ДЛЯ ОСАХАРИВАНИЯ ЛИГНОЦЕЛЛЮЛОЗНЫХ МАТЕРИАЛОВ
RU2316584C1 (ru) Способ биотехнологического получения сбраживаемых сахаров из лигноцеллюлозных материалов
Job et al. Purification and characterization of a highly glucose tolerant β-glucosidase isozyme from Paecilomyces variotiiMG3