CS197796B1 - Method of obtaining new type of mutants having mucidine resistance - Google Patents

Method of obtaining new type of mutants having mucidine resistance Download PDF

Info

Publication number
CS197796B1
CS197796B1 CS98178A CS98178A CS197796B1 CS 197796 B1 CS197796 B1 CS 197796B1 CS 98178 A CS98178 A CS 98178A CS 98178 A CS98178 A CS 98178A CS 197796 B1 CS197796 B1 CS 197796B1
Authority
CS
Czechoslovakia
Prior art keywords
mucidine
resistant
mutants
yeast
muc3
Prior art date
Application number
CS98178A
Other languages
English (en)
Slovak (sk)
Inventor
Julius Subik
Gizela Takacsova
Original Assignee
Julius Subik
Gizela Takacsova
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Julius Subik, Gizela Takacsova filed Critical Julius Subik
Priority to CS98178A priority Critical patent/CS197796B1/cs
Publication of CS197796B1 publication Critical patent/CS197796B1/cs

Links

Landscapes

  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)

Description

197 796 (11) (Bl)
XKr*s“s“ POPIS VYNÁLEZU
REPUBLIKA
‘19' K AUTORSKÉMU OSVEDČENIU
(61) (23) Výstavná priorita(22) Přihlášené 1-5 02 78(21) PV 981-78 (51) IntCl.3 G 12 R 1/14
ÚŘAD PRO VYNÁLEZY
A OBJEVY (40) Zverejnené 31 08 79(45) Vydané 01 5 82
Autor vynálezu ŠUBÍK JÚLIUS RNDr. a TAKÍCSOVÁ GIZELARNDr. , BRATISLAVA (54) Spósob získavania mucidin-režistentnýoh mutantov nového typu 1
Fredmetom vynálezu sú.mutahty kvasiniek rezistentně k antibiotiku mucidinu, u kto-rých mutácia v raitochondriálnom genóme sa nachádza mimo genetických lokusov MUC1 a MUC2,a sposob ich získavania.
Mucidin je protihubové antibiotikum získané podlá cs. patentov č.136 492 a č.136 495.Toto antibiotikum inhibuje i rast kvasiniek. Losial isolované kmene kvasiniek rezistentněk inhibičnému účinku mucidinu nesu mutácie v jadrovom gehome alebo v jednom z dvoch re-kombinačně separovatelných lokusov MUC1 a MUC2 mitochondriálneho genomu.
Spdsob získavania kmeňov kvasiniek rezistentných k mucidinu sa prevádza podl'a vyná-lezu v podstatě tak, že čistá kultúra kvasiniek citlivých k mucidinu sa kultivuje v ne-přítomnosti alebo v přítomnosti mutagénneho faktora například MnGlg, na čo sa spontánněalebo indukované vzniknuté mutanty rezistentně k mucidinu selektujú rastom v tekutých ale-bo na povrchu pevných médií, obsahujúcich mucidin a nefermentabilné zdroje uhlíka a ener-gie. U získaných mitochondriálnych mutantov kvasiniek rezistentných k mucidinu, ktorýohleterminanty rezistencie podliehajú mitotickej segregácii, sa mutácia v novom lokuse mito-ihondriálneho genómu indentifikuje postupom vykonávaným v podstatě tak, že sa zmiešajúíaploidné buňky opačného pohlavia testovaných mucidin-rezistentných mutantov a referenc-ích mucidin-rezistentných mutantov nesúcich mutáciu buS v lokuse MUC1 alebo MUC2, zabaštových alebo nerastových podmienok, na čo sa vzniknuté diploidné potomstvo oddělí pro-:otrofnou seiekciou a frekvencia mucidin-senzitívnych buniek sa stanoví kvantitativnouwalýzou diploidov na nefermentabilných médiaách obsahujúcich a neobsahujúcich mucidin.akto isolované mucidin-rezistentné mutanty, ktoré po vyššie uvedených kríženiach tvoria diploidnom potoms.tve muoidin-senzitívne·buňky e obidvomi referenonými mucidin-rezistent- 97 796 2 197 796 nými mutantami představuji! novů skupinu /skupiny/ mutantov rezistentních k mucidinu, uktorých mutácia v mitochondriálnom genome sa nachádza mimo oblast lokusov MUC1 a MUC2.
Takýmto, spdsobom boli připraveně a izolované mucidin-rezistehtné kme‘ne kvasinky Sa-charomyces cerevisiae nesúoe oznaoenie K5O a Kil deponované v Sel. zbierke kvasiniek/809 33 Bratislava, Dúbravská cesta, Chemický ústav SÁV/ pod šišlami CCY 22-15-8 a CCY22-15-9, predstavujúce mucidín-rezistentné mutanty nového genotypu, nesúce mutácie v lo-kuse MUC3.
