CS196655B1 - Sposob přípravy uri<lín-<Iiíosío-14C-D-<|lukurónovej kyseliny vysokej mólovej aktivity a rádíoehemickej čistoty - Google Patents

Sposob přípravy uri<lín-<Iiíosío-14C-D-<|lukurónovej kyseliny vysokej mólovej aktivity a rádíoehemickej čistoty Download PDF

Info

Publication number
CS196655B1
CS196655B1 CS768776A CS768776A CS196655B1 CS 196655 B1 CS196655 B1 CS 196655B1 CS 768776 A CS768776 A CS 768776A CS 768776 A CS768776 A CS 768776A CS 196655 B1 CS196655 B1 CS 196655B1
Authority
CS
Czechoslovakia
Prior art keywords
uridine
glucuronic acid
diphospho
glucose
radiochemical purity
Prior art date
Application number
CS768776A
Other languages
English (en)
Slovak (sk)
Inventor
Vladimir Farkas
Peter Biely
Jan Koelbl
Original Assignee
Vladimir Farkas
Peter Biely
Jan Koelbl
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Vladimir Farkas, Peter Biely, Jan Koelbl filed Critical Vladimir Farkas
Priority to CS768776A priority Critical patent/CS196655B1/cs
Publication of CS196655B1 publication Critical patent/CS196655B1/cs

Links

Landscapes

  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)

Description

ČESKOSLOVENSKÁ SOCIALISTICKÁ
REPUBLIKA (19)
POPIS VYNÁLEZU 196655 (II) (Bl)
K AUTORSKÉMU OSVEDČENIU —:- (51) Int. Cl.3 - C 07 H 19/20 (22) Přihlášené 29 11 76 (21) (PV 7687-76) (40) Zverejnené 31 07 79
ÚŘAD PROVYNÁLEZYA OBJEVY (45) Vydané 15 07 81 (75) X -
Autor vynálezu FARKAŠ VLADIMÍR ing., CSc., BIELY PETER RNDr. CSc., BRATISLAVA
a K0LBL JAN, ing., PRAHA (54) Sposob přípravy iiri<lín-<liíoslo-14C-D-<|lukurónovej kyseliny vysekej mólovejaktivity a rádíochemickej čistoty
Predmetom vynálezu je sposob přípravy uridín-difosfo-146-D-glukurónovej kyseliny (UDPGK-14C)značenej rádioaktívnym uhlíkom 14C vysokej mó-lovej aktivity enzymatickou syntézou a sposobjej izoláeie z reakčnej zmesi. Vynález rieši novýmsposobom přípravu uvedenej látky vysokej rá-diochemickej čistoty, pričom mólová aktivitatakto pripravenej látky přesahuje 150 mCi/mmól.
Uridín difosfo-14C-D-glukurónová kyselina sapoužívá ako glukuronozylový donor při štúdiumechanizmu róznych enzymatických transgly-kozylačných reakcií vedúcich k biosyntéze pektí-nu, kyslých polysacharidov, a tvorbě róznychfenolických, steroidných a iných glykozidov. Uri-dín difosfo-14C-D-glukurónová kyselina sa v posled-nom čase stále viac využívá ako substrát pri sledo-vaní aktivit róznych hepatálnych transglykozyláz,ktoré sa zúčastňuj ú pri eliminácii rozmanitýchcudzorodých látok z organizmov vyšších živo-číchov. Z uvedeného je zřejmé, že uridín difosfo-14C-D-glukurónová kyselina nachádza široké možnostiuplatnenia hlavně v základnom biologickom výsku-me, ale aj v klinickej diagnostike a pri výskumekontroly znečistovania životného prostredia.
Uridín difosfo-14C-D-glukurónová kyselina sanajčastejšie připravuje selektívnou oxidáciou uridíndifosfo-14C-D-glukózy (UDPG-14C) s nikotínamidadenín difosfátom v přítomnosti enzýmu uridín difosfo-glukózo-dyhydrogenázy (J. L. Strominger,Η. M. Kalckar, J. Axelrod a E. S. Maxwell, J.Amer. Chem. Soc. 76, 6411 (1954)).
Spoločným problémom všetkých doteraz použí-vaných spósobov přípravy uridín difosfo-14C-D-glukurónovej kyseliny je izolácia produktu z reak-čnej zmesi. Doteraz používané metody iónomeni-čové alebo preparatlvna papierová elektroforézasú poměrně náročné na materiál i na přístrojovévybavenie. Metoda preparatívnej papierovej chro-matografie sa doteraz nedala použit vzhladomk nedokonalej separácii produktu od doprevádza-júcich cukorných fosfátov a nukleozid-fosfátovpřítomných v reakčnej zmesi.
Predmetom vynálezu je sposob přípravy uridín--difosfo-14C-D-glukurónovej kyseliny o vysokej mó-lovej aktivitě a rádíochemickej čistotě enzymatic-kou syntézou vyznačený tým, že sa ako východisko-vé} látky používá D-glukózy-14C, ktorá sa enzy-maticky prevedie na uridín difosfo-14C-D-glukózu,ktorá sa návaznou enzymatickou reakciou oxidujena uridín difosfo-14C-D-glukurónovú kyselinu, ktorása z reakčnej zmesi izoluje preparatívnou papiero-vou chromatografiou, čím sa z reakčnej zmesipósóbením alkalickej fosfatázy v přítomnosti fe-nolftaleínu ako iniciátora odstránia doprevádzajúcecukorné fosfáty a nukleozid-5’-fosfáty. Předmětný vynález uvádza nový sposob enzy- matickej syntézy uridín difosfo-14C-D-glukurónovej 196655

