CN118496364A

CN118496364A - uPARAP特异性结合蛋白及其制备方法和应用

Info

Publication number: CN118496364A
Application number: CN202410526886.7A
Authority: CN
Inventors: 李妮; 刘谦; 赵葵
Original assignee: Shanghai Wishing Biotechnology Co ltd
Current assignee: Shanghai Wishing Biotechnology Co ltd
Priority date: 2024-04-28
Filing date: 2024-04-28
Publication date: 2024-08-16

Abstract

本申请涉及抗体药物领域，特别涉及一种uPARAP特异性结合蛋白及其制备方法和应用。本申请提供了新的uPARAP特异性结合蛋白，其与uPARAP的N端CysR‑FN‑II‑CTLD‑I‑CTLD‑II结构域的高亲和力，并且在高表达uPARAP细胞上的内吞效率高，用其制备的抗体偶联物的抗肿瘤活性高。

Description

uPARAP特异性结合蛋白及其制备方法和应用

技术领域

本申请涉及抗体药物领域，特别涉及一种uPARAP特异性结合蛋白及其制备方法和应用。

背景技术

尿激酶型纤溶酶原激活物受体相关蛋白(uPARAP)，也称为CD280、Endo180和2型甘露糖受体C，是内吞跨膜糖蛋白的巨噬细胞甘露糖受体家族的成员。uPARAP位于细胞表面上、被膜小窝和内涵体中，主要表达于成纤维细胞、内皮细胞和巨噬细胞中。作为胶原蛋白或大胶原蛋白片段的网格蛋白依赖性内吞受体，uPARAP在生理(如组织稳态和修复)和病理(如纤维化，癌症)条件下参与细胞外基质(ECM)重塑、细胞趋化性和迁移。研究表明，uPARAP在肉瘤、晚期胶质母细胞瘤、恶性间皮瘤、头颈部鳞状细胞癌、急性髓系白血病(AML)等特定癌症的肿瘤细胞中上调，其最常在实体瘤周围的基质细胞中上调(比如，在浸润性乳腺癌中肿瘤组织相关的成纤维细胞中表达)，在骨转移肿瘤细胞高表达(如乳腺癌骨转移、前列腺癌骨转移等)。而在健康的成年个体中，uPARAP的组织分布有限，仅表达在一组受限制的间充质细胞上，包括参与骨发育的活化成纤维细胞、成骨细胞和骨细胞亚群。这些研究结果表明，uPARAP是作为许多癌症检测的生物标志物和治疗靶点。

因此，开发uPARAP特异性抗体，对于uPARAP相关疾病的诊断以及靶向药物开发至关重要。

发明内容

基于此，本申请一个或者多个实施例提供一种uPARAP特异性结合蛋白及其制备方法和应用。包括如下技术方案：

本申请的一个或者多个实施例提供一种uPARAP特异性结合蛋白，其具有uPARAP结合结构域，所述uPARAP结合结构域选自如下uPARAP结合结构域1至uPARAP结合结构域14中的任一种：

uPARAP结合结构域1具有序列SEQ ID NO.98所示的CDR-H1、序列SEQ ID NO.99所示的CDR-H2、序列SEQ ID NO.100所示的CDR-H3、序列SEQ ID NO.131所示的CDR-L1、序列SEQ ID NO.132所示的CDR-L2和序列SEQ ID NO.133所示的CDR-L3；

uPARAP结合结构域2具有序列SEQ ID NO.101所示的CDR-H1、序列SEQ ID NO.102所示的CDR-H2、序列SEQ ID NO.103所示的CDR-H3、序列SEQ ID NO.134所示的CDR-L1、序列SEQ ID NO.135所示的CDR-L2和序列SEQ ID NO.136所示的CDR-L3；

uPARAP结合结构域3具有序列SEQ ID NO.104所示的CDR-H1、序列SEQ ID NO.105所示的CDR-H2、序列SEQ ID NO.106所示的CDR-H3、序列SEQ ID NO.137所示的CDR-L1、序列SEQ ID NO.138所示的CDR-L2和序列SEQ ID NO.139所示的CDR-L3；

uPARAP结合结构域4具有序列SEQ ID NO.107所示的CDR-H1、序列SEQ ID NO.108所示的CDR-H2、序列SEQ ID NO.109所示的CDR-H3、序列SEQ ID NO.140所示的CDR-L1、序列SEQ ID NO.141所示的CDR-L2和序列SEQ ID NO.142所示的CDR-L3；

uPARAP结合结构域5具有序列SEQ ID NO.110所示的CDR-H1、序列SEQ ID NO.111所示的CDR-H2、序列SEQ ID NO.112所示的CDR-H3、序列SEQ ID NO.131所示的CDR-L1、序列SEQ ID NO.143所示的CDR-L2和序列SEQ ID NO.133所示的CDR-L3；

uPARAP结合结构域6具有序列SEQ ID NO.113所示的CDR-H1、序列SEQ ID NO.114所示的CDR-H2、序列SEQ ID NO.115所示的CDR-H3、序列SEQ ID NO.144所示的CDR-L1、序列SEQ ID NO.135所示的CDR-L2和序列SEQ ID NO.136所示的CDR-L3；

uPARAP结合结构域7具有序列SEQ ID NO.116所示的CDR-H1、序列SEQ ID NO.117所示的CDR-H2、序列SEQ ID NO.118所示的CDR-H3、序列SEQ ID NO.131所示的CDR-L1、序列SEQ ID NO.145所示的CDR-L2和序列SEQ ID NO.133所示的CDR-L3；

uPARAP结合结构域8具有序列SEQ ID NO.101所示的CDR-H1、序列SEQ ID NO.119所示的CDR-H2、序列SEQ ID NO.120所示的CDR-H3、序列SEQ ID NO.146所示的CDR-L1、序列SEQ ID NO.135所示的CDR-L2和序列SEQ ID NO.147所示的CDR-L3；

