CN1331970A - 曼得利特制备治疗人兽弓形虫病的药物用途 - Google Patents

Abstract

曼得利特的原料药曼得利酸是从蔷薇科植物桃树的叶子中用普通工艺提取的天然产物,常规药含活性成分的曼得利特在制剂中与药学上有机或无机的固体或液体赋形剂混合制成片剂、颗粒剂、针剂等,曼得利特经药效、毒理、作用机理等实验研究,证明它有很强地杀灭和抑制强毒株(RH株)弓形虫的作用,毒副作用很低,若用于弓形虫病的临床试验,预期将会有较好的治疗效果。

Description

曼得利特制备治疗人兽弓形虫病的药物用途

本发明涉及曼得利特治疗人兽共患弓形虫病的新用途。

弓形虫(Toxoplasma gondii)是一种寄生于人和多种动物(190余种)有核细胞内的专性寄生原虫，引起人和动物弓形虫病(Toxoplasmosis)，感染和流行极为普遍。据调查，欧美国家人群血清阳性率为25—50％，高者可达80％以上，据Kean综合世界文献，估计全球人类弓形虫平均感染率为33％，感染人数约为10—12亿。国内调查，其感染率为4—35.7％，平均感染率为5.17％，家畜感染率达10—50％。我国6000多万人为弓形虫感染者。孕妇感染弓形虫可通过胎盘垂直传播给胎儿，导致胎儿畸形。资料表明，有近1/1000的新生儿有先天性弓形虫感染，严重影响优生优育和人口素质。在艾滋病患者中，弓形虫病流行占10％左右，是艾滋病等免疫缺陷病的致死因素之一。同时，弓形虫感染还与恶性肿瘤、器官移植、免疫功能低下及长期应用免疫抑制者有关。因此，弓形虫病对人类健康和畜牧业的危害极为严重，对其防治日益受到世界各国的关注。目前对弓形虫病的治疗仍以磺胺嘧啶或乙胺嘧啶为主(世界卫生组织推荐药物)，但其毒副作用(抑制骨髓、损害肝脏、致畸、过敏等)而限制了推广和应用：螺旋霉素常用于孕妇弓形虫病的治疗，但作用较弱。目前仍无理想的特效药物。因此，寻找和研究高效低毒的抗弓形虫新药非常必要。

本发明的目的在于克服目前治疗弓形虫病常用药物磺胺嘧啶和乙胺嘧啶存在的缺点，为曼得利特制备的药物提供一种新用途，并为防治弓形虫病提供一种新药制剂。

曼得利特的原料药曼得利酸是从蔷薇科植物桃树(runus persica(L.)Batsch)的叶子中用普通工艺提取的天然产物，其化学名称2-羟基苯乙酸，已用苯乙酮经氯化、重排、冷却法人工合成，分子式为C₈H₈O₃，结构式为C₆H₅CH(OH)COOH，分子量为152.14。其盐结构式为C₆H₅CH(OH)COOM(M＝Na、K、NH₄及有机胺类等)。

申请人在长期进行弓形虫的研究过程中，首先发现曼得利特(如钠、钾、铵及有机碱之盐类等)对弓形虫有显著抑制和杀灭作用，对它的抗弓形虫作用从体外实验、体内实验及各种给药途径(腹腔注射、口服、静脉注射等)均做了系统地、动态地、详细的实验研究，并研究了其抗弓形虫的机制。

有效成分用曼得利特制备治疗人兽共患弓形虫病的药物以常规药用制剂的形式来使用。所述的常规药用制剂含作为活性成分的曼得利特，该活性成分在制剂中与药学上可接受的载体如适宜于胃肠内和胃肠外给药的有机或无机的固体或液体赋形剂混合。该药用制剂可以是固体形式，如片剂、颗粒剂、粉剂、胶囊剂，或液体形式如糖浆剂、乳剂及针剂等。

上述制剂中可含辅助物质、稳定剂、润湿剂和其它常用的添加剂，如乳糖、柠檬酸、酒石酸、硬脂酸镁、蔗糖、玉米淀粉、滑石粉、明胶、琼脂、果胶、花生油、橄榄油、可可脂、乙二醇、葡萄糖、抗坏血酸、粘合剂、羟丙基纤维素等。

