CN217278400U - 牛结核检测试剂盒 - Google Patents

Abstract

本实用新型公开一种牛结核检测试剂盒，其中，牛结核检测试剂盒包括试剂存放区和反应板存放区；所述试剂存放区至少放置有第一试剂瓶、第二试剂瓶和第三试剂瓶，所述反应板存放区放置有抗原包被板；所述第一试剂瓶容纳有荧光抗体溶液，所述第二试剂瓶容纳有清洗液，所述第三试剂瓶容纳有样本稀释液，所述抗原包被板表面设有抗原反应层。本实用新型技术方案简化检测操作并提升检测结果的准确性。

Description

牛结核检测试剂盒

技术领域

本实用新型涉及免疫层析检测技术领域，特别涉及一种牛结核检测试剂盒。

背景技术

牛结核分枝杆菌病(Brucellosis)由牛结核分枝杆菌(Brucella)引起的的一种人兽共患性传染病，我国将其列为二类动物疫病。以组织器官的结核结节性肉芽肿和干酪样、钙化的坏死病灶为特征。OIE将其列为B类疫病。结核分枝杆菌主要分三个型：即牛分枝杆菌(牛型)、结核分枝杆菌(人型)和禽分枝杆菌(禽型)。该病病原主要为牛型，人型、禽型也可引起本病。结核杆菌的形态，不同的型稍有差异,牛型结核菌比人型菌短粗，且着色不均匀。结核杆菌为严格的需氧菌，生长最适pH为：牛型结核菌5.9～6.9、人型菌7.4～8.0、禽型菌7.2。最适温度为37～38℃。结核杆菌的菌落、毒力及耐药性可发生变异。典型的菌落为粗糙型，毒力强，而变异菌株菌落则呈光滑型，毒力弱。结核杆菌对外界的抵抗力很强，在土壤中可生存7个月，在粪便内可生存5个月，在奶中可存活90天。

目前牛结核分枝杆菌的检测方法有多种，主要包括病原学和血清学两大方面。由于病原分离对实验室条件要求较高，且常呈现分离不出病原的现象等缺点，现已基本不用此方法；PCR方法和基因探针方法特异性强、敏感性高，但基因组DNA的提取也涉及到生物安全问题。现在方法有病原检查：显微镜检查(根据本菌的抗酸性特征，采用萋-尼氏染色或荧光抗酸染色，检查抗酸性杆菌)、病原分离鉴定(用选择性培养基分离，再通过培养和生化试验进行鉴定)、DNA寡聚核苷酸探针或聚合酶链反应(测定培养分离物或可疑动物组织样品中的牛分枝杆菌DNA)。迟发性过敏试验：皮内注射牛结核菌素，三天后测量注射部位的肿胀程度(本法为测定牛结核病的标准方法，也为国际贸易指定的诊断方法)。血清学反应：淋巴细胞增生试验、γ-干扰素试验和酶联免疫吸附试验。以上检测方法目前存在着特异性不好，灵敏度不够或者操作繁等因素。

实用新型内容

本实用新型的主要目的是提供一种牛结核检测试剂盒，旨在提供一种利用荧光时间分辨方法检测牛结核分枝杆菌抗体的检测试剂盒，用于牛牛结核分枝杆菌病的宰前检疫、进出口交易市场的现场诊断、动物流动过程中的检疫、以及方便于基层养殖户对牛牛结核分枝杆菌病的检测。在简化检测操作的同时并提升检测结果的准确性。

为实现上述目的，本实用新型提出的牛结核检测试剂盒，至少包括试剂存放区和反应板存放区；所述试剂存放区至少放置有第一试剂瓶、第二试剂瓶和第三试剂瓶，所述反应板存放区放置有抗原包被板；所述第一试剂瓶容纳有荧光抗体溶液，所述第二试剂瓶容纳有清洗液，所述第三试剂瓶容纳有样本稀释液，所述抗原包被板表面设有抗原反应层。

可选地，所述荧光抗体的激发波长为365纳米，所述荧光抗体的发射波长为610纳米；所述荧光抗体配置为Eu微球。

可选地，所述抗原反应层配置为EC蛋白抗原层。

可选地，所述牛结核检测试剂盒还包括减震垫，所述减震垫至少设有第一安装槽、第二安装槽、第三安装槽和第四安装槽；所述第一试剂瓶设于所述第一安装槽，所述第二试剂瓶设于所述第二安装槽，所述第三试剂瓶设于所述第三安装槽，所述抗原包被板设于所述第四安装槽。

