CN1407915A - 用于分析测定的装置 - Google Patents

Abstract

一种用于实现分析测定例如免疫测定的装置。该装置包括一个化验盒，该化验盒包括一系列分离的试剂室，该试剂室依次包含用于完成分析测定所需的试剂。加载进化验盒中的试样通过试剂室相对于试样的旋转而与相继的试剂室对准。

Description

用于分析测定的装置

技术领域

本发明涉及一种用于实现分析测定的装置，并特别地涉及一种实现特定的结合化验例如免疫测定的装置。

背景技术

在开发简化的化验系统中对分析测定领域具有相当大的兴趣，该简化的化验系统允许不熟练的用户在没有出现不适当错误的情况下，完成复杂的化验程序。而且，在研制有效和干净的化验系统中具有很大的兴趣，该有效和干净的化验系统需要最低限度的处理液体试剂并能被自动操纵使在需要用户最低限度参与的情况下完成化验程序。这特别与保健领域相关，在该领域中对化验系统有一个不断增加的需求，特别是诊断分析，在医生的办公室、门诊部、兽医诊疗室、甚至在病人的家里或在野外都可以进行有效和安全地操作该化验系统。

解决这个问题的一个方法在EP-B-0320240中提供，EP-B-0320240公开了一种在分析测定中使用的装置，该装置需要最低限度的处理液体试剂。该装置由两部分组成：一个独立的化验盒，该化验盒包括一系列彼此互相由分离装置分离的分散的试剂室，该试剂室依次包含实现化验程序所需的所有试剂和洗液，和一个适宜位于化验盒中的试样运送体。要测试的试样加载到试样运送体上，然后该试样运送体被插进化验盒中。为了完成化验程序，试样运送体被进一步推进化验盒中，为了使试样暴露在相继试剂室的化验试剂中，当试样运送体通过盒移动时，破坏在试剂室之间的分离装置。

虽然在EP-B-0320240中的装置提供了最低限度的处理液体试剂，但是这种设计不是特别适合于化验程序的自动操作，主要是因为当试样运送体插进化验盒时，装置的整个尺寸在操作期间发生变化。因此还需要一个将最低限度的处理液体试剂同化验程序的自动操作性能结合的装置。

发明内容

现在发明人已经研制出了一种改进的用于实现分析测定的装置，该装置更适合于自动操作，因为装置的整体形状和尺寸在化验程序中是不变的。该装置提供了一种方便、有效、干净和对于不熟练的用户来说容易操作的化验系统。

根据本发明提供一种用在实现分析测定中的化验盒，该化验盒包括：

可彼此互相相对旋转的试样接收部分和试剂保存部分，该试剂保存部分具有在其中形成的一系列分离的试剂室，该试剂室依次容纳完成分析测定所需的试剂，该试剂室相对于旋转轴线偏心定位，并且试样接收部分限定一入口，该入口也相对于同一旋转轴线偏心定位，以便通过试剂保存部分和试样接收部分的相对旋转，该入口可以与相继的试剂室对准。

在一个优选的实施例中，为了形成在分析测定中使用的装置，化验盒适宜使用一试样加载体。

该化验盒包括一由可模塑的塑性材料制作的试剂保存部分，和一适合于试样加载体的定位的试样接收部分，该试剂保存部分具有在其中形成的一系列分离的试剂室。该试剂保存部分中的试剂室依次容纳用于实现分析程序所需的试剂。方便地，这一系列独立的分离的试剂室基本上沿着以试剂保存部分相对于试样接收部分旋转的旋转轴线为中心的圆的圆周分布。

可以理解的是，试剂室的精确排列和里面的内含物可以根据分析程序的性质而变化并且对本发明不重要。在免疫测定的情况下，试剂室可以包括一洗室、一结合室、一系列进一步的洗室和最后的信号检测室。一个或多个试剂室可以是空的以便于从试样收集区排除多余的液体试剂。这里试样收集区包括一吸收体或可压缩性材料的垫，为了压缩该垫或该吸收体并因此压出多余的液体，这些“液体排除”室可以有益地在深度上比吸收体或垫要小。

分析程序或化验的读出的检测/测定通常在这一系列中的最后的试剂室中完成，在这里可以被指称“信号检测室”。信号检测室可以充满最后的试剂，例如比色酶基质。或如果测定发光、荧光、放射性或颜料的色强或微粒的标记，该信号检测室可以是空的。当在高灵敏度化验中使用化学发光的标记时，它也可以充满发光触发试剂例如过氧化氢。该信号检测室最好设置至少一个透明的壁或窗口，通过它由对定性或半定量结果的目测可以确定分析程序的结果，或通过它借助于测量仪器指示程序的结果的信号可以被测量以给出定量结果。在一个实施例中，整个试剂保存部分可以由透明材料形成。

