CS195151B1

CS195151B1 - Způsob stanovení poměru hydrogenovaných alkaloidů ergotoxinové skupiny

Info

Publication number: CS195151B1
Application number: CS749277A
Authority: CS
Inventors: Bohumil Trtik
Original assignee: Bohumil Trtik
Priority date: 1977-11-15
Filing date: 1977-11-15
Publication date: 1980-01-31

Description

Vynález se týká stanovení poměru hydrogenovaných alkaloidů ergotoxinové skupiny /dihydroergokristinu, dihydroergokryptinu a dihydroergokorninu/ přítomných ve formě solí nebo bází. Znalost přesného poměrového zastoupení hydrogenovaných ergotoxinových alkaloidů v dihydroergotoxinových solích nebo bázích je důležitá z hlediska jejich účinku a tedy nezbytná i při kontrole meziproduktů a finálních výrobků při jejich výrobě.

Pro stanovení poměru hydrogenovaných ergotoxinových alkaloidů se používá chromatograf ického oddělení jednotlivých složek buď chromatografií papírovou, tenkovrstevnou,. plynovou nebo kapalinovou. Vyhodnocení obsahu oddělených alkaloidů se provádí podle použité metody chromatografíe buď extrakcí alkaloidů z papíru s konečným fotometrickým vyhodnocením, denzitometrickým vyhodnocením z tenké vrstvy, nebo vyhodnocením záznamů z kapalinového nebo plynového chromatografu. Uvedené metody se vyznačují některými nedostatky, zvláště metody používající k rozdělení papírové chromatografie jsou značně časově náročné /1,5 až 2 pracovní směny/, ostatní metody jsou zase značně přístrojově náročné, navíc, metoda plynové chromatografie je problematické vzhledem k částečnému štěpení alkaloidů při stanovení. Také příprava chromatogramu pro denzitometrické účely vyžaduje zvláštní péči a celý výsledek depzitometrického stanovení je závislý na získání kvalitně oddělených skvrn jednotlivých složek na chromatogramu, který se ne vždy dostatečně daří.

Nově byla vypracována jednoduchá metoda přístrojově nenáročná, vyznačující se tím, že se směs hydrogenovaných ergotoxinových alkaloidů rozpustí ve směsi chloroform - methanol 9 : 1, nanese do pruhu na start tenké vrstvy celulózy impregnované dimethylf tal á tem, provede, chromatografické oddělení jednotlivých složek v kyselé soustavě tvořené 0,05 N HC1, chromatogram se s výhodou bez sušení zdetekuje protažením 0,5X roztokem p-dimethylaminobenzaldehydu v eyklohexanu a vystaví se účinku par kyseliny chlorovodíkové, načež se kvantitativně oddělí zóny s rozdělenými alkaloidy, provede se extrakce z celulózy do vodného roztoku kyseliny octové, s výhodou 25X, barevná reakce přidáním van Urkova Činidla, oddělení celulózy filtrací či odstředěním a vyhodnocením barevnosti získaných roztoků na spektrofotometru*

Jak je patrno, je způsob 'stanovení podle vynálezu založen na chromátografickém oddělení složek dihydroergotoxinu na tenké vrstvě celulózy impregnované dimethylftalátem, přičemž bylo dosaženo důležité výhody - dobrého a spolehlivého dělení alkaloidů i za odlišných chromatografických podmínek /vlhkost desek, kvalita použitých rozpouštědel, teplota, vlhkost vzduchu, hodnota komory apod./. Použití kyselé eluční soustavy, s výhodou 0,05 N roztoku HC1, umožňuje vysokou nanášku vzorku na chromatogram, je výhodné z hlediska stálosti alkaloidů a poskytuje výhodné hodnoty Rp /dihydroergokrístin 0,19, dihydroergokryptin 0,35 a dihydroergokornin 0,48/. Po chromatografii se chromatogram s výhodou bez sušení a odstraňování dimethylftalátu z desky, zdetekuje protažením roztokem p-dimethylaminobenzaldehydu /0,5%/ v cyklohéxanu a vystavením na nejkratší nutnou dobu účinku par kyseliny chlorovodíkové. Extrakce se provede u kvantitativně vyškrábnutých modrých pruhů alkaloidů vodným roztokem kyseliny octové a roztokem p-dimethylaminobenzaldehydu ve zředěné kyselině sírové /Van Urkova činidla/.

Po oddělení celulózy, s výhodou odstředěním nebo filtrací přes sintr G 4 a proběhnutí barvotvorné reakce /30 min./ se změří extinkce roztoků na vhodném přístroji a vypočte procentuální zastoupení jednotlivých složek ^zdihydroergotoxinu.

Výhodou způsobu stanovení podle vynálezu je spolehlivé, dělení jednotlivých složek, nový rychlý způsob detekce a extrakce, přístrojová nenáročnost a kvalitní výsledky a představuje tedy především zlepšení spolehlivosti kontroly jednotlivých stupňů výroby a finálních výrobků, solí nebo bází dihydroergotoxinu. Stanovení lze provést s dostatečnou přesností až do obsahu 5 Z některé složky /např. pří poměru 50 : 45 í 5 nebo 95 : 5 : 0 apod./. Při nižším obsahu než 5 Z je stanovení méně přesné.

