CN1255927A - 人神经胶质成熟因子(GMF)β同系基因(CBFBOE11) - Google Patents

人神经胶质成熟因子(GMF)β同系基因(CBFBOE11) Download PDF

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沈宇
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Abstract

公开了CBFBOE11多肽和多核苷酸及通过重组技术生产上述多肽的方法。还公开了应用CBFBOE11多肽和多核苷酸治疗癌症、神经性疾病和自身免疫性疾病以及其它疾病的方法,以及对上述病情进行诊断的方法。

Description

人神经胶质成熟因子(GMF)β同 系基因(CBFBOE11)
发明领域
本发明涉及新鉴定的多核苷酸，由这些多核苷酸编码的多肽和上述多核苷酸和多肽的应用以及生产方法。更具体而言，本发明的多核苷酸和多肽涉及神经胶质成熟因子家族，在此之后称为CBFBOE11。本发明也涉及上述多核苷酸和多肽的抑制或激活作用。
发明背景
神经胶质成熟因子与神经元发育和成熟有关。这表明神经胶质成熟因子家族具有作为治疗靶点已确立并证实的历史。显然，需要对神经胶质成熟因子家族的更多成员进行鉴定并描述其特性，这些因子在预防、改善或校正机能不良或疾病，包括但不局限于癌症、神经性疾病和自身免疫疾病中起作用。
发明概述
在一方面，本发明涉及CBFBOE11多肽和重组材料以及生产方法。本发明的另一方面涉及应用上述CBFBOE11多肽和多核苷酸的方法。上述用途包括治疗癌症、神经性疾病和自身免疫疾病及其它疾病。在另一方面，本发明还涉及应用由本发明提供的材料鉴别激动剂和拮抗剂的方法，和用所鉴别出的化合物治疗和CBFBOE11失衡有关的病情。而本发明的另一方面涉及检测和不适当的CBFBOE11活性或水平相关的疾病的诊断方法。
发明描述
定义
提供下列定义以便于对本发明经常使用的某些术语的理解。
虽然有其他意义，“CBFBOE11”一般指具有在SEQ ID NO：2给出的氨基酸序列的多肽或其等位变异体。
“CBFBOE11活性或CBFBOE11多肽活性”或“CBFBOE11或CBFBOE11多肽的生物学活性”指的是所述的CBFBOE11的代谢或生理学功能，包括相似的活性或改善的活性或具有降低非所需的副作用的这些活性。也包括所述的CBFBOE11的抗原和免疫原活性。
“CBFBOE11基因”指的是具有在SEQ ID NO：1给出的核苷酸序列的多核苷酸或其等位变异体和/或它们的互补体。
本发明所用的“抗体”包括多克隆和单克隆抗体、嵌合、单链和人源化抗体，以及Fab片段，包括Fab的产物或其它免疫球蛋白表达文库的产物。
“分离的”意味着从天然状态“通过人工”改变。如果一种“分离的”组合物或物质在天然中出现，即从其原始的环境已被改变或转移，或者两种情况兼而有之。例如，天然存在在活动物中的多核苷酸或多肽不是“分离的”，而从其天然状态共存在的材料中分离的相同多核苷酸或多肽为“分离的”，正是本发明所用的术语的意思。
一般来说，“多核苷酸”指的是任何多核苷酸或多脱氧核苷酸，它们可以是非修饰的RNA或DNA或修饰过的RNA或DNA。“多核苷酸”包括单链和双链区混合的DNA(不限制单链和双链DNA)，单链和双链RNA，单链和双链区混合的RNA以及杂种分子，该杂种分子包含可以是单链或更典型的双链或单链和双链区混合的DNA和RNA。此外，“多核苷酸”指的是包含RNA或DNA或RNA和DNA二者的三链区。术语多核苷酸也包括含有1个或多个修饰碱基的DNAs或RNAs和具有为稳定或其他原因修饰骨架的DNAs和RNAs。“修饰的”碱基包括例如三苯甲基化碱基和如次黄嘌呤核苷的稀有碱基。各种修饰对DNA和RNA进行，因此，“多核苷酸”包括多核苷酸的化学、酶学或代谢修饰的形式，一般为天然中所找到的形式，以及病毒和细胞DNA和RNA特性的化学形式。“多核苷酸”也包含相对短的多核苷酸，通常称作寡核苷酸。
“多肽”指的是包括通过肽键或修饰过的肽键即肽同配物互相连接2个或多个氨基酸的任何肽或蛋白。“多肽”指的是短链，通常称作肽、寡肽或寡聚体，和较长链，一般称为蛋白。多肽可含有非20个基因编码氨基酸的氨基酸。“多肽”包括通过天然加工如翻译后加工修饰或通过本领域众所周知的化学修饰技术修饰过的氨基酸序列。上述修饰方法在基础教程和更详细的专题文章以及大量的研究文献中充分描述。修饰能在多肽的任何部位包括肽骨架，氨基酸侧链和氨基或羧基末端出现。值得赞赏的是，相同类型的修饰可在一种给定多肽的几个位点上以相同或不同的程度存在。另外，一种给定的多肽可含有多种类型的修饰。多肽可因遍在蛋白化的结果而分枝，并且它们可以具有或没有分枝的情况下环化。环形分枝和分枝环形的多肽可来源于翻译后天然加工过程或通过合成方法制得。修饰包括乙酰化、酰化作用、ADP-核糖基化、酰胺化、核黄素的共价连接、血色素组分的共价连接、核苷酸或核苷酸衍生物的共价连接、脂类或脂类衍生物的共价连接、磷脂酰肌醇的共价连接、交联、环形化、二硫键形成、去甲基化、共价交联的形成、胱氨酸的形成、焦谷氨酸的形成、甲酰化、γ羧基化、糖苷化、GPI锚定形成、羟基化、碘化、甲基化、肉豆蔻基化、氧化、蛋白裂解加工、磷酸化、异戊二烯化、消旋化、硒化、硫酸化、由转移RNA介导的往蛋白上添加氨基酸如精氨酰基化和遍在蛋白化。例如见，蛋白结构和分子特性，第二版，T.E.Creighton编著，W.H. Freeman公司，纽约，1993和Wold，F.，翻译后蛋白修饰：概况和前景，《蛋白的翻译后共价修饰》一书中1-12页，B.C.Johnson编著，学术出版社，纽约，1983；Seifter等“蛋白修饰和非蛋白共因子的分析”，酶学方法(1990)182：626-646和Rattan等，“蛋白合成：翻译后修饰和老化”，纽约科学院年报(1992)663：48-62。
