CN1780835B - 新型稠合杂环及其应用 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及新的具有下式(I)的化合物及其药物组合物和使用方法。这些新化合物可用于治疗或预防癌症。
其中R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8和R9如本发明说明书中定义。
Description
发明领域
本发明涉及新型稠合杂环、其药物组合物和使用方法。另外，本发明涉及用于治疗和预防癌症的治疗方法。
发明背景
目前，在临床上广泛使用的一类抗癌药(紫杉烷类，长春花属生物碱)是作用于微管并且通过干扰有丝分裂纺锤体的正常装配或解装配而阻断细胞分裂周期(参见Chabner，B.A.，Ryan，D.P.，Paz-Ares，1.，Garcia-Carbonero，R.和Calabresi，P：Antineoplastic agents(抗肿瘤药)。Hardman，J.G.，Limbird，L.E.和Gilman，A.G.编著.Goodman andGilman’s The Pharmacological Basis ofTherapeutics，第10版，2001，TheMacGraw-Hill Companies，Inc)。(紫杉醇)，是该类药物中最有效的药物之一，是一种微管稳定剂。它干扰微管的正常生长和皱缩，因而阻断处于有丝分裂中期的细胞。有丝分裂阻断常常会紧接着进入到下一个细胞周期而没有进行适当的分裂，最终导致这些非正常细胞的凋亡(Blagosklonny，M.V.和Fojo，T.：Molecular effects ofpaclitaxel：myths and reality(a critical review)(紫杉醇的分子效应：理想与现实(重要的综述)).Int J Cancer 1999，83：151-156)。
用紫杉醇治疗的一些副作用有中性白细胞减少症和周围神经病。已知紫杉醇会引起间期细胞中微管的异常成束。另外，一些肿瘤类型用紫杉醇治疗是无效的，而另一些肿瘤在治疗期间变得不敏感。紫杉醇也是多药抗性泵P-糖蛋白的底物(参见Chabner等，2001)。
因此，需要比抗微管药的特异性更高而副作用更低的有效抗有丝分裂药，也需要对紫杉烷抗性肿瘤有效的药物。
驱动蛋白是分子发动蛋白的一个大家族，其利用ATP水解能量以分级方式沿微管运动。有关综述参见Sablin，E.P.：Kinesins andmicrotubuless ：their stuctures and motor mechanisms(驱动蛋白与微管：其结构和发动机制).Curr Opin Cell Biol 2000，12：35-41；Schief，W.R.和Howard，J.：Conformational changes during kinesin motility(驱动蛋白发动期间的构象变化).Curr Opin Cell Biol 2001，13：19-28。
该家族的一些成员将分子货物沿微管运输到细胞中需要它们的位点。例如，一些驱动蛋白结合囊泡并将其在轴突中沿微管长距离运输。几个家族成员是有丝分裂驱动蛋白，因为它们在建立两极有丝分裂纺锤体的微管的重构中起作用。微管的负端起始于中心体或纺锤极，而正端结合每条染色体着丝粒区的着丝粒。因此，有丝分裂纺锤体在染色体的有丝分裂中期呈线性排列，并且经协调运动而分开，在后期和末期分裂成为子细胞(胞质分裂)。参见Alberts，B.，Bray，D.，Lewis，J.，Raff，M.，Roberts，K.和Watson，J.D.，Molecular Biology ofthe Cell，第3版，第18章，The Mechanics of Cell Division，1994，Garland Publishing，Inc.New York。
HsEg5(检索号X85137；参见Blangy，A.，Lane H.A.，d’Heron，P.，Harper，M.，Kress，M.和Nigg，E.A.：Phosphorylation by p34cdc2regulates spindle association of human Eg5，a kinesin-related motoressential for bipolar spindle formation in vivo(p34cdc2的磷酸化调节人Eg5纺锤体联会，人Eg5是一种体内两极纺锤体形成所必需的驱动蛋白相关发动蛋白).Cell 1995，83(7)：1159-1169)，或者，KSP，是一种有丝分裂驱动蛋白，已经表明其在许多生物体中的同源性是有丝分裂前期中的中心体分离所必需的，也是两极有丝分裂纺锤体装配所必需的。有关综述参见Kashina，A.S.，Rogers，G.C.和Scholey，J.M.：ThebimC family of kinesins：essential bipolar mitotic motors drivingcentrosome separation(驱动蛋白的bimC家族：驱动中心体分离所必需的两极有丝分裂发动蛋白).Biochem Biophys Acta 1997，1357：257-271。Eg5构成四级发动，被认为是使微管交联并参与其成束(Walczak，C.E.，Vernos，I.，Mitchison，T.J.，Karsenti，E.和Heald，R.：A model forthe proposed roles of different microtubule-based motor proteins inestablishing spindle bipolarity(一种不同的基于微管的发动蛋白在建立纺锤体双极性中的假定作用模型).Curr Biol 1998，8：903-913)。一些报道已经表明，对Eg5功能的抑制导致中期阻断，中期中细胞表现出单星纺锤体。最近，在基于细胞筛选有丝分裂阻断剂期间分离出称为单星素的Eg5抑制剂(Mayer，T.U.，Kapoor，T.M.，Haggarty，S.J.，King，R.w.，Schreiber，S.L.和Mitchison，T.J.：Small molecule inhibitor ofmitotic spindle bipolarity identified in a phenotype-based screen(在基于表型的筛选中鉴定出的有丝分裂纺锤体双极性的小分子抑制剂).Science 1999，286：971-974)。
已表明单星素治疗对于Eg5比驱动蛋白重链即另一种具不同功能的密切相关的发动蛋白更具特异性(Mayer等，1999)。单星素阻断ADP从Eg5发动蛋白的释放(Maliga，Z.，Kapoor，T.M.和Mitchison，T.J.：Evidence that monastrol is an allosteric inhibitor of the mitotic kinesinEg5(有证据表明单星素是一种有丝分裂驱动蛋白Eg5的变构抑制剂).Chem&Biol 2002，9：989-996；DeBonis，S.，Simorre，J.-P.，Crevel，I.，Lebeau，L，Skoufias，D.A.，Blangy，A.，Ebel，C.，Gans，P.，Cross，R.，Hackney，D.D.，Wade，R.H.和Kozielski，F.：Interaction of the mitoticinhibitor monastrol with human kinesin Eg5(有丝分裂抑制剂单星素与人驱动蛋白Eg5的相互作用).Biochemistry 2003，42：338-349)，这是在驱动蛋白发动蛋白的催化周期中重要的一步(有关综述参见Sablin，2000；Schief和Howard，2001)。也表明用单星素治疗是可逆的并且激活有丝分裂纺锤体关卡，该关卡使细胞分裂周期的进程停止直到所有DNA均处于发生适当分裂的位置(Kapoor，T.M.，Mayer，T.U.，Coughlin，M.L.和Mitchison，T.J.：Probing spindle assembly mechanismswith monastrol，a small molecule inhibitor of the mitotic kinesin，Eg5(用单星素即有丝分裂驱动蛋白Eg5的小分子抑制剂探索纺锤体装配机制).J Cell Biol 2000，150(5)：975-988)。最近的报道也表明，Eg5抑制剂导致经处理的细胞凋亡并且对于一些肿瘤细胞系和肿瘤模型是有效的(Mayer等，1999)。
虽然Eg5被认为是所有细胞中有丝分裂所必需的，但是有一个报道指出Eg5在肿瘤细胞中是过量表达的(国际专利申请WO01/31335)，提示它们对于其抑制可能是特别敏感的。Eg5在间期细胞微管上不存在，并且通过在有丝分裂早期点磷酸化而靶向微管(Blangy等，1995)。另见Sawin，K.E.和Mitchison，T.J.：Mutations in theKinesin-like protein Eg5d isrupting localization to the mitotic spindle(驱动蛋白样蛋白Eg5中的突变破坏有丝分裂纺锤体的定位).Proc NatlAcadSci USA 1995，92(10)：4289-4293，因此，单星素在间期细胞中对微管阵列没有可检测的效应(Mayer等，1999)。另一报道表明，Eg5参与小鼠神经元的发育，但它在分娩后不久从神经元消失，因此，Eg5抑制不会产生与紫杉醇和其它抗微管药物治疗相关的周围神经病(Ferhat，L.，Expression of the mitotic motor protein Eg5 in postmitoticneurons：implications for neuronal development(有丝分裂发动蛋白Eg5在有丝分裂后神经元中的表达：神经元发育的暗示).J Neurosci 1998，18(19)：7822-7835)。在此我们描述了对一类特异性有效的Eg5抑制剂的分离，预期该Eg5抑制剂可用于治疗瘤性疾病。
发明概述
按照本发明，申请人因此发现了具有细胞-周期抑制活性的新化合物，因此，本发明的新化合物因其抗细胞增殖活性(例如抗癌)而具有价值，因此其可用于人或动物受治疗者中具有细胞-增殖活性的疾病的治疗方法。除了新化合物之外，本发明也包括含有所述化合物的药物组合物及所述化合物在制备人或动物受治疗者中具有抗细胞增殖效应的药物中的用途。本发明也涉及所述化合物的制备方法。
本发明包括所述化合物的药物可接受的盐或前体药物。按照本发明，申请人也提供含有所述化合物的药物组合物及使用所述化合物治疗癌症的方法。
预期这些特性对于治疗诸如以下的细胞周期和细胞增殖相关疾病有效：癌症(实体瘤和白血病)、纤维增殖性和分化性疾病、银屑病、类风湿病性关节炎、卡波西肉瘤(Kaposi’s sarcoma)、血管瘤、急性和慢性肾病、粉瘤、动脉粥样硬化、动脉再狭窄、自身免疫病、急性和慢性炎症、骨病和视网膜血管增殖性眼病。
发明详述
在第一个实施方案中，本发明提供一种具有以下结构式(I)的新化合物：
其中，
A为C＝O、CH2或SO2；
B代表任选取代的烷基、任选取代的烯基、任选取代的炔基、任选取代的芳基、任选取代的环烷基或任选取代的杂环基；
D为O或N，其中O任选被一个R8取代，其中N任选被一个或多个R8取代，当n为0而m不为0时，R8直接连接到B；
R1和R2结合在一起形成稠合的5元杂芳环，该杂芳环任选被1个或2个取代基取代，所述环具有至少一个氮原子、氧原子或硫原子，但不超过2个氧原子或2个硫原子或1个氧原子和1个硫原子；
R3独立选自H、任选取代的烷基、任选取代的烯基、任选取代的炔基、任选取代的环烷基、任选取代的环烯基、任选取代的环炔基、任选取代的芳基或任选取代的杂环基；
R4和R5独立选自H或任选取代的烷基，或者R4和R5结合在一起形成3、4、5或6元环，所述环也可以是任选取代的；
R6和R7独立选自H、任选取代的烷基、任选取代的烯基、任选取代的炔基、任选取代的环烷基、任选取代的环烯基、任选取代的环炔基、任选取代的杂环基、任选取代的芳基，或者R6和R7结合在一起形成3、4、5或6元环，所述环也可以是取代的；
R8独立选自H、任选取代的烷基、任选取代的烯基、任选取代的炔基、任选取代的环烷基、任选取代的环烯基、任选取代的环炔基、任选取代的芳基或任选取代的杂环基；
R9独立选自H、任选取代的烷基、任选取代的烯基、任选取代的炔基、任选取代的环烷基、任选取代的环烯基、任选取代的环炔基、任选取代的芳基或任选取代的杂环基。
在一个具体的实施方案中，本发明提供具有上述结构式(I)的化合物，其中A为C＝O或CH2。
在一个具体的实施方案中，本发明提供具有上述结构式(I)的化合物，其中A为C＝O。
在一个具体的实施方案中，本发明提供具有上述结构式(I)的化合物，其中B为任选取代的烷基或任选取代的杂环基。
在一个具体的实施方案中，本发明提供具有上述结构式(I)的化合物，其中B为任选取代的C1-4烷基。
在一个具体的实施方案中，本发明提供具有上述结构式(I)的化合物，其中B为任选取代的C1-4烷基，其中这样的取代基独立选自-NH2、-OH、-NCH3、-N(CH3)2、-N-环丙烷、-N-环丁烷、氮杂环丁烷、吡咯烷或哌啶。
在一个具体的实施方案中，本发明提供具有上述结构式(I)的化合物，其中D为任选被一个或多个R8取代的O。
在一个具体的实施方案中，本发明提供具有上述结构式(I)的化合物，其中D为任选被一个或多个R8取代的N。
在一个具体的实施方案中，本发明提供具有上述结构式(I)的化合物，其中R1和R2结合在一起形成稠合的5元杂芳环，该杂芳环任选被1个或2个取代基取代，所述环具有一个氮原子和一个硫原子或者具有一个氮原子和一个氧原子。
在一个具体的实施方案中，本发明提供具有上述结构式(I)的化合物，其中R1和R2结合在一起形成任选取代的稠合异噻唑或任选取代的稠合异噁唑。
在一个具体的实施方案中，本发明提供具有上述结构式(I)的化合物，其中R1和R2结合在一起形成稠合的5元杂芳环，该杂芳环任选被1个或2个取代基取代，所述环具有一个氮原子和一个硫原子或者具有一个氮原子和一个氧原子，其中所述取代基选自C1-6烷基或卤素。
在一个具体的实施方案中，本发明提供具有上述结构式(I)的化合物，其中R3为任选取代的芳基。
在一个具体的实施方案中，本发明提供具有上述结构式(I)的化合物，其中R3为任选取代的C5-7芳基。
在一个具体的实施方案中，本发明提供具有上述结构式(I)的化合物，其中R3为任选取代的C5-7芳基，其中所述取代基独立选自C1- 6烷基、F、Cl、Br或I。
在一个具体的实施方案中，本发明提供具有上述结构式(I)的化合物，其中R4和R5为H。
在一个具体的实施方案中，本发明提供具有上述结构式(I)的化合物，其中R6和R7独立选自H或任选取代的烷基。
在一个具体的实施方案中，本发明提供具有上述结构式(I)的化合物，其中R6和R7独立选自H或C1-6烷基。
在一个具体的实施方案中，本发明提供具有上述结构式(I)的化合物，其中R8独立选自H、任选取代的烷基或任选取代的杂环基。
