CN1522752A - 动物脑提取物和苦瓜提取物的组合物及其应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种动物脑中提取的神经活性物质和苦瓜提取物组成的药物、保健品和食品及其在延缓衰老、改善记忆、治疗和预防糖尿病及其并发症的应用。干净的动物脑,用Hank液浸泡,搅碎,离心后,沉淀用Hank液洗2遍,用蔗糖PBS重悬、抽提、离心,收集上层与中间层之间的物质。将所得物用加5%的胆酸的PBS浸泡,匀浆后,在4℃下离心,上清过GST柱,用谷光苷肽洗液洗脱,收得以脑源性神经营养因子为主要成分的神经活性物质,用环糊精包裹。将动物脑提取物(主要成分为脑源性神经营养因子、神经节苷脂)和苦瓜提取物按比例组成组合物。
Description
技术领域
本发明涉及一种治疗神经系统疾病的脑提取神经活性物质,具体地说涉及神经营养因子(BDNF)、神经节苷脂(Ganglioside)、和苦瓜提取物的复方药物、保健品和食品。
背景技术
神经节苷脂是主要存在于哺乳动物的脑灰质,是神经元膜的特征性成分。目前认为细胞膜上的神经节苷脂类物质的变化对调节神经元和细胞内外信息的传递有重要意义。研究表明,外原性神经节苷脂于细胞膜结合后能增加神经生长因子的功能,促进神经生长,加速神经功能的恢复。增加感觉神经、交感神经和中枢胆碱能神经元轴索生长的营养作用。动物实验表明,神经节苷脂具有周围神经镇痛作用。临床实验表明,神经节苷脂对糖尿病周围神经病变有一定的疗效。
在中枢神经损伤修复中有重要的作用,自最早发现神经生长因子NGF以来,陆续发现了许多神经营养因子,它们对特定的神经元的发育及神经系统发育成熟后对维持神经元的存活及功能起重要作用。脑源性神经营养因子(BDNF)对损伤的黑质纹状体的神经元、视网膜节细胞以及脊髓运动神经元有修复作用,为巴金森氏病、视网膜损伤、萎缩及肌萎缩侧索硬化症等疾病的治疗提供了可能。
目前已有成熟的从动物组织中提取、分离纯化以神经节苷脂主要成分的脑活性物质的技术。其中,以神经节苷脂为主要成分的保健品脑力键在1996年就已经获得了国家卫生部的批准。
苦瓜为葫芦科植物苦瓜的果实,全国各地均有栽培,又名锦荔子,癞葡萄,癞瓜,是药食两用的食疗佳品。明代医学家李时珍在其巨著《本草纲目》中称赞“苦瓜味苦,性寒凉,无毒,具有除邪热,解疲乏,清心明目,益气壮阳之功。”因此,苦瓜是炎夏人们健身、消暑、开胃的药食佳蔬。据测定,每500克苦瓜含维生素C420mg,比菜瓜、丝瓜高10-20倍,每日吃100克生苦瓜就能获得全天所需要的维生素C;此外,还含有蛋白质4.5g、糖15g、钙90mg、磷145mg、铁3mg。
苦瓜入药疗疾亦堪称上品,尤其对糖尿病的治疗效果甚佳,被人们誉为“植物胰岛素”。药理分析表明,苦瓜含苦瓜多肽类物质(每百克苦瓜含多肽类物质25mg)、多种氨基酸及果胶等。印度的科研人员研究发现苦瓜多肽类物质有明显的降低血糖的作用,动物实验证实,类胰岛素物质不仅可使严重糖尿病动物的血糖下降,使它恢复正常,而且不论注射、口服疗效都相同;我国北京大学医学院的科研人员研究发现,苦瓜多肽类物质有快速降糖,调节胰岛功能,修复B细胞,增加胰岛素的敏感性,预防改善并发症,调节血脂,提高免疫力的作用。
很多专利公开了以苦瓜提取物为主要原料或添加剂制成的中药药品、保健品和食品。如《一种苦瓜降糖胶囊及其制备工艺》申请号:98102198-0
上述专利和文献所披露的分别以神经节苷脂为主要活性成分的脑提取活性物质和苦瓜提取物为主要成分的药物、保健品和食品均忽略了这两种成分连用后,在各自用量减少的情况下,呈现的相互的协同作用,其功效未能充分发挥。因此,提供一种能够发挥协同效应的以神经节苷脂、神经营养因子为主要成分的脑提取活性物和苦瓜提取物的组合物是十分必要的。
发明内容
本发明需要解决的技术问题之一是提供一种以神经营养因子、神经节苷脂为主要成分的脑提取活性物质和苦瓜提取物配制的药物、保健品和食品,以克服现有技术作用单一的缺陷,使其功效比其任何单一成分的制品,具有更显著的增强学习和记忆功能。
本发明需要解决的技术问题之二是公开一种分离脑源性神经因子的方法。
本发明需要解决的技术问题之三是公开上述的药物、保健品和食品在制备预防和治疗糖尿病及其并发症的制品中的应用。