本发明中作为术语使用的“变异体”，是一种分别与参考多核苷酸或多肽不同的但保留基本特性的多核苷酸或多肽。一种典型的多核苷酸变异体在核苷酸序列方面与另一种参考多核苷酸不同。在变异体核苷酸序列中的变化可能改变或没有改变由该参考核苷酸编码的多肽的氨基酸序列。正如以下所讨论的那样，核苷酸的变化可导致在由参考序列编码的多肽中的氨基酸替换、添加、缺失、融合和截短。一种典型的多肽变异体与另一种参考多肽的氨基酸序列方面不同。一般来说，差异是有限的，这样参考多肽和变异体的序列整个来说非常相似，并且在许多区域中是一致的。变异体和参考多肽在氨基酸序列方面可通过任一种组合的一个或多个替换、添加、缺失而不同。替换或插入的氨基酸残基可能是或不是由遗传密码所编码的种类。多核苷酸或多肽的变异体可能是天然产生的如等位变异体，或未知的天然产生的变异体。非天然产生的多核苷酸和多肽的变异体可通过诱变或直接合成的方法制得。
本领域熟知的“一致性”是2种或多种多肽序列之间或2种或多种多核苷酸序列之间的关系，由比较其序列确定。在本领域中，“一致性”也意味着在可能的情况下多肽或多核苷酸序列之间序列相关性的程度，通过上述一串串序列的配对确定。“一致性”和“相似性”能通过熟知的方法方便地计算，这些方法包括但不局限于以下描述的那些种类(计算分子生物学，Lesk A.M编著，牛津大学出版社，纽约，1988；生物计算学：信息学和基因组计划，Smith，D.W.编著，学术出版社，纽约，1993；序列资料的计算机分析，第一部分，Griffn，A.M和Griffn，H.G.编著，Humana出版社，New Jersey，1994；分子生物学中的序列分析，von Heinje，G.学术出版社，1987；和序列分析引物，Gribskov，M和Devereux，J编著，M Stockton出版社，纽约，1991；以及Carillo，H和Lipman，D，SIAM应用数学杂志.，48：1073(1988))。确定一致性的优选方法应设计为给出所检测的序列之间的最大配对。确定一致性和相似性的方法编码在一般途径可得到的计算机程序中。确定2种序列之间一致性和相似性的优选计算机程序方法包括但不局限于GCG程序包(Devereux，J.等，核酸研究12(1)：387(1984)，BLASTP，BLASTN，和FASTA(Atschul，S.F.等，分子生物学杂志215：403-410(1990))。BLAST X程序可从NCBI和其他来源的一般途径得到(BLAST手册，Altschul，S.，等，NCBI NLM NIHBethesda，MD 20894；Altschul，S.，等，分子生物学杂志215：403-410(1990)。众所周知的Smith  Waterman也可用于确定一致性。
针对多肽序列比较的优选参数包括下列：
1)计算规则：Needleman和Wunsch，分子生物学杂志48：443
            -453(1970)
比较基数：来自Hentikoff和Hentikoff，美国国家科学院院报，89：
          10915-10919(1992)。
间隔扣分：12
间隔长度扣分：4
用于这些参数的程序作为“间隔”程序可从一般途径从遗传学计算机组，Madison WI获得。以上提到的参数对多肽比较是缺乏的参数(附对末端间隔没有扣分)。
针对多核苷酸比较的优选参数包括下列：
1)计算规则：Needleman和Wunsch，分子生物学杂志，48：443
            -453(1970)
比较基数：配对＝+10，错配＝0
间隔扣分：50
间隔长度扣分：3
用于这些参数的程序作为“间隔”程序从一般途径从遗传学计算机组，Madison WI获得。以上提到的参数对多核苷酸比较为缺乏的参数。
优选的多核苷酸实施方案进一步包括一种分离的多核苷酸，该多核苷酸含有与SEQ ID NO：1的多核苷酸参考序列的一致性至少具有50、60、70、80、85、90、95、97或100％的多核苷酸，其中所述的参考序列可以与SEQ ID NO：1的序列一致或者可能包括与参考序列相比较达到一些整数的核苷酸改变，其中所述的改变选自下组：至少1个核苷酸缺失、替换包括变迁和转变或插入，其中所述的改变可出现在参考核苷酸序列的5′或3′末端位置，或者在参考序列的核苷酸之间单个间隔或在参考序列中1个或多个毗邻组的间隔的那些末端位置之间的任何位置，其中所述的核苷酸改变数量通过SEQ ID NO：1中核苷酸总数乘以各自百分率一致性的百分比值，然后从SEQ IDNO：1中核苷酸总数中减去该乘积的形成值确定，或者：
nn≤xn-(xn·y)，
其中nn是核苷酸改变的数量，xn是在SEQ ID NO：1中核苷酸总数，而y为0.50作为50％，0.60作为60％，0.70作为70％，0.80作为80％，0.85作为85％，0.90作为90％，0.95作为95％，0.97作为97％或1.00作为100％，并且其中任何xn和y的非整数形成值，在用xn减去该值之前，取整到最邻近的整数。编码SEQ ID NO：2多肽的多核苷酸序列的改变可能形成在该编码序列的无义、错义或移码突变，因此改变了由下列所述改变的多核苷酸编码的多肽。
优选的多肽实施方案进一步包括一种分离的多肽，该多肽包含与SEQ ID NO：2的多肽参考序列一致性至少为50、60、70、80、85、90、95、97或100％的多肽，其中所述的参考序列可能与SEQID NO：2的序列一致，或者与参考序列相比较可能包括达到某种整数值的氨基酸改变，其中所述的改变选自如下一组，至少1个氨基酸缺失、替换包括保守性和非保守性的替换或插入，而其中所述的改变可出现在参考多肽序列的氨基或羧基末端位置，或那些末端位置之间在参考序列氨基酸中单个间隔或参考序列中1个或多个毗邻组间隔的任何位置，并且其中所述的氨基酸改变数量由在SEQ ID NO：2中氨基酸总数乘以各个百分率一致性的百分比值然后从SEQ ID NO：2中所述的氨基酸总数中减去该乘积而确定，或者：
na≤xa-(xa·y)，
其中na是氨基酸改变的数量，xa是SEQ ID NO：2中的氨基酸总数而y为0.50作为50％，0.60作为60％，0.70作为70％，0.80作为80％，0.85作为85％，0.90作为90％，0.95作为95％，0.97作为97％或1.00作为100％，并且其中任何xa和y的非整数形成值，在被xa减去之前，取整到最接近的整数。
本发明的多肽
