CS196962B1 - Process for preparing 14c-alpha-d-glucoso-1-phosphate with high molar radioactivity and radiochemical purity - Google Patents

Process for preparing 14c-alpha-d-glucoso-1-phosphate with high molar radioactivity and radiochemical purity Download PDF

Info

Publication number
CS196962B1
CS196962B1 CS43578A CS43578A CS196962B1 CS 196962 B1 CS196962 B1 CS 196962B1 CS 43578 A CS43578 A CS 43578A CS 43578 A CS43578 A CS 43578A CS 196962 B1 CS196962 B1 CS 196962B1
Authority
CS
Czechoslovakia
Prior art keywords
glucose
phosphate
glucoso
high molar
radiochemical purity
Prior art date
Application number
CS43578A
Other languages
English (en)
Slovak (sk)
Inventor
Peter Biely
Vladimir Farkas
Jan Koebl
Original Assignee
Peter Biely
Vladimir Farkas
Jan Koebl
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Peter Biely, Vladimir Farkas, Jan Koebl filed Critical Peter Biely
Priority to CS43578A priority Critical patent/CS196962B1/cs
Publication of CS196962B1 publication Critical patent/CS196962B1/cs

Links

Landscapes

  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Saccharide Compounds (AREA)

Description

POPIS VYNÁLEZU (51) Int. Cl.3 C 07 H 11/04 ČESKOSLOVENSKÁ SOCIALISTICKÁ
REPUBLIKA ( 19 ) 196 962 (II) (Bl)
K AUTORSKÉMU OSVEDČENIU
(61) (23) Výstavná priorita(22) Přihlášené 23 01 7θ(21) PV 435-78
ÚŘAD PRO VYNÁLEZY
A OBJEVY (46) Zverejnené 31 07 79(45) Vydané 01 3 82 (75) \utor vynálezu
BIBLY PETER RNDr. CSc., FARKAS VLADIMÍR ing.,· CSc., BRATISLAVA aKOLBL JÁN ing., PRAHA (54)
Spdsob přípravy ^4C-oL-D-glukózo-l-fosfátu vysokej molovéj rádioaktivity a rádio-chemickej čistoty 1
Vynález sa týká spdsobu přípravy ob-D-glukózo-l-fosfátu značeného rádioaktívnym uhlí-kom * 14C vysokej molovéj rádioaktivity enzymatickou cestou a jeho izolácie z reakčnej zmesi.Vynález rieši nový postup přípravy uvedenej látky vysokej rádiochemickej čistoty a špetíi-fickej rádioaktivity. 14C-ot-D-glukózo-l-fosfát sa využívá v biochémii ako enzýmový substrát v řade reakcií,ktoré sa podieTajú na výstavbě a degradácii štrukturálnych a zásobných polysacharidov živýchbuniek rdzneho pdvodu. Stúdium mechanizmu takýchto reakcií, ako i vlastností odpovedajúcichenzýmov vyžaduje dostupnost glukózo-l-fosfátu značeného rádioaktívnymi izotopmi. Okrem to-ho 14C- oC-D-glukózo-l-fosfát sa dá využit ako medziprodukt enzýmovej alebo chemickéj synté-zy rĎznych nukleozid difosfát glukóz značených v glukózovej časti molekuly (N. K. Kochetkova V. N. Shibaev, Adv. Carb. Chem. 28. 307 (1973))· “C-ot-D-glukózo-l-fosfát sa bežne připravuje dvorná spdsobmi. Prvý spdsob, chemickásyntéza, je založený na kondenzácii peracetylovaných alebo halogénperacetylovaných derivá-tov l^C-D-glukózy s kyselinou fosforečnou, jej soTami a derivátmi v bezvodom prostředí(T. Posternak, Methods in Enzymology, Vol. 3, str. 129; L. L. McDonald, J. Org. Chem. 27.1107, 1962; Y. Y. Kusov a N. V. Shibaev, Usp. Biol. Khim. 12, 182, 1971). Uvedené chemicképostupy sú poměrně pracné a v niektorých prípadoch vedú i k tvorbě malých množstiev ft-anomé-ru glukózo-l-fosfátu, ktorý je nutné od požadovaného produktu separovat. Druhou metodou napřípravu 14C-ot-D-glukózo-l-fosfátu je enzymatická fosforolýza 14C-z«ačeného škrobu kata-196962 198 982 lyžovaná rastlinnými fosforylázami (R. M. McCready a W. Z. Zassid, Methode in Bnzymology,Vol. 3, str. 137» Academie Preaa, New York, 1957). Táto metoda vyžaduje dostupnost škrobuznačeného uhlíkom vysokej molovej rádioaktivity.
