CN1994371A - 治疗心脑血管疾病的中药制剂及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明提供了治疗心脑血管疾病的中药制剂及其制备方法，它用丹参总酚酸脂质体或前体脂质体、灯盏细辛总黄酮脂质体或前体脂质体与辅料制作成注射制剂或口服制剂。与现有技术相比，本发明采用丹参总酚酸和灯盏细辛总黄酮的脂质体或前体脂质体作为药物载体，具有靶向性，药物用量少，毒性低，副作用小。

Description

治疗心脑血管疾病的中药制剂及其制备方法

技术领域

本发明是一种治疗心脑血管疾病的中药制剂及其制备方法，属于中药的技术领域。

技术背景

心脑血管疾病是指血液污染导致动脉粥样硬化，从而引起心脑缺血引发的相应病变。包括：高血压、动脉粥样硬化、冠心病(心梗和心绞痛)、脑缺血性病变(脑供血不足、脑血栓形成、脑梗塞)及脑出血。血液污染后导致的动脉粥样硬化及其并发症是导致死亡的第一杀手。在世界范围内动脉粥样硬化血栓形成而导致死亡比例占全部死亡人数的52％，远远超过第二位死因的肿瘤(24％)。为了达到更好的防治目的，许多发明人及药品企业做了大量的研究，也提供了一些优秀的治疗产品；如：本申请人申请名称为“治疗心脑血管疾病的中药制剂及其制备方法和应用”的专利申请，它采用了丹参、灯盏细辛有效部位配伍用于治疗心脑血管方面的疾病有确切的疗效；但是在深入研究中发现，采用有效部位的脂质体制剂更适合于生物体内降解、无毒性和无免疫原性，特别是脂质体作为药物载体，具有靶向性，从而减小药物剂量，降低毒性，减少副作用等。

发明内容

本发明的目的在于：提供一种治疗心脑血管疾病的中药制剂及其制备方法和应用；本发明针对现有技术，根据心脑血管疾病如冠心病、脑血栓、老年性痴呆等均因血管窄缩、血流量减少等原因致使供血不足引发疾病的原理，在实验筛选的基础上，采用丹参总酚酸脂质体和灯盏细辛总黄酮脂质体配伍做成制剂，优选出最佳的组方及工艺；得到的产品，特别是注射制剂产品能起到活血化淤、通脉舒络、改善血循环和代谢作用。例如冠心病是冠状动脉粥样硬化导致心肌缺血，缺氧而引起心脏病，两药合用，可起到改善心肌代谢作用、增加冠状动脉血流，改善心肌的血供以缓解心绞痛的作用。本发明对于治疗心脑血管疾病如冠心病、心绞痛、心律失常、脑血栓、老年性痴呆等有较好的疗效。而且本发明为脂质体作为药物载体，具有靶向性，从而减小药物剂量，降低毒性，减少副作用，其不良反应小、可供病人长期使用。

本发明是这样构成的：按照重量百分比计算，它是由丹参总酚酸脂质体或前体脂质体1～99％和灯盏细辛总黄酮脂质体或前体脂质体99～1％和适当的辅料制作而成。优选为：按照重量百分比计算，它是由丹参总酚酸脂质体或前体脂质体20～80％和灯盏细辛总黄酮脂质体或前体脂质体80～20％和适当的辅料制作而成。准确的说：按照重量百分比计算，它是由丹参总酚酸脂质体或前体脂质体40～60％与灯盏细辛总黄酮脂质体或前体脂质体60～40％和适当的辅料制作而成。

所述组方中的丹参总酚酸脂质体或前体脂质体可以是在丹参醇提取物、丹参水提取物、丹参水提醇沉提取物、丹参半仿生提取物、丹参超临界萃取物或者以上各提取物的精制品的基础上制得；灯盏细辛总黄酮脂质体或前体脂质体可以是在灯盏细辛醇提取物、灯盏细辛水提取物、灯盏细辛水提醇沉提取物、灯盏细辛半仿生提取物、灯盏细辛超临界萃取物或者以上各提取物的精制品的基础上制得。

所述的制剂可以是药剂学上任何可以接受的剂型：直接用于注射给药的注射液、直接供静脉滴注的静脉输液、需稀释后用于静脉滴注的注射用浓溶液和用冷冻干燥法或喷雾干燥法制得的注射用无菌粉末和无菌块状物以及片剂、胶囊剂、颗粒剂、滴丸剂、丸剂、软胶囊剂、口服液体制剂、口腔崩解片、舌下片或分散片剂。