在一个方面，本发明涉及CBFBOE11多肽(或CBFBOE11蛋白)。CBFBOE11多肽包括SEQ ID NO：2的多肽，以及包含SEQ IDNO：2氨基酸序列的多肽和就其全长来说与SEQ ID NO：2的序列至少80％一致性的氨基酸序列的多肽，和与SEQ ID NO：2相比仍较优选至少90％一致性和甚至仍较优选95％一致性的多肽。此外，那些至少具有97-99％一致性的多肽是高度优选的。还包括在CBFBOE11多肽之中的是就其全长来说与具有SEQ ID NO：2的氨基酸序列的多肽至少80％一致性的氨基酸序列的多肽，而与SEQ IDNO：2相比仍较优选至少90％一致性和仍较优选至少95％一致性的多肽。此外，那些至少具有97-99％一致性的多肽是高度优选的。优选的CBFBOE11多肽至少表现一种CBFBOE11的生物学活性。
所述的CBFBOE11多肽可以是“天然”蛋白的形式或较大的蛋白如融合蛋白的一部分。包括额外的含有分泌或前导序列，前序列，便于纯化如多组氨酸残基的序列或者为重组产生过程中稳定性考虑的额外序列的氨基酸序列，这通常是有利的。
CBFBOE11多肽的片段也包括在本发明中。片段是一种具有的氨基酸序列大体说来与前面提到的CBFBOE11多肽的氨基酸序列部分相同但不是全部相同的多肽。至于CBFBOE11多肽，片段可以“自由出现”，或包含在一种较大的多肽中，在该多肽中片段形成部分或区域，最优选的是作为单个连续区。本发明多肽片段的代表性实施例包括例如来自CBFBOE11多肽大约氨基酸数目1-20、21-40、41-60、61-80、81-100和101至末端的片段。在本论述中“大约”包括由在一个极端或在二个极端上几个、5、4、3、2或1个氨基酸的较大或较小的特别列举范围。
优选的片段包括例如具有CBFBOE11多肽的氨基酸序列的截短多肽，但缺失包括氨基末端连续系列的残基或包括羧基末端连续系列的残基或者缺失2个连续系列的残基(1个包括氨基末端和1个包括羧基末端)的情况除外。另外优选的是有结构和功能特性为特征的片段，如包含α-螺旋和α-螺旋形成区、β-折叠和β-折叠形成区、转折和转折形成区、螺旋和螺旋形成区、亲水区、疏水区、α两亲区、β两亲区、柔性区、表面形成区、底物结合区和高抗原指数区的片段。其他优选的片段是生物学活性片段。生物学活性片段是那些介导CBFBOE11活性的片段，包括具有相似活性或改善的活性或降低不需要的活性的那些片段。还包括那些在动物尤其在人中是抗原或免疫原的片段。
优选地，所有这些多肽片段仍保留CBFBOE11的生物学活性，包括抗原活性。所定义的序列和片段的变异体也形成本发明的部分。优选的变异体是那些由保守氨基酸替换即用另一个相似特性的残基替换而与参照体不同的种类。典型的上述替换可在Ala、Val、Leu和Ile之间；Ser和Thr之间；酸性残基Asp和Glu之间；Asn和Gln之间和碱性残基Lys和Arg之间或芳香族残基Phe和Tyr之间。特别优选的是在任何组合中几个、5-10、1-5或1-2个氨基酸被替换、缺失或添加的变异体。
本发明的CBFBOE11多肽能用任何合适的方式制备。上述多肽包括分离的天然产生的多肽、重组产生的多肽、合成产生的多肽，或这些方法的组合产生的多肽。制备这些多肽的方法在本领域完全掌握。
本发明的多核苷酸
本发明的另一方面涉及CBFBOE11多核苷酸。CBFBOE11多核苷酸包括分离的编码CBFBOE11多肽和片段的多核苷酸和与其紧密相关的多核苷酸。更具体而言，本发明的CBFBOE11多核苷酸包括在SEQID NO：1中含有的编码SEQ ID NO：2的CBFBOE11多肽的核苷酸序列的多核苷酸和具有SEQ ID NO：1的特殊序列的多核苷酸。CBFBOE11多核苷酸进一步包括与编码SEQ ID NO：2的CBFBOE11多肽的核苷酸序列就其全长来说至少80％一致性的核苷酸序列的多核苷酸和包含就其全长来说与SEQ ID NO：1至少80％一致的核苷酸序列的多核苷酸。在此方面，至少90％一致的多核苷酸是尤其优选的，而至少95％一致的那些是特别优选的。此外，至少97％一致的那些多核苷酸是高度优选的，至少98-99％一致的那些是极为高度优选的，而至少99％一致的最为优选。还包括在CBFBOE11多核苷酸之下的是与在SEQ ID NO：1中含有的核苷酸序列足够一致，在用作扩增或用作探针或标记的条件下能杂交的核苷酸序列。本发明也提供与上述CBFBOE11多核苷酸互补的多核苷酸。
本发明的CBFBOE11与神经胶质细胞成熟因子家族的其它蛋白在结构上相关，如在表1(SEQ ID NO：1)编码人CBFBOE11的cDNA测序结果所示。SEQ ID NO：1的cDNA序列含有一个开放阅读框架(核苷酸数目5～430)，编码一种142个氨基酸的SEQ IDNO：2多肽。表2的氨基酸序列(SEQ ID NO：2)有140个氨基酸残基与人和大鼠GMF-β大约82.1％的一致性(用FASTA)(R.Kaplan等，神经化学杂志，57(2)，483-490，1991)。表1的核苷酸序列(SEQ ID NO：1)有433个核苷酸残基与人和大鼠的GMF-β大约70.2％的一致性(用FASTA)(R.Kaplan等，神经化学杂志，57(2)，483-490，1991)。因此，预期本发明的CBFBOE11多肽和多核苷酸特别具有与它们同源的多肽和多核苷酸相似的生物学功能/特性，并且它们的用途对本领域的任何技术人员来说是显而易见的。
                               表1a
      1 AATCATGTCT GACTCCCTGG TGGTGTGCGA GGTAGACCCA GAGCTAACAG51 AAAAGCTGAG GAAATTCCGC TTCCGAAAAG AGACAGACAA TGCAGCCATC101 ATAATGAAGG TGGACAAAGA CCGGCAGATG GTGGTGCTGG AGGAAGAATT151 TCAGAACATT TCCCCAGAGG AGCTCAAAAT GGAGTTGCCG GAGAGACAGC201 CCAGGTTCGT GGTTTACAGC TACAAGTACG TGCATGACGA TGGCCGAGTG251 TCCTACCCTT TGTGTTTCAT CTTCTCCAGC CCTGTGGGCT GCAAGCCGGA301 ACAACAGATG ATGTATGCAG GGAGTAAAAA CAGGCTGGTG CAGACAGCAG351 AGCTCACAAA GGTGTTCGAA ATCCGCACCA CTGATGACCT CACTGAGGCC401 TGGCTCCAAG AAAAGTTGTC TTTCTTTCGT TGATCTCTGG GCTGGGGACT451 GAATTCCTGA TGTCTGAGTC CTCAGGTGAC TGGGGACTTG GAACCCTAGG501 ACCTGAACAA CCAAGACTTT AAATAATTTT AAATGCAAAA ACTCAGAAAA551 AAAAAAAAAA A
