CN1802174A - 用于预防和/或治疗癌症的肿瘤抗原bfa5 - Google Patents

用于预防和/或治疗癌症的肿瘤抗原bfa5 Download PDF

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Abstract

本发明涉及编码多肽的核酸以及该核酸或多肽在预防和/或治疗癌症上的用途。本发明特别涉及用于癌症免疫治疗的供编码肿瘤抗原的外源基因插入和表达的改良载体。

Description

用于预防和/或治疗癌症的肿瘤抗原BFA5
相关申请
本申请要求保护2003年4月15日递交的美国临时申请号60/462,945的优先权。
发明领域
本发明涉及一种编码多肽的核酸以及该核酸和/或多肽在预防和/或治疗癌症方面的用途。本发明特别涉及用于癌症免疫治疗的供编码肿瘤抗原的外源基因插入和表达的改良载体。
发明背景
在过去几年中，借助高密度芯片、SEREX、免疫组化(IHC))、RT-PCR、原位杂交(ISH)和激光捕获显微镜几种技术(Rosenberg，Immunity，1999；Sgroi等，1999，Schena等，1995，Offringa等，2000)，基于原发肿瘤和正常细胞表达谱的分子识别取得了长足进展，导致了带有肿瘤相关抗原(TAA)的癌症疫苗开发的剧增。TAA是由肿瘤细胞表达或过度表达的抗原，可能具有一种或数种肿瘤特异性，例如，CEA抗原表达于直肠癌、乳腺癌和肺癌。Sgroi等(1999)结合激光捕获显微切割技术和cDNA芯片技术鉴别了几种差异性表达于浸润和转移的肉瘤细胞的基因。数种导入系统如DNA或病毒，可用于人类癌症的治疗性疫苗，能诱导免疫反应并打破对TAA的耐受。通过插入编码T细胞协同刺激分子转基因，如B7.1基因或细胞因子基因，如γ-干扰素(IFN-γ)，白细胞介素-2(IL-2)或GM-集落刺激因子(GM-CSF)转基因，可提高肿瘤细胞的免疫原性。TAA和细胞因子或协同刺激分子的共表达也显示了在开发有效的治疗性疫苗方面的作用(Hodge等，95，Bronte等，1995，Chamberlain等，1996)。
在本领域存在有对刺激免疫反应以预防或治疗癌症的有效试剂和方法的需求，本发明提供了这样的试剂和方法，这些试剂和方法克服了许多人们在治疗癌症的努力中遇到的困难。
发明概述
本发明提供了一个用于病人以预防和/或治疗癌症的免疫原性靶。特别的是该免疫原性靶为肿瘤抗原(“TA”)和/或血管生成相关抗原(“AA”)。在一个实施方案中，该免疫原性靶由SEQ ID NO：5编码或有SEQ ID NO：6的氨基酸序列。在某些实施方案中，TA和/或AA通过质粒或其他导入载体，如重组病毒，以核酸的形式用于病人。TA和/或AA也可和其他的肿瘤抗原(如SEQ ID NO：1-4)和/或协同刺激分子及佐剂联合给予。
附图简述
图1.BFA4cDNA序列
图2.BFA4氨基酸序列
图3.BCYl核苷酸(A)和氨基酸(B)序列
图4.BFA5cDNA序列
图5.BFA5氨基酸序列
发明详述
本发明提供了可用于癌症预防和治疗的试剂和方法。本申请中所有引用的参考资料均通过引用结合到本文中。
在一个实施方案中，本发明涉及到诱导或加强针对一种或多种的肿瘤抗原(“TA”)的免疫反应来预防和/或治疗癌症。在某些实施方案中，一种或多种TA可联合给予。在优选的实施方案中，免疫反应由给予编码肿瘤抗原的核酸载体后引起或由给予肽或多肽形式的肿瘤抗原本身引起。
如这里所用，“抗原”是一种能在一个被给予了该抗原的宿主体内诱生免疫反应的分子，如一种多肽或它的一部分。免疫反应包括产生与该抗原上至少一种抗原决定簇结合的抗体和/或产生针对表达有该抗原的某一抗原决定簇的细胞的细胞免疫反应。这种反应也可是原有免疫反应的加强，例如诱导更多抗体的产生，或有更高亲合力的抗体的产生，或诱导更有效的细胞免疫反应(如增高T细胞数量或增强T细胞的抗肿瘤作用)。能够诱生免疫反应的抗原又可称为具免疫性或称作免疫原。在本发明的描述中，TA可被称为“免疫原性靶”。
TA包括了肿瘤相关抗原(TAA)和肿瘤特异性抗原(TSA)，癌性细胞是其来源。TAA是在肿瘤细胞表面的表达高于正常细胞的抗原，或正常细胞只在胚胎期才表达的抗原；TSA是肿瘤细胞特有而正常细胞不表达的抗原。TA还进一步包括了TAA或TSA、它们的抗原性片段以及保留了它们的抗原性的修饰后的变异体。
根据TA的表达模式、功能及基因来源将其分为典型的5类：癌-睾丸抗原(即MAGE，NY-ES-1)；黑色素细胞分化抗原(即MelanA/MART-1，酪氨酸酶，gp100)；突变抗原(即MUM-1，p53，CDK-4)；过度表达的“自身”抗原(即HER-2/neu，p53)；病毒抗原(即HPV，EBV)。为了应用本发明，合适的TA指任何一种能够在其表达的宿主体内诱导和增强抗肿瘤免疫的TA。合适的TA包括有：例如，gap100(Cox等，Science，264：716-719(1994))、MART-1/Melan A(Kawakami等，J.Exp.Med.，180：347-352(1994)))、gp75(TRP-1)(Wang等，J.Exp.Med.，186：1131-1140(1996))、酪氨酸酶(Wolfel等，EU7-.J.Inamufzol.，24：759-764(1994)；WO 200175117；WO 200175016；WO200175007))、NY-ESO-1(WO 98/14464；WO 99/18206)、黑色素瘤蛋白聚糖(Hellstrom等，J.Immunol.，130：1467-1472(1983))、MAGE家族抗原(即，MAGE-1、2、3、4、6、12、51；Van der Bruggen等，Science，254：1643-1647(1991)；美国专利6,235,525；CN 1319611)、BAGE家族抗原(Boel等，Imnauszity，2：167-175(1995))、GAGE家族抗原(即，GAGE-1、2；Van den Eynde等，J.Exp.Med.，182：689-698(1995)；美国专利6,013,765)、RAGE家族抗原(即，RAGE-1；Gaugler等，Inaozunogenetics，44：323-330(1996)；美国专利5,939,526)、N-乙酰氨基葡萄糖转移酶V(Guilloux等，J.Exp.Med.，183：1173-1183(1996))、p15(Robbins等，J.lmnzunol.154：5944-5950(1995))、β-联蛋白(Robbins等，J.Exp.Med.，183：1185-1192(1996))、MUM-1(Coulie等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，92：7976-7980(1995))、细胞周期依赖的蛋白激酶-4(CDK4)(Wolfel等，Science，269：1281-1284(1995))、p21-ras(Fossum等，7.Cancer 56：40-45(1994))、BCR-abl(Bocchia等，Blood，85：2680-2684(1995))、p53(Theobald等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，92：11993-11997(1995))、p185HER2/neu(erb-Bl；Fisk等，J.Exp.Med.，181：2109-2117(1995))、表皮生长因子受体(EGFR)(Harris等，BreastCancer Res.Treat，29：1-2(1994))、癌胚抗原(CEA)(Kwong等，J.Natl.Cancer 17nst.，85：982-990(1995)美国专利5,756,103；5,274,087；5,571,710；6,071,716；5,698,530；6,045,802；EP 263933；EP 346710；和EP 784483)；癌相关突变粘蛋白(即，MUC-1gene products；Jerome等，J.Inznauriol.9151：1654-1662(1993))；EBV基因产物EBNA(即，EBNA-1；Rickinson等，Cancer Surveys，13：53-80(1992))；人乳头状瘤病毒蛋白E7，E6(Ressing等，J.Inimuno19154：5934-5943(1995))；前列腺特异性抗原(PSA；Xue等，The Prostate，30：73-78(1997))；前列腺特异性膜抗原(PSMA；Israeli，等，Cancer Res.，54：1807-1811(1994))；独特型抗原决定簇或抗原，如免疫球蛋白独特型或T细胞受体独特型(Chen等，J.immunol.，153：4775-4787(1994))；KSA(美国专利5,348,887)、驱动蛋白-2(Dietz，等Biochem Biophys ResCommun 2000Sep 7；275(3)：731-8)、HIP-55，TGF β-1抗凋亡因子(Toomey，等Br J Biomed Sci 2001；58(3)：177-83)、肿瘤蛋白D52(Bryne J.A.，等，Genomics，35：523-532(1996))、H1FT、NY-BR-1(WO01/47959)、NY-BR-62、NY-BR-75、NY-BR-85、NY-BR-87、NY-BR-96(Scanlan，M.Serologic and Bioinfonnatic Approaches to the Identificationof Human Tumor Antigens，in Cancer Tzacci7les 2000，Cancer ResearchInstitute，New York，NY)、BFA4(SEQ ID NOS.：1和2)、BCY1(SEQ IDNOS.：3和4)和BFA5(SEQ ID NOS.：5和6)，包括这些抗原的“野生型”(即由染色体编码的，自然发生的)、修饰型和突变型以及它们的其他片段和衍生物。这些靶抗原中的任何一个均可单独给予或相互联合以共免疫的形式给予。
在一定情况下，用TA和其他抗原共免疫可能会使病人受益，例如与血管生成相关抗原(“AA”)联用。AA是一种与血管的诱生和/或继续生长的细胞有关的免疫分子(即肽或多肽)。例如，AA可以表达在内皮细胞(“EC”)上，内皮细胞是血管的基本结构成份。治疗肿瘤时，肿瘤内部或附近的供血血管上最好有AA存在，用AA免疫病人诱导出抗AA的免疫反应，这样，肿瘤内部或附近的血管生成过程将会被阻止或抑制。
AA包括血管内皮细胞生长因子(即，VEGF；Bernardini，等J.Urol.，2001，166(4)：1275-9；Starnes，等J.Thorac.Cardiovasc.Surg.，2001，122(3)：518-23；Dias，等Blood，2002，99：2179-2184)、VEGF受体(即，VEGF-R，flk-1/KDR；Starnes，等J.Thorac.Cardiooasc.Surg.，2001，122(3)：518-23)、EPH受体(即，EPHA2；Gerety，等1999，Cell，4：403-414)、表皮生长因子受体(即，EGFR；Ciardeillo，等Clin.CancerRes.，2001，7(10)：2958-70)、碱性成纤维细胞生长因子(即，bFGF；Davidson，等Clin.Exp.Metastasis 2000，18(6)：501-7；Poon，等AmJ.Surg.，2001，182(3)：298-304)、血小板源细胞生长因子(即，PDGF-B)、血小板源内皮生长因子(PD-ECGF；Hong，等J.Mol.Med.，2001，8(2)：141-8)、转化生长因子(即，TGF-a.；Hong，等J.Mol.Med.，2001，8(2)：141-8)、内皮因子(Balza，等Int.J.Cancer，2001，94：579-585)、Id蛋白(Benezra，R.Trends Cardiovasc.Med.，2001，11(6)：237-41)、蛋白酶，如uPA、uPAR和基质金属蛋白酶(MMP-2，MMP-9；Djonov，等J.Pathol.，2001，195(2)：147-55)、一氧化氮合酶(Am.J.Ophtllallllol.，20019 132(4)：551-6)、氨肽酶(Rouslhati，E.NatureCancer，2：84-90，2002)、凝血酶致敏蛋白(即，TSP-1，TSP-2；Alvarez，等Gynecol.Oncol.，2001，82(2)：273-8；Seki，等Int.J.Oncol.，2001，19(2)：305-10)、k-ras(Zhang，等Cancer Res.，2001，61(16)：6050-4)、Wnt(Zhang，等Cancer Res.，2001，61(16)：6050-4)、细胞周期蛋白依赖性激酶(CDKs；Drug Resist.Updat.2000，3(2)：83-88)、微管(Timar，等2001.Path.Oncol.Res.，7(2)：85-94)、热休克蛋白(即，HSP90(Timar，supra))、肝素结合因子(即，heparinase；Gohji，等Int.J.Cancer，2001，95(5)：295-301)、合成酶(即，ATP合酶，胸苷二磷酸合酶)、胶原蛋白受体、整联蛋白(即auj33、aup5、alpl、a2pl、a5pl)、表面蛋白聚糖NG2，AAC2-1(SEQ ID NO.：1)或AAC2-2(SEQ ID NO.：2)，包括这些抗原的“野生型”(即由染色体编码的，自然发生的)、修饰型和突变型以及它们的其他片段和衍生物。这些靶抗原中的任何一个都适用于本发明，可单独给予或相互联合给予或与其他试剂联合给予。
在某些实施方案中，用编码免疫原性靶的核酸分子，该核酸分子含编码一种或多种免疫原性靶或它们的片段或衍生物的核苷酸序列，例如ATCC(美国典型培养物保藏中心)保藏中DNA插件含有的核苷酸序列。术语“核酸序列”或“核酸分子”指一段DNA或RNA序列，该术语涵盖任何已知的DNA和RNA的碱基类似物形成的分子，但不限于4-乙酰胞嘧啶、8-羟基-N6-甲基腺苷、氮丙啶基-胞嘧啶、假异胞嘧啶、5-(羧基羟基甲基)尿嘧啶、5-氟尿嘧啶、5-溴尿嘧啶、5-羧基甲基氨基甲基-2-硫尿嘧啶、5-羧基-甲基氨基甲基尿嘧啶、二氢尿嘧啶、肌苷、N6-异-戊烯基腺嘌呤、1-甲基腺嘌呤、1-甲基假尿嘧啶、1-甲基鸟嘌呤、1-甲基肌苷、2，2二甲基-鸟嘌呤、2-甲基腺嘌呤、2-甲基鸟嘌呤、3-甲基胞嘧啶、5-甲基胞嘧啶、N6-甲基腺嘌呤、7-甲基鸟嘌呤、5-甲基氨基甲基尿嘧啶、5-甲氧基氨基-甲基-2-硫尿嘧啶、β-D-甘露酰Q核苷、5′-甲氧基羰基-甲基尿嘧啶、5-甲氧基尿嘧啶、2-甲硫基-N6-异戊烯基腺嘌呤、尿嘧啶-5-乙醇酸甲基酯、尿嘧啶-5-乙醇酸、oxybutoxosine、假尿嘧啶、Q核苷、2-硫胞嘧啶、5-甲基-2-硫尿嘧啶、2-硫尿嘧啶、4-硫尿嘧啶、5-甲基尿嘧啶、N-尿嘧啶-5-乙醇酸甲基酯、尿嘧啶-5-乙醇酸、假尿嘧啶、Q核苷、2-硫胞嘧啶和2，6-二氨基嘌呤等。
分离出的核酸分子指：(1)从来源细胞中提取总DNA时，至少与其天然存在在一起的50％的蛋白质、脂类、碳水化合物或其他物质相分离；(2)不再与自然条件下相连的多核苷酸的全部或部分连接；(3)被操作性连接到自然条件下不相连的多核苷酸上；和/或(4)作为较大多核苷酸序列的一部分自然条件下不存在。本发明中分离的核酸分子最好基本不含其他核酸分子和其他自然环境中存在的污染物，这些污染物会干扰其在多肽产生或治疗、诊断、预防和研究中的用途。当术语“自然发生的”、“天然的”和“天然存在的”在这里用于指生物物质，如核酸分子、多肽、宿主细胞和类似的其他东西时，是指该物质是自然而没有经人为操作的。类似，“非自然发生的”或“非天然的”表示该物质不是自然存在而是经过了人为结构修饰或人工合成的。
两个或更多核酸或多肽分子的同一性由对比其序列来决定。正如在本领域所熟知，“同一性”意味着核酸或多肽序列相似的程度，由匹配比较构成序列的基本单位(即核苷酸或氨基酸残基)确定。同一性通过一种特殊的数学模型或计算机程序(即算法(algorithm))设计的带空位比对以测定两个或更多序列的较小者之间的相同匹配的百分比。核酸分子之间的同一性也可由相关序列与该核酸序列或分离到的核酸分子的杂交的能力来确定。在确定这样的序列时，术语“高度严格条件”和“中度严格条件”是指允许序列互补的核酸杂交，而避免错配杂交的过程。用于杂交和洗涤的“高度严格条件”的例子有：0.015M氯化钠、0.0015M柠檬酸钠、65-68℃孵育或0.015M氯化钠、0.0015M柠檬酸钠和50％甲酰胺、42℃孵育(见，例如，Sambrook，Fritsch & Maniatis，Molecular Cloning：A Laboratory Manual(2nded.，Cold Spring Harbor Laboratory，1989)；Anderson等，Nucleic AcidHybridisation：A Practical Approach Ch.4(IRL Press Limited))。术语“中度严格条件”是指与“高度严格条件”相比，较大程度的DNA双螺旋碱基错配可能发生的条件。中度严格条件的例子是0.015M氯化钠、0.0015M柠檬酸钠50-65℃孵育或0.015M氯化钠、0.0015M柠檬酸钠和20％甲酰胺于37-50℃孵育。根据例子，0.015M钠离子在50℃孵育的中度严格条件下，将有21％的错配发生。杂交时，为了降低非特异反应和/或杂交背景，杂交和洗涤缓冲液中可包含其他试剂，例如0.1％牛血清白蛋白、0.1％聚乙烯吡喀烷酮、0.1％亚锡焦磷酸钠、0.1％十二烷基硫酸钠、NaDodSO4(SDS)、聚蔗糖、Denhardt’溶液超声处理过的鲑鱼精DNA(或其他非互补DNA)和硫酸葡聚糖，也可用其他合适的试剂。改变这些添加物的浓度和类别不会对杂交条件的严格性有太大影响。杂交实验通常在pH6.8-7.4的条件下进行，然而在通常的离子强度条件下，杂交率几乎不受pH的影响。
在本发明的某些实施方案中，载体被用于转运编码多肽的核酸序列进入细胞中。载体为任何用于将核酸序列导入宿主细胞的分子。在某些情况下，使用表达载体，表达载体为含有能够指导和/或控制被导入的核酸序列的表达的核苷酸序列且适合于转化宿主细胞的核酸分子。表达包括但不限于转录、翻译和有内含子存在时的剪接的过程。典型的表达载体含有一个或多个操作性连接到编码多肽的外源核酸序列的侧翼序列。侧翼序列可以是，例如同源的(即与宿主细胞来自同一种和/或株)、异源的(即与宿主细胞不同种、株)、杂源的(即一个以上来源的侧翼序列的结合)或合成的。
侧翼序列最好具有影响编码序列的复制、转录和/或翻译的能力且被操作性连接到编码序列上。正如这里所用，术语“操作性连接”指多核苷酸片段以功能关系连接到一起。例如，一个启动子或一个增强子如能影响编码序列的转录，则其为操作性连接到编码序列上。然而，只要能正常发挥功能，侧翼序列并无必要与编码序列相邻。如此，例如不翻译但转录的干预序列可存在于启动序列与编码序列之间，启动序列仍被认为是操作性连接到编码序列。同理，一个增强序列可以位于编码序列的上游或下游而影响该序列的转录。
在某些实施方案中，优选侧翼序列是在靶细胞中驱动基因高水平表达的转录调节序列，该转录调节区域可包含，例如，启动子、增强子、沉默子、抑制子或它们的联合。该转录调节区域可以是组成性的、组织特异性的、细胞特异性的(即可在一种组织和细胞中较其他组织和细胞中驱动高水平转录的区)、或可调节的(即对与化合物的作用作出反应)。转录调节区可来源于任何原核或真核生物，任何脊椎或无脊椎生物，或任何植物，只要该侧翼序列能在细胞内通过引起核酸的转录而发挥功能。各种不同的转录调节区均可在本发明的实施中使用。
合适的转录调节区包括，如CMV启动子(即CMV即早启动子)；来自真核基因的启动子(如雌激素诱导的鸡卵清蛋白基因，干扰素基因，糖皮质激素诱导的酪氨酸氨基转移酶基因和胸苷激酶基因)；腺病毒主要早期和晚期基因启动子；SV40早期启动区(Bernoist andChambon 1981，1981，NATURE 290：304-10)；包含于Rous肉瘤病毒(RSV)3’长端重复序列(LTR)的启动子(Yamamoto，等，1980，Cell22：787-97)；单纯疱疹病毒胸苷激酶(HSV-TK)启动子(Wagner.，1981，Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.78：1444-45)；金属硫蛋白基因的调节序列(Brinster，et al.，1982，Nature 296：39-42)；原核表达载体如β-内酰胺酶启动子(Villa-Kamaroff等，1978.Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.，75：3727-31)；或tac启动子(Deboer等，1983.Rorc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.80：21-25)。组织和/或细胞特异的转录控制区其中包括，如，只在胰腺腺泡细胞内激活的弹性蛋白酶I基因控制区段(Swift等，1984Cell 38：639-46；Ornitz等，1986，Cold Spring Cold Spring Harbor Symp.Quant.Biol.50：399-409(1986)MacDonald，1987，Hepatology 7：425-515)；在胰腺β细胞中激活的胰岛素基因控制区(Hanahan，1985，Nature315：115-22)；在淋巴细胞中激活的免疫球蛋白基因控制区(Grosschcdl等，1984，Cell38：647-58；Adames等，1985，Nature 318：533-38；Alexander等，1987，Mol.Cell.Biol.，7：1436-44)；在睾丸、乳腺、淋巴细胞和肥大细胞中的鼠乳腺瘤病毒控制区(Leder et.al.，1986，Cel145：485-95)；肝中的白蛋白基因控制区(Pinkert等，1987，Genes andDevel.1：268-76))；肝中的甲胎蛋白控制区(Krumlauf等，1985，Mol.Cell.Biol.，5：1639-48；Hammer等，1987，Science 235：53-58)；肝中的α-1-抗胰蛋白酶基因控制区(Kelsey等，1987，Genes and Devel.1：161-71)；髓样细胞中的β-球蛋白基因控制区(Mogram等，1985，Nature 315：338-40；Kollias等，1986，Cell 46：89-94)；大脑少突神经胶质细胞中的髓鞘碱性蛋白基因控制区(Readhead等，1987，Cell 48：703-12)；骨骼肌细胞中的肌球蛋白轻链-2基因控制区(Sani，1985Nature 314：283-86)；下丘脑中的促性腺释放激素基因控制区(Mason等，1986，Science234：1372-78)和黑色素瘤细胞中的酪氨酸酶启动子(Hart，I.SeminOncol 1996Feb；23(1)：154-8；Siders，等Cancer Gene Ther 1998 Sep-Oct；5(5)：281-91)。也可用诱导型启动子，即在有某些化合物存在或在有光、热、放射、四环素存在，或热休克蛋白存在时被激活的启动子(见例，WO00/10612)。其他合适的启动子为本领域已知。
如上所述，增强子也可以是合适的侧翼序列。增强子为DNA顺式作用元件，通常长度为10-300bp，作用于启动子以增强转录。典型的增强子无方向和位置依赖性，在受其控制的编码核酸序列的5’和3’端都有发现。已知有几个来源于哺乳动物基因的增强子序列(即，球蛋白、弹性蛋白酶、白蛋白、甲胎蛋白和胰岛素)。同样，SV40增强子，巨细胞病毒早期启动子增强子，多形瘤增强子和腺病毒增强子也有增强真核细胞启动子序列的作用。虽然增强子可以拼接入载体的编码序列的5’和3’端，但典型的还是位于启动子的5’端。其他本领域已知的合适增强子，应该也适用于本发明。
在制备本发明试剂的同时，细胞可能需要被转染或转化。转染指外来或外源基因被细胞吸收。当外源基因被导入细胞膜，该细胞即被转染。本领域有许多转染技术为人们所熟知(如，Graham等，1973，Virology 52：456；Sambrook等，Molecular Cloning，A laboratoryManual(Cold Spring Harbor Laboratories，1989)and Chu等，1981，Gene13：197)。利用这些技术能将一个和更多的DNA片段导入合适的宿主细胞。
在某些实施方案中，以转染导致被转染的细胞发生转化为优选。当细胞的特征发生改变时即细胞发生了转化，被转化意味着细胞被修饰而含有了新的核酸。转染后，被转染进入细胞的核酸可以物理的方式整合进细胞染色体而与细胞核酸重组为一体，也可作为一种游离的元件暂时存在于细胞中不被复制或作为质粒独立地复制。当转染进去的核酸随细胞的分裂而复制时，即该细胞发生了稳定转化。