uPARAP结合结构域9具有序列SEQ ID NO.101所示的CDR-H1、序列SEQ ID NO.102所示的CDR-H2、序列SEQ ID NO.103所示的CDR-H3、序列SEQ ID NO.148所示的CDR-L1、序列SEQ ID NO.149所示的CDR-L2和序列SEQ ID NO.136所示的CDR-L3；

uPARAP结合结构域10具有序列SEQ ID NO.101所示的CDR-H1、序列SEQ ID NO.121所示的CDR-H2、序列SEQ ID NO.122所示的CDR-H3、序列SEQ ID NO.146所示的CDR-L1、序列SEQ ID NO.135所示的CDR-L2和序列SEQ ID NO.136所示的CDR-L3；

uPARAP结合结构域11具有序列SEQ ID NO.123所示的CDR-H1、序列SEQ ID NO.124所示的CDR-H2、序列SEQ ID NO.125所示的CDR-H3、序列SEQ ID NO.150所示的CDR-L1、序列SEQ ID NO.151所示的CDR-L2和序列SEQ ID NO.152所示的CDR-L3；

uPARAP结合结构域12具有序列SEQ ID NO.104所示的CDR-H1、序列SEQ ID NO.105所示的CDR-H2、序列SEQ ID NO.106所示的CDR-H3、序列SEQ ID NO.137所示的CDR-L1、序列SEQ ID NO.138所示的CDR-L2和序列SEQ ID NO.139所示的CDR-L3；

uPARAP结合结构域13具有序列SEQ ID NO.126所示的CDR-H1、序列SEQ ID NO.127所示的CDR-H2、序列SEQ ID NO.128所示的CDR-H3、序列SEQ ID NO.153所示的CDR-L1、序列SEQ ID NO.138所示的CDR-L2和序列SEQ ID NO.139所示的CDR-L3；以及，

uPARAP结合结构域14具有序列SEQ ID NO.129所示的CDR-H1、序列SEQ ID NO.130所示的CDR-H2、序列SEQ ID NO.103所示的CDR-H3、序列SEQ ID NO.146所示的CDR-L1、序列SEQ ID NO.135所示的CDR-L2和序列SEQ ID NO.136所示的CDR-L3。

在本申请的一些实施方式中，所述的uPARAP特异性结合蛋白，其为抗体、抗体的抗原结合片段或者小模块免疫药物。

在本申请的一些实施方式中，所述结合蛋白为单克隆抗体、F(ab’)2片段、Fab’片段、Fab片段、Fv片段、scFv片段、多特异性抗体、微型抗体、螯合重组抗体、内抗体、纳米抗体、结合结构域免疫球蛋白融合蛋白或者小模块免疫药物。

在本申请的一些实施方式中，所述的uPARAP特异性结合蛋白，其重链可变区和轻链可变区的骨架区的种属来源各自独立地为鼠、人、牛、马、猪、羊、狗、猫、兔、骆驼、驴、鹿、貂、鸡、鸭或者鹅。

在本申请的一些实施方式，所述的uPARAP特异性结合蛋白，其重链可变区如序列SEQ ID NO.8、SEQID NO.12、SEQ ID NO.16、SEQ ID NO.20、SEQ ID NO.24、SEQ ID NO.28、SEQ ID NO.32、SEQ ID NO.36、SEQ ID NO.40、SEQ ID NO.44、SEQ ID NO.48、SEQ IDNO.52、SEQ ID NO.56和SEQ ID NO.60中任一序列所示。

在本申请的一些实施方式中，所述的uPARAP特异性结合蛋白，其轻链可变区如序列SEQ ID NO.10、SEQ ID NO.14、SEQ ID NO.18、SEQ ID NO.22、SEQ ID NO.26、SEQ IDNO.30、SEQ ID NO.34、SEQ IDNO.38、SEQ ID NO.42、SEQ ID NO.46、SEQ ID NO.50、SEQ IDNO.54、SEQ ID NO.58和SEQ ID NO.62中任一序列所示。

在本申请的一些实施方式中，所述的uPARAP特异性结合蛋白，其还包括抗体恒定区。

在本申请的一些实施方式中，所述抗体恒定区的序列选自IgG、IgA、IgM、IgE及IgD任何其中之一恒定区的序列。

在本申请的一些实施方式中，所述抗体恒定区中，轻链恒定区和重链恒定区的种属来源各自独立地为鼠、人牛、马、猪、羊、狗、猫、兔、骆驼、驴、鹿、貂、鸡、鸭或者鹅。

在本申请的一些实施方式中，所述抗体恒定区中的轻链恒定区的类型为κ型或者λ型。

在本申请的一些实施方式中，所述的uPARAP特异性结合蛋白，其重链如序列SEQID NO.68、SEQ IDNO.70、SEQ ID NO.72、SEQ ID NO.74、SEQ ID NO.76、SEQ ID NO.78、SEQID NO.80、SEQ ID NO.82、SEQ ID NO.84、SEQ ID NO.86、SEQ ID NO.88、SEQ ID NO.90、SEQID NO.92和SEQ ID NO.94中任一序列所示。

在本申请的一些实施方式中，所述的uPARAP特异性结合蛋白，其轻链如序列SEQID NO.69、SEQ IDNO.71、SEQ ID NO.73、SEQ ID NO.75、SEQ ID NO.77、SEQ ID NO.79、SEQID NO.81、SEQ ID NO.83、SEQ ID NO.85、SEQ ID NO.87、SEQ ID NO.89、SEQ ID NO.91、SEQID NO.93和SEQ ID NO.95中任一序列所示。