a人CBFBOE11的核苷酸序列(SEQ ID NO：1)
                           表2b
      1 MSDSLVVCEV DPELTEKLRK FRFRKETDNA AIIMKVDKDR QMVVLEEEFQ51 NISPEELKME LPERQPRFVV YSYKYVHDDG RVSYPLCFIF SSPVGCKPEQ101 QMMYAGSKNR LVQTAELTKV FEIRTTDDLT EAWLQEKLSF FR
b人CBFBOE11的氨基酸序列(SEQ ID NO：2)
本发明编码CBFBOE11的一种多核苷酸可用标准的克隆和筛选方法，用表达序列标签(EST)分析从来源于人脊髓血液细胞的mRNA形成的cDNA文库中获得(Adams，M.D.等，科学(1991)252：1651-1656；Adams，M.D.等，自然(1992)355：632-634；Adams，M.D.等，自然(1995)377增刊：3-174)。本发明的多核苷酸也能从天然来源如基因组DNA文库中获得，或者用众所周知的商业途径可购得的技术合成。
编码SEQ ID NO：2的CBFBOE11多肽的核苷酸序列与在表1中(SEQ ID NO：1的核苷酸数目5～430)含有的编码序列的多肽一致，或者它可能是这样的一种序列，作为遗传密码冗余性(简并性)的结果也编码SEQ ID NO：2的多肽。
当本发明的多核苷酸用作CBFBOE11多肽的重组生产时，该多核苷酸可包括对成熟多肽或其片段通过自身作用的编码序列；对成熟多肽或片段在阅读框架中具有其他编码序列的编码序列，如那些编码引导或分泌的序列，前-或原-或前原蛋白序列或其他融合肽部分。例如，能编码便于融合多肽纯化的标记序列。在本发明此方面的一些优选实施方案中，标记序列是六个组氨酸的肽，用pQE载体提供(Qiagen，Inc)并在Gentz等，美国国家科学院院报(1989)86：821-824中有描述，或者标记序列是HA标签。该多核苷酸也可以含有非编码的5′和3′序列，如转录非翻译的序列，拼接和多腺苷化信号，核糖体结合位点和稳定mRNA的序列。
进一步优选的实施方案是编码包含有表2的CBFBOE11多肽氨基酸序列(SEQ ID NO：2)的CBFBOE11变异体的多核苷酸，其中几个、5-10、1-5、1-3、1-2或1个氨基酸残基被替换、缺失或添加，以任何组合的方式进行。
本发明进一步涉及与在此上面所描述的序列杂交的多核苷酸。在此方面，本发明特别涉及在严格条件下能与在此上面所描述的多核苷酸杂交的多核苷酸。至于本发明所用的术语“严格条件”意指序列之间仅在一致性至少80％，优选地至少90％，更优选地至少95％，而甚至更优选地97-99％时发生杂交。
与在SEQ ID NO：1或其片段中含有的核苷酸序列一致或足够一致的本发明多核苷酸，可用作cDNA和基因组DNA的杂交探针，以分离编码CBFBOE11多肽的全长cDNAs和基因组克隆和分离与CBFBOE11基因高度序列相似性的其他基因的cDNA和基因组克隆(包括编码来源于不是人的物种的同系物和定向进化同源基因的基因)。上述杂交技术对本领域的技术人员来说众所周知。典型地这些核苷酸序列与参照体的序列80％一致性，优选的90％一致性，更优选地95％一致性。一般来说所述的探针包括至少15个核苷酸。优选地，上述探针至少具有30个核苷酸和可能至少具有50个核苷酸。特别优选的探针将在30和50个核苷酸的范围。
在为获得编码CBFBOE11多肽的多核苷酸包括来源于不是人的物种的同系物和定向进化同源基因，在一个实施方案中包括如下步骤，用具有SEQ ID NO：1或其片段的探针在严格杂交条件下筛选合适的文库；然后分离含有所述多核苷酸序列的全长cDNA和基因组克隆。因此，在另一方面，本发明的CBFBOE11多核苷酸进一步包括一种核苷酸序列，该核苷酸序列包含一种与具有SEQ ID NO：1或其片段的核苷酸序列在严格条件下杂交的核苷酸序列。还与CBFBOE11多肽包括在一起的是包含通过上述杂交条件获得的核苷酸序列编码的氨基酸序列的多肽。上述杂交技术在本领域的技术人员中众所周知。严格杂交条件如上面限定，或者另外在含有：50％甲酰胺，5×SSC(150mMNaCl，15mM柠檬酸三钠)，50mM磷酸钠(pH7.6)，5×Denhardt′s溶液，10％硫酸葡聚糖和20微克/ml变性切剪过的鲑精DNA的溶液中，42℃下温育过夜的条件，然后在大约65℃ 0.1×SSC中洗涤杂交膜。
本发明的多核苷酸和多肽可用作研究试剂和材料，以发现对动物和人类疾病的治疗和诊断。
载体，宿主细胞，表达
本发明也涉及含有本发明的一种多核苷酸或多种多核苷酸的载体，和用本发明的载体遗传工程化的宿主细胞以及用重组技术生产本发明的多肽。无细胞翻译系统也能用于来源于本发明DNA构建体的RNAs生产上述蛋白。
对重组生产而言，宿主细胞能被遗传工程操作以掺入针对本发明多核苷酸的表达系统或其部分。把多核苷酸导入到宿主细胞能通过在许多标准实验室操作手册中所描述的方法实现，如Davis等，分子生物学的基本方法(1986)和Sambrook等，分子克隆：实验室手册，第二版，冷泉港实验室出版社，冷泉港，纽约(1989)，如磷酸钙转染、DEAE-葡聚糖介导的转染、转位、微注射、阳离子脂质体介导的转染、电穿孔、转导、划痕负载、冲击导入或感染。
合适宿主的代表性实施例包括细菌细胞，如链球菌、葡萄球菌、大肠杆菌、链霉菌、和枯草杆菌细胞；真菌细胞如酵母细胞和曲霉菌细胞；昆虫细胞如果蝇S2和草地夜蛾Sf9细胞；动物细胞如CHO、COS、HeLa、C127、3T3、BHK、HEK293和Bowes黑色素瘤细胞；和植物细胞。