在一个具体的实施方案中，本发明提供具有上述结构式(I)的化合物，其中R9独立选自任选取代的芳基或任选取代的杂环基。
在一个具体的实施方案中，本发明提供具有上述结构式(I)的化合物，其中R9独立选自芳基或杂环基，其中任一个任选被1个或2个取代基取代，其中所述取代基独立选自-C1-6烷基、-OC1-6烷基、F、Cl、Br、I。
在一个具体的实施方案中，本发明提供具有上述结构式(I)的化合物，其中R9为任选被1个或2个取代基取代的C5-7芳基，其中所述取代基独立选自-C1-6烷基、-OC1-6烷基、F、Cl、Br、I。
在一个具体的实施方案中，本发明提供具有上述结构式(I)的化合物，其中：
n为0；
A为CO或CH2；
B为任选取代的C1-6烷基；
R1和R2结合在一起形成稠合的5元杂芳基；
R3为任选取代的C5-7芳基；
R4和R5为H；
R6和R7独立选自H或任选取代的烷基；
R9为任选取代的芳基或任选取代的杂环基。
在一个具体的实施方案中，本发明提供具有上述结构式(I)的化合物，其中：
n为0；
A为CO或CH2；
B为任选被一个以下基团取代的C1-6烷基：-NH2、-OH、-NCH3、-N(CH3)2、-N-环丙烷、-N-环丁烷、氮杂环丁烷、吡咯烷或哌啶；
R1和R2结合在一起形成稠合的5元杂芳环，该杂芳环任选被1个或2个取代基取代，所述环具有一个氮原子和一个硫原子或者具有一个氮原子和一个氧原子；
R3为任选取代的苯基；
R4和R5为H；
R6和R7独立选自H或任选取代的-C1-6烷基；
R9为任选取代的芳基。
在一个具体的实施方案中，本发明提供具有上述结构式(I)的化合物，其中：
n为0；
A为CO；
B为任选被一个以下基团取代的C1-6烷基：-NH2、-OH、-NCH3、-N(CH3)2、-N-环丙烷、-N-环丁烷、氮杂环丁烷、吡咯烷或哌啶。
R1和R2结合在一起形成稠合的5元杂芳环，该杂芳环任选被1个或2个取代基取代，所述环具有一个氮原子和一个硫原子或者具有一个氮原子和一个氧原子，其中所述取代基选自C1-6烷基或卤素；
R3为任选取代的C5-7芳基，其中所述取代基独立选自C1-6烷基、F、Cl、Br或I；
R4和R5为H；
R6和R7独立选自H或-C1-6烷基；
R9为任选被1个或2个取代基取代的C5-7芳基，其中所述取代基独立选自-C1-6烷基、-OC1-6烷基、F、Cl、Br、I。
在一个具体的实施方案中，本发明提供具有上述结构式(I)的化合物，其中：
n为1；
A为CO或CH2；
B为任选取代的C1-6烷基；
D为N或O；
R1和R2结合在一起形成稠合的5元杂芳基；
R3为任选取代的芳基；
R4和R5为H；
R6和R7为H或任选取代的烷基；
R8为H或任选取代的C1-6烷基；
R9为任选取代的芳基。
在一个具体的实施方案中，本发明提供具有上述结构式(I)的化合物，其中：
n为1；
A为CO或CH2；
B为任选取代的C1-6烷基；
D为N或O；
R1和R2结合在一起形成稠合的异噻唑、异噁唑；
R3为任选取代的苯基；
R4和R5为H；
R6和R7为H或任选取代的烷基；
R8为H或任选取代的C1-6烷基；
R9为任选取代的苯基。
在一个具体的实施方案中，本发明提供具有结构式(I)的化合物，所述化合物选自：
1)N-(3-氨基-丙基)-N-{1-[5-(4-氟-苄基)-3-甲基-4-氧代-4，5-二氢-异噻唑并[5，4-d]嘧啶-6-基]-丙基}-4-甲基-苯甲酰胺；
2)N-(3-氨基-丙基)-N-[1-(5-苄基-3-甲基-4-氧代-4，5-二氢-异噻唑并[5，4-d]嘧啶-6-基)-丙基]-4-溴-苯甲酰胺；
3)N-(3-氨基-丙基)-N-[1-(5-苄基-3-甲基-4-氧代-4，5-二氢-异噻唑并[5，4-d]嘧啶-6-基)-丙基]-4-氯-苯甲酰胺；
4)N-(3-氨基-丙基)-N-[1-(5-苄基-3-甲基-4-氧代-4，5-二氢-异噻唑并[5，4-d]嘧啶-6-基)-丙基]-3-氟-4-甲基-苯甲酰胺；
5)N-(3-氨基-丙基)-N-[1-(5-苄基-3-甲基-4-氧代-4，5-二氢-异噻唑并[5，4-d]嘧啶-6-基)-丙基]-2，3-二氯-苯甲酰胺；
6)萘-2-甲酸(3-氨基-丙基)-[1-(5-苄基-3-甲基-4-氧代-4，5-二氢-异噻唑并[5，4-d]嘧啶-6-基)-丙基]-酰胺；
7)苯并[b]噻吩-2-甲酸(3-氨基-丙基)-[1-(5-苄基-3-甲基-4-氧代-4，5-二氢-异噻唑并[5，4-d]嘧啶-6-基)-丙基]-酰胺；
8)N-氮杂环丁烷-3-基甲基-N-[1-(5-苄基-3-甲基-4-氧代-4，5-二氢-异噻唑并[5，4-d]嘧啶-6-基)-丙基]-4-甲基-苯甲酰胺；
9)N-[1-(5-苄基-3-甲基-4-氧代-4，5-二氢-异噻唑并[5，4-d]嘧啶-6-基)-丙基]-4-甲基-N-哌啶-3-基甲基-苯甲酰胺；
10)N-(2-氨基-乙基)-N-[1-(5-苄基-3-甲基-4-氧代-4，5-二氢-异噻唑并[5，4-d]嘧啶-6-基)-丙基]-4-甲基-苯甲酰胺；
11)N-[1-(5-苄基-3-甲基-4-氧代-4，5-二氢-异噻唑并[5，4-d]嘧啶-6-基)-丙基]-N-(2-二甲氨基-乙基)-4-甲基-苯甲酰胺；
12)N-[1-(5-苄基-3-甲基-4-氧代-4，5-二氢-异噻唑并[5，4-d]嘧啶-6-基)-丙基]-N-(3-二甲氨基-丙基)-4-甲基-苯甲酰胺；
13)N-[1-(5-苄基-3-甲基-4-氧代-4，5-二氢-异噻唑并[5，4-d]嘧啶-6-基)丙基]-N-[3-(异丙基氨基)丙基]-4-甲基苯甲酰胺；
14)N-[1-(5-苄基-3-甲基-4-氧代-4，5-二氢-异噻唑并[5，4-d]嘧啶-6-基)丙基]-N-[3-(环丙基氨基)丙基]-4-甲基苯甲酰胺；
15)N-(3-氮杂环丁烷-1-基丙基)-N-[1-(5-苄基-3-甲基-4-氧代-4，5-二氢-异噻唑并[5，4-d]嘧啶-6-基)丙基]-4-甲基苯甲酰胺；
16)N-[1-(5-苄基-3-甲基-4-氧代-4，5-二氢-异噻唑并[5，4-d]嘧啶-6-基)丙基]-4-甲基-N-[3-(3-吡咯烷-1-基丙基)苯甲酰胺；
17)N-[1-(5-苄基-3-甲基-4-氧代-4，5-二氢-异噻唑并[5，4-d]嘧啶-6-基)丙基]-4-甲基-N-[3-(甲基氨基)丙基]苯甲酰胺；
18)N-[1-(5-苄基-3-甲基-4-氧代-4，5-二氢-异噻唑并[5，4-d]嘧啶-6-基)-丙基]-N-(3-羟基-丙基)-4-甲基-苯甲酰胺；
19)N-(3-氨基-丙基)-N-[1-(5-苄基-3-甲基-4-氧代-4，5-二氢-异噻唑并[5，4-d]嘧啶-6-基)-丙基]-4-甲基-苯甲酰胺；
20)N-(3-氨基-丙基)-N-[1-(5-苄基-3-甲基-4-氧代-4，5-二氢-异噻唑并[5，4-d]嘧啶-6-基)-2-甲基-丙基]-4-甲基-苯甲酰胺；
21)N-(3-氨基-丙基)-N-{1-[5-(4-氟-苄基)-3-甲基-4-氧代-4，5-二氢-异噻唑并[5，4-d]嘧啶-6-基]-2-甲基-丙基}-4-甲基-苯甲酰胺；
22)5-苄基-6-{1-[(3-羟基-丙基)-(4-甲基-苄基)-氨基]-丙基}-3-甲基-5H-异噻唑并[5，4-d]嘧啶-4-酮；
23)N-(3-氨基-丙基)-N-{1-[5-(4-氟-苄基)-3-甲基-4-氧代-4，5-二氢-异噁唑并[5，4-d]嘧啶-6-基]-2-甲基-丙基}-4-甲基-苯甲酰胺；
24)N-(3-氨基-丙基)-3-氟-N-{1-[5-(4-氟-苄基)-3-甲基-4-氧代-4，5-二氢-异噁唑并[5，4-d]嘧啶-6-基]-2-甲基-丙基}-4-甲基-苯甲酰胺；
25)N-(3-氨基-丙基)-N-[1-(5-苄基-3-甲基-4-氧代-4，5-二氢-异噁唑并[5，4-d]嘧啶-6-基)-2-甲基-丙基]-3-氟-4-甲基-苯甲酰胺；
26)N-(3-氨基-丙基)-N-[1-(5-苄基-3-甲基-4-氧代-4，5-二氢-异噁唑并[5，4-d]嘧啶-6-基)-2-甲基-丙基]-4-甲基-苯甲酰胺；
27)N-(3-氨基-丙基)-N-[1-(5-苄基-3-甲基-4-氧代-4，5-二氢-异噁唑并[5，4-d]嘧啶-6-基)-丙基]-4-甲基-苯甲酰胺；
28)N-(3-氨基-丙基)-N-[1-(5-苄基-3-甲基-4-氧代-4，5-二氢-异噁唑并[5，4-d]嘧啶-6-基)-丙基]-4-氟-苯甲酰胺；
29)N-(3-氨基-丙基)-N-[1-(5-苄基-3-甲基-4-氧代-4，5-二氢-异噁唑并[5，4-d]嘧啶-6-基)-丙基]-2，3-二氯-苯甲酰胺；
30)N-(3-氨基-丙基)-N-[1-(5-苄基-3-甲基-4-氧代-4，5-二氢-异噁唑并[5，4-d]嘧啶-6-基)-丙基]-3-氟-4-甲基-苯甲酰胺；
31)N-(3-氨基-丙基)-N-[1-(5-苄基-3-甲基-4-氧代-4，5-二氢-异噁唑并[5，4-d]嘧啶-6-基)-丙基]-4-甲氧基-苯甲酰胺。
在一个具体的实施方案中，本发明提供权利要求1-27中任一项的化合物，所述化合物用作药物。
在一个具体的实施方案中，本发明提供权利要求1-27中任一项限定的化合物在制备用于治疗或预防癌相关疾病的药物中的用途。
在一个具体的实施方案中，本发明提供一种用于治疗癌症的方法，所述方法包括给予需要这种治疗的宿主治疗有效量的权利要求1-27中任一项限定的化合物。
在一个具体的实施方案中，本发明提供一种用于预防性治疗癌症的方法，所述方法包括给予需要这种治疗的宿主治疗有效量的权利要求1-27中任一项限定的化合物。
在一个具体的实施方案中，本发明提供一种用于治疗或预防癌症的方法，所述方法包括给予治疗有效量的权利要求1-27中任一项限定的化合物或权利要求1-27中任一项要求保护的药物可接受的盐。
在一个具体的实施方案中，本发明提供一种在需要这种治疗的温血动物(例如人)体内产生细胞周期抑制(抗细胞增殖)效应的方法，所述治疗方法包括给予所述动物有效量的权利要求1-27中任一项要求保护的化合物。
在一个具体的实施方案中，本发明提供一种药物组合物，所述组合物包含权利要求1-27中任一项限定的化合物或其药物可接受的盐或体内可水解酯以及至少一种药物可接受的载体、稀释剂或赋形剂。
在一个具体的实施方案中，本发明提供一种制备权利要求1要求保护的结构式(I)化合物或其药物可接受的盐或体内可水解酯的方法，所述方法包括：
定义
本小节中所给出的定义用来阐明本申请中所用的术语。术语“本文”是指整个申请。
除非本说明书中另有说明，否则本说明书中所使用的命名法总的来讲按照下述文献给出的实例和原则：Nomenclature of OrganicChemistry，第A、B、C、D、E、F和H节，Pergamon Press，Oxford，1979，所述文献的示例性化学结构名称及其对化学结构的命名原则通过引用结合到本文中。
单独使用或者作为前缀使用的术语“Cm-n”或“Cm-n基团”，是指具有m-n个碳原子的任何基团。例如，C1-6是指1、2、3、4、5或6个碳原子。
单独使用或者作为后缀或前缀使用的术语“烃”，是指仅包含碳原子和氢原子且至多14个碳原子的任何结构。
单独使用或者作为后缀或前缀使用的术语“烃基”，是指因除去烃中的一个或多个氢而获得的任何结构。
单独使用或者作为后缀或前缀使用的术语“烷基”，是指包含1个至约12个碳原子的单价直链或支链烃基。除非另有说明，“烷基”一般既包括饱和烷基又包括不饱和烷基。
单独使用或者作为后缀或前缀使用的术语“亚烷基”，是指包含1个至约12碳原子的二价直链或支链烃基，其用来将两个结构连接在一起。
单独使用或者作为后缀或前缀使用的术语“烯基”，是指具有至少一个碳-碳双键并且包含至少2个到至多约12个碳原子的单价直链或支链烃基。
单独使用或者作为后缀或前缀使用的术语“炔基”，是指具有至少一个碳-碳三键并且包含至少2个到至多约12个碳原子的单价直链或支链烃基。
单独使用或者作为后缀或前缀使用的术语“环烷基”，是指包含至少3个到至多约12个碳原子的单价含环烃基。
单独使用或者作为后缀或前缀使用的术语“环烯基”，是指具有至少一个碳-碳双键并且包含至少3到至多约12碳原子的单价含环烃基。
单独使用或者作为后缀或前缀使用的术语“环炔基”，是指具有至少一个碳-碳三键并且包含约7个至约12碳原子的单价含环烃基。
单独使用或者作为后缀或前缀使用的术语“芳基”，是指具有一个或多个多不饱和碳环、具备芳族特征(例如4n+2离域电子)并且包含5个至约14碳原子的烃基，其中所述基团位于芳环的碳上。
单独使用或者作为后缀或前缀使用的术语“非芳族基团”或“非芳族基”，是指不含有具备芳族特征(例如4n+2离域电子)的环的化学基团或化学基。
单独使用或者作为后缀或前缀使用的术语“亚芳基”，是指具有一个或多个多不饱和碳环、具备芳族特征(例如4n+2离域电子)并且包含5个至约14个碳原子的二价烃基，其用来将两个结构连接在一起。
单独使用或者作为后缀或前缀使用的术语“杂环”，是指具有一个或多个多价杂原子的含环结构或分子，其中所述杂原子独立选自N、O、P和S并且作为环结构的组成部分，环中包括至少3个到至多约20原子。杂环可以是饱和或不饱和的，含有一个或多个双键，杂环可以含有不止一个环。当杂环含有不止一个环时，环可以是稠合或非稠合的。稠合环一般是指两个环彼此之间共用两个原子。杂环可以具备芳族特征，或者可以不具备芳族特征。
单独使用或者作为后缀或前缀使用的术语“杂烷基”，是指烷基的一个或多个碳原子被一个或多个选自N、O、P和S的杂原子置换而形成的基团。
单独使用或者作为后缀或前缀使用的术语“杂芳族”，是指具有一个或多个多价独立选自N、O、P和S的杂原子(作为环结构的组成部分)的并且环中包括至少到3个至多约20个原子的含环结构或分子，其中含有环的结构或分子具备芳族特征(例如4n+2离域电子)。
单独使用或者作为后缀或前缀使用的术语“杂环基团”、“杂环部分”或“杂环基”，是指除去杂环中的一个或多个氢而得到的基团。
单独使用或者作为后缀或前缀使用的术语“杂环基”，是指除去杂环的环碳上的一个氢而得到的基团。
单独使用或者作为后缀或前缀使用的术语“杂亚环基”，是指除去杂环中的两个氢而得到的二价基团，其用来将两个结构连接在一起。
单独使用或者作为后缀或前缀使用的术语“杂芳基”，是指具备芳族特征的杂环，其中杂环的基位于杂环中芳环的碳上。
单独使用或者作为后缀或前缀使用的术语“杂环烷基”，是指不具备芳族特征的杂环。
单独使用或者作为后缀或前缀使用的术语“杂亚芳基”，是指具备芳族特征的杂亚环基。
单独使用或者作为后缀或前缀使用的术语“杂亚环烷基”，是指不具备芳族特征的杂亚环基。
作为前缀使用的术语“六元”是指其环含有六个环原子的基团。
作为前缀使用的术语“五元”是指其环含有五个环原子的基团。
五元环杂芳基是环中具有五个环原子且1、2或3个环原子独立选自N、O和S的杂芳基。
示例性的五元环杂芳基是噻吩基、呋喃基、吡咯基、咪唑基、噻唑基、噁唑基、吡唑基、异噻唑基、异噁唑基、1，2，3-三唑基、四唑基、1，2，3-噻二唑基、1，2，3-噁二唑基、1，2，4-三唑基、1，2，4-噻二唑基、1，2，4-噁二唑基、1，3，4-三唑基、1，3，4-噻二唑基和1，3，4-噁二唑基。
六元环杂芳基是环中具有六个环原子且1、2或3个环原子独立选自N、O和S的杂芳基。
示例性的六元环杂芳基是吡啶基、吡嗪基、嘧啶基、三嗪基和哒嗪基。