Buňky mucidin-citlivého materského kmeňa kvasiniek Saccharomyces cerevisiae 55R5-3C/CCY 22-15-10/ nerastú na pevných glycerolových médiách v přítomnosti už 0,2 /ug muci-dinu/ml média. Za tých istých podmlenok buňky mutantov K50 a Kil /aural MUC3/ tolerovalikoncentrácie mucidinu 0,5/Ug/ml. Oba mutanty sú specificky rezistentně k mucidinu ako naúrovni celých buniek tak aj na úrovni izolovaných iriitochondrií. Nakolko morfologieké, fy-ziologické a biochemické vlastnosti mutantných kmeňov rezistentných k mucidinu sú dosťpodobné vlastnostlam materského mucidin-citlivého kmeňa, z ktorého sú odvodené /55R5-3C/uvádzame len ich najvýznačnéjšie vlastnosti a tie sú: 1. schopnost rastu nefermentabilných substrátoch slúžiacich ako zdroj uhlíka a energie 2. schopnost tolerovat niekolkonášobne vyššie koncentrácie mucidinu pri raste na týchtosubstrátoch v porovnaní s materským kmeňom, z ktorého sú odvodené.
Prakticky možno vynález .prevádzať pódia nasledovného příkladu bez toho, že by sa natento len výlučné obmedzoval. Uvedený příklad sa týká získavania mucidin-rezistentnýchmutantov po mutagenéze s MhClg a indentifikácie mutantov patriacich k novému mitodhondriál-nemu genetickému lokusu MUC3. Příklad 1
Buňky mucidin-citlivého kmeňa kvasiniek Saccharomyces cerevisiae 55R5-3C /a ural/rástli aerobne 24 hod pri 30°C v tekutom glukózovom médiu zloženia: 2 % glukóza,- 1 % pep-ton, 1 % kvasničný extrakt, 0,005 % uráčil. Vyrastené buňky sa potom inokulovali na kon-centráciu 2 x 10^ buniek/ml do čerstvého média zloženia: 2 % glukóza, 1 % pepton, 1 % • kvasničný extrakt, 0,005 % uráčil a 7 mM MnClg. Po 20 hod rastu pri 30°C sa suspenzia kva-siniek premyla, zriedila a v množstve 10^ buniek/Petriho misku vysiala na pevné glycero-lové médium s mucidinom zloženia: 2 % agar,*2 % glycerol, 1 % pepton,'1 % kvasničný ex-trakt, 0,005 % uráčil, 0,5 ^ug/ml mucidinu. Po 10 dňoch raetu vyrastené kolonie na Petri-ho miskách predstavujú buňky mucidin-rezistentných mutantov, ktorých maximálna rezisten-cia k mucidinu po vyčistění kultúry klonováním sa stanoví na pevných glycerolových mé-diách vyššie popísaného zloženia obsahujúcich rdzne koncentrácie mucidinu v rozmedzí 0,5až 10,0/Ug/ml.
Po overení mitochondriálnej povahy mutácií získaných mucidin-rezistentných mutantovkvasiniek mitotickou segregáciou sa indentifikácia mutantov patriacich k lokusu /-om/odlišnému od lokusov MUC1 a MUC2 stanoví alelickým testom. Buňky analyzovaných" mucidin-rezistentných mutantov například K50 resp. Kil ako aj buňky štandardaých mucidin-rezistent-ných kmeňov kvasiniek Saccharomyces cerevisiae ale opačného pohlavia 3D a 101-4B /PV 5531-75/ rástli 24 hod pri 30°C v tekutom glukózovom médiu obsahujúcom 2 % glukózu, 1 % pepton, 1 % kvasničný extrakt, 0,005 % adenín a 0,005 % uráčil. Potom sa 1 ml vyrastených buniekz odpovedajúcich kmeňov K50 a 3D resp. K50 a 101-4B /podobné Kil a 3D ako aj K 11 a 101-4B/ přidá k 3 ml čerstvých tekutých glukózových médií, premieša sa po 24 hod kultivéciesa vyseje na Petriho misky obsahujúce minimálně glukózové médium zloženia: 3 % agar, 2 %glukóza, 0,001 % inozitol, 0,0001 % tiamín, 0,0001 % pyridoxín, .0,0001 % kyselina nikoti-nová, 0,0001 % kyselina para-amínobenzoová, 0,0001 % pantoténan vápenatý, 0,00001 % biotina 0,00002 % riboflavín, 0,1 % ΚΗ2Ρ©4, 0,05 % MgSO4 x 7 HgO, 0,05 % KC1, 0,12 % /WH4/2S04,0,2 % NaNOj, 0,001 % PeSO4 x 7 HgO. Po troch dňoch vyrastené buňky na Petriho miskách' sázmyjú a vysejú v množstve 40 až 90 buniek/ Petriho misku na minimálně glukózové médiumtoho istého zloženia. Po troch dňoch vyrastené kolonie buniek na Petriho miskách sa repli-kujú na pevné· glycerolové médiá ne.obsahujúce mucidin a súčasne aj na médiá obsahujúce mu-

