CN1904043A - 一种纳米磁性壳聚糖固定化酶的制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种纳米磁性壳聚糖固定化酶的制备方法，将表面含有酰氯基官能团的纳米磁性壳聚糖微粒分散在含酶溶液中，在20～25℃下搅拌反应2～8小时，在磁场中固液分离，磁性沉淀物用磷酸缓冲溶液洗涤三次后，得到所需的纳米磁性壳聚糖固定化酶；含酶溶液中酶的浓度为：0.01～0.1％，表面含酰氯基官能团的纳米磁性壳聚糖与含酶溶液的固液比为1∶50～1∶200克/毫升。本发明通过使用外部磁场将酶简捷的回收、反复使用，从而提高了酶的利用率，降低了成本，制备的纳米磁性壳聚糖固定化酶具有强磁性、高蛋白质载量及高活性回收率，适用于食品工业、绿色催化等领域。
Description
技术领域
本发明属于磁性壳聚糖固定化酶领域，尤其涉及一种纳米磁性壳聚糖固定化酶的制备方法。
背景技术
磁性高分子微粒是一种新型功能高分子材料，可作为生物分子的固定化载体，它既可以通过共聚、表面改性等化学反应在磁性微粒表面引入多种反应性功能基，如羟基、羧基、醛基、氨基等，可以通过共价键来结合酶、细胞、抗体等生物活性物质，还因具有磁性，在外加磁场的作用下，进行快速运动或分离，因而磁性高分子微粒在生物医学、细胞学、生物工程等领域有着广泛的应用。现有的固定化酶粒径大，不易接近和催化活性低，限制了它的使用范围。而纳米磁性高分子载体具有易接近性和高催化活性，为磁性高分子材料的发展提供了新的契机，已成为纳米技术的重要组成之一。
发明内容
本发明的目的在于提供一种纳米磁性壳聚糖固定化酶的制备方法。该方法采用表面含有酰氯基官能团的纳米磁性壳聚糖微粒与酶分子反应，从而制备出具有强磁性、高蛋白质载量及高活性回收率的纳米磁性壳聚糖固定化酶，适用于食品工业、绿色催化等领域。
本发明方法的具体工艺步骤如下：
将表面含有酰氯基官能团的纳米磁性壳聚糖微粒分散在含酶溶液中，在20～25℃下搅拌反应2～8小时，在磁场中固液分离，磁性沉淀物用磷酸缓冲溶液洗涤三次后，得到所需的纳米磁性壳聚糖固定化酶；
所述的含酶溶液中酶的浓度为：0.01～0.1％；
所述的表面含酰氯基官能团的纳米磁性壳聚糖与含酶溶液的固液比为1∶50～1∶200克/毫升。
所述的含酶溶液中的酶是胰蛋白酶、抑肽酶、卵清粘蛋或脂肪酶。
本发明与现有技术相比，具有如下优点和有益效果：
本发明方法制备的纳米磁性壳聚糖固定化酶具有强磁性、高蛋白质载量及高活性回收率，本方法通过使用外部磁场将酶简捷的回收、反复使用，从而提高了酶的利用率，降低了成本。
具体实施方式
为了更好地理解本发明，下面结合实施例对本发明作进一步地描述，但本发明的保护范围不限于此。
实施例1
将0.1g表面含有酰氯基官能团的纳米磁性壳聚糖微粒分散在20mL含有0.01％胰蛋白酶溶液中，在20℃下搅拌反应2小时，在磁场中固液分离，磁性沉淀物用磷酸缓冲溶液洗涤三次后，得到所需的纳米磁性壳聚糖固定化胰蛋白酶。以N-苯甲酰-L-精氨酸乙酯盐酸盐为底物，测定固定化酶活力。该磁性固定化酶的蛋白质载量为5.8mg/g、活性回收率为74.2％。
实施例2
将0.1g表面含有酰氯基官能团的纳米磁性壳聚糖微粒分散在10mL含有0.05％脂肪酶溶液中，在23℃下搅拌反应6小时，在磁场中固液分离，磁性沉淀物用磷酸缓冲溶液洗涤三次后，得到所需的纳米磁性壳聚糖固定化脂肪酶。以三甘酯为底物，测定固定化酶活力。该磁性固定化酶的蛋白质载量为6.1mg/g、活性回收率为67.2％。
实施例3
将0.1g表面含有酰氯基官能团的纳米磁性壳聚糖微粒分散在5mL含有0.1％抑肽酶溶液中，在25℃下搅拌反应8小时，在磁场中固液分离，磁性沉淀物用磷酸缓冲溶液洗涤三次后，得到所需的纳米磁性壳聚糖固定化抑肽酶。以胰蛋白酶和N-苯甲酰-L-精氨酸乙酯盐酸盐为底物，测定固定化酶活力。该磁性固定化酶的蛋白质载量为6.8mg/g、活性回收率为75.3％。
实施例4
将0.1g表面含有酰氯基官能团的纳米磁性壳聚糖微粒分散在20mL含有0.01％
卵清粘蛋溶液中，在20℃下搅拌反应2小时，在磁场中固液分离，磁性沉淀物用磷酸缓冲溶液洗涤三次后，得到所需的纳米磁性壳聚糖固定化卵清粘蛋。以胰蛋白酶和N-苯甲酰-L-精氨酸乙酯盐酸盐为底物，测定固定化酶活力。该磁性固定化酶的蛋白质载量为5.4mg/g、活性回收率为71.6％。
Claims (2)
1.一种纳米磁性壳聚糖固定化酶的制备方法，其特征在于步骤如下：
将表面含有酰氯基官能团的纳米磁性壳聚糖微粒分散在含酶溶液中，在20～25℃下搅拌反应2～8小时，在磁场中固液分离，磁性沉淀物用磷酸缓冲溶液洗涤三次后，得到所需的纳米磁性壳聚糖固定化酶；
所述的含酶溶液中酶的浓度为：0.01～0.1％；
所述的表面含酰氯基官能团的纳米磁性壳聚糖与含酶溶液的固液比为1∶50～1∶200克/毫升。
2.根据权利要求1所述的纳米磁性壳聚糖固定化酶的制备方法，其特征在于所述的含酶溶液中的酶是胰蛋白酶、抑肽酶、卵清粘蛋或脂肪酶。
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| CN 200610036861 CN1904043A (zh) | 2006-07-31 | 2006-07-31 | 一种纳米磁性壳聚糖固定化酶的制备方法 |
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| CN 200610036861 Pending CN1904043A (zh) | 2006-07-31 | 2006-07-31 | 一种纳米磁性壳聚糖固定化酶的制备方法 |
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Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101643727B (zh) * | 2008-08-05 | 2011-04-20 | 中国农业大学 | 一种中空多聚糖微球固定化酶及其制备方法 |
| CN101643725B (zh) * | 2008-08-05 | 2011-06-01 | 中国农业大学 | 一种磁性中空复合微结构固定化酶及其制备方法 |
| CN103007847A (zh) * | 2012-12-20 | 2013-04-03 | 华南理工大学 | 基于磁性纳米固定化漆酶和离子液体复合微粒及其应用 |
| CN105107473A (zh) * | 2015-07-23 | 2015-12-02 | 江苏大学 | 一种磁性纳米复合颗粒的制备方法及其应用 |
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2006
- 2006-07-31 CN CN 200610036861 patent/CN1904043A/zh active Pending
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