试剂保存部分的内表面，即当在化验盒被组装时处在内部的表面，它包括一个由可断裂的材料制作的层，例如薄箔。这个可断裂的层起到密封使用之前的试剂室里的内容物的作用。因此，该层可被贴上跨过整个内表面或仅在包括试剂室的区域上。

本发明的基本特征是化验盒的试剂保存部分可以相对于试样接收部分旋转，有益地，该试样接收部分也由可模塑的塑料制成。试剂保存部分的试剂室相对于试剂保存部分的旋转轴线偏心定位，例如在圆环带上。试样接收部分包括一入口，该入口也相对于试剂保存部分的旋转轴线偏心定位，以便仅通过旋转试剂保存部分就能与相继的试剂室对准。

在一个实施例中，化验盒适宜使用在其上具有试样收集区的试样加载体。该试样收集区可以有益地包括一个由尼龙、聚氨基甲酸酯、PVC或聚醚泡沫、或纤维素或其他压缩性材料制作的吸收体或垫。在免疫测定的情况下，一个特定的结合剂例如抗体或抗原可以固定到试样收集区上。该特定的结合剂可以使用公认的方法例如被动吸收或共价连接直接耦合到塑料表面上。

在一个可替换的实施例中，它可以通过被动吸收或共价连接粘合到吸收体或垫上。在许多情况中，要测试的试样可以通过滴管吸取或不需要测量就加到试样收集区上，在收集区通过吸收材料来被吸收。可替换地，试样可以通过滴管精确地测量。可以理解的是试样可以是任何流体材料，包括体液例如全血、血清、血浆、尿、乳液等，和其他的流体例如环境试样。进一步可以理解的是本发明的装置除了用在上面描述的免疫测定外，可以用在范围广泛的分析测定中。

对照试样或校准器可以加到试样加载体的其它区域。这些对照试样可以在开始化验之前即刻加入，即在添加测试试样的同时加上对照试样，或者可以在制造过程中加入。在一个优选的结构中，试样加载体包括两个或多个不同的吸收体或垫，至少一个起试样收集区的功能，用于加入测试试样，并且至少一个用于加入对照试样。在最优选的结构中，试样加载体包括三个吸收体，一个为试样收集区，一个用于正的对照试样，和一个用于负的对准试样。

在化验盒的试样接收部分形成的入口最好是适合容纳包括试样收集区的试样加载体的至少一部分，以便当装置在使用时，试样收集区相对于试剂室正确地定位。最好是，试样加载体适合位于化验盒的试样接收部分的外表面的协同操作凹口中，而试样收集区在入口内。方便地是，试样加载体可以密封进化验盒中，例如通过一搭扣配合机构。因此该装置在分析程序期间和在分析程序结束时均被密封以防止任何液体试剂的泄漏。在使用之前，入口使用一可以移走的遮盖物盖住，例如可剥去的条或片，其在插入试样加载体之前可以直接被去掉。

在一个可替换的实施例中，试样加载体可以固定到化验盒的试样接收部分的顶面。最优选地，试样加载体可以通过柔性接头或铰链固定到化验盒上，该柔性接头或铰链使试样加载体可在第一位置和第二位置之间移动，在第一位置，试样加载体被折回到试样接收部分的顶面，试样收集区面向上，在第二位置，试样收集区位于入口。在这种结构中，当试样加载体被保持在第一位置时，试样可以用滴管吸取到面向上的试样收集区上。然后试样加载体折进第二位置，使试样收集区位于入口内。一搭扣配合确保该装置被密封。

化验盒的试样接收部分可进一步配设一穿透装置，其位于邻近入口的试样接收部分的内表面上(即在装配好的化验盒的里面的表面)。穿透装置适合穿透密封化验盒的试剂保存部分的试剂室的可断裂的层。最好是，穿透装置包括一能割开可断裂的层的刀片或刀。该穿透装置自身可以固定到弹簧装置上或等同物上，该弹簧装置或等同物允许刀片或刀相对于试样接收部分的内表面移动。当包括穿透装置的化验盒在使用时，试剂保存部分和试样接收部分彼此相对旋转，以便试剂室按次序移动经过穿透装置，使穿透装置能穿透密封试剂室的可断裂材料制作的层，然后对准位于入口内的试样加载体上的试样收集区，使试样与试剂室中的内容物接触。

