CN1644043A - 鲎人工育苗方法 - Google Patents

Abstract

鲎人工育苗方法，涉及一种人工育苗方法，尤其是涉及一种鲎的人工育苗方法。提供一种可应用于大规模生产的鲎人工育苗方法。具体步骤为人工授精，将鲎卵子与含有精子的体液混合，静置至受精；受精卵的孵育，将受精卵孵化，气泵充氧，至孵化为一龄幼鲎；幼鲎的饲养，将一龄幼鲎在温度20～24℃下饲养，氧气泵充气；喂养期间每天换过滤海水一次。采用鲎人工育苗技术向海区投放鲎幼苗是目前保护鲎免于灭绝，快速恢复种群数量最有效的措施，应尽量大力推广，使鲎这珍贵的活化石得到保护，并让鲎为人类造福。

Description

鲎人工育苗方法

技术领域

本发明涉及一种人工育苗方法，尤其是涉及一种鲎的人工育苗方法。

背景技术

鲎亦称马蹄蟹(horseshoe crab)，属节肢动物门(Arthropoda)，肢口纲(Merostomata)，剑尾目(Xiphosurida)，鲎科(Limuroidea)。根据其形态和分布特点，目前世界现存的鲎可分为二亚科三属四种，其中Limulinae亚科仅有美洲鲎属(Limulus)，美洲鲎(Limuluspolyphemus)一种，分布于北美东海岸水域；而Tachypleinae亚科有两属，分布于亚洲东南岸及东岸沿海水域，其中东方鲎属(Tachypleus)有两种：东方鲎(Tachypleustridentatus)(亦称三刺鲎、中国鲎或日本鲎)和南方鲎(Tachypleus gigas)(亦称巨鲎)；蝎鲎属(Carcinoscorpius)仅一种圆尾鲎(Carcinoscorpius rotundicauda)鲎是一种生活在海详中的大型节肢动物，具有十分重要的经济价值和科学意义。

从进化的观点，在胚胎发育中，幼鲎没有尾剑，身体纵向分成中央和两侧三个部分，很像三叶虫的成虫，所以被称作三叶幼虫。这说明鲎与三叶虫有着亲缘关系。因此，鲎是一类与三叶虫(现在只有化石)一样古老的动物。鲎的祖先出现在地质历史时期古生代的奥陶纪，当时恐龙尚未崛起，原始鱼类刚刚问世，随着时间的推移，与它同时代的动物或者进化，或者灭绝，而惟独只有鲎从4亿多年前问世至今，仍然保留着它原始而古老的相貌，所以鲎有“活化石”之称；另外，鲎血蓝蛋白代表动物界三种呼吸蛋白起源的一个重要分支，所以它是研究动物进化史的珍贵材料，备受动物学家的青睐，因而具有重要的科学研究价值。

鲎的药用价值，古代就有记载。历史上最早记录鲎的文献是我国的《吴都赋》(一本有关古代吴国的长叙事史诗，周氏编于公元276年～324年)。后来，鲎作为一种中草药记录于各种中草药书中，譬如《饲料本草》(一本收集药用动植物的书，陈章奇编于公元739年)。《本草纲目拾遗》及李时珍的《本草纲目》中对鲎均有记载。其中，《本草纲目》中提到，鲎壳治积年呷嗽。《本草纲目拾遗》中提到：鲎尾灰断产后痢。

我国最近出版的很多药物学和药用海洋生物的书，认为中国鲎具有以下药物作用：肉：辛、咸、平，清热解毒，可明目，治青光眼，脓泡疮。壳：成、平，有活血祛瘀、解毒作用；含溴、铁、锌、铜、镍、锰、钙、钛、氯、硫、硅、铝、镁等元素；主治跌打损伤、创伤出血、烫伤、疮疖。尾：咸、温，有收敛止血功效，用于治肺结核咯血、疮疖。

经4亿多年漫长的沧桑岁月的物竞天择，鲎蓝色血液蕴藏着许多功能特殊的生化活性物质，目前发现的已经超过50多种。鲎试剂就是利用鲎的蓝色血液中的变形细胞溶解物(limulus amebocytes lysate，LAL)作为试剂，用以检测微量细菌内毒素(亦称脂多糖，LPS)的一种生物学测试法。它具有操作简便、灵敏度高、特异性强、反应迅速以及有利于批试验等优点。它不但可以简易快速地检测出由细菌内毒素所造成的淋病和脑膜炎等疾病，也广泛应用于临床各种体液(如脑脊液、血液、尿液、痰液、胸腹水等)的内毒素检查以及各种药物、水质、食品中细菌污染情况的检测，因此鲎试剂成为国际上价格昂贵，又十分热门的商品，具有十分广泛的市场。

近年，研究还发现，从鲎血细胞提取的鲎素具有显着抗菌、抗肿瘤及抗病毒等活性。目前已从鲎血淋巴分离提取具有十分重要生物活性的组份T₁。经临床实验证明，T₁具有强烈抗革兰氏阴性及革兰氏阳性细菌的活性，尤其对金黄色葡萄球菌更为敏感，其最小致死量为8.28-10.40μg/ml之间，因此，很有希望开发一种新的广谱的抗菌素，以取代目前广泛产生耐药性的抗菌素。