本申请的一个或者多个实施例还提供一种核酸分子，其编码所述的uPARAP特异性结合蛋白。

本申请的一个或者多个实施例还提供一种载体，其包括所述的核酸分子。

在本申请的一些实施方式中，所述载体选自哺乳动物细胞病毒、细菌质粒、噬菌体、酵母质粒、植物细胞病毒或其组合。

本申请的一个或者多个实施例还提供一种细胞，其包括所述的核酸分子或者所述的载体。

在本申请的一些实施方式中，所述细胞为CHO细胞、COS细胞、NSO细胞、HeLa细胞、BHK细胞或HEK293细胞。

本申请的一个或者多个实施例还提供一种所述的uPARAP特异性结合蛋白的制备方法，其包括：培养所述的细胞，从所得培养物中分离uPARAP特异性结合蛋白。

本申请的一个或者多个实施例还提供一种抗体偶联物，其包括：

所述的uPARAP特异性结合蛋白，以及，

与所述uPARAP特异性结合蛋白偶联的偶联物。

在本申请的一些实施方式中，所述抗体偶联物满足如下条件中的一个或者多个：

(1)所述偶联物选自可检测标记物、细胞毒性药物、细胞因子、放射性核素、酶或其组合；以及，

(2)所述uPARAP特异性结合蛋白和所述偶联物通过化学键或连接子进行偶联。

本申请的一个或者多个实施例还提供一种药物组合物，其包括：

所述的uPARAP特异性结合蛋白、所述的核酸分子、所述的表达载体、所述的细胞，或者所述的抗体偶联物，以及药学上可以接受的载体。

本申请一个或者多个实施例还提供所述的uPARAP特异性结合蛋白、所述的核酸分子、所述的载体、所述的细胞、所述的抗体偶联物或者所述的药物组合物在制备uPARAP表达相关疾病的药物中的用途。

在本申请的一些实施方式中，所述药物治疗的uPARAP表达相关疾病为癌症、骨退化疾病(例如骨质疏松症)、纤维化和巨噬细胞相关疾病(例如动脉粥样硬化)、关节炎或者慢性炎症。

在本申请的一些实施方式中，所述关节炎为骨关节炎、炎症性关节炎、类风湿性关节炎、银屑病性关节炎、痛风、假痛风、强直性脊柱炎、狼疮或者莱姆病诱发的关节炎(例如莱姆关节炎)。

在本申请的一些实施方式中，所述癌症为肉瘤、骨肉瘤、脑癌、神经胶质瘤、多形性成胶质细胞瘤、神经母细胞瘤、中枢神经系统癌、神经内分泌肿瘤、间皮瘤、前列腺癌、来自前列腺癌的骨转移瘤、乳腺癌、来自乳腺癌的骨转移瘤、头颈癌、咽喉癌、咽鳞癌、口腔鳞癌、鼻咽癌、食管癌、食管胃连接部癌、胃癌、胃肠道癌、肠癌、结肠癌、结肠直肠癌、肺癌、肾癌、透明细胞肾细胞癌、胆道癌、佩吉特病、胰腺癌、卵巢癌、子宫内膜癌、子宫颈癌、膀胱癌、尿路上皮癌、胃肠道间质瘤、宫颈癌、鳞状细胞癌、腹膜癌、肝癌、肝胆癌、肝细胞癌、外阴癌、甲状腺癌、阴茎癌、皮肤癌、白血病、恶性淋巴瘤、浆细胞瘤、骨癌、骨髓瘤、多发性骨髓瘤、骨髓异常增生综合征、库肯勃氏瘤、骨髓增生性肿瘤、黑色素瘤或者梅克尔细胞癌。

本申请一个或者多个实施例还提供所述的uPARAP特异性结合蛋白、所述的核酸分子、所述的载体或者所述的细胞在制备uPARAP相关疾病诊断产品中的用途。

在本申请的一些实施方式中，所述uPARAP相关疾病诊断产品诊断的uPARAP相关疾病为癌症、骨退化疾病(例如骨质疏松症)、纤维化和巨噬细胞相关疾病(例如动脉粥样硬化)、关节炎或者慢性炎症。

在本申请的一些实施方式中，所述关节炎为骨关节炎、炎症性关节炎、类风湿性关节炎、银屑病性关节炎、痛风、假痛风、强直性脊柱炎、狼疮以及莱姆病诱发的关节炎(例如莱姆关节炎)。

本申请一个或者多个实施例还提供uPARAP相关疾病诊断产品，其包括所述的uPARAP特异性结合蛋白；

在本申请的一些实施方式中，所述uPARAP相关疾病诊断产品为诊断试剂、试纸条、检测板或者试剂盒。

本申请还提供了多种病症或疾病的治疗方法，其包括向有需要的受试者(其适当地为哺乳动物受试者特别是人类受试者)给予治疗上有效量的uPARAP特异性结合蛋白或其抗原结合片段，或所述的核酸分子或表达载体，或所述的药物组合物或所述的宿主细胞制备用于治疗多种病症或疾病的药物中的用途。所述病症或疾病为癌症、骨退化疾病(例如骨质疏松症)、纤维化和巨噬细胞相关疾病(例如动脉粥样硬化)、关节炎或者慢性炎症。

进一步地，所述关节炎为骨关节炎、炎症性关节炎、类风湿性关节炎、银屑病性关节炎、痛风、假痛风、强直性脊柱炎、狼疮以及莱姆病诱发的关节炎(例如莱姆关节炎)。进一步地，所述癌症肿瘤细胞或肿瘤相关细胞表达或过表达uPARAP。更进一步地，所述肿瘤和癌症为肉瘤、骨肉瘤、脑癌、神经胶质瘤、多形性成胶质细胞瘤、神经母细胞瘤、中枢神经系统癌、神经内分泌肿瘤、间皮瘤、前列腺癌、来自前列腺癌的骨转移瘤、乳腺癌、来自乳腺癌的骨转移瘤、头颈癌、咽喉癌、咽鳞癌、口腔鳞癌、鼻咽癌、食管癌、食管胃连接部癌、胃癌、胃肠道癌、肠癌、结肠癌、结肠直肠癌、肺癌、肾癌、透明细胞肾细胞癌、胆道癌、佩吉特病、胰腺癌、卵巢癌、子宫内膜癌、子宫颈癌、膀胱癌、尿路上皮癌、胃肠道间质瘤、宫颈癌、鳞状细胞癌、腹膜癌、肝癌、肝胆癌、肝细胞癌、外阴癌、甲状腺癌、阴茎癌、皮肤癌、白血病、恶性淋巴瘤、浆细胞瘤、骨癌、骨髓瘤、多发性骨髓瘤、骨髓异常增生综合征、库肯勃氏瘤、骨髓增生性肿瘤、黑色素瘤或者梅克尔细胞癌。

