CN1784146A - 具有血管紧张素转化酶抑制作用的肽 - Google Patents

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Abstract

5肽IIAEK、5肽IPAVF和6肽IPAVFK及其盐在制备血管紧张素转化酶抑制剂上的用途。

Description

具有血管紧张素转化酶抑制作用的肽
                    发明领域
本发明涉及用于制备血管紧张素转化酶(ACE)抑制剂的某些特定肽，本发明还涉及有ACE抑制剂作用的食品和加工此类食品的方法。
                    发明背景
高血压被认为是引起心血管系统疾病(CVD)的主要危险因素之一，机体调节血压的一个机理是通过肾素-血管紧张素系统来实现的。该系统通过级联反应导致血管紧张素II的形成，血管紧张素II有强烈的收缩血管、从而增高血压的效应。抑制该级联反应中的关键酶之一：血管紧张素I转化酶(ACE)，减少血管紧张素II的形成，可起到降低血压的作用。长期人体干预研究显示，定期食入低剂量的ACE抑制剂可将心血管系统疾病降低25％(Gerstein等(2000)，The Lancet355，253-259)。
食品中含ACE抑制剂是众所周知的，这样的食品可通过对奶及其他奶制品进行发酵而制成。在一个安慰剂对照试验中观察到，酸奶中的VPP和IPP降低高血压病人的血压。(Hata，Y etal.(1966)，American Journal of Clinical Nutrition 64，767-771)
一个已经上市的且宣称“适用于轻度高血压患者”的发酵奶制品是Calpis酸奶，经纤维二糖乳杆菌(Lactobacillus helveticus)和酿酒酵母(Saccharomyces cervisiae)发酵制成，由日本的Calpis Food Industry生产。另一个已经上市的发酵奶制品是Evolus，由芬兰的Valio生产，号称是“欧洲第一个有助于降低血压的功能性食品”，经纤维二糖乳杆菌株发酵而成。该制品含有经体外证实有ACE抑制作用的生物活性肽(VPP和IPP)，这些肽由水解酪蛋白产生。
另一个在现有领域被认同的可能方法是用酶水解奶制品来生产含ACE抑制剂的食品，WO 01/85984描述了用胰蛋白酶水解乳清蛋白分离物来制备ACE抑制组合物的方法。
WO 02/19837描述了从有ACE抑制特性的乳清蛋白分离物中制备乳清蛋白水解物的方法，所用酶是中性蛋白酶。WO 02/19837的表1中列出了具有ACE抑制活性特征的肽，但没有提及IPAVEK、IPAVE和IIAEK。
Pellegrini A等在Biochimica et Biophysica Acta-GeneralSubjects(2001)，1526(2)，第131-140页中公开了肽片段IPAVEK有杀菌特性，但未报道此肽有ACE抑制活性。
Nagaoka，S等在Biochemical and Biophysical Communications(2001)281，11-17中公开了IIAEK有降低胆固醇作用，但也未提及其ACE抑制活性。
                     发明概述
本发明的目的是要提供一种适合于抑制ACE的食品，进一步的目的是要提供一种具有抗高血压作用的食品。另一个目的是要使该食品味道好，尤其是要降低苦味，另外还要使该食品的生产价格能够被接受。还有一个目的是要使食品中含高浓度ACE抑制剂。本发明通过用5肽IIAEK、5肽IPAVF和/或6肽IPAVFK及其盐来制备ACE抑制剂，部分达到了这些目的。
                     发明详述
单字母代码常被用来表示氨基酸。IIAEK是β-乳球蛋白上第71-75位氨基酸，IPVAF是β-乳球蛋白上第78-82位氨基酸，IPVAFK是β-乳球蛋白上第78-83位氨基酸。
根据本发明，我们发现5肽IIAEK在人体肠道中是稳定的，而IPAVF和IPAVFK在人肠道中会被消化降解为具有ACE抑制作用的肽IPA。由此，5肽IIAEK、5肽IPAVF和/或6肽IPAVFK及其盐是很合适的ACE抑制剂。最好这种ACE抑制剂能是一种功能性食品。Abubakar等在Journal of Sairy Science 81，3131-3138上撰文阐述了IPA在患有原发性高血压的大鼠身上的抗高血压作用，文章中显示了IPA的ACE抑制作用。本发明中的食品正是具有抗高血压作用的食品。
本发明提供的适合于抑制ACE的食品含有25mg/g或更多的IIAEK和/或5mg/g或更多的IPAVF和/或3mg/g或更多的IPAVFK。优选的食品应含有50mg/g或更多的IIAEK和/或10mg/g或更多的5肽IPAVF和/或6mg/g或更多的6肽IPAVFK。优选的食品是蛋白水解产物，更优选的是β-乳球蛋白的水解产物。