Claims (2)

  1. kyseliny vysokej rádioaktívnej čistoty a mólovejaktivity prevyšujúcej 150 mCi/mmól a izóláciu tejtolátky z reakčnej zmesi. Tvorba uridín difosfo-14C-D-glukurónovej kyseliny z východiskové] D-glukó-zy 14C je katalýzo váná enzymovým systém ompřipraveným z pekárenského droždia, obohatenýmenzýmom uridín-difosfo-D-glukózo-dehydrogená-zou. Izolácia produktu z reakčnej zmesi sa prevádzajednoduchou a málo nákladnou metodou papierovejchromatografie. Aplikácia tejto metody je umožně-ná elimináciou doprevádzajúcich fosfátov glukózya nukleozid-5’-fosfátov ich selektívnou enzymatic-kou hydrolýzou. Výtažky takto pripravenej uridíndifosfo-14C-D-glukurónovej kyseliny sa pohybujúv rozmedzí 95 až 85 % vzhladom k východiskovejD-glukóze-14C. Tento spósob přípravy uridín-difosfo-14C-D-glukurónovej kyseliny prináša tietovýhody: 1. vysoké výtažky
  2. 2. Tahká izolácia produktu z reakčnej zmesi 3. úspora času 4. úspora materiálu 5. možnost použitia domácích surovin. Příklad prevedenia Reakčná zmes obsahuje následovně poměryvýchodiskových látok alebo ich násobky: 0,4 ml0,1 M Tris-HCl pufru (pH 7,8); 1 mg D-glukózy-14Cšpecifickej mólovej aktivity 150 mCi/mmól a vyš-šej; 12 mg trojsódnej soli uridín trifosfátu; 20 mgfosfoglycerátu sodného; 10 mg chloridu horečnatéhohexahydrátu; 0,05 mg glukózo-1,6-difosfátu, 0,2 mghexokinázy; 0,2 mg anorganickej pyrofosfatázy,15 mg proteinu enzýmového preparátu pripravené- ho z pekárenského droždia postupom podlá A.Wright a P. W. Robbins, Biochim. Biophys. Acta104, 594 (1965). Celkový objem reakčnej zmesisa upraví na 2,4 ml prídavkom redestilovanej vodya zmes sa inkubuje při 30 °C. Po ukončení konverzieD-glukózy-14C na uridín-difosfo-14C-D-glukózu (PV7687-76) sa pH inkubacnej zmesi upraví na 8,7a přidá sa 15 /zinólov NAD, 10 /tmólov EDTAa 0,25 mg uridín-difosfo-D-glukózo-dehydrogenázy.Zmes sa inkubuje pri laboratórnej teplote pokiafsa nedosiahne kvantitatívnej oxidácie uridín--difosfo-14C-D-glukózy na uridín difosfo-14C-D-gluku-rónovú kyselinu. Zmes sa potom krátko ohřejena 100 °C, denaturované proteiny sa odstrániacentrifugáciou. K roztoku sa přidá kvapka 1 %fenolftaleínu a 0,02 mg alkalickej fosfatázy. Kon-stantně hodnota pH sa udržiava přidávánímroztoku uhličitanu sodného. Po ukončení hydro-lýzy fosfátov, ěo je indikované stálosťou růžovéhozafarbenia