相对于传统技术，本申请的有益效果包括：

本申请实施例提供了新的uPARAP特异性结合蛋白，其与uPARAP的N端CysR-FN-II-CTLD-I-CTLD-II结构域的高亲和力，特异性强，并且在高表达uPARAP细胞上的内吞效率高，用其制备的抗体偶联物的抗肿瘤活性高。

附图说明

为了更清楚地说明本申请实施例中的技术方案、更完整地理解本申请及其有益效果，下面将对实施例描述中所需要使用的附图作简单的介绍。显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本申请的一些实施例，对本领域技术人员来说，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。

图1为实施例1的步骤二中的重组的人、食蟹猴和小鼠uPARAP胞外结构域蛋白的SEC-HPLC检测结果图；

图2为实施例1的步骤五中测试例1的嵌合抗体与重组的人、食蟹猴和小鼠uPARAP胞外结构域蛋白ELISA结合实验结果图；

图3为实施例1中的步骤五中测试例2的嵌合抗体与uPARAP同家族蛋白结合实验结果图；

图4为实施例1中的步骤五中测试例3的嵌合抗体细胞水平流式结合实验结果图；

图5为实施例1中的步骤五中测试例4的嵌合抗体内吞活性检测结果图；

图6为实施例1中的步骤五中测试例5的抗体与vc-MMAE药物偶联物HSP340001-ADC的图谱；

图7为实施例1中的步骤五中测试例6的阳性参考抗体流式检测筛选uPARAP表达阳性肿瘤细胞系结果图；

图8为实施例1中的步骤五中测试例7的嵌合抗体ADC和阳性参考抗体偶联ADC对肿瘤细胞杀伤活性检测结果图。

具体实施方式

下面结合附图、实施方式和实施例，对本申请作进一步详细的说明。应理解，这些实施方式和实施例仅用于说明本申请而不用于限制本申请的范围，提供这些实施方式和实施例的目的是使对本申请公开内容理解更加透彻全面。还应理解，本申请可以以许多不同的形式来实现，并不限于本文所描述的实施方式和实施例，本领域技术人员可以在不违背本申请内涵的情况下作各种改动或修改，得到的等价形式同样落于本申请的保护范围。此外，在下文的描述中，给出了大量具体的细节以便提供对本申请更为充分地理解，应理解，本申请可以无需一个或多个这些细节而得以实施。

除非另有定义，本文所使用的所有的技术和科学术语与属于本申请的技术领域的技术人员通常理解的含义相同。本文中在本申请的说明书中所使用的术语只是为了描述实施方式和实施例的目的，不是旨在于限制本申请。

术语

除非另外说明或存在矛盾之处，本文中使用的术语或短语具有以下含义：

本文所使用的术语“和/或”、“或/和”、“及/或”的选择范围包括两个或两个以上相关所列项目中任一个项目，也包括相关所列项目的任意的和所有的组合，所述任意的和所有的组合包括任意的两个相关所列项目、任意的更多个相关所列项目、或者全部相关所列项目的组合。需要说明的是，当用至少两个选自“和/或”、“或/和”、“及/或”的连词组合连接至少三个项目时，应当理解，在本申请中，该技术方案毫无疑问地包括均用“逻辑与”连接的技术方案，还毫无疑问地包括均用“逻辑或”连接的技术方案。比如，“A及/或B”包括A、B和A+B三种并列方案。又比如，“A，及/或，B，及/或，C，及/或，D”的技术方案，包括A、B、C、D中任一项(也即均用“逻辑或”连接的技术方案)，也包括A、B、C、D的任意的和所有的组合，也即包括A、B、C、D中任两项或任三项的组合，还包括A、B、C、D的四项组合(也即均用“逻辑与”连接的技术方案)。

本申请中涉及“多个”、“多种”、“多次”、“多元”等，如无特别限定，指在数量上大于2或等于2。例如，“一种或多种”表示一种或大于等于两种。

本文中所使用的“其组合”、“其任意组合”、“其任意组合方式”等中包括所列项目中任两个或任两个以上项目的所有合适的组合方式。

本文中，“合适的组合方式”、“合适的方式”、“任意合适的方式”等中所述“合适”，以能够实施本申请的技术方案、解决本申请的技术问题、实现本申请预期的技术效果为准。

本文中，“优选”、“更好”、“更佳”、“为宜”仅为描述效果更好的实施方式或实施例，应当理解，并不构成对本申请保护范围的限制。

本申请中，“进一步”、“更进一步”、“特别”等用于描述目的，表示内容上的差异，但并不应理解为对本申请保护范围的限制。

本申请中，“可选地”、“可选的”、“可选”，指可有可无，也即指选自“有”或“无”两种并列方案中的任一种。如果一个技术方案中出现多处“可选”，如无特别说明，且无矛盾之处或相互制约关系，则每项“可选”各自独立。

本申请中，“第一方面”、“第二方面”、“第三方面”、“第四方面”等中，术语“第一”、“第二”、“第三”、“第四”等仅用于描述目的，不能理解为指示或暗示相对重要性或数量，也不能理解为隐含指明所指示的技术特征的重要性或数量。而且“第一”、“第二”、“第三”、“第四”等仅起到非穷举式的列举描述目的，应当理解并不构成对数量的封闭式限定。