通过优化发酵或水解条件，具有生物活性的IIAEK、IPAVF和IPAVFK分子的生产可以达到最大化。熟练的技术人员要想使产品产量最大化，就应该知道怎样调节加工过程中的各种参数，如水解时间、水解温度、酶的类型和浓度等。
最好IIAEK、IPAVF和IPAVFK的摩尔产率能够高。IIAEK的摩尔产率的定义为：生产得到的IIAEK的摩尔量除以水解前原料中总β-乳球蛋白中IIAEK片段的摩尔量。IPAVF或IPAVFK的摩尔产率也通过同样的计算获得。注意IIAEK序列和IPAVFK序列存在于β-乳球蛋白中。
优选的IIAEK摩尔产率是90-100％；对IPAVF来说是30-100％，更优选的是50-100％，最优选的是80-100％；对IPAVFK来说是15-100％，更优选的是30-100％，最优选的是50-100％。
就水解物优化方法而言，需要了解活性肽前体的特性。然而在复杂的水解产物或发酵产物中，检测和鉴别具有生物学活性的肽是一项很具挑战性的工作。因为，通常在含有数千种肽的复杂样品中，仅有几个具有生物学活性的肽以相对低水平的存在。传统的鉴定手段利用重复循环高效液相(HPLC)分离和生物化学评价，既耗时，又易使样品活性丧失。现在所用的是在线联接在HPLC分级分离系统上的连续流生物化学检测系统，HPLC的柱流出液一部分被导入连续流的ACE生物化学检测系统，另一部分被导向化学分析系统(质谱仪)。粗制水解产物经HPLC分离后，其化合物的生物学活性的经在线生物化学检测系统检测，并由质谱仪持续记录其质谱信息。这样，当某个肽经生物化学检测系统检出阳性信号时，其结构信息能立即获得。
本发明中的食品被定义为适合于人体食入、加入了有效量的本发明β-乳球蛋白水解产物、从而获得了明显的ACE抑制效应的产品。
本发明的食品最好依据包含下列步骤的加工过程来制备：
(a)用酶水解的方法来水解含有β-乳球蛋白的乳清蛋白底物获得乳清蛋白水解产物；
(b)从乳清蛋白水解物中分离富含5肽IIAEK、5肽IPAVF和/或6肽IPAVFK的组分；
(c)通过干燥从b)步骤得到的组分，获得固体状态的富含5肽IIAEK、5肽IPAVF和/或6肽IPAVFK的组分；
(d)将从c)步骤得到富含5肽IIAEK、5肽IPAVF和/或6肽IPAVFK的固体用作食品生产中的食品成份。
酶水解步骤(a)可以是任何一种酶法处理乳清蛋白底物，导致β-乳球蛋白水解释放出IPAVFK、IPAVF和IIAEK中的一种或多种肽的过程。
乳清蛋白底物可以是任何一种含有充足量的β-乳球蛋白的物质。合适的底物的实例为奶、乳清、乳清粉、乳清粉浓缩物、乳清粉分离物或β-乳球蛋白等，优选有高含量的β-乳球蛋白的底物，如乳清蛋白分离物(WPI)。
酶可以是任何一种能够水解β-乳球蛋白从而导致IIAEK、IPAVF和/或IPAVFK中的一种或多种释放出来的酶。优选的酶的实例是胰蛋白酶，更优选的酶是胰蛋白酶与糜蛋白酶的混合物。
分离步骤(b)(或浓缩步骤(b))可以用专业技术人员所知的任何一种方法来完成，例如过滤、离心或色谱分离以及将这些方法合并使用。优选的分离步骤(b)是用超滤(UF)和/或纳米过滤(NF)的技术来实施的。过滤过程中使用的膜的孔径及电荷可用来控制5肽IIAEK、5肽IPAVF和/或6肽IPAVFK的分离。Poilot等在Journal of MembraneScience 158(1999)105-114上报道了利用带电荷的UF/NF膜分级分离乳清蛋白水解物的方法。WO 00/42066对电透析的方法有所描述。
干燥步骤(c)涉及到对从步骤(b)得到的组合物进行干燥，获得富含5肽IIAEK、5肽IPAVF和/或6肽IPAVFK的过程，可用常规方法，如喷雾干燥或冷冻干燥的方法来完成该步骤。
从步骤(b)获得的富含肽的组分在下面的文章中用ACE-组分表示，从步骤(c)获得固体在后面的文章中用ACE-固体表示。该ACE-组分和/或ACE-固体可适于用作食品成份。
本发明的食品及其衍生食品可以被巴斯德消毒或灭菌。
本发明的食品可以是任何一种类型的食品，除食品本身外还可含有适当量的常用的其品成份，如香料、糖、水果、矿物质、维生素，稳定剂及增稠剂。
优选的食品含50-200mmol/kg K+和/或15-60mmol/kg Ca2+和/或6-25mmol/kg Mg2+；更优选的是含100-150mmol/kg K+和/或30-50mmol/kg Ca2+和/或10-25mmol/kg Mg2+；最优选的是含110-135mmol/kg K+和/或35-45kg mmol/kg Ca2+和/或13-20mmol/kg Mg2+。