制剂中含有酚酸类成分和黄酮类成分，以重量百分比计算，制剂中酚酸类成分含量不低于制剂中扣除辅料量和水分量的总固体量的50％，黄酮类成分含量不低于制剂中扣除辅料量和水分量的总固体量的50％，脂质体包封率不低于60％。

所述脂质体的制备方法是：灯盏细辛总黄酮脂质体和丹参总酚酸脂质体是采用薄膜法、硫酸铵梯度法、逆相蒸发法、溶剂注入法、去污剂分散法、钙融合法、冻结融解法、主动包封法、冷冻干燥法、复乳法、离心法、前体脂质体法、制备脂质体气雾剂中的一种或几种方法制得的。

所述制剂中的脂质体这样制备：按主药∶卵磷脂＝1∶11的比例取卵磷脂，按主药∶磷脂酰甘油＝1∶1.2的比例取磷脂酰甘油，溶于氯仿—异丙醇的混合溶液中；另取灯盏细辛总黄酮溶于pH5-8的磷酸盐缓冲液中，两相混合，水浴式超声15min后，于旋转蒸发仪中除去有机溶剂即得脂质体混悬液，同法制备丹参总酚酸脂质体混悬液，与灯盏细辛总黄酮脂质体混悬液混合后以不同的方法制成各种制剂。

所述制剂中的前体脂质体这样制备：取磷脂和辅料加一定量无水乙醇溶解，在恒温搅拌的条件下以一定速度注入丹参总酚酸或灯盏细辛总黄酮溶液中，继续恒温搅拌，降至室温，匀浆，膜过滤，灌装，充氮气，封口；将所得脂质体放入液氮中，冷冻后取出；室温使之溶，重复一次即得丹参总酚酸或灯盏细辛总黄酮前体脂质体，将丹参总酚酸前体脂质体和灯盏细辛总黄酮前体脂质体混合后以不同的方法制成各种制剂。

所述制剂中的分散片这样制备：取丹参总酚酸脂质体、灯盏细辛总黄酮脂质体混合，按主药∶辅料＝1.2∶1的比例加入磷酸钙，按主药∶辅料＝1.3∶1的比例加入微粉纤维素，以及按主药∶辅料＝2∶1的交联聚乙烯吡咯烷酮，混和均匀，用72％乙醇适量制软材，过20目筛制颗粒，50℃干燥，取出，过30目筛整粒，加入适量滑石粉、微粉硅胶，混和均匀，压片，即得分散片。

与现有技术相比，本申请人进行过大量实验研究，筛选出治疗冠心病心绞痛等疾病的处方为丹参总酚酸脂质体、灯盏细辛总黄酮脂质体，最佳配伍范围为丹参总酚酸脂质体40～60％与灯盏细辛总黄酮脂质体60～40％。采用本发明的工艺制备产品外观良好、质量稳定。

为证明本发明提供的药物具有有效的效果，申请人进行了一系列实验；

实验例1：对不同配比药效学比较研究

对实验性犬脑缺血的影响：取草犬，随机分成8组：模型组；丹参总酚酸脂质体/灯盏细辛总黄酮脂质体99/1组：简称99/1组；丹参总酚酸脂质体/灯盏细辛总黄酮脂质体80/20组：简称80/20；丹参总酚酸脂质体/灯盏细辛总黄酮脂质体60/40组：简称60/40；丹参总酚酸脂质体/灯盏细辛总黄酮脂质体40/60组：简称40/60；丹参总酚酸脂质体/灯盏细辛总黄酮脂质体20/80组：简称20/80；丹参总酚酸脂质体/灯盏细辛总黄酮脂质体1/99组：简称1/99；阳性对照消心痛组：简称消心痛，每组5只。腹腔注射3％戊巴比妥钠1.0ml/kg麻醉，固定于犬手术台上，然后在犬右外眼角与右耳根部1/2处(中点)，用电刀切开皮肤，分离肌肉。用手术专用颅骨钻钻开颅骨，以咬骨钳扩大颅骨孔，切开硬脑膜，找到大脑中动脉。先用多谱勒超声血流探测仪测定大脑中动脉血流速度，然后静脉注射给药，给药15min后，再次同前法测定大脑中动脉血流速度，随后立即将大脑中动脉结扎造成脑缺血。大脑中动脉结扎6小时后，分离双侧颈总动脉并夹闭之，即刻从右侧颈总动脉夹闭处的远心端灌注2.0ml龙胆紫饱和溶液对脑组织进行染色，然后处死动物，开颅取出脑组织，称全脑重，遂切下未染色的脑组织(即缺血区脑组织)称重，求出其占全脑重量的百分率，结果见下表。