本申请中，以开放式描述的技术特征中，包括所列举特征组成的封闭式技术方案，也包括包含所列举特征的开放式技术方案。

本申请中，涉及到数值区间(也即数值范围)，如无特别说明，可选的数值分布在上述数值区间内视为连续，且包括该数值范围的两个数值端点(即最小值及最大值)，以及这两个数值端点之间的每一个数值。如无特别说明，当数值区间仅仅指向该数值区间内的整数时，包括该数值范围的两个端点整数，以及两个端点之间的每一个整数，在本文中，相当于直接列举了每一个整数，比如t为选自1～10的整数，表示t为选自由1、2、3、4、5、6、7、8、9和10构成的整数组的任一个整数。此外，当提供多个范围描述特征或特性时，可以合并这些范围。换言之，除非另有指明，否则本文中所公开之范围应理解为包括其中所归入的任何及所有的子范围。

本申请中的温度参数，如无特别限定，既允许为恒温处理，也允许在一定温度区间内存在变动。应当理解的是，所述的恒温处理允许温度在仪器控制的精度范围内进行波动。允许在如±5℃、±4℃、±3℃、±2℃、±1℃的范围内波动。

本申请中，％(w/w)与wt％均表示重量百分比，％(v/v)指体积百分比，％(w/v)指质量体积百分数。就靶向治疗而言，抗体-药物偶联物(ADC)是一类新的被设计为靶向治疗特别是用于治疗癌症的高效生物药物。ADC是通过化学接头连接特异性抗体和细胞毒性药物而形成的复杂分子，通过特异性抗体将细胞毒性药物递送到细胞内，在胞内低pH条件下释放细胞毒性药物，从而杀死细胞。uPARAP可捕获胶原蛋白等配体而快速被内化进细胞，50％的以上uPARAP可在2min内被内化到内体中，在内体中低pH环境下uPARAP释放捕获的配体再循环回到质膜。

尽管由于手术技术以及围手术治疗的发展，癌症患者的预后已经显著改善，但是患者生存率仍然极低。靶向治疗为复发/晚期癌症患者治疗带来了新的希望，但现有靶向治疗药物的靶点表达阳性患者比例低，收益人群有限。尤其是对于晚期骨转移癌症患者，尚缺乏有效的治疗方案延长患者生存率。因此，开发新的癌症治疗药物仍然迫在眉睫。uPARAP快速内吞且可循环的特点使其成为开发ADC药物的理想靶点。

专利申请WO 2010/111198、WO2017/13374、WO2023/275112公开了包含抗uPARAP抗体的偶联物，并且提出了通过抗uPARAP抗体偶联药物将细胞毒性药物递送至表达uPARAP的细胞中用于治疗癌症的用途。高活性的ADC要求抗体在与细胞表明的靶蛋白结合后可以快速被内化进入细胞，从而允许偶联的细胞毒性药物被释放以杀死细胞。从例如专利文件WO2010/11198已知，不是所有可结合uPARAP的抗体都以相同的速率或以相同的量被内化。实际上，一些抗uPARAP抗体根本不被内化因而不适用于ADC。尽管专利申请WO 2010/111198、WO2017/133745、WO2023/275112记载了用于做ADC的抗uPARAP抗体，但存在抗体产量低，内吞活性低等不足。抗体产量低会极大增加药物生产成本，内吞活性低直接导致ADC药物杀伤活性低，疗效差。基于此，亟需内吞活性更高，产量更高的抗uPARAP抗体用于癌症治疗。

本申请实施例的第一方面，提供一种uPARAP特异性结合蛋白，其具有uPARAP结合结构域，所述uPARAP结合结构域选自如下uPARAP结合结构域1至uPARAP结合结构域14中的任一种：

uPARAP结合结构域10具有序列SEQ ID NO.所示的CDR-H1、序列SEQ ID NO.所示的CDR-H2、序列SEQ ID NO.所示的CDR-H3、序列SEQ ID NO.所示的CDR-L1、序列SEQ ID NO.所示的CDR-L2和序列SEQ ID NO.所示的CDR-L3；

本申请的uPARAP特异性结合蛋白，其可以具有上述CDRs，亦或是具有上述CDRs的衍生片段。所述衍生片段是相对其对应的CDR经过不超过6个位点的氨基酸替换(“保守修饰”或“保守置换或取代”)形成的，保留有与其对应的互补决定区一致的生物学活性。例如，所述衍生片段相对于其对应的互补决定区1、2、3、4、5或者6个位点发生替换，可以是一个氨基酸被另一个氨基酸替换，也可以是一个氨基酸被多个(例如2个)氨基酸替换。

在本申请提供的CDRs中，衍生片段(保守性变异体)，指与本申请抗体的氨基酸序列相比，有1、2、3个氨基酸被性质相似或相近的氨基酸所替换而形成多肽。这些保守性变异多肽最好根据表A进行氨基酸替换而产生。

表A

最初的残基	代表性的取代	优选的取代
			Ala(A)	Val；Leu；Ile	Val
Arg(R)	Lys；Gln；Asn	Lys
			Asn(N)	Gln；His；Lys；Arg	Gln
Asp(D)	Glu	Glu
			Cys(C)	Ser	Ser
Gln(Q)	Asn	Asn
			Glu(E)	Asp	Asp
Gly(G)	Pro；Ala	Ala
			His(H)	Asn；Gln；Lys；Arg	Arg
Ile(I)	Leu；Val；Met；Ala；Phe	Leu
			Leu(L)	Ile；Val；Met；Ala；Phe	Ile
Lys(K)	Arg；Gln；Asn	Arg
			Met(M)	Leu；Phe；Ile	Leu
Phe(F)	Leu；Val；Ile；Ala；Tyr	Leu
			Pro(P)	Ala	Ala
Ser(S)	Thr	Thr
			Thr(T)	Ser	Ser
Trp(W)	Tyr；Phe	Tyr
			Tyr(Y)	Trp；Phe；Thr；Ser	Phe
Val(V)	Ile；Leu；Met；Phe；Ala	Leu