本发明进一步提供了多肽形式的分离的免疫原性靶。一个多肽被认为是分离的应具备：(1)从来源细胞中分离时，至少已与其天然存在在一起的50％的多核苷酸、脂类、碳水化合物或其他物质相分离；(2)不再与自然条件下相连的多肽的全部或部分相连接(共价或非共价相互作用)；(3)被操作性连接到自然条件下不相连的多肽上(通过共价或非共价相互作用)；(4)自然条件下不存在。分离的多肽最好基本不含其他污染多肽或其他自然环境中存在的污染物，这些污染物会干扰其在多肽产生或治疗、诊断、预防和研究中的用途。免疫原性靶多肽可以是成熟的多肽，如这里所定义，其氨基端可以有也可以无甲硫氨酸残基，这取决于它们的制备方法。另外涉及相关多肽如片段、变异体(等位，拼接)、直向同源物、同源物和衍生物，例如至少具有免疫原性靶的一种特征或功能(即活性或抗原性)的上述物质。还涉及肽，指一系列至少与其来源多肽的某部分序列具序列相关性的连续的氨基酸残基。在优选实施方案中，肽含有约5-10个氨基酸、10-15个氨基酸、15-20个氨基酸、20-30个氨基酸或30-50个氨基酸。在更优选的实施方案中，例如，肽含9-12个氨基酸，正好适合于提呈给MHCI类分子。
核酸或多肽片段在其氨基端(有或无前导序列)和/或羧基端包含一个序列截断(即，核酸或多肽)。片段也可以包括变异体(等位的，拼接的)、直向同源物、同源物和其他与母序列相比有一个或多个的氨基酸插入或取代或内在缺失的变异体。在优选的实施方案中，截断和/或缺失含约10个氨基酸、20个氨基酸、30个氨基酸、40个氨基酸、50个氨基酸或更多。由此产生的多肽片段将含约10个氨基酸、25个氨基酸、30个氨基酸、40个氨基酸、50个氨基酸、70个氨基酸或更多。这样的多肽片段的氨基端可选择性地含有一个甲硫氨酸残基。不言而喻，这样的片段应该能被用于，例如，产生与免疫原性靶多肽应答的抗体或细胞免疫。
变异体是指与原有序列相比有一个或多个序列发生了取代、缺失和/或加入的序列。变异体可以是自然发生的或人为操控的。这样的变异体可以从相应的核酸分子制备而得。在优选实施方案中，变异体有1-3、1-5、1-10、1-15、1-20、1-25、1-30、1-40、1-50或多于50的氨基酸发生了取代、插入、添加和/或缺失。
一个等位变异体为一个生物或一个生物群体的染色体上占据同一基因座的基因的几种可能自然发生的不同表型之一。一个拼接变异体是指由原始转录物经拼接形成的几个RNA转录物产生的多肽之一。直向同源物指来自不同的种属的同样的核酸和多肽序列，例如，鼠和人的一个相同的免疫原性靶多肽可被认为相互直系同源。一个衍生序列是指从母代序列衍生而来、其序列发生有取代、添加、缺失和化学修饰的序列。变异体也可包括融合蛋白，融合蛋白指一种或多种的第一序列(如肽)与至少另一个序列(如外源肽)在氨基或羧基端融合在一起。
“相似性”是一个与同一性有关的概念，但相似性指对相关性的衡量，相关性包括了相同匹配和保守取代匹配两者。如果两个多肽序列，例如，有10/20相同氨基酸，其余均为非保守取代，则同一性和相似性均为50％。同一个例子，如果多了5个位点上的保守性取代，则同一性的百分比仍为50％，相似性百分比为75％(15/20)。这样，在有保守性取代的情况下，两个多肽间相似性的百分比将比这两个多肽间的同一性的百分比高。
取代可以是保守的，也可是非保守的，或它们的任何组合。对多肽序列的保守氨基酸修饰(和对编码序列的相应修饰)可产生功能和化学特征与母体多肽相似的多肽。例如，“保守氨基酸取代”可涉及一个天然氨基酸被一个非天然氨基酸取代，但其对该位点的氨基酸残基的大小、极性、电荷、疏水性和亲水性几乎没有影响或完全没有影响，特别是不会引起免疫原性的降低。合适的保守氨基酸取代见表1。
表1
  原有残基   示例性取代   优选的取代
  Ala   Val，Leu，Ile   Val
  Arg   Lys，Gln，Asn   Lys
  Asn   Gln   Gln
  Asp   Glu   Glu
  Cys   Ser，Ala   Ser
  Gln   Asn   Asn
  Glu   Asp   Asp
  Gly   Pro，Ala   Ala
  His   Asn，Gln，Lys，Arg   Arg
  Ile   Leu，Val，Met，Ala，Phe，正亮氨酸   Leu
  Leu   正亮氨酸，Ile，Val，Met，Ala，Phe   Ile
  Lys   Arg，1，4-二氨基-丁酸，Gin，Asn   Arg
  Met   Leu，Phe，Ile   Leu
  Phe   Leu，Val，Ile，Ala，Tyr   Leu
  Pro   Ala   Gly
  Ser   Thr，Ala，Cys   Thr
  Tlir   Ser   Ser
  Trp   Tyr，Phe   Tyr
  Tyr   Trp，Phe，Thr，Ser   Phe
  Val   Ile，Met，Leu，Phe，Ala，正亮氨酸   Leu
一个熟练的技术人员能够利用已知的技术来确定合适的多肽变异体。为了鉴别一个分子上可以进行改变但又不至于破坏其生物活性的(即MHC结合能力，免疫原性)合适区域，一个本领域技术人员可能会把目标对准被相信是对该活性不重要的区域。例如，当已知从同一种系或不同种系来源的具有相似活性的相似多肽后，本领域技术人员可将一个多肽的氨基酸序列与其相似多肽进行比较。通过这样的比较分析，可鉴别相似多肽分子上的保守残基或保守部位。对这些相似多肽分子上的非保守区域的改变应该不至于对多肽的活性和/或结构产生负面影响。同理，已知与MHC分子结合的必要残基，可以对这些残基进行修饰来增强结合力。然而，如果修饰导致了与MHC结合力的下降，在多数情况下是不可取的。本领域技术人员应该知道，即使在相对保守的区域，人们可用化学性相似的氨基酸残基取代自然残基而保留其活性。其实，即使对生物学活性或结构重要的区域也可用保守氨基酸取代而不破坏其生物学活性或不产生对其结构的负面影响。
其他优选的多肽变异体包括糖基化变异体，即对比原氨基酸序列，多肽中糖基化位点的数量和类型有变化。在一个实施方案中，与原氨基酸序列相比多肽变异体含有更多或更少的N连接的糖基化位点。一个N连接的糖基化位点是以Asn-X-Ser或Asn-X-Thr的序列为特征，其中以X代表的氨基酸残基可以是除了脯氨酸以外的任何氨基酸残基。氨基酸残基取代产生的这一序列提供了一个潜在的可增添N连接碳水化合物链的新位点。反之，取代去掉这一序列将失去一个已经存在的N连接碳水化合物链。实施方案还提供了一种对N连接碳水化合物链的重排，其中一种或多种N糖基化位点(通常是那些自然存在的)被去除，而一种或多种新的N-连接位点被创造出。如要影响多肽的O连接糖基化，应该对丝氨酸和苏氨酸残基进行修饰。
另外的优选的变异体包括半胱氨酸变异体，对比原氨基酸序列，其中一种或多种的半胱氨酸残基被去除或被其他氨基酸取代。半胱氨酸变异体在不溶性包涵体分离后多肽必须重新折叠以形成有生物活性的构型的情况下很有用处。半胱氨酸变异体通常比原蛋白拥有较少的半胱氨酸残基，并且拥有的半胱氨酸呈偶数以减低未匹配的半胱氨酸残引起的反应。
在其他实施方案中，本发明中的分离多肽含有有助于纯化的融合多肽片段。融合可发生在这样的目的多肽变异体的氨基端或羧基端，或不通过接头或衔接分子融合，或通过接头或衔接分子融合。接头或衔接分子分子可以是一种或多种的氨基酸残基，典型的约20到约50个氨基酸残基。接头或衔接分子分子上也可设计入DNA限制性内切酶或蛋白酶的切点以分离融合的部分。一旦构建好，该融合多肽应该能够根据这里描述的方法得到。合适的融合片段其中包括，金属结合域(如，多组氨酸片段)、免疫球蛋白结合域(即A蛋白、G蛋白、T细胞、B细胞、Fc受体或补体蛋白抗体结合域)、糖结合域(如麦芽糖结合域)和/或“标记”域(如，至少α半乳糖苷酶的一部分，链霉的标记多肽、T7标记多肽、FLAG多肽或其他化合物通过与之结合而能被纯化的域，如单克隆抗体)。多肽表达出来时已带有标记，可被用作亲和纯化的工具将目的多肽序列从宿主细胞中纯化出来。亲和纯化可通过用抗标记的抗体做亲和填料的柱层析来完成。标记可以通过某些特定的多肽酶从已纯化的目的多肽的序列中切除。如下述，融合也可以被设计为一个TA和一个协同刺激物之间的融合，这样的例子有趋化因子CXC10(IP-10)、CCL7(MCP-3)或CCL5(RANTES)。
融合基序可以加强转运免疫原性靶到MHC加工场所，如内质网。这些序列被称为转导或胞运序列，包括从HIV tat(见Kim等1997J.Immunol 159：1666)、果蝇属(drosophila)antp基因(antennapedia)(见Schutze-Redelmeier等1996，J.Immunol.157：650)得来的序列，或人周期-1蛋白(hPERl；特别是，SRRHHCRSKAKSRHH)序列。
另外，多肽及其变异体可以与一个同源多肽融合形成同源二聚体，或与异源多肽融合形成异源二聚体。异源肽或多肽包括但不限于：用于检测和/或分离融合多肽的抗原决定簇，跨膜受体蛋白或其片段，如跨膜细胞外域或跨膜区和细胞内域；与跨膜受体结合的配体或其片段；具有催化活性的酶或其片段；有促寡聚反应的多肽或肽，如亮氨酸拉链域；增进稳定性的多肽或肽，如免疫球蛋白恒定区；与原多肽及其变异体有着不同的治疗活性的多肽。
在某些实施方案中，有利的是，将编码免疫原性靶、多肽或其衍生物的核酸序列与一种或多种编码一种或多种协同刺激物，如细胞表面蛋白、细胞因子或化学趋化因子的核酸序列结合在本发明的组合物中。协同刺激物可以以多肽或编码多肽的核酸序列的形式存在于此种组合物中。合适的协同刺激分子包括，如与CD28家族成员结合的多肽(即，CD28，ICOS；Hutloff，等Nature 1999，397：263-265；Peach，等JExp Med 1994，180：2049-2058)如CD28结合多肽B7.1(CD80；Schwarz，1992；Chen等，1992；Ellis，等J.Inznzunol.9156(8)：2700-9)和B7.2(CD86；Ellis9等J.Immunol.，156(8)：2700-9)；突变的和衍生的B7分子(WO 00/66162)；与整联蛋白家族成员结合的多肽(如，LFA-1(CDlla/CDl8)；Sedwick，等J Immunol1999，162：1367-1375；Wulfing，等Science 1998，282：2266-2269；Lub，等Immunol Today 1995，16：479-483)包括ICAM家族成员(如，ICAM-1，-2 or-3)；与CD2家族成员结合的多肽(如，CD2，signallinglymphocyte activation molecule(CDw150 or″SLAM″；Aversa，等，JImmunol 1997，158：4036-4044))如CD58(LFA-3；CD2 ligand；Davis，等Immunol Today 1996，17：177-187)或SLAM配体(Sayos，等Nature 1998，395：462-469)；与热稳定蛋白结合的多肽(HSA orCD24；Zhou，等EurJ Immunol 1997，27：2524-2528)；与TNF受体(TNFR)家族成员结合的多肽(如4-1BB(CD137；Vinay，等SeminImmunol 1998，10：481-489)、OX40(CD134；Weinberg，等SeminImmunol 1998，10：471-480；Higgins，等J Inzmurzol 1999，162：486-493)、and CD27(Lens，等Semin Immunol 1998，10：491-499))如4-1BBL(4-1BB ligand；Vinay，等Benzin Immunol 1998，10：481-48；DeBenedette，等J Immunol 1997，158：551-559)、TNFR相关因子-1(TRAF-1；4-1BB ligand；Saoulli，等J Exp Med 1998，187：1849-1862，Arch，等Mol Cell Biol 1998，18：558-565)、TRAF-2(4-1BB and OX40ligand；Saoulli，等J Exp AvIed 1998，187：1849-1862；Oshima，等IntImmunol 1998，10：517-526，Kawamata，等J Biol Chem 1998，273：5808-5814)、TRAF-3(4-1BB and OX40 ligand；Arch，等Mol Cell Biol1998，18：558-565；Jang，等Biochem Biophys Res Commun 1998，242：613-620；Kawamata S，等J Biol Chem 1998，273：5808-5814)、OX40L(OX40 ligand；Gramaglia，等J Immunol 1998，161：6510-6517)、TRAF-5(OX40 ligand；Arch，等Mol Cell Biol 1998，18：558-565；Kawamata，等J Biol Chem 1998，273：5808-5814)和CD70(CD27 ligand；Couderc，等Cancer Gene Ther.，5(3)：163-75)。CD154(CD40 ligand or″CD40L″；Gurunathan，等J.Immunol.，1998，161：4563-4571；Sine，等Hum.Gene Ther.，2001，12：1091-1102)也是合适的。
一种或多种的细胞因子也可以是合适的协同刺激物或“佐剂”，或作为多肽或通过本发明组合物中的核酸编码表达。(Parmiani，等Immunol Lett 2000Sep 15；74(1)：41-4；Berzofsky，等Nature Immunol.1：209-219)。合适的细胞因子包括，例如，白介素-2(IL-2)(Rosenberg，等Nature Med.4：321-327(1998))、IL-4、IL-7、IL-12(综述见Pardoll，1992；Harries，等J.Gene Med.2000 Jul-Aug；2(4)：243-9；Rao，等J.Immunol.156：3357-3365(1996))、IL-15(Xin，等Vaccine，17：858-866，1999)、IL-16(Cruikshank，等J.Leuk Biol.67(6)：757-66，2000)、IL-18(I.Cancer Res.Clin.Oncol.2001.127(12)：718-726)、GM-CSF(CSF(Disis，等Blood，88：202-210(1996))、肿瘤坏死因子(TNF-α；)或干扰素如IFN-α；或INF-γ。其他细胞因子也可能适用于本发明，正如本领域所知。
化学趋化因子也可被使用，例如，CXCL10(IP-10)和CCL7(MCP-3)融合到一个肿瘤自身抗原形成的融合蛋白诱导抗肿瘤免疫性(Biragyn，等Nattlre Biotecll.1999，17：253-258)。趋化因子CCL3(MIP-1α)和CCL5(RANTES)(Boyer，等Iaccine，1999，17(Supp.2)：S53-S64)也可应用于本发明中，其他合适的化学趋化因子为本领域所知。
正如本领域所知，对免疫机制的抑制或负调节可以被阻断，从而增强免疫反应，如用抗-CTLA-4(Shrikant，等Immunity，1996，14：145-155；Sutmuller，等J.Exp.Med.，2001，194：823-832)、抗-CD25(Sutmuller，supra)、抗-CD4(Matsui，等J.Immunol.，1999，163：184-193)、融合蛋白IL13Ra2-Fc(Terabe，等Natte Immunol.，2000，1：515-520)及其联合进行治疗(即，抗-CTLA-4and抗-CD25，Sutmuller，supra)有上调抗肿瘤免疫反应的作用，应该可以应用于本发明。
这些化合物中的任何一种可以单独给予或与其他试剂联合给予。如CD80、ICAM-1和LFA-3(″TRICOM″)的联合给予可以增强抗肿瘤的免疫反应。(Hodge，等Cancer Res.59：5800-5807(1999)。其他有效的联合包括，如IL-12+GM-CSF(Ahlers，等J.Immunol.，158：3947-3958(1997)；1wasaki，等J.Immunol.158：4591-4601(1997))、IL-12+GM-CSF+TNF-α(Ahlers，等Int.Immunol.13：897-908(2001))、CD80+IL-12(Fruend，等Int.J.Cancer，85：508-517(2000)；Rao，等supra)和CD86+GM-CSF+IL-12(Iwasaki，supra)。本领域技术人员在应用本发明时应该知道其他有用的联合。另外，他们应该知道可以用来调节该机理的其他试剂和方法，这些试剂和方法连同他们所知的其他试剂和方法可以应用于本发明。
其他用于提高核酸免疫效率的策略也可被采用，包括，如自身复制型的病毒复制子的使用(Caley，等1999.Vacci7ze，17：3124-2135；Dubensky，等2000.Mol.Med.6：723-732；Leitner，等2000.Cancer Res.60：51-55)、密码优化(Liu，等2000.Mol.Ther.，1：497-500；Dubensky，supra；Huang，等2001.J.Tirol.75：4947-4951)、体内电穿孔(Widera，等2000.J.Immunol.164：4635-3640)、CpG刺激基序的掺入(Gurunathan，等Ann.Rev.Immunol.，2000，18：927-974Leitner，supra；Cho，等J.Immunol.168(10)：4907-13)、内吞或泛素蛋白的加工通路的目标序列(Thomson，等1998.J.tirol.72：2246-2252；Velders，等2001.J.Immunol.166：5366-5373)、Marek′s病1型病毒VP22序列(J.Virol.76(6)：2676-82，2002)、初免和加强策略(Gurunathan，supra；Sullivan，等2000.Natirre，408：605-609；Hanke，等1998.Vaccine，16：439-445；Amara，等2001.Science，292：69-74)和粘膜导入载体的使用，如沙门氏菌(Darji，等1997.Cell，91：765-775；Woo，等2001.Facets，19：2945-2954)。以及其他本领域所知的方法，其中的一些将在下面描述。
在用免疫原性靶治疗和/或预防癌症时也可使用化学治疗药、放射治疗、抗血管生成化合物或其他药(Sebti，等Oncogene 2000Dec27；19(56)：6566-73)。例如，在治疗转移性乳癌时，有效的化学治疗剂其中包括环磷酰胺、盐酸多柔比星、紫杉醇、多烯紫衫醇、诺维本、希罗达和丝裂霉素C。联合治疗方案包括环磷酰胺+甲氨蝶呤+5氟尿嘧啶；环磷酰胺+多柔比星+5氟尿嘧啶；或环磷酰胺+多柔比星也被证明有效。其他化合物、如泼尼松、紫杉醇(taxane)、诺维本、丝裂霉素C、或长春碱也因各种原因被使用。大多数的乳腺癌患者为雌激素受体阳性(ER+)肿瘤，对这些病人内分泌疗法(如三苯氧胺)是化学疗法上的优选。对这些病人，三苯氧胺或作为二线用药的孕激素(醋酸甲羟孕酮或醋酸甲地孕酮)为优选。芳香酶抑制剂(如氨基格鲁米特和其类似物，如来曲唑)能降低维持肿瘤生长所需的雌激素水平，在某些病人中可作为二线或三线内分泌疗法用药。
其他癌症可能需要不同的化学治疗方案，如转移性直肠癌，通常用盐酸依立替康制剂(依立替康或CPT-11)、5-氟尿嘧啶或甲酰四氢叶酸单独或相互联合治疗。蛋白酶抑制剂和整联蛋白抑制剂，如MMP抑制剂马立马司他(British Biotech)、COL-3(Collagenex)、新伐司他(Aetema)、AG3340(Agouron)、BMS-275291(Bristol Myers Squibb)、CGS 27023A(Novartis)或整联蛋白抑制剂Vitaxin(Medimmune)或MEDl 522(Merck KgaA)也可能适用。直肠癌相关的免疫原性靶在与这些化学治疗药的联合应用中可发挥免疫靶向性作用。同理，本领域所知的治疗其他型癌症的化学治疗药物可与这里描述的免疫原性靶联合使用。
许多本领域所知的抗血管生成剂应该适于与免疫原性靶疫苗联合使用(参见例如，Timar，等2001.Pathology Oi7coL Rt--s.，7(2)：85-94)。它们包括，如生理介质生长因子(即，ANG-2，Nul92，4(HGF)、β转化生长因子(TGF-β))、细胞因子(即干扰素如IFN-α、-β、-γ、血小板因子4(PF-4)、PR-39)、蛋白酶(即，裂解的AT-111、胶原XVIII片段(内皮他丁))、高分子量激肽释放酶-d5纤溶酶片段(血管他丁)、凝血酶原-F1-2，TSP-1)、蛋白酶抑制剂(即，金属蛋白酶组织抑制剂例如TIMP-1、-2或-3；乳腺丝抑蛋白；纤溶酶原激活剂-抑制剂如PAI-1；色素上皮来源因子(PEDF))、Tumstatin(得自ILEX，Inc.)、抗体产品(即，胶原结合抗体HUIV26、HUl77、XL313；抗-VEGF；抗-整联蛋白(即，Vitaxin，(Lxsys)))和糖苷酶(即，肝素酶-I，-III)。已知或相信有抗血管生成作用的“化学的”或修饰的生理介质，如长春碱、紫杉醇、酮康唑、沙立度胺、多拉司他汀(dolestatin)、考布他汀(combrestatin)A、雷帕霉素(rapamycin)(Guba，等2002，Nature Med.，8：128-135)、CEP-7055(得自Cephalon，Inc.)、醋酸黄酮、Bay 12-9566(Bayer Corp.)、AG3340(Agouron，Inc.)、CGS 27023A(Novartis)、四环素衍生物(即，COL-3(Collagenix，Inc.))、新伐司他(Aetema)、BMS-275291(Bristol-Myers Squibb)、低剂量5-FU、低剂量氨甲喋呤(MTX)、伊索拉定、根赤壳菌素、环孢霉素A、卡托普利、塞来考昔、D45152-硫酸多糖、阳离子蛋白(Protamine)、阳离子肽-VEGF、苏拉明(多磺酸萘基脲)、干扰VEGF产生或发挥功能的化合物(如，SU5416 orSU6668(Sugen)、PTK787/ZK22584(Novartis))、偏端霉素A、Angiozyme(ribozyme)、异黄酮、十字孢碱衍生物、金雀异黄素、EMD121974(MerckKcgaA)、酪氨酸磷酸化抑制剂、异喹诺酮、维甲酸、羧基氨基三唑、TNP-470、奥曲肽、2-甲氧基雌二醇、氨基醇(即，角鲨胺)、谷胱甘肽类似物(即，N-乙酰-L-半胱氨酸)、考布他汀A-4(Oxigene)、Eph受体阻断因子(Nature，414：933-938，2001)、Rh-血管他丁、Rh-内皮他丁(WO 01/93897)、环-RGD肽、accutin-解联蛋白、苯并二氮杂、人化的抗-avb3Ab、Rh-PAI-2、盐酸阿米洛利、对酰氨基苯甲脒、抗-uPA ab、抗-uPAR Ab、L-苯丙氨酰-N-甲酰胺(即，巴马司他，马立马司他)、AG3340和米诺环素。其他许多本领域所知的合适因子也应该能够满足本发明的应用。
本发明也可与“非传统”的癌症治疗方法联合使用，如，近来有证据显示给予某些厌氧菌治疗有助于减缓肿瘤生长。在一个研究中，梭状芽胞杆菌(Clostridium novyi)经修饰去掉一个由噬菌体携带的毒素基因后，用于患直肠癌的小鼠(Dang，等P.N.Ai.S.USA，98(26)：15155-15160，2001)。结合化学疗法，该治疗显示可引起动物体内的肿瘤发生坏死。本申请中的试剂和方法可与这样的方法联合使用。
编码免疫原性靶的核酸可以通过数种可行技术的任何一种用于病人。已有几种病毒载体被成功地运用于将核酸导入宿主体内，它们之中包括：逆转录病毒、腺病毒、腺相关病毒、疱疹病毒和痘病毒。在本领域有许多这样的病毒载体可用。本发明中的载体可以通过在本领域广泛应用的标准的重组技术来构建。这样的技术可以从普通的分子生物学参考书中找到，如分子克隆：实验室手册(Sambrook，等，1989，Cold Spring Harbor Laboratory Press)、基因表达技术(Methods in Enzymology，Vol.185，edited by D.Goeddel，1991.Academic Press，San Diego，CA)和PCR方法：方法和使用指南(Innis，等1990.Academic Press，San Diego，CA)。
优选的逆转录病毒是慢病毒衍生物和鼠和禽类逆转录病毒衍生物。合适的逆转录病毒的例子包括，Moloney鼠白血病病毒(MoMuLV)、Harvey鼠肉瘤病毒(HaMuSV)、鼠乳腺瘤病毒(MuMTV)、SIV、BIV、HIV和Rous肉瘤病毒(RSV)。许多逆转录病毒能整合入多种外源核酸序列。由于重组的逆转录病毒是缺陷型的，需要借助外来的帮助产生感染性载体颗粒。这种帮助可来自于，如，编码逆转录病毒结构基因的辅助细胞系。适合的辅助细胞系包括Ψ2、PA317和PA12。用这些细胞系产生的病毒毒粒感染组织细胞系，如NIH 3T3，从而生产大量的嵌和逆转录病毒毒粒。逆转录病毒可经传统方法用药(如注射)或将“生产细胞系”植入到目标细胞群附近(Culver，K.，等，1994，Hum.Gene Ther.，5(3)：343-79；Culver，K.，等，Cold Spring Harb.Symp.Quant.Biol.，59：685-90)；Oldfield，E.，1993，Hum.Gene Ther.，4(1)：39-69)。该生产细胞系被构建来产生并在目标细胞的附近释放病毒载体，部分释放出来的病毒颗粒接触并感染细胞，从而将本发明中的核酸导入目标细胞。随着目标细胞的感染，载体所带的核酸随之发生表达。