优选的该食品类型为果汁类食品、乳制品、冰冻甜食类食品或涂抹酱/人造黄油等。这些优选食品类型将在下面举例详述。
· 果汁类食品
本发明中的果汁类食品例子有加入了ACE-固体和/或ACE-组分的柑橘鼠水果如桔子和葡萄柚汁、热带水果汁、香蕉汁、桃汁、梨汁和草莓汁。
· 乳类制品
本发明中的乳类制品实例有加入了ACE-固体和/或ACE-组分的牛奶、乳制涂抹酱、乳酪、牛奶饮料和酸奶。该类食品作为奶类饮料时，也可加入香精和其他添加剂。乳类制品也可通过将ACE-固体和/或ACE-组分加入水中或加入乳制品中而制得。
一个酸奶制品组合物的实例是约含50-80％重量的水、0.1-15％重量的ACE-固体、0-15％重量的乳清蛋白粉、0-15％重量的糖(例如蔗糖)、0.01-1％重量的酸奶培养物、0-20％重量的水果、0.05-5％重量的维生素和矿物质、0-2％重量的香精和0-5％重量的稳定剂(附型剂增稠剂或凝胶剂)。
典型的酸奶制品的大小可以为50-250克，通常是80-200克。
· 冰冻甜食制品
在本发明中，术语冰冻甜食包括了含冷冻甜食奶，如冰淇淋、冻酸奶、果汁饮料、雪糕、冰牛奶以及冻蛋奶冻、冰棍、grannitas和冻果泥。
在冰冻甜食中，优选的固体(如糖、脂肪和香料等)成份的重量比应是3％；更优选的固体成份重量比应是10-70％，例如40-70％。典型的冰淇淋含有0-20％重量的脂肪、0.1-20％重量的ACE-固体和甜味剂、0-10％重量的脱脂奶成份和选择性成份，如乳化剂、稳定剂、防腐剂、调味成份、维生素、矿物质等，其余为水。典型的冰淇淋会充气超过体积的20-200％，更确切的是40-200％，并被冻至-2至-200℃，更确切的是冻至-10至-30℃。冰淇淋通常还含有约0.1％重量的钙。
· 其他食品
本发明中的其他食品可由专业人员根据常识，使用水解的β-乳球蛋白或水解的β-乳球蛋白衍生产物，如适当量的水解β-乳球蛋白干粉作为成份制备。这样的食品实例有烘烤类食品、乳类食品和点心等。
最好食品是含油和水的乳剂，例如涂抹酱。油和水的乳剂在此定义为含有油和水的乳剂，包括水包油(O/W)乳剂和油包水(W/O)乳剂及更复杂的乳剂，如水包油包水(W/O/W/O/W)乳剂。这里定义的油包括脂肪。优选的食品是涂抹酱、冰冻甜食或调味汁。本发明中优选的涂抹酱含有30-90％重量的植物油。涂抹酱的pH值最好为4.2-6.0。
                     实施例
                     实施例1
材料和方法
高分辨筛选-质谱检测(HRS-MS)
用Kiadis(Leiden，the Netherlands)公司开发的高分辨筛选系统对Davisco国际食品(Le Sueur，MN，USA)生产的一种水解乳清蛋白分离物BiozateTM进行ACE抑制活性分析。该系统由HPLC、检测生物活性的连续流ACE生物检测装置和进行化学鉴别的质谱仪组成。该梯度HPLC系统由4个Agilent 1100系列的液相色谱(LC)泵(Walbronn，Germany)组成。其中两个泵用于传送进行色谱分离的溶液，另外两个泵用于添加补充溶液(make-up)到柱流出液中，以调节并补偿色谱分离过程中有机调节剂百分比和流速的变化。用于梯度色谱分离的水溶液和有机调节溶液分别由0％-95％的甲醇组成。与此类似，用作柱后补充溶液的水溶液及有机溶液由0％-35％的甲醇组成。所有溶液中均含有0.05％的三氟乙酸(TFA)。除非另有说明，色谱分离在室温下进行，使用的色谱柱为Alltech Ultima型号、体积2.1*250mm、填充有5μm、100大小的颗粒的碳18(C18)柱(Alltech Amsterdam，theNetherlands)。通过分析柱的液体流速为200μl/min。柱后补偿后保持液流总流速恒定在1ml/min，液流中含10％乙腈。样品生物活性曲线用2-95％的甲醇/0.05三氟乙酸梯度进行。分析时使用400μl含0.5％Biozate溶液(W/V)。
通过三通管，梯度流出液以50μl/min的速度导入连续流生物检测装置。200μl/min的流速导入型号为Micromass QTOF-micro的质谱仪(Almere，The Netherlands)，750μl/min的流速导入废液管。