研究表明，从鲎血淋巴分离提取具有显著抗肿瘤活性的化学组份Tx，并经体内体外实验表明，该组份对人早幼粒白血病HL-60细胞、胃癌BGC-823细胞、肺癌细胞以及SMMC-7721肝癌细胞具有显著的抑制及诱导分化的作用。见CN 01104850.6号专利申请。

现在还从鲎血淋巴分离提取具有广谱性抗病毒的组份T-22。经临术实验证明，T-22特别具有明显抗HTV病毒的药效。其活性比目前美国用于治疗艾滋病的AZT药效强数十倍。美国《科学》杂志评出的1996年十大科学突破中将“对付艾滋病的新武器”列为第一项。而T-22就是文中所提的“科学家们还发现一种能够抑制艾滋病的天然多肽分子”的一种多肽分子。因此，从鲎血淋巴中开发抗艾滋病药物前景十分良好。由于鲎素是一大家族，因而使之成为一种具有巨大医药开发潜力的重要资源，而为世界各国高技术产业所瞩目。

另外，鲎的肉可食用，其味鲜美如蟹，厦门人素有喜食鲎肉的习惯，市场供不应求，价格又高，潜力很大。

鲎甲壳不仅可以制成生活器具，如用鲎外壳制成的舀取东西的鲎勺，是早先家庭及豆腐作坊必备的工具；鲎壳还可以用于提取甲壳素和几丁聚糖，甲壳素可用于生产人造皮肤，几丁聚糖被定为在蛋白质、糖、脂肪、维生素和矿物质五大生命要素之后的第六生命要素，具有广泛的保健功能，被称为“人体免疫卫士”、“21世纪有希望的健康食品”。

鲎卵富含卵黄，是候鸟迁移时重要的能量来源，在厦门鲎卵也可为白鹭栖息提供美食，可以解决白鹭保护与养殖争食的矛盾。

鲎的复眼可以加強所看到图像的反差。人们利用此一原理设计新的电视，提高电视的清晰度。有些可以在黑暗中摄取影像的摄像机就是根据鲎的视觉原理制造的。鲎的视神经系统结构微妙、功能奇特，是生理学和仿生学研究的重要模型，成为提供研究神经系统影响动物行为的最佳例子，也是大脑能够调控视网膜敏感度的最佳模型。1967年美国科学家哈特莱恩(H.K.Hartline)等人，成功揭示鲎视神经功能而获得诺贝尔生理或医学奖。

鲎的形态奇特，披盔戴甲，民间俗称海怪，是一种人们喜爱的重要而难见的观赏动物。因此可以说，鲎全身是宝，是一种珍贵的海洋资源。一方面，鲎是珍贵的活化石，全身是宝。另一方面，由于鲎的胚胎发育周期长，从受精发育为成鲎需经13-15年。近年来由于鲎试剂生产及人们食用的需求，每年捕杀鲎不计其数。这种杀鸡取卵式的狂杀滥捕一方面使鲎数量锐减，另方面从根本上切断鲎自然繁殖最重要的环节，使得每年洄游到厦门的鲎有来无回。往年春夏之交，厦门海滩随处可见成对鲎徜徉沙滩交配受精的情景已经消失了。据调查，厦门原是我国鲎的主要产区。在20世纪80年代前，鲎资源为厦门自行生产鲎试剂、减少外汇支出作出了重要贡献。然而，从八十年代起，随着厦门市滩涂经济和旅游业的发展，厦门海滩生态环境急剧恶化，鲎把卵排到沙滩受精孵化的习性也受到人类活动的严重威胁。随着鲎的科研和医用价值的日益提高，预计鲎肉将发展成为一种需求量很大的药膳食品。这又将刺激对鲎的需求量，照此下去，厦门鲎资源将面临灭绝的境地。据调查，厦门目前鲎的数量已经很少，20世纪90年代厦门鲎比20世纪50年代减少了80％~90％，现在更是难觅踪迹。现在市场上的鲎主要来自两广地区。因此，采取措施，保护鲎资源，已经是刻不容缓了。

鲎资源已面临灭绝的境地。当前仅依靠建立鲎自然保护区让鲎自然繁衍生息来达到恢复鲎的种群需要十分漫长的年月。因此，大规模人工育苗和人工放流是当前最理想，最有战略意义的保护鲎资源的措施。

人工繁殖生产的鲎苗除了放流增殖外，还可以养殖成为成鲎，供各种需要；另方面，还可利用所其特独的形态结构，辟为专门旅游景点，供游客观赏；其次，其幼苗可作观赏动物，供应旅游市场；再者，所养成的成鲎抽完血之后肉可加工成食品，鲎甲壳可开发生产几丁聚糖。几丁聚糖是继蛋白质、脂肪、糖、维生素和矿物质人体不可缺少的生命五大要素之后，被称为第六要素，它具有重要的保健伤病功能。因此，鲎的开发利用可以成为一条龙、全面发展、可持续发展的产业。因此，建立鲎繁殖生产基地，并将这当成一个产业加以开发利用将会取得巨大的经济效益和社会效益。