roztoku, sa zmes nanesie na chromato-grafický papier a chromatograíuje v systéme kyse-lina izomáselná - 1M hydroxid amónny (5 : 3)v 20 hodin. Chromatogram sa potom dokladnépremyje v acetone a uridín difosfo-14C-D-gluku-rónová kyselina sa eluuje vodou. Ďalšie čistenieproduktu sa prevádza rechromatografiou na pa-pieri v systéme etanol-ΙΜ octan amónny, pH 7(2,5 : 1). Vynález má rozsiahly význam pre lacnú a efektív-nu přípravu uridín-difosfo-14C-D-glukurónovej ky-seliny vo formě komerčného preparátu použité Γ-ného na výskumné účely, pričom sa využívajúv prevažnej miere domáce suroviny. Vytváravšetky předpoklady pre zahájenie výroby prepa-rátu, ktorý sa doteraz musel nakupovat zo štátovdolárovej oblasti. PREDM ET Spósob přípravy uridín-difosfo-14C-D-glukuró-novej kyseliny vysokej mólovej aktivity a rádio-chemickej čistoty enzymatickou syntézou, vyzna-čujúci sa tým, že ako východisková látka sa používáD-glukóza-14C, ktorá sa enzymaticky prevedie nauridín difosfo-14C-D-glukózu, ktorá sa návaznouenzymatickou reakciou oxiduje na uridín difosfo- YNÁLEZU 14C-D-glukurónovú kyselinu, ktorá sa z reakčnejzmesi izoluje preparatívnou papierovou chromato-grafiou, pričom sa z reakčnej zmesi pósobením alka-lickej fosfatázy v přítomnosti fenolftaleínu akoindikátora odstránia doprevádzajúce cukrové fos-fáty a nukleozid-5’-fosfáty. Tisk /81 j
CS768776A 1976-11-29 1976-11-29 Sposob přípravy uri<lín-<Iiíosío-14C-D-<|lukurónovej kyseliny vysokej mólovej aktivity a rádíoehemickej čistoty CS196655B1 (cs)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CS768776A CS196655B1 (cs) 1976-11-29 1976-11-29 Sposob přípravy uri<lín-<Iiíosío-14C-D-<|lukurónovej kyseliny vysokej mólovej aktivity a rádíoehemickej čistoty

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CS768776A CS196655B1 (cs) 1976-11-29 1976-11-29 Sposob přípravy uri<lín-<Iiíosío-14C-D-<|lukurónovej kyseliny vysokej mólovej aktivity a rádíoehemickej čistoty

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CS196655B1 true CS196655B1 (cs) 1980-03-31

Family

ID=5426439

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CS768776A CS196655B1 (cs) 1976-11-29 1976-11-29 Sposob přípravy uri<lín-<Iiíosío-14C-D-<|lukurónovej kyseliny vysokej mólovej aktivity a rádíoehemickej čistoty

Country Status (1)

Country Link
CS (1) CS196655B1 (cs)