Claims (3)

197 796 cidin v koncentraci! 0,5/Ug/ml média obsahujúceho glycerol /2 %/ ako zdroj uhlíka a ener-gie. Po troch a 6 dňoch kolonie buniek nevyrastené na mucidin-obsahujúcich glycerolových .médiaách ale súčasne dobré rastúce na glycerolových médiách neobsahujúcich mucidin před-stavujú diploidné mucidin-senzitivně kvasinky, ktorých objavenie sa vo frekvenciách vač-šíeh ako 2 % v oboch typoch križenia so štandardnými kmeňmi 3D a 101-4B indikuje existen-ciu nových mutácii mapujúcich sa v mitochondriálnom-genóme v oblasti inej než MUC1 a MUC2. V případe mutantných kmeňov K50 a Kil frekvencié odpovedajúcich mucidin-senzitívnych re-kombinantov boli následovně: 8,3 % v křížení K50 x 3D, 4,3 % v křížení K50 x 101-4B, 13il% v křížení Kil x 3D a 8,4 % v křížení Kil x 101-4B. Uvedené kmene mucidin-rezistentných kvasiniek sú použitelné vo výskume štruktúry,funkcie, biogenézy a genetiky organel eukaryotických buniek, v. hygienickéj službě a v prie-mysle antibiotik pri mikrobiologiekom stanovení roznych látok v přítomnosti mucidinu ako ajpri výskume a získávání prirodzených alebo syntetických analógov antifungálneho antibio-tika mucidinu. PREDMET VYNÁLEZU
1. Sposob získavania mucidin-rezistentných mutantov nového typu, vyznačujúci sa tým, žez kultúry mikroorganizmov citlivých k inhibičnému účinku antifungálneho antibiotikamucidinu například kvasiniek, obzvlášť rodu Saccharomyces sa priamo alebo po posobenímutagénneho faktora například.iónov dvojmocného mangánu za rastových alebo nerastovýchpodmiénok, selektujú rastom na pevných alebo v tekutých médiách obsahujúcich mucidin a zdroje uhlíka a energie, obzvlášť nefeirmentabilné, mucidin-rezistentné mutanty, kto-rých determinanty rezistencůe podliehajú mitotickej segregácii, a ktoré po křížení soštandardnými mucidiň-rezistenthými kmeňmi, obsahujúcimi odpovedajúce mutácie v lokusochMUC1 a MUC2, tvoria mucidin-senzitívne rekombinanty.
2. Kmeň.mikroorganizmu Saccharomyces cerevisiae K50, CCY 22-15-8, rezistentný k mucidinu,inutáoiou v novom lokuse mitochondriálneho genómu označenom.MOC 3, získaný sposobom po-dlá bodu 1.
3. Kmen mikroorganizmu Saccharomyces cerevisiae Kil, CCY 22-15-9, rezistentný k mucidinu, mutáciou v novom lokuse mitochondriálneho genomu označenom MUC3, získaný sposobompodlá bodu 1. ' '
CS98178A 1978-02-15 1978-02-15 Method of obtaining new type of mutants having mucidine resistance CS197796B1 (en)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CS98178A CS197796B1 (en) 1978-02-15 1978-02-15 Method of obtaining new type of mutants having mucidine resistance