“保守修饰”或“保守置换或取代”是指具有类似特征(例如电荷、侧链大小、疏水性/亲水性、主链构象和刚性等)的其它氨基酸置换蛋白中的氨基酸，使得可频繁进行改变而不改变蛋白的生物学活性。本领域技术人员知晓，一般而言，多肽的非必需区域中的单个氨基酸置换基本上不改变生物学活性(参见例如Watson等(1987)Molecular Biology ofthe Gene，The Benjamin/Cummings Pub.Co.，第224页，(第4版))。另外，结构或功能类似的氨基酸的置换不大可能破环生物学活性。

uPARAP：尿激酶型纤溶酶原激活物受体相关蛋白(urokinase plasminogenactivator receptor-associatedprotein)，也称为CD280、Endo180和2型甘露糖受体C，是内吞跨膜糖蛋白的巨噬细胞甘露糖受体家族的成员。uPARAP是一种在组织重塑过程中(特别是胶原的摄取和细胞内降解)参与基质转换的膜蛋白。

本申请所用氨基酸三字母代码和单字母代码如J.biol.chem，243，p3558(1968)中所述。

本申请中，所述的uPARAP特异性结合蛋白，其可以为抗体、抗体的抗原结合片段或者小模块免疫药物。进一步地，所述结合蛋白为单克隆抗体、F(ab’)2片段、Fab’片段、Fab片段、Fv片段、scFv片段、双克隆抗体、多特异性抗体、微型抗体、螯合重组抗体、内抗体、纳米抗体、结合结构域免疫球蛋白融合蛋白或者小模块免疫药物。

本申请所述的“抗体”指免疫球蛋白，完整抗体是由两条相同的重链和两条相同的轻链通过链间二硫键连接而成的四肽链结构。免疫球蛋白重链恒定区的氨基酸组成和排列顺序不同，故其抗原性也不同。据此，可将免疫球蛋白分为五类，或称为免疫球蛋白的同种型，即IgM、IgD、IgG、IgA和IgE，其相应的重链分别为μ链、δ链、γ链、α链、和ε链。同一类Ig根据其铰链区氨基酸组成和重链二硫键的数目和位置的差别，又可分为不同的亚类，如IgG可分为IgG1、IgG2、IgG3、IgG4。轻链通过恒定区的不同分为κ链或λ链。五类Ig中每类Ig都可以有κ链或λ链。

抗体重链和轻链靠近N端的约110个氨基酸的序列变化很大，为可变区(Fv区)；靠近C端的其余氨基酸序列相对稳定，为恒定区。可变区包括3个高变区(HVR)和4个序列相对保守的骨架区(FR)。3个高变区决定抗体的特异性，又称为互补性决定区(CDR)。每条轻链可变区(VL)和重链可变区(VH)由3个CDR区4个FR区组成，从氨基端到羧基端依次排列的顺序为：FR1，CDR1，FR2，CDR2，FR3，CDR3，FR4。轻链的3个CDR区指LCDR1、LCDR2、和LCDR3；重链的3个CDR区指HCDR1、HCDR2和HCDR3。

本申请的抗体可以为鼠源抗体(例如本申请步骤二中提到的MM01至MM14抗体)、嵌合抗体(例如本申请步骤四中提到的ch01至ch14抗体)或者人源化抗体。

术语“鼠源抗体”在本申请中为根据本领域知识和技能制备的针对人uPARAP的单克隆抗体。制备时用uPARAP或其表位作为抗原注射试验对象，然后分离表达具有所需序列或功能特性的抗体的杂交瘤。在一些示例中，所述的鼠源抗uPARAP抗体或其抗原结合片段，可进一步包含鼠源κ、λ链或其变体的轻链恒定区，或进一步包含鼠源IgG1、IgG2、IgG3或其变体的重链恒定区。

术语“嵌合抗体(chimeric antibody)”，是将鼠源性抗体的可变区与人抗体的恒定区融合而成的抗体，可以减轻鼠源性抗体诱发的免疫应答反应。建立嵌合抗体，要先建立分泌鼠源性特异性单抗的杂交瘤，然后从鼠杂交瘤细胞中克隆可变区基因，再根据需要克隆人抗体的恒定区基因，将鼠可变区基因与人恒定区基因连接成嵌合基因后插入表达载体中，最后在真核系统或原核系统中表达嵌合抗体分子。在本公开一个优选的实施方案中，所述的嵌合抗体的抗体轻链进一步包含人源κ、λ链或其变体的轻链恒定区。所述的uPARAP嵌合抗体的抗体重链进一步包含人源IgG1、IgG2、IgG3、IgG4或其变体的重链恒定区，优选包含人源IgG1、IgG2或IgG4重链恒定区，或者使用氨基酸突变(例如L234A和/或L235A突变，和/或S228P突变)的IgG1、IgG2或IgG4变体。

术语“人源化抗体(humanized antibody)”，也称为CDR移植抗体(CDR-graftedantibody)，是指将非人物种的CDR序列移植到人的抗体可变区框架，即不同类型的人种系抗体框架序列中产生的抗体。可以克服嵌合抗体由于携带大量异源蛋白成分，从而诱导的异源性反应。此类构架序列可以从包括种系抗体基因序列的公共DNA数据库或公开的参考文献获得。如人重链和轻链可变区基因的种系DNA序列可以在“VBase”人种系序列数据库(在因特网www.mrccpe.com.ac.uk/vbase可获得)，以及在Kabat，E.A.等人，1991Sequences of Proteins of Immunological Interest，第5版中找到。为避免免疫原性下降的同时，引起的活性下降，可对所述的人抗体可变区框架序列进行最少反向突变或回复突变，以保持活性。本公开的人源化抗体也包括进一步由酵母菌展示对CDR进行亲和力成熟突变后的人源化抗体。

本申请中，所述的抗体或其抗原结合片段，可进一步包含人源或鼠源κ、λ链或其变体的轻链恒定区，或进一步包含人源或鼠源IgG1、IgG2、IgG3、IgG4或其变体的重链恒定区；优选包含人源IgG1、IgG2或IgG4重链恒定区，或者使用氨基酸突变(例如L234A和/或L235A突变、和/或S228P突变)的IgG1、IgG2或IgG4变体。