本申请中使用的术语“任选取代的”，是指取代是任选的，因此，对于未被取代的指定原子或分子而言是可能的。在需要取代的情况下，则这样的取代是指指定原子上任何数目的氢被从指定基团中选择的基团置换，前提条件是不超过指定原子的正常化合价，取代产生稳定的化合物。例如，当取代基是酮基(即＝O)时，则该原子上的二个氢被置换。如果没有提供选择，则取代基应当选自：-OC1-6烷基、-C1-6烷基、F、Cl、Br、I、N、O、S、P、-NH2、-OH、-NCH3、-N(CH3)2、-N-环丙烷、-N-环丁烷、氮杂环丁烷、吡咯烷、哌啶。示例性的含有一个或多个杂原子的化学基团包括杂环基、-NO2、-OR、-CF3、-C(＝O)R、-C(＝O)OH、-SH、-NHR、-NR2、-SR、-SO3H、-SO2R、-S(＝O)R、-CN、-C(＝O)OR、-C(＝O)NR2、-NRC(＝O)R、氧代(＝O)、亚氨基(＝NR)、硫代(＝S)和肟基(＝N-OR)，其中每个“R”为C1-12烃基。例如，取代的苯基可指硝基苯基、吡啶基苯基、甲氧基苯基、氯苯基、氨基苯基等，其中硝基、吡啶基、甲氧基、氯和氨基可以置换苯环上的任何合适的氢。
用作第一结构、分子或基团的后缀后接化学基团的一个或多个名称的术语“取代的”是指第二结构、分子或基团，所述第二结构、分子或基团是用一个或多个所述化学基团置换第一结构、分子或基团的一个或多个氢的结果。例如，“被硝基取代的苯基”是指硝基苯基。
杂环包括例如单环杂环，例如：氮杂环丙烷、环氧乙烷、硫杂环丙烷、氮杂环丁烷、氧杂环丁烷、硫杂环丁烷、吡咯烷、吡咯啉、咪唑烷、吡唑烷、吡唑啉、二氧戊环、环丁砜2，3-二氢呋喃、2，5-二氢呋喃、四氢呋喃、噻吩烷、哌啶、1，2，3，6-四氢-吡啶、哌嗪、吗啉、硫代吗啉、吡喃、噻喃、2，3-二氢吡喃、四氢吡喃、1，4-二氢吡啶、1，4-二噁烷、1，3-二噁烷、二噁烷、高哌啶、2，3，4，7-四氢-1H-氮杂高哌嗪、1，3-二氧杂环庚烷、4，7-二氢-1，3-二氧杂和氧杂环庚烷。
另外，杂环包括芳族杂环，例如，吡啶、吡嗪、嘧啶、哒嗪、噻吩、呋喃、呋咱、吡咯、咪唑、噻唑、噁唑、吡唑、异噻唑、异噁唑、1，2，3-三唑、四唑、1，2，3-噻二唑、1，2，3-噁二唑、1，2，4-三唑、1，2，4-噻二唑、1，2，4-噁二唑、1，3，4-三唑、1，3，4-噻二唑和1，3，4-噁二唑。
另外，杂环包括多环杂环，例如，吲哚、二氢吲哚、异二氢吲哚、喹啉、四氢喹啉、异喹啉、四氢异喹啉、1，4-苯并二噁烷、香豆素、二氢香豆素、苯并呋喃、2，3-二氢苯并呋喃、异苯并呋喃、色烯、色满、异色满、呫吨、苯并氧硫杂环己二烯(phenoxathiin)、噻蒽、吲嗪、异吲哚唑、嘌呤、酞嗪、萘啶、喹喔啉、喹唑啉、噌啉、蝶啶、菲啶、啶(perimidine)、菲咯啉、吩嗪、吩噻嗪、吩噁嗪、1，2-苯并异噁唑、苯并噻吩、苯并噁唑、苯并噻唑、苯并咪唑、苯并三唑、硫黄嘌呤(thioxanthine)、咔唑、咔啉、吖啶、双吡咯烷(pyrolizidine)和喹嗪烷(quinolizidine)。
除上述多环杂环以外，杂环包括多环杂环，其中两个或更多个环之间的环稠合包括不止一个两个环共用的键和不止两个两个环共用的原子。这样的桥连杂环的实例包括奎宁环、二氮杂双环[2.2.1]庚烷和7-氧杂双环[2.2.1]庚烷。
杂环包括例如单环杂环，例如，氮杂环丙烷基、氧杂环丙烷基、硫杂环丙烷基、氮杂环丁烷基、氧杂环丁烷基、硫杂环丁烷基、吡咯烷基、吡咯啉基、咪唑烷基、吡唑烷基、吡唑啉基、二氧戊环基、环丁砜基(sulfolanyl)、2，3-二氢呋喃基、2，5-二氢呋喃基、四氢呋喃基、四氢噻吩基、哌啶基、1，2，3，6-四氢-吡啶、哌嗪基、吗啉基、硫代吗啉基、吡喃基、噻喃基、2，3-二氢吡喃基、四氢吡喃基、1，4-二氢吡啶、1，4-二氧六环基、1，3-二氧六环基、二氧六环基、高哌啶基、2，3，4，7-四氢-1H-氮杂
基、高哌嗪基、1，3-二氧环庚烷基、4，7-二氢-1，3-二氧基和氧杂环庚烷基。
另外，杂环包括芳族杂环或杂芳基，例如，吡啶、吡嗪基、嘧啶基、哒嗪基、噻吩基、呋喃基、呋咱基、吡咯基、咪唑基、噻唑基、噁唑基、吡唑基、异噻唑基、异噁唑基、1，2，3-三唑基、四唑基、1，2，3-噻二唑基、1，2，3-噁二唑基、1，2，4-三唑基、1，2，4-噻二唑基、1，2，4-噁二唑基、1，3，4-三唑基、1，3，4-噻二唑基和1，3，4-噁二唑基。
另外，杂环包括多环杂环(包括芳族或非芳族)，例如、吲哚基、二氢吲哚基、异二氢吲哚基、喹啉基、四氢喹啉基、异喹啉基、四氢异喹啉基、1，4-苯并二氧六环基、香豆素基、二氢香豆素基、苯并呋喃基、2，3-二氢苯并呋喃基、异苯并呋喃基、色烯基、色满基、异色满基、呫吨基、苯并氧硫杂环己二烯基(phenoxathiinyl)、噻蒽基、吲嗪基、异吲哚基、吲唑基、嘌呤基、酞嗪基、萘啶基、喹喔啉基、喹唑啉基、噌啉基、蝶啶基、菲啶基、
啶基、菲咯啉基、吩嗪基、吩噻嗪基、吩噁嗪基、1，2-苯并异噁唑基、苯并噻吩基、苯并噁唑基、苯并噻唑基、苯并咪唑基、苯并三唑基、硫黄嘌呤基(thioxanthinyl)、咔唑基、咔啉基、吖啶基、双吡咯烷基(pyrolizidinyl)和喹嗪烷基(quinolizidinyl)。
除了上述多环杂环之外，杂环包括多环杂环，其中两个或更多个环之间的环稠合包括两个环中不止一个共用的键以及两个环中不止两个共用的原子。这样的桥连杂环的实例包括奎宁环基、二氮杂双环[2.2.1]庚基；和7-氧杂双环[2.2.1]庚基。
单独使用或者作为后缀或前缀使用的术语“烷氧基”，是指通式-O-R的基团，其中-R选自烃基。示例性的烷氧基包括甲氧基、乙氧基、丙氧基、异丙氧基、丁氧基、叔丁氧基、异丁氧基、环丙基甲氧基、烯丙氧基和丙炔氧基。
单独使用或者作为后缀或前缀使用的术语“芳氧基”，是指通式-O-Ar的基团，其中-Ar为芳基。
单独使用或者作为后缀或前缀使用的术语“杂芳氧基”，是指通式-O-Ar′的基团，其中-Ar′为杂芳基。
单独使用或者作为后缀或前缀使用的术语“胺”或“氨基”，是指通式-NRR’的基团，其中R和R’独立选自氢或烃基。
单独使用或者作为后缀或前缀使用的“酰基”，是指-C(＝O)-R，其中-R为任选取代的烃基、氢、氨基或烷氧基。酰基包括例如乙酰基、丙酰基、苯甲酰基、苯基乙酰基、乙酯基和二甲基氨基甲酰基。
卤素包括氟、氯、溴和碘。
用作前缀的“卤代”，是指基团上的一个或多个氢被一个或多个卤素置换。
“RT”或“rt”是指室温。
第一环基团与第二环基团“稠合”是指第一环和第二环两者之间共用至少两个原子。
除非另有说明，“结合”是指共价结合或键合。
当第一基团、结构或原子与第二基团、结构或原子“直接连接”时，第一基团、结构或原子的至少一个原子与第二基团、结构或原子的至少一个原子形成化学键。
“饱和碳”是指结构、分子或基团的碳原子，其中与该碳原子连接的所有的键都是单键。换句话说，与该碳原子连接的键中没有双键或三键，并且该碳原子通常采用sp3原子轨道杂化。
“不饱和碳”是指结构、分子或基团的碳原子，其中与该碳原子连接的至少一个键不是单键。换句话说，与该碳原子连接的键中至少存在一个双键或三键，并且该碳原子通常采用sp或sp2原子轨道杂化。
当任何可变基团(例如R1、R4、Ra、Re等)在化合物的任何组分或结构式中不止出现一次时，其在每次出现时的定义都独立于其在其它各情况下出现时的定义。因此，例如，如果说明基团被0-3个R1基团取代，则所述基团可以任选被0、1、2或3个R1基团取代，Re在每次出现时独立选自Re的定义。另外，取代基和/或可变基团的组合只有当这样的组合能产生稳定的化合物时才被允许。
本发明的各种化合物可以具体的几何异构体或立体异构体形式存在。本发明考虑了所有这样的化合物，包括顺式异构体和反式异构体、R-对映体和S-对映体、非对映体、(D)-异构体、(L)-异构体、其外消旋混合物、以及它们的其它混合物，这些全都包括在本发明的范围之内。另外的不对称碳原子可以存在于烷基等取代基中。所有这些异构体以及它们的混合物都包括在本发明中。本文所述的化合物可以具有不对称中心。含有不对称取代原子的本发明化合物可以旋光或外消旋形式分离出来。本领域众所周知如何制备旋光形式，例如通过外消旋形式的拆分或者通过从旋光原料进行合成。需要时，可以用本领域已知的方法完成外消旋原料的合成。本发明化合物中也可以存在含C＝N双键等烯烃的许多几何异构体，本发明考虑了所有这样稳定的异构体。对本发明化合物的顺式和反式几何异构体作了说明，并且可以将其作为异构体混合物或分离的异构体形式分离出来。除非具体指明专一性立体化学或异构体形式，否则是指结构的所有手性、非对映体、外消旋形式和所有的几何异构体形式。
当说明取代基的化学键交联环中连接两个原子的键时，则这样的取代基可以与环上的任何原子键合。当取代基列出但未指明这样的取代基键合给定式的化合物的其余部分的原子时，则这样的取代基可以通过该取代基中任何原子键合在一起。取代基和/或可变基团的组合只有当这样的组合能产生稳定的化合物时才被允许。
本文所用的“药物可接受的”用于本文时是指，在合理的医疗判断范围内适用于接触人体组织和动物组织而没有过度的毒性、刺激性、变态反应或其它问题或并发症、而且具有合理利益/风险比的那些化合物、物质、组合物和/或剂型。
本文所用的“药物可接受的盐”是指所公开的化合物的衍生物，其中母体化合物经修饰以制成其酸式盐或碱式盐。药物可接受的盐的实例包括但不限于碱性残基例如胺的无机酸或有机酸的盐；酸性残基例如羧酸的碱式盐或有机盐等。所述药物可接受的盐包括所得母体化合物的常规无毒盐或季铵盐，例如从无毒无机酸或有机酸生成的盐。例如，这类常规无毒盐包括从无机酸衍生的盐和从有机酸制备的盐，所述无机酸例如盐酸、氢溴酸、硫酸、氨基磺酸、磷酸、硝酸等，所述有机酸例如乙酸、丙酸、琥珀酸、羟基乙酸、硬脂酸、乳酸、苹果酸、酒石酸、柠檬酸、抗坏血酸、双羟萘酸、马来酸、羟基马来酸、苯乙酸、谷氨酸、苯甲酸、水杨酸、对氨基苯磺酸、2-乙酰氧基苯甲酸、富马酸、甲苯磺酸、甲磺酸、乙磺酸、草酸、羟乙磺酸等。
可以通过常规化学方法，由含有碱性或酸性部分的母体化合物合成本发明的药物可接受的盐。一般而言，这样的盐可以通过使这些化合物的游离酸或碱形式与化学计量的水或有机溶剂或者水和有机溶剂的混合物中的适当碱或酸反应来制备；一般优选非水性介质如乙醚、乙酸乙酯、乙醇、异丙醇或乙腈。合适盐的一览表见Remington′s Pharmaceutical Sciences，第17版，Mack PublishingCompany，Easton，Pa，1985，第1418页，该参考文献公开的内容通过引用结合到本文中。
“前体药物”意指包括当将所述前体药物给予哺乳动物患者时在体内释放式(I)的活性母体药物的任何以共价键结合的载体。式(I)化合物的前体药物通过修饰所述化合物中存在的官能团来制备，其修饰方式使得所述修饰或者在常规操作中或者在体内被切割成母体化合物。前体药物包括式(I)的化合物，其中羟基、氨基或巯基与任何基团结合在一起，当将式(I)的前体药物或化合物给予哺乳动物患者时所述基团被切割而分别形成游离羟基、游离氨基或游离巯基。前体药物的实例包括但不限于式(I)化合物中醇和胺官能团的乙酸酯、甲酸酯和苯甲酸酯衍生物。
制剂
本发明化合物可按下列给药途径给药：口服、胃肠外、口腔含化、阴道、直肠、吸入法、吹入法、舌下、肌内、皮下、局部、鼻内、腹膜内、胸内、静脉内、硬膜外、鞘内、脑室内和注射到关节腔内。
当确定最适合具体患者的个体方案和剂量水平时，剂量将会取决于给药途径、疾病的严重程度、患者的年龄和体重以及主治医师常规考虑的其它因素。
用于治疗感染的本发明化合物的有效量是足以在症状上减轻温血动物、特别是人的感染症状以减慢感染进程或者减轻有感染症状的患者的恶化风险的量。
为了由本发明化合物制备药物组合物，惰性、药物可接受的载体可以是固体或是液体。固体形式的制剂包括粉剂、片剂、可分散颗粒剂、胶囊剂、扁囊剂和栓剂。
固体载体可以是一种或多种物质，该物质也可用作稀释剂、矫味剂、增溶剂、润滑剂、悬浮剂、粘合剂或片剂崩解剂；其也可是包胶囊材料。
在粉剂中，载体是微细固体，其与微细活性成分一起存在于混合物中。在片剂中，将活性成分与具有必需粘合特性的载体按合适的比例进行混合并压成所需的形状和大小。
为了制备栓剂组合物，首先将低熔点蜡例如脂肪酸甘油酯和可可脂混合物熔化并使活性成分分散在其中，例如通过搅拌。然后将溶化的均质混合物倒在常规大小的模子中，让其冷却并固化。
合适的载体包括碳酸镁、硬脂酸镁、滑石粉、乳糖、蔗糖、果胶、糊精、淀粉、西黄蓍胶、甲基纤维素、羧甲基纤维素钠、低熔点蜡、可可脂等。
一些本发明化合物能与各种无机酸和有机酸以及碱形成盐，这样的盐也在本发明范围之内。这样的酸加成盐的实例包括乙酸盐、己二酸盐、抗坏血酸盐、苯甲酸盐、苯磺酸盐、碳酸氢盐、硫酸氢盐、丁酸盐、樟脑酸盐、樟脑磺酸盐、胆碱、柠檬酸盐、环己基氨基磺酸盐、哌嗪、乙磺酸盐、富马酸盐、谷氨酸盐、羟乙酸盐、半硫酸盐、2-羟乙基磺酸盐、庚酸盐、己酸盐、盐酸盐、氢溴酸盐、氢碘酸盐、羟基马来酸盐、乳酸盐、苹果酸盐、马来酸盐、甲磺酸盐、葡甲胺、2-萘磺酸盐、硝酸盐、草酸盐、双羟萘酸盐、过硫酸盐、苯乙酸盐、磷酸盐、二磷酸盐、苦味酸盐、新戊酸酯、丙酸盐、奎尼酸盐、水杨酸盐、硬脂酸盐、琥珀酸盐、氨基磺酸盐、磺胺酸盐、硫酸盐、酒石酸盐、甲苯磺酸盐(对甲苯磺酸盐)、三氟乙酸盐和十一烷酸盐。碱盐包括铵盐，碱金属盐例如钠盐、锂盐和钾盐，碱土金属盐例如铝盐、钙盐和镁盐，与有机碱形成的盐例如二环己胺盐、N-甲基-D-葡糖胺，与氨基酸例如精氨酸、赖氨酸、鸟氨酸等形成的盐。另外，碱性含氮基团可以用诸如以下的试剂季铵化：低级烷基卤，例如甲基卤、乙基卤、丙基卤和丁基卤；硫酸二烷基酯，如硫酸二甲酯、硫酸二乙酯、硫酸二丁酯、硫酸二戊酯；长链卤化物，例如癸基卤、十二烷基卤、肉豆蔻基卤和十八烷基卤；芳烷基卤，如苄基溴等。优选无毒的生理上可接受的盐，尽管其它盐也可用于例如分离或纯化产物。
所述盐可用常规方法制得，例如通过使游离碱形式的产物与一个或多个当量的合适酸在所得盐不溶的溶剂或介质中反应而制得，或者在水等溶剂中反应而制得，然后真空除去水等溶剂，或者冷冻干燥，或者在合适的离子交换树脂上将现有的盐的阴离子交换成另一种阴离子。
为了用式(I)化合物或其药物可接受的盐治疗性治疗(包括预防性治疗)哺乳动物(包括人)，将式(I)化合物或其药物可接受的盐按照标准药物实践常规配制成药物组合物。
除了本发明化合物之外，本发明的药物组合物还可以含有一种或多种有价值的药物，或者与一种或多种有价值的药物共同给药(同时或序贯给药)，以治疗一种或多种本文提及的疾病。
术语组合物意指包括活性成分或药物可接受的盐以及药物可接受的载体的制剂。例如，可以用本领域已知的方法将本发明组合物配制成诸如以下的形式：片剂、胶囊剂、水性或油性溶液剂、混悬剂、乳剂、乳油剂、软膏剂、凝胶剂、鼻腔喷雾剂、栓剂、供吸入用的微细粉剂或气雾剂或雾化剂，以及供胃肠外(包括静脉内、肌内或输注)用的无菌水性或油性溶液剂或混悬剂或无菌乳剂。
液体形式的组合物包括溶液剂、混悬剂和乳剂。可以提及的适合于胃肠外给药的液体制剂的一个实例是活性成分的无菌水溶液或水-丙二醇溶液。液体组合物也可以配制在聚乙二醇水溶液的溶液中。将活性成分溶于水中，按需添加合适的着色剂、矫味剂、稳定剂和增稠剂，可以制备用于口服给药的水性溶液剂。将微细活性成分与粘性物质例如天然合成树胶、树脂、甲基纤维素、羧甲基纤维素钠和药物制剂领域已知的其它悬浮剂一起分散在水中，可以制备口服用水性混悬剂。