神经系统包括中枢神经系统和周围神经系统。人体各体统及其功能均受神经系统的影响和支配,因此神经系统是人体最重要的系统。神经系统的疾病给病人带来极大的痛苦。糖尿病是一种内分泌失调的代谢性疾病,表现为以血糖升高为主要指标,伴有蛋白质和脂肪代谢紊乱。随着病程的延长可以并发许多其他疾病,整体上可以分为神经系统疾病和血管的病变,研究表明,患病3年的糖尿病人中,有70%的病人已经出现早期的神经病变。两者中神经病变是关键,因为神经病变使神经系统功能紊乱,影响血管正常的收缩和舒张,同时通过影响NOS的活性,进一步影响循环功能,从而并发一系列的疾病,如神经性膀胱炎、糖尿病足、糖尿病性白内障等,给病人造成极大的痛苦。随着生活水平的提高,糖尿病的发病率越来越高,在临床以及日常生活中,急需一种有防治功效,可以长期应用且毒副作用小的药物、保健品和食品。本发明配方中的以神经营养因子、神经节苷脂为主要成分的脑活性提取物和苦瓜提取物具有协同多靶点立体作用的特点,一方面,苦瓜通过降低血糖水平,使非酶糖基化水平降低,阻断多元醇代谢旁路的开放。另一方面,神经节苷脂、神经营养因子等通过修复受损的神经细胞,使神经和循环系统的功能趋于正常,阻断并发症的发生。
本发明的药物、保健品和食品的组分和重量百分含量以脑活性提取物质和苦瓜提取物的总量计为:
脑提取物 1-20%
苦瓜提取物 80-99%
优选的含量为:
脑提取物 1%-7.5%
苦瓜提取 92.5%-99%
较优选的含量为:
脑提取物 7.5%-15%
苦瓜提取物 92.5%-95%
较优选的含量为:
脑提取物 15%-20%
苦瓜提取物 80%-85%
最优选的含量为:
脑提取物 1%-8%
苦瓜提取物 92%-99%
上述配比中为不含添加剂,在实际使用中可添加药品制剂或食品可以接受的任何载体,如淀粉、蒸馏水等,采用公知的方法制备成任何一种食品、保健品和药剂学上的剂型,如口服液、胶囊和注射剂等。
上述脑提取物中的神经节苷脂可采用专利:《一种分离纯化制备神经节苷脂工艺》申请号:85102590,公开的技术进行制备。或采用市售的宝智生物制品公司的神经节苷脂提取物。
苦瓜提取物采用市售产品,如湖南金农生物资源股份有限公司的苦瓜提取物。
为更好的阐明本发明的实质,以下将用该配方配制的产品,进行安全性实验、不同配比的功效实验,及其与单一成分的功效实验的比较来说明本发明的内容。
一.安全性毒理实验
32只,22月龄,雄性Wistar大鼠,体重(450±28)g,平均分成4组,分别为80ml/kg剂量组(其中含脑活性提取物125mg,苦瓜提取物500mg);40ml/kg剂量组(其中含脑活性提取物62.5mg,苦瓜提取物250mg);20ml/kg剂量组(其中含脑活性提取物31.23mg,苦瓜提取物125mg)和生理盐水对照组,连续喂养60天。
结果:服用口服液组及对照组大鼠均无死亡,比较各组体重、生化指标脏器重量以及组织学检查均正常,服用本发明物组与对照组无显著差异。说明本发明物制品无毒性,可以安全服用。
二功能实验
(一).增强学习和记忆能力
动物:
15月龄,初老年雄性Wistar大鼠48只,体重350±32g。随机分成4组,每组12只,正常对照组(A)给予生理盐水,其余三组分别给予(B)脑提取物8mg+苦瓜提取物100mg;(C)脑提取物20mg;(D)苦瓜提取物200mgMorris水迷宫及实验
材料:
Morris水迷宫参照有关文献制作。为一不锈钢的圆形水池,直径200cm,高50cm,水深30cm,水温控制在(26±1)℃。池壁表明4个入水点,由此将水池等分为4个象限,任选其中1个象限,正中放置一个直径11cm、高29cm的平台。迷宫上方按有摄象机,并和录象机及显示器连接,自动录入大鼠游泳轨迹进行分析。测试程序包括:(1)定位航行实验,历时5D,每天上下午个4次,将大鼠面向池壁从4个入水点放入水中,记录其在2min内寻找到平台的时间(逃避潜伏期)。如果大鼠在2分钟内未找到平台,则由实验者用手牵引其至平台上,让大鼠停留10s,再放回笼中。(2)空间探索实验:第6天撤除平台,将大鼠任选1个入水点放入水中,记录其2min的游泳轨迹,分别计算其跨越个象限内的游泳距离以及在原平台象限游泳的时间和距离占正个游泳时间和距离的百分比。
统计方法