Další podrobnosti vyplývají z následujících příkladů provedení.

Příklady provedení

Příklad 1

Tenká vrstva celulózy /komerční výrobky, např,,; Lucefol^R Quick, fy Kavalier Sázava, nebo DC-Karten CE Celíulose fUr DC, fy Riedel de HaUn AG, Seelze-Hanover, NSR/ se naimpregnuje ponořením do 4% roztoku dimethylftalátu v chloroformu a 5 minut se odvětrává v proudu studeného vzduchu. Potom se na start do 7 cm dlouhého pruhu nanese 40 <ul roztoku /50 mg v 10 ml směsi chloroform-methanol 9 ; 1/. Předvíjí se 1 cm za start 0,05 N kyselinou chlorovodíkovou, odsuší se v proudu studeného vzduchu a pak se opět vyvíjí 0,05 N kyselinou chlorovodíkovou jako eluční soustavou v nasycené komoře do vzdálenosti 12 cm. Deska se potom suší v proudu studeného nebo teplého vzduchu do vizuelního oschnutí /10 min, resp. 5 min/, ponoří se na deset sekund do 0,5% roztoku p-dimethylaminobenzaldehydu v cyklohexanu a po krátkém odsuŠení /1 min/ se deska vystaví ve vhodné komoře účinku par kyseliny chlorovodíkové tak dlouho, až jsou pruhy jednotlivých alkaloidů zřetelné. /Proud vzduchu je realizován např. vysoušečem vlasů umístěným nad chromatografickou deskou ve vzdálenosti 25 cm/. Ergotoxinové alkaloidy mají tyto hodnoty Ry: dihydroergokristin 0,19, di-

Claims

Způsob stanovení poměru hydrogenovaných alkaloidů ergotoxinové skupiny, vyznačující se tím, že se směs hydrogenovaných ergotoxinových alkaloidů rozpustí ve směsi chloroform - metanol 9:1, nanese do pruhu na start tenké vrstvy celulózy impregnované dimetylftalátem, provede chromatografické oddělení jednotlivých složek v kyselé soustavě tvořené 0,05 N HC1, chromatogram se s výhodou bez sušení zdetekuje hydroergokryptin 0,35, dihydroergokornin 0,48. Jednotlivé pruhy se kvantitativně vyškrábnou do zkumavek, přidají se 2 ml 25% kyseliny octové a po důkladném protřepáni 4 ml ván Urkova činidla /0,125 g p-dimethylaminobenzaldehydu v 100 ml 65% kyseliny sírové s 0,1 ml 5% roztoku chloridu železitého/. Opět sje důkladně promísí a po 5 minutách se zfiltruje přes sintr G 4 nebo odstředí 30 minut při 3000 ot/min, čiré roztoky se po’30 minutách od přidání činidla změří na vhodném spektrofotometru při 580 nm v 1 cm kyvetách proti slepé zkoušce připravené ze 2 ml 25% kyseliny octové a 4 ml van Urkova činidla. Výpočet hmotnostníoh procent jednotlivých alkaloidů se provede podle vztahu;

KO = % KRX =

KRY ₌

Li/ + /Akry Mkry/ + • + /Ako · Μχο/ = ^χ ^akri - ^mkrx . 100 > X A , M .100 KRY KRY X f , M , 100 KO ' KO

kde: Akri » Akry, Aro jsou' hodnoty extinkcí dihydroergokristínu, dihydroergokryptinu a dihydroergokorninu.

MkrIi ^kry, Mko jsou molekulové hmotnosti solí nebo bází'dihydroergokristinu, dihydroergokryptinu a dihydroergokorninu.

Postup je vhodný pro vzorky s poměrem složek přibližně' 1:1:1.

Příklad 2

Postup je vhodný pro vzorky dihydroergotoxinu, v nichž převládá některá složka.

Postupuje se jako v příkladě 1, jen β tím rozdílem, že se k vyškrábnutým pruhům převládající složky přidají 4 ml 25% kyseliny octové + 8 ml van Urkova činidla a ke zbývajícím dvěma /případně jednomu/ pruhům /pruhy/ po 2 ml 25% kyseliny octové + 4 ml van Urkova činidla. Při výpočtu poměru se potom u převládající složky musí zjištěná extinkce násobit dvěma.

VYNÁLEZU protažením 0,5% roztokem para-dimethylaminobenzaldehydu v cyklohexanu a vystaví účinku par kyseliny chlorovodíkové, načež se kvantitativně oddělí zóny s rozdělenými alkaloidy, provede se extrakce z celulózy do vodného roztoku kyseliny octové s výhodou 25%» barevná reakce přidáním vanUrkova činidla, oddělení celulózy filtrací nebo odstředěním a vyhodnocení barevností získaných roztoků na spektrofotometru.