所述药物组合物可以呈单位剂型。在这样的形式中，所述组合物分成含有适量活性成分的单位剂量。单位剂型可以是包装制剂，所述包装包括独立剂量的制剂，例如包装片剂、胶囊剂及小瓶或安瓿中的粉剂。所述单位剂型也可以是胶囊剂、扁囊剂或片剂本身，或者可以是适当数目的任何这些包装形式。
联合药物
本文定义的抗癌治疗可以用作单一疗法，或者除本发明化合物之外，还可以包括常规手术或放疗或化疗。这样的化疗可以包括一种或多种下列目录的抗肿瘤药：
(i)肿瘤医学中所用的抗增殖药/抗肿瘤药及其组合，例如烷化剂(例如顺铂、卡铂、环磷酰胺、氮芥、美法仑、苯丁酸氮芥、白消安和亚硝基脲)；抗代谢药(例如抗叶酸药例如氟嘧啶如5-氟尿嘧啶和替加氟、雷替曲塞、甲氨蝶呤、阿糖胞苷和羟基脲)；抗肿瘤抗生素(例如蒽环类抗生素如阿霉素、博来霉素、多柔比星、道诺霉素、表柔比星、伊达比星、丝裂霉素C、放线菌素D和普卡霉素)；抗有丝分裂药(例如长春花属类生物碱如长春新碱、长春碱、长春地辛和长春瑞滨以及紫杉类生物碱如紫杉醇和紫杉萜)；拓扑异构酶抑制剂(例如表鬼臼毒素如依托泊苷和替尼泊苷、安吖啶、托泊替康和喜树碱)；
(ii)细胞抑制剂例如抗雌激素药(例如他莫昔芬、托瑞米芬、雷洛昔芬、屈洛昔芬和iodoxyfene)、雌激素受体减量调节药(例如氟维司群)、抗雄激素药(例如比卡鲁胺、氟他胺、尼鲁米特和醋酸环丙孕酮)、LHRH拮抗剂或LHRH激动剂(例如戈舍瑞林、亮丙瑞林和布舍瑞林)、孕激素(例如醋酸甲地孕酮)、芳香酶抑制剂(例如阿那曲唑、来曲唑、vorazole和依西美坦)和5α还原酶抑制剂例如非那雄胺；
(iii)抑制癌细胞浸润的药物(例如金属蛋白酶抑制剂如马立马司他和尿激酶纤溶酶原激活受体功能的抑制剂)；
(iv)生长因子功能的抑制剂，例如这样的抑制剂包括生长因子抗体、生长因子受体抗体(例如抗erbb2抗体曲妥单抗[HerceptinTM]和抗erbb1抗体西曲妥单抗[C225])、法呢基转移酶抑制剂、酪氨酸激酶抑制剂和丝氨酸/苏氨酸激酶抑制剂例如表皮生长因子家族抑制剂(例如EGFR家族酪氨酸激酶抑制剂例如N-(3-氯-4-氟苯基)-7-甲氧基-6-(3-吗啉代丙氧基)喹唑啉-4-胺(吉非替尼(gefitinib)，AZD1839)、N-(3-乙炔基苯基)-6，7-双(2-甲氧基乙氧基)喹唑啉-4-胺(埃罗替尼(erlotinib)，OSI-774)和6-酰氨基-N-(3-氯-4-氟苯基)-7-(3-吗啉代丙氧基)喹唑啉-4-胺(CI 1033))、例如血小板衍生生长因子家族抑制剂和例如肝细胞生长因子家族抑制剂；
(v)抗血管生成药例如抑制血管内皮生长因子作用的那些抗血管生成药(例如抗血管内皮细胞生长因子抗体贝伐单抗[AvastinTM]、以下国际专利申请公开的那些化合物例如：WO 97/22596、WO97/30035、WO 97/32856和WO 98/13354)和以其它机制起作用的化合物(例如利诺胺、整联蛋白αvβ3功能抑制剂和血管生长抑素)；
(vi)血管损伤药例如考布他汀A4和以下国际专利申请公开的化合物：WO 99/02166、WO 00/40529、WO 00/41669、WO 01/92224、WO 02/04434和WO 02/08213；
(vii)反义疗法，例如针对上述靶的那些疗法，例如ISIS 2503、抗ras反义疗法；
(viii)基因疗法，包括例如替代异常基因的疗法，例如异常p53或异常BRCA1或BRCA2、GDEPT(基因指导的酶前药疗法)替代疗法，例如使用胞嘧啶脱氨酶、胸苷激酶或细菌硝基还原酶的那些替代疗法和增加患者对化疗或放疗耐受性的疗法，例如多药抗性基因疗法；和
(ix)免疫疗法，包括例如增加患者肿瘤细胞免疫原性的体外和体内疗法，例如用细胞因子例如白介素2、白介素4或粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子转染，例如减少T细胞无反应性的疗法，使用转染免疫细胞的疗法，例如细胞因子转染的树突细胞，使用细胞因子转染的肿瘤细胞系的疗法和使用抗独特型抗体的疗法。
这样的联合疗法可以通过同时、序贯或独立给予各治疗组分来实现。这样的组合产品使用的本发明化合物的剂量在上述剂量范围之内，其它药物活性剂在其批准的剂量范围之内。
合成
本发明的化合物可以用有机合成领域技术人员熟知的许多方法来制备。本发明的化合物可以用下述方法以及合成有机化学领域已知的合成方法或本领域技术人员已知的改进方法进行合成。这样的方法包括但不限于下述方法。本文中所引用的所有参考文献都通过引用整体结合到本文中。
本发明的新化合物可以用本文记载的反应和技术来制备。在适合所用试剂和材料的溶剂中进行反应，并且反应适合于待实现的转化。另外，在下述合成方法的描述中，人们应当知道，所有提出的反应条件，包括对溶剂、反应气氛、反应温度、实验持续时间和后处理步骤的选择，都选择为对于该反应而言是标准的条件，这些都是本领域技术人员容易理解的。有机合成领域技术人员还知道，分子各部分上存在的官能团必须与提出的试剂和反应相匹配。这样对取代基的限制，即与反应条件相匹配，对于本领域技术人员而言将会是显而易见的，于是可使用替代方法。
本文实施例中记载的原料是市售的，或者容易用标准方法由已知材料制得。例如，以下反应是说明性的而不是对本文中所用的一些原料的制备和实施例的限制。
实施例中所用的化学缩写如下定义：″BOC″表示N-叔丁氧羰基，″CBZ″表示苄酯基；″DIEA″表示N，N-二异丙基乙胺，″DMF″表示N，N-二甲基甲酰胺；″THF″表示四氢呋喃，″ether″表示乙醚，″min.″表示分钟；″h″或hr表示小时；″RT″或“r.t.”表示室温；“SM”表示原料，“MS”表示质谱，“RM”表示反应混合物，“NMR”表示核磁共振，“TLC”表示薄层色谱法，“LC”表示液相色谱法，“HPLC”表示高压液相色谱法，“TFA”表示三氟乙酸，“DMSO”表示二甲基亚砜，“EtOAc”表示乙酸乙酯。除非另有说明，有机溶液是经无水硫酸钠“干燥”的。
下面举例说明这些方法的实例：
方法1
2-(1-乙氧基-亚乙基)-丙二腈
将原乙酸三乙酯(97g，0.6mol)、丙二腈(33g，0.5mol)和冰乙酸(1.5g)加到1升烧瓶中，该烧瓶配备有搅拌器、温度计和Vigreux柱(20x 1in)并在顶部加上一个蒸馏冷凝器。将反应混合物加热，当反应混合物的温度大约85-90℃时，乙醇开始蒸馏。约40分钟后，反应混合物的温度达到140℃。在旋转蒸发器中浓缩反应物，以除去低沸点物质，残余物从无水乙醇中结晶，得到纯产物(62.2g，91％，浅黄色固体)[mp 91.6℃(lit.90-92℃，MCCall.M.A.J.Org.Chem.1962，27，2433-2439)]。
方法2
(E)-2-氰基-3-乙氧基-丁-2-烯硫代酸酰胺
将2-(1-乙氧基-亚乙基)-丙二腈(方法1)(62g，0.45mol)溶于无水苯(800ml)中，然后加入1ml三乙胺作为催化剂。搅拌所得混合物，向该溶液通入硫化氢40分钟，生成固体。滤出沉淀的固体并干燥。所得固体从无水乙醇(100ml)中重结晶，过滤并干燥，分离得到纯的(E)-2-氰基-3-乙氧基-丁-2-烯硫代酸酰胺(19.3g，25％，浅褐色晶体)。
方法3
(E)-3-氨基-2-氰基-丁-2-烯硫代酸酰胺
将(E)-2-氰基-3-乙氧基-丁-2-烯硫代酸酰胺(方法2)(19.2g，0.136mol)溶于饱和甲醇铵溶液(500ml)中并于室温搅拌过夜。浓缩反应混合物，将残余物溶于热水(600ml)中，将不溶解的固体过滤并干燥，回收到6g原料硫代巴豆酰胺。将该水溶液静置过夜，得到纯的(E)-3-氨基-2-氰基-丁-2-烯硫代酸酰胺(6.85g，63％，灰白色晶体)。1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ2.22(s，3H)，7.73(bs，1H)，8.53(bs，1H)，9.01(bs，1H)，11.60(bs，1H)。
方法4
5-氨基-3-甲基异噻唑-4-甲腈
向(E)-3-氨基-2-氰基-丁-2-烯硫代酸酰胺(方法3)(6.83g，48.4mmol)的甲醇(300ml)的搅拌溶液中滴加13.6ml(124mmoL)30％过氧化氢。将所得混合物于60℃搅拌4小时并在旋转蒸发器中蒸发至60ml，然后在冰浴中冷却。滤出结晶产物，从乙酸乙酯中重结晶，得到纯产物5-氨基-3-甲基异噻唑-4-甲腈(5.41g，80％，白色结晶固体)。1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ2.24(s，3H)，8.00(bs，2H)。
方法5
N-(4-氰基-3-甲基-异噻唑-5-基)-丁酰胺
在0℃，向所得胺(方法4)(5.31g，38.2mmol)的CH2Cl2(200ml)溶液中加入NEt3(5g，50mmol)，然后滴加丁酰氯(4.88g，45.8mmol)的CH2Cl2(50ml)溶液。加入结束后，让反应混合物升至室温并搅拌过夜。反应混合物用水(100ml)、1N HCl(100ml)、盐水(200ml)洗涤，经Na2SO4干燥。浓缩CH2Cl2层，得到产物，用CH2Cl2/己烷(1/10)研磨，过滤，分离得到纯的N-(4-氰基-3-甲基-异噻唑-5-基)-丁酰胺(7.57g，95％，橙色固体)。
方法6
5-丁酰基氨基-3-甲基-异噻唑-4-甲酰胺
在室温下，向N-(4-氰基-3-甲基-异噻唑-5-基)-丁酰胺(方法5)(4.18g，20mmol)的30％NH4OH水溶液(250ml)中滴加100ml过氧化氢。加入结束后，将反应混合物于60℃搅拌过夜，此后TLC显示SM完全消失。将反应混合物冷却并用氯仿(3x100ml)萃取。将有机层干燥(Na2SO4)并浓缩，得到纯的5-丁酰基氨基-3-甲基-异噻唑-4-甲酰胺(2.9g，72％，白色固体)。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ1.03(t，3H)，1.79(m，2H)，2.54(t，3H)，2.69(s，3H)，5.97(bs，2H)，11.78(bs，1H)。
方法7
3-甲基-6-丙基-5H-异噻唑并[5，4-d]嘧啶-4-酮
将5-丁酰基氨基-3-甲基-异噻唑-4-甲酰胺(方法6)(1.9g，8.3mmol)悬浮于75ml 30％NH3中，然后在压力反应器中加热至140℃达4h。将所得混合物冷却并中和到pH 8。滤出3-甲基-6-丙基-5H-异噻唑并[5，4-d]嘧啶-4-酮的沉淀，用水(100ml)洗涤，在真空炉中于40℃干燥过夜，得到800mg(34％)纯产物。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ1.03(t，3H)，1.74(m，2H)，2.67(t，3H)，2.78(s，3H)。
方法8
5-苄基-3-甲基-6-丙基-5H-异噻唑并[5，4-d]嘧啶-4-酮
向3-甲基-6-丙基-5H-异噻唑并[5，4-d]嘧啶-4-酮(方法7)(800mg，3.8mmol)的20ml无水DMF溶液中加入1.38g(10mmol)无水K2CO3，然后加入苄基溴(655mg，3.8mmol)，将所得混合物在室温下搅拌过夜。TLC显示反应混合物中的SM完全消失。将反应混合物倒入冰冷的水中，用EtOAc(3x100ml)萃取。合并的萃取液用水(100ml)、盐水(100ml)洗涤，干燥(Na2SO4)并浓缩。TLC和1H NMR显示存在两种产物，即N烷基化产物以及O-烷基化产物，比率为1∶1。所得产物用柱(硅胶，116g)色谱法进行分离，使用10-20％EtOAc/己烷。分离得到所需N-烷基化产物5-苄基-3-甲基-6-丙基-5H-异噻唑并[5，4-d]嘧啶-4-酮(369mg，32％，白色结晶固体)。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ0.96(t，3H)，1.71-1.84(m，2H)，2.73(t，3H)，2.81(s，3H)，5.38(s，2H)，7.14-7.38(m，5H)。
按照方法8合成下列化合物：
| 方法# | 化合物名称 | m/z | 烷化剂 |
| 8a | 5-(4-氟-苄基)-3-甲基-6-丙基-异噻唑并[5，4-d]嘧啶-4-酮 | 318(MH<sup>+</sup>) | 4-氟苄基溴 |
方法9
5-苄基-6-(1-溴-丙基)-3-甲基-5-H-异噻唑并[5，4-d]嘧啶-4-酮
在100℃，在20分钟内，向5-苄基-3-甲基-6-丙基-5H-异噻唑并[5，4-d]嘧啶-4-酮(方法8)(369mg，1.23mmol)和乙酸钠(1g)的乙酸(5ml)溶液中，滴加溴(318mg，2mmol)的乙酸(10ml)溶液[根据脱色反应判断，仅在前面的滴加物反应完全后，才加入下一滴溴]。加入后将反应混合物冷却，TLC(洗脱液为10％EtOAc/己烷)和MS显示SM完全消失而仅留下产物。将反应混合物倒入冰水中，用EtOAc(3X 60ml)萃取，将有机层合并，用2％硫代硫酸钠溶液(60ml)、水(100ml)、盐水(100ml)洗涤，经Na2SO4干燥。浓缩有机层，得到纯的5-苄基-6-(1-溴-丙基)-3-甲基-5-H-异噻唑并[5，4-d]嘧啶-4-酮(460mg，100％，白色结晶固体)。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ0.76(t，3H)，2.1-2.47(m，2H)，2.84(s，3H)，4.62(t，1H)，4.88(d，1H)，6.20(d，1H)，7.10-7.40(m，5H)。
按照方法9合成下列化合物：
| 方法# | 化合物名称 | m/z | SM |
| 9a | 6-(1-溴丙基)-5-[(4-氟苯基)甲基)]-3-甲基-异噻唑并[5，4-d]嘧啶-4(5H)-酮 | 397(MH<sup>+</sup>) | 方法8a |
方法10
{3-[1-(5-苄基-3-甲基-4-氧代-4，5-二氢-异噻唑并[5，4-d]嘧啶-6-基)-丙基氨基]-丙基}-氨基甲酸叔丁酯
向溴(方法9)(0.46g，1.22mmol)的无水乙醇(20ml)溶液中，加入3-氨基丙基-氨基甲酸叔丁酯(0.211g，1.22mmol)，然后加入无水二异丙基乙胺(0.258g，2mmol)，将所得混合物在回流下搅拌16小时。RM的TLC显示原料溴完全消失。将反应混合物倒入冰水(200ml)中，用EtOAc(3x100ml)萃取。有机层用水(100ml)、盐水(100ml)洗涤，干燥(Na2SO4)。浓缩有机层，得到产物，所得产物用柱(硅胶)色谱法纯化，使用30-50％EtOAc/己烷，分离得到纯的胺{3-[1-(5-苄基-3-甲基-4-氧代-4，5-二氢-异噻唑并[5，4-d]嘧啶-6-基)-丙基氨基]-丙基}-氨基甲酸叔丁酯(0.1g，17％，白色泡沫)。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ0.95(t，3H)，1.33(t，2H)，1.42(s，9H)，1.49-1.51(m，2H)，1.87-1.99(m，1H)，2.35-2.45(m，1H)，2.83(s，3H)，2.92-3.20(m，2H)，3.64-3.70(m，1H)，4.98(d，1H)，5.17(bs，1H)，5.85(d，1H)，7.10-7.40(m，5H)。