腺病毒载体在将基因传导入真核细胞(Rosenfeld，M.，等，1991，Science，252(5004)：431-4；Crystal，R.，等，1994，Nat.Genet.，8(1)：42-51)、在真核细胞基因表达的研究(Levrero，M.，等，1991，Gene，101(2)：195-202)、在疫苗的研发(Graham，F.and Prevec，L.，1992，Biotechrtoloy，20：363-90)和在动物模型(Stratford-Perricaudet，L.，等，1992，Bone Marrow Transplant.，9(Suppl.1)：151-2；Rich，D.，等，1993，Hum.Gene Tuer.，4(4)：461-76)中被证明特别有效。重组腺病毒用于体内不同组织的实验途径其中包括气管内滴注(Rosenfeld，M.，等，1992，Cell，68(1)：143-55)、肌肉注射(Quantin，B.，等，1992，Proc.Natl.24cad.Sci.U.S.A.，89(7)：2581-4)、外周静脉注射(Herz，J.，and Gerard，R.，1993，Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.，90(7)：2812-6)和脑内立体定向接种(Le Gal La Salle，G.，等，1993，Science，259(5097)：988-90)。
腺相关病毒(AAV)具有高度感染性，宽泛的宿主范围和整合入宿主细胞基因组的特异性(Hermonat，P.，等，1984，Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.，81(20)：6466-70)。I型单纯疱疹病毒是另一个很具吸引力的载体系统，特别是因为它的嗜神经特性而应用于神经系统(Geller，A.，等，1991，Trends Neurosci.，14(10)：428-32；Glorioso，等，1995，Mol.Biotechnol.，4(1)：87-99；Glorioso，等，1995，Amnu.Reo.Microbiol.，49：675-710)。
痘病毒是另外的有效表达载体(Smith，等1983，Gene，25(1)：21-8；Moss，等，1992，Biotechnology，20：345-62；Moss，等，1992，Curr.Top.Microbiol.Immunol.，158：25-38；Moss，等1991.Science，252：1662-1667)。其中有效的痘病毒除其它的以外还包括牛痘(vaccinia)、NYVAC、禽痘(aVipox)、鸟痘(fowlpox)、金丝雀痘(canarypox)、ALVAC和ALVAC(2)。
NYVAC(vP866)是从牛痘病毒的哥本哈根(Copenhagen)疫苗株通过去除6个编码已知或潜在的毒性因子的非必需区衍生而来(参见例如，美国专利5,364,773和5,494,807)。缺失基因座被改造为外来基因插入的受体基因座。缺失的区是：胸腺激酶基因(TK；J2R)；出血区(u；B13R+B14R)；A型包涵体基因(ATI；A26L)；血凝素基因(HA；A56R)；宿主范围基因区(C7L-K1L)；和大亚单位，核糖核苷酸还原酶基因(14L)。NYVAC是经过基因改造，被特异性去除了编码与毒力和宿主范围有关的基因产物的18个开放性阅读框架的牛痘株。NYVAC显示可有效表达TAs(参见例如，美国专利6,265,189)。
根据布达佩斯协定的条款，NYVAC(vP866)、vP994、vCP205、vCP1433、placZH6H4Lreverse、pMPC6H6K3E3和pC3H6FHVB保藏于ATCC，其检索号分别为VR-2559、VR-2558、VR-2557、VR-2556、ATCC-97913、ATCC-97912和ATCC-97914。
基于ALVAC的重组病毒(即，ALVAC-1和ALVAC-2)也适于在本发明中使用(参见例如，美国专利5,756,103)。除了ALVAC(2)基因组含有在牛痘病毒启动子控制下的牛痘病毒的E3L和K3L外ALVAC(2)与ALVAC(1)相同。(美国专利6,130,066；Beattie等，1995a，1995b，1991；Chang等，1992；Davies等，1993)。BALVAC(1)和ALVAC(2)二者均显示可有效表达外源基因序列，如TAs(Tartaglia等，1993a，b；美国专利5,833,975)。ALVAC根据布达佩斯协定的条款保藏于美国典型培养物保藏中心(ATCC)，10801 UniversityBoulevard，Manassas，Va.20110-2209，USA，ATCC检索号为VR-2547。
另一个有效的牛痘病毒载体是TROVAC。TROVAC是一个减毒的经噬斑克隆分离的衍生自禽痘病毒FP-1疫苗株的禽痘病毒。该禽痘病毒已获许用于1天龄的幼鸡的接种。TROVAC同样根据布达佩斯协定的条款保藏于ATCC，其检索号为2553。
“非病毒”的质粒载体也能适于本发明的使用。优选的质粒载体与细菌、昆虫和/或哺乳动物宿主细胞相容。这些载体包括，如PCR-11、pCR3和pcDNA3.1(Invitrogen，San Diego，CA)、pBSII(Stratagene，La Jolla，CA)、pET 15(Novagen，Madison，WI)、pGEX(Pharmacia Biotech，Piscataway，NJ)、pEGFP-N2(Clontech，Palo Alto，CA)、pETL(BlueBacII，Invitrogen)、pDSR-alpha(PCT pub.No.WO90/14363)和pFastBacDual(Gibco-BRL，Grand Island，NY)同时还有Bluescript质粒的衍生物(高拷贝数基于COLE1的噬菌粒，StratageneCloning Systems，La Jolla，CA)、用于克隆Taq-扩增的PCR产物的PCR克隆质粒(如，TOPOTM TA cloningkit，PCR2.1质粒衍生物，Invitrogen，Carlsbad，CA)。细菌载体也可以用于本发明，这些载体包括，如志贺氏菌(Shigella)、沙门氏菌(Salmonella)、霍乱弧菌(Vibriocholerae)、乳酸杆菌(Lactobacillus)、卡介苗(Bacille calmette guérin)(BCG)和链球菌(Streptococcus)(参见例如，WO 88/6626；WO 90/0594；WO 91/13157；WO 92/1796；和WO 92/21376)。其他本领域所知的非病毒质粒表达载体和系统也可用于本发明。
合适的核酸导入技术之中包括DNA-配体复合物、腺病毒-配体-DNA复合物、DNA直接注射、CaPO4沉淀、基因枪技术、电穿孔和胶体分散系统。胶体分散系统包括微分子复合物、纳米囊、微球、微珠和包含有水包油乳剂、微胶粒、混合微胶粒和脂质体的脂类系统。本发明优选的胶体系统为脂质体，脂质体是人工的膜性囊泡用于体外和体内基因导入的介质。RNA、DNA和完整的病毒颗粒能够被包裹在其水相内部以生物活性形式被导入细胞。(Fraley，R.等，1981Trends Biochem.Sci.，6：77)。脂质体的组合物通常是磷脂的复合体，尤其是高相转换温度的磷脂，通常与类固醇，特别是胆固醇联合。也可用其他磷脂和脂类。脂质体的物理特征取决于pH、离子强度和二价阳离子的存在。用于脂质体生产的脂类例子包括磷脂酰基化合物如磷脂酰甘油、磷脂酰胆碱、磷脂酰丝氨酸、磷脂酰胆胺、鞘脂、脑苷脂和神经节苷脂。特别有用的是二酰磷脂酰甘油，其中脂类的组成成份含14-18个碳原子，特别是16-18个碳原子，是饱和的。图解的磷脂包括卵磷脂酰胆碱、二棕榈酰磷脂酰胆碱和二硬脂酰磷脂酰胆碱。
免疫原性靶也可以和一种或多种的佐剂联合应用以强化免疫反应。佐剂的例子见表2。
表2免疫佐剂类型
  佐剂类型   一般例子   特例/参考文献
  凝胶类型   氢氧化铝/磷酸铝(铝佐剂)   (Aggerbeck and Herom，1995)
  磷酸钙   (Relyveld，1986)
  微生物   胞壁酰二肽(MDP)   (Chedid等，1986)
  细菌外毒素   Cholera toxin(CT)，E.coli labile toxin(LT)(Freytag andClements，1999)
  基于内毒素的佐剂   Monophosphoryl lipid A(MPL)(Ulrich and Myers，1995)
  其他细菌   CpG oligonucleotides(Corral and Petray，2000)，BCGSequences(Krieg，et al.Nature，374：576)，tetanustoxoid(Rice，et al.J.Immunol.，2001，167：1558-1565)
  颗粒   生物降解的多聚微球   (Gupta等，1998)
  免疫刺激复合物(ISCOMs)   (Morein and Bengtsson，1999)
  脂质体   (Wassef等，1994)
  油-乳剂和表面活性剂佐剂   弗氏不完全佐剂   (Jensen等，1998)
  微流态乳剂   MF59(Ott等，1995)SAF(Allison and Byars，1992)(Allison，1999)
  皂苷类   QS-21(Kensil，1996)
  合成类   胞壁酰肽衍生物   Murabutide(Lederer，1986)Threory-MDP(Allison，1997)
  非离子阻断共聚物   L121(Allison，1999)
  聚磷腈(PCPP)   (Payne等，1995)
  合成的多核苷酸   Poly A：U，Poly L：C(Johnson.1994)
  沙利度胺衍生物   CC-4047/ACTIMID(J.Immunol.，168(10)：4914-9
本发明中的免疫原性靶也可用于产生供筛选检测或免疫治疗用的抗体，这是本发明的另一方面。其他方面的用途对本领域技术的人员应该是显而易见的。术语“抗体”包括抗体片段，正如本领域所知，包括Fab、Fab2、单链抗体(Fv)、人源化抗体、嵌合抗体、人抗体，通过为本领域所知的数种方法产生。
制备抗体的和应用各型抗体的方法为本领域技术人员所熟知，而且应该适用于本发明的应用(见，例如，Harlow，等Antibodies：ALaboratory Manual，Cold Spring Harbor Laboratory，1988；Harlow，等Using Antibodies：A Labonatory Manual，Portable Protocol No.1，1998；Kohler and Milstein，Nature，256：495(1975))；Jones等Nature，321：522-525(1986)；Riechmann等Nature，332：323-329(1988)；Presta(Curr.Op.Struct.Biol.，2：593-596(1992)；Verhoeyen等(Science，239：1534-1536(1988)；Hoogenboom等，J.Mol.Biol.，227：381(1991)；Marks等，J.Mol.Biol.，222：581(1991)；Cole等，Monoclonal Antibodies andCancer Therapy，Alan R.Liss，p.77(1985)；Boerner等，J.Immunol.，147(1)：86-95(1991)；Marks等，Bio/Technology 10，779-783(1992)；Lonberg等，Nature 368856-859(1994)；Morrison，Nature 368 812-13(1994)；Fishwild等，Nature Biotechnology 14，845-51(1996)；Neuberger，Nature Biotechnology 14，826(1996)；Lonberg and Huszar，Intern.Rev.Immunol.1365-93(1995)；以及美国专利4,816,567；5,545,807；5,545,806；5,569,825；5,625,126；5,633,425；和5,661,016)。抗体和抗体衍生物也可与治疗性物质，如细胞毒性药物或毒素或其活性片段联合使用，它们之中包括白喉毒素A链、外毒素A链、篦麻毒蛋白A链、相思豆毒蛋白A链、麻疯树毒蛋白、巴豆毒蛋白、酚霉素、伊诺霉素。细胞毒性物质也可包括放射化疗试剂。抗体和它们的衍生物可以包含于本发明的组分中供体外和体内使用。
作为免疫原性靶的核酸、蛋白或其衍生物可用于检测，以确定病人的病情，预测预后或确定化学治疗或其他治疗方案的有效性。表达谱，正如本领域所知，可以用于确定免疫原性靶表达的相对水平。将表达水平用基础水平进行矫正后来判断病人体内是否患有某种特殊疾病，病人的预后如何，或一种特殊的治疗方案是否有效。例如，如果病人正在接受一种特殊的化学治疗方案的治疗，病人组织中一种免疫原性靶表达水平的下降(如，在外周血中)可能提示该治疗方案正在降低宿主体内癌细胞的载量。同样，假如表达水平在升高，提示可能需要另一种治疗方案。在一个实施方案中，可以将与编码免疫原性靶的核酸的相应的核酸探针用于生物芯片技术，如本领域所知，供检测和定量基因在宿主中的表达之用。
也可能将核酸、蛋白和其衍生物、或其抗体用作药物筛选试验的试剂。这些试剂可被用于确定候选药物对在细胞系、或病人细胞和组织中表达的免疫原性靶的作用。表达谱技术结合高通量筛选技术可以满足有效化合物的快速鉴别和候选药物疗效的监测(参见例如，Zlokamiik，等，Science 279，84-8(1998))。候选药物可以是化合物、核酸、蛋白、抗体或它们的衍生物，或天然存在或人工合成。被鉴别的候选药物可以作为用于病人的药用组合物，也可被用于进一步的筛选试验。
给予宿主本发明的组合物可用本领域技术人员所知的各种技术来完成。该组合物可以根据制药业常规方法加工，用于生产病人，包括人和其他哺乳动物的药物(即“药用组合物”)。药用组合物最好制成含有规定量的DNA、病毒载体颗粒、多肽或肽的剂量单位形式。合适的人用或动物用每日剂量取决于病人的情况和其他因素，可以变化很大，但能用常规方法确定。
药用组合物以含有常规药学上可以接受的载体、佐剂和介质的剂量单位制剂通过口服、胃肠外、吸入喷雾、直肠、结内或局部给药。术语“药学上可接受的载体”或“生理上可接受的载体”用在这里指适合于完成或加强药用组合物核酸、多肽或肽的导入的一种或多种的制剂物质。“药用组合物”指含有治疗有效量的核酸或多肽的组合物。术语“有效量”和“治疗有效量”指用于诱导或加强有效免疫反应的核酸或多肽的量。以本发明的组合物能够诱导和加强宿主体内的抗肿瘤免疫反应作用、从而保护宿主体内不发生肿瘤和/或从机体清除已经存在的肿瘤为优选。
对于口服用药，药用组合物可以是数种剂型中的任一种，其中包括，例如，胶囊、片剂、混悬剂或液体剂。当液体剂与合适载体如生理盐水、葡萄糖和水一起作为药用组合物使用时可注射给药。这里所用的术语胃肠外用药包括了皮下、静脉、肌内、结内、灌注或腹膜内给药。用于直肠给药的栓剂的制备可以将药物与非刺激性的赋形剂如可可缓冲液和聚乙烯乙二醇混合，它们在常温下是固体而在直肠温度下为液体。
本发明的组合物用于免疫宿主或用于治疗紊乱和疾病时的剂量方案是根据各种因素来定的，包括疾病的类型，病人的年龄、体重、性别、医疗条件、病情的严重程度、给药途径和所用的特殊药用组合物。例如，痘病毒载体可以按含有1×106感染性颗粒/剂量给药。剂量方案可变化很大，但可用标准方法按常规来决定。
初免-加强方案也可被应用(参见例如，WO01/30382 A1)，在初免-加强方案中，免疫原性靶在初免步骤中初次给药是一种形式，继后的加强步骤中又是以另外一种形式给药，免疫原性靶在初免和加强步骤时的形式不同。例如，如果初免时用的是核酸，加强时可给多肽。同理，当初免时用一种类型的重组病毒(如，ALVAC)，加强时则用另外一种类型的病毒(如，NYVAC)。这种初免-加强的给药方式已被证明可引起很强的免疫反应。
本发明的组合物可作为单一活性药物给药，也可与一种或多种其他组合物或药物联合给药(如，其他免疫原性靶，协同刺激分子，佐剂)。当联合给药时，各成分可被配制成分开的组合物在同一时间或在不同时间给药，各成分也可被混合在一起作为单一组合物给药。
注射制剂，如灭菌水剂或含油混悬剂，可以根据已知方法用合适的分散剂或湿润剂和悬浮剂配制。注射制剂也可以是用无毒性的肠外可接受的稀释液或溶剂配制的溶液或悬液。可用的合适介质和溶剂其中包括水、Ringer’s溶液、等渗的氯化钠溶液。例如，痘病毒这样的病毒载体可用0.4％的NaCl配制。另外，灭菌的固定油被常规地用作溶剂或悬浮介质，任何清淡无毒的固定油都可用于这一目的，包括合成的甘油单酯和甘油二酯。再有，脂肪酸如油酸也被用于制备注射制剂。
对于局部用药，药用组合物的合适局部给药剂量可以是每天1-4次，优选每天2-3次，给药时也可间隔不给药的天数。合适的组合物在制剂中的含量可以是从0.001％到10％的重量比w/w，如占制剂重量的1％-2％，虽然含量可多达制剂的10％w/w，但优选的不要超过制剂的5％w/w，更优选的是占制剂重量的0.1％-1％。合适的局部给药制剂包括适于渗透入皮肤的液体或半液体制剂(如，搽剂、乳液、软膏、乳膏或涂膏)和适合于眼、耳或鼻部给药的点滴剂。
药用组合物也可被制成固体(如颗粒、粉末或栓剂)、药用组合物可经过常规的制药过程如灭菌和/或可含有常规的佐剂如防腐剂、稳定剂、湿润剂、乳化剂、缓冲剂等。经口服给药的固体剂型包括胶囊、片剂、丸剂、粉剂和颗粒。在这些固体剂型中，活性组合物可以至少与一种惰性稀释剂如蔗糖、乳糖或淀粉混合。这些固体剂型也可含有除惰性物之外的物质，如润滑剂如硬脂酸镁。作为胶囊、片剂和丸剂，剂型中也可含有缓冲剂。片剂和丸剂制备时还可加上肠溶衣。用于口服的液体剂型可以包括药学上可接受的乳液、溶液、混悬液、糖浆和含有常用于本领域的惰性稀释剂(如，水)的酏剂。这些组合物也可含有辅料，如湿润剂、增甜剂、增味剂和增香剂等。
本发明中含有核酸和多肽的药用组合物可被制成这些剂型中的任何一种剂型，并且可通过这些给药途径中的任何一种途径给药。在优选实施方案中，该药用组合物通过肠外途径(皮内，肌内或皮下)诱导宿主体内的免疫反应。另一种选择是将药用组合物直接向淋巴结(结内)和肿瘤组织内(瘤内)给药。例如，可在第0天、7天和14天皮下给药。本领域所知的用含有TAs的药用组合物进行免疫的合适方法，其中如用p53(Hollstein等，1991)、p21-ras(Almoguera等，1988)、HER-2(Fendly等，1990)、黑色素瘤相关抗原(MAGE-1；MAGE-2)(van der Bruggen等，1991)、p97(Hu等，1988)、黑色素瘤相关抗原E(WO 99/30737)和癌胚抗原(CEA)(Kantor等，1993；Fishbein等，1992；Kaufman等，1991)进行免疫时所用的方法。
优选的给药组合物实施方案包括核酸和多肽制成的液体剂型，如混悬液、糖浆和酏剂。优选的注射用核酸和多肽制剂包括，如适合于肠外的、皮下、皮内、肌内、静脉给药的灭菌的混悬液和乳液。例如，重组的痘病毒可以与合适的载体、稀释剂、或赋形剂如灭菌水、生理盐水、葡萄糖或类似物混合。药用组合物也可制成冻干制剂用如等渗水溶液和生理盐水重新溶解配成原浓度后使用。另外，本药用组合物也可与其他抗瘤、抗肿瘤或抗癌制剂和/或能减轻或缓解抗瘤、抗肿瘤或抗癌制剂的副作用的制剂联合用药或相继用药。
一个含有本发明组合物的试剂盒也已制成，该试剂盒包括一个分开的小包装，其中装有合适的载体，稀释剂或赋形剂。该试剂盒还包括有其他抗瘤、抗肿瘤或抗癌制剂和/或能减轻或缓解抗瘤、抗肿瘤或抗癌制剂的副作用的制剂供与本发明的组合物联合或相继使用。另外，该试剂盒还提供有指导如何配用各种成分和/或如何用药的说明书。
以下以图解的形式给出的例子将使人们更好地了解本发明及其优点。
实施例
实例1
BFA5乳腺癌抗原
A.BFA5的鉴别
基因芯片表达谱分析显示，与正常非肿瘤组织样品相比，54份乳腺癌的活检样品中有41份不同程度地表达BFA5(76％)，且54份乳癌样品中高水平表达的有31份(57％)。用一系列BFA5DNA探针进行原位杂交显示有61％的肿瘤样品有很强的信号，证实了芯片分析的结果。进一步的生物信息学评估也证实这些分析的结果正确。
BFA5的序列分析揭示了其与两个未鉴别的从胚胎和成人脑组织cDNA克隆(Kikuno，等The complete sequences of 100new cDNAclones from brain which code for large proteins in vitro.DNA Res.6：197-205)分离到的人类基因KIAA1074(GenBank Accession No.XM_159732)和KIAA0565(GenBank Accession No.AB011137)呈高度相似。这些基因含有公认的锌指区和胞核定位序列。有人认为BFA5是潜在的乳腺癌抗原(Jager，等2001.Identification of a tissue-specificputative transcription factor in breast tissue by serological screening of abreast cancer library.Cancer Res.61：2055-2061 and WO 01/47959)。在各发表的文献中，BFA5的核酸序列被被命名为NYBR-1(″New YorkBreast Cancer-l″；GenBank Accession Nos.AF269087(核苷酸)和AAK27325(氨基酸)。
正如先前由Jager等发现，并在上述WO01/47959中描述的那样，BFA5特异性表达于乳腺。在已分析的19例乳腺肿瘤中有12例有该抗原表达。BFA5/NYBR-1基因的结构显示它编码一个150-160KD的带有bZIP位点的核转录因子(亮氨酸拉链基序紧随其后的DNA结合域)。该基因还含有5个前后排列的锚蛋白重复序列，提示其在蛋白-蛋白相互作用中的作用。这些锚蛋白重复序列可能在蛋白的同源二聚体化中发挥作用。BFA5的cDNA序列见图4和SEQ ID NO：5，BFA5的氨基酸序列见图5和SEQ ID NO：6。
B.BFA5的免疫反应
1.人T细胞激活和ELISPOT检测中IFN-γ的分泌
用Rammensee and Parker算法根据BFA5/NYBR-1的编码序列设计了含100个预计与HLA-A*0201有中到高结合力的肽文库。该文库被分成了10个肽池，每个肽池含10个肽(表III)。在用肽脉冲成熟的自体树突状细胞后，每个肽池用于激活10个不同的T细胞培养物。用BFA5/NYBR-1肽文库进行了两个实验来显示其在人HLA-A*0201T细胞的免疫反应，结果将在下面描述。
表III
                                                       BFA5肽池
  肽组   CLP数   序列
  BFA5组1   2983   LMDMQTFKA
  2984   KVSIPTKAL
  2985   SIPTKALEL
  2986   LELKNEQTL
  2987   TVSQKDVCL
  2988   SVPNKALEL
  2989   CETVSQKDV
  2990   KINGKLEES
  2991   SLVEKTPDE
  2992   SLCETVSQK
  8FA5组2   2993   EIDKINGKL
  2994   MLLQQNVDV
  2995   NMWLQQQLV
  2996   FLVDRKCQL
  2997   YLLHENCML
  2998   SLFESSAKI
  2999   KITIDIHFL
  3000   QLQSKNMWL
  3001   SLDQKLFQL
  3002   FLLIKNANA
  肽组   CLP数   序列
  BFA5组6   3033   FESSAKIQV
  3034   GVTAEHYAV
  3035   RVTSHKTKV
  3036   TVSQKDVCV
  3037   KSQEPAFHI
  3038   KVLIAENTM
  3039   MLKLEIATL
  3040   EILSVVAKL
  3041   MLKKEIAML
  3042   LLKEKNEEI
  BFA5组7   3043   ALRIQDIEL
  3044   KIREELGRI
  3045   TLKLKEESL
  3046   ILNEKIREE
  3047   VLKKKLSEA
  3048   GTSDKIQCL
  3049   GADINLVDV
  3050   ELCSVRLTL
  3051   SVESNLNQV
  3052   SLKINLNYA
  BFA5组3   3003   KILDTVHSC
  3004   SLSKILDTV
  3005   ILIDSGADI
  3006   KVMEINREV
  3007   KLLSHGAVI