Teraz bol vypracovaný nový netradičný spčsob enzymatickéj přípravy 14C-eo-D-glukózo--1-foefátu vysokej molovej rádioaktivity, ktorý vychádza z ^^C-D-glukózy. Podstata vynálezuspočívá v tom, že ^^ff-D-glukóza sa účinkom kvasničnýeh enzýmov konvertuje na UDP-^^C-D-glu-kózu, ktorá sa priamo v pčvodnej reakčnej zmesi po odstránení rušivých látok alkalickoufosfatázou kvantitativné rozloží účinkom hádej fosfodiesterázy na uridín monofosfáta 14C- ot-D-glukózo-l-fosfát, ktorý sa z reakčnej zmesi izoluje preparatívnou papierovouChromatografiou. Posfodiesteráza štiepi UDP-^C-D.glukózu výlučné za vzniku oC-anoméru 14C--D-glukózo-l-fosfátu, čo sa potvrdilo enzymatickými testami. Produkt sa účinkom fosfogluko-mutázy konvertuje na 14C-glukózo-6-fosfát, ktorý sa identifikoval enzymaticky pomocou glu-kózo-6-fosfát dehydrogenázy. Výhodou tohto postupu přípravy 14C-eí,-D-glukózo-l-fosfátu je, že: - vychádza z 14C-D-glukózy domáceho pčvodu, - poskytuje jednoznačné ot-anomér 140-D-glukózo-l-fosfátu, - produkt sa izoluje z reakčnej zmesi jednoduchým apdsobom, papierovou chromatografiou, - všetky reakcie vedúce k produktu, počnúc od 14G-D-glukózy až po jeho chromatografickúseparáciu a čistenie, sa uskutočnujú v jedinej reakčnej nádobě, - β výnimkou niekoTkých komerčně dostupných enzýmov sa v postupe využívajú domáce suroviny, * 14 * - produkt má rovnakú molovú rádioaktivitu ako východzia C-D-glukoza. Příklad prevedenia
Reakčná zmes obsahujúca v 2,4 ml (celkový objem) 0,4 ml 0,1 M Tris-HCl pufru (pH 7,8), 1 mg ^C-D.glukózy špecifickej rádioaktivity 555 Bg/ mmol a vyššej, 12 mg trojsodnej soliuridín 5’-trifosfátu, 20 mg fosfoglycerátu sodného, 10 mg hexahydrátu chloridu horečnatého, O, 05 mg glukózo-l,6-difosfátu, 0,2 mg hexokinázy, 0,2 mg anorganickéj pyrofosfatázy a 15 mgbielkovín enzýmového preparátu připraveného z pekárenských kvašiniek podTa A. Wright a P. W. Robbins (Biochem, Biophys. Acta 104. 594, 1965) sa- inkubuje při 30 °C, kým sa nedo-siahne maximálna konverzia 14C-D-glukózy na UDP-14C-D-rglukózu. Inkubačná zmee sa potomzahřeje na 100 °C na 2 až 3 min. a po ochladení pH zmesi upraví sa nasýteným roztokomNa2COj na hodnotu zhodnú s farebným prechodom fenolftaleinu. Přidá sa 50 pl preparátualkalickej fosfatázy a po 3 až 6 hodinovej inkubácii sa zmes op&ť zahřeje na 100 °C na 2 až 3 min. Do vychladanéj zmesi, ktorej pH je zhodné s farebným prechodom fenolftaleinusa přidá 50 pl roztoku fosfodiesterázy z Crotalus terr, terr a zmes sa nechá inkubovaťpri laboratórnej teplote 2 až1 3 hodiny. Po tomto čase, ke3 sa dosiahne úplný rozklad uri-dín difosfo-^4C-D-glukózy na uridín 5’-monofosfát a 14C-et-D-glukózo-l-fosfát, sa inkubač-ná zmes zahustí na 0,5 až 1 ml a chromatografuje sa na vodou premytých papieroch Whatman 3 MM v systéme etanol - 1 M octan amónny (pH 7,3) 5 : 2 po dobu 60 až 80 hodin. Chromato-gram sa po lokalizácii uridín monofosfátu a ^C-D-glukózo-l-fosfátu dčkladne odsolí premy-

Claims (1)