按照方法10合成下列化合物：
| 方法# | 化合物名称 | m/z | SM | 胺 |
| 10 a | [3-({1-[5-(4-氟苄基)-3-甲基-4-氧代-4，5-二氢-异噻唑并[5，4-d]嘧啶-6-基]-丙基}氨基)-丙基}-氨基甲酸叔丁酯 | 490(MH<sup>+</sup>) | 方法9a | 3-氨基丙基-氨基甲酸叔丁酯 |
方法11
{3-[1-(5-苄基-3-甲基-4-氧代-4，5-二氢-异噻唑并[5，4-d]嘧啶-6-基)-丙基氨基]-丙基}-氨基甲酸叔丁酯
向溴(方法9)(0.1g，0.26mmol)的无水二氯甲烷(5ml)溶液中，加入无水二异丙基乙胺(100μl，0.52mmol)，然后加入3-氨基丙基-氨基甲酸叔丁酯(0.10g，0.52mmol)。反应混合物于120℃微波加热2h。RM的LC/MS显示原料溴完全消失。将反应混合物蒸发至干，所得产物用柱(硅胶)色谱法纯化，使用40-60％EtOAc/己烷，分离得到纯的胺{3-[1-(5-苄基-3-甲基-4-氧代-4，5-二氢-异噻唑并[5，4-d]嘧啶-6-基)-丙基氨基]-丙基}-氨基甲酸叔丁酯(0.085g，64％)。m/z 472(MH+)。
按照方法11合成下列化合物：
方法12
N-(3-氨基-丙基)-N-[1-(5-苄基-3-甲基-4-氧代-4，5-二氢-异噻唑并-[5，4-d]嘧啶-6-基)-丙基]-4-甲基-苯甲酰胺
在室温下，向所得胺13(方法10)(0.1g，0.21mmol)和三乙胺(0.303g，3mmol)的二氯甲烷(20ml)溶液中，滴加对甲苯甲酰氯(0.1g，0.6mmol)的二氯甲烷(10ml)溶液。将所得溶液在室温下搅拌30分钟，此后，TLC显示SM消失。反应混合物用CH2Cl2(60ml)稀释，用饱和NaHCO3(100ml)、水(100ml)、盐水(100ml)洗涤，干燥(Na2SO4)。浓缩有机层，得到产物，所得产物用柱(硅胶)色谱法纯化，使用20-30％EtOAc/己烷作为洗脱液。产量＝0.117g(94％)。将所得酰化产物溶于2M HCl的乙醚溶液中，将所得混合物在室温下搅拌20小时。滤出所沉淀的产物，用乙醚洗涤并真空干燥，得到纯的N-(3-氨基-丙基)-N-[1-(5-苄基-3-甲基-4-氧代-4，5-二氢-异噻唑并-[5，4-d]嘧啶-6-基)-丙基]-4-甲基-苯甲酰胺盐酸盐(91mg，87％，白色粉末)。mp.127.8-129.2℃ m/z 490(MH+)，1H NMR(DMSO-d6 300MHz，96℃)δ：7.79(bs，3H)，7.37-6.95(m，9H)，5.77(d，1H)，5.50(bs，1H)，4.83(d，1H)，3.36(t，2H)，2.72(s，3H)，2.46(t，2H)，2.39(s，3H)，2.20-2.05(m，1H)，1.96-1.75(m，1H)，1.74-1.40(m，2H)，0.63(t，3H)。
按照方法12合成下列化合物：
| 方法# | 化合物名称 | m/z | SM | 酰化剂 |
| 12a | N-(3-氨基-丙基)-N-[1-(5-{4-氟苄基}-3-甲基-4-氧代-4，5-二氢-异噻唑并[5，4-d]嘧啶-6-基)-丙基]-4-甲基-苯甲酰胺 | 507(MH<sup>+</sup>) | 方法10a | 4-甲基-苯甲酰氯 |
方法13
N-(3-氨基-丙基)-N-[1-(5-苄基-3-甲基-4-氧代-4，5-二氢-异噻唑并[5，4-d]嘧啶-6-基)-丙基]-4-溴-苯甲酰胺
在室温下，向{3-[1-(5-苄基-3-甲基-4-氧代-4，5-二氢-异噻唑并[5，4-d]嘧啶-6-基)-丙基氨基]-丙基}-氨基甲酸叔丁酯(方法11)(0.085g，0.167mmol)的二氯甲烷(8ml)溶液中，加入饱和碳酸钾溶液(8ml)，然后滴加对溴苯甲酰氯(0.044g，0.2mmol)。将所得溶液在室温下搅拌16h，此后，LC/MS显示SM消失。将反应混合物蒸发至干，然后重悬于3ml MeOH中，用Gilson HPLC进行纯化，使用20-99％H2O/CH3CN(0.05％TFA)梯度。浓缩所需流分，得到{3-[1-(5-苄基-3-甲基-4-氧代-4，5-二氢-异噻唑并[5，4-d]嘧啶-6-基)-丙基](4-溴苯甲酰基)氨基]丙基}-氨基甲酸叔丁酯。将所得产物溶液2M HCl的1，4-二噁烷溶液中，将所得混合物在室温下搅拌1h。将反应混合物蒸发至干，用乙醚洗涤并真空干燥，得到纯的N-(3-氨基-丙基)-N-[1-(5-苄基-3-甲基-4-氧代-4，5-二氢-异噻唑并[5，4-d]嘧啶-6-基)-丙基]-4-溴-苯甲酰胺盐酸盐(33mg，34％)。m/z 556(MH+)，1H NMR(DMSO-d6500MHz，96℃)δ：7.80(br，3H)，7.64(d，2H)，7.36-7.28(m，5H)，7.13(m，2H)，5.80(d，1H)，5.57(bs，1H)，4.95(d，1H)，3.38(t，2H)，2.77(s，3H)，2.47(t，2H)，2.17-2.13(m，1H)，1.96-1.91(m，1H)，1.72-1.50(m，2H)，0.68(t，3H)。
按照方法13合成下列化合物：
| 方法# | 化合物名称 | m/z | SM | 酰化剂 |
| 13a | N-(3-氨基-丙基)-N-[1-(5-苄基-3-甲基-4-氧代-4，5-二氢-异噻唑并[5，4-d]嘧啶-6-基)-丙基]-4-氯-苯甲酰胺盐酸盐 | 510(MH<sup>+</sup>) | 方法11 | 4-氯-苯甲酰氯 |
| 13b | N-(3-氨基-丙基)-N-[1-(5-苄基-3-甲基-4-氧代-4，5-二氢-异噻唑并[5，4-d]嘧啶-6-基)-丙基]-3-氟-4-甲基-苯甲酰胺盐酸盐 | 508(MH<sup>+</sup>) | 方法11 | 3-氟-4-甲基-苯甲酰氯 |
| 13c | N-(3-氨基-丙基)-N-[1-(5-苄基-3-甲基-4-氧代-4，5-二氢-异噻唑并[5，4-d]嘧啶-6-基)-丙基]-2，3-二氯-苯甲酰胺盐酸盐 | 545(MH<sup>+</sup>) | 方法11 | 2，3-二氯-苯甲酰氯 |
| 13d | 萘-2-甲酸(3-氨基-丙基)-[1-(5-苄基-3-甲基-4-氧代-4，5-二氢-异噻唑并[5，4-d]嘧啶-6-基)-丙基]-酰胺盐酸盐 | 526(MH<sup>+</sup>) | 方法11 | 2-萘甲酰氯 |
| 13e | 苯并[b]噻吩-2-甲酸(3-氨基-丙基)-[1-(5-苄基-3-甲基-4-氧代-4，5-二氢-异噻唑并[5，4-d]嘧啶-6-基)-丙基]-酰胺盐酸盐 | 532(MH<sup>+</sup>) | 方法11 | 1-苯并噻吩-2-碳酰氯 |
| 13f | N-氮杂环丁烷-3-基甲基-N-[1-(5-苄基-3-甲基-4-氧代-4，5-二氢-异噻唑并[5，4-d]嘧啶-6-基)-丙基]-4-甲基-苯甲酰胺盐酸盐 | 502(MH<sup>+</sup>) | 方法11 | 4-甲基-苯甲酰氯 |
| 13g | N-[1-(5-苄基-3-甲基-4-氧代-4，5-二氢-异噻唑并[5，4-d]嘧啶-6-基)-丙基]-4-甲基-N-哌啶-3-基甲基-苯甲酰胺盐酸盐 | 530(MH<sup>+</sup>) | 方法11 | 4-甲基-苯甲酰氯 |
| 方法# | 化合物名称 | m/z | SM | 酰化剂 |
| 13h | N-(2-氨基-乙基)-N-[1-(5-苄基-3-甲基-4-氧代-4，5-二氢-异噻唑并[5，4-d]嘧啶-6-基)-丙基]-4-甲基-苯甲酰胺盐酸盐 | 476(MH<sup>+</sup>) | 方法11 | 4-甲基-苯甲酰氯 |
方法14
N-[1-(5-苄基-3-甲基-4-氧代-4，5-二氢-异噻唑并[5，4-d]嘧啶-6-基)-丙基]-N-(3-二甲氨基-丙基)-4-甲基-苯甲酰胺
在室温下，向5-苄基-6-[1-(3-二甲氨基-丙基氨基)-丙基]-3-甲基-5H-异噻唑并[5，4-d]嘧啶-4-酮(方法11e)(0.104g，0.26mmol)的二氯甲烷(10ml)溶液中，加入饱和碳酸钾溶液(10ml)，然后滴加对甲苯甲酰氯(34μL，0.26mmol)。将所得溶液在室温下搅拌16h，此后，LC/MS显示SM消失。将反应混合物蒸发至干，然后重悬于3ml MeOH中，用GilsonHPLC进行纯化，使用20-99％H2O/CH3CN(0.05％TFA)梯度。浓缩所需流分，得到N-[1-(5-苄基-3-甲基-4-氧代-4，5-二氢-异噻唑并[5，4-d]嘧啶-6-基)-丙基]-N-(3-二甲氨基-丙基)-4-甲基-苯甲酰胺(65mg，48％)。m/z 518(MH+)，1H NMR(DMSO-d6 300MHz，96℃)δ：7.44-7.00(m，9H)，5.82(d，1H)，5.51(bs，1H)，4.86(d，1H)，3.41(t，2H)，2.75(s，3H)，2.50(s，6H)，2.39(bm，2H)，2.12-2.05(m，1H)，1.93-1.90(m，1H)，1.75(m，1H)，1.50(m，1H)，0.66(t，3H)。
按照方法14合成下列化合物：
| 方法# | 化合物名称 | m/z | SM | 酰化剂 |
| 14a | N-[1-(5-苄基-3-甲基-4-氧代-4，5-二氢-异噻唑并[5，4-d]嘧啶-6-基)-丙基]-N-(2-二甲氨基-乙基)-4-甲基-苯甲酰胺 | 504(MH<sup>+</sup>) | 方法11d | 4-甲基-苯甲酰氯 |
| 14b | N-[1-(5-苄基-3-甲基-4-氧代-4，5-二氢-异噻唑并[5，4-d]嘧啶-6-基)-丙基]-N-(3-羟基-丙基)-4-甲基-苯甲酰胺 | 491(MH<sup>+</sup>) | 方法11f | 4-甲基-苯甲酰氯 |
方法15
甲磺酸3-[[1-(5-苄基-3-甲基-4-氧代-4，5-二氢-异噻唑并[5，4-d]嘧啶-6-基)-丙基]-(4-甲基-苯甲酰基)-氨基]-丙酯
向N-[1-(5-苄基-3-甲基-4-氧代-4，5-二氢-异噻唑并[5，4-d]嘧啶-6-基)-丙基]-N-(3-羟基-丙基)-4-甲基-苯甲酰胺(方法14b)(0.42g，0.85mmol)的无水二氯甲烷(57ml)溶液中，加入无水二异丙基乙胺(295μl，1.70mmol)，然后滴加甲磺酰氯(71μl，0.935mmol)。将反应混合物在室温下搅拌2h。RM的LC/MS显示原料完全消失并完全转化成甲磺酸3-[[1-(5-苄基-3-甲基-4-氧代-4，5-二氢-异噻唑并[5，4-d]嘧啶-6-基)-丙基]-(4-甲基-苯甲酰基)-氨基]-丙酯。将反应混合物蒸发至干，并作为粗产物使用。
方法16
N-(3-氮杂环丁烷-1-基-丙基)-N-[1-(5-苄基-3-甲基-4-氧代-4，5-二氢-异噻唑并[5，4-d]嘧啶-6-基)-丙基]-4-甲基-苯甲酰胺
在室温下，向甲磺酸3-[[1-(5-苄基-3-甲基-4-氧代-4，5-二氢-异噻唑并[5，4-d]嘧啶-6-基)-丙基]-(4-甲基-苯甲酰基)-氨基]-丙酯(方法15)((假定得自上述反应)0.080g，0.14mmol)的DMF(25ml)溶液中，加入过量的碳酸钾(0.097g，0.70mmol)，然后滴加氮杂环丁烷(19μl，0.28mmol)。将反应混合物于38℃搅拌16h，此后，LC/MS显示SM消失。将反应混合物在GeneVac HT12上蒸发至干，然后重悬于3mlMeOH中，用Gilson HPLC进行纯化，使用20-99％H2O/CH3CN(0.05％HCl)梯度。浓缩所需流分，得到N-(3-氮杂环丁烷-1-基-丙基)-N-[1-(5-苄基-3-甲基-4-氧代-4，5-二氢-异噻唑并[5，4-d]嘧啶-6-基)-丙基]-4-甲基-苯甲酰胺(51mg，69％)。m/z 530(MH+)，1H NMR(DMSO-d6 400MHz，96℃)δ：7.40-7.00(m，9H)，5.85(d，1H)，5.55(bs，1H)，4.85(d，1H)，3.40(b，2H)，2.90(b，2H)，2.78(s，3H)，2.50(b，2H)，2.40(s，3H)，2.35(bm，2H)，2.20-2.00(m，1H)，1.96-1.80(m，1H)，1.65-1.50(m，1H)，1.40-1.30(m，3H)，0.65(t，3H)。
按照方法16合成下列化合物：
方法17
5-苄基-6-{1-[(3-羟基-丙基)-(4-甲基-苄基)-氨基]-丙基}-3-甲基-5H-异噻唑并[5，4-d]嘧啶-4-酮
向5-苄基-6-[1-(3-羟基-丙基氨基)-丙基]-3-甲基-5H-异噻唑并[5，4-d]嘧啶-4-酮(方法11f)(0.098g，0.26mmol)的无水DMF(3ml)溶液中，加入碳酸钾(0.108g，0.78mmol)，然后滴加4-甲基苄基溴(0.048g，0.26mmol)。将所得溶液于40℃振荡4h，此后LC/MS显示SM消失。将反应混合物蒸发至干，然后重悬于3ml MeOH中，用GilsonHPLC进行纯化，使用20-99％H2O/CH3CN(0.05％TFA)梯度。浓缩所需流分，得到5-苄基-6-{1-[(3-羟基-丙基)-(4-甲基-苄基)-氨基]-丙基}-3-甲基-5H-异噻唑并[5，4-d]嘧啶-4-酮(48mg，39％)。m/z 477(MH+)，1H NMR(DMSO-d6 500MHz，96℃)δ：8.20(s，1H)，7.40-6.85(m，9H)，5.80(d，1H)，5.20(d，1H)，3.80(d，1H)，3.70(m，1H)，3.62(d，1H)，3.50-3.30(m，2H)，2.90(m，1H)，2.75(s，3H)，2.33(m，2H)，2.25(s，3H)，2.20-2.16(m，1H)，1.90-1.80(m，1H)，1.50(m，2H)，0.65(t，3H)。
方法18
5-丁酰基氨基-3-甲基-异噁唑-4-甲酰胺
将5-氨基-3-甲基-异噁唑-4-甲酰胺(2g，14.18mmol)在10ml丁酸酐中的混合物于150℃搅拌0.5～1h。褐色溶液用己烷(100ml)稀释并冷却至室温。将混合物的捣碎固体过滤，用己烷洗涤，真空干燥。得到标题酰胺(2.6g)，为白色固体。
方法19
3-甲基-6-丙基-5H-异噁唑并[5，4-d]嘧啶-4-酮
将5-丁酰基氨基-3-甲基-异噁唑-4-甲酰胺(方法18)(2.6g，分成20个小瓶)在3.5ml 2N NaOH水溶液中的悬浮液在140℃的温度下进行微波辐射20分钟。所得溶液用冰浴冷却，用浓盐酸调pH至1～3。将捣碎的固体过滤，用水洗涤，于40℃真空干燥过夜，得到标题嘧啶酮(1.749g)，为白色固体。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)：0.91(t，3H)，1.71(m，2H)，2.44(s，3H)，2.64(t，2H)，12.78(s，1H)。