能用大量的各种表达系统。上述系统包括其他系统也在内的染色体、附加体和病毒来源的系统，如来源于细菌质粒、细菌噬菌体、转座子、酵母附加体、插入元件、酵母染色体元件的载体，来源于病毒如杆状病毒、乳头瘤病毒如SV40，痘菌病毒、腺病毒、禽痘病毒、假性狂犬病毒和逆转录病毒的载体和来源于其组合的载体，如来源于质粒和细菌噬菌体遗传元件的那些种类如粘粒和噬菌粒。表达系统可含有调节和产生表达的控制区。一般来说，可以使用适于在宿主中维持、增殖或表达多核苷酸以产生多肽的任何系统或载体。合适的核苷酸序列可通过各种众所周知常规技术的任一种，例如Sambrook等，分子克隆，实验室手册(同上)所描述的那些方法，插入到表达系统中。
为把翻译的蛋白分泌到内质网腔，分泌到外周间隙或分泌到细胞外环境中，合适的分泌信号可掺入到所期望的多肽中。这些信号对多肽来说可以是内源的或它们可能是异源信号。
如果CBFBOE11多肽表达用于筛选方法中，一般来说该多肽出现在细胞表面是优选的。在该事件中，用于筛选分析前可收获细胞。如果CBFBOE11多肽被分泌到培养基中，可重新获得培养基以便于重新获得和纯化多肽；如果在细胞内产生，在重新获得该多肽前首先必需裂解细胞。
CBFBOE11多肽能通过众所周知的方法从重组细胞培养物中重新获得和纯化，这些方法包括硫酸铵或乙醇沉淀、酸抽提、阴离子和阳离子交换层析、磷纤维素层析、疏水相互作用层析、亲和层析、羧基磷灰石层析和凝集素层析。最优选地，高效液相层析可用于纯化。当该多肽在分离和/或纯化过程中变性时，可利用熟知的技术重新折叠蛋白以重新产生活性构象。
诊断分析
本发明还涉及CBFBOE11多核苷酸用作诊断试剂的用途。和机能失调有关的CBFBOE11基因突变形式的检测将提供一种检测工具，该工具增加或确定疾病的诊断或由于CBFBOE11表达不足、过表达或改变表达的疾病的易感性。携带有在CBFBOE11基因中突变的个体可通过各种技术在DNA水平上检测出来。
用于诊断的核酸可从受试者的细胞例如血液、尿液、唾液、组织活检或尸检的材料中获得。基因组DNA可直接用于检测或者分析前用PCR或其他扩增技术进行酶法扩增。RNA或cDNA也可以相似的方式使用。根据扩增产物的大小变化与正常基因型相比较，能检测出缺乏和插入。点突变能通过扩增的DNA与标记的CBFBOE11核苷酸序列杂交鉴定。完全配对的序列通过RNase消化或熔解温度的差异与非配对的复合体区别开来。由具有或没有变性剂的凝胶中DNA片段的电泳迁移性或直接DNA测序也可检测出DNA序列的差异。如见Myers等，科学(1985)230：1242。在特定位置的序列变化也可通过核酸酶保护分析如RNase和S1保护或化学裂解方法显示。见Cotton等，美国国家科学院院报(1985)85：4397-4401。在另一实施方案中，能构建包含CBFBOE11核苷酸序列或其片段的寡核苷酸探针阵列以进行如遗传突变的有效筛选。阵列技术方法已众所周知，具有普遍使用性，并且能用于说明分子遗传学中包括基因表达、遗传连锁和遗传变异的各种问题(如见Chee M.等，科学，274卷610-613页(1996))。
诊断分析法提供一种途径，通过所描述的方法检测在CBFBOE11基因中的突变，诊断或确定对癌症、神经性疾病和自身免疫疾病的易感性。
此外，癌症、神经性疾病和自身免疫疾病能通过下列方法诊断，这些方法包括测定来源于受试者样品的CBFBOE11多肽或CBFBOE11mRNA异常的降低或增加水平。降低或增加表达能在RNA水平检测，用本领域众所周知的定量多核苷酸的任何方法，例如PCR、RT-PCR、RNase保护、Northern印迹和其他杂交方法。用于测定来自宿主的样品的蛋白水平，如CBFBOE11多肽水平的分析技术对本领域的技术人员来说众所周知。上述分析方法包括放射免疫分析法，竞争结合分析法，Western印迹分析法和ELISA分析法。
因此在另一方面，本发明涉及针对疾病或对疾病易感性，尤其是癌症、神经性疾病和自身免疫性疾病的一种诊断试剂盒，该试剂盒包括：
(a)CBFBOE11多核苷酸、优选地SEQ ID NO：1的核苷酸序列或其片段；
(b)与(a)的序列互补的核苷酸序列；
(c)CBFBOE11多肽、优选地SEQ ID NO：2的多肽或其片段；或者
(d)针对CBFBOE11多肽的抗体，优选地对SEQ ID NO：2的多肽。
应该意识到，在上述任何试剂盒中，(a)、(b)、(c)或(d)可包括基本组分。
染色体分析
本发明的核苷酸序列也对染色体鉴定有价值。序列是特异靶向的并且能与单个人染色体的特异位置杂交。根据本发明将有关序列作图到染色体上是确定和基因有关疾病的那些序列的关系的重要第一步。一旦序列被作图到精确的染色体上位置，在染色体上序列的物理位置能和遗传图数据相联系。上述数据如在V.McKusick，人类孟德尔式遗传中找到(可通过网上在线从约瀚·霍普金斯大学Welch医学图书馆获得)。然后，已经作图到相同染色体区的基因和疾病之间的关系可通过连锁分析(物理邻近基因的共遗传性)鉴定。
受影响和非受影响个体之间在cDNA或基因组序列中的差异也能确定。假如在一些或所有的受影响个体但不在任何正常个体中观察到突变，那么该突变可能是引起该疾病的因素。
抗体
本发明的多肽或它们的片段或其类似物或表达它们的细胞，能用作免疫原以产生对CBFBOE11多肽免疫特异的抗体。术语“免疫特异的”意味着所述的抗体具有基本上对本发明的多肽的亲和力比对以前技术所描述的其他相关多肽的亲和力更大。
产生抗CBFBOE11多肽的抗体能通过用常规方法给动物，优选的非人类施用所述的多肽或带有表位的片段，类似物或细胞而获得。为制备单克隆抗体，能用任何提供由连续细胞系培养物产生抗体的技术。实施例包括杂交瘤技术Kohler，G和Milstein，C.自然(1975)256：495-497)三瘤技术(trioma)、人B细胞杂交瘤技术(Kozbor等，今日免疫学(1983)4：72)和EBV-杂交瘤技术(Cole等，单克隆抗体和癌症治疗，77-96页，Alan R.Liss，Inc.1985)。
也能采用产生单链抗体的技术(美国专利号4,946,778)产生针对本发明多肽的单链抗体。此外，转基因小鼠或其他生物包括其他哺乳动物可用于表达人源化的抗体。
上述描述的抗体可用于分离或鉴定表达所述多肽的克隆或通过亲和层析纯化多肽。
抗CBFBOE11多肽的抗体也能用于治疗癌症，神经性疾病和自身免疫疾病在内的其他疾病。
疫苗
本发明的另一方面涉及在哺乳动物中诱导免疫应答的方法，该方法包括用CBFBOE11多肽或其片段接种哺乳动物，适量地产生抗体和/或T细胞免疫应答，以保护所述的动物免受癌症、神经性疾病和自身免疫疾病及其他疾病。而本发明的另一方面涉及一种在哺乳动物中诱导免疫应答的方法，该方法包括经载体指导CBFBOE11多核苷酸表达体内输送CBFBOE11多肽，以便诱导上述免疫应答而产生保护所述的动物免受疾病的抗体。