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Lennarz et al. The chemical characterization and enzymatic synthesis of mannolipids in Micrococcus lysodeikticus
Heidlas et al. Gram-scale synthesis of uridine 5'-diphospho-N-acetylglucosamine: comparison of enzymic and chemical routes
Brodelius et al. The synthesis of three AMP‐analogues: N6‐(6‐aminohexyl)‐adenosine 5′‐monophosphate, N6‐(6‐aminohexyl)‐adenosine 2′, 5′‐bisphosphate, and N6‐(6‐aminohexyl)‐adenosine 3′, 5′‐bisphosphate and their application as general ligands in biospecific affinity chromatography
Storey et al. Uridine compounds in glucuronic acid metabolism. 2. The isolation and structure ofuridine-diphosphate-glucuronic acid'
Heath et al. The enzymatic synthesis of guanosine diphosphate colitose by a mutant strain of Escherichia coli
Hulcher et al. Metabolic basis for disaccharide preference in a Cellvibrio
Matsuhashi et al. Enzymatic synthesis of cytidine diphosphate 3, 6-dideoxyhexoses: I. Over-all reactions
BEAU et al. Chemical behaviour of cytidine 5′‐monophospho‐N‐acetyl‐β‐d‐neuraminic acid under neutral and alkaline conditions
Sable Pentose metabolism in extracts of yeast and mammalian tissues
Oths et al. Stereochemistry and mechanism of the GDP-mannose dehydratase reaction
Gaugler et al. Biological Mechanisms Involved in the Formation of Deoxy Sugars: VII BIOSYNTHESIS OF 6-DEOXY-l-TALOSE
Kuninaka et al. Studies on 5′-Phosphodiesterases in Microorganisms: Part I. Formation of Nucleoside-5′-monophosphates from Yeast Ribonucleic Acid by Penicillium citrinum
Matsuhashi Enzymatic Synthesis of Cytidine Diphosphate 3, 6-Dideoxyhexoses: II. REVERSIBLE 2-EPIMERIZATION OF CYTIDINE DIPHOSPHATE PARATOSE
Palmer et al. Cellobiose Metabolism in Aerobacter aerogenes: II. PHOSPHORYLATION OF CELLOBIOSE WITH ADENOSINE 5′-TRIPHOSPHATE BY A β-GLUCOSIDE KINASE
Shimizu et al. [44] Synthesis of coenzyme A and its biosynthetic intermediates by microbial processes
CS196655B1 (cs) Sposob přípravy uri&lt;lín-&lt;Iiíosío-14C-D-&lt;|lukurónovej kyseliny vysokej mólovej aktivity a rádíoehemickej čistoty
Bean et al. Choline metabolism in pneumococci
Hanna et al. Synthesis of α-d-Glucose 1, 6-Diphosphate, α-d-Mannose 1, 6-Diphosphate, α-d-Ribose 1, 5-Diphosphate, and N-Acetyl-α-d-glucosamine 1, 6-Diphosphate
Dietrich et al. Glycerol diphosphate disaccharide-pentapeptide: a functional group of the lipid intermediate in cell wall glycopeptide synthesis
van Pelt et al. Transfer of sialic acid in α2-6 linkage to mannose in Manβ1-4GlcNAc and Manβ1-4GlcNAcβ1-4GlcNAc by the action of Galβ1-4GlcNAc α2-6-sialyltransferase
Seyama et al. Specific tritium labeling of uridine diphosphogalactose 4-epimerase by D-[1-3H] galactose
Elbein The enzymatic synthesis of cytidine diphosphate tyvelose
Hey et al. Biosynthesis of Tyvelose: THE PURIFICATION AND PROPERTIES OF CYTIDINE DIPHOSPHATE d-GLUCOSE OXIDOREDUCTASE
Bretthauer et al. The biosynthesis of guanosine diphosphate mannose and phosphomannan by Hansanula holstii
Pallanca et al. Chemo-enzymic synthesis of guanosine 5′-diphosphomannose (GDP-mannose) and selected analogues