单因素方差分析,根据方差齐性实验结果,分别采用Newman-Keulsf法或Scheffe法。多因素重复测量方差分析采用Huynh-feldt。显著性水平取α=0.05。
结果:
大鼠空间探索所反映记忆能力的变化:各组大鼠撤除平台后2min在各象限游泳的距离(R、P、L、O分别代表大鼠在原平台右侧象限,原平台象限、原平台左侧象限,和原平台对侧象限)。经单因素方差分析,服用本发明物组的大鼠在原平台象限游泳的时间tp和距离lp在总游泳时间和距离中的比例增加,与正常组比较有极显著的差异P<0.01,与其余两组比较,部分指标有显著性差异P<0.05,说明本发明物中的脑活性提取物与苦瓜提取物有相互协同的作用。具体见下表:
组别 | 个数(N) | 各象限游泳距离 | P1(tp/tT) | P2(lp/lT) | |||
R | P | L | O | ||||
正常组(A) | 12 | 605±130.58 | 1120±258.3 | 450.52±180.23 | 350.12±112.13 | 0.58±0.12 | 0.48±0.09 |
脑提取物+苦瓜提取物组(B) | 12 | 450±125.3 | 1320.2±150.56 | 420.1±150.62 | 325.26±160.4 | 0.66±0.08**# | 0.58±0.11**# |
脑提取物组(C) | 12 | 515.2±122.3 | 1280.4±250.3 | 460.8±200.8 | 462.8±201.7 | 0.62±0.1* | 0.52±0.09* |
苦瓜提取物组(D) | 12 | 585.3±130 | 1180±168.8 | 470.1±189.7 | 380.7±167.3 | 0.6±0.7* | 0.54±0.1* |
*与对照组比较P<0.05,**与对照组比较P<0.01,#与C组比较P<0.05,
与D组比较P<0.05。
实施例
实施例1:神经营养因子的提取
干净的动物脑3000g,用Hank液浸泡,搅碎,2000r/min离心20min。沉淀用Hank液洗2遍,用2.5mol/l的蔗糖PBS重悬,所得的混合物用1.0mol/l和2.5mol/l的蔗糖PBS抽提。1500r/min离心后,收集上层与中间层之间的物质。用0.5mol/l的PBS(另加5%的胆酸)浸泡,匀浆后,在4℃下15000r/min离心45min,上清过GST柱,用2μg/ml谷光苷肽洗液洗脱,收集得到脑源性神经营养因子600mg。所得的神经营养因子用环糊精包裹。
实施例2:发明物的制备
将脑提取物1份,苦瓜提取物12.5份,淀粉5份,充分混匀,分装成胶囊。
实施例3:本发明物对糖尿病人血糖、神经功能和记忆功能的影响
本实验从2002年11月到2003年3月进行,测试对象为患糖尿病5年以上的患者,血糖不能控制在正常水平,有四肢针刺麻痛感,年龄40-65岁,均值58.2岁,男女各18人,共36人。随机分成A、B、C、D 4组,其中A组服用不含提取物的安慰剂,B组服用本发明物,剂量为脑提取物8mg+苦瓜提取物100mg/D。C组服用脑提取物,剂量为20mg,D组服用苦瓜提取物200mg,在服用本实施例所说的食品或安慰剂前,先对测试对象测定餐后2小时血糖、神经反射功能和记忆商MQ(按中国科学院心理研究所编制的临床记忆量表计算)。随机把测试对象分为两组,在实验期间,受试者的原用药以及饮食控制均保持不变。口服1.5个月后,对受试者的餐后2小时血糖、神经反射功能和记忆商MQ再进行一次测试。
结果表明,服用本发明物的(B)组效果最佳,与A组比较,血糖、神经反射功能得分、记忆商有极显著性或显著性差异,分别为6.85±2.8mmol/l,9.7±3.5mmol/l;2.9±0.5,1.8±0.4(P<0.01);103.5±10.5,97.8±11.6(P<0.05)。B组与C、D组比较有显著性差异。B组中有7例四肢针刺麻通感消失,2例好转,明显好于其它组,其中2例有神经性膀胱炎的患者,也有明显的改善。具体见下表:
组别 | 例数 | 血糖(mmol/l) | 神经反射得分 | 记忆商 | |||
实验前 | 实验后 | 实验前 | 实验后 | 实验前 | 实验后 | ||