方法20
5-苄基-3-甲基-6-丙基-5H-异噁唑并[5，4-d]嘧啶-4-酮
将3-甲基-6-丙基-5H-异噁唑并[5，4-d]嘧啶-4-酮(方法19)(1.698g，8.8mmol)、苄基溴(1.5g，8.8mmol)、碳酸钾(2.43g，17.6mmol)在10mlDMF中的悬浮液在室温下搅拌过夜。所得混合物用水稀释，用乙酸乙酯(50ml×3)萃取，合并的有机相经无水硫酸钠干燥，浓缩，用快速柱色谱法纯化(洗脱液：己烷-乙酸乙酯＝5∶1)。得到1.69g(68％)标题化合物，为白色固体。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)：0.80(t，3H)，1.61(m，2H)，2.43(s，3H)，2.73(t，2H)，5.35(s，2H)，7.12-7.35(m，5H)。
方法21
5-苄基-6-(1-溴-丙基)-3-甲基-5H-异噁唑并[5，4-d]嘧啶-4-酮
5-苄基-3-甲基-6-丙基-5H-异噁唑并[5，4-d]嘧啶-4-酮(方法20)(3.167g，11.2mmol)和乙酸钠(4.59g，56mmol，5当量)的冰乙酸(26ml)溶液用预先制成的溴溶液(0.7ml溴/10ml冰乙酸)(8.64ml，22.4mmol，2当量)处理。将所得混合物于100℃搅拌24小时。向混合物中加入过量的溴(8.64ml，22.4mmol，2当量)。然后将所得混合物于100℃再搅拌24小时。向反应混合物中加入水，然后加入碳酸钾水溶液。所得混合物用二氯甲烷(50ml×3)萃取，合并的有机相用水洗涤，经无水硫酸钠干燥，浓缩后得到产物，所得产物用快速色谱法纯化(洗脱液：己烷-乙酸乙酯)。得到2.5g白色固体产物。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)：0.79(t，3H)，2.18(m，1H)，2.35(m，1H)，2.58(s，3H)，5.12(t，1H)，5.25(d，1H)，5.80(d，1H)，7.27-7.42(m，5H)。
方法22
5-苄基-6-(1-丁基氨基-丙基)-3-甲基-5H-异噁唑并[5，4-d]嘧啶-4-酮
向5-苄基-6-(1-溴-丙基)-3-甲基-5H-异噁唑并[5，4-d]嘧啶-4-酮(方法21)(2.8g，7.73mmol)和碳酸钾(2.67g，19.38mmol)在乙腈(100ml)中的悬浮液中，加入N-(3-氨基丙基)-氨基甲酸叔丁酯(1.345g，7.73mmol)。将所得混合物于100℃搅拌过夜。向混合物中加入水(30ml)，用乙酸乙酯(3x 50ml)萃取。合并的有机相用盐水(10ml)洗涤，经硫酸钠干燥，浓缩，得到标题胺，所得胺用快速色谱柱进行纯化(洗脱液：乙酸乙酯-己烷＝1-4～1-1)，得到2.6g(74％)白色固体产物。1HNMR(400MHz，DMSO-d6)：0.85(t，3H)，1.32(m，2H)，1.41(s，9H)，1.58(m，1H)，1.65(m，1H)，2.09(m，1H)，2.40(m，1H)，2.60(s，3H)，2.81(m，2H)，3.29(m，1H)，3.75(m，1H)，5.42(d，1H)，5.63(d，1H)，6.72(br，1H)，7.25-7.45(m，5H)。
方法23
N-[[1-(5-苄基-3-甲基-4-氧代-4，5-二氢-异噁唑并[5，4-d]嘧啶-6-基)-丙基]-(4-甲基-苯甲酰基)-氨基]-丙基)-氨基甲酸叔丁酯
将5-苄基-6-(1-丁基氨基-丙基)-3-甲基-5H-异噁唑并[5，4-d]嘧啶-4-酮(方法22)(135mg，0.297mmol)的二氯甲烷(4ml)溶液加入到对甲苯甲酰氯(46mg，0.297mmol)中，然后加入三乙胺(60mg，0.594mmol)。将所得混合物在室温下搅拌1小时。然后用二氯甲烷稀释，用饱和碳酸氢钠水溶液洗涤。有机相经硫酸钠干燥，过滤并浓缩。粗制油状物用快速柱色谱法纯化(溶剂：乙酸乙酯-己烷)，得到N-[[1-(5-苄基-3-甲基-4-氧代-4，5-二氢-异噁唑并[5，4-d]嘧啶-6-基)-丙基]-(4-甲基-苯甲酰基)-氨基]-丙基)-氨基甲酸叔丁酯(130mg，白色固体)。
1H NMR(500MHz，100℃，DMSO-d6)：0.71(t，3H)，1.12(m，1H)，1.35(s，9H)，1.47(m，1H)，1.92(m，1H)，2.14(m，1H)，2.37(s，3H)，2.56(s，3H)，2.57(m，2H)，3.29(m，2H)，5.01(d，1H)，5.68(m，br，1H)，5.79(d，1H)，6.06(br，1H)，7.14-7.36(m，9H)。
方法24
N-(3-氨基-丙基)-N-[1-(5-苄基-3-甲基-4-氧代-4，5-二氢-异噁唑并[5，4-d]嘧啶-6-基)-丙基]-4-甲基-苯甲酰胺
将N-[[1-(5-苄基-3-甲基-4-氧代-4，5-二氢-异噁唑并[5，4-d]嘧啶-6-基)-丙基]-(4-甲基-苯甲酰基)-氨基]-丙基)-氨基甲酸叔丁酯(方法23)(0.223mmol)的3ml 4M HCl的二噁烷溶液在室温下搅拌2小时。真空蒸馏出溶剂，将残余物于40～50℃真空干燥过夜。得到相应的胺盐酸盐。m/z 474(MH+)1H NMR(500MHz，100℃，DMSO-d6)：0.68(t，3H)，1.52(m，1H)，1.72(m，1H)，1.92(m，1H)，2.10(m，1H)，2.39(s，3H)，2.51(m，2H)，2.57(s，3H)，3.41(m，2H)，4.85(br，1H)，5.50(br，1H)，5.77(d，1H)，7.07(br，2H)，7.24-7.35(m，7H)，7.73(br，3H)。
按照方法24合成下列化合物：
方法25
N-(4-氰基-3-甲基-异噻唑-5-基)-3-甲基-丁酰胺
在0℃，向5-氨基-3-甲基-异噻唑-4-甲腈(方法4)(6.38g，45.9mmol)的吡啶(20ml)溶液中，滴加异戊酰氯(6.65g，55mmol)。加入结束后，让反应混合物升至室温并搅拌过夜。TLC和MS显示原料完全消失，反应混合物用CHCl3(200ml)稀释，用水(200ml)、2N HCl(225ml)、饱和NaHCO3(200ml)、盐水(200ml)洗涤并经Na2SO4干燥。浓缩CHCl3层，得到产物，所得产物用CH2Cl2/己烷(1/10)研磨并过滤，分离得到N-(4-氰基-3-甲基-异噻唑-5-基)-3-甲基-丁酰胺(8.1g，79％，灰白色结晶固体)。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ1.04(d，6H)，2.18-2.32(m，1H)，2.46(d，2H)，2.53(s，3H)，9.87(bs，1H)。
方法26
3-甲基-5-(3-甲基-丁酰基氨基)-异噻唑-4-甲酰胺
在室温下，向N-(4-氰基-3-甲基-异噻唑-5-基)-3-甲基-丁酰胺(方法25)(8g，35.8mmol)的30％NH4OH水溶液(200ml)中，滴加100ml过氧化氢。加入结束后，反应混合物于60℃搅拌过夜，此后，TLC显示SM完全消失，浓缩反应混合物至40ml，用氯仿(3x100ml)萃取。将有机层干燥(Na2SO4)并浓缩，得到3-甲基-5-(3-甲基-丁酰基氨基)-异噻唑-4-甲酰胺(6.1g，71％，浅黄色固体)。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ1.03(d，6H)，2.24(m，1H)，2.43(d，2H)，2.69(s，3H)，5.98(bs，2H)，11.77(bs，1H)。
方法27
6-异丁基-3-甲基-5H-异噻唑并[5，4-d]嘧啶-4-酮
将3-甲基-5-(3-甲基-丁酰基氨基)-异噻唑-4-甲酰胺(方法26)(6g，25mmol)悬浮于150ml 30％NH3中，然后在压力反应器中加热至140℃达5h。将所得混合物冷却并中和至pH7。反应混合物用Et0Ac(3x100ml)萃取，合并的有机层用水(100ml)、盐水(100ml)洗涤并浓缩，得到产物，所得产物用柱(硅胶)色谱法进一步纯化，使用30％EtOAc/己烷作为洗脱液。浓缩纯产物流分，得到6-异丁基-3-甲基-5H-异噻唑并[5，4-d]嘧啶-4-酮(2.2g，38％，灰白色粉末)。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ1.05(d，6H)，2.32(m，1H)，2.69(d，2H)，2.82(s，3H)。
方法28
5-苄基-6-异丁基-3-甲基-5H-异噻唑并[5，4-d]嘧啶-4-酮
向6-异丁基-3-甲基-5H-异噻唑并[5，4-d]嘧啶-4-酮(方法27)(1.31g，5.8mmol)的20ml无水DMF溶液中，加入1.38g(10mmol)无水K2CO3，然后加入苄基溴(1.18g，6.9mmol)，将所得混合物在室温下搅拌过夜。TLC显示反应混合物中的SM完全消失。将反应混合物倒入冰冷的水中，用EtOAc(3x100ml)萃取。合并的萃取液用水(100ml)、盐水(100ml)洗涤，干燥(Na2SO4)并浓缩。TLC和1H NMR显示存在两种产物，即N烷基化产物以及O-烷基化产物，比率为7∶3。所得产物用柱(硅胶，116g)色谱法进行分离，使用10％EtOAc/己烷。分离得到5-苄基-6-异丁基-3-甲基-5H-异噻唑并[5，4-d]嘧啶-4-酮(1.3g，70％，白色结晶固体)。m/z 314(MH+)，1H NMR(300MHz，CDCl3)δ0.94(d，6H)，2.23-2.37(m，1H)，2.64(d，2H)，2.82(s，3H)，5.38(s，2H)，7.10-7.38(m，5H)。
按照方法28合成下列化合物：
| 方法# | 化合物名称 | m/z | 烷化剂 |
| 28a | 5-(4-氟-苄基)-6-异丁基-3-甲基-5H-异噻唑并[5，4-d]嘧啶-4-酮 | 332(MH<sup>+</sup>) | 4-氟苄基溴 |
方法29
5-苄基-6-(1-溴-2-甲基-丙基)-3-甲基-5H-异噻唑并[5，4-d]嘧啶-4-酮
在100℃，在20分钟内向5-苄基-6-异丁基-3-甲基-5H-异噻唑并[5，4-d]嘧啶-4-酮(方法28)(1.3g，4.2mmol)和乙酸钠(2g)的乙酸(10ml)溶液中，滴加溴(1.32g，8.4mmol)的乙酸(10ml)溶液。将反应混合物在该温度下搅拌30分钟，然后冷却，TLC(洗脱液：10％EtOAc/己烷)和MS显示SM完全消失而仅存在产物。将反应混合物倒入冰水中，用EtOAc(3X60ml)萃取，合并有机层，用2％硫代硫酸钠溶液(60ml)、水(100ml)、盐水(100ml)洗涤，经Na2SO4干燥。浓缩有机层，得到5-苄基-6-(1-溴-2-甲基-丙基)-3-甲基-5H-异噻唑并[5，4-d]嘧啶-4-酮(1.61g，99％，白色结晶固体)。m/z 394(MH+)，1H NMR(300MHz，CDCl3)δ0.54(d，3H)，1.11(d，3H)，2.62-2.76(m，1H)，2.83(s，3H)，4.42(d，1H)，4.80(d，1H)，6.22(d，1H)，7.12-7.42(m，5H)。
按照方法29合成下列化合物：
| 方法# | 化合物名称 | m/z |
| 29a | 6-(1-溴-2-甲基-丙基)-5-(4-氟-苄基)-3-甲基-5H-异噻唑并[5，4-d]嘧啶-4-酮 | 412(MH<sup>+</sup>) |
方法30
6-(1-叠氮基-2-甲基-丙基)-5-苄基-3-甲基-5H-异噻唑并[5，4-d]嘧啶-4-酮
向5-苄基-6-(1-溴-2-甲基-丙基)-3-甲基-5H-异噻唑并[5，4-d]嘧啶-4-酮(方法29)(0.6g，1.52mmol)的无水DMF(20ml)溶液中，加入叠氮化钠(0.65g，10mmol)，将所得混合物在室温下搅拌1小时。RM的TLC显示原料溴完全消失。将反应混合物倒入冰水(300ml)中，用EtOAc(3x100ml)萃取。有机层用水(100ml)、盐水(100ml)洗涤，干燥(Na2SO4)。浓缩有机层，得到产物，所得产物用柱(硅胶)色谱法纯化，使用30％EtOAc/己烷作为洗脱液，分离得到6-(1-叠氮基-2-甲基-丙基)-5-苄基-3-甲基-5H-异噻唑并[5，4-d]嘧啶-4-酮(0.506g，94％，低熔点固体)。m/z 355(MH+)，1H NMR(300MHz，CDCl3)δ0.57(d，3H)，1.07(d，3H)，2.50-2.74(m，1H)，2.98(s，3H)，3.71(d，1H)，5.05(d，1H)，5.78(d，1H)，7.12-7.40(m，5H)。
按照方法30合成下列化合物：
| 方法# | 化合物名称 | m/z |
| 30a | 6-(1-叠氮基-2-甲基-丙基)-5-(4-氟-苄基)-3-甲基-5H-异噻唑并[5，4-d]嘧啶-4-酮 | 373(MH<sup>+</sup>) |
方法31
6-(1-氨基-2-甲基-丙基)-5-苄基-3-甲基-5H-异噻唑并[5，4-d]嘧啶-4-酮
在H2气氛下，向6-(1-叠氮基-2-甲基-丙基)-5-苄基-3-甲基-5H-异噻唑并[5，4-d]嘧啶-4-酮(方法30)(0.5g，1.41mmol)的甲醇(20ml)溶液中，加入5％Pd/C(20％重量)，将所得混合物在室温下进行搅拌，反应进程用MS监控。原料消失后，反应混合物通过硅藻土过滤，用EtOAc洗涤。浓缩滤液，得到6-(1-氨基-2-甲基-丙基)-5-苄基-3-甲基-5H-异噻唑并[5，4-d]嘧啶-4-酮(粘稠油状物)。所得产物直接用于下一反应步骤中而无需进一步纯化。m/z 349(MH+)。
按照方法31合成下列化合物：
| 方法# | 化合物名称 | m/z |
| 31a | 6-(1-氨基-2-甲基-丙基)-5-(4-氟-苄基)-3-甲基-5H-异噻唑并[5，4-d]嘧啶-4-酮 | 367(MH<sup>+</sup>) |
方法32
{3-[1-(5-苄基-3-甲基-4-氧代-4，5-二氢-异噻唑并[5，4-d]嘧啶-6-基)-2-甲基-丙基氨基]-丙基}-氨基甲酸叔丁酯
向6-(1-氨基-2-甲基-丙基)-5-苄基-3-甲基-5H-异噻唑并[5，4-d]嘧啶-4-酮(方法31)的二氯甲烷(30ml)溶液中，加入
分子筛(5g)，然后加入(3-氧代-丙基)-氨基甲酸叔丁酯(1.2当量)，将反应混合物在室温下搅拌3小时，反应进程用MS监控。原料胺消失后，向反应物中加入催化量的乙酸，然后加入三乙酰氧基硼氢化钠(1.2当量)，将反应混合物在室温下搅拌过夜。反应完成(MS)后，将反应混合物过滤，残余物用二氯甲烷洗涤，滤液用水(100ml)、盐水(100ml)洗涤并浓缩，得到产物，所得产物直接用于下一步反应中。m/z 486(MH+)。
按照方法32合成下列化合物：
| 方法# | 化合物名称 | m/z |