  3009   AVYSEILSV
  3010   KMNVDVSST
  3011   ILSVVAKLL
  3012   VLIAENTML
  BFA5组4   3013   KLSKNHQNT
  3014   SLTPLLLSI
  3015   SQYSGQLKV
  3016   KELEVKQQL
  3017   QIMEYIRKL
  3018   AMLKLEIAT
  3019   VLHQPLSEA
  3020   GLLKATCGM
  3021   GLLKANCGM
  3022   QQLEQALRI
  BFA5组5   3023   CMLKKEIAM
  3024   EQMKKKFCV
  3025   IQDIELKSV
  3026   SVPNKAFEL
  3027   SIYQKVMEI
  3028   NLNYAGDAL
  3029   AVQDHDQIV
  BFA5组8   3053   KTPDEAASL
  3054   ATCGMKVSI
  3055   LSHGAVIEV
  3056   EIAMLKLEI
  3057   AELQMTLKL
  3058   VFAADICGV
  3060   PAIEMQNSV
  3061   EIFNYNNHL
  3062   ILKEKPIAEL
  BFA5组9   3063   QLVHAHKKA
  3065   NIQDAQKRT
  3066   NLVDVYGNM
  3067   KCTALMLAV
  3068   KIQCLEKAT
  3069   KIAWEKKET
  3070   IAWEKKEDT
  3071   VGMLLQQNV
  3072   VKTGCVARV
  BFA5组10   3074   ALHYAVYSE
  3075   QMKKKFCVL
  3076   ALQCHQEAC
  3077   SEQIVEFLL
  3078   AVIEVHNKA
  3079   AVTCGFHHI
  3080   ACLQRKMNV
  3081   SLVEGTSDK
经过4轮用BFA5肽池刺激后，激活的人T细胞培养物用ELIPOT检测来分析。抗CMVpp65肽和流感基质肽的反应性在实验中用作阳性对照。每个实验均用来源于单一HLA-A*0201+命名为“AP10”的供者的PBMC和树突状细胞。结果显示，虽然BFA4在实验中每100000个细胞中也有很高的ELISPOT计数，但BFA5对10个肽池中的9个显示了更强的ELISPOT反应。用另外一个不同来源的HKLA-A*细胞做实验，BFA4和BFA5/NYBR-1二者都显示了相似的结果。纵轴的最高读数为600，因为超过600以后ELISPOT读板仪将不能给出准确读数。那些读数为600的培养物的实际读数高于600。
许多BFA5肽池引起高水平的IFN-γ产生表明是有反应的，各个有反应的肽池又被细分为单个多肽，用ELISPOT的方法分析其免疫原性以分离到单个有反应的BFA5肽。较之BFA4，BFA5的几个有反应的单一肽具有高度的免疫原性。在两个独立的PBMC培养实验中得到的结果类似。
除了进行ELISPOT分析，经BFA5肽段激活的T细胞也被用于检测作为CTL的能力。T细胞经肽脉冲后的树突状细胞激活后，再用CD40配体激活的B细胞刺激(5轮刺激)。实验用从HLA-A*0201+供者AP31分离得到的PBMC进行。用负载有肽的T2细胞在51Cr释放实验来检测分离到的T细胞。当T细胞与靶细胞的比率分别为10∶1，5∶1，1∶1时用BFA5/NYBR-1的各个肽池或单一肽脉冲的T2细胞的特异性裂解率(％)被示出。该图显示了被诱导出针对负载有非特异性HLA-A*0201结合的HIV肽(对照)靶细胞的CTL活性，继之是针对负载有肽池(池1等)和负载从右面池来源的单个肽的靶细胞的CTL活性。在1∶1的效靶比时观察到针对某些肽段的高水平的细胞毒性。由对照HIV肽诱导的CTL活性(特异性裂解率)一般＜10％，用另一个表达HLA-A*0201(AP10)的供者PBMC也得到了相似的结果。许多BFA5肽激发针对载有BFA5肽的靶细胞的T细胞介导的细胞毒性反应。表IV列出了那些具有免疫原性的肽，5个肽(LMDMQTFKALMDMQTFKA  LMDMQTFKA  LMDMQTFKA  KVSIPTKALKVSIPTKAL)被发现在两个供者中都能诱导出T细胞的IFN-γ分泌活性和CTL活性。
表IV
来自BFA5的免疫反应性肽
  BFA5肽引起高IFN-γ释放(200spot/100000细胞)   BFA5肽诱导脉冲的细胞的CTL裂解
  供体AP10   供体AP31   供体AP10   供体AP31
  LMDMQTFKAKVSIPTKALSIPTKALELTVSQKDVCLSVPNKALELYLLHENCMLQLQSKNMWLSLSKILDTVILIDSGADIKVMEINREVAVYSEILSVILSWAKLLSLTPLLLSISQYSGQLKVQIMEYIRKLSVPNKAFELNLNYAGDALMLKLEIATLALRIQDIELELCSVRLTLSLKINLNYAATCGMKVSIAELQMTLKLILKEKNAELNLVDVYGNMKCTALMLAV   LMDMQTFKAYLLHENCMLQLQSKNMWLSLSKILDTVILIDSGADIILSVVAKLLSLTPLLLSISQYSGQLKVQIMEYIRKLNLNYAGDALGVTAEHYAVKSQEPAFHIMLKLEIATLMLKKEIAMLVLKKKLSEAELCSVRLTLSLKINLNYAVFAADICGVILKEKNAEL   LMDMQTFKAYLLHENCMLILIDSGADIILSVVAKLLSQYSGQLKVELCSVRLTLATCGMKVSIAELQMTLKLNLVDVYGNM   LMDMQTFKAKVSIPTKAL SIPTKALELQLQSKNMWLSLSKILDTVILIDSGADIILSVVAKLLSLTPLLLSISQYSGQLKVQIMEYIRKLMIKLEIATLELCSVRLTLSLKINLNYAAELQMTLKL
C.免疫试剂
制备针对以下BFA5上含22-23个氨基酸的系列肽的多克隆抗血清。
BFA5(1-23)       KLH-MTKRKKTINLNIQDAQKRTALHW(CLP-2977)
BFA5(312-334)    KLH-TSEKFTWPAKGRPRKIAWEKKED(CLP-2978)
BFA5(612-634)    KLH-DEILPSESKQKDYEENSWDTESL(CLP-2979)
BFA5(972-994)    KLH-RLTLNQEEEKRRNADILNEKIRE(CLP-2980)
BFA5(1117-1139)  KLH-AENTMLTSKLKEKQDKEILEAEI(CLP-2981)
BFA5(1319-1341)  KLH-NYNTNHLKNRJYQYEKEKAETENS(CLP-2982)
从兔子身上采得的免疫前血清制备出来后冻存于-20℃，然后按以下实施方案对兔子进行免疫：1)肽与弗氏完全佐剂混合成乳剂给药；2)两周后，肽与匙孔血蓝蛋白(Keyhole Limpet Hemocyanin)(KLH)偶联并与弗氏不完全佐剂配成乳剂给药。以下是观察到的结果：
表V
  肽/蛋白   IgG滴度x105(第一次免疫后兔1/兔2)   IgG滴度x105(第二次免疫后兔1/兔2)
  CPL2977CPL2978CPL2979CPL2980CPL2981CPL2982   25/625/2512/2525/128/42/2   256/6464/256256/5121024/128256/6464/32
免疫前全部血清样品的IgG滴度均＜100。
通过蛋白质印迹实验用抗BFA5血清评价了这些多克隆抗血清的质量，血清分别与来自BT474、MDMB453、MCF-7、Calu-6和CosA2细胞的提取物进行反应而筛选。BFA5蛋白的预期分子量为153kDa，在BT474细胞提取物中用CPL2980抗体检测到一个220kDa的反应带，但在MDMB453细胞提取物中未发现，然而一个130kD的反应带出现在MDMB453细胞提取物中。两个反应带与本分析中所试多克隆抗血清一致。阴性对照中未出现两条反应带中的任何一条。这样，可得出本多克隆抗血清为BFA5特异性抗血清的结论。
当根据优选的实施方案来描述本发明时，那些本领域技术人员进行变动和修改是可以理解的。因此，所附权利要求书有意覆盖所有在本发明要求保护的范围内的这样的等价变动。
                           序列表
<110>圣诺菲.帕斯图尔有限公司(sanofi Pasteur，Ltd.)
<120>用于预防和/或治疗癌症的肿瘤抗原BFA5
<130>API-03-03-PCT
<150>60/462,945
<151>2004-04-15
<160>106
<170>PatentIn version 3.2
<210>1
<211>3846
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>1
atggtccgga aaaagaaccc ccctctgaga aacgttgcaa gtgaaggcga gggccagatc     60
ctggagccta taggtacaga aagcaaggta tctggaaaga acaaagaatt ctctgcagat    120
cagatgtcag aaaatacgga tcagagtgat gctgcagaac taaatcataa ggaggaacat    180
agcttgcatg ttcaagatcc atcttctagc agtaagaagg acttgaaaag cgcagttctg    240
agtgagaagg ctggcttcaa ttatgaaagc cccagtaagg gaggaaactt tccctccttt    300
ccgcatgatg aggtgacaga cagaaatatg ttggctttct catttccagc tgctggggga    360
gtctgtgagc ccttgaagtc tccgcaaaga gcagaggcag atgaccctca agatatggcc    420
tgcaccccct caggggactc actggagaca aaggaagatc agaagatgtc accaaaggct    480
acagaggaaa cagggcaagc acagagtggt caagccaatt gtcaaggttt gagcccagtt    540
tcagtggcct caaaaaaccc acaagtgcct tcagatgggg gtgtaagact gaataaatcc    600
aaaactgact tactggtgaa tgacaaccca gacccggcac ctctgtctcc agagcttcag    660
gactttaaat gcaatatctg tggatatggt tactacggca acgaccccac agatctgatt    720
aagcacttcc gaaagtatca cttaggactg cataaccgca ccaggcaaga tgctgagctg    780
gacagcaaaa tcttggccct tcataacatg gtgcagttca gccattccaa agacttccag    840
aaggtcaacc gttctgtgtt ttctggtgtg ctgcaggaca tcaattcttc aaggcctgtt    900
ttactaaatg ggacctatga tgtgcaggtg acttcaggtg gaacattcat tggcattgga    960
cggaaaacac cagattgcca agggaacacc aagtatttcc gctgtaaatt ctgcaatttc   1020
acttatatgg gcaactcatc caccgaatta gaacaacatt ttcttcagac tcacccaaac   1080
aaaataaaag cttctctccc ctcctctgag gttgcaaaac cttcagagaa aaactctaac   1140
aagtccatcc ctgcacttca atccagtgat tctggagact tgggaaaatg gcaggacaag   1200
ataacagtca aagcaggaga tgacactcct gttgggtact cagtgcccat aaagcccctc   1260
gattcctcta gacaaaatgg tacagaggcc accagttact actggtgtaa attttgtagt   1320
ttcagctgtg agtcatctag ctcacttaaa ctgctagaac attatggcaa gcagcacgga   1380
gcagtgcagt caggcggcct taatccagag ttaaatgata agctttccag gggctctgtc   1440
attaatcaga atgatctagc caaaagttca gaaggagaga caatgaccaa gacagacaag   1500
agctcgagtg gggctaaaaa gaaggacttc tccagcaagg gagccgagga taatatggta   1560
acgagctata attgtcagtt ctgtgacttc cgatattcca aaagccatgg ccctgatgta   1620
attgtagtgg ggccacttct ccgtcattat caacagctcc ataacattca caagtgtacc   1680
attaaacact gtccattctg tcccagagga ctttgcagcc cagaaaagca ccttggagaa   1740
attacttatc cgtttgcttg tagaaaaagt aattgttccc actgtgcact cttgcttctg   1800
cacttgtctc ctggggcggc tggaagctcg cgagtcaaac atcagtgcca tcagtgttca   1860
ttcaccaccc ctgacgtaga tgtactcctc tttcactatg aaagtgtgca tgagtcccaa   1920
gcatcggatg tcaaacaaga agcaaatcac ctgcaaggat cggatgggca gcagtctgtc   1980
aaggaaagca aagaacactc atgtaccaaa tgtgatttta ttacccaagt ggaagaagag   2040
atttcccgac actacaggag agcacacagc tgctacaaat gccgtcagtg cagttttaca   2100
gctgccgata ctcagtcact actggagcac ttcaacactg ttcactgcca ggaacaggac   2160
atcactacag ccaacggcga agaggacggt catgccatat ccaccatcaa agaggagccc   2220
aaaattgact tcagggtcta caatctgcta actccagact ctaaaatggg agagccagtt   2280
tctgagagtg tggtgaagag agagaagctg gaagagaagg acgggctcaa agagaaagtt   2340
tggaccgaga gttccagtga tgaccttcgc aatgtgactt ggagaggggc agacatcctg   2400
cgggggagtc cgtcatacac ccaagcaagc ctggggctgc tgacgcctgt gtctggcacc   2460
caagagcaga caaagactct aagggatagt cccaatgtgg aggccgccca tctggcgcga   2520
cctatttatg gcttggctgt ggaaaccaag ggattcctgc agggggcgcc agctggcgga   2580
gagaagtctg gggccctccc ccagcagtat cctgcatcgg gagaaaacaa gtccaaggat   2640
gaatcccagt ccctgttacg gaggcgtaga ggctccggtg ttttttgtgc caattgcctg   2700
accacaaaga cctctctctg gcgaaagaat gcaaatggcg gatatgtatg caacgcgtgt   2760
ggcctctacc agaagcttca ctcgactccc aggcctttaa acatcattaa acaaaacaac   2820
ggtgagcaga ttattaggag gagaacaaga aagcgcctta acccagaggc acttcaggct   2880
gagcagctca acaaacagca gaggggcagc aatgaggagc aagtcaatgg aagcccgtta   2940
gagaggaggt cagaagatca tctaactgaa agtcaccaga gagaaattcc actccccagc   3000
ctaagtaaat acgaagccca gggttcattg actaaaagcc attctgctca gcagccagtc   3060
ctggtcagcc aaactctgga tattcacaaa aggatgcaac ctttgcacat tcagataaaa   3120
agtcctcagg aaagtactgg agatccagga aatagttcat ccgtatctga agggaaagga   3180
agttctgaga gaggcagtcc tatagaaaag tacatgagac ctgcgaaaca cccaaattat   3240
tcaccaccag gcagccctat tgaaaagtac cagtacccac tttttggact tccctttgta   3300
cataatgact tccagagtga agctgattgg ctgcggttct ggagtaaata taagctctcc   3360
gttcctggga atccgcacta cttgagtcac gtgcctggcc taccaaatcc ttgccaaaac   3420
tatgtgcctt atcccacctt caatctgcct cctcattttt cagctgttgg atcagacaat   3480
gacattcctc tagatttggc gatcaagcat tccagacctg ggccaactgc aaacggtgcc   3540
tccaaggaga aaacgaaggc accaccaaat gtaaaaaatg aaggtccctt gaatgtagta   3600
aaaacagaga aagttgatag aagtactcaa gatgaacttt caacaaaatg tgtgcactgt   3660
ggcattgtct ttctggatga agtgatgtat gctttgcata tgagttgcca tggtgacagt   3720
ggacctttcc agtgcagcat atgccagcat ctttgcacgg acaaatatga cttcacaaca   3780
catatccaga ggggcctgca taggaacaat gcacaagtgg aaaaaaatgg aaaacctaaa   3840
gagtaa                                                              3846
<210>2
<211>1281
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>2
Met Val Arg Lys Lys Asn Pro Pro Leu Arg Asn Val Ala Ser Glu Gly
1               5                   10                  15
Glu Gly Gln Ile Leu Glu Pro Ile Gly Thr Glu Ser Lys Val Ser Gly
            20                  25                  30
Lys Asn Lys Glu Phe Ser Ala Asp Gln Met Ser Glu Asn Thr Asp Gln
        35                  40                  45
Ser Asp Ala Ala Glu Leu Asn His Lys Glu Glu His Ser Leu His Val
    50                  55                  60
Gln Asp Pro Ser Ser Ser Ser Lys Lys Asp Leu Lys Ser Ala Val Leu
65                  70                  75                  80
Ser Glu Lys Ala Gly Phe Asn Tyr Glu Ser Pro Ser Lys Gly Gly Asn
                85                  90                  95
Phe Pro Ser Phe Pro His Asp Glu Val Thr Asp Arg Asn Met Leu Ala
            100                 105                 110
Phe Ser Phe Pro Ala Ala Gly Gly Val Cys Glu Pro Leu Lys Ser Pro
        115                 120                 125
Gln Arg Ala Glu Ala Asp Asp Pro Gln Asp Met Ala Cys Thr Pro Ser
    130                 135                 140
Gly Asp Ser Leu Glu Thr Lys Glu Asp Gln Lys Met Ser Pro Lys Ala
145                 150                 155                 160
Thr Glu Glu Thr Gly Gln Ala Gln Ser Gly Gln Ala Asn Cys Gln Gly
                165                 170                 175
Leu Ser Pro Val Ser Val Ala Ser Lys Asn Pro Gln Val Pro Ser Asp
            180                 185                 190
Gly Gly Val Arg Leu Asn Lys Ser Lys Thr Asp Leu Leu Val Asn Asp
        195                 200                 205
Asn Pro Asp Pro Ala Pro Leu Ser Pro Glu Leu Gln Asp Phe Lys Cys
    210                 215                 220
Asn Ile Cys Gly Tyr Gly Tyr Tyr Gly Asn Asp Pro Thr Asp Leu Ile
225                 230                 235                 240
Lys His Phe Arg Lys Tyr His Leu Gly Leu His Ash Arg Thr Arg Gln
                245                 250                 255
Asp Ala Glu Leu Asp Ser Lys Ile Leu Ala Leu His Asn Met Val Gln
            260                 265                 270
Phe Ser His Ser Lys Asp Phe Gln Lys Val Asn Arg Ser Val Phe Ser
        275                 280                 285
Gly Val Leu Gln Asp Ile Asn Ser Ser Arg Pro Val Leu Leu Asn Gly