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CS98178A CS197796B1 (en) 1978-02-15 1978-02-15 Method of obtaining new type of mutants having mucidine resistance

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CS197796B1 true CS197796B1 (en) 1980-05-30

Family

ID=5343048

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CS98178A CS197796B1 (en) 1978-02-15 1978-02-15 Method of obtaining new type of mutants having mucidine resistance

Country Status (1)

Country Link
CS (1) CS197796B1 (cs)

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Magni et al. Different rates of spontaneous mutation during mitosis and meiosis in yeast
Olsen et al. Viability of soil bacteria: optimization of plate-counting technique and comparison between total counts and plate counts within different size groups
Pontecorvo et al. The genetics of Aspergillus nidulans
Lobo et al. Genetics of yeast hexokinase
Gold et al. Conditions for fruit body formation in the white rot basidiomycete Phanerochaete chrysosporium
Goffrini et al. RAG1 and RAG2: nuclear genes involved in the dependence/independence on mitochondrial respiratory function for growth on sugars
Swiezynski et al. Heterokaryon formation in Coprinus lagopus
Haanstad et al. Microbial symbiotes of the ambrosia beetle Xyloterinus politus
Cohn et al. Regulatory mutations affecting ornithine decarboxylase activity in Saccharomyces cerevisiae
Hynes et al. The genetic analysis of regulation of amidase synthesis in Aspergillus nidulans: II. Mutants resistant to fluoroacetamide
Holmberg et al. A mutant of Saccharomyces cerevisiae temperature sensitive for flocculation. Influence of oxygen and respiratory deficiency on flocculence
Hofer et al. The genetic fine structure of nonsense suppressors in Schizosaccharomyces pombe: I. sup3 and sup9
Algeri et al. IMP1/imp1: a gene involved in the nucleo-mitochondrial control of galactose fermentation in Saccharomyces cerevisiae
Tiraby et al. Integration efficiencies of spontaneous mutant alleles of amiA locus in pneumococcal transformation
Snow Toward genetic improvement of wine yeast
CS197796B1 (en) Method of obtaining new type of mutants having mucidine resistance
AU628291B2 (en) Riboflavin producing strains of microorganisms, method for selecting, and method for fermentation
CA1305679C (en) Efficient riboflavin production with yeast
Whelan et al. Genetic complementation in Cryptococcus neoformans
Farkas-Himsley et al. Studies on nitrate reduction by Escherichia coli
Tohoyama et al. Isolation and some characteristics of cadmium-resistant yeast
CN113789295B (zh) 野生型酿酒酵母单倍体子囊孢子的制备方法
Bistis Pleomorphism and growth cycles in Trichophyton mentagrophytes
Takahashi et al. Heterothallic behavior of a homothallic strain in Saccharomyces yeast
Valle et al. Effects of caffeine, cyclic 3′, 5′ adenosine monophosphate and cyclic 3′, 5′ guanosine monophosphate in the development of the mycelial form of Sporothrix schenckii