上述制剂可按照各种制剂常规的制备工艺制成。

有效成分用曼得利特制备治疗人兽共患弓形虫病的药物的用途，所制成的各种剂型的口服药物，成人口服，每天65毫克左右，所制成的注射药物，静脉点滴，成人每天30毫升左右，一周到十天为一个疗程，儿童酌情减量。

下面是申请人作出的曼得利特抗弓形虫的有关实验内容及其结果，从实验结果可以证明其治疗弓形虫病的有效性。

一、药效试验

1.体外杀虫和抑虫试验

试验药物：曼得利特

试验虫株：RH株弓形虫(国际公认强毒株)

试验方法：收集感染小鼠腹水，用血球计数器计算虫数，用生理盐水调整虫数至1.5—3.5×10⁷/ml悬液。实验设不同浓度药物组，每组取弓形虫悬液0.5ml，加入药物1.5ml于10ml离心管内，使药物终浓度分别为0.1mg/ml、0.25mg/ml、0.5mg/ml、0.75mg/ml和1.0mg/ml。对照组取弓形虫悬液0.5ml，加1.5ml生理盐水于离心管中。不同浓度药物组(各4管)和对照组(4管)的混合液用H84混合器充分振荡混匀，置37℃温箱，于1h、2h、4h、8h分别取出1管，用生理盐水离心洗涤3次(2000rpm，5min)，最后用生理盐水调至2ml/管，用台盼兰染色，姬姆萨染色，显微观察虫体着色率及弓形虫形态变化情况。同时，取不同浓度、作用不同时间药物组和对照组生理盐水洗涤的虫体悬液再转种小鼠，记录存活时间并取腹水镜检。

试验结果：

(1)、台盼兰染色

药物组台盼兰染色，虫体着色率随着药物浓度增高，作用时间延长而逐渐升高(见表1)。

(2)、姬姆萨染色

对照组虫体呈典型香蕉形，胞质染色淡兰色，均匀，胞核呈紫红色，疏松。低浓度药物组和高浓度药物组早期，部分虫形体态略有变化，两端变钝，或椭圆，核稍固缩，染色稍深。随着药物浓度增高和作用时间延长，虫体形态和结构变化逐渐显著，多为椭圆和圆形，虫体表面不光滑，核固缩，染色加深明显。胞质中出现颗粒。

(3)、小鼠再接种结果

对照组共做小鼠接种5组，平均存活时间5.6d。药物组药物浓度分别为0.1mg/ml、0.25mg/ml、0.5mg/ml/0.75mg/ml，作用时间分别为1h，2h，4h，8h后，经小鼠腹腔接种。0.1mg/ml组小鼠存活时间平均延长1.2d；0.25mg/ml组作用4h以上；0.5mg/ml及1.0mg/ml组作用2h以上，接种的第1代小鼠存活时间均超过1个月，无发病迹象，处死小鼠腹水中均未查到弓形虫。

结论：

体外实验结果表明，低浓度的曼得利特(0.1mg/ml、0.25mg/ml)作用1—2h即有明显地抑虫作用。0.5mg/ml、0.75mg/ml、1.0mg/ml的曼得利特作用1-2h即可使1.5～3.5×10⁷/ml腹水中的弓形虫完全、彻底地被杀灭。0.5mg/ml(即0.05％)的曼得利特是体外杀灭弓形虫的最低有效浓度，体外最短有效作用时间为2h。

2、体内抗虫试验

试验药物：曼得利特

试验虫种：RH株弓形虫(国际公认强毒株)