    290                 295                 300
Thr Tyr Asp Val Gln Val Thr Ser Gly Gly Thr Phe Ile Gly Ile Gly
305                 310                 315                 320
Arg Lys Thr Pro Asp Cys Gln Gly Asn Thr Lys Tyr Phe Arg Cys Lys
                325                 330                 335
Phe Cys Asn Phe Thr Tyr Met Gly Asn Ser Ser Thr Glu Leu Glu Gln
            340                 345                 350
His Phe Leu Gln Thr His Pro Asn Lys Ile Lys Ala Ser Leu Pro Ser
        355                 360                 365
Ser Glu Val Ala Lys Pro Ser Glu Lys Asn Ser Asn Lys Ser Ile Pro
    370                 375                 380
Ala Leu Gln Ser Ser Asp Ser Gly Asp Leu Gly Lys Trp Gln Asp Lys
385                 390                 395                 400
Ile Thr Val Lys Ala Gly Asp Asp Thr Pro Val Gly Tyr Ser Val Pro
                405                 410                  415
Ile Lys Pro Leu Asp Ser Ser Arg Gln Asn Gly Thr Glu Ala Thr Ser
            420                 425                 430
Tyr Tyr Trp Cys Lys Phe Cys Ser Phe Ser Cys Glu Ser Ser Ser Ser
        435                 440                 445
Leu Lys Leu Leu Glu His Tyr Gly Lys Gln His Gly Ala Val Gln Ser
    450                 455                 460
Gly Gly Leu Asn Pro Glu Leu Asn Asp Lys Leu Ser Arg Gly Ser Val
465                 470                 475                 480
Ile Asn Gln Asn Asp Leu Ala Lys Ser Ser Glu Gly Glu Thr Met Thr
                485                 490                 495
Lys Thr Asp Lys Ser Ser Ser Gly Ala Lys Lys Lys Asp Phe Ser Ser
            500                 505                 510
Lys Gly Ala Glu Asp Asn Met Val Thr Ser Tyr Asn Cys Gln Phe Cys
        515                 520                 525
Asp Phe Arg Tyr Ser Lys Ser His Gly Pro Asp Val Ile Val Val Gly
    530                 535                 540
Pro Leu Leu Arg His Tyr Gln Gln Leu His Asn Ile His Lys Cys Thr
545                 550                 555                 560
Ile Lys His Cys Pro Phe Cys Pro Arg Gly Leu Cys Ser Pro Glu Lys
                565                 570                 575
His Leu Gly Glu Ile Thr Tyr Pro Phe Ala Cys Arg Lys Ser Asn Cys
            580                 585                 590
Ser His Cys Ala Leu Leu Leu Leu His Leu Ser Pro Gly Ala Ala Gly
        595                 600                 605
Ser Ser Arg Val Lys His Gln Cys His Gln Cys Ser Phe Thr Thr Pro
    610                 615                 620
Asp Val Asp Val Leu Leu Phe His Tyr Glu Ser Val His Glu Ser Gln
625                 630                 635                 640
Ala Ser Asp Val Lys Gln Glu Ala Asn His Leu Gln Gly Ser Asp Gly
                645                 650                 655
Gln Gln Ser Val Lys Glu Ser Lys Glu His Ser Cys Thr Lys Cys Asp
            660                 665                 670
Phe Ile Thr Gln Val Glu Glu Glu Ile Ser Arg His Tyr Arg Arg Ala
        675                 680                 685
His Ser Cys Tyr Lys Cys Arg Gln Cys Ser Phe Thr Ala Ala Asp Thr
    690                 695                 700
Gln Ser Leu Leu Glu His Phe Asn Thr Val His Cys Gln Glu Gln Asp
705                 710                 715                 720
Ile Thr Thr Ala Asn Gly Glu Glu Asp Gly His Ala Ile Ser Thr Ile
                725                 730                 735
Lys Glu Glu Pro Lys Ile Asp Phe Arg Val Tyr Asn Leu Leu Thr Pro
            740                 745                 750
Asp Ser Lys Met Gly Glu Pro Val Ser Glu Ser Val Val Lys Arg Glu
        755                 760                  765
Lys Leu Glu Glu Lys Asp Gly Leu Lys Glu Lys Val Trp Thr Glu Ser
    770                 775                 780
Ser Ser Asp Asp Leu Arg Asn Val Thr Trp Arg Gly Ala Asp Ile Leu
785                 790                 795                 800
Arg Gly Ser Pro Ser Tyr Thr Gln Ala Ser Leu Gly Leu Leu Thr Pro
                805                 810                 815
Val Ser Gly Thr Gln Glu Gln Thr Lys Thr Leu Arg Asp Ser Pro Asn
            820                 825                 830
Val Glu Ala Ala His Leu Ala Arg Pro Ile Tyr Gly Leu Ala Val Glu
        835                 840                 845
Thr Lys Gly Phe Leu Gln Gly Ala Pro Ala Gly Gly Glu Lys Ser Gly
    850                 855                 860
Ala Leu Pro Gln Gln Tyr Pro Ala Ser Gly Glu Asn Lys Ser Lys Asp
865                 870                 875                 880
Glu Ser Gln Ser Leu Leu Arg Arg Arg Arg Gly Ser Gly Val Phe Cys
                885                 890                 895
Ala Asn Cys Leu Thr Thr Lys Thr Ser Leu Trp Arg Lys Asn Ala Asn
            900                 905                 910
Gly Gly Tyr Val Cys Asn Ala Cys Gly Leu Tyr Gln Lys Leu His Ser
        915                 920                 925
Thr Pro Arg Pro Leu Asn Ile Ile Lys Gln Asn Asn Gly Glu Gln Ile
    930                 935                 940
Ile Arg Arg Arg Thr Arg Lys Arg Leu Asn Pro Glu Ala Leu Gln Ala
945                 950                 955                 960
Glu Gln Leu Asn Lys Gln Gln Arg Gly Ser Asn Glu Glu Gln Val Asn
                965                 970                 975
Gly Ser Pro Leu Glu Arg Arg Ser Glu Asp His Leu Thr Glu Ser His
            980                 985                 990
Gln Arg Glu Ile Pro Leu Pro Ser  Leu Ser Lys Tyr Glu  Ala Gln Gly
        995                 1000                 1005
Ser Leu  Thr Lys Ser His Ser  Ala Gln Gln Pro Val  Leu Val Ser
    1010                 1015                 1020
Gln Thr  Leu Asp Ile His Lys  Arg Met Gln Pro Leu  His Ile Gln
    1025                 1030                 1035
Ile Lys  Ser Pro Gln Glu Ser  Thr Gly Asp Pro Gly  Asn Ser Ser
    1040                 1045                 1050
Ser Val  Ser Glu Gly Lys Gly  Ser Ser Glu Arg Gly  Ser Pro Ile
    1055                 1060                 1065
Glu Lys  Tyr Met Arg Pro Ala  Lys His Pro Asn Tyr  Ser Pro Pro
    1070                 1075                 1080
Gly Ser  Pro Ile Glu Lys Tyr  Gln Tyr Pro Leu Phe  Gly Leu Pro
    1085                 1090                 1095
Phe Val  His Asn Asp Phe Gln  Ser Glu Ala Asp Trp  Leu Arg Phe
    1100                 1105                 1110
Trp Ser  Lys Tyr Lys Leu Ser  Val Pro Gly Asn Pro  His Tyr Leu
    1115                 1120                 1125
Ser His  Val Pro Gly Leu Pro  Asn Pro Cys Gln Asn  Tyr Val Pro
    1130                 1135                 1140
Tyr Pro  Thr Phe Asn Leu Pro  Pro His Phe Ser Ala  Val Gly Ser
    1145                 1150                 1155
Asp Asn  Asp Ile Pro Leu Asp  Leu Ala Ile Lys His  Ser Arg Pro
    1160                 1165                 1170
Gly Pro  Thr Ala Asn Gly Ala  Ser Lys Glu Lys Thr  Lys Ala Pro
    1175                 1180                 1185
Pro Asn  Val Lys Asn Glu Gly  Pro Leu Asn Val Val  Lys Thr Glu
    1190                 1195                 1200
Lys Val  Asp Arg Ser Thr Gln  Asp Glu Leu Ser Thr  Lys Cys Val
    1205                 1210                 1215
His Cys  Gly Ile Val Phe Leu  Asp Glu Val Met Tyr  Ala Leu His
    1220                 1225                 1230
Met Ser  Cys His Gly Asp Ser  Gly Pro Phe Gln Cys  Ser Ile Cys
    1235                 1240                 1245
Gln His  Leu Cys Thr Asp Lys  Tyr Asp Phe Thr Thr  His Ile Gln
    1250                 1255                 1260
Arg Gly  Leu His Arg Asn Asn  Ala Gln Val Glu Lys  Asn Gly Lys
    1265                 1270                 1275
Pro Lys  Glu
    1280
<210>3
<211>1203
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>3
atggccgagc tgcgcctgaa gggcagcagc aacaccacgg agtgtgttcc cgtgcccacc     60
tccgagcacg tggccgagat cgtgggcagg caaggctgca agattaaggc cttgagggcc    120
aagaccaaca cctacatcaa gacaccggtg aggggcgagg aaccagtgtt catggtgaca    180
gggcgacggg aggacgtggc cacagcccgg cgggaaatca tctcagcagc ggagcacttc    240
tccatgatcc gtgcctcccg caacaagtca ggcgccgcct ttggtgtggc tcctgctctg    300
cccggccagg tgaccatccg tgtgcgggtg ccctaccgcg tggtggggct ggtggtgggc    360
cccaaagggg caaccatcaa gcgcatccag cagcaaacca acacatacat tatcacacca    420
agccgtgacc gcgaccccgt gttcgagatc acgggtgccc caggcaacgt ggagcgtgcg    480
cgcgaggaga tcgagacgca catcgcggtg cgcactggca agatcctcga gtacaacaat    540
gaaaacgact tcctggcggg gagccccgac gcagcaatcg atagccgcta ctccgacgcc    600
tggcgggtgc accagcccgg ctgcaagccc ctctccacct tccggcagaa cagcctgggc    660
tgcatcggcg agtgcggagt ggactctggc tttgaggccc cacgcctggg tgagcagggc    720
ggggactttg gctacggcgg gtacctcttt ccgggctatg gcgtgggcaa gcaggatgtg    780
tactacggcg tggccgagac tagccccccg ctgtgggcgg gccaggagaa cgccacgccc    840
acctccgtgc tcttctcctc tgcctcctcc tcctcctcct cttccgccaa ggcccgcgct    900
gggcccccgg gcgcacaccg ctcccctgcc acttccgcgg gacccgagct ggccggactc    960
ccgaggcgcc ccccgggaga gccgctccag ggcttctcta aacttggtgg gggcggcctg   1020
cggagccccg gcggcgggcg ggattgcatg gtctgctttg agagcgaagt gactgccgcc  1080
cttgtgccct gcggacacaa cctgttctgc atggagtgtg cagtacgcat ctgcgagagg  1140
acggacccag agtgtcccgt ctgccacatc acagccgcgc aagccatccg aatattctcc  1200
taa                                                                1203
<210>4
<211>400
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>4
Met Ala Glu Leu Arg Leu Lys Gly Ser Ser Asn Thr Thr Glu Cys Val
1               5                   10                  15
Pro Val Pro Thr Ser Glu His Val Ala Glu Ile Val Gly Arg Gln Gly
            20                  25                  30
Cys Lys lle Lys Ala Leu Arg Ala Lys Thr Asn Thr Tyr Ile Lys Thr
        35                  40                  45
Pro Val Arg Gly Glu Glu Pro Val Phe Met Val Thr Gly Arg Arg Glu
    50                  55                  60
Asp Val Ala Thr Ala Arg Arg Glu Ile Ile Ser Ala Ala Glu His Phe
65                  70                  75                  80
Ser Met Ile Arg Ala Ser Arg Asn Lys Ser Gly Ala Ala Phe Gly Val
                85                  90                  95
Ala Pro Ala Leu Pro Gly Gln Val Thr Ile Arg Val Arg Val Pro Tyr
            100                 105                 110
Arg Val Val Gly Leu Val Val Gly Pro Lys Gly Ala Thr Ile Lys Arg
        115                 120                 125
Ile Gln Gln Gln Thr Asn Thr Tyr Ile Ile Thr Pro Ser Arg Asp Arg
    130                 135                 140
Asp Pro Val Phe Glu Ile Thr Gly Ala Pro Gly Asn Val Glu Arg Ala
145                 150                 155                 160
Arg Glu Glu Ile Glu Thr His Ile Ala Val Arg Thr Gly Lys Ile Leu
                165                 170                 175
Glu Tyr Asn Asn Glu Asn Asp Phe Leu Ala Gly Ser Pro Asp Ala Ala
            180                 185                 190
Ile Asp Ser Arg Tyr Ser Asp Ala Trp Arg Val His Gln Pro Gly Cys
        195                 200                 205
Lys Pro Leu Ser Thr Phe Arg Gln Asn Ser Leu Gly Cys Ile Gly Glu
    210                 215                 220
Cys Gly Val Asp Ser Gly Phe Glu Ala Pro Arg Leu Gly Glu Gln Gly
225                 230                 235                 240
Gly Asp Phe Gly Tyr Gly Gly Tyr Leu Phe Pro Gly Tyr Gly Val Gly
                245                 250                 255
