CN219777696U - 一种测定禽蛋中残留兽药的测试卡 - Google Patents

一种测定禽蛋中残留兽药的测试卡 Download PDF

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陆锦辉
刘博超
张恩会
李成城
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Abstract

本实用新型公开了一种测定禽蛋中残留兽药的测试卡,其包括:下卡壳,下卡壳内置试纸条槽,其用于放置试纸条;上卡壳;上卡壳的表面设有样本孵育反应槽,样本孵育反应槽用于存储胶体金标记物和作为孵育反应的反应容器;密封板,密封板用于封盖或敞开样本孵育反应槽;加样孔,与试纸条的样品垫垂直相对;检测窗,与试纸条的NC膜垂直相对。本实用新型测试卡改良为上卡壳样本孵育反应槽内的胶体金标记物,通过将经前处理得到的样本加入样本孵育反应槽充分孵育反应2min,可从根本上提高免疫竞争反应灵敏度,还解决了胶体金标记物额外需要装载孔的问题,集试剂装载孔和反应槽于卡一身,贴合的密封板保障了干粉试剂的存储,方便运输与操作。

Description

一种测定禽蛋中残留兽药的测试卡
技术领域
本实用新型涉胶体金免疫层析技术领域,特别是涉及了一种测定禽蛋中残留兽药的测试卡。
背景技术
禽蛋食品中残留以上兽药对人体会造成危害,所以需要对禽蛋中残留兽药进行检测。当前该方面的检测专利主要包括高效液相色谱-串联质谱法(专利号CN102706991A)和ELISA法(专利号CN110579604A),以以上两项发明专利为代表的高效液相色谱-串联质谱法和ELISA法虽然能够对鸡蛋中残留兽药进行定量检测,但需要大型的仪器设备,无法用于养殖场和交易市场的即时检测。之后,仅专利号为CN210690597U的专利公开了一种禽蛋类抗生素残留检测用多联卡,该专利文件中提出该多联卡一次性前处理样品后,可同时检测多个项目,具有小体积、大通量检测的优点,但该实用新型未从小分子免疫竞争检测原理上将常规的胶体金结合垫分离出来以提前与待测样本孵育反应充分,无法提高检测灵敏度,无法满足以上磺胺类等4类药物国家禁用检测限标准。而将胶体金结合垫单独分离出来制备成反应孵育孔见于专利号CN105467115A,该专利涉及胶体金免疫层析技术领域,基于小分子免疫竞争检测原理将胶体金标记物置于ELISA孔中和牛奶样本充分反应以提高牛奶中黄曲霉毒素M1的检测灵敏度,灵敏度可达0.05ng/mL,但需要额外的ELISA孔用于存储胶体金标记物。
为此,本实用新型揭示了一种自带样本孵育反应槽适用于竞争性检测禽蛋中残留兽药的测试卡。
实用新型内容
基于此,有必要针对上述技术问题,提供一种测定禽蛋中残留兽药的测试卡,来解决当下禽蛋食品安全免疫层析卡检测灵敏度低的问题以及胶体金标记物存储问题,为禽蛋兽药残留的现场即时检验工作提供保障。
为了解决上述技术问题,本实用新型采用了如下所述的技术方案:
一种测定禽蛋中残留兽药的测试卡,其包括:
下卡壳,所述下卡壳内置试纸条槽,其用于放置试纸条;
上卡壳,其与所述下卡壳相对位组装成壳体;所述上卡壳的表面设有样本孵育反应槽,所述样本孵育反应槽用于存储胶体金标记物和作为孵育反应的反应容器;
密封板,所述密封板用于封盖或敞开所述样本孵育反应槽;
加样孔,所述加样孔设置于所述上卡壳且贯穿所述上卡壳,与所述试纸条的样品垫垂直相对;
检测窗,所述检测窗设置于所述上卡壳且贯穿所述上卡壳,与所述试纸条的NC膜垂直相对。
作为本实用新型提供的测定禽蛋中残留兽药的测试卡的一种优选实施方式,所述上卡壳表面内凹形成所述样本孵育反应槽。
作为本实用新型提供的测定禽蛋中残留兽药的测试卡的一种优选实施方式,所述上卡壳开设有插口,所述密封板通过所述插口进出。