本发明的进一步方面涉及一种免疫/疫苗制剂(组合物)，当被导入到哺乳动物宿主中时，该制剂诱导在该哺乳动物中对CBFBOE11多肽的免疫应答，其中所述的组合物包括CBFBOE11多肽或CBFBOE11基因。疫苗制剂可进一步包括适当的载体。由于CBFBOE11多肽可在胃中被降解，胃肠道外施用是优选的(包括皮下、肌肉内、静脉内、真皮内等注射)。适于胃肠道外施用的制剂包括水和非水的无菌注射溶液，该溶液可含有抗氧化剂、缓冲液、抑菌剂和使制剂与受体的血液等渗的溶质，以及包括水和非水的无菌悬浮剂，该悬浮剂包括悬浮剂或粘稠剂。制剂可保存在单位剂量或多单位剂量的容器内，例如密封的安瓿和小瓶中，并且可以在冷冻干燥条件下贮存，使用前仅需要立刻添加无菌液状载体。疫苗制剂也可包括增强制剂免疫原性的佐剂系统，如本领域熟知的水包油系统和其他系统。剂量将依赖于疫苗的比活性并且能由常规实验方便地确定。
筛选分析
本发明的CBFBOE11多肽可用在筛选化合物的方法中，所述的化合物能活化本发明的CBFBOE11多肽(激动剂)或抑制其活化(拮抗剂、或者称为抑制剂)。因此，本发明的多肽可用于估计鉴定来源于如细胞、无细胞的制备物、化学文库和天然产物混合物的激动剂或拮抗剂。
这些拮抗剂或激动剂可以是本发明多肽的天然或修饰的底物、配基、受体、酶类等，依具体情况而定；或可能是本发明多肽的结构或功能模拟物。见Coligan等，免疫学现代方法1(2)：第5章(1991)。
CBFBOE11多肽担负着许多生物学功能，包括许多病理作用。因此，可预期找到的化合物和药物能一方面刺激CBFBOE11多肽而在另一方面能抑制CBFBOE11多肽的功能。一般来说，激动剂被用于对如癌症、神经性疾病和自身免疫性疾病等病情的治疗和预防目的。拮抗剂可用于对如癌症、神经性疾病和自身免疫性疾病等病情的各种治疗和预防目的。
一般来说，上述筛选方法可包括应用表达所述的CBFBOE11多肽或对本发明的CBFBOE11多肽起反应的合适细胞。上述细胞包括来自哺乳动物、酵母、果蝇或大肠杆菌的细胞。然后，表达CBFBOE11多肽(或细胞膜含有表达多肽)或对CBFBOE11多肽反应的细胞和测试化合物接触，以观察结合或刺激或抑制的功能性反应。与候选化合物接触的细胞影响CBFBOE11活性能力与相同细胞不接触的能力相比较。
分析可简单地检测候选化合物的结合能力，其中与含有CBFBOE11多肽的细胞的结合性，可通过直接或非直接和候选化合物相关的标记物或涉及与标记的竞争剂竞争的分析的各种方法检测出来。进一步，这些分析法可使用对含CBFBOE11多肽细胞合适的检测系统，检测是否候选化合物可导致因CBFBOE11多肽的活化产生的信号。活化的抑制剂一般在已知的激动剂存在下观察存在候选化合物对由该激动剂引起的活化的影响而测定。
进一步，分析法可简单地包括如下步骤，把候选化合物和含CBFBOE11多肽的溶液混合以形成混合物，测定混合物中CBFBOE11的活性，然后与标准比较混合物的CBFBOE11活性。
CBFBOE11cDNA、蛋白和抗该蛋白的抗体也用于构型分析，以检测所加的化合物对细胞中产生的CBFBOE11 mRNA和蛋白的影响。例如，可构建ELISA方法，用单克隆和多克隆抗体通过本领域熟知的标准方法，测定CBFBOE11蛋白的分泌或和细胞相关的水平，并且本方法能用于发现可抑制或增强来自适当操作的细胞或组织的CBFBOE11产生的药物(也分别称为拮抗剂或激动剂)。
通过本领域熟知的标准受体结合技术，CBFBOE11蛋白可用于鉴定膜结合或可溶性受体，如果存在任何受体均能鉴定出来。这些技术包括但不局限于配基结合和交联分析法，在这些方法中，CBFBOE11被放射性同位素(如125I)标记，化学修饰(如生物素化)或融合列适于检测或纯化的肽序列上，然后和假定受体的来源材料(细胞、细胞膜、细胞上清液、组织抽提液、体液)温育。其他方法包括生物物理技术如表面质子共振分光光度术。除了用于受体的纯化和克隆外，这些结合分析法能用于鉴定CBFBOE11与其受体结合时竞争的CBFBOE11的激动剂和拮抗剂，如果存在任何竞争作用均能鉴别出来。进行筛选分析的标准方法在本领域完全掌握。
潜在的CBFBOE11多肽拮抗剂的实施例包括抗体，或在某些情况下，与CBFBOE11多肽的配基、底物、受体、酶等(视具体情况而定)紧密相关的寡核苷酸或蛋白，如配基的片段、底物、受体、酶等；或者能与本发明的多肽结合但不能引起反应的小分子，结果阻止了多肽的活性。
因此在另一方面，本发明涉及一种筛选试剂盒，用于鉴别针对CBFBOE11多肽的激动剂、拮抗剂、配基、受体、底物、酶等；或降低或增强CBFBOE11多肽产生的化合物，该试剂盒包括：
(a)CBFBOE11多肽，优选地SEQ ID NO：2的多肽；
(b)表达CBFBOE11多肽的重组细胞，优选的是表达SEQ ID
   NO：2的多肽；
(c)表达CBFBOE11多肽的细胞膜；优选地表达SEQ ID NO：
   2的多肽；或
(d)针对CBFBOE11多肽的抗体，优选地针对SEQ ID NO：2
   的多肽。
应该意识到，在任何上述试剂盒中，(a)、(b)、(c)或(d)可包括基本的组份。
预防和治疗方法
本发明提供治疗与CBFBOE11多肽活性的过量或不足量相关的异常病情如癌症、神经性疾病、和自身免疫性疾病的方法。
如果CBFBOE11多肽的活性过度，可使用几种方法。一种方法包括给患者施用如本文上面所述的抑制性化合物(拮抗剂)，这些化合物和药用可接受的载体一起施以有效量，例如通过阻断配基、底物、受体、酶等的结合或抑制第二信号而抑制CBFBOE11多肽的功能，因而改善了异常病情。在另一种方法中，可施用可溶形式的CBFBOE11多肽，该多肽能和内源性CBFBOE11多肽竞争仍能与配基、底物、酶、受体等结合。上述竞争剂的典型实施方案包括CBFBOE11多肽的片段。
仍在另一种方法中，编码内源CBFBOE11多肽的基因表达能用阻断表达的技术抑制。熟知的上述技术包括应用反义序列、内部产生或个别施用。如见，O′Connor，神经化学杂志(1991)56：560，寡核苷酸用作基因表达的反义抑制剂，CRC出版社，Boca Raton，FL(1988)。另外，能提供和所述的基因形成三股螺旋的寡核苷酸。例如见Lee等，核酸研究(1979)6：3073；Cooney等，科学(1988)241：456；Dervan等，科学(1991)251：1360。这些寡聚体能以原形式施用或在体内表达相关的寡聚物。