试验动物：昆虫株小鼠

试验方法：用RH株弓形虫通过腹腔接种感染小鼠，设立阴性、阳性对照组及药物试验组进行实验。(给药组又设乙胺嘧啶药物对照组)。经腹腔注射、灌服、静脉注射不同途径给药，曼得利特腹腔注射剂量为300mg/kg·d×1；灌服和静脉注射剂量为200mg/kg·d×2；乙胺嘧啶灌服剂量为62.5mg/kg·d×1；在给药后的不同时期(24h、72h，死亡后)处死小鼠，取材，采用实验室检测、病理学、免疫组织化学、图像分析和电子显微镜技术等系统地、动态地观察研究曼得利特抗小鼠体内弓形虫的作用及其机制。

试验结果：

(1)、曼得利特对弓形虫感染小鼠腹水中弓形虫速殖子繁殖力的影响(感染弓形虫24h、72h和小鼠死亡后)。

经统计学分析，结果表明：用药组与阳性对照组小鼠腹水中弓形虫数量相比，腹腔注射组、口服组、静脉注射组、乙胺嘧啶组小鼠腹水中弓形虫的数量均有显著性差异(P＜0.01)(见表2、表3、表4、表5、表6、表7)。证明曼得利特无论腹腔注射、口服和静脉注射给药，均有明显地抑制弓形虫繁殖的作用。曼得利特用药组与乙胺嘧啶组相比，小鼠腹水中弓形虫数量无显著性差异(P＞0.05)，说明曼得利特对弓形虫的抑制作用不低于乙胺嘧啶。

(2)、给药不同时间，各用药组与阳性对照组小鼠腹水中弓形虫数量的动态变化(见图1，图2)。

(3)、曼得利特腹腔注射组，阳性对照组不同时期肝组织及阴性对照组小鼠肝组织ABC染色图象分析结果(表8)。

经统计学分析显示：小鼠感染了弓形虫24h，曼得利特治疗组面密度与阳性对照组相比有显著差异(P＜0.01)，而与阴性对照组相比无差异性(P＞0.05)。表明曼得利特治疗感染小鼠24h，对小鼠肝组织内弓形虫侵入肝细胞以及在肝细胞内的繁殖均有明显的抑制作用。在治疗72h后，曼得利特治疗组面密度与阳性对照组相比仍有差异性(P＜0.05)。小鼠死亡后，曼得利特治疗组面密度与阳性对照组相比无差异性(P＞0.05)。表明弓形虫对两组小鼠肝组织破坏程度无差异。

(4)、各治疗组对感染小鼠存活时间的影响：

经用多样本均数的秩和检验，与阳性对照组小鼠生存时间相比，腹腔注射组、口服组、静脉注射组、乙胺嘧啶组小鼠生存时间均有显著性差异(P＜0.01)。表明曼得利特各治疗组均能有效的延长小鼠存活时间，与乙胺嘧啶对小鼠存活时间延长的效果相近(P＞0.05)(见表8，表9，表10)。

(5)、曼得利特对小鼠急性弓形虫病肝脏的保护作用：

a、HE染色光镜检查结果：

弓形虫感染阳性对照组小鼠肝脏病理变化明显而严重，通过光镜观察，在感染早期(24h)可见组织轻度充血，肝组织内有大量炎性细胞浸润。感染中期(72h)，肝组织内有小灶状肝细胞坏死及炎性细胞浸润灶，血管内皮细胞剥脱。感染晚期(小鼠死亡后)肝组织大片坏死，肝细胞肝胀，溶解坏死，炎性细胞浸润明显。

曼得利特治疗组小鼠肝组织的病理变化与阳性对照组相比，病变轻微。小鼠感染早期(24h)肝脏组织结构基本正常，未见坏死。感染中期(72h)肝组织结构大致正常，仅见血管内淤血，个别区域结构紊乱，肝细胞未见明显坏死，可见小灶状炎性细胞浸润。