组  别	犬数(只)	缺血区重/全脑重(％)
			模型组1∶9920∶8040∶6060∶4080∶2099∶1消心痛	55555555	32.76±3.7426.51±3.2723.53±2.6319.66±2.3618.41±3.9522.71±3.7825.58±2.2817.36±2.15

由实验结果可知，丹参总酚酸脂质体、灯盏细辛总黄酮脂质体最佳配伍范围为丹参总酚酸脂质体40～60％与灯盏细辛总黄酮脂质体60～40％。

实验例2：脂质体制备方法研究

2.1脂质体的制备方法的考察

2.1.1逆向蒸发法：取大豆卵磷脂100mg，胆固醇60mg溶于20mL乙醚中，置于锥形瓶中。以pH5-8的磷酸盐缓冲液为溶剂配制1％丹参总酚酸或灯盏细辛总黄酮溶液，电磁搅拌下，将1％丹参总酚酸或灯盏细辛总黄酮溶液15mL缓缓滴入锥形瓶中，搅拌使与乙醚形成乳浊液，减压蒸馏1h将乙醚蒸除，得脂质体。

2.1.2乙醚注入法：以pH5-8的磷酸盐缓冲液为溶剂配制1％丹参总酚酸或灯盏细辛总黄酮溶液，取15mL于锥形瓶中。将大豆卵磷脂100mg、胆固醇60mg溶于6mL乙醚中。电磁搅拌下，缓缓将乙醚溶液用五号针头(针尖在液面以下)均匀后加热65℃，挥发除去乙醚，得脂质体。

2.1.3薄膜法：大豆卵磷脂100mg，胆固醇60mg溶于20mL乙醚中，用旋转蒸发仪减压除去有机溶剂，在梨形瓶中形成均匀的磷脂膜，加15mL含1％丹参总酚酸或灯盏细辛总黄酮的pH5-8的磷酸盐缓冲液，浸泡，搅拌洗脱脂质膜，可得脂质体。

2.1.4硫酸铵梯度法：取大豆卵磷脂100mg，胆固醇60mg溶于20mL乙醚中，用旋转蒸发仪减压除去有机溶剂，在梨形瓶中形成均匀的磷脂膜，于真空干燥箱中干燥后，加入20mL硫酸铵溶液浸泡洗脱脂质膜。将制备的空白脂质体用探头超声细胞破碎器破碎后，装入透析袋中(约10mmol·L^-1)，放入0.9％氯化钠溶液中透析48h，取出透析后的空白脂质体，加入15mL1％丹参总酚酸或灯盏细辛总黄酮溶液，置于60℃水浴中孵化10min，得脂质体。

2.2包封率测定

采用透析法测定脂质体包封率。各取上述几种方法制备的脂质体5mL置于透析袋中，分别置50mL烧杯中，精密加入磷酸缓冲液45mL浸泡，每隔2h搅拌15min。12h后取浸泡液2.5mL置于25mL容量瓶中，加pH5-8磷酸盐缓冲液定容。以pH5-8磷酸盐缓冲液为空白在274nm处测吸收度。同步，取5mL1％丹参总酚酸或灯盏细辛总黄酮溶液于透析袋中透析，作为空白药物对比，采用包封率计算公式：

包封率＝(C总-C游离)/C总×100％

其中C总为脂质体混悬液中总药量，C游离为未包入脂质体中药物量。结果见下表。

不同方法制备脂质体的包封率

	乙醚注入法	逆向蒸发法	薄膜法	硫酸铵梯度法
					丹参总酚酸包封率(％)灯盏细辛总黄酮包封率(％)	28.734.6	66.462.1	36.641.7	25.327.2

结果：由实验结果可知，丹参总酚酸脂质体、灯盏细辛总黄酮脂质体采用逆向蒸发法的包封率较高，因此确定逆向蒸发法为本制剂的脂质体制备方法。

实验例3：制剂药效学实验

对大鼠急性心肌缺血的保护作用：取SD大鼠，体质量230～250g，雌雄各半，随机分为模型对照组、丹参总酚酸-灯盏细辛总黄酮注射液0.3g/kg组、本发明注射剂0.3g/kg组、本发明口服液0.3g/kg组，每组10只，连续7天，在末次给药后1h结扎大鼠冠状动脉左前降支。于冠脉结扎3h后心室取血3ml，以3000×g的速度离心5min制备血清，取血清，用超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)试剂盒分别测定血清中相应指标。摘取大鼠心脏排出心腔内积血，用生理盐水冲洗并用滤纸吸去水分，剔除脂肪血管等非心肌组织，剪除心房和右心室，留下左心室称重，计算梗死区(湿重)占左心室(湿重)百分比。结果见下表。