| 32a | (3-{1-[5-(4-氟-苄基)-3-甲基-4-氧代-4，5-二氢-异噻唑并[5，4-d]嘧啶-6-基]-2-甲基-丙基氨基}-丙基)-氨基甲酸叔丁酯 | 504(MH<sup>+</sup>) |
方法33
N-(3-氨基-丙基)-N-[1-(5-苄基-3-甲基-4-氧代-4，5-二氢-异噻唑并[5，4-d]嘧啶-6-基)-2-甲基-丙基]-4-甲基-苯甲酰胺
在室温下，向{3-[1-(5-苄基-3-甲基-4-氧代-4，5-二氢-异噻唑并[5，4-d]嘧啶-6-基)-2-甲基-丙基氨基]-丙基}-氨基甲酸叔丁酯(方法31)的吡啶(10ml)溶液中，滴加对甲苯甲酰氯(0.616g，4mmol)的二氯甲烷(10ml)溶液，将所得溶液在室温下搅拌2天。此后，TLC显示大部分SM消失。反应混合物用CH2Cl2(100ml)稀释，用水(2x100ml)、盐水(100ml)洗涤，干燥(Na2SO4)。浓缩有机层，得到产物，所得产物用柱(硅胶)色谱法纯化，使用20-30％EtOAC/己烷作为洗脱液。产量＝0.276g酰胺。将所得酰化产物溶于4M HCl的1，4-二噁烷溶液中，将所得混合物在室温下搅拌20分钟，TLC显示原料完全消失。在旋转蒸发器中浓缩反应混合物，残余物用乙醚研磨。滤出沉淀的产物，用乙醚洗涤，真空干燥，得到N-(3-氨基-丙基)-N-[1-(5-苄基-3-甲基-4-氧代-4，5-二氢-异噻唑并[5，4-d]嘧啶-6-基)-2-甲基-丙基]-4-甲基-苯甲酰胺的盐酸盐(196mg，99％，白色粉末)。mp.139-140℃ m/z 504(MH+)，1H NMR(DMSO-d6300MHz，96℃)δ：0.45(d，3H)，0.90(d，3H)，1.12-1.30(m，1H)，1.46-1.63(m，1H)，2.25(t，2H)，2.36(s，3H)，2.64-2.7(m，1H)，2.68(s，3H)，3.34(t，2H)，5.06(d，1H)，5.59(d，1H)，5.90(d，1H)，7.20-7.40(m，9H)，7.71(bs，3H)。
按照方法33合成下列化合物：
| 方法# | 化合物名称 | m/z |
| 33a | N-(3-氨基-丙基)-N-{1-[5-(4-氟-苄基)-3-甲基-4-氧代-4，5-二氢-异噻唑并[5，4-d]嘧啶-6-基]-2-甲基-丙基}-4-甲基-苯甲酰胺 | 522(MH<sup>+</sup>) |
方法34
3-甲基-5-(3-甲基-丁酰基)-异噁唑-4-甲酰胺
将5-氨基-3-甲基-异噁唑-4-甲酰胺(10g，70mmol)在25ml异戊酸酐中的混合物于110-145℃搅拌1小时。褐色溶液用己烷(500ml)稀释并冷却。从混合物中分离出沉淀的胶状物，用己烷洗涤，真空干燥。得到3-甲基-5-(3-甲基-丁酰基)-异噁唑-4-甲酰胺，为黄色胶状物。所得产物无需进一步纯化就可直接用于方法35中。
方法35
6-异丁基-3-甲基-5H-异噁唑并[5，4-d]嘧啶-4-酮
将3-甲基-5-(3-甲基-丁酰基)-异噁唑-4-甲酰胺(方法34)(分成40个小瓶)在3.5ml 2N NaOH水溶液中的悬浮液于140℃进行微波辐射20分钟。所得溶液用冰浴冷却，用浓盐酸调pH至1～3。滤出固体，用水洗涤，于40℃真空干燥过夜，得到6-异丁基-3-甲基-5H-异噁唑并[5，4-d]嘧啶-4-酮(8g，白色固体)。两步收率为55％。
m/z：208(MH+)，1H NMR(400MHz，DMSO-d6)：0.76(d，6H)，1.95(m，1H)，2.25(s，3H)，2.32(d，2H)，12.55(s，1H)。
方法36
5-苄基-6-异丁基-3-甲基-5H-异噁唑并[5，4-d]嘧啶-4-酮
将6-异丁基-3-甲基-5H-异噁唑并[5，4-d]嘧啶-4-酮(方法35)(5g，24.4mmol)、苄基溴(4.17g，24.4mmol)、碳酸钾(6.7g，48.8mmol)在20ml DMF中的悬浮液在室温下搅拌2天。所得混合物用水稀释，用乙酸乙酯(100ml×3)萃取，合并的有机相经无水硫酸钠干燥，浓缩，用快速柱色谱法纯化(洗脱液：己烷-乙酸乙酯＝7∶1)。得到5-苄基-6-异丁基-3-甲基-5H-异噁唑并[5，4-d]嘧啶-4-酮(3g，10.1mmol，白色固体)(41％)。
m/z：298(MH+)，1H NMR(400MHz，DMSO-d6)：0.90(d，6H)，2.30(m，1H)，2.55(s，3H)，2.75(d，2H)，5.42(s，2H)，7.22-7.43(m，5H)。
按照方法36合成下列化合物：
| 方法# | 化合物名称 | m/z |
| 36a | 5-(4-氟-苄基)-6-异丁基-3-甲基-5H-异噁唑并[5，4-d]嘧啶-4-酮 | 316(MH<sup>+</sup>) |
方法37
5-苄基-6-(1-溴-2-甲基-丙基)-3-甲基-5H-异噁唑并[5，4-d]嘧啶-4-酮
5-苄基-6-异丁基-3-甲基-5H-异噁唑并[5，4-d]嘧啶-4-酮(方法36)(130mg，0.44mmol)和乙酸钠(90mg，1.09mmol，2.5当量)的冰乙酸(2ml)溶液用预先制成的溴溶液(0.7ml溴，溶于10ml冰乙酸)(1.54ml，2mmol)处理。将所得混合物于110-120℃搅拌1天。在110-120℃，每4小时向混合物中加入过量的溴(1.54ml，2mmol)，共两次。向混合物中加入水，然后加入碳酸钾，用二氯甲烷(20ml×3)萃取，合并的有机相用水洗涤，经无水硫酸钠干燥，然后浓缩，得到产物，所得产物用ISCO纯化(洗脱液：己烷-乙酸乙酯)。得到100mg(60％)5-苄基-6-(1-溴-2-甲基-丙基)-3-甲基-5H-异噁唑并[5，4-d]嘧啶-4-酮，为黄色胶状物。
m/z：377(MH+)，1H NMR(400MHz，DMSO-d6)：0.55(d，3H)，1.02(d，3H)，2.48(m，4H)，4.75(d，1H)，5.60(d，1H)，5.70(d，1H)，7.16-7.30(m，5H)。
按照方法37合成下列化合物：
| 方法# | 化合物名称 | m/z |
| 37a | 6-(1-溴-2-甲基-丙基)-5-(4-氟-苄基)-3-甲基-5H-异噁唑并[5，4-d]嘧啶-4-酮 | 396(MH<sup>+</sup>) |
方法38
6-(1-叠氮基-2-甲基-丙基)-5-苄基--3-甲基-5H-异噁唑并[5，4-d]嘧啶-4-酮
将5-苄基-6-(1-溴-2-甲基-丙基)-3-甲基-5H-异噁唑并[5，4-d]嘧啶-4-酮(方法37)(100mg，0.266mmol)和叠氮化钠(34.5mg，0.53mmol)在DMF(2ml)中的悬浮液于60℃搅拌1小时。向混合物中加入水(5ml)，然后用乙酸乙酯(3×20ml)萃取。合并的有机相用盐水(10ml)洗涤，经硫酸钠干燥，浓缩，得到6-(1-叠氮基-2-甲基-丙基)-5-苄基--3-甲基-5H-异噁唑并[5，4-d]嘧啶-4-酮，然后用ISCO进行纯化(己烷-乙酸乙酯)。得到50mg(56％)无色油状物。
m/z：339(MH+)，1H NMR(400MHz，DMSO-d6)：0.60(d，3H)，0.95(d，3H)，2.25(m，1H)，2.45(s，3H)，4.19(d，1H)，5.30(d，1H)，5.42(d，1H)，7.12-7.30(m，5H)。
按照方法38合成下列化合物：
| 方法# | 化合物名称 | m/z |
| 38a | 6-(1-叠氮基-2-甲基-丙基)-5-(4-氟-苄基)-3-甲基-5H-异噁唑并[5，4-d]嘧啶-4-酮 | 357(MH<sup>+</sup>) |
方法39
6-(1-氨基-2-甲基-丙基)-5-苄基-3-甲基-5H-异噁唑并[5，4-d]嘧啶-4-酮
将6-(1-叠氮基-2-甲基-丙基)-5-苄基--3-甲基-5H-异噁唑并[5，4-d]嘧啶-4-酮(方法38)(40mg，1.118mmol)、三苯基膦(62mg，0.237mmol)和水(4μl)在THF中的混合物于60℃搅拌5小时。向混合物中加入过量的水(30μl)，于60℃再搅拌10小时。蒸馏出挥发性溶剂，所得产物用ISCO进行纯化(乙酸乙酯∶己烷＝60％)。得到25mg(68％)6-(1-氨基-2-甲基-丙基)-5-苄基-3-甲基-5H-异噁唑并[5，4-d]嘧啶-4-酮，为无色油状物。
m/z：313(MH+)，1H NMR(400MHz，DMSO-d6)：0.55(d，3H)，0.95(d，3H)，2.02(m，1H)，2.15(br，2H)，2.55(s，3H)，3.59(d，1H)，5.38(d，1H)，5.65(d，1H)，7.25-7.42(m，5H)。
按照方法39合成下列化合物：
| 方法# | 化合物名称 | m/z |
| 39a | 6-(1-氨基-2-甲基-丙基)-5-(4-氟-苄基)-3-甲基-5H-异噁唑并[5，4-d]嘧啶-4-酮 | 331(MH<sup>+</sup>) |
方法40
{3-[1-(5-苄基-3-甲基-4-氧代-4，5-二氢-异噁唑并[5，4-d]嘧啶-6-基)-2-甲基-丙基氨基]-丙基}-氨基甲酸叔丁酯
将6-(1-氨基-2-甲基-丙基)-5-苄基-3-甲基-5H-异噁唑并[5，4-d]嘧啶-4-酮(方法39)(20mg，0.064mmol)和(3-氧代-丙基)-氨基甲酸叔丁酯(11mg，0.064mmol)在二氯甲烷(5ml)中的混合物以及无水MS在室温下搅拌1小时。然后向混合物中加入三乙酰氧基硼氢化钠(2当量)和1滴乙酸。将所得混合物在室温下搅拌1天。所得混合物通过2μ柱子过滤，浓缩滤液，所得混合物用ISCO进行纯化(洗脱液：乙酸乙酯-己烷＝30％～60％)，得到18mg(60％){3-[1-(5-苄基-3-甲基-4-氧代-4，5-二氢-异噁唑并[5，4-d]嘧啶-6-基)-2-甲基-丙基氨基]-丙基}-氨基甲酸叔丁酯，为白色固体。
m/z：470(MH+)，1H NMR(400MHz，DMSO-d6)：0.65(d，3H)，0.80(d，3H)，1.10(m，2H)，1.25(s，9H)，1.32(d，1H)，1.70-1.90(m，2H)，2.18(m，1H)，2.49(s，3H)，2.70(m，2H)，3.48(d，1H)，5.15(d，1H)，5.51(d，1H)，6.55(br，1H)，7.12-7.32(m，5H)。
按照方法40合成下列化合物：
| 方法# | 化合物名称 | m/z |
| 40a | (3-{1-[5-(4-氟-苄基)-3-甲基-4-氧代-4，5-二氢-异噁唑并[5，4-d]嘧啶-6-基]-2-甲基-丙基氨基}-丙基)-氨基甲酸叔丁酯 | 488(MH<sup>+</sup>) |
方法41
{3-[[1-(5-苄基-3-甲基-4-氧代-4，5-二氢-异噁唑并[5，4-d]嘧啶-6-基)-2-甲基-丙基]-(4-甲基-苯甲酰基)-氨基]-丙基}-氨基甲酸叔丁酯
将{3-[1-(5-苄基-3-甲基-4-氧代-4，5-二氢-异噁唑并[5，4-d]嘧啶-6-基)-2-甲基-丙基氨基]-丙基}-氨基甲酸叔丁酯(方法40)(100mg，0.213mmol)的二氯甲烷(4ml)溶液加入到甲苯甲酰氯(66mg，0.426mmol)中，然后加入三乙胺(65mg，0.639mmol)。将所得混合物于30-40℃搅拌2天。然后所得混合物用二氯甲烷稀释，用饱和的碳酸氢钠水溶液洗涤。有机相经硫酸钠干燥，过滤并浓缩。粗制油状物用ISCO进行纯化(溶剂：乙酸乙酯-己烷)，得到{3-[[1-(5-苄基-3-甲基-4-氧代-4，5-二氢-异噁唑并[5，4-d]嘧啶-6-基)-2-甲基-丙基]-(4-甲基-苯甲酰基)-氨基]-丙基}-氨基甲酸叔丁酯(115mg，0.196mmol，白色固体)。m/z：588(MH+)。
按照方法41合成下列化合物：
方法42
N-(3-氨基-丙基)-N-[1-(5-苄基-3-甲基-4-氧代-4，5-二氢-异噁唑并[5，4-d]嘧啶-6-基)-2-甲基-丙基]-4-甲基-苯甲酰胺
将{3-[[1-(5-苄基-3-甲基-4-氧代-4，5-二氢-异噁唑并[5，4-d]嘧啶-6-基)-2-甲基-丙基]-(4-甲基-苯甲酰基)-氨基]-丙基}-氨基甲酸叔丁酯(方法41)(0.2mmol)的3ml 4M HCl的二噁烷溶液在室温下搅拌2小时。
真空蒸馏出溶剂，残余物于40～50℃真空干燥过夜。得到N-(3-氨基-丙基)-N-[1-(5-苄基-3-甲基-4-氧代-4，5-二氢-异噁唑并[5，4-d]嘧啶-6-基)-2-甲基-丙基]-4-甲基-苯甲酰胺的盐酸盐。m/z 488(MH+)，1H NMR(500MHz，100℃，DMSO-d6)：0.48(d，3H)，0.94(d，3H)，1.30(m，1H)，1.60(m，1H)，2.35(m，2H)，2.38(s，3H)，2.58(s，3H)，2.70(m，1H)，3.37(m，2H)，5.11(d，1H)，5.64(d，1H)，5.90(d，1H)，7.23-7.39(m，9H)，7.63(br，3H)。
按照方法42合成下列化合物：
实施例A-1
实施例A1
按照上述合成方案A-1合成下列化合物：
| 实施例 | 化合物 | 1H NMR | m/z | SM |
| A1-1 | N-(3-氨基-丙基)-N-[1-(5-苄基-3-甲基-4-氧代-4，5-二氢-异噻唑并-[5，4-d]嘧啶-6-基)-丙基]-4-甲基-苯甲酰胺盐酸盐 | 1H NMR(DMSO-d63 00MHz，96℃)δ：7.79(bs，3H)，7.37-6.95(m，9H)，5.77(d，1H)，5.50(bs，1H)，4.83(d，1H)，3.36(t，2H)，2.72(s，3H)，2.46(t，2H)，2.39(s，3H)，2.20-2.05(m，1H)，1.96-1.75(m，1H)，1.74-1.40(m，2H)，0.63(t，3H) | m/z490(MH<sup>+</sup>) | 方法11 |
| A1-2 | N-(3-氨基-丙基)-N-{1-[5-(4-氟-苄基)-3-甲基-4-氧代-4，5-二氢-异噻唑并[5，4-d]嘧啶-6-基]-丙基}-4-甲基-苯甲酰胺盐酸盐 | 1H NMR(DMSO-d6 300MHz，96℃)δ：7.76(bs，3H)，7.27-7.05(m，8H)，5.70(d，1H)，5.49(bs，1H)，4.85(d，1H)，3.36(t，2H)，2.99(s，1H)，2.72(s，3H)，2.42(t，2H)，2.34(s，3H)，2.20-2.05(m，1H)，1.98-1.82(m，1H)，1.74-1.38(m，2H)，0.66(t，3H) | m/z 507(MH<sup>+</sup>) | 方法11 |
实施例A-2
实施例A2
按照上述合成方案A-2合成下列化合物：
实施例B
按照上述实施例B合成下列化合物：
实施例C
按照上述合成方案C合成下列化合物：
| 实施例 | 化合物 | 1H NMR | m/z | SM |