Lys Gln Asp Val Tyr Tyr Gly Val Ala Glu Thr Ser Pro Pro Leu Trp
            260                 265                 270
Ala Gly Gln Glu Asn Ala Thr Pro Thr Ser Val Leu Phe Ser Ser Ala
        275                 280                 285
Ser Ser Ser Ser Ser Ser Ser Ala Lys Ala Arg Ala Gly Pro Pro Gly
    290                 295                 300
Ala His Arg Ser Pro Ala Thr Ser Ala Gly Pro Glu Leu Ala Gly Leu
305                 310                 315                 320
Pro Arg Arg Pro Pro Gly Glu Pro Leu Gln Gly Phe Ser Lys Leu Gly
                325                 330                 335
Gly Gly Gly Leu Arg Ser Pro Gly Gly Gly Arg Asp Cys Met Val Cys
            340                 345                 350
Phe Glu Ser Glu Val Thr Ala Ala Leu Val Pro Cys Gly His Asn Leu
        355                 360                 365
Phe Cys Met Glu Cys Ala Val Arg Ile Cys Glu Arg Thr Asp Pro Glu
    370                 375                 380
Cys Pro Val Cys His Ile Thr Ala Ala Gln Ala Ile Arg Ile Phe Ser
385                 390                 395                 400
<210>5
<211>4026
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>5
atgacaaaga ggaagaagac catcaacctt aatatacaag acgcccagaa gaggactgct   60
ctacactggg cctgtgtcaa tggccatgag gaagtagtaa catttctggt agacagaaag  120
tgccagcttg acgtccttga tggcgaacac aggacacctc tgatgaaggc tctacaatgc  180
catcaggagg cttgtgcaaa tattctgata gattctggtg ccgatataaa tctcgtagat  240
gtgtatggca acatggctct ccattatgct gtttatagtg agattttgtc agtggtggca  300
aaactgctgt cccatggtgc agtcatcgaa gtgcacaaca aggctagcct cacaccactt    360
ttactatcca taacgaaaag aagtgagcaa attgtggaat ttttgctgat aaaaaatgca    420
aatgcgaatg cagttaataa gtataaatgc acagccctca tgcttgctgt atgtcatgga    480
tcatcagaga tagttggcat gcttcttcag caaaatgttg acgtctttgc tgcagatata    540
tgtggagtaa ctgcagaaca ttatgctgtt acttgtggat ttcatcacat tcatgaacaa    600
attatggaat atatacgaaa attatctaaa aatcatcaaa ataccaatcc agaaggaaca    660
tctgcaggaa cacctgatga ggctgcaccc ttggcggaaa gaacacctga cacagctgaa    720
agcttggtgg aaaaaacacc tgatgaggct gcacccttgg tggaaagaac acctgacacg    780
gctgaaagct tggtggaaaa aacacctgat gaggctgcat ccttggtgga gggaacatct    840
gacaaaattc aatgtttgga gaaagcgaca tctggaaagt tcgaacagtc agcagaagaa    900
acacctaggg aaattacgag tcctgcaaaa gaaacatctg agaaatttac gtggccagca    960
aaaggaagac ctaggaagat cgcatgggag aaaaaagaag acacacctag ggaaattatg   1020
agtcccgcaa aagaaacatc tgagaaattt acgtgggcag caaaaggaag acctaggaag   1080
atcgcatggg agaaaaaaga aacacctgta aagactggat gcgtggcaag agtaacatct   1140
aataaaacta aagttttgga aaaaggaaga tctaagatga ttgcatgtcc tacaaaagaa   1200
tcatctacaa aagcaagtgc caatgatcag aggttcccat cagaatccaa acaagaggaa   1260
gatgaagaat attcttgtga ttctcggagt ctctttgaga gttctgcaaa gattcaagtg   1320
tgtatacctg agtctatata tcaaaaagta atggagataa atagagaagt agaagagcct   1380
cctaagaagc catctgcctt caagcctgcc attgaaatgc aaaactctgt tccaaataaa   1440
gcctttgaat tgaagaatga acaaacattg agagcagatc cgatgttccc accagaatcc   1500
aaacaaaagg actatgaaga aaattcttgg gattctgaga gtctctgtga gactgtttca   1560
cagaaggatg tgtgtttacc caaggctaca catcaaaaag aaatagataa aataaatgga   1620
aaattagaag agtctcctaa taaagatggt cttctgaagg ctacctgcgg aatgaaagtt   1680
tctattccaa ctaaagcctt agaattgaag gacatgcaaa ctttcaaagc ggagcctccg   1740
gggaagccat ctgccttcga gcctgccact gaaatgcaaa agtctgtccc aaataaagcc   1800
ttggaattga aaaatgaaca aacatggaga gcagatgaga tactcccatc agaatccaaa   1860
caaaaggact atgaagaaaa ttcttgggat actgagagtc tctgtgagac tgtttcacag   1920
aaggatgtgt gtttacccaa ggctgcgcat caaaaagaaa tagataaaat aaatggaaaa   1980
ttagaagggt ctcctgttaa agatggtctt ctgaaggcta actgcggaat gaaagtttct   2040
attccaacta aagccttaga attgatggac atgcaaactt tcaaagcaga gcctcccgag   2100
aagccatctg ccttcgagcc tgccattgaa atgcaaaagt ctgttccaaa taaagccttg   2160
gaattgaaga atgaacaaac attgagagca gatgagatac tcccatcaga atccaaacaa   2220
aaggactatg aagaaagttc ttgggattct gagagtctct gtgagactgt ttcacagaag   2280
gatgtgtgtt tacccaaggc tacacatcaa aaagaaatag ataaaataaa tggaaaatta   2340
gaagagtctc ctgataatga tggttttctg aaggctccct gcagaatgaa agtttctatt   2400
ccaactaaag ccttagaatt gatggacatg caaactttca aagcagagcc tcccgagaag   2460
ccatctgcct tcgagcctgc cattgaaatg caaaagtctg ttccaaataa agccttggaa   2520
ttgaagaatg aacaaacatt gagagcagat cagatgttcc cttcagaatc aaaacaaaag   2580
aaggttgaag aaaattcttg ggattctgag agtctccgtg agactgtttc acagaaggat   2640
gtgtgtgtac ccaaggctac acatcaaaaa gaaatggata aaataagtgg aaaattagaa   2700
gattcaacta gcctatcaaa aatcttggat acagttcatt cttgtgaaag agcaagggaa   2760
cttcaaaaag atcactgtga acaacgtaca ggaaaaatgg aacaaatgaa aaagaagttt   2820
tgtgtactga aaaagaaact gtcagaagca aaagaaataa aatcacagtt agagaaccaa   2880
aaagttaaat gggaacaaga gctctgcagt gtgagattga ctttaaacca agaagaagag   2940
aagagaagaa atgccgatat attaaatgaa aaaattaggg aagaattagg aagaatcgaa   3000
gagcagcata ggaaagagtt agaagtgaaa caacaacttg aacaggctct cagaatacaa   3060
gatatagaat tgaagagtgt agaaagtaat ttgaatcagg tttctcacac tcatgaaaat   3120
gaaaattatc tcttacatga aaattgcatg ttgaaaaagg aaattgccat gctaaaactg   3180
gaaatagcca cactgaaaca ccaataccag gaaaaggaaa ataaatactt tgaggacatt   3240
aagattttaa aagaaaagaa tgctgaactt cagatgaccc taaaactgaa agaggaatca   3300
ttaactaaaa gggcatctca atatagtggg cagcttaaag ttctgatagc tgagaacaca   3360
atgctcactt ctaaattgaa ggaaaaacaa gacaaagaaa tactagaggc agaaattgaa   3420
tcacaccatc ctagactggc ttctgctgta caagaccatg atcaaattgt gacatcaaga   3480
aaaagtcaag aacctgcttt ccacattgca ggagatgctt gtttgcaaag aaaaatgaat   3540
gttgatgtga gtagtacgat atataacaat gaggtgctcc atcaaccact ttctgaagct   3600
caaaggaaat ccaaaagcct aaaaattaat ctcaattatg caggagatgc tctaagagaa   3660
aatacattgg tttcagaaca tgcacaaaga gaccaacgtg aaacacagtg tcaaatgaag   3720
gaagctgaac acatgtatca aaacgaacaa gataatgtga acaaacacac tgaacagcag   3780
gagtctctag atcagaaatt atttcaacta caaagcaaaa atatgtggct tcaacagcaa   3840
ttagttcatg cacataagaa agctgacaac aaaagcaaga taacaattga tattcatttt   3900
cttgagagga aaatgcaaca tcatctccta aaagagaaaa atgaggagat atttaattac   3960
aataaccatt taaaaaaccg tatatatcaa tatgaaaaag agaaagcaga aacagaaaac   4020
tcatga                                                              4026
<210>6
<211>1341
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>6
Met Thr Lys Arg Lys Lys Thr Ile Asn Leu Asn Ile Gln Asp Ala Gln
1               5                   10                  15
Lys Arg Thr Ala Leu His Trp Ala Cys Val Asn Gly His Glu Glu Val
            20                  25                  30
Val Thr Phe Leu Val Asp Arg Lys Cys Gln Leu Asp Val Leu Asp Gly
        35                  40                  45
Glu His Arg Thr Pro Leu Met Lys Ala Leu Gln Cys His Gln Glu Ala
    50                  55                  60
Cys Ala Asn Ile Leu Ile Asp Ser Gly Ala Asp Ile Asn Leu Val Asp
65                  70                  75                  80
Val Tyr Gly Asn Met Ala Leu His Tyr Ala Val Tyr Ser Glu Ile Leu
                85                  90                  95
Ser Val Val Ala Lys Leu Leu Ser His Gly Ala Val Ile Glu Val His
            100                 105                 110
Asn Lys Ala Ser Leu Thr Pro Leu Leu Leu Ser Ile Thr Lys Arg Ser
        115                 120                 125
Glu Gln Ile Val Glu Phe Leu Leu Ile Lys Asn Ala Asn Ala Asn Ala
    130                 135                 140
Val Asn Lys Tyr Lys Cys Thr Ala Leu Met Leu Ala Val Cys His Gly
145                 150                 155                 160
Ser Ser Glu Ile Val Gly Met Leu Leu Gln Gln Asn Val Asp Val Phe
                165                 170                 175
Ala Ala Asp Ile Cys Gly Val Thr Ala Glu His Tyr Ala Val Thr Cys
            180                 185                 190
Gly Phe His His Ile His Glu Gln Ile Met Glu Tyr Ile Arg Lys Leu
        195                 200                 205
Ser Lys Asn His Gln Asn Thr Asn Pro Glu Gly Thr Ser Ala Gly Thr
    210                 215                 220
Pro Asp Glu Ala Ala Pro Leu Ala Glu Arg Thr Pro Asp Thr Ala Glu
225                 230                 235                 240
Ser Leu Val Glu Lys Thr Pro Asp Glu Ala Ala Pro Leu Val Glu Arg
                245                 250                 255
Thr Pro Asp Thr Ala Glu Ser Leu Val Glu Lys Thr Pro Asp Glu Ala
            260                 265                 270
Ala Ser Leu Val Glu Gly Thr Ser Asp Lys Ile Gln Cys Leu Glu Lys
        275                 280                 285
Ala Thr Ser Gly Lys Phe Glu Gln Ser Ala Glu Glu Thr Pro Arg Glu
    290                 295                 300
Ile Thr Ser Pro Ala Lys Glu Thr Ser Glu Lys Phe Thr Trp Pro Ala
305                 310                 315                 320
Lys Gly Arg Pro Arg Lys Ile Ala Trp Glu Lys Lys Glu Asp Thr Pro
                325                 330                 335
Arg Glu Ile Met Ser Pro Ala Lys Glu Thr Ser Glu Lys Phe Thr Trp
            340                 345                 350
Ala Ala Lys Gly Arg Pro Arg Lys Ile Ala Trp Glu Lys Lys Glu Thr
        355                 360                 365
Pro Val Lys Thr Gly Cys Val Ala Arg Val Thr Ser Asn Lys Thr Lys
    370                 375                 380
Val Leu Glu Lys Gly Arg Ser Lys Met Ile Ala Cys Pro Thr Lys Glu
385                 390                 395                 400
Ser Ser Thr Lys Ala Ser Ala Asn Asp Gln Arg Phe Pro Ser Glu Ser
                405                 410                 415
Lys Gln Glu Glu Asp Glu Glu Tyr Ser Cys Asp Ser Arg Ser Leu Phe
            420                 425                 430
Glu Ser Ser Ala Lys Ile Gln Val Cys Ile Pro Glu Ser Ile Tyr Gln
        435                 440                 445
Lys Val Met Glu Ile Asn Arg Glu Val Glu Glu Pro Pro Lys Lys Pro
    450                 455                 460
Ser Ala Phe Lys Pro Ala Ile Glu Met Gln Asn Ser Val Pro Asn Lys
465                 470                 475                 480
Ala Phe Glu Leu Lys Asn Glu Gln Thr Leu Arg Ala Asp Pro Met Phe
                485                 490                 495
Pro Pro Glu Ser Lys Gln Lys Asp Tyr Glu Glu Asn Ser Trp Asp Ser
            500                 505                 510
Glu Ser Leu Cys Glu Thr Val Ser Gln Lys Asp Val Cys Leu Pro Lys
        515                 520                 525
Ala Thr His Gln Lys Glu Ile Asp Lys Ile Asn Gly Lys Leu Glu Glu
    530                 535                 540
Ser Pro Asn Lys Asp Gly Leu Leu Lys Ala Thr Cys Gly Met Lys Val
545                 550                 555                 560
Ser Ile Pro Thr Lys Ala Leu Glu Leu Lys Asp Met Gln Thr Phe Lys
                565                 570                 575
Ala Glu Pro Pro Gly Lys Pro Ser Ala Phe Glu Pro Ala Thr Glu Met
            580                 585                 590
Gln Lys Ser Val Pro Asn Lys Ala Leu Glu Leu Lys Asn Glu Gln Thr
        595                 600                 605
Trp Arg Ala Asp Glu Ile Leu Pro Ser Glu Ser Lys Gln Lys Asp Tyr
    610                 615                620
Glu Glu Asn Ser Trp Asp Thr Glu Ser Leu Cys Glu Thr Val Ser Gln
625                 630                 635                 640
Lys Asp Val Cys Leu Pro Lys Ala Ala His Gln Lys Glu Ile Asp Lys