在连续流生物检测装置中，样品的ACE抑制作用是通过基于底物转化模式的生物检测试验来检测的。检测的第一步，将从分析色谱柱洗脱出的化合物与目标蛋白ACE混合，并相互作用60秒钟，第二步，将某种内源性淬灭(internally quenched)荧光底物，即abz-FRK(dnp)P-OH，加入以上混合物，使其与ACE相互作用120秒钟。分别在320nm的激发波长和420nm的发射波长下持续监测荧光信号。展示出ACE抑制活性的化合物，酶底物的转化速率会暂时降低，在生化读出仪器上就会记录到一个负峰。将荧光底物abz-FRK(DNP)P-OH(10μm)和酶溶液ACE(0.0375U/ml)，溶于pH7.5的200mM Tris，300mM NaCl，0.5％Tween的溶液中，分别转入Pharmacia公司出品的50ml进样环(superloop)(Uppsala Sweden)。置两个进样环于4℃的Spark Mistral恒温箱(Emmen，The Netherlands)中。将Agilent1100系列的液相色谱泵与进样环连接，以25μl/min的速流替换生物试剂。亲合反应在开放管状的、盘绕的、内径0.5mm的聚四氟乙烯(PTEE)反应圈内进行。反应圈放置于温度为50℃的Shimadzu CTO10A vp恒温箱中(Den Bosch，The Netherlands)。其荧光信号用Agilent1100系列的荧光检测仪(Waldbronn，Germany)检测。部分色谱柱流出液被导入OTOF micro MS质谱仪，质谱仪设定为电喷雾电离(ESI)正离子全扫描模式(EIS posivive ion full scan)。其去溶剂的温度和离子源的温度分别为300和80℃。毛细管，样品锥(cone)和提取电压设为3000、50和2.5伏。样品锥和去溶剂气流速度相当于50和450l/hr。在此种条件下，大多数的肽显示出相当程度地片段化，有利用结构的解析。咖啡因作为锁定质量完成准确质量测定，以10μl/min的流速持续输入。每天用稀释的磷酸溶液校正质谱仪。Biozate样品中的IIAEK、IPAVF和IPAVFK的定量用Micromass Quattro II MS质谱仪完成，质谱仪设置为正电喷雾模式，多反应检测模式。所用HPLC方法和上面描述的一样。MS(ESI+)参数如下：样品锥电压37V，毛细管电压4KV，干燥氮气流速300L/hr。离子源温度和喷雾器温度分别为：100℃和250℃。合成的肽用于制备校正线；IIAEK的母离子573.4，最大的子离子分别是227.2和347.2；IPAVF的母离子546.3，最大的子离子分别是282.2和433.1；IPAVFK的母离子674.4，最大的子离子分别是282.2和501.2。
体外胃肠道消化试验
为考察这些肽在人体胃肠道的稳定性，模拟了一个典型胃和小肠的条件来对BiozateTM进行研究，将5.0g BiozateTM、2.1g NaCl，0.1gNaH2PO4、0.45g脂肪酶和2.9g胃蛋白酶溶于900ml纯净水(Millipore Q水)中，用HCl调节pH至3.5，然后在37℃温度条件下用桨搅拌(50转/分)60分钟，模拟胃内条件。继之，将9.0g胰蛋白酶加入到模拟胃液中，用NaHCO3将pH上调到6.8，在37℃的温度条件下继续搅拌(50转/分)120分钟，模拟小肠液。在此体外胃肠消化过程中，按不同时间点采集样品。收集到的样品直接在95℃加热30分钟后放-20℃冻存。
IIAEK、IPAVF和IPAVFK的ACE抑制活性测定
IIAEK、IPAVF(K)的ACE抑制活性采用了经过某些改良的、Araujo等(2000)的方法来测定。ACE作用于荧光底物(Abz-FRK(Dnp)P-OH)的活性检测在含有100mM NaCl，pH7.0的0.1M Tris缓冲液中进行。向白色透明的96孔板((Packerd Bioscience)各反应孔中加入150μl 3.75μM的底物、20μl 0.00625U/ml的ACE及40μl肽样品。用带2个分液器的Fluostar荧光检测仪(BMG)测定激发波长320nm处和发射波长420nm处的荧光来连续追踪ACE活性。作为标准使用的卡托普利(终浓度为1nM)抑制30％的ACE活性。
结果和讨论
水解样品的高分辨筛选-质谱(HRS-MS)分析
结果显示，BiozateTM所含的ACE抑制效果的重要肽有IIAEK(β-乳球蛋白第71-75位氨基酸)、IPAVF和IPAVFK(β-乳球蛋白第78-73位氨基酸)，其浓度分别为18.2、4.1和2.31mg/g。测得的IIAEK、IPAVF和IPAVFK的IC50(50％抑制浓度)分别是20、300和120μM。