作为本实用新型提供的测定禽蛋中残留兽药的测试卡的一种优选实施方式,所述密封板上表面开设有防滑凸点。
作为本实用新型提供的测定禽蛋中残留兽药的测试卡的一种优选实施方式,所述密封板的材料为EVA。
作为本实用新型提供的测定禽蛋中残留兽药的测试卡的一种优选实施方式,所述下卡壳内置有4个所述试纸条槽,用于分别承载磺胺类兽药检测试纸条、氟喹诺酮类兽药检测试纸条、氯霉素类兽药检测试纸条及甲砜霉素兽药检测试纸条;所述上卡壳表面开设有4个所述加样孔和4个所述检测窗。
作为本实用新型提供的测定禽蛋中残留兽药的测试卡的一种优选实施方式,所述加样孔旁边设置有加样箭头。
作为本实用新型提供的测定禽蛋中残留兽药的测试卡的一种优选实施方式,所述下卡壳和上卡壳分别设置有相对应的固定槽和固定脚。
作为本实用新型提供的测定禽蛋中残留兽药的测试卡的一种优选实施方式,所述试纸条包括有设置在下卡壳顶端并位于样本垫一端的NC膜,所述NC膜的顶端设置有检测线,所述NC膜的顶端,并位于靠近检测线的一端设置有质控线。
作为本实用新型提供的测定禽蛋中残留兽药的测试卡的一种优选实施方式,设置在PVC底板顶端的吸水纸,所述吸水纸靠近质控线远离检测线的一端。
与现有技术相比,本实用新型有以下有益效果:
本实用新型测试卡从小分子免疫竞争检测原理上将常规的胶体金结合垫分离出来,改良为上卡壳样本孵育反应槽内的胶体金标记物(干粉试剂),通过将经前处理得到的样本加入样本孵育反应槽充分孵育反应2min,可从根本上提高免疫竞争反应灵敏度,还解决了胶体金标记物(干粉试剂)额外需要装载孔的问题,集试剂装载孔和反应槽于卡一身,贴合的密封板保障了干粉试剂的存储,方便运输与操作。
本实用新型适合现场即时检测,无需大型的仪器设备,操作简便,无需专业技术人员。
本实用新型设置了4个试纸条槽,放置了4个试纸条,如磺胺类兽药检测试纸条、氟喹诺酮类兽药检测试纸条、氯霉素类兽药检测试纸条及甲砜霉素兽药检测试纸条,用于分别测试磺胺类兽药、氟喹诺酮类兽药、氯霉素类兽药和甲砜霉素兽药,采用本实用新型的测试卡后,磺胺类兽药检测限可达0.5ppb,氟喹诺酮类兽药检测限可达0.5ppb,氯霉素检测限可达0.1ppb,甲砜霉素检测限可达0.1ppb;同时所述测试卡可同时检测禽蛋中多种残留兽药,操作到结果判读只需5min,省时便利,可极大地提高操作者检测效率;判读结果简单明了:若C线条带颜色浅于T线,则待测样本内无兽药残留;若C线条带颜色深于T线,则待测样本中有兽药残留;若C线不显色则测试卡失效。
附图说明
为了更清楚地说明本实用新型中的方案,下面将对实施例描述中所需要使用的附图作一个简单介绍,显而易见地,下面描述中的附图是本实用新型的一些实施例,对于本领域普通技术人员来讲,在不付出创造性劳动的前提下,还可以根据这些附图获得其他的附图。
图1为本实用新型的完整组装结构示意图;
图2a、b分别为本实用新型的上卡壳正面和反面的结构示意图;
图3为本实用新型的试纸条结构示意图;
图4为本实用新型的装载有试纸条的下卡壳结构示意图;
图5a-e分别为本实用新型禽蛋中残留兽药联检卡的结果判读阴性、阳性、阳性、失效、失效的示意图。
附图中,各标号所代表的部件列表如下:
1、下卡壳;2、上卡壳;3、密封板;4、样本孵育反应槽;5、插口;6、加样箭头;7、加样孔;8、样品垫;9、检测窗;10、检测线;11、质控线;12、NC膜;13、PVC底板;14、吸水纸;15、固定槽;16、试纸条槽;17、固定脚;18、防滑凸点。
具体实施方式
为了使本技术领域的人员更好地理解本实用新型方案,下面将结合本实用新型实施例中的附图,对本实用新型实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述,显然,所描述的实施例仅仅是本实用新型一部分的实施例,而不是全部的实施例。基于本实用新型中的实施例,本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例,都应当属于本实用新型保护的范围。