为治疗与CBFBOE11和其活性表达不足相关的异常病情，也能使用几种方法。一种方法包括给患者施用治疗有效量的活化CBFBOE11多肽的化合物，即如上面所描述的激动剂，与药用可接受的载体结合使用，因此改善异常病情。另外，可采用基因治疗，由在患者中的相关细胞影响内源的CBFBOE11的产生。例如，本发明的多核苷酸，如上面所讨论的方法那样，工程操作以在复制缺陷的逆转录病毒载体中表达。然后分离逆转录病毒表达构建体，然后用含有编码本发明多肽的RNA的逆转录病毒质粒载体转导而导入到包装细胞中，至此包装细胞能产生含有该目的基因的感染性病毒颗粒。可给患者施用这些生产者细胞，以体内工程化细胞和体内表达多肽。至于基因治疗的综述，见第20章，基因治疗和其他基于分子遗传学的治疗方法(在此引入仅供参考)见人类分子遗传学一书，T S′trachan和A P Read，BIOS科学出版有限公司(1996)。另一种方法是和适用的药用载体组合施用治疗量的CBFBOE11多肽。
制剂和施用
肽如可溶形式的CBFBOE11多肽和激动剂及拮抗剂肽或小分子，可和适当的药用载体形成制剂。上述制剂包括治疗有效量的多肽或化合物和药用可接受的载体或赋形剂。上述载体包括但不局限于盐、缓冲盐类、右旋糖、水、甘油、乙醇和其组合物。制剂应适合施用的方式，并且本领域的技术人员中熟知。本发明进一步涉及包括一种或多种容器，里面装有一种或多种前面提到的本发明组合物的成份的治疗包装物和试剂盒。
本发明的多肽和其他化合物可单独使用或和其他化合物如治疗化合物结合使用。
优选的全身施用药用组合物的形式包括注射，一般为静脉注射。其他注射途径如皮下、肌肉内或腹膜内也能使用。全身施用的其他方法包括用穿透剂如胆酸盐或梭链孢酸或其他洗涤剂透粘膜或透皮施用。此外，假如适当制成肠衣片或包囊制剂，口服也是可能的。这些化合物也可以油膏、糊、胶等形式在表面和/或局部施用。
需要的剂量范围依据选择的肽、施用途径、制剂的特点、患者病情的特点和参与治疗的医生的判断。然而，适当的剂量为0.1～100μg/公斤患者体重。不过，鉴于各种可得到的化合物和施用各种途径的不同效率，可预期在所需的剂量中有大量的变化。例如，可预期口服比静脉注射施用需要更高的剂量。这些剂量水平的变化能用标准实验常规技术调整而优化，这些技术在本领域已完全掌握。
用于治疗的多肽也能在患者中内源产生，其治疗方法常称为如上所述的“基因治疗”。因此，例如，来自患者的细胞可用多核苷酸如DNA或RNA工程处理，离体编码多肽，例如可用逆转录病毒质粒载体进行。然后所述的细胞导入到患者中。
尽管每一个单独的出版物已具体和单独地被标出以便引入作为参考。但好象又被完整地解释，实际上本说明书所引用的全部出版物，包括但不局限于专利和专利申请书均在本发明中引入作为参考。
                        序列表
(1)一般资料
(i)申请者：付刚
           沈宇
           茅矛
           王亚新
(ii)发明题目：人神经胶质成熟因子(GMF)β同系基因(CBFBOE11)
(iii)序列数：2
(iv)通讯地址：
    (A)通讯人：RATNER & PRESTIA
    (B)街道：P.O.Box 980
    (C)城市：VALLEY FORGE
    (D)州名：PA
    (E)国家：美国
    (F)邮编：19482
(v)计算机可读资料：
   (A)介质类型：软盘
   (B)计算机：IBM兼容
   (C)操作系统：DOS
   (D)软件：FastSEQ for Windows Version 2.0
(vi)目前申请资料：
    (A)申请号：
    (B)提交文件日期：
    (C)分类：
(vii)在先申请资料：
    (A)申请号：
    (B)提交文件日期：
(viii)代理人/代理机构资料：
     (A)姓名：PRESTIA，PAULE F
     (B)登记号：23,031
     (C)参考/档案号：GP-70381
(ix)通讯资料：
    (A)电话：610-407-0700
    (B)传真：610-407-0701
    (C)电传：846169
    (2)SEQ ID NO：1的资料：
(i)序列特征：
    (A)长度：561个碱基对
    (B)类型：核酸
    (C)链型：单链
    (D)拓扑结构：线性
(ii)分子类型：cDNA
(xi)序列描述：SEQ ID NO：1：AATCATGTCT GACTCCCTGG TGGTGTGCGA GGTAGACCCA GAGCTAACAG AAAAGCTGAG     60GAAATTCCGC TTCCGAAAAG AGACAGACAA TGCAGCCATC ATAATGAAGG TGGACAAAGA    120CCGGCAGATG GTGGTGCTGG AGGAAGAATT TCAGAACATT TCCCCAGAGG AGCTCAAAAT    180GGAGTTGCCG GAGAGACAGC CCAGGTTCGT GGTTTACAGC TACAAGTACG TGCATGACGA    240TGGCCGAGTG TCCTACCCTT TGTGTTTCAT CTTCTCCAGC CCTGTGGGCT GCAAGCCGGA    300ACAACAGATG ATGTATGCAG GGAGTAAAAA CAGGCTGGTG CAGACAGCAG AGCTCACAAA    360GGTGTTCGAA ATCCGCACCA CTGATGACCT CACTGAGGCC TGGCTCCAAG AAAAGTTGTC    420TTTCTTTCGT TGATCTCTGG GCTGGGGACT GAATTCCTGA TGTCTGAGTC CTCAGGTGAC    480TGGGGACTTG GAACCCTAGG ACCTGAACAA CCAAGACTTT AAATAATTTT AAATGCAAAA    540ACTCAGAAAA AAAAAAAAAA A                                              561