众所周知，奶蛋白和奶蛋白水解物中含有大量的具有ACE抑制活性的肽前体。被食入后，这些蛋白在人胃肠道经过各种消化酶解过程，在体内释放出具有ACE抑制活性的肽。为了评价被食入后这些已鉴别肽的降解以及新的活性肽的形成，在人造的典型人体胃肠道的条件下对BiozateTM进行研究。按一定时间点从该胃肠道模型系统采样。样品用在线HPLC生物检测-质谱系统(HPLC-Bioassay-MS)或高分辨筛选-质谱系统(HRS-MS)进行分析(表1)。结果显示，IIAEK是一个非常重要的肽，因为它对胃肠道消化有很强的抗性，因此是非常有潜力的降血压的肽。IPAVF和IPAVFK是活性肽IPA的重要前体。IPA的IC50为50μM。从文献得知，IPA在患原发性高血压的大鼠体内有抗高血压作用(Abubadar等，1998)
表1.实施例1结果。BiozateTM经人工胃肠道系统消化后得到的IIAEK、IPAVF、IPAVFK和IPA浓度(mg/L)
  肽   起始溶液                       时间(分)
  0   0   65   75   90   120   150   180
  IIAEKIPAVFIPAVFKIPA   10123130   9924260   10730320   106639   102009   68009   79009   630014   240017
参考文献：
Araujo，M.C.，Melo，R.L.，Cesari，M.H.，Juliano，M.A.，Juliano，L.，Carmona，A.K.(2000)Peptidase specificity characterization of C- and N-terminalCatalytic sites of Angiotensin I-converting enzyme.Biochemistry39：8519-8525

Claims (9)

1.5肽IIAEK、5肽IPAVF和/或6肽IPAVFK及其盐在制备血管紧张素转化酶抑制剂上的用途。
2.权利要求1的用途，其中所述血管紧张素转化酶抑制剂是功能性食品。
3.权利要求1或2的用途，其中所述肽是IPAVFK，并用于制备抗菌产品。
4.权利要求1-3中任一项的用途，其中所述肽是IIAEK，并用于制备高胆固醇产品。
5.适于抑制血管紧张素转化酶的食品，所述食品包含25mg/g或更多量的IIAEK，和/或5mg/g或更多量的5肽IPAVF，和/或3mg/g或更多量的6肽IPAVFK。
6.权利要求5的食品，其中IIAEK的量为50mg/g或更多，和/或5肽IPAVF的量为10mg/g或更多，和/或6肽IPAVFK的量为6mg/g或更多。
7.权利要求5或6的食品的制备方法，所述方法涉及下述步骤：
a)含有β-乳球蛋白的乳清蛋白底物经酶水解形成乳清蛋白水解产物；
b)从乳清蛋白水解产物分离出富含5肽IIAEK、5肽IPAVF和/或6肽IPAVFK的组分；
c)将从b)步骤获得的组分进行干燥，得到富含5肽IIAEK、5肽IPAVF和/或6肽IPAVFK的固体；
d)将c)步骤中制备的固体用作食品制备中的成份。
8.权利要求7的方法，其中用于酶解的酶是胰蛋白酶。
9.权利要求8的方法，其中用于酶解的酶是胰蛋白酶和糜蛋白酶的混合物。
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Cited By (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101618207B (zh) * 2009-06-17 2011-08-03 中国科学院大连化学物理研究所 多肽在制备ace抑制剂及降血压药物中的应用
CN101696233B (zh) * 2009-10-29 2012-02-01 吉林大学 蛋清蛋白血管紧张素转化酶抑制肽及其制备
CN102399262A (zh) * 2010-09-07 2012-04-04 任发政 具有血管紧张素转化酶抑制活性的三肽及其应用和组合物
CN102475884A (zh) * 2010-11-29 2012-05-30 中国科学院大连化学物理研究所 四个多肽在制备ace抑制剂及降血压药物中的应用
CN104558109A (zh) * 2013-10-21 2015-04-29 中国科学院大连化学物理研究所 源于油菜花粉的具有ace抑制活性的多肽化合物及应用
CN113321719A (zh) * 2021-05-20 2021-08-31 澳优乳业（中国）有限公司 一种寡肽及其制备方法与应用

Families Citing this family (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
AU2006239562B2 (en) * 2005-04-28 2010-12-23 Unilever Plc Compositions comprising tripeptides inhibiting ace