为了使本技术领域的人员更好地理解本实用新型方案,下面将结合附图,对本实用新型实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述。
在本实用新型的描述中,需要理解的是,术语“中心”、“纵向”、“横向”、“长度”、“宽度”、“厚度”、“上”、“下”、“前”、“后”、“左”、“右”、“竖直”、“水平”、“顶”、“底”“内”、“外”、“顺时针”、“逆时针”、“轴向”、“径向”、“周向”等指示的方位或位置关系为基于附图所示的方位或位置关系,仅是为了便于描述本实用新型和简化描述,而不是指示或暗示所指的装置或元件必须具有特定的方位、以特定的方位构造和操作,因此不能理解为对本实用新型的限制。此外,术语“第一”、“第二”仅用于描述目的,而不能理解为指示或暗示相对重要性或者隐含指明所指示的技术特征的数量。由此,限定有“第一”、“第二”的特征可以明示或者隐含地包括至少一个该特征。在本实用新型的描述中,“多个”的含义是至少两个,例如两个,三个等,除非另有明确具体的限定。
需要说明的是,在不冲突的情况下,本实用新型中的实施例及实施例中的特征和技术方案可以相互组合。
应注意到:相似的标号和字母在下面的附图中表示类似项,因此,一旦某一项在一个附图中被定义,则在随后的附图中不需要对其进行进一步定义和解释。
实施例1
请参阅图1-5,本实用新型实施例中,一种测定禽蛋中残留兽药的测试卡,其包括:
下卡壳1,其在四周设置有固定槽15;
上卡壳2,其在四周设置有与固定槽15对应的固定脚;具体装配时,上卡壳2通过固定槽15和固定脚17配合组装下卡壳1形成壳体;
样本孵育反应槽4,样本孵育反应槽4设置于上卡壳2的顶端;
密封板3,密封板3用于封盖或敞开样本孵育反应槽4;
加样孔7,加样孔7设置于上卡壳2的顶端,加样孔7贯穿所述上卡壳2设置,便于加样至试纸条上;
检测窗9,检测窗9设置于上卡壳2的顶端中部,检测窗9贯穿所述上卡壳2设置,便于观察试纸条的显色情况;
试纸条,设置于下卡壳1的内部,并位于检测窗9和加样孔7的下方,用于测试待测样本。
实施例2
基于实施例1的基础上进一步优化,上卡壳2上还开设有插口5,插口5位于样本孵育反应槽4的顶端;密封板3可通过插口5进出,以实现封盖或敞开样本孵育反应槽4。
实施例3
基于实施例1的基础上进一步优化,上卡壳2的表面内凹可直接形成样本孵育反应槽4,便于生产制造。可以理解的是,还可以通过其他方式获得样本孵育反应槽4。
实施例4
基于上述实施例1-3的任一实施例的进一步优化,请参考图3和图4,下卡壳1内设置有4个试纸条槽16,用于装载4个试纸条,从左至右分别对应磺胺类兽药试纸条、氟喹诺酮类兽药试纸条、氯霉素试纸条和甲砜霉素试纸条。需要说明的是,并不仅仅是4个,还可以是更多或更少。
上卡壳2设置有4个样本孵育反应槽4,用于存储胶体金标记物和作为孵育反应的反应容器。对应的,试纸条中不再含喷涂有胶体金标记物的结合垫结构,将胶体金标记物冻存为干粉存储在样本孵育反应槽4中待使用,胶体金标记物包含胶体金分别标记的磺胺类兽药单克隆抗体、氟喹诺酮类兽药单克隆抗体、氯霉素单克隆抗体及甲砜霉素单克隆抗体,针对不同检测项目,胶体金标记单克隆抗体的量不同,具体如下:
1ml胶体金溶液标记8.1μg磺胺类兽药单克隆抗体;
1ml胶体金溶液标记7.2μg氟喹诺酮类兽药单克隆抗体;
1ml胶体金溶液标记9.0μg氯霉素单克隆抗体;
1ml胶体金溶液标记7.2μg甲砜霉素单克隆抗体;
复溶在胶体金标记物保存液(5%海藻糖、5%蔗糖、5%甘露醇和5%吐温,10mM Tris-Hcl,pH8.0)中,每个样本孵育反应槽中放置200ul体系,使用东富龙冻干机LYO-5按以下配方进行冻干:
-45℃冷冻4h,抽真空1h,一次干燥12h,解析干燥2h;制备得到的胶体金标记物干粉试剂装载于样本孵育反应槽4,使用密封板3进行封闭。
请参考图3,试纸条由PVC底板13支撑,PVC底板13顶端粘贴有样品垫8、NC膜12和吸水纸14,其中NC膜14位于样品垫8和吸水纸14中间,三者之间互相叠贴1-2mm,值得注意的是,样品垫8和吸水纸14均叠贴在NC膜12上端,NC膜12上表面分别包被有检测线10和质控线11,检测线10上包被有兽药偶联蛋白抗原,质控线11上包被有羊抗鼠二抗。
具体质控线11包被兽药偶联蛋白抗原量和C线包被羊抗鼠二抗量如下:
磺胺类兽药试纸条的质控线包被抗原浓度为1.2mg/ml,C线包被羊抗鼠二抗浓度为0.5mg/ml,包被量为1μl/cm;
氟喹诺酮类兽药试纸条的质控线包被抗原浓度为3.3mg/ml,C线包被羊抗鼠二抗浓度为0.5mg/ml,包被量为1μl/cm;
氯霉素类兽药试纸条的质控线包被抗原浓度为2.7mg/ml,C线包被羊抗鼠二抗浓度为0.5mg/ml,包被量为1μl/cm;
甲砜霉素兽药试纸条的质控线包被抗原浓度为2.5mg/ml,C线包被羊抗鼠二抗浓度为0.5mg/ml,包被量为1μl/cm。
请参考图2a、b,上卡壳2顶端对应设置有4个样本孵育反应槽4,用于装载胶体金标记物干粉试剂,4个检测窗9和4个加样孔7分别设置于上卡壳2顶端,检测窗9位于NC膜12的上方,加样孔7位于样品垫8的上方。为了便于快速识别检测项目,在上卡壳2的表面位于样本孵育反应槽4的旁边标记有检测项目简称,如SAs、FQs、CPL和TAP。
请参考图1、图2a、b和图4,组装时,下卡壳1内部试纸条槽16装载试纸条,需值得注意的是吸水纸14一端靠近样本孵育反应槽4;接着通过下卡壳1内部的4个固定槽15与上卡壳2内部的4个固定脚17对应组装以对试纸条进行固定,组装后的本实用新型联检卡请参阅图1。
请参考图1和图2a、b,密封板3的材质优选为EVA材料,EVA材料是一种密封橡胶材质,具有良好的密封性。进一步地,密封板3上端设置有防滑凸点18,用于抽拉开启样本孵育反应槽4。
请参考图5a-e,若T线颜色较C线颜色深,则结果判读为阴性,如图5a所示;若T线颜色较C线颜色浅,甚至消失,则结果判读为阳性,如图5b、5c所示;若C线不显色,则表明本检测卡失效,如图5d、5e所示。
此外,本实用新型实施例中的样本前处理方式具体如下:
取新鲜禽蛋破碎蛋壳,充分涡旋混匀蛋清和蛋黄后,称取0.5g禽蛋混合液于1.5ml离心管中,向离心管中加入500ml PBS(100mM,pH7.4),充分涡旋混匀,12000r/min离心5min,取200ul上清液即为前处理后的样本。
本实用新型的具体工作过程和工作原理如下:
该联检卡在使用的时候,首先将联检卡放于水平桌面,捏住防滑点18抽出EVA材料密封板3,使用移液器向样本孵育反应槽4中加入200μl待测样本,充分吹打混匀,使待测样本与样本反应槽4中的胶体金标记的兽药单克隆抗体充分孵育反应2min后,使用移液器吸取所有孵育反应后的混合液,加入带有加样箭头6的加样孔7,计时3min,透过检测窗9观察检测线10和质控线11显色情况,进行比色判读结果。若待测样本中无兽药残留,则样本孵育反应槽4中存在大量未结合兽药的胶体金标记的兽药单克隆抗体,则与检测线10上包被的兽药偶联蛋白抗原强烈反应,检测线10显色出比质控线11较深的酒红色条带;随着待测样本中存在兽药残留,且残留量逐渐增多时,样本孵育反应槽中未结合兽药的胶体金标记的兽药单克隆抗体逐渐减少,则可与检测线10上包被的兽药偶联蛋白抗原结合的胶体金标记的兽药单克隆抗体也逐渐减少,检测线10显色出比质控线11较浅的酒红色条带,当样本中残留兽药量足够大时,检测线10不显色,质控线11显色出酒红色条带;若测试中,质控线11不显色,则所述联检卡失效。