对大鼠冠脉结扎后心肌梗死范围及血清中SOD、MDA的影响

组别	心梗范围(％)	SOD(NU/ml)	MDA(nmol/ml)
				模型组丹参总酚酸-灯盏细辛总黄酮注射液组本发明注射剂组本发明口服液组	19.8±3.414.9±2.413.8±2.314.6±1.2	207.67±18.32309.14±27.42331.77±15.84324.57±21.54	8.78±3.494.98±2.153.82±1.594.76±1.28

由实验结果可知，本发明药物制剂能明显提高冠脉结扎大鼠血清中SOD活性，显著抑制了MDA的生成，明显减小心肌梗死区面积，并且在大大降低用量的情况下，疗效仍然优于丹参总酚酸、灯盏细辛总黄酮普通注射液。

具体的实施方式

本发明的实施例1：丹参总酚酸脂质体50g灯盏细辛总黄酮脂质体50g

取丹参总酚酸脂质体、灯盏细辛总黄酮脂质体混合，将混悬液置于-20℃冰箱中预冻12h，最后经冷冻干燥后即得冻干粉针剂。静脉注射，一日一次，一次一支。

本发明的实施例2：丹参总酚酸脂质体40g灯盏细辛总黄酮脂质体60g

取丹参总酚酸脂质体、灯盏细辛总黄酮脂质体混合，滤过，加注射用水，分装到安剖瓶，封口灭菌，即得注射液和注射用浓溶液。

本发明的实施例3：丹参总酚酸脂质体50g灯盏细辛总黄酮脂质体50g

取丹参总酚酸脂质体、灯盏细辛总黄酮脂质体混合，将所得混悬液填充在软胶囊中，即得软胶囊。

本发明的实施例4：丹参总酚酸脂质体60g灯盏细辛总黄酮脂质体40g

取丹参总酚酸脂质体、灯盏细辛总黄酮脂质体混合，将所得混悬液与预胶化淀粉混合，用聚乙吡咯烷酮的乙醇液为粘合剂制粒，干燥后整粒，再与适量聚乙二醇6000混合均匀，压片即为片剂。

本发明的实施例5：丹参总酚酸脂质体30g灯盏细辛总黄酮脂质体70g

取丹参总酚酸脂质体、灯盏细辛总黄酮脂质体混合，按主药∶辅料＝1.4∶1的比例加入磷酸钙，按主药∶辅料＝1.2∶1的比例加入微粉纤维素，以及按主药∶辅料＝3∶1的交联聚乙烯吡咯烷酮，混和均匀，用70％乙醇适量制软材，过20目筛制颗粒，55℃干燥，取出，过30目筛整粒，加入适量滑石粉、微粉硅胶，混和均匀，压片，即得分散片。

本发明的实施例6∶丹参总酚酸脂质体20g灯盏细辛总黄酮脂质体80g

取丹参总酚酸脂质体、灯盏细辛总黄酮脂质体混合，加入2.5倍量糊精，0.4％的甜菊甙，1.5％的微晶纤维素，用适量乙醇溶液制软材，制粒，65℃鼓风干燥，制粒，整粒，即得颗粒剂。

本发明的实施例7：丹参总酚酸脂质体95g灯盏细辛总黄酮脂质体5g

取丹参总酚酸脂质体、灯盏细辛总黄酮脂质体混合，将与主药比例是1.8∶1的硬脂酸钠置不锈钢容器内，混合均匀，加热至80-85℃，待全部熔融后，70-75℃保温，机械高速搅拌15min至均匀，转移至贮液瓶中，70～75℃保温，调节滴液阀门，滴入30～35℃的煤油中，滴距5～6cm，滴速40～45滴/分，将形成的滴丸沥尽并擦除煤油，包装，即得滴丸剂。

本发明的实施例8：丹参总酚酸脂质体5g灯盏细辛总黄酮脂质体95g

取丹参总酚酸脂质体、灯盏细辛总黄酮脂质体混合，将混悬液置于-20℃冰箱中预冻12h，最后经冷冻干燥后即得冻干粉针剂。

本发明的实施例9：丹参总酚酸脂质体80g灯盏细辛总黄酮脂质体20g

取丹参总酚酸脂质体、灯盏细辛总黄酮脂质体混合，滤过，加注射用水，分装到安剖瓶，封口灭菌，即得注射液和注射用浓溶液。

本发明的实施例10：丹参总酚酸脂质体20g灯盏细辛总黄酮脂质体80g

将丹参总酚酸脂质体与灯盏细辛总黄酮脂质体混合均匀，加入5％的的低取代羟丙基纤维素和1.0％甘露醇，压制成片，即得口崩片。

本发明的实施例11：丹参总酚酸脂质体30g灯盏细辛总黄酮脂质体70g

将丹参总酚酸脂质体与灯盏细辛总黄酮脂质体混合均匀，将与主药比例是1.4∶1的聚乙二醇6000置不锈钢容器内，加入提取物，混合均匀，加热至85-90℃，待全部熔融后，75-80℃保温，机械高速搅拌15min至均匀，转移至贮液瓶中，75～80℃保温，调节滴液阀门，滴入30～35℃的液状石蜡中，滴距5～6cm，滴速40～45滴/分，将形成的滴丸沥尽并擦除液状石蜡，包装，即得滴丸剂。