乙胺嘧啶对照组小鼠感染早期(24h)肝组织结构大致正常，但细胞肿胀明显，可见点状肝细胞坏死和炎细胞浸润。小鼠感染中期(72h)肝组织结构紊乱，出血，充血明显，肝细胞中度肿胀，个别区域可见小的肝细胞坏死灶，血管内皮细胞剥脱。

b、免疫组织化学ABC法光镜观察

各治疗组小鼠肝组织病理变化与上述(HE染色)病理变化基本相同。

c、电镜观察结果

阳性对照组小鼠感染弓形虫24h，可见肝细胞核肿胀，染色质聚集成块，电子密度明显降低，胞质溶解，线粒体肿胀，线粒体嵴消失，有的线粒体溶解消失，粗面内质网肿胀。小鼠感染弓形虫72h，可见核膜迂曲，胞核变形，核仁偏移，染色质聚集成块，细胞质溶解，出现空泡，数量较多，线粒体明显肿胀，部分线粒体空泡变性，粗面内质网肿胀破裂，有少量白细胞浸润，毛细胆管有条离现象，紧密连接扩张，肝细胞间胶原纤维增生。小鼠死亡后，可见肝细胞核溶解破坏，核膜迂曲、断裂，线粒体及粗面内质网溶解、消失，细胞质溶解破坏加重，大量空泡。可见肝细胞内含数个虫体，虫体形态结构正常，白细胞浸润，毛细胆管内可见多量游离虫体，肝内见大片出血。

曼得利特治疗组：

感染小鼠用药24h后，可见肝细胞核正常，胞质内细胞器结构、形态正常，清晰可见，未见异常改变。同时可见肝细胞内虫体轻度破坏，胞膜突出、破裂，虫体前端细胞质溶解破坏，虫体电子密度增高。治疗72h，可见肝细胞核大致正常，染色质轻度聚集，线粒体、粗面内质网轻度肿胀，部分线粒体嵴消失。肝窦内虫体破坏明显，虫体肿胀，电子密度降低，胞膜崩解，伸出伪足，胞质溶解坏死，呈空泡改变，细胞器结构模糊不清，线粒体中度肿大，粗面内质网破裂、消失，致密颗粒消失。小鼠死亡后，肝细胞核形不规则，核膜迂曲，染色质凝集成块边移，线粒体肿、匀质改变，细胞器模糊不清。细胞内虫体破坏明显，胞膜破裂，胞质出现空泡，结构模糊，致密颗粒消失，虫体电子密度降低。

乙胺嘧啶治疗组：

感染小鼠治疗后24h，可见肝细胞大量破坏，染色质凝集、核模迂曲，细胞器结构不清、匀质改变，线粒体消失，粗面内质网破裂，可见巨大脂滴出现。用药72h后，肝细胞破坏更为严重，核模迂曲破裂，染色质聚集边移，细胞器明显溶解破坏。肝细胞内虫体破坏明显，形态尚可，核膜断裂，细胞器模糊，可见残留的棒状体。小鼠死亡后，肝细胞大量破坏，肝细胞界限不清，核形不规则，核膜迂曲断裂，染色质聚集成块，细胞器匀质改变，结构不清。

结论：

(1)、曼得利特经腹腔注射、口服、静脉注射均对感染小鼠体内的弓形虫有杀灭和抑制繁殖的作用，与阳性对照组比较有显著性差异(P＜0.01)。与乙胺嘧啶组比较，无显著性差异(P＞0.05)，即证明曼得利特对弓形虫的杀灭和抑制繁殖的作用不低于乙胺嘧啶。

(2)、曼得利特各种途径治疗组均能有效地延长感染小鼠的存活时间，与阳性对照组相比，有显著差异性(P＜0.01)。而与乙胺嘧啶组比较对小鼠存活时间延长的效果相近(P＞0.05)。

(3)、通过HE染色、免疫组化法光镜观察及电子显微镜观察，曼得利特各治疗组与阳性对照组各相应时期比较，具有明显的减轻弓形虫对肝组织、肝细胞的损伤破坏作用，可阻断和减轻病理过程，对肝脏有一定的保护作用。但乙胺嘧啶对肝组织和肝细胞有明显的损伤破坏作用，其毒副作用明显。