对照组(A) | 9 | 9.8±2.4 | 9.7±3.5 | 1.5±0.7 | 1.8±0.4 | 98.1±8.9 | 97.8±11.6 |
发明物组(B) | 9 | 96±3.2 | 6.85±2.8**# | 1.6±0.4 | 2.9±0.5**# | 97.2±10.2 | 103.5±10.5** |
脑提取物组(C) | 9 | 8.9±4.0 | 8.8±4.0 | 1.5±0.3 | 2.7±1.0** | 98.6±13.2 | 100.2±15.4** |
苦瓜提取物组(D) | 9 | 10.1±.0.5 | 7.5±2.6*# | 1.7±0.5 | 1.9±0.3 | 99.1±15.2 | 99.3±10.4 |
*与对照组比较P<0.05,**与对照组比较P<0.01,#与C组比较P<0.05,与D组比较P<0.05。
Claims (10)
1.一种动物脑的提取物质和苦瓜提取物组成的药品、保健品和食品,其特征在于,该药物、保健品和食品的组分和重量百分比以动物脑中提取的神经活性物质和苦瓜提取物的总量计为:
脑提取物 1——20%
苦瓜提取物 80——99%
其中的脑提取物主要为脑源性神经营养因子(BDNF)、神经节苷脂(GM)的一种或一种以上。
2.如权利要求1所述的药品、保健品和食品,一种从动物脑中提取神经活性因子的方法,其特征在于,干净的动物脑,用Hank液浸泡,搅碎,2000r/min离心20min。沉淀用Hank液洗2遍,用2.5mol/l的蔗糖PBS重悬,所得的混合物用1.0mol/l和2.5mol/l的蔗糖PBS抽提。1500r/min离心后,收集上层与中间层之间的物质。用0.5mol/l的PBS(另加5%的胆酸)浸泡,匀浆后,在4℃下15000r/min离心45min,上清过GST柱,用2μg/ml谷光苷肽洗液洗脱,收集得到脑源性神经营养因子。所得的神经营养因子用环糊精包裹。
3.权利要求1所述的药品、保健品和食品,其特征在于,含量为:
脑提取物 1%——7.5%
苦瓜提取物 92.5%——99%
4.如权利要求1所述的药品、保健品和食品,其特征在于,含量为:
脑提取物 7.5%——15%
苦瓜提取物 92.5%——95%
5.如权利要求1所述的药品、保健品和食品,其特征在于,含量为:
脑提取物 15%——20%
苦瓜提取物 80%——85%
6.如权利要求1所述的药品、保健品和食品,其特征在于,含量为:
脑提取物 1%——8%
苦瓜提取物 92%——99%
7.如权利要求1-5任一所述的药物、保健品和食品在治疗和预防糖尿病及其并发症中的应用。
8.如权利要求1-5任一所述的药物、保健品和食品在改善记忆中的应用
9.以如权利要求1-5任一所述的药物、保健品和食品为主要成分,再添加其他一种或几种物质在制备改善记忆、糖尿病及其并发症治疗和保健制剂中的应用。
10.一种用于预防和治疗糖尿病及其并发症的药物、保健品和食品,其特征在于,其中含有治疗有效量的权利要求1-5任一所述的药物、保健品和食品以及医学上可以接受的载体。
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EP3095451A1 (en) | 2015-05-22 | 2016-11-23 | Bioiberica, S.A. | Process for preparing an animal brain extract |
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2003
- 2003-09-05 CN CNA031576877A patent/CN1522752A/zh active Pending
Cited By (2)
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EP3095451A1 (en) | 2015-05-22 | 2016-11-23 | Bioiberica, S.A. | Process for preparing an animal brain extract |
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