该化验盒可以进一步包括吸收材料制作的层，该层位于试剂保存部分的内表面和试样接收部分之间。该吸收材料制作的层包括一与试样接收部分的入口对准的开口，并可以进一步包括一对准形成试样接收部分的一部分的穿透装置的开口。当装置在使用时，吸收层吸收从试剂室中释放出来的任何多余的液体试剂，因此阻止了泄漏并使在邻近的试剂室之间的试剂的换室的可能性最小。吸收层的总流体吸收容量应该理想地超过装进装置中的液体试剂的总量，以便当完成测试时，留在装置中的所有的液体试剂将被吸收。因此该装置能被以干燥的方式处理而不需要液体保存设备。

本发明还包括一化验盒，该化验盒在没有单独的试样加载体的情况下可以使用。在这个实施例中，试样收集区位于离入口短距离的试样接收部分的内表面，因此试样接收部分也充当试样加载体。当装置在使用时，试样通过在试样接收部分的入口被直接加到试剂保存部分的一个小室内。然后最好是放一个盖到入口上以密封该装置，方便地是使用一搭扣配合的盖。试样接收部分相对于试剂保存部分旋转时，试样收集区开始与试样接触。然后其它试剂室依次与试样收集区接触。在这个实施例中，穿透装置可以位于入口附近。

化验盒的放射状结构提供了几个优于以前的公知装置的好处。特别地，通过将试剂室设于圆的周边上放射状结构允许包括更多个试剂室，可保持整个装置的小型化。另外，因为试样加载体一旦进入适当位置就不会相对于化验盒移动，整个装置在操作以前和操作期间在尺寸上是固定的，并且更适合用于化验程序的自动操作。

因为化验盒整个是独立的，并且所有的试剂在制造过程中加入，因此不需要复杂的试剂加入或洗的步骤。在将试样加到试样收集区之后，试样加载体装入就位以便试样收集区在化验盒的试样接收部分的入口定位。此后，试样加载体在整个分析程序中保持就位。在自动化验的情况下，然后整个装置放进化验设备中，根据预先设定的编程可以完成化验程序。

化验设备包括一电动机驱动机构，以有效地控制化验盒的试剂保存部分相对于试样接收部部分的旋转，并且也充当测量化验程序的结果或读出的测量仪器。一便携式的手持化验设备包括一电动机驱动机构，以实现旋转化验盒，但是没有复杂的测量仪器，该手持化验设备可以在病人的家里或野外使用。一个更复杂的装有测量仪器的设备将更适合在诊所或医生的办公室里使用。后者的设备也可以被预先编程的，带有提供全面定量结果所必须的校准数据。

为了有助于化验盒相对于化验设备的电动机驱动机构的正确定位，化验盒的试剂保存部分的外表面可以配设定位装置例如嵌齿，其基本上在化验盒的旋转轴线的中心定位。显然，试样接收部分和试剂保存部分，的相对旋转可以通过保持试样接收部分在固定位置而移动试剂保存部分和通过保持试剂保存部分在固定位置而移动试样接部分达到。在自动操作的系统中，优选的结构是试样接收部分被保持固定而试剂保存部分相对于它旋转。以这种方式，试样收集区可以保持对准测量装置，例光学测量仪器。

本发明提供一种干净和有效的装置，不需要处理任何液体并可以由不熟练的用户来操作以提供快速的定量化验结果。这种装置理想地适合用在诊断领域，特别是用在免疫测定或DNA放大或杂交化验中。它可以在医生的办公室或诊所中使用以有助于医生诊断或监测疾病的发展。一个有用的例子是在癌症诊断或预测中的使用。对血液中与癌症有关的指标的检测/测量变成越来越有力的一个工具以有助于所有阶段的癌症治疗，包括检测早期的瘤形成，疾病的诊断，和监测疾病发展并对治疗进行反应。使用本发明的装置，一个医生或护士将能在诊所、医生的办公室或病人的床边完成为呈现与癌症有关的指标的快速和定量测试。而且，因为该装置适合于不熟练的用户使用并且为了取得定量结果不需要分配或测量液体试剂，所以它也适合在家庭测试中使用。