(4)、通过电镜观察，可以清楚地看到曼得利特对感染小鼠肝组织内游离的弓形虫速殖子及肝细胞内的弓形虫速殖子均有明显的损伤破坏作用，起到杀灭、抑制繁殖的作用。

二、曼得利特杀灭和抑制弓形虫机制试验

1.体外试验

将不同浓度的曼得利特加入感染小鼠腹水悬液中(弓形虫数1.5—3.5×10⁷/ml)，混匀，置37℃温箱。在不同时间(1h、2h、4h、8h)分别取出药物组和对照组各1管，用生理盐水离心洗涤3次，取材、制片，染色，用光镜和电镜观察。

(1)、光镜观察结果

低浓度药物组和高浓度药物组早期，可见部分虫体两端变钝，中部变粗，部分呈椭圆形，核固缩，染色深。随着药物浓度增高和作用时间延长，虫体变为椭圆和圆形，核固缩，深染明显。而对照组虫体呈典型的香蕉形，胞质染成淡兰色，较均匀，胞核呈紫红色、疏松。

(2)、透射电镜观察

阳性对照组小鼠腹水中弓形虫呈半月形或香蕉形，前端较尖，后端钝圆，一侧扁平，一侧较弯曲，虫体外被胞膜，胞核位于虫体中央稍偏后，染色质呈细粒状散在分布于核质中，核仁清晰，位置不定。棒状体、线粒体、高尔基体、粗面内质网、致密颗粒均清晰可见。曼得利特作用于弓形虫后超微结构改变主要发生在以下几个方面：A、细胞膜：可见局部增厚，或疏松甚至断裂，或局部变薄膨出呈空泡状。B、细胞核：核形不规则，核膜增厚、断裂、溶解、边缘模糊不清，异染色质聚集成块，核质部分溶解并出现多量空泡。C、细胞质和细胞器：结构明显破坏，基质溶解，出现大量空泡或空白溶解区。致密颗粒减少或消失。线粒体断裂、溶解呈空泡状。高尔基体、内质网等消失。棒状体电子密度降低，也有部分溶解呈空泡状，甚至消失。药物浓度愈大、作用时间愈长，各种损伤愈重、愈明显。

观察结果表明，曼得利特作用弓形虫后，首先破坏其细胞膜，改变其通透性，使药物渗入虫体，破坏其正常结构，同时破坏了各种细胞器，表明该药对蛋白质及糖原合成有严重破坏作用，同时影响其呼吸、运动、繁殖等功能，起到杀灭虫体的作用。

2.体内试验

感染小鼠应用曼得利特治疗不同时期，小鼠腹水中虫体形态结构变化。

(1)、光镜观察结果

用曼得利特经不同途径(腹腔注射、灌服、静脉注射)给感染小鼠给药，在不同时间(24h、72h、小鼠死亡后)分别取小鼠腹水涂片染色(姬姆萨染液)，光镜观察弓形虫滋养体形态结构变化。

阳性对照组小鼠腹水中弓形虫滋养体形态结构正常(与体外试验阳性对照组相似，如前所述)。曼得利特治疗组，24h后，可见大部分虫体肿胀，细胞膜破裂，细胞质中出现许多颗粒和空泡，部分虫体细胞核溶解、消失。假包囊内(细胞内)的虫体局部破裂。治疗72h后，虫体破坏明显加重，虫体肿胀，胞膜不完整，细胞质出现空泡，细胞核肿大、碎裂，假包囊内的虫体亦被破坏。小鼠死亡后，虫体破坏更加明显，见假包囊内虫体明显崩解死亡。

(2)、电镜观察

试验方法与光镜观察组相同。阳性对照组弓形虫滋养体形态结构正常(与体外观察结果相同，如前所述)。

曼得利特各治疗组24h后，腹水中部分弓形虫破坏，电子密度降低，胞膜突出、破裂，细胞质结构模糊，匀质改变。棒状体扩张，线粒体肿胀、破裂，致密颗粒减少，核固缩，核膜迂曲断裂。用药72h，可见虫体破坏严重，大部分虫体变圆或椭圆形。虫体电子密度明显降低，胞膜界限不清，胞质出现许多空泡及脂滴，致密颗粒消失，线粒体明显肿胀，嵴消失，内质网扩张破裂。小鼠死亡后，腹水中可见虫体结构大致正常的虫体，部分虫体破坏明显。假包囊内虫体也明显破坏，虫体胞膜突出、破裂，胞质结构不清，呈匀质化。核膜迂曲、破裂，染色质明显凝集。