本发明的实施例12：丹参总酚酸脂质体70g灯盏细辛总黄酮脂质体30g

将丹参总酚酸脂质体与灯盏细辛总黄酮脂质体混合均匀，按主药∶辅料＝1.2∶1的比例加入碳酸钙，按主药∶辅料＝1.4∶1的比例加入微晶纤维素，以及按主药∶辅料＝3∶1的交联羧甲基纤维素钠，混和均匀，用75％乙醇适量制软材，过20目筛制颗粒，55℃干燥，取出，过30目筛整粒，加入适量滑石粉、微粉硅胶，混和均匀，压片，即得分散片。

本发明的实施例13：丹参总酚酸脂质体1g灯盏细辛总黄酮脂质体99g

将丹参总酚酸脂质体与灯盏细辛总黄酮脂质体混合均匀，加入2倍量淀粉，0.6％的甜菊甙，1.4％的微晶纤维素，用适量乙醇溶液制软材，制粒，70℃鼓风干燥，制粒，整粒，即得颗粒剂。

本发明的实施例14：丹参总酚酸脂质体99g灯盏细辛总黄酮脂质体1g

将丹参总酚酸脂质体与灯盏细辛总黄酮脂质体混合均匀，加入等量的淀粉，混合均匀，制粒，装胶囊，即得胶囊剂。

本发明的实施例15：丹参总酚酸脂质体10g灯盏细辛总黄酮脂质体90g

将丹参总酚酸脂质体与灯盏细辛总黄酮脂质体混合均匀，加入等量的淀粉，混合均匀，制粒，即得颗粒剂。

本发明的实施例16：丹参总酚酸脂质体90g灯盏细辛总黄酮脂质体10g

取丹参总酚酸脂质体、灯盏细辛总黄酮脂质体，加入适量注射用水溶解，加入规定量的葡萄糖或氯化钠，混合溶解后按体积加入0.5％的活性炭，煮沸，保持微沸30min，稍冷滤过，滤液加注射用水至规定量，再用饱和氢氧化钠溶液调pH值至7.0～7.5，煮沸，4℃冷藏过夜，粗滤、精滤，加注射用水，分装，灭菌即得葡萄糖或氯化钠静脉输液。

本发明的实施例17：丹参总酚酸脂质体65g灯盏细辛总黄酮脂质体35g

将丹参总酚酸脂质体与灯盏细辛总黄酮脂质体混合均匀，加入5％的交联聚维酮PVPP和1.4％甘露醇，压制成片，即得口崩片。

本发明的实施例18：丹参总酚酸脂质体55g灯盏细辛总黄酮脂质体45g

将丹参总酚酸脂质体与灯盏细辛总黄酮脂质体混合均匀，按主药∶辅料＝1.3∶1的比例加入硫酸钙，按主药∶辅料＝1.1∶1的比例加入微晶纤维素，以及按主药∶辅料＝3∶1的交聚维酮，混和均匀，用75％乙醇适量制软材，过20目筛制颗粒，50℃干燥，取出，过30目筛整粒，加入适量滑石粉、微粉硅胶，混和均匀，压片，即得分散片。

实施例19：以上丹参总酚酸脂质体、灯盏细辛总黄酮脂质体可以是市售的或是用以下方法制备的：

(1)逆向蒸发法：取大豆卵磷脂100mg，胆固醇60mg溶于20mL乙醚中，置于锥形瓶中。以pH5-8的磷酸盐缓冲液为溶剂配制1％丹参总酚酸或灯盏细辛总黄酮溶液，电磁搅拌下，将1％丹参总酚酸或灯盏细辛总黄酮溶液15mL缓缓滴入锥形瓶中，搅拌使与乙醚形成乳浊液，减压蒸馏1h将乙醚蒸除，得脂质体；

(2)溶剂注入法(乙醚注入法)：以pH5-8的磷酸盐缓冲液为溶剂配制1％丹参总酚酸或灯盏细辛总黄酮，取15mL于锥形瓶中。将大豆卵磷脂100mg、胆固醇60mg溶于6mL乙醚中。电磁搅拌下，缓缓将乙醚溶液用五号针头(针尖在液面以下)注入丹参总酚酸或灯盏细辛总黄酮溶液中。搅拌均匀后加热至65℃，挥发除去乙醚，得脂质体；