可选地，所述抗原包被板包括平底孔板和容置板，所述平底孔板设于所述容置板上，所述平底孔板开设有多个反应孔，所述反应孔的表面设有所述抗原反应层。

可选地，所述平底孔板与所述容置板可拆卸连接。

可选地，所述平底孔板包括多组反应杯组，所述反应杯组包括多个依次串联固接的反应杯。

可选地，所述反应杯组的至少一侧开设有握持部。

可选地，所述平底孔板的顶部覆设有防尘膜。

可选地，所述牛结核检测试剂盒还包括真空包装袋，所述真空包装袋真空包装所述抗原包被板。

本实用新型技术方案在室温的条件下使用将样本稀释液对样本进行稀释，并把稀释好的样本加入抗原包被板中进行反应，静置反应过后用清洗液清洗抗原包被板并加入荧光抗体溶液染色，静置染色后再使用清洗液进行清洗并拍干残留的液体。将拍干后的抗原包被板置于分析仪中进行检测，根据荧光的强弱可直接判断并分析检测结果。

附图说明

为了更清楚地说明本实用新型实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本实用新型的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图示出的结构获得其他的附图。

图1为本实用新型牛结核检测试剂盒一实施例的结构示意图；

图2为本实用新型牛结核检测试剂盒一实施例的内部结构示意图；

图3为本实用新型牛结核检测试剂盒的平底孔板一实施例的结构示意图；

图4为本实用新型牛结核检测试剂盒的反应杯一实施例的半剖图；

图5为本实用新型牛结核检测试剂盒的容置板一实施例的结构示意图。

附图标号说明：

标号	名称	标号	名称
				1	牛结核检测试剂盒	11	第一试剂瓶
12	第二试剂瓶	13	第三试剂瓶
				21	抗原包被板	22	抗原反应层
211	平底孔板	212	容置板
				213	反应孔	214	反应杯
215	握持部	216	卡接槽
				217	卡接部	3	减震垫
31	第一安装槽	32	第二安装槽
				33	第三安装槽	34	第四安装槽

本实用新型目的的实现、功能特点及优点将结合实施例，参照附图做进一步说明。

具体实施方式

下面将结合本实用新型实施例中的附图，对本实用新型实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本实用新型的一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本实用新型中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本实用新型保护的范围。

需要说明，本实用新型实施例中所有方向性指示(诸如上、下、左、右、前、后……)仅用于解释在某一特定姿态(如附图所示)下各部件之间的相对位置关系、运动情况等，如果该特定姿态发生改变时，则该方向性指示也相应地随之改变。

在本实用新型中，除非另有明确的规定和限定，术语“连接”、“固定”等应做广义理解，例如，“固定”可以是固定连接，也可以是可拆卸连接，或成一体；可以是机械连接，也可以是电连接；可以是直接相连，也可以通过中间媒介间接相连，可以是两个元件内部的连通或两个元件的相互作用关系，除非另有明确的限定。对于本领域的普通技术人员而言，可以根据具体情况理解上述术语在本实用新型中的具体含义。

另外，若本实用新型实施例中有涉及“第一”、“第二”等的描述，则该“第一”、“第二”等的描述仅用于描述目的，而不能理解为指示或暗示其相对重要性或者隐含指明所指示的技术特征的数量。由此，限定有“第一”、“第二”的特征可以明示或者隐含地包括至少一个该特征。另外，全文中出现的“和/或”的含义，包括三个并列的方案，以“A和/或B”为例，包括A方案、或B方案、或A和B同时满足的方案。另外，各个实施例之间的技术方案可以相互结合，但是必须是以本领域普通技术人员能够实现为基础，当技术方案的结合出现相互矛盾或无法实现时应当认为这种技术方案的结合不存在，也不在本实用新型要求的保护范围之内。

本实用新型提出一种牛结核检测试剂盒1，样本中的牛结核杆菌抗体在包被有EC蛋白抗原的反应孔213反应，未结合的样本清洗倒掉，在反应孔213中的结核抗体与加入的稀土Eu3+偶联的SPA反应，通过清洗去除未结合的SPA，通过时间分辨荧光分析仪辨读结果。

参考图1至图5，在本实用新型一实施例中，该牛结核检测试剂盒1包括试剂存放区和反应板存放区；所述试剂存放区至少放置有第一试剂瓶11、第二试剂瓶12和第三试剂瓶13，所述反应板存放区放置有抗原包被板21；所述第一试剂瓶11容纳有荧光抗体溶液，所述第二试剂瓶12容纳有清洗液，所述第三试剂瓶13容纳有样本稀释液，所述抗原包被板21表面设有抗原反应层22。