感染小鼠应用曼得利特治疗后，不同时期小鼠组织结构及组织中(肝组织)弓形虫形态结构的变化：

(3)、光镜电镜观察结果

见药效学观察结果(如前所述)

结论：通过应用曼得利特对感染小鼠腹水及肝组织内的弓形虫作用后的形态观察，证明曼得利特的杀虫机制主要是该药可选择性的直接作用于虫体(对小鼠体内游离的及组织细胞内的弓形虫均有作用)，破坏弓形虫的细胞膜，破坏了细胞膜的正常功能，改变其通透性，药物进入虫体，破坏其正常结构，使细胞质、细胞核以及各种细胞器均发生损伤、破坏，进而影响蛋白质、糖原等合成代谢，并影响其能量代谢以及呼吸、运动、繁殖等功能，使虫体死亡或各种生理代谢功能严重受损，达到杀灭和抑制虫体生长发育、繁殖作用。

三、毒理试验

1、急性毒性试验

选用ICR小鼠用静脉注射和灌胃给药法进行试验。

试验结果：静脉注射的LD₅₀＝1128.702mg/kg，灌胃给药的LD₅₀＝3285mg/kg。

2、致畸试验

选用受精的雌性ICR小鼠，在受孕后的6—15天给药，每天灌服不同剂量的曼得利特1次。

试验结果

其活胚胎的数量、体重、身长、发育与对照组比较未发现异常，证明曼得利特无致畸作用。

3、Ames试验与微核试验均证明无致突变性。

四、曼得利特对正常活组织及组织细胞的毒性作用试验

给正常昆明株小鼠腹腔注射、灌服及静脉注射曼得利特2周，观察小鼠反应情况，并取腹水和肝脏组织切片、染色、光镜和电镜观察。

试验结果

(1)、曼得利特对正常小鼠的影响：在给药期间，小鼠未出现异常反应，停药后继续喂养至小鼠死亡，小鼠死亡时间与正常对照组小鼠死亡时间无明显区别。

(2)、曼得利特给药期间，小鼠肝组织的病理、免疫组化和电镜观察均未发现肝组织结构的破坏和肝细胞坏死。小鼠腹水检查清亮，仅见少量正常白细胞。

毒性作用试验证明曼得利特对正常小鼠无毒副作用。

从以上实验结果可以看出，本发明中的曼得利特经药效、毒理、作用机理等实验，证明它有很强地杀灭和抑制强毒株(RH株)弓形虫的作用，毒副作用很低，若用于弓形虫病的临床试验，预期将会有较好的治疗效果。

本发明的实施例1：

用常规工艺制备成片剂，以生产1000片曼得利特片(每片净重100mg)为例所用的原料和辅料的配比为：原料或辅料         重量       配比曼得利特            50g       50％玉米淀粉            35g       35％羟丙基纤维素        10g       10％粘合剂              5g        5％硬脂酸镁            适量

用常规工艺制备成注射液，以生产1000ml曼得利特注射液为例所用的原料和辅料的为：

曼得利特2.5g    注射水       1000ml附表1-10：曼得利特浓度及作用时间与弓形虫(RH株)台盼兰染色着色率(％)的关系                                     表1曼得利特对弓形虫感染小鼠腹水中弓形虫速殖子繁殖力的影响：

感染弓形虫24h曼得利特试验组与阳性对照组小鼠腹水中弓形虫数量的比较：                               表2

感染弓形虫72h曼得利特试验组与阳性对照组小鼠腹水中弓形虫数量的比较：

                                           表3

感染弓形虫小鼠死亡后曼得利特试验组与阳性对照组小鼠腹水中弓形虫数量的比较：试验组：                                       表4

死亡时间    死亡只数    腹水中弓形虫天平均数	弓形虫总平均数
		第8天         4只          3.488×106第9天         9只          5.8×106第10天        12只         8.326×106第11天        2只          46.95×106	16.141×106