(3)薄膜法：大豆卵磷脂100mg，胆固醇60mg溶于20mL乙醚中，用旋转蒸发仪减压除去有机溶剂，在梨形瓶中形成均匀的磷脂膜，加15mL含1％丹参总酚酸或灯盏细辛总黄酮的pH5-8的磷酸盐缓冲液，浸泡，搅拌洗脱脂质膜，可得脂质体；

(4)硫酸铵梯度法：取大豆卵磷脂100mg，胆固醇60mg溶于20mL乙醚中，用旋转蒸发仪减压除去有机溶剂，在梨形瓶中形成均匀的磷脂膜，于真空干燥箱中干燥后，加入20mL硫酸铵溶液浸泡洗脱脂质膜。将制备的空白脂质体用探头超声细胞破碎器破碎后，装入透析袋中(约10mmol·L^-1)，放入0.9％氯化钠溶液中透析48h，取出透析后的空白脂质体，加入15mL1％丹参总酚酸或灯盏细辛总黄酮溶液，置于60℃水浴中孵化10min，得脂质体；

(5)冻结融解法：取磷脂和辅料加一定量无水乙醇溶解，在恒温搅拌的条件下以一定速度注入丹参总酚酸或灯盏细辛总黄酮溶液中，继续恒温搅拌，降至室温，匀浆，膜过滤，灌装，充氮气，封口。将所得脂质体放入液氮中，冷冻后取出。室温使之溶，重复一次即得；

(6)冷冻干燥法：取豆磷脂2.0g，胆固醇0.5g用适量乙醇在80℃熔融，加入pH5-8磷酸盐缓冲液，待乙醇自然挥尽后转移至组织捣碎机中，高速搅拌10min，过滤，火菌，超声15min，在无菌条件下，加入灭菌丹参总酚酸或灯盏细辛总黄酮注射原料1.0g及灭菌甘露醇2.0g溶解，灌装于安瓶中，冷冻干燥成冻干脂质体；

(7)钙融合法：7umol的磷脂酰丝氨酸(PS)制成薄膜后，用1.5ml生理盐水水合，超声波处理5min。取出0.25ml加入到20mmol/L的等量的氯化钙溶液中混合，37℃孵育80min。生成的卷桶状物1800g离心10min，取沉淀加入丹参总酚酸或灯盏细辛总黄酮溶液后孵育15min。随后加入45mmol/L含有EDTA的生理盐水缓冲液0.25ml孵育50min，即得脂质体；

(8)主动包封法：以pH为4的300mmol/L枸橼酸水溶液为介质，采用逆相蒸发法或薄膜法制备空白脂质体。用1mol/L的氢氧化钠或碳酸钠溶液调节空白脂质体混悬液的pH至7.8，使脂质体膜内外形成质子的梯度，即得到脂质体膜的内部为酸性，外部为碱性的脂质体。将丹参总酚酸或灯盏细辛总黄酮溶液pH5-8的磷酸盐缓冲液溶解，65℃孵育。在65℃孵育条件下，将脂质体混悬液与丹参总酚酸或灯盏细辛总黄酮溶液混合并轻摇，孵育12min即得；

(9)复乳法：按摩尔比为7∶2.2∶1.5取磷脂酰胆碱(PC)、胆固醇(Ch)和磷脂酸(PA)，将它溶于有机溶剂，加入一定的丹参总酚酸或灯盏细辛总黄酮溶液，置高速组织捣碎机(10000r/min)乳化10min，再加入磷酸盐缓冲液(pH5-8)，再一次高速乳化(8000r/min)，得乳状液。在减压通氮条件下，除去有机溶液，即得；

(10)离心法：将80mg磷脂溶于5ml二丁醚中，加入丹参总酚酸或灯盏细辛总黄酮溶液的氯化钠溶液0.2ml。超声处理得透明溶液，移置有20ml相同渗透压的氯化钠溶液的离心管中，用3000r/min离心30min，除去上层有机溶剂，下层则为含有脂质体的氯化钠溶液。经大孔树脂吸附未包封的丹参总酚酸或灯盏细辛总黄酮，即得脂质体；

(11)制备脂质体气雾剂：5ml丹参总酚酸或灯盏细辛总黄酮溶液，280mg/ml卵磷脂乙醇液及6.0g的二氯二氟甲烷混合成有机相，含有7％乙醇50ml水为水相，每次阀门放出50ul有机相及水相，即得。