在本发明进一步的实施例中，化验盒可以适于完成多个并行的分析测定。这可以通过在试剂保存部分具有两个或多个系列分离的试剂室，和在试样接收部分的相应数量的入口来达到，每个系列的室依次包括一种分析测定所需的试剂。便利地，该两个或多个系列的试剂室可以基本上沿着与旋转轴线同心的一系列圆的圆周分布，该旋转轴线是试剂保存部分相对于试样接收部分旋转的旋转轴线。当装置在使用时，一个被用在这种化验盒中的试样加载体可以包括两个或多个试样收集区，收集区适合位于在两个或多个入口内。可替换地，可以使用两个或多个试样加载体，每个试样加载体适合位于试样接收部分的特定位置。为了实现多于一个的化验，多个入口的特征也可以被包括在适合在没有单独的试样加载体的情况下使用的化验盒装置的实施例中。

本发明将参照附图来进行进一步说明：

附图1A是本发明装置中使用的试样加载体的俯视图，

附图1B是试样加载体下侧的俯视图，

附图2是本发明的化验盒的俯视图，

附图3是本发明中装置的俯视图，图解了试样加载体如何装进化验盒中，

附图4是化验盒下侧的俯视图，

附图5是化验盒展开的视图，

附图6a和6b是本发明的分析装置在操作时的横截面图，

附图7是根据本发明的化验盒的俯视图，其中试样加载体连接到化验盒的试样接收部分上，

附图8是根据本发明的装置的展开视图，其中不需要单独的试样加载体。

参照附图，附图1A和1B示出了试样加载体1，该试样加载体是塑料元件，具有至少一个试样收集区。在该实施例中，试样加载体具有三个连接在其上的由吸收材料制作的垫2。至少一个垫充当用于加入测试试样的试样收集区。正或负的对照试样加到其余垫上。在附图1B中示出的垫的排列只是说明性的，并可以使用可替换的结构。例如，可呈放射状地排列三个或多个垫。

附图2-3示意性地示出了本发明的化验盒。在优选的结构中，化验盒是圆盘形的并由适合的可模塑的塑料制作，附图2是一俯视图，示出了化验盒3的试样接收部分。该试样接收部分配设有入口4上并可进一步配设一凹槽5，该凹槽5的形状适合与试样加载体配合。附图3示意性地示出了试样加载体1如何被设置在形成在化验盒的试样接收部分的凹槽中以使试样收集区2定位在入口4处。

附图4是化验盒下侧的俯视图，示出了试剂保存部分6。该试剂保存部分具有一系列的在其中形成的试剂室7-18。在附图4中示出的实施例共有12个试剂室，但是可以理解的是该装置按照需求可以构造成不同数量的试剂室。室18是信号检测室。一定位装置19设置在试剂保存部分的外表面上以帮助化验盒在化验设备中的定位。在该实施例中，定位装置包括一适于与设置在化验设备中的电动机驱动机构一起协同配合使用的嵌齿。

附图5是一展开图，示意性地示出了化验盒的结构，该化验盒包括试样接收部分3和试剂保存部分6。试剂保存部分与试样接收部分连接以使试剂保存、部分相对于试样接收部分围绕着一个共同的旋转轴线旋转。在附图5中示出的实施例中，这可以通过延伸试样接收部分的边缘以形成一个凸缘20，使试剂保存部分的外周稍微比试样接收部分的凸缘的内周小以使试剂保存部分配合试样接收部分并能在试样接收部分内旋转来达到。化验盒进一步配置一可断裂材料例如薄箔制成的层21，当组装化验盒时，为了密封试剂室，该层与试剂保存部分的上表面粘合。吸收材料制成的层22设置在可断裂的层和试样接收部分之间。吸收层包括与形成在试样接收部分的入口对准的第一开口23，和与附加到试样接收部分下表面的穿透装置(未示出)对准的第二开口24，以便在组装化验盒时，穿透装置能与可断裂材料制成的层接触。

附图6A和6B示出了本发明的分析装置在操作中的阶段。试样加载体1在试样接收部分上的配合凹槽中定位，形成试样收集区2的吸收材料在入口内定位。附图6A示出了装置在第一位置的横截面图，入口与其中一个试剂室13对准。为了与试剂室里的内容物接触，吸收材料伸出通过试样保存体并通过吸收层22。密封试剂室13的可断裂的层21已经预先通过穿透装置25被刺穿，该穿透装置定位在邻近入口处并附加到试接收部分的内表面。穿透装置在刺穿密封试剂室14的可断裂的层的过程中被示出，试剂室15仍然被密封着。如图6A所示，试剂室彼此互相完全分离。试剂室相对于吸收体2和穿透装置25移动的方向被标明。