| C-1 | N-[1-(5-苄基-3-甲基-4-氧代-4，5-二氢-异噻唑并[5，4-d]嘧啶-6-基)-丙基]-N-(3-羟基-丙基)-4-甲基-苯甲酰胺 | 1H NMR(DMSO-d6 500MHz，96℃)δ：7.40-7.10(m，9H)，5.85(d，1H)，5.69(bs，1H)，5.00(d，1H)，3.37(t，2H)，3.05(bm，2H)，2.77(s，3H)，2.52(s，1H)，2.40(s，3H)，2.16(m，1H)，1.94(m，1H)，1.50-1.40(m，1H)，1.20-1.10(m，1H)，0.71(t，3H) | m/z491(MH<sup>+</sup>) | 方法14 |
| C-2 | 5-苄基-6-{1-[(3-羟基-丙基)-(4-甲基-苄基)-氨基]-丙基}-3-甲基-5H-异噻唑并[5，4-d]嘧啶-4-酮 | 1H NMR(DMSO-d6 500MHz，96℃)δ：7.40-6.85(m，9H)，5.80(d，1H)，5.20(d，1H)，3.80(d，1H)，3.70(m，1H)，3.62(d，1H)，3.50-3.30(m，2H)，2.90(m，1H)，2.75(s，3H)，2.33(m，2H)，2.25(s，3H)，2.20-2.16(m，1H)，1.90-1.80(m，H)，1.50(m，2H)，0.65(t，3H) | m/z477(MH<sup>+</sup>) | 方法17 |
实施例D
按照上述合成方案D合成下列化合物：
实施例E
按照上述合成方案E合成下列化合物：
| 实施例 | 化合物 | 1H NMR | m/z | SM |
| E-1 | N-(3-氨基-丙基)-N-[1-(5-苄基-3-甲基-4-氧代-4，5-二氢-异噻唑并[5，4-d]嘧啶-6-基)-2-甲基-丙基]-4-甲基-苯甲酰胺盐酸盐 | 1H NMR(300MHz，96℃，DMSO-d<sub>6</sub>)δ：7.71(bs，3H)，7.20-7.40(m，9H)，5.90(d，1H)，5.59(d，1H)，5.06(d，1H)，3.34(t，2H)，2.68(s，3H)，2.642.7(m，1H)，2.36(s，3H)，2.25(t，2H)，1.46-1.63(m，1H)，1.12-1.30(m，1H)，0.90(d，3H)，0.45(d，3H) | m/z 504(MH<sup>+</sup>) | 方法33 |
| E-2 | N-(3-氨基-丙基)-N-{1-[5-(4-氟-苄基)-3-甲基-4-氧代-4，5-二氢-异噻唑并[5，4-d]嘧啶-6-基]-2-甲基-丙基}-4-甲基-苯甲酰胺盐酸盐 | 1H NMR(300MHz，96℃，DMSO-d<sub>6</sub>)δ：7.12-7.67(m，11H)，5.86(d，1H)，5.57(d，1H)，5.04(d，1H)，3.35(t，2H)，2.75(s，3H)，2.66-2.72(m，1H)，2.36(s，3H)，2.27(t，2H)，1.44-1.56(m，1H)，1.10-1.28(m，1H)，0.92(d，3H)，0.47(d，3H) | m/z 522(MH<sup>+</sup>) | 方法33 |
实施例F
按照上述合成方案F合成下列化合物：
实用性
本发明的化合物通过抑制微管发动蛋白HsEg5而在治疗瘤性疾病中具有实用性。治疗方法靶向Eg5活性，Eg5活性是有丝分裂纺锤体的形成所需要的，因此也是细胞分裂所需要的。因此，Eg5的抑制剂已经显示出能阻断处于有丝分裂中期的细胞，导致效应细胞凋亡，从而具有抗增殖效应。因此，Eg5抑制剂用作细胞分裂调节剂，预期对诸如以下的瘤性疾病具有活性：乳腺癌、卵巢癌、肺癌、结肠癌、前列腺癌或其它组织的癌以及白血病和淋巴瘤、中枢神经系统和周围神经系统的肿瘤、及其它肿瘤类型例如黑素瘤、纤维肉瘤和骨肉瘤。预期Eg5抑制剂也可用于治疗其它增殖性疾病，包括但不限于自身免疫病、炎性疾病、神经性疾病和心血管疾病。
根据本文所述的孔雀石绿(Malachite Green)试验的测定，已经证明本发明化合物能抑制Eg5。
本发明提供的化合物应当也可用作测定潜在药物抑制Eg5的能力的标准品和试剂。这些将会在包含本发明化合物的商业试剂盒中提供。
试验
孔雀石绿试验
采用孔雀石绿试验，测定Eg5发动蛋白的酶活性及抑制剂的效果，该试验测定从ATP释放的磷酸酯，并且先前已经用于测定驱动蛋白相关性发动蛋白的活性(Hackney和Jiang，2001)。酶是重组HsEg5发动蛋白结构域(氨基酸1-369-8His)，并以6nM的终浓度加入到100μl反应物中。缓冲液由25mM PIPES/KOH pH6.8、2mM MgCl2、1mMEGTA、1mM dtt、0.01％Triton X-100和5μM紫杉醇组成。孔雀石绿/钼酸铵试剂如下制备：对于最终体积800ml，将0.27g孔雀石绿(J.T.Baker)溶于聚丙烯瓶中的600ml H2O中。将8.4g钼酸铵(Sigma)溶于200ml 4N HCl中。将所得溶液混合20分钟，通过0.02μm滤器直接过滤到聚丙烯容器中。
将用12％DMSO稀释的5μl化合物加入到96孔板的各孔中。每孔加入80μl用上述缓冲液稀释的酶溶液，与化合物一起孵育20分钟。该预孵育后，向各孔中加入15μl缓冲液中含有2mM ATP(终浓度：300μM)和6.053μM聚合微管蛋白(终浓度：908nM)的底物溶液，以起始反应。在室温下，将反应物混合并正好孵育20分钟。然后通过加入150μl孔雀石绿/钼酸铵试剂猝灭反应物，用SpectramaxPlus读板器(Molecular Devices)，读出猝灭后正好5分钟的650nm吸光度。将数据绘成图，运用ExCel Fit(Microsoft)计算出IC50。
Claims (23)
1.一种具有以下结构式(I)的化合物或其药物可接受的盐：
其中，
A为C＝O、CH2或SO2；
B代表烷基；
D为O或N，其中O任选被一个R8取代，其中N任选被一个或多个R8取代，并且当n为0而m不为0时，R8直接连接到B；
R1和R2结合在一起形成稠合异噻唑或稠合异噁唑，其中所述异噻唑或异噁唑任选被1个或2个C1-6烷基取代；
R3为C5-7芳基，其任选被独立选自F、Cl、Br和I的基团取代；
R4和R5均为H；
R6和R7独立选自H或烷基；
R8独立选自H、烷基、环烷基和杂环基；
R9独立选自芳基或杂环基，其中所述芳基或杂环任选被1个或2个独立选自F、Cl、Br、I、C1-6烷基或C1-6烷氧基的基团取代。
2.权利要求1的化合物或其药物可接受的盐，其中A为C＝O或CH2。
3.权利要求1的化合物或其药物可接受的盐，其中A为C＝O。
4.权利要求1的化合物或其药物可接受的盐，其中B为C1-4烷基。
5.权利要求1的化合物或其药物可接受的盐，其中B为C1-4烷基，n为0，而且R8独立选自氮杂环丁烷、吡咯烷或哌啶。
6.权利要求1的化合物或其药物可接受的盐，其中D为O而且任选被一个R8取代。
7.权利要求1的化合物或其药物可接受的盐，其中D为N而且任选被一个或多个R8取代。
8.权利要求1的化合物或其药物可接受的盐，其中R1和R2结合在一起形成稠合异噻唑，其任选被1个或2个选自C1-6烷基的取代基取代。
9.权利要求1的化合物或其药物可接受的盐，其中R3为任选被独立选自F、Cl、Br和I的取代基取代的苯基。
10.权利要求1的化合物或其药物可接受的盐，其中R6和R7独立选自H或C1-6烷基。
11.权利要求1的化合物或其药物可接受的盐，其中R8独立选自H、烷基或杂环基。
12.权利要求1的化合物或其药物可接受的盐，其中R9为芳基或杂环基，其中任一个任选被1个或2个取代基取代，其中所述取代基独立选自-C1-6烷基、-OC1-6烷基、F、Cl、Br、I。
13.权利要求1的化合物或其药物可接受的盐，其中R9为任选被1个或2个取代基取代的C5-7芳基，其中所述取代基独立选自-C1-6烷基、-OC1-6烷基、F、Cl、Br或I。
14.权利要求1的化合物或其药物可接受的盐，其中：
n为1；
A为CO或CH2；
B为C1-6烷基；
D为N或O；
R1和R2结合在一起形成稠合的异噻唑或异噁唑，其中所述异噻唑或异噁唑任选被1个C1-6烷基取代；
R3为任选被独立选自F、Cl、Br和I的取代基取代的苯基；
R4和R5为H；
R6和R7为H或烷基；
R8为H或C1-6烷基；
R9为任选被1个或2个独立选自F、Cl、Br、I、C1-6烷基或C1-6烷氧基的取代基取代的苯基。
15.一种权利要求1的化合物或其药物可接受的盐，它选自：
1)N-(3-氨基-丙基)-N-{1-[5-(4-氟-苄基)-3-甲基-4-氧代-4，5-二氢-异噻唑并[5，4-d]嘧啶-6-基]-丙基}-4-甲基-苯甲酰胺；
2)N-(3-氨基-丙基)-N-[1-(5-苄基-3-甲基-4-氧代-4，5-二氢-异噻唑并[5，4-d]嘧啶-6-基)-丙基]-4-溴-苯甲酰胺；
3)N-(3-氨基-丙基)-N-[1-(5-苄基-3-甲基-4-氧代-4，5-二氢-异噻唑并[5，4-d]嘧啶-6-基)-丙基]-4-氯-苯甲酰胺；
4)N-(3-氨基-丙基)-N-[1-(5-苄基-3-甲基-4-氧代-4，5-二氢-异噻唑并[5，4-d]嘧啶-6-基)-丙基]-3-氟-4-甲基-苯甲酰胺；
5)N-(3-氨基-丙基)-N-[1-(5-苄基-3-甲基-4-氧代-4，5-二氢-异噻唑并[5，4-d]嘧啶-6-基)-丙基]-2，3-二氯-苯甲酰胺；
6)萘-2-甲酸(3-氨基-丙基)-[1-(5-苄基-3-甲基-4-氧代-4，5-二氢-异噻唑并[5，4-d]嘧啶-6-基)-丙基]-酰胺；
7)苯并[b]噻吩-2-甲酸(3-氨基-丙基)-[1-(5-苄基-3-甲基-4-氧代-4，5-二氢-异噻唑并[5，4-d]嘧啶-6-基)-丙基]-酰胺；
8)N-氮杂环丁烷-3-基甲基-N-[1-(5-苄基-3-甲基-4-氧代-4，5-二氢-异噻唑并[5，4-d]嘧啶-6-基)-丙基]-4-甲基-苯甲酰胺；
9)N-[1-(5-苄基-3-甲基-4-氧代-4，5-二氢-异噻唑并[5，4-d]嘧啶-6-基)-丙基]4-甲基-N-哌啶-3-基甲基-苯甲酰胺；
10)N-(2-氨基-乙基)-N-[1-(5-苄基-3-甲基-4-氧代-4，5-二氢-异噻唑并[5，4-d]嘧啶-6-基)-丙基]-4-甲基-苯甲酰胺；
11)N-[1-(5-苄基-3-甲基-4-氧代-4，5-二氢-异噻唑并[5，4-d]嘧啶-6-基)-丙基]-N-(2-二甲氨基-乙基)-4-甲基-苯甲酰胺；
12)N-[1-(5-苄基-3-甲基-4-氧代-4，5-二氢-异噻唑并[5，4-d]嘧啶-6-基)-丙基]-N-(3-二甲氨基-丙基)-4-甲基-苯甲酰胺；
13)N-[1-(5-苄基-3-甲基-4-氧代-4，5-二氢-异噻唑并[5，4-d]嘧啶-6-基)丙基]-N-[3-(异丙基氨基)丙基]-4-甲基苯甲酰胺；
14)N-[1-(5-苄基-3-甲基-4-氧代-4，5-二氢-异噻唑并[5，4-d]嘧啶-6-基)丙基]-N-[3-(环丙基氨基)丙基]-4-甲基苯甲酰胺；
15)N-(3-氮杂环丁烷-1-基丙基)-N-[1-(5-苄基-3-甲基-4-氧代-4，5-二氢-异噻唑并[5，4-d]嘧啶-6-基)丙基]-4-甲基苯甲酰胺；
16)N-[1-(5-苄基-3-甲基-4-氧代-4，5-二氢-异噻唑并[5，4-d]嘧啶-6-基)丙基]-4-甲基-N-[3-(3-吡咯烷-1-基丙基)苯甲酰胺；
17)N-[1-(5-苄基-3-甲基-4-氧代-4，5-二氢-异噻唑并[5，4-d]嘧啶-6-基)丙基]-4-甲基-N-[3-(甲基氨基)丙基]苯甲酰胺；
18)N-[1-(5-苄基-3-甲基-4-氧代-4，5-二氢-异噻唑并[5，4-d]嘧啶-6-基)-丙基]-N-(3-羟基-丙基)-4-甲基-苯甲酰胺；
19)N-(3-氨基-丙基)-N-[1-(5-苄基-3-甲基-4-氧代-4，5-二氢-异噻唑并[5，4-d]嘧啶-6-基)-丙基]-4-甲基-苯甲酰胺；
20)N-(3-氨基-丙基)-N-[1-(5-苄基-3-甲基-4-氧代-4，5-二氢-异噻唑并[5，4-d]嘧啶-6-基)-2-甲基-丙基]-4-甲基-苯甲酰胺；
21)N-(3-氨基-丙基)-N-{1-[5-(4-氟-苄基)-3-甲基-4-氧代-4，5-二氢-异噻唑并[5，4-d]嘧啶-6-基]-2-甲基-丙基}-4-甲基-苯甲酰胺；
22)5-苄基-6-{1-[(3-羟基-丙基)-(4-甲基-苄基)-氨基]-丙基}-3-甲基-5H-异噻唑并[5，4-d]嘧啶-4-酮；
23)N-(3-氨基-丙基)-N-{1-[5-(4-氟-苄基)-3-甲基-4-氧代-4，5-二氢-异噁唑并[5，4-d]嘧啶-6-基]-2-甲基-丙基}-4-甲基-苯甲酰胺；
24)N-(3-氨基-丙基)-3-氟-N-{1-[5-(4-氟-苄基)-3-甲基-4-氧代-4，5-二氢-异噁唑并[5，4-d]嘧啶-6-基]-2-甲基-丙基}-4-甲基-苯甲酰胺；
25)N-(3-氨基-丙基)-N-[1-(5-苄基-3-甲基-4-氧代-4，5-二氢-异噁唑并[5，4-d]嘧啶-6-基)-2-甲基-丙基]-3-氟-4-甲基-苯甲酰胺；
26)N-(3-氨基-丙基)-N-[1-(5-苄基-3-甲基-4-氧代-4，5-二氢-异噁唑并[5，4-d]嘧啶-6-基)-2-甲基-丙基]-4-甲基-苯甲酰胺；
27)N-(3-氨基-丙基)-N-[1-(5-苄基-3-甲基-4-氧代-4，5-二氢-异噁唑并[5，4-d]嘧啶-6-基)-丙基]-4-甲基-苯甲酰胺；
28)N-(3-氨基-丙基)-N-[1-(5-苄基-3-甲基-4-氧代-4，5-二氢-异噁唑并[5，4-d]嘧啶-6-基)-丙基]-4-氟-苯甲酰胺；
29)N-(3-氨基-丙基)-N-[1-(5-苄基-3-甲基-4-氧代-4，5-二氢-异噁唑并[5，4-d]嘧啶-6-基)-丙基]-2，3-二氯-苯甲酰胺；
30)N-(3-氨基-丙基)-N-[1-(5-苄基-3-甲基-4-氧代-4，5-二氢-异噁唑并[5，4-d]嘧啶-6-基)-丙基]-3-氟-4-甲基-苯甲酰胺；
31)N-(3-氨基-丙基)-N-[1-(5-苄基-3-甲基-4-氧代-4，5-二氢-异噁唑并[5，4-d]嘧啶-6-基)-丙基]-4-甲氧基-苯甲酰胺。
16.权利要求6的化合物，其中R8为H。
17.权利要求7的化合物，其中-(D)n-(R8)m选自NH2、-NCH3、-(CH3)2、-N-环丙烷、-N环丁烷。
18.权利要求1的化合物或其药学上可接受的盐，其中R1和R2一起形成稠合异噁唑，其任选被1个或2个选自C1-6烷基的取代基取代。
19.权利要求1的化合物或其药学上可接受的盐，其中R9为苯基，其任选被1个或2个取代基取代，其中所述取代基独立选自-C1-6烷基、-OC1-6烷基、F、Cl、Br或I。
20.权利要求1-19中任一项限定的化合物或其药物可接受的盐在制备用于治疗或预防癌相关性疾病的药物中的用途。
21.一种药物组合物，所述组合物包含权利要求1-19中任一项限定的化合物或其药物可接受的盐以及至少一种药物可接受的载体、稀释剂或赋形剂。
22.权利要求1-19中任一项限定的化合物或其药物可接受的盐在制备用于在温血动物产生抗细胞增殖的细胞周期抑制效应的药物中的用途。
23.权利要求22的用途，其中所述温血动物为人。
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