实施例16：以上丹参总酚酸前体脂质体、灯盏细辛总黄酮前体脂质体可以是市售的或是用以下方法制备的：

(1)冻融法：取磷脂和辅料加一定量无水乙醇溶解，在恒温搅拌的条件下以一定速度注入丹参总酚酸或灯盏细辛总黄酮溶液中，继续恒温搅拌，降至室温，匀浆，膜过滤，灌装，充氮气，封口。将所得脂质体放入液氮中，冷冻后取出。室温使之溶，重复一次即得；

(2)喷雾干燥法：将精确称取的丹参总酚酸或灯盏细辛总黄酮、大豆磷脂和胆固醇共同溶于氯仿中，过滤，滤液收集于圆底烧瓶中，旋转蒸发挥去氯仿成薄膜，真空干燥后，加入pH5-8的磷酸盐缓冲液，浸泡2-8h，然后在氮气流保护下高速搅拌，一定时间后，向其中缓慢滴加同样缓冲液溶解的聚乙烯吡咯烷酮(PVP)和蔗糖溶液，继续搅拌，并补足缓冲液至150mL，然后将脂质体混悬液用微孔滤膜过滤，滤液在氮气保护下罐封，即得丹参总酚酸或灯盏细辛总黄酮脂质体。采用喷干法，实验条件为：进风温度125℃，进料速度60mL/min，旋风分离器压差55mmH20，雾化盘转速2700r/min；

(3)旋转蒸发法：分别称取卵磷脂、胆固醇、VE，聚乙烯吡咯烷酮(PVP)等溶于适量氯仿并收集于茄形烧瓶中，置水浴上，用旋转蒸发器减压挥去氯仿成膜后加丹参总酚酸或灯盏细辛总黄酮磷酸缓冲液。浸泡薄膜后。在频率35kHz、强档工作状态下超声，即得丹参总酚酸或灯盏细辛总黄酮脂质体混悬液。取甘露醇等置于150ml茄形烧瓶中，持续减压蒸发至干燥，取出置于真空干燥器中室温减压过夜，彻底干燥后氮气下分装，即得。

实施例20：丹参总酚酸、灯盏细辛总黄酮可以是市售的，或是用以下方法制备的：

(1)取丹参，粗粉碎后加入4～15倍量的水，浸泡2～12小时，加热提取1～5次，每次0.5～2小时，合并提取液，滤过，滤液浓缩，加入1％～8％的明胶溶液，搅匀，冷藏过夜，滤过，滤液浓缩，加入1～4倍体积乙酸乙酯萃取1～5次，合并乙酸乙酯液，减压回收溶剂，真空干燥得丹参总酚酸；

(2)取丹参，粉碎成过10目筛的粗粉，加入6～10倍体积50％～90％乙醇回流提取1～4次，每次0.5～4小时，合并提取液，减压回收乙醇至60℃时测定相对密度为1.05～1.15，加入2～4倍药材体积的水溶解，过滤，滤液过D-101型大孔吸附树脂，用3～10倍树脂体积水冲洗杂质，然后用2～8倍树脂体积的20％～50％乙醇解吸，收集解吸液，减压回收乙醇至60℃时测定相对密度为1.05～1.15，得丹参总酚酸；

(3)灯盏细辛药材，加入5～15倍体积50～80％乙醇回流提取1～4次，每次0.5～2.5小时，合并提取液，减压回收溶剂至60℃时测定相对密度为1.05～1.15，加入1～4倍量乙酸乙酯，振摇萃取1～8次，合并乙酸乙酯液，减压回收溶剂至60℃时测定相对密度为1.05～1.15，干燥得灯盏细辛总黄酮；

(4)灯盏细辛药材，加入5～15倍体积50～80％乙醇回流提取1～4次，每次0.5～2.5小时，合并提取液，减压回收乙醇至60℃时测定相对密度为1.05～1.15，加入1-5倍药材体积的水加热溶解，过滤，滤液以0.3-0.8ml/g药材.min的速度过AB-8型大孔吸附树脂，依次用1-10倍树脂体积水和1-6倍树脂体积5-15％乙醇冲洗杂质，然后用1-7倍树脂体积的30-70％乙醇解吸，收集解吸液，减压回收乙醇至60℃时测定相对密度为1.05～1.15，干燥得灯盏细辛总黄酮。

Claims (10)

1、一种治疗心脑血管疾病的中药制剂，其特征在于：按照重量百分比计算，它是由丹参总酚酸脂质体或前体脂质体1～99％和灯盏细辛总黄酮脂质体或前体脂质体99～1％和适当的辅料制作而成。