                645                 650                 655
Ile Asn Gly Lys Leu Glu Gly Ser Pro Val Lys Asp Gly Leu Leu Lys
            660                 665                 670
Ala Asn Cys Gly Met Lys Val Ser Ile Pro Thr Lys Ala Leu Glu Leu
        675                 680                 685
Met Asp Met Gln Thr Phe Lys Ala Glu Pro Pro Glu Lys Pro Ser Ala
    690                 695                 700
Phe Glu Pro Ala Ile Glu Met Gln Lys Ser Val Pro Asn Lys Ala Leu
705                 710                 715                 720
Glu Leu Lys Asn Glu Gln Thr Leu Arg Ala Asp Glu Ile Leu Pro Ser
                725                 730                 735
Glu Ser Lys Gln Lys Asp Tyr Glu Glu Ser Ser Trp Asp Ser Glu Ser
            740                 745                 750
Leu Cys Glu Thr Val Ser Gln Lys Asp Val Cys Leu Pro Lys Ala Thr
        755                 760                 765
His Gln Lys Glu Ile Asp Lys Ile Asn Gly Lys Leu Glu Glu Ser Pro
    770                 775                 780
Asp Asn Asp Gly Phe Leu Lys Ala Pro Cys Arg Met Lys Val Ser Ile
785                 790                 795                 800
Pro Thr Lys Ala Leu Glu Leu Met Asp Met Gln Thr Phe Lys Ala Glu
                805                 810                 815
Pro Pro Glu Lys Pro Ser Ala Phe Glu Pro Ala Ile Glu Met Gln Lys
            820                 825                 830
Ser Val Pro Asn Lys Ala Leu Glu Leu Lys Asn Glu Gln Thr Leu Arg
        835                 840                 845
Ala Asp Gln Met Phe Pro Ser Glu Ser Lys Gln Lys Lys Val Glu Glu
    850                 855                 860
Asn Ser Trp Asp Ser Glu Ser Leu Arg Glu Thr Val Ser Gln Lys Asp
865                 870                 875                 880
Val Cys Val Pro Lys Ala Thr His Gln Lys Glu Met Asp Lys Ile Ser
                885                 890                 895
Gly Lys Leu Glu Asp Ser Thr Ser Leu Ser Lys Ile Leu Asp Thr Val
            900                 905                 910
His Ser Cys Glu Arg Ala Arg Glu Leu Gln Lys Asp His Cys Glu Gln
        915                 920                 925
Arg Thr Gly Lys Met Glu Gln Met Lys Lys Lys Phe Cys Val Leu Lys
    930                 935                 940
Lys Lys Leu Ser Glu Ala Lys Glu Ile Lys Ser Gln Leu Glu Asn Gln
945                 950                 955                 960
Lys Val Lys Trp Glu Gln Glu Leu Cys Ser Val Arg Leu Thr Leu Asn
                965                 970                 975
Gln Glu Glu Glu Lys Arg Arg Asn Ala Asp Ile Leu Asn Glu Lys Ile
            980                  985                990
Arg Glu Glu Leu Gly Arg Ile Glu  Glu Gln His Arg Lys  Glu Leu Glu
        995                 1000                 1005
Val Lys  Gln Gln Leu Glu Gln  Ala Leu Arg Ile Gln  Asp Ile Glu
    1010                 1015                 1020
Leu Lys  Ser Val Glu Ser Asn  Leu Asn Gln Val Ser  His Thr His
    1025                 1030                 1035
Glu Asn  Glu Asn Tyr Leu Leu  His Glu Asn Cys Met  Leu Lys Lys
    1040                 1045                 1050
Glu Ile  Ala Met Leu Lys Leu  Glu Ile Ala Thr Leu  Lys His Gln
    1055                 1060                 1065
Tyr Gln  Glu Lys Glu Asn Lys  Tyr Phe Glu Asp Ile  Lys Ile Leu
    1070                 1075                 1080
Lys Glu  Lys Asn Ala Glu Leu  Gln Met Thr Leu Lys  Leu Lys Glu
    1085                 1090                 1095
Glu Ser  Leu Thr Lys Arg Ala  Ser Gln Tyr Ser Gly  Gln Leu Lys
    1100                 1105                 1110
Val Leu  Ile Ala Glu Asn Thr  Met Leu Thr Ser Lys  Leu Lys Glu
    1115                 1120                 1125
Lys Gln  Asp Lys Glu Ile Leu  Glu Ala Glu Ile Glu  Ser His His
    1130                 1135                 1140
Pro Arg  Leu Ala Ser Ala Val  Gln Asp His Asp Gln  Ile Val Thr
    1145                 1150                 1155
Ser Arg  Lys Ser Gln Glu Pro  Ala Phe His Ile Ala  Gly Asp Ala
    1160                 1165                 1170
Cys Leu  Gln Arg Lys Met Asn  Val Asp Val Ser Ser  Thr Ile Tyr
    1175                 1180                 1185
Asn Asn  Glu Val Leu His Gln  Pro Leu Ser Glu Ala  Gln Arg Lys
    1190                 1195                 1200
Ser Lys  Ser Leu Lys Ile Asn  Leu Asn Tyr Ala Gly  Asp Ala Leu
    1205                 1210                 1215
Arg Glu  Asn Thr Leu Val Ser  Glu His Ala Gln Arg  Asp Gln Arg
    1220                 1225                 1230
Glu Thr  Gln Cys Gln Met Lys  Glu Ala Glu His Met  Tyr Gln Asn
    1235                 1240                 1245
Glu Gln  Asp Asn Val Asn Lys  His Thr Glu Gln Gln  Glu Ser Leu
    1250                 1255                 1260
Asp Gln  Lys Leu Phe Gln Leu  Gln Ser Lys Asn Met  Trp Leu Gln
    1265                 1270                 1275
Gln Gln  Leu Val His Ala His  Lys Lys Ala Asp Asn  Lys Ser Lys
    1280                 1285                 1290
Ile Thr  Ile Asp Ile His Phe  Leu Glu Arg Lys Met  Gln His His
    1295                 1300                 1305
Leu Leu  Lys Glu Lys Asn Glu  Glu Ile Phe Asn Tyr  Asn Asn His
    1310                 1315                 1320
Leu Lys  Asn Arg Ile Tyr Gln  Tyr Glu Lys Glu Lys  Ala Glu Thr
    1325                 1330                 1335
Glu Asn  Ser
    1340
<210>7
<211>23
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>7
Met Thr Lys Arg Lys Lys Thr Ile Asn Leu Asn Ile Gln Asp Ala Gln
1               5                   10                  15
Lys Arg Thr Ala Leu His Trp
            20
<210>8
<211>23
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>8
Thr Ser Glu Lys Phe Thr Trp Pro Ala Lys Gly Arg Pro Arg Lys Ile
1               5                   10                  15
Ala Trp Glu Lys Lys Glu Asp
            20
<210>9
<211>23
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>9
Asp Glu Ile Leu Pro Ser Glu Ser Lys Gln Lys Asp Tyr Glu Glu Asn
1               5                   10                  15
Ser Trp Asp Thr Glu Ser Leu
            20
<210>10
<211>23
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>10
Arg Leu Thr Leu Asn Gln Glu Glu Glu Lys Arg Arg Asn Ala Asp Ile
l               5                   10                  15
Leu Asn Glu Lys Ile Arg Glu
            20
<210>11
<211>23
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>11
Ala Glu Asn Thr Met Leu Thr Ser Lys Leu Lys Glu Lys Gln Asp Lys
1               5                   10                  15
Glu Ile Leu Glu Ala Glu Ile
            20
<210>12
<211>23
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>12
Asn Tyr Asn Asn His Leu Lys Asn Arg Ile Tyr Gln Tyr Glu Lys Glu
1               5                   10                  15
Lys Ala Glu Thr Glu Asn Ser
            20
<210>13
<211>9
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>13
Leu Met Asp Met Gln Thr Phe Lys Ala
1               5
<210>14
<211>9
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>14
Lys Val Ile Ser Pro Thr Lys Ala Leu
1               5
<210>15
<211>9
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>15
Ser Ile Pro Thr Lys Ala Leu Glu Leu
1               5
<210>16
<211>9
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>16
Leu Glu Leu Lys Asn Glu Gln Thr Leu
1               5
<210>17
<211>9
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>17
Thr Val Ser Gln Lys Asp Val Cys Leu
1               5
<210>18
<211>9
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>18
Ser Val Pro Asn Lys Ala Leu Glu Leu
1               5
<210>19
<211>9
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>19
Cys Glu Thr Val Ser Gln Lys Asp Val
1               5
<210>20
<211>9
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>20
Lys Ile Asn Gly Lys Leu Glu Glu Ser
1               5
<210>21
<211>9
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>21
Ser Leu Val Glu Lys Thr Pro Asp Glu
1               5
<210>22
<211>9
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>22
Ser Leu Cys Glu Thr Val Ser Gln Lys
1               5
<210>23
<211>9
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>23
Glu Ile Asp Lys Ile Asn Gly Lys Leu
1               5
<210>24
<211>9
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>24
Met Leu Leu Gln Gln Asn Val Asp Val
1               5
<210>25
<211>9
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>25
Asn Met Trp Leu Gln Gln Gln Leu Val
1               5
<210>26
<211>9
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>26
Phe Leu Val Asp Arg Lys Cys Gin Leu
1               5
<210>27
<211>9
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>27
Tyr Leu Leu His Glu Asn Cys Met Leu
1               5
<210>28
<211>9
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>28
Ser Leu Phe Glu Ser Ser Ala Lys Ile
1               5
<210>29
<211>9
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>29
Lys Ile Thr Ile Asp Ile His Phe Leu
1               5
<210>30
<211>9
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>30
Gln Leu Gln Ser Lys Asn Met Trp Leu
1               5
<210>31
<211>9
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>31
Ser Leu Asp Gln Lys Leu Phe Gln Leu
1               5
<210>32
<211>9
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>32
Phe Leu Leu Ile Lys Asn Ala Asn Ala
1               5
<210>33
<211>9
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>33
Lys Ile Leu Asp Thr Val His Ser Cys
1               5
<210>34
<211>9
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>34
Ser Leu Ser Lys Ile Leu Asp Thr Val
1               5
<210>35
<211>9
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>35
Ile Leu Ile Asp Ser Gly Ala Asp Ile
1               5
<210>36
<211>9
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>36
Lys Val Met Glu Ile Asn Arg Glu Val
1               5
<210>37
<211>9
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>37
Lys Leu Leu Ser His Gly Ala Val Ile
1               5
<210>38
<211>9
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>38
Ala Val Tyr Ser Glu Ile Leu Ser Val
1               5
<210>39
<211>9
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>39
Lys Met Asn Val Asp Val Ser Ser Thr
1               5
<210>40
<211>9
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>40
Ile Leu Ser Val Val Ala Lys Leu Leu
1               5
<210>41
<211>9
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>41
Val Leu Ile Ala Glu Asn Thr Met Leu
1               5
<210>42
<211>9
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>42
Lys Leu Ser Lys Asn His Gln Asn Thr
1               5
<210>43
<211>9
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>43
Ser Leu Thr Pro Leu Leu Leu Ser Ile
1               5
<210>44
<211>9
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>44
Ser Gln Tyr Ser Gly Gln Leu Lys Val
1               5
<210>45
<211>9
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>45
Lys Glu Leu Glu Val Lys Gln Gln Leu
1               5
<210>46
<211>9
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>46
Gln Ile Met Glu Tyr Ile Arg Lys Leu
1               5
<210>47
<211>9
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>47