  1. 3 196 962 tím v absolútnom etanole a acetone. 14C- ot-D-glukozo-l-fosfát sa eluuje z vysušeného chro-matogramu vodou a přečistí sa rechromatografiou za tých istých podmienok. Výtažky na vý-chodziu ^4C-D-glukozu sa pohybujú v rozmedzí 40 až 60 %. PŘED MET VYNÁLEZU TA* z Spósob přípravy C-oč-D-glukozo-l-fosfátu vysokéj molovej rádioaktivity a rádioche-mickej čistoty enzymatickou syntézou, vyznačujúci sa tým, že 14C-D-glukóza sa enzymatickyprevedie na uridín difoso-14C-D-glukózu, ktorá sa priamo v pfivodnej reakónej zmesi po· roz-klade ostatných fosforylováných derivátov alkalickou fosfatázou štiepi účinkom hádej fos-fodiesterázy na uridín 5’-monofosfát a 14C-eC-D-glukozo-l-fosfát, ktorý sa zo zmesi izolu-je papierovou chromatografiou.
CS43578A 1978-01-23 1978-01-23 Process for preparing 14c-alpha-d-glucoso-1-phosphate with high molar radioactivity and radiochemical purity CS196962B1 (en)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CS43578A CS196962B1 (en) 1978-01-23 1978-01-23 Process for preparing 14c-alpha-d-glucoso-1-phosphate with high molar radioactivity and radiochemical purity

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CS43578A CS196962B1 (en) 1978-01-23 1978-01-23 Process for preparing 14c-alpha-d-glucoso-1-phosphate with high molar radioactivity and radiochemical purity

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CS196962B1 true CS196962B1 (en) 1980-04-30

Family

ID=5336412

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CS43578A CS196962B1 (en) 1978-01-23 1978-01-23 Process for preparing 14c-alpha-d-glucoso-1-phosphate with high molar radioactivity and radiochemical purity

Country Status (1)

Country Link
CS (1) CS196962B1 (cs)

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Sheu et al. Stereochemical courses of nucleotidyltransferase and phosphotransferase action. Uridine diphosphate glucose pyrophosphorylase, galactose-1-phosphate uridylyltransferase, adenylate kinase, and nucleoside diphosphate kinase
US4804748A (en) 7-deaza-2'-deoxyguanosine nucleotides
Simon et al. Convenient syntheses of cytidine 5'-triphosphate, guanosine 5'-triphosphate, and uridine 5'-triphosphate and their use in the preparation of UDP-glucose, UDP-glucuronic acid, and GDP-mannose
Heidlas et al. Gram-scale synthesis of uridine 5'-diphospho-N-acetylglucosamine: comparison of enzymic and chemical routes
Hayashi et al. A chemoenzymatic synthesis of UDP-(2-deoxy-2-fluoro) galactose and evaluation of its interaction with galactosyltransferase
Leloir et al. Uridine nucleotides
Heath et al. The enzymatic synthesis of guanosine diphosphate colitose by a mutant strain of Escherichia coli
US5770407A (en) Process for preparing nucleotide inhibitors of glycosyltransferases
Kozarich et al. Ribonucleoside phosphates via phosphorimidazolidate intermediates. Synthesis of pseudoadenosine 5'-triphosphate
Hinton et al. T4 RNA Ligase joins 2'-deoxyribonucleoside 3', 5'-bisphosphates to oligodeoxyribonucleotides
Uchiyama et al. Rapid conversion of unprotected galactose analogs to their UDP-derivatives for use in the chemo-enzymatic synthesis of unnatural oligosaccharides
Serianni et al. [14] Enzymic synthesis of13C-enriched aldoses, ketoses, and their phosphate esters
Huang et al. Formation of 3-(2′-deoxyribofuranosyl) and 9-(2′-deoxyribofuranosyl) nucleosides of 8-substituted purines by nucleoside deoxyribosyltransferase
Ma et al. High yielding one-pot enzyme-catalyzed synthesis of UDP-glucose in gram scales
Nigam et al. Limiting Factors for Glycogen Storage in Tumors: I. Limiting Enzymes
Khaled et al. Synthesis of unnatural sugar nucleotides and their evaluation as donor substrates in glycosyltransferase-catalyzed reactions
GB2614570A (en) C-nucleoside monophosphate synthesis
Leonard et al. Synthesis of fluorescent nucleotide analogues: 5'-mono-, di-, and triphosphates of linear-benzoguanosine, linear-benzoinosine, and linear-benzoxanthosine.
CS196962B1 (en) Process for preparing 14c-alpha-d-glucoso-1-phosphate with high molar radioactivity and radiochemical purity
JP4601060B2 (ja) アジド化アミノ糖ヌクレオチド及びその応用
Secrist III et al. 2-Fluoroformycin and 2-aminoformycin. Synthesis and biological activity
Frederiksen et al. The effect of deoxyadenosine 1-N-oxide on nucleic acid synthesis in ascites tumor cells in vitro
Brunngraber et al. Nucleotide phosphotransferase from Escherichia coli. Purification and properties
Bryant et al. Phosphorothioate substrates for T4 RNA ligase
US5750389A (en) Purified saccharose-synthase, process for its production and its use