本申请中所述人抗体的重链恒定区和人抗体的轻链恒定区的“变体”是指现有技术已公开的来源于人的不改变抗体可变区结构和功能的重链恒定区或轻链恒定区的变体。示例性变体包括对重链恒定区进行定点改造和氨基酸替换的IgG1、IgG2、IgG3或IgG4重链恒定区变体；具体替换如现有技术已知的YTE突变、L234A和/或L235A突变、S228P突变、和/或获得knob-into-hole结构的突变(使抗体重链具有knob-Fc和hole-Fc组合)，这些突变已被证实使得抗体具有新的性能，但不改变抗体可变区的功能。

“人抗体”(HuMAb)、“人源抗体”、“全人抗体”、“完全人抗体”可以互换使用，可以是源于人的抗体或者是从一种转基因生物体中获得的抗体，该转基因生物体经“改造”以响应于抗原刺激而产生特异性人抗体，并且可以通过本领域已知的任何方法产生。在某些技术中，将人重链和轻链基因座元件引入到源于胚胎干细胞系的细胞株中，这些细胞株中的内源性重链和轻链基因座遭到靶向破坏。转基因生物可以合成对人抗原特异的人抗体，并且该生物可以用于产生分泌人抗体的杂交瘤。人抗体还可以是一种抗体，其中重链和轻链是由源于一个或多个人DNA来源的核苷酸序列编码的。完全人抗体还可以通过基因或染色体转染方法以及噬菌体展示技术来构建，或者由体外活化的B细胞构建，所有的这些都是本领域已知的。

术语“全长抗体”、“完整抗体”、“完全抗体”和“全抗体”在本文中可互换使用，指基本上完整形式的抗体，与下文定义的抗原结合片段相区分。该术语特别指在轻链和重链中包含恒定区的抗体。本公开“抗体”包含“全长抗体”及其抗原结合片段。

本申请的全长抗体包括由以下表中轻重链可变区组合中的轻链可变区与轻链恒定区连接和重链可变区与重链恒定区连接后所形成的全长抗体。本领域技术人员可以根据实际需要选择不同的抗体来源的轻链恒定区、重链恒定区，例如人抗体来源的轻链恒定区和重链恒定区。

术语抗体的“抗原结合片段”或“功能片段”是指保持特异性结合抗原(例如，uPARAP)的能力的一个或多个片段。已显示可利用全长抗体的片段来进行抗体的抗原结合功能。术语抗体的“抗原结合片段”中包含的结合片段的实例包括(i)Fab片段，由VL、VH、CL和CH1结构域组成的单价片段；(ii)F(ab')2片段，包含通过铰链区上的二硫桥连接的两个Fab片段的二价片段，(iii)由VH和CH1结构域组成的Fd片段；(iv)由抗体的单臂的VH和VL结构域组成的Fv片段；(v)dsFv，由VH和VL经链间二硫键形成的抗原结合片段；(vi)包含scFv、dsFv、Fab等片段的双抗体、双特异性抗体和多特异性抗体。此外，虽然Fv片段的两个结构域VL和VH，通过合成的接头连接它们，从而使得其能够产生为其中VL和VH区配对形成单价分子的单个蛋白质链(称为单链Fv(scFv)；参见，例如，Bird等人(1988)Science242:423-426；和Huston等人(1988)Proc.Natl.Acad.Sci USA85:5879-5883)。此类单链抗体也包括在术语抗体的“抗原结合片段”中。使用本领域技术人员已知的常规技术获得此类抗体片段，并且以与对于完整抗体的方式相同的方式就功用性筛选片段。可通过重组DNA技术或通过酶促或化学断裂完整免疫球蛋白来产生抗原结合部分。抗体可以是不同同种型的抗体，例如，IgG(例如，IgG1，IgG2，IgG3或IgG4亚型)，IgA1，IgA2，IgD，IgE或IgM抗体。

Fab是通过用木瓜蛋白酶相同活性的酶处理IgG抗体分子所获得的片段中具有抗原结合活性的抗体片段。

F(ab')2是通过用酶胃蛋白酶相同活性的酶消化IgG，而获得的具有抗原结合活性的抗体片段。

Fab'是通过切割上述F(ab')2而获得的具有抗原结合活性的抗体片段。

此外，可以通过将编码Fab'片段的DNA插入到表达载体中，并将载体导入到宿主中来生产所述Fab'。

术语“单链抗体”、“单链Fv”或“scFv”意指包含通过接头连接的抗体重链可变结构域(或区域；VH)和抗体轻链可变结构域(或区域；VL)的分子。此类scFv分子可具有通用结构：NH2-VL-接头-VH-COOH或NH2-VH-接头-VL-COOH。可用于本公开的其他接头由以下文献描述，例如但不限于：Holliger等人(1993)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 90:6444-6448；Alfthan等人(1995)，Protein Eng.8:725-731；Choi等人(2001)，Eur.J.Immunol.31:94-106；Hu等人(1996)，Cancer Res.56:3055-3061；Kipriyanov等人(1999)，J.Mol.Biol.293:41-56和Roovers等人(2001)，Cancer Immunol.。

双抗体是其中scFv或Fab被二聚体化的抗体片段，是具有二价抗原结合活性的抗体片段。在二价抗原结合活性中，两个抗原可以是相同或不同的。

双特异性抗体和多特异性抗体是指能结合两个或多个抗原或抗原决定簇的抗体。

dsFv是通过将其中每个VH和VL中的一个氨基酸残基被半胱氨酸残基取代的多肽经由半胱氨酸残基之间的二硫键相连而获得的。可以按照已知方法(例如ProteinEngineering，7，697(1994))基于抗体的三维结构预测来选择被半胱氨酸残基取代的氨基酸残基。

术语“氨基酸差异”或“氨基酸突变”是指相较于原蛋白质或多肽，变体蛋白质或多肽存在氨基酸的改变或突变，包括在原蛋白质或多肽的基础上发生1个、2个、3个或多个氨基酸的插入、缺失或替换。