Ala Met Leu Lys Leu Glu Ile Ala Thr
1               5
<210>48
<211>9
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>48
Val Leu His Gln Pro Leu Ser Glu Ala
l               5
<210>49
<211>9
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>49
Gly Leu Leu Lys Ala Thr Cys Gly Met
1               5
<210>50
<211>9
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>50
Gly Leu Leu Lys Ala Asn Cys Gly Met
1               5
<210>51
<211>9
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>51
Gln Gln Leu Glu Gln Ala Leu Arg Ile
1               5
<210>52
<211>9
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>52
Cys Met Leu Lys Lys Glu Ile Ala Met
1               5
<210>53
<211>9
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>53
Glu Gln Met Lys Lys Lys Phe Cys Val
1               5
<210>54
<211>9
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>54
Ile Gln Lys Ile Glu Leu Lys Ser Val
1               5
<210>55
<211>9
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>55
Ser Val Pro Asn Lys Ala Phe Glu Leu
1               5
<210>56
<211>9
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>56
Ser Ile Tyr Gln Lys Val Met Glu Ile
1               5
<210>57
<211>9
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>57
Asn Leu Asn Tyr Gln Gly Asp Ala Leu
1               5
<210>58
<211>9
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>58
Ala Val Gln Asp His Asp Gln Ile Val
1               5
<210>59
<211>9
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>59
Leu Ile Ala Glu Asn Thr Met Leu Thr
1               5
<210>60
<211>9
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>60
Phe Glu Leu Lys Asn Glu Gln Thr Leu
1               5
<210>61
<211>9
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>61
Phe Glu Ser Ser Ala Lys Ile Gln Val
1               5
<210>62
<211>9
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>62
Gly Val Thr Ala Glu His Tyr Ala Val
1               5
<210>63
<211>9
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>63
Arg Val Thr Ser Asn Lys Thr Lys Val
1               5
<210>64
<211>9
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>64
Thr Val Ser Gln Lys Asp Val Cys Val
1               5
<210>65
<211>9
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>65
Lys Ser Gln Glu Pro Ala Phe His Ile
1               5
<210>66
<211>9
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>66
LysAsn Leu Ile Ala Glu Asn Thr Met
1              5
<210>67
<211>9
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>67
Met Leu Lys Leu Glu Ile Ala Thr Leu
1               5
<210>68
<211>9
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>68
Glu Ile Leu Ser Val Val Ala Lys Leu
1               5
<210>69
<211>9
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>69
Met Leu Lys Lys Glu Ile Ala Met Leu
1               5
<210>70
<211>9
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>70
Leu Leu Lys Glu Lys Asn Glu Glu Ile
1               5
<210>71
<211>9
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>71
Ala Leu Arg Ile Gln Asp Ile Glu Leu
1               5
<210>72
<211>9
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>72
Lys Ile Arg Glu Glu Leu Gly Arg Ile
1               5
<210>73
<211>9
<212>PRT
<213>人(Hommo sapiens)
<400>73
Thr Leu Lys Leu Lys Glu Glu Ser Leu
1               5
<210>74
<211>9
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>74
Ile Leu Asn Glu Lys Ile Arg Glu Glu
1               5
<210>75
<211>9
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>75
Val Leu Lys Lys Lys Leu Ser Glu Ala
1               5
<210>76
<211>9
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>76
Gly Thr Ser Asp Lys Ile Gln Cys Leu
1               5
<210>77
<211>9
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>77
Gly Ala Asp Ile Asn Leu Val Asp Val
1               5
<210>78
<211>9
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>78
Glu Leu Cys Ser Val Arg Leu Thr Leu
1               5
<210>79
<211>9
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>79
Ser Val Glu Ser Asn Leu Asn Gln Val
1               5
<210>80
<211>9
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>80
Ser Leu Lys Ile Asn Leu Asn Tyr Ala
1               5
<210>81
<211>9
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>81
Lys Thr Pro Asp Glu Ala Ala Ser Leu
1               5
<210>82
<211>9
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>82
Ala ThrCys Gly Met Lys Val Ser Ile
1              5
<210>83
<211>9
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>83
Leu Ser His Gly Ala Val lle Glu Val
1               5
<210>84
<211>9
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>84
Glu Ile Ala Met Leu Lys Leu Glu Ile
1               5
<210>85
<211>9
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>85
Ala Glu Leu Gln Met Thr Leu Lys Leu
1               5
<210>86
<211>9
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>86
Val Phe Ala Ala Asp Ile Cys Gly Val
1               5
<210>87
<211>9
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>87
ProAla Ile Glu Met Gln Asn Ser Val
1              5
<210>88
<211>9
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>88
Glu Ile Phe Asn Tyr Asn Asn His Leu
1               5
<210>89
<211>9
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>89
Ile Leu Lys Glu Lys Asn Ala Glu Leu
1               5
<210>90
<211>9
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>90
Gln Leu Val His Ala His Lys Lys Ala
1               5
<210>91
<211>9
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>91
Asn Ile Gln Asp Ala Gln Lys Arg Thr
1               5
<210>92
<211>9
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>92
Asn Leu Val Asp Val Tyr Gly Asn Met
1               5
<210>93
<211>9
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>93
Lys Cys Thr Ala Leu Met Leu Ala Val
1               5
<210>94
<211>9
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>94
Lys Ile Gln Cys Leu Glu Lys Ala Thr
1               5
<210>95
<211>9
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>95
Lys Ile Ala Trp Glu Lys Lys Glu Thr
1               5
<210>96
<211>9
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>96
Ile Ala Trp Glu Lys Lys Glu Asp Thr
1               5
<210>97
<211>9
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>97
Val Gly Met Leu Leu Gln Gln Asn Val
1               5
<210>98
<211>9
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>98
Val Lys Thr Gly Cys Val Ala Arg Val
1               5
<210>99
<211>9
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>99
Ala Leu His Tyr Ala Val Tyr Ser Glu
1               5
<210>100
<211>9
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>100
Gln Met Lys Lys Lys Phe Cys Val Leu
1               5
<210>101
<211>9
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>101
Ala Leu Gln Cys His Gln Glu Ala Cys
1               5
<210>102
<211>9
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>102
Ser Glu Gln Ile Val Glu Phe Leu Leu
1               5
<210>103
<211>9
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>103
Ala Val Ile Glu Val His Asn Lys Ala
1               5
<210>104
<211>9
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>104
Ala Val Thr Cys Gly Phe His His Ile
1               5
<210>105
<211>9
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>105
Ala Cys Leu Gln Arg Lys Met Asn Val
1               5
<210>106
<211>9
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>106
Ser Leu Val Glu Gly Thr Ser Asp Lys
1               5

Claims (63)

1.一种表达载体，含有SEQ ID NO：5或图4中所示的核酸序列；一段核酸序列，编码SEQ ID NO：6或图5中所示的氨基酸序列；或其片段。
2.权利要求1的表达载体，其中载体为质粒或病毒载体。
3.权利要求2的表达载体，其中的病毒载体选自痘病毒、腺病毒、逆转录病毒、疱疹病毒和腺相关病毒。
4.权利要求3的表达载体，其中病毒载体是选自牛痘、NYVAC、禽痘、金丝雀痘、ALVAC、ALVAC(2)、鸟痘和TROVAC的痘病毒。
5.权利要求4的表达载体，其中病毒载体是选自NYVAC、ALVAC和ALVAC(2)的痘病毒。
6.权利要求1的表达载体，进一步含有至少一个附加的肿瘤相关抗原。
7.权利要求6的表达载体，其中载体是质粒或病毒载体。
8.权利要求7的表达载体，其中的病毒载体选自痘病毒、腺病毒、逆转录病毒、疱疹病毒和腺相关病毒。
9.权利要求8的表达载体，其中病毒载体是选自牛痘、NYVAC、禽痘、金丝雀痘、ALVAC、ALVAC(2)、鸟痘和TROVAC的痘病毒。
10.权利要求9的表达载体，其中病毒载体是选自NYVAC、ALVAC和ALVAC(2)的痘病毒。
11.权利要求1的表达载体，进一步含有至少一段编码血管生成相关抗原的核酸序列。
12.权利要求11的表达载体，其中载体是质粒或病毒载体。
13.权利要求12的表达载体，其中的病毒载体选自痘病毒、腺病毒、逆转录病毒、疱疹病毒和腺相关病毒。
14.权利要求13的表达载体，其中病毒载体是选自牛痘、NYVAC、禽痘、金丝雀痘、ALVAC、ALVAC(2)、鸟痘和TROVAC的痘病毒。
15.权利要求14的表达载体，其中病毒载体是选自NYVAC、ALVAC和ALVAC(2)的痘病毒。
16.权利要求6的表达载体，进一步含有至少一段编码血管生成相关抗原的核酸序列。
17.权利要求16的表达载体，其中载体是质粒或病毒载体。
18.权利要求17的表达载体，其中的病毒载体选自痘病毒、腺病毒、逆转录病毒、疱疹病毒和腺相关病毒。
19.权利要求17的表达载体，其中病毒载体是选自牛痘、NYVAC、禽痘、金丝雀痘、ALVAC、ALVAC(2)、鸟痘和TROVAC的痘病毒。
20.权利要求18的表达载体，其中病毒载体是选自NYVAC、ALVAC和ALVAC(2)的痘病毒。
21.一种表达载体，选自权利要求1的表达载体、权利要求6的表达载体、权利要求11的表达载体和权利要求16的表达载体；进一步含有编码协同刺激分子的核酸序列。
22.权利要求22的表达载体，其中载体是质粒或病毒载体。
23.权利要求23的表达载体，其中的病毒载体选自痘病毒、腺病毒、逆转录病毒、疱疹病毒和腺相关病毒。
24.权利要求24的表达载体，其中病毒载体是选自牛痘、NYVAC、禽痘、金丝雀痘、ALVAC、ALVAC(2)、鸟痘和TROVAC的痘病毒。
25.权利要求18的表达载体，其中病毒载体是选自NYVAC、ALVAC和ALVAC(2)的痘病毒。
26.一种组合物，所述组合物在药学上可接受的载体之中含有表达载体，所述表达载体含有SEQ ID NO：5或图4中所示的核酸序列；编码SEQ ID NO：6或图5中所示的氨基酸序列的核酸序列；或其片段。
27.权利要求26的组合物，其中载体是质粒或病毒载体。
28.权利要求27的组合物，其中的病毒载体选自痘病毒、腺病毒、逆转录病毒、疱疹病毒和腺相关病毒。
29.权利要求28的组合物，其中病毒载体是选自牛痘、NYVAC、禽痘、金丝雀痘、ALVAC、ALVAC(2)、鸟痘和TROVAC的痘病毒。
30.权利要求29的组合物，其中病毒载体是选自NYVAC、ALVAC和ALVAC(2)的痘病毒。
31.一种预防或治疗癌症的方法，包括给予宿主含有SEQ IDNO：5或图4中所示的核酸序列的表达载体；编码SEQ ID NO：6或图5中所示的氨基酸序列的核酸；或其片段。
32.权利要求31的方法，其中载体是质粒或病毒载体。
33.权利要求32的方法，其中的病毒载体选自痘病毒、腺病毒、逆转录病毒、疱疹病毒和腺相关病毒。
34.权利要求33的方法，其中病毒载体是选自牛痘、NYVAC、禽痘、金丝雀痘、ALVAC、ALVAC(2)、鸟痘和TROVAC的痘病毒。
35.权利要求34的方法，其中病毒载体是选自NYVAC、ALVAC和ALVAC(2)的痘病毒。
36.一种分离的肽，得自表X或XI所示的BFA5。
37.一种用肿瘤抗原BFA5免疫宿主的方法，包括给予病人表X或XI所示的肽，单独给予或与其他药联合给予，联合给予时各组分同时给予或各自分开给予。
38.一种分离的肽，得自表X或XI所示的BFA5。
39一种用肿瘤抗原BFA5免疫宿主的方法，包括给予病人表X或XI所示的肽，单独给予或与其他药联合给予，联合给予时各组分同时给予或各自分开给予。
40.权利要求6的表达载体，其中外加的肿瘤相关抗原由选自下述序列的核酸序列编码：SEQ ID NO：1核酸序列；SEQ ID NO：3核酸序列；图1中所示的核酸序列；图3A中所示的核酸序列；编码SEQID NO：2氨基酸序列的核酸序列；编码SEQ ID NO：4氨基酸序列的核酸序列；编码图2中所示的氨基酸序列的核酸序列；编码图3B中所示的氨基酸序列的核酸序列；在严格条件下与前述任何序列杂交的核酸序列；前述任何核酸序列的片段；前述任何核酸序列的衍生物。
41.权利要求40的表达载体，其中的病毒载体选自痘病毒、腺病毒、逆转录病毒、疱疹病毒和腺相关病毒。
42.权利要求41的表达载体，其中病毒载体是选自牛痘、NYVAC、禽痘、金丝雀痘、ALVAC、ALVAC(2)、鸟痘和TROVAC的痘病毒。
43.权利要求42的表达载体，其中病毒载体是选自NYVAC、ALVAC和ALVAC(2)的痘病毒。
44.一种表达载体，所述表达载体选自权利要求40的表达载体、权利要求41的表达载体、权利要求42的表达载体和权利要求42的表达载体；进一步含有编码协同刺激分子的核酸序列。
45.权利要求44或21的表达载体，其中协同刺激分子是人B7.1或其衍生物。
46.一种组合物，所述组合物在药学上可接受的载体中包含权利要求40的表达载体。
47.一种组合物，所述组合物在药学上可接受的载体中包含权利要求41的表达载体。
48.一种组合物，所述组合物在药学上可接受的载体中包含权利要求42的表达载体。
49.一种组合物，所述组合物在药学上可接受的载体中包含权利要求43的表达载体。
50.一种组合物，所述组合物在药学上可接受的载体中包含权利要求44的表达载体。
51.一种组合物，所述组合物在药学上可接受的载体中包含权利要求45的表达载体。
52.一种预防或治疗癌症的方法，所述方法包括给予宿主权利要求46的组合物。
53.一种预防或治疗癌症的方法，所述方法包括给予宿主权利要求47的组合物。
54.一种预防或治疗癌症的方法，所述方法包括给予宿主权利要求48的组合物。
55.一种预防或治疗癌症的方法，所述方法包括给予宿主权利要求49的组合物。
56.一种预防或治疗癌症的方法，所述方法包括给予宿主权利要求50的组合物。
57.一种预防或治疗癌症的方法，所述方法包括给予宿主权利要求51的组合物。
58.一种分离的DNA分子，含有SEQ ID NO：5的核酸序列和至少一种SEQ ID NO：3或SEQ ID NO：5的核酸序列。
59.一种表达载体，含有权利要求58的分离的DNA分子。
60.一种分离的DNA分子，含有编码SEQ ID NO：6氨基酸序列和至少一种SEQ ID NO：2或SEQ ID NO：4氨基酸序列的核酸序列。
61.一种表达载体，含有权利要求60的分离的DNA分子。
62.一种分离的DNA分子，含有SEQ ID NO：5的核酸序列和至少一种SEQ ID NO：3或SEQ ID NO：5的核酸序列；能在严格条件下与SEQ ID NO：3或SEQ ID NO：5杂交的核酸序列；SEQ ID NO：3或SEQ ID NO：5的核酸序列片段；任何SEQ ID NO：3或SEQ ID NO：5的核酸序列的衍生物。
63.一种抗体，能与SEQ ID NO：6的氨基酸序列或SEQ ID NO：6的氨基酸序列的片段结合。
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