附图6B示出了装置在第二位置的横截面图，试剂保存部分已经相对于试样接收部分在标明的方向上旋转。吸收体2现在位于试剂室14和15之间，示出了当吸收体在试剂室之间移动时，吸收体如何在试剂保存部分的表面和试样加载体之间被压缩。这种压缩有助于从吸收体中排除多余的液体。试剂室15比试剂室13，14，16和17要浅并且没有包含液体试剂。当吸收体移动通过试剂室15时，吸收体将被压缩便于排除其它多余的液体试剂。穿透装置位于试剂室15和16之间，试剂室16仍然被完好的可断裂的层21密封。附图6A和6B示出了穿透装置如何能够相对于试样加载部分的内表面移动。穿透装置在附图6A中被示出在试剂室内在展开位置，而在附图6B中其被示出当在试剂室之间移动时的抽回位置。

附图7图解了化验盒，其中试样加载体附加到/整体形成在试样接收部分上并能围绕柔性或铰链连接接头26活动。

附图8示出了本发明化验盒的另一实施例，该化验盒不需要一独立的试样加载体。试样收集区2位于在试样接收部分的内表面，在入口4附近。试样收集区的可替换的排列也是可能的，例如其可以形成在围绕入口的周边的环上。为了与入口对准并容纳试样收集区，吸收层上的开口23是长的。在使用时，要测试的试样通过入口4装进该装置的试剂保存部分的第一室。然后入口4被盖27密封。形成试样收集区的垫向下伸进入试剂保存部分的室并因此与加到第一室的试样接触，然后依次与完成化验所需要的试剂接触。

本发明中装置的结构和操作将参照下面实验的例子与附图一起进一步的被理解：

附图9示出了使用本发明的装置化验人体IgA的化验结果，如在例子4中所描述的。加到试样加载体上的泡沫垫的IgA溶液的浓度(ng/ml)在X轴上示出而在完成化验的泡沫垫上的彩色密度在Y轴上示出。

附图10示出了使用本发明的装置在IgA化验中洗的次数对信噪比的影响，如在例子4和5中所描述的。洗的次数在X轴上示出而泡沫垫的彩色密度在Y轴上示出。

附图11和12示出了使用本发明的装置检测c-erbB2的标准曲线，如例子7中所描述的。加到试样加载体的泡沫垫上的c-erbB2溶液的浓度(HNU/ml)在X轴上示出而完成化验的泡沫垫的彩色密度在Y轴上示出。

例子1

粘合到试样加载体上的泡沫的准备

以3毫米厚的薄片被供给的开口PVC泡沫(由英国Derby的Duflex有限公司提供)被设置在试样加加载体末端的平面部分并且用超生波焊接装置(ultrasound welding horn)(由英国累斯特城(leicester)的Renfrew Stylengineering有限公司提供)粘合泡沫到试样加载体的材料上，该超声波焊接装置被构造成焊接泡沫末端，但是留下内部的“枕垫”。在100瓦的状态下30秒的时间用于确保泡沫和塑料表面之间的牢固粘合。这个过程在试样在加载体的末端生成泡沫反应区，该泡沫反应区通过焊接工艺被牢固地保持就位。

例子2

用抗体涂覆泡沫的程序

在这个例子中，泡沫被用对抗人体的IgA抗体涂覆。在试样加载体上的泡沫部分被在0.01M Tris/Cl、PH值为7.5的缓冲剂中洗一次。泡沫片使用以10μg/ml的浓度、在0.01M Tris/Cl、PH值为7.5的溶液中的老鼠单系的抗人体IgA抗体(由美国的Zymed实验室(Laboratories)公司提供)涂覆，通过增加20微升μl到每块泡沫部分。涂覆在4℃条件下在密封湿润的室内进行12-16小时。在试样加载体上的对照泡沫部分被在0.01M Tris/Cl、PH值为7.5的缓冲剂中洗一次并在包含0.05％(v/v)Tween 20、PH值为7.5的0.01MTris/Cl中洗三次。涂覆的泡沫和对照泡沫通过在0.01M Tris/Cl、PH值为7.5包含0.1％(w/v)牛血清白朊(BSA)和1％(w/v)乳糖的缓冲剂中洗三次来涂敷。然后试样加载体被立即用于化验。试剂供给者如下：Trizma-基(Trizma-base)，Sigma Chemical公司/Sigma-Aldrich Chemie Gmbh；氯化钠(NaCl)，J.T.Baker 0278或Sigma S7653；Tween 20，Merck/KEBO实验室(lab)丹麦；牛血清白朊(bovine serum albumin(BSA))馏分(Fraction)V，Sigma A4503；α-乳糖(α-Lactose)，Sigma L3625；MgCl₂，J.T.Baker；蒸馏水，Bie和Berntsen，丹麦。