US8017168B2 (en) 2006-11-02 2011-09-13 The Coca-Cola Company High-potency sweetener composition with rubisco protein, rubiscolin, rubiscolin derivatives, ace inhibitory peptides, and combinations thereof, and compositions sweetened therewith
ES2394988B2 (es) * 2011-06-15 2013-06-06 Queizúar, S.L. Procedimiento optimizado para la obtención de péptidos inhibidores de la actividad de la eca a partir de suero lácteo, péptidos inhibidores de la eca y alimento que los comprende.
WO2016172479A1 (en) * 2015-04-22 2016-10-27 Cedars-Sinai Medical Center Enterically delivered bitter oligopeptides for the treatment for type 2 diabetes
JP7291917B2 (ja) * 2020-03-13 2023-06-16 フォーデイズ株式会社 トリペプチドｒｐｒを含有する抗肥満薬並びに健康食品

Family Cites Families (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP4205227B2 (ja) * 1999-01-11 2009-01-07 カルピス株式会社 ペプチド含有液の精製方法
WO2001085984A1 (en) * 2000-05-08 2001-11-15 Davisco Foods International, Inc. Enzymatic treatment of whey proteins for the production of antihypertensive peptides, the resulting products and treatment of hypertension in mammals

Cited By (11)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101618207B (zh) * 2009-06-17 2011-08-03 中国科学院大连化学物理研究所 多肽在制备ace抑制剂及降血压药物中的应用
CN101696233B (zh) * 2009-10-29 2012-02-01 吉林大学 蛋清蛋白血管紧张素转化酶抑制肽及其制备
CN102399262A (zh) * 2010-09-07 2012-04-04 任发政 具有血管紧张素转化酶抑制活性的三肽及其应用和组合物
CN102399262B (zh) * 2010-09-07 2013-09-18 任发政 具有血管紧张素转化酶抑制活性的三肽及其应用和组合物
CN102475884A (zh) * 2010-11-29 2012-05-30 中国科学院大连化学物理研究所 四个多肽在制备ace抑制剂及降血压药物中的应用
CN102475884B (zh) * 2010-11-29 2013-08-14 中国科学院大连化学物理研究所 四个多肽在制备ace抑制剂及降血压药物中的应用
CN104558109A (zh) * 2013-10-21 2015-04-29 中国科学院大连化学物理研究所 源于油菜花粉的具有ace抑制活性的多肽化合物及应用
CN104558109B (zh) * 2013-10-21 2018-06-08 中国科学院大连化学物理研究所 源于油菜花粉的具有ace抑制活性的多肽化合物及应用
CN113321719A (zh) * 2021-05-20 2021-08-31 澳优乳业（中国）有限公司 一种寡肽及其制备方法与应用
CN113321719B (zh) * 2021-05-20 2022-03-18 澳优乳业（中国）有限公司 一种寡肽及其制备方法与应用
WO2022242339A1 (zh) * 2021-05-20 2022-11-24 澳优乳业（中国）有限公司 一种寡肽及其制备方法与应用

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