有关鲎人工授精已有报道，参见文献：洪水根2002年3月在厦门大学学报(自然科学版)第41卷第2期发表《中国鲎胚胎发育研究》报道过。这些研究主要适用于实验室研究鲎胚胎过程的特点和规律，无法应用于大规模的人工育苗，以解决苗种问题。

发明内容

本发明旨在提供一种可应用于大规模生产的鲎人工育苗方法。

本发明的具体步骤为

1.人工授精

将鲎卵子与含有精子的体液混合，静置至受精。

2.受精卵的孵育

将受精卵孵化，温度为28～30℃，盐度1.010～1.020，pH8.0～8.2，气泵充氧，至孵化为一龄幼鲎。

3.幼鲎的饲养

将一龄幼鲎在温度20～24℃下饲养，氧气泵充气；饲料选自轮虫，当剑尾长出后喂养饲料选自丰年虫，每天换过滤海水一次。

采用鲎人工育苗技术向海区投放鲎幼苗是目前保护鲎免于灭绝，快速恢复种群数量最有效的措施，应尽量大力推广，使鲎这珍贵的活化石得到保护，并让鲎为人类造福。

具体实施方式

以下实施例对本发明作进一步的说明。

(1)亲鲎的选择

选择成熟度好的亲鲎是人工授精成功的关键。用海水把雌雄成鲎刷洗干净。

翻开雌鲎腹部生殖盖板，可见一对生殖厣，用手挤压生殖孔，若有成熟的卵排出，该雌鲎即可留用授精。

翻开雄鲎腹部生殖盖板，用注射器从生殖孔抽取血淋巴液(内含精液)，滴于载玻片上，加等量海水，盖上玻片，置于高倍镜下观察，确认有大量游动的精子，该雄即可留用。如果反复做标本3～5次还是在视野中观察不到游动精子，该鲎即弃去不能用。另选雄鲎再作检查。

(2)卵子的收集

用剪刀从腹部附肢基部截去附肢，让体液快速流出。用过滤海水洗去体液后，切开头胸部腹面周缘甲壳，将腹腔大量的卵取出置于盛有海水的塑料箱。用镊子仔细清除混杂在卵子中的肝脏、黄色结缔组织及不良卵子。反复用过滤海水清洗，直至海水不再混浊。然后将卵平铺于盛有海水的洁净塑料箱中，以备授精之用。由于雌鲎体液有抑制受精的作用，所以应尽量洗净残存的雌鲎体液。清洗时动作应轻柔，注意防止伤及卵子。

(3)精子的采集

采精与采卵同时或稍后进行。用剪刀或解剖刀从雄鲎头胸部附肢的基部切掉附肢，让体液快速流出。精子即混在流出的体液中，用盛有过滤海水的大烧杯盛之，用玻棒轻微搅拌，使之混合均习，后用多层纱布过滤，滤去血凝块及组织块。

(4)人工授精

迅速把经纱布过滤过的雄鲎体液倒入铺有卵的塑料箱中，用玻棒轻轻搅拌使卵子与含有精子的体液充分混合，静置数小时，受精即完成。

2.受精卵的孵育

受精后第2天起，每天早晚各换过滤新鲜海水1次。孵化温度控制在29℃，盐度1.020，pH 8.2，气泵充氧。换水时，注意挑去变绿坏死的卵。

受精卵经卵裂6天进入囊胚期，17天为附肢原基形成期，20天形成第1次胚内蜕皮的胚，27天形成第2次胚内蜕皮的胚，34天形成第3次胚内蜕皮的胚，46天形成第4次胚内蜕皮的胚，47天孵化为一龄幼鲎，170天发育为二龄幼鲎，剑尾长出。

3.幼鲎的饲养

孵出的一龄幼鲎在22℃用塑料桶饲养，氧气泵充气。每天喂养轮虫，当剑尾长出喂养丰年虫，每天换过滤海水一次。

4.放流增殖

隔年春夏之交选择具有沙滩和滩涂将二龄幼鲎进行放流，利用天然海区作养殖场，定期到放流海区采集水样，记录放流幼鲎成活率。

实施例2

与实施例1类似，其区别在于将受精卵孵化的温度控制在28℃，盐度为1.010，pH8.0。孵出的一龄幼鲎在24℃用塑料桶饲养，氧气泵充气。

实施例3

与实施例1类似，其区别在于将受精卵孵化的温度控制在30℃，盐度为1.015，pH8.1。孵出的一龄幼鲎在20℃用塑料桶饲养，氧气泵充气。

Claims (1)

1、鲎人工育苗方法，其特征在于其具体步骤为

1)人工授精：将鲎卵子与含有精子的体液混合，静置至受精；

2)受精卵的孵育：将受精卵孵化，温度为28～30℃，盐度1.010～1.020，pH8.0～8.2，气泵充氧，至孵化为一龄幼鲎；

3)幼鲎的饲养：将一龄幼鲎在温度20～24℃下饲养，氧气泵充气；饲料选自轮虫，当剑尾长出后喂养，饲料选自丰年虫，每天换过滤海水一次。