为了测试涂在泡沫部分上的抗体的涂敷，整个试样加载体被放置在室温(22℃)条件下的超级块(SuperBlock)(由美国的PierceChemical公司提供)中两分钟。然后泡沫被压缩，使用吸收纸排除多余的流体。然后，以表1中示出的浓度，在包含0.1M氯化钠(NaCl)、1mM MgCl₂、1％(w/v)牛血清白朊(BSA)和0.1％(v/v)Tween 20的PH值为7.5的0.05M Tris/Cl中的25微升(μl)人体IgA被加到试样加载体上的所有三块泡沫部分上。然后泡沫在室温(22℃)下培养5分钟并吸干。然后以1∶25在包含0.1M氯化钠(NaCl)、1mM氯化镁(MgCl₂)、1％(w/v)牛血清白朊(BSA)和0.1％(v/v)Tween 20的0.05M Tris/Cl、PH值为7.5的缓冲剂中稀释的25微升碱性磷酸酶共轭兔的抗人体IgA(由丹麦的DAKO A/S提供)被加到每块泡沫上，进一步培养5分钟。该泡沫在包含0.05％(v/v)Tween 20的PH值为7.5的0.01M Tris/Cl中洗三次，然后吸干后，25微升的BCIP/NBT基质物(由美国的Zymed实验室(Laboratories)公司提供)被加到每块泡沫上。在室温(22℃)下培养5分钟之后，泡沫被用蒸馏水洗以停止彩色显影反应，然后泡沫被使用与运行软件程序“Cream forWindows，版本为1.0”(由丹麦的Kem-En-Tech A/S提供)的PC连接的DUOSCAN T1200(由德国的AGFA提供)来扫描彩色密度。该Cream软件提供泡沫中彩色密度的定量测定。在表1中示出的结果表明泡沫是用特定抗体涂敷的，随着IgA浓度的增加得到了一标准曲线并且未涂覆的泡沫的背景是低的。

表1：来自AGFA扫描仪/Cream软件的彩色密度信号

IgA浓度(ng/ml)	抗体涂覆的泡沫	对照泡沫(在泡沫上没有抗体)
			800	195，2624	23，6427
400	162，9983	29，4803
			200	149，9239	28，2855
100	106，4026	28，5222
			50	79，1239	24，6085
25	63，0786	20，6205
			12.5	43，2786	19，0222
0	16，1427	13，9188
			0	16，9897	19，5684

例子3

化验盒基部的制备

试剂保存部分由英国莱斯特的Stylengineering有限公司提供。该部件由PVC片(1.5毫米厚)使用真空形成工艺制作而成。试剂保存部分放在保持器中并且根据具体的化验程序在适当的室内充满液体试剂。然后一片铝箔(在一面涂有漆)被切成与试剂保存部分的直径相配并被放到该部件上，使有漆的表面与试剂保存部分的表面并置。然后一个家用的设定为“丝”的烙铁被用来密封箔片到试剂保存部分表面上。然后检查该部件的泄露和试剂室内的过热信号。为了完成试剂处理部分，铝箔围绕着边缘被修整并且去掉覆盖第一室的铝箔表面以允许定位试样加载体。

例子4

在化验盒中对人体IgA的化验

这个例子描述了对在化验盒中的人体IgA的化验。手工驱动试验台被构造成，如例子3中所准备的密封试剂保存部分被装在该设备中。一片吸收材料(由Renfrew Stylengineering有限公司提供)被贴在试剂保存部分的上表面，然后化验盒的试样接收部分被夹着就位。化验盒的试样接收部分有一个放在内表面的刀该刀适合穿透试剂室的金属箔，这样允许流体到达在试样加载体上的泡沫试样收集区。为了进行化验，试样被加到试样加载体的泡沫试样收集区，短时间培养之后，为使IgA粘合到泡沫表面的抗体上，试样加载体被夹持到化验盒的试样接收部分上就位，并且手工转动试样接收部分以带动泡沫部分依次通过断裂的试剂室。

为了在化验盒中进行化验，试样加载体根据例子2中的程序制备。在使用25微升的老鼠单系抗人体IgA抗体涂覆之后，泡沫部分被用0.01M Tris/Cl、PH值为7.5的缓冲剂洗，并且整个试样加载体在室温(22℃)下被放在超级块(SuperBlock)(由Pierce Chemical公司提供)中2分钟。在吸干之后，以400，200，100，50，或0 ng/ml浓度的包含0.1M NaCl、1mM MgCl₂、1％(w/v)牛血清白朊(BSA)和0.1％(v/v)Tween 20的PH值为7.5中的25微升人体IgA被加到试样加载体上的所有三块泡沫部分上。然后泡沫放在室温(22℃)下培养3分钟。