(2)SEQ ID NO：2的资料：
(i)序列特征：
   (A)长度：142个氨基酸
   (B)类型：氨基酸
   (C)链型：单链
   (D)拓扑结构：线性
(ii)分子类型：蛋白
(xi)序列描述：SEQ ID NO：2：Met Ser Asp Ser Leu Val Val Cys Glu Val Asp Pro Glu Leu Thr Glu1               5                  10                  15Lys Leu Arg Lys Phe Arg Phe Arg Lys Glu Thr Asp Asn Ala Ala Ile
        20                  25                  30Ile Met Lys Val Asp Lys Asp Arg Gln Met Val Val Leu Glu Glu Glu
    35                  40                  45Phe Gln Asn Ile Ser Pro Glu Glu Leu Lys Met Glu Leu Pro Glu Arg
50                  55                  60Gln Pro Arg Phe Val Val Tyr Ser Tyr Lys Tyr Val His Asp Asp Gly65                  70                  75                  80Arg Val Ser Tyr Pro Leu Cys Phe Ile Phe Ser Ser Pro Val Gly Cys
            85                  90                  95Lys Pro Glu Gln Gln Met Met Tyr Ala Gly Ser Lys Asn Arg Leu Val
        100                 105                 110Gln Thr Ala Glu Leu Thr Lys Val Phe Glu Ile Arg Thr Thr Asp Asp
    115                 120                 125Leu Thr Glu Ala Trp Leu Gln Glu Lys Leu Ser Phe Phe Arg
130                 135                 140

Claims (19)

1.一种分离的多核苷酸，包括就其全长来说与编码SEQ IDNO：2的CBFFOE11多肽的核苷酸序列至少有80％的一致性的核苷酸序列，或者与所述的多核苷酸互补的核苷酸序列。
2.权利要求1的多核苷酸，其中所述的多核苷酸包括SEQ IDNO：1中的编码SEQ ID NO：2的CBFBOE11多肽的核苷酸序列。
3.权利要求1的多核苷酸，其中所述的多核苷酸包括就其全长来说与SEQ ID NO：1的序列至少80％一致的核苷酸序列。
4.权利要求3的多核苷酸，它为SEQ ID NO：1的多核苷酸。
5.权利要求1的多核苷酸，它是DNA或RNA。
6.一种包括表达系统的DNA或RNA分子，其中当所述的表达系统存在于相容的宿主细胞中时，该表达系统能产生其氨基酸序列与SEQID NO：2的多肽至少83％一致的CBFBOE11多肽。
7.一种包括权利要求6的表达系统的宿主细胞。
8.一种产生CBFBOE11多肽的方法，该方法包括将权利要求7的宿主培养在足以产生所述多肽的条件下，然后从培养物中回收该多肽。
9.生产产CBFBOE11多肽的细胞的方法，包括用权利要求6的表达系统转化或转染宿主细胞，结果宿主细胞在合适的培养条件下产生CBFBOE11多肽。
10.一种CBFBOE11多肽，该多肽包括的氨基酸序列就其全长来说与SEQ ID NO：2的氨基序列至少有83％的一致性。
11.权利要求10的多肽，该多肽包括SEQ ID NO：2的氨基酸序列。
12.一种对权利要求10的CBFBOE11多肽免疫专一的抗体。
13.一种治疗患者的方法，该患者需要增强权利要求10的CBFBOE11多肽的活性或表达，该方法包括：
(a)给患者施用治疗有效量的针对所述多肽的激动剂；和/或
(b)给患者提供一种分离的多核苷酸，该多核苷酸包括的核苷酸序列就其全长来说与编码SEQ ID NO：2的CBFBOE11多肽的多核苷酸至少有80％的一致性；或者提供与所述的多核苷酸序列互补的多核苷酸序列，且提供方式能体内影响产生所述多肽的活性。
14.一种治疗患者的方法，该患者需要抑制权利要求10的CBFBOE11多肽的活性或表达，所述的方法包括：
(a)给患者施用治疗有效量的针对所述多肽的拮抗剂；和/或
(b)给患者施用抑制编码所述多肽的核苷酸序列的表达的核酸分子；和/或
(c)给患者施用治疗有效量的多肽，该多肽与所述的多肽竞争其配基、底物、或受体。
15.一种诊断患者中与权利要求10的CBFBOE11多肽的表达或活性有关的疾病或患者对该疾病易感性的方法，该方法包括：
(a)确定在所述患者的基因组中在编码所述的CBFBOE11多肽的核苷酸序列中突变的有或无；和/或
(b)分析来源于所述患者的样品中CBFBOE11多肽的表达或其表达量。
16.一种鉴定抑制(拮抗)或激动权利要求10的CBFBOE11多肽的化合物的方法，该方法包括：
(a)把候选化合物与表达CBFBOE11多肽(或细胞膜表达CBFBOE11多肽)或对CBFBOE11多肽起反应的细胞接触；并且
(b)观察结合或刺激或抑制的功能反应；或将与候选化合物接触的细胞(或细胞膜)影响CBFBOE11多肽活性的能力与不接触的相同细胞比较。
17.一种由权利要求6的方法而鉴别的激动剂。
18.一种由权利要求6的方法而鉴别的拮抗剂。
19.一种由权利要求9的方法产生或其细胞膜表达CBFBOE11多肽的重组宿主细胞。
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