阳性对照组：

死亡时间  死亡只数  腹水中弓形虫天平均数  弓形虫总平均数
	第4天    5只          24.76×106第5天    13只         29.53×106        27.97×106第6天    6只          29.63×106

感染弓形虫24h曼得利特口服试验组及曼得利特注射试验组与阳性对照组、乙胺嘧啶药物对照组小鼠腹水中弓形虫数量的比较：

            感染后24h各组小鼠腹水中弓形虫数量(个/ml)表5

1            2           3             4           5          X-
	阳性对照组  1.8×105  1.4×105   1.6×105    9.5×104  1.3×105  1.3×105乙胺嘧啶组  1.0×104  125×104   1.75×104   1.25×104 2.25×104 1.5×104口服组      4×104    1.75×104  2.5×104    1.5×104  2.0×104  2.35×104注射组      2.5×104  1×104     1.5×104    1.5×104  0.75×104 1.45×104

感染后72h各组小鼠腹水中弓形虫数量(个/ml)    表6

	1	2	3	4	5	X-
							阳性对照组	1.55×107	1.28×107	1.92×107	1.0×107	1.3×107	1.41×107
乙胺嘧啶组	1.75×104	1×104	0.75×104	0.5×104	1.2×104	1.04×104
							口服组	3.5×104	1.75×104	1.5×104	3.5×104	2×104	2.45×104
注射组	1.23×106	3.4×106	7.4×105	8.6×105	1.3.5×105	1.27×106

各组小鼠死亡后腹水中弓形虫计数结果(个/ml)表7

组别       死亡时间  死亡只数  腹水弓形虫平均数/天 弓形虫总平均数
	阳性对照组   第4天      5只         5.86×106第6天      15只        7.25×106         6.65×106
口服组       第6天      1只         1.8×106第7天      5只         3.42×106第8天      3只         6.7×105          2.86×106第9天      5只         7.2×106第10天     1只         1.19×106
	注射组       第6天      5只         4.5×106第7天      8只         7.21×105         1.84×106第8天      2只         3×105
乙胺嘧啶组   第7天      4只         1.13×104第8天      9只         0.6×104          0.99×104第9天      3只         1.3×104第10天     4只         0.94×104

曼得利特试验组、阳性对照组小鼠不同时期肝组织以及阴性对照组小鼠肝组织ABC染色图像分析：              表8

试验组                           阳性对照组	阴性对照8.6435053.850.00025
		24h(1)    72h(2)    死亡(3)   24h(4)    72h(5)    死亡(6)
阳性面积     100.25    219.00    855.11    1368.05   6035.79   1112.62统计场总面积 27638.05  35053.85  35307.69  35307.69  35307.69  34869.23面密度       0.00362   0.00625   0.02122   0.03875   0.17095   0.03191

注：单位：um²   面密度＝阳性面积/统计场总面积曼得利特对弓形虫感染小鼠生存时间的影响：曼得利特试验组小鼠与阳性对照组小鼠平均存活天数比较：表9

组别        动物数 总的存活天数 平均存活天数
	试验组(300mg/kg/d)   27        255         9.44阳性对照组       24        121         5.04

曼得利特试验组与阳性对照组小鼠生存时间比较  表9

阳性对照组                     试验组生存天数   只数   秩次 生存天数 只数    秩次
	4        5    1-5      8      4     25-285        13   6-18     9      9     29-376        6    19-24    10     12    38-4911     2     50-51
ni＝24 T1＝300       n2＝27 T2＝1026

曼得利特对弓形虫感染小鼠生存时间的影响：曼得利特口服试验组、注射试验组、乙胺嘧啶药物对照组与阳性对照组小鼠平均存活天数的比较：

  各组小鼠平均存活天数(天)               表10

组别       动物数  总的存活天数 平均存活天数
	阳性对照组 20      110          5.5乙胺嘧啶组 20      167          8.35口服组     15      120          8.0注射组     15      102          6.8

Claims (1)

1. 有效成份用曼得利特制备治疗人兽共患弓形虫病的药物用途。