然后试样加载体被夹持到化验盒的试样接收部分上就位，并且泡沫部分被运送通过试剂保存部分的第一室，该室内充满250微升超级块(SuperBlock)，然后进入到第二室，该第二室内包含250微升碱性磷酸酶共轭兔抗人体IgA(由丹麦的DAKO A/S提供)，该碱性磷酸酶共轭兔抗人体IgA在0.05M Tris/Cl、PH值为7.5的缓冲剂中以1∶25稀释，该缓冲剂包含0.1M NaCl、1mM MgCl₂、1％(w/v)牛血清白朊(BSA)和0.1％(v/v)Tween 20。在第二室的培养时间为6分钟。然后，泡沫运送到邻近的第七室，该室充有2 50微升PH值为7.5、包含0.05％(w/v)Tween 20的0.01M Tris/Cl缓冲剂。最后一个室(第10个)包含250微升BCIP/NBT基质(由美国的Zymed实验室(Laboratories)有限公司提供)。该泡沫被培养6分钟，然后在泡沫结构中发生颜色显影。然后试样加载体被从化验盒的试样接收部分移走，泡沫被用蒸馏水进行洗以停止颜色显影反应，然后使用连接到运行软件程序“Cream forWindows，版本1.0”的PC机上(由丹麦的Kem-En-Tech A/S提供)的DUOSCAN T12000(由德国AGFA提供)来对泡沫扫描彩色密度。该Cream软件提供在泡沫中的彩色密度的定量测定。典型的化验结果在附图9中。

例子5

对在化验盒中洗的次数的影响的研究

人体IgA的化验基本上如在例子4的描述中完成。一个发动机操纵的设备被使用，化验盒的旋转在计时装置的控制下通过步进马达来控制。在老鼠抗人体IgA抗体碱性磷酸酶缀合物中的培养期是4分25秒。在缀合物中培养之后，马达运送试样加载体通过8个洗室，这些室或包含275微升洗缓冲剂或是空的。最后一个室(第10个)包含BCIP/NBT基质(由美国的Zymed Laboratories有限公司提供)并且培养期为4分25秒。结果在附图10中表明在动力操纵的化验盒中最佳的信号与噪声的比率在洗7次时达到。

例子6

用SKBR-3提取物覆盖泡沫

在这个例子中，用于试样加载体上的试样收集区的PVC泡沫用SKBR-3细胞的硫酸铵提取物(由欧登塞的南丹麦大学提供)涂覆。该提取物包含320HNU/ml的人体蛋白质c-erb(由Oncogene Sciences有限公司提供的ELISA工具测得)，该人体蛋白质c-erb由在培育的细胞产生。该细胞提取物在0.01M Tris/Cl、PH值为7.5的缓冲剂中被稀释到c-erb的变化浓度，并且在每块泡沫上加25微升。该泡沫在4℃下培养一个晚上。然后它们用0.01M Tris/Cl的缓冲剂洗剂洗，然后用超级块(SuperBlock)培养10分钟。在吸干之后，以1/100稀度在Tris/Cl的缓冲剂中稀释的25微升的抗c-erb的单系抗体(Mab15，由美国的Neomarkers有限公司提供)被加到泡沫片上并在22℃下培养5分钟。在洗三次并吸干之后，25微升的抗老鼠IgG碱性磷酸酶缀合物(由丹麦的Amdex A/S提供)加到泡沫上并进一步培养5分钟。进一步用Tris/Cl缓冲剂中洗三次并吸干之后，25微升的BCIP/Cl基质(由美国的Zymed Laboratories有限公司提供)加到泡沫片上并在10分钟之后，泡沫被用蒸馏水洗并且用AGFA/cream系统读取彩色密度。示出在表2中的结果表明，在细胞提取物中的c-erb粘到泡沫片上并能在定量化验中被特定老鼠单系抗体来检测。

表2

c-erb HNU/ml	泡沫上的信号
		500	184，669
250	144，859
		125	98，993
62.5	78，840
		31.3	69，706
15.6	53，228
		0	34，712
0	39，864