在本实用新型中,除非另有明确的规定和限定,术语“安装”、“相连”、“连接”、“固定”等术语应做广义理解,例如,可以是固定连接,也可以是可拆卸连接,或成一体;可以是机械连接,也可以是电连接或彼此可通讯;可以是直接相连,也可以通过中间媒介间接相连,可以是两个元件内部的连通或两个元件的相互作用关系,除非另有明确的限定。对于本领域的普通技术人员而言,可以根据具体情况理解上述术语在本实用新型中的具体含义。
显然,以上所描述的实施例仅仅是本实用新型一部分实施例,而不是全部的实施例,附图中给出了本实用新型的较佳实施例,但并不限制本实用新型的专利范围。本实用新型可以以许多不同的形式来实现,相反地,提供这些实施例的目的是使对本实用新型的公开内容的理解更加透彻全面。尽管参照前述实施例对本实用新型进行了详细的说明,对于本领域的技术人员来而言,其依然可以对前述各具体实施方式所记载的技术方案进行修改,或者对其中部分技术特征进行等效替换。凡是利用本实用新型说明书及附图内容所做的等效结构,直接或间接运用在其他相关的技术领域,均同理在本实用新型专利保护范围之内。

Claims (10)

1.一种测定禽蛋中残留兽药的测试卡,其特征在于,包括:
下卡壳(1),所述下卡壳(1)内置试纸条槽(16),其用于放置试纸条;
上卡壳(2),其与所述下卡壳(1)相对位组装成壳体;所述上卡壳(2)的表面设有样本孵育反应槽(4),所述样本孵育反应槽(4)用于存储胶体金标记物和作为孵育反应的反应容器;
密封板(3),所述密封板(3)用于封盖或敞开所述样本孵育反应槽(4);
加样孔(7),所述加样孔(7)设置于所述上卡壳(2)且贯穿所述上卡壳(2),与所述试纸条的样品垫(8)垂直相对;
检测窗(9),所述检测窗(9)设置于所述上卡壳(2)且贯穿所述上卡壳(2),与所述试纸条的NC膜(12)垂直相对。
2.根据权利要求1所述的一种测定禽蛋中残留兽药的测试卡,其特征在于,所述上卡壳(2)表面内凹形成所述样本孵育反应槽(4)。
3.根据权利要求1所述的一种测定禽蛋中残留兽药的测试卡,其特征在于,所述上卡壳(2)开设有插口(5),所述密封板(3)通过所述插口(5)进出。
4.根据权利要求1或3所述的一种测定禽蛋中残留兽药的测试卡,其特征在于,所述密封板(3)上表面开设有防滑凸点(18)。
5.根据权利要求1所述的一种测定禽蛋中残留兽药的测试卡,其特征在于,所述密封板的材料为EVA。
6.根据权利要求1所述的一种测定禽蛋中残留兽药的测试卡,其特征在于,所述下卡壳(1)内置有4个所述试纸条槽(16),用于分别承载磺胺类兽药检测试纸条、氟喹诺酮类兽药检测试纸条、氯霉素类兽药检测试纸条及甲砜霉素兽药检测试纸条;所述上卡壳(2)表面开设有4个所述加样孔(7)和4个所述检测窗(9)。
7.根据权利要求6所述的一种测定禽蛋中残留兽药的测试卡,其特征在于,所述加样孔(7)旁边设置有加样箭头(6)。
8.根据权利要求1所述的一种测定禽蛋中残留兽药的测试卡,其特征在于,所述下卡壳(1)和上卡壳(2)分别设置有相对应的固定槽(15)和固定脚(17)。
9.根据权利要求1所述的一种测定禽蛋中残留兽药的测试卡,其特征在于,所述试纸条包括有设置在下卡壳(1)顶端并位于样品垫(8)一端的NC膜(12),所述NC膜(12)的顶端设置有检测线(10),所述NC膜(12)的顶端,并位于靠近检测线(10)的一端设置有质控线(11)。
10.根据权利要求9所述的一种测定禽蛋中残留兽药的测试卡,其特征在于,设置在PVC底板(13)顶端的吸水纸(14),所述吸水纸(14)靠近质控线(11)远离检测线(10)的一端。
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