2、按照权利要求1所述的治疗心脑血管疾病的中药制剂，其特征在于：按照重量百分比计算，它是由丹参总酚酸脂质体或前体脂质体20～80％和灯盏细辛总黄酮脂质体或前体脂质体80～20％和适当的辅料制作而成。

3、按照权利要求1或2所述的治疗心脑血管疾病的中药制剂，其特征在于：按照重量百分比计算，它是由丹参总酚酸脂质体或前体脂质体40～60％与灯盏细辛总黄酮脂质体或前体脂质体60～40％和适当的辅料制作而成。

4、按照权利要求1～3任意一项所述的治疗心脑血管疾病的中药制剂，其特征在于：所述组方中的丹参总酚酸脂质体或前体脂质体可以是在丹参醇提取物、丹参水提取物、丹参水提醇沉提取物、丹参半仿生提取物、丹参超临界萃取物或者以上各提取物的精制品的基础上制得；灯盏细辛总黄酮脂质体或前体脂质体可以是在灯盏细辛醇提取物、灯盏细辛水提取物、灯盏细辛水提醇沉提取物、灯盏细辛半仿生提取物、灯盏细辛超临界萃取物或者以上各提取物的精制品的基础上制得。

5、按照权利要求1～4任意一项所述的治疗心脑血管疾病的中药制剂，其特征在于：所述的制剂为直接用于注射给药的注射液、直接供静脉滴注的静脉输液、需稀释后用于静脉滴注的注射用浓溶液和用冷冻干燥法或喷雾干燥法制得的注射用无菌粉末和无菌块状物以及片剂、胶囊剂、颗粒剂、滴丸剂、丸剂、软胶囊剂、口服液体制剂、口腔崩解片、舌下片或分散片剂。

6、按照权利要求1～5中任意一项所述的治疗心脑血管疾病的中药制剂，其特征在于：制剂中含有酚酸类成分和黄酮类成分，以重量百分比计算，制剂中酚酸类成分含量不低于制剂中扣除辅料量和水分量的总固体量的50％，黄酮类成分含量不低于制剂中扣除辅料量和水分量的总固体量的50％，脂质体包封率不低于60％。

7、如权利要求1～5中任意一项所述的治疗心脑血管疾病的中药制剂，其特征在于：灯盏细辛总黄酮脂质体和丹参总酚酸脂质体是采用薄膜法、硫酸铵梯度法、逆相蒸发法、溶剂注入法、去污剂分散法、钙融合法、冻结融解法、主动包封法、冷冻干燥法、复乳法、离心法、前体脂质体法、制备脂质体气雾剂中的一种或几种方法制得的。

8、如权利要求1～7中任意一项所述的治疗心脑血管疾病的中药制剂，其特征在于：所述制剂中的脂质体这样制备：按主药∶卵磷脂＝1∶11的比例取卵磷脂，按主药∶磷脂酰甘油＝1∶1.2的比例取磷脂酰甘油，溶于氯仿-异丙醇的混合溶液中；另取灯盏细辛总黄酮溶于pH5-8的磷酸盐缓冲液中，两相混合，水浴式超声15min后，于旋转蒸发仪中除去有机溶剂即得脂质体混悬液，同法制备丹参总酚酸脂质体混悬液，与灯盏细辛总黄酮脂质体混悬液混合后以不同的方法制成各种制剂。

9、如权利要求1～7中任意一项所述的治疗心脑血管疾病的中药制剂，其特征在于：所述制剂中的前体脂质体这样制备：取磷脂和辅料加一定量无水乙醇溶解，在恒温搅拌的条件下以一定速度注入丹参总酚酸或灯盏细辛总黄酮溶液中，继续恒温搅拌，降至室温，匀浆，膜过滤，灌装，充氮气，封口；将所得脂质体放入液氮中，冷冻后取出；室温使之溶，重复一次即得丹参总酚酸或灯盏细辛总黄酮前体脂质体，将丹参总酚酸前体脂质体和灯盏细辛总黄酮前体脂质体混合后以不同的方法制成各种制剂。

10、按照权利要求1～9中任意一项所述的治疗心脑血管疾病的中药制剂的制备方法，其特征在于：所述制剂中的分散片这样制备：取丹参总酚酸脂质体、灯盏细辛总黄酮脂质体混合，按主药∶辅料＝1.2∶1的比例加入磷酸钙，按主药∶辅料＝1.3∶1的比例加入微粉纤维素，以及按主药∶辅料＝2∶1的交联聚乙烯吡咯烷酮，混和均匀，用72％乙醇适量制软材，过20目筛制颗粒，50℃干燥，取出，过30目筛整粒，加入适量滑石粉、微粉硅胶，混和均匀，压片，即得分散片。