例子7

在化验盒中的c-erb的化验

在这个例子中，在试样加载体上的泡沫试样收集区被用不同浓度的c-erb涂覆，如例子6中所描述的。并用在Tris/Cl缓冲剂中稀释1/100的老鼠单系抗-c-erb抗体培养15分钟。在使用Tris/Cl缓冲剂洗剂洗三次之后，试样加载体被夹持进化验盒中的试样接收部分中并使用手动实验台继续进行化验。第一室包含以1/500在Tris/Cl缓冲剂中的抗老鼠IgG碱性磷酸酶缀合物，培养时间是5分钟。然后旋转试样加载体，使之经过用275微升的缓冲剂洗剂洗七次，到达BCIP/NBT基质，在从化验盒移走之前最后的培养时间为10分钟，并用蒸馏水清洗以停止反应。从AGFA/cream系统中得到的结果表示在附图11和12中，表明化验盒能产生c-erb的标准曲线。

Claims (18)

1.一种用于实现分析测定的化验盒，该化验盒包括：

可彼此互相相对旋转的试样接收部分和试剂保存部分，该试剂保存部分具有在其中形成的一系列分离的试剂室，该试剂室依次包含完成分析测定所需的试剂，该试剂室相对于旋转轴线偏心定位，并且试样接收部分限定一入口，该入口也相对于同一旋转轴线偏心定位，以便通过试剂保存部分和试样接收部分的相对旋转，该入口可以与相继的试剂室对准。

2.如权利要求1所述的化验盒，其特征在于该试剂保存部分的内表面包括一由可断裂的材料制作的层，能被用来密封使用以前的试剂室。

3.如权利要求2所述的化验盒，其特征在于该试样接收部分进一步包括一邻近所述入口设置的穿透装置，该穿透装置适合穿透密封试剂保存部分的试剂室的可断裂的层。

4.如权利要求3所述的化验盒，其特征在于该穿透装置是一刀片。

5.如权利要求3或4所述的化验盒，其特征在于该穿透装置固定在弹簧装置上。

6.如上述任何一个权利要求中所述的化验盒，其特征在于进一步包括一吸收材料制作的层，该层位于试剂保存部分和试样接收部分之间，该吸收材料制作的层包括一与入口对准的开口。

7.如上述任何一个权利要求中所述的化验盒，其特征在于信号检测室配置至少一个透明壁或窗口。

8.如上述任何一个权利要求中所述的化验盒，其特征在于该试剂保存部分具有一系列分离分隔的试剂室，这些试剂室基本上沿着以旋转轴线为中心的圆的圆周分布。

9.如权利要求1-8任何一个权利要求中所述的化验盒，其特征在于这一系列的试剂室包含用于实现特定分析测定所需的试剂。

10.如权利要求1-9任何一个权利要求中所述的化验盒，其特征在于该化验盒包括至少一个试样收集区，用于收集要被分析的试样。

11.如权利要求10所述的化验盒，其特征在于该试样收集区包括一附加到邻近入口的试样接收部分的内表面的吸收体。

12.一种用于分析测定的装置，包括权利要求1-9任何一个中的化验盒和试样加载体，该试样加载体包括至少一个用于收集要被分析的试样的试样收集区。

13.如权利要求12所述的装置，其特征在于该试样收集区包括粘合到试样加载体上的吸收体。

14.如权利要求12或13所述的装置，其特征在于该试样加载体适合定位于形成在化验盒的试样接收部分外表面上的凹槽中，以便试样收集区被设置在入口内，以此当装置在使用时，通过试剂保存部分和试样接收部分的相对旋转，试样收集区可以顺序地与相继的试剂室对准。

15.一种用于实现多个分析测定的化验盒装置，该化验盒装置适于使用试样加载体，该化验盒包括：

可彼此互相相对旋转的试样接收部分和试剂保存部分，

该试剂保存部分在其中形成有两个或多个不同系列的独立的分离非连续的试剂室，该试剂室基本上沿着以旋转轴线为中心的一系列同心圆的圆周分布，每个系列的试剂室依次包括用于完成分析测定所需的试剂，

该试样接收部分限定两个或多个相对于旋转轴线偏心定位的入口，其中每个入口对准在试剂保存部分形成的系列试剂室中的一个，以便该入口通过试剂保存部分的相对旋转可以与相继的试剂室对准。

16.一种用于分析测定的装置，包括权利要求15中的化验盒和适合随其使用的试样加载体。

17.一种化验盒，基本上如参照这里的描述和附图2，3，4，5或7中任何一个的图解。

18.一种用于分析测定的装置，基本上参照这里的描述和附图6A，6B或8中任何一个的图解。

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