本实用新型技术方案在室温的条件下使用将样本稀释液对样本进行稀释，并把稀释好的样本加入抗原包被板21中进行反应，静置反应过后用清洗液清洗抗原包被板21并加入荧光抗体溶液染色，静置染色后再使用清洗液进行清洗并拍干残留的液体。将拍干后的抗原包被板21置于分析仪中进行检测，根据荧光的强弱可直接判断并分析检测结果。

需要说明的是，检测样本包括但不限于全血、血浆、血清的至少一种，样本稀释液的成分至少包括磷酸氢二钠、磷酸二氢钠、乳化剂(TW-20)、聚乙烯吡咯烷酮40(PVP-40)和蔗糖。清洗液至少包括磷酸氢二钠、磷酸二氢钠、乳化剂(TW-20)。

本实用新型的牛结核检测试剂盒1的检测原理是通过时间分辨荧光分析法(Timeresolved fluoroisnmunoassay，TRFIA)进行检测的，它是一种特殊的荧光分析。利用了荧光的波长与其激发波长的巨大差异克服了普通紫外－可见分光分析法中杂色光的影响，同时，荧光分析与普通分光不同，光电接受器与激发光不在同一直线上，激发光不能直接到达光电接受器，从而大幅度的提高了光学分析的灵敏度。当进行超微量分析的时候，该分析法解决了激发光的杂散光的影响，并提高了检测的灵敏度。

普通的荧光标志物荧光寿命非常短，激发光消失，荧光也消失。但部分稀土金属(Eu、Tb、Sm、Dy)的荧光寿命较长，可达1－2ms，能够满足测量要求。于本实施例中，所述荧光抗体采用Eu微球，所述Eu微球的激发波长为365纳米，所述Eu微球的发射波长为610纳米。

荧光抗体溶液的制备包括：

(1)微球用0.05mol/L的MES缓冲液清洗多次；

(2)每50ug的Eu3+微球加入16ug的EDC中进行活化，并离心；

(3)再用0.05mol/L的MES缓冲液复溶，并加入妊娠相关广谱二抗SPA 10～100ug，磁力搅拌器搅拌混匀反应1～3小时；并离心；

(4)用0.02mol/L的Hris-Hcl缓冲液复溶，并加入终浓度为1％的BSA (Bovineserum albumin，牛血清白蛋白)，搅拌混匀，反应过液；

(5)反应完成后，16000g离心力离心15分钟，用0.02mol/L的Hris-Hcl复溶到Eu3+微球浓度到2mg/ml，低温保存。

其中离心力包括但不限于16000g，低温的具体温度包括但不限于4℃。

所述抗原反应层22配置为重组的牛结核分枝杆菌(EC)蛋白抗原层。具体而言，重组的牛结核分枝杆菌(EC)蛋白抗原层的制备过程包括：

(1)制备缓冲液，成分至少包括碳酸氢钠、过碳酸钠和蔗糖；

(2)用上述缓冲液稀释Ec蛋白抗原至2ug/ml；

(3)将稀释后的Ec蛋白抗原加入抗原包被板21的表面，低温包被过液，倒去多余的液体，并干燥形成重组的牛结核分枝杆菌(EC)蛋白抗原层。

于一实施例中，参考图2，所述牛结核检测试剂盒1还包括减震垫3，所述减震垫3至少设有第一安装槽31、第二安装槽32、第三安装槽33，所述第一试剂瓶11设于所述第一安装槽31，所述第二试剂瓶12设于所述第二安装槽32，所述第三试剂瓶13设于所述第三安装槽33，所述抗原包被板21可以放置于所述牛结核检测试剂盒1剩余的空间内。于另一实施例中，为了将抗原包被板21进行固定，所述减震垫3还开设有第四安装槽34，所述抗原包被板21设于所述第四安装槽34。

参考图2和图3，所述抗原包被板21包括平底孔板211和容置板212，所述平底孔板211设于所述容置板212上，所述平底孔板211开设有多个反应孔213，所述反应孔213的表面设有所述抗原反应层22。具体而言，平底孔板211开设有用于反应的反应孔213，并在反应孔213的壁面(包括但不限于底壁)设有抗原反应层22，加入稀释过后的样本于反应孔213内，样本可以直接与抗原反应层22进行反应。

所述平底孔板211与所述容置板212可拆卸连接。也即，平底孔板211是可以单独取出使用的，也可以是和容置板212一起取出使用。具体而言，所述平底孔板211包括多组反应杯组，所述反应杯组包括多个依次串联固接的反应杯214。当操作人员检测的数量不多时，可以定量地将反应杯组取出并倒入样品至反应杯214内反应以及倒入荧光抗体进行染色检测。进一步地，为了便于握持和移动，在所述反应杯组的至少一侧开设有握持部215。握持部215的设计一方面方便了操作人员的握持和使用，另一方面可以在握持部215的位置进行样本标记，再者还可以避免操作人员的手部污染到样本或内部的抗原反应层22。

具体的，参考图4和图5，容置板212设有安装槽，在安装槽的槽口位置向中心延伸有卡接部217，在反应杯214的外侧壁上周向设置有卡接槽216，如此一来，卡接部217可以嵌设于所述卡接槽216中，以使得反应杯214可以嵌设于容置板212的安装槽内，以实现平底孔板211与所述容置板212可拆卸连接。

所述牛结核检测试剂盒1还包括真空包装袋(未图示)，所述真空包装袋真空包装所述抗原包被板21，真空包装有利于延长抗原包被板21的使用寿命。另外，所述平底孔板211的顶部覆设有防尘膜(未图示)，防尘膜盖设于反应孔213的上部，防尘膜的设置可在反应的过程中防止外部的环境因素影响到实验过程和实验结果。

所述牛结核检测试剂盒1具体使用过程包括：

(1)取血浆、血清等血液样本并用样本稀释液至少100稀释；

(2)将稀释后的液体倒入处于常温的抗原包被板21的反应孔213中反应，至少静置30分钟；

(3)用清洗液多次清洗后拍干多余的液体；

(4)加入荧光抗染色，至少静置30分钟；

(5)用清洗液多次清洗后拍干多余的液体；

(6)将拍干的抗原包被板21置于时间分辨荧光分析仪检测，根据荧光的强弱判断分析结果。

以上所述仅为本实用新型的可选实施例，并非因此限制本实用新型的专利范围，凡是在本实用新型的发明构思下，利用本实用新型说明书及附图内容所作的等效结构变换，或直接/间接运用在其他相关的技术领域均包括在本实用新型的专利保护范围内。

Claims (10)

1.一种牛结核检测试剂盒，其特征在于，至少包括试剂存放区和反应板存放区；

所述试剂存放区至少放置有第一试剂瓶、第二试剂瓶和第三试剂瓶，所述反应板存放区放置有抗原包被板；

所述第一试剂瓶容纳有荧光抗体溶液，所述第二试剂瓶容纳有清洗液，所述第三试剂瓶容纳有样本稀释液，所述抗原包被板表面设有抗原反应层。

2.如权利要求1所述的牛结核检测试剂盒，其特征在于，所述荧光抗体的激发波长为365纳米，所述荧光抗体的发射波长为610纳米；

所述荧光抗体配置为Eu微球。

3.如权利要求1所述的牛结核检测试剂盒，其特征在于，所述抗原反应层配置为EC蛋白抗原层。

4.如权利要求1所述的牛结核检测试剂盒，其特征在于，所述牛结核检测试剂盒还包括减震垫，所述减震垫至少设有第一安装槽、第二安装槽、第三安装槽和第四安装槽；

所述第一试剂瓶设于所述第一安装槽，所述第二试剂瓶设于所述第二安装槽，所述第三试剂瓶设于所述第三安装槽，所述抗原包被板设于所述第四安装槽。

5.如权利要求4所述的牛结核检测试剂盒，其特征在于，所述抗原包被板包括平底孔板和容置板，所述平底孔板设于所述容置板上，所述平底孔板开设有多个反应孔，所述反应孔的表面设有所述抗原反应层。

6.如权利要求5所述的牛结核检测试剂盒，其特征在于，所述平底孔板与所述容置板可拆卸连接。

7.如权利要求6所述的牛结核检测试剂盒，其特征在于，所述平底孔板包括多组反应杯组，所述反应杯组包括多个依次串联固接的反应杯。

8.如权利要求7所述的牛结核检测试剂盒，其特征在于，所述反应杯组的至少一侧开设有握持部。

9.如权利要求5所述的牛结核检测试剂盒，其特征在于，所述平底孔板的顶部覆设有防尘膜。

10.如权利要求1至9任一项所述的牛结核检测试剂盒，其特征在于，所述牛结核检测试剂盒还包括真空包装袋，所述真空包装袋真空包装所述抗原包被板。

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