术语“抗体框架”或“FR区”，是指可变结构域VL或VH的一部分，其用作该可变结构域的抗原结合环(CDR)的支架。从本质上讲，其是不具有CDR的可变结构域。

术语“互补决定区”、“CDR”或“高变区”是指抗体的可变结构域内主要促成抗原结合的6个高变区之一。通常，每个重链可变区中存在三个CDR(HCDR1、HCDR2、HCDR3)，每个轻链可变区中存在三个CDR(LCDR1、LCDR2、LCDR3)。可以使用各种公知方案中的任何一种来确定CDR的氨基酸序列边界，包括“Kabat”编号规则(参见Kabat等(1991)，“Sequences ofProteins of Immunological Interest”，第5版，PublicHealth Service，NationalInstitutes of Health，Bethesda，MD)、“Chothia”编号规则(参见Al-Lazikani等人，(1 997)J M B 27 3：9 27-9 4 8)和I m M u n o G e n T i c s(I MG T)编号规则(L ef ran c M.P.，Immunologist，7，132-136(1999)；Lefranc，M.P.等，Dev.Comp.Immunol.，27，55-77(2003)等。例如，对于经典格式，遵循Kabat规则，所述重链可变域(VH)中的CDR氨基酸残基编号为31-35(HCDR1)、50-65(HCDR2)和95-102(HCDR3)；轻链可变域(VL)中的CDR氨基酸残基编号为24-34(LCDR1)、50-56(LCDR2)和89-97(LCDR3)。遵循Chothia规则，VH中的CDR氨基酸编号为26-32(HCDR1)、52-56(HCDR2)和95-102(HCDR3)；并且VL中的氨基酸残基编号为26-32(LCDR1)、50-52(LCDR2)和91-96(LCDR3)。通过组合Kabat和Chothia两者的CDR定义，CDR由人VH中的氨基酸残基26-35(HCDR1)、50-65(HCDR2)和95-102(HCDR3)和人VL中的氨基酸残基24-34(LCDR1)、50-56(LCDR2)和89-97(LCDR3)构成。遵循IMGT规则，VH中的CDR氨基酸残基编号大致为26-35(CDR1)、51-57(CDR2)和93-102(CDR3)，VL中的CDR氨基酸残基编号大致为27-32(CDR1)、50-52(CDR2)和89-97(CDR3)。遵循IMGT规则，抗体的CDR区可以使用程序IMGT/DomainGap Align确定。

术语“表位”或“抗原决定簇”是指抗原上被免疫球蛋白或抗体所结合的部位(例如，uPARAP分子上的特定部位)。表位通常以独特的空间构象包括至少3，4，5，6，7，8，9，10，11，12，13，14或15个连续或非连续的氨基酸。参见，例如，E pito pe Ma ppingProtocolsin Methods in Molecular B iology，第66卷，G.E.Morris，Ed.(1996)。

术语“特异性结合”、“选择性结合”、“选择性地结合”和“特异性地结合”是指抗体对预先确定的抗原上的表位的结合。通常，抗体以大约小于10-8M，例如大约小于10-9M、10-10M、10-11M、10-12M或更小的亲和力(KD)结合。

术语“KD”是指特定抗体-抗原相互作用的解离平衡常数。通常，本公开的抗体以小于大约10-7M，例如小于大约10-8M或10-9M的解离平衡常数(KD)结合uPARAP或其表位，例如，在本公开中抗体与细胞表面抗原的亲和力采用FACS法测定KD值。

可选地，所述的uPARAP特异性结合蛋白，其重链可变区和轻链可变区的骨架区的种属来源不做特别限定，各自独立地可选为但不限于：鼠、人、牛、马、猪、羊、狗、猫、兔、骆驼、驴、鹿、貂、鸡、鸭或者鹅。

在本申请的一些实施方式，所述的uPARAP特异性结合蛋白，其重链可变区如序列SEQ ID NO.8、SEQID NO.12、SEQ ID NO.16、SEQ ID NO.20、SEQ ID NO.24、SEQ ID NO.28、SEQ ID NO.32、SEQ ID NO.36、SEQ ID NO.40、SEQ ID NO.44、SEQ ID NO.48、SEQ IDNO.52、SEQ ID NO.56和SEQ ID NO.60中任一序列所示。或者其重链可变区与这些序列具有不低于80％(例如，80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、990％或100％)同一性的序列。

可选地，，所述的uPARAP特异性结合蛋白，其轻链可变区如序列SEQ ID NO.10、SEQID NO.14、SEQ ID NO.18、SEQ ID NO.22、SEQ ID NO.26、SEQ ID NO.30、SEQ ID NO.34、SEQID NO.38、SEQ IDNO.42、SEQ ID NO.46、SEQ ID NO.50、SEQ ID NO.54、SEQ ID NO.58和SEQID NO.62中任一序列所示。或者其轻链可变区与这些序列具有不低于80％(例如，80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、990％或100％)同一性。

可选地，所述的uPARAP特异性结合蛋白，其还包括抗体恒定区。

本申请的所述抗体恒定区的序列选自IgG、IgA、IgM、IgE及IgD任何其中之一恒定区的序列。

可选地，所述抗体恒定区中，轻链恒定区和重链恒定区的种属来源各自独立地为鼠、人牛、马、猪、羊、狗、猫、兔、骆驼、驴、鹿、貂、鸡、鸭或者鹅。

可选地，所述抗体恒定区中的轻链恒定区的类型为κ型或者λ型。

可选地，所述的uPARAP特异性结合蛋白，其重链如序列SEQ ID NO.68、SEQ IDNO.70、SEQ IDNO.72、SEQ ID NO.74、SEQ ID NO.76、SEQ ID NO.78、SEQ ID NO.80、SEQ IDNO.82、SEQ ID NO.84、SEQ ID NO.86、SEQ ID NO.88、SEQ ID NO.90、SEQ ID NO.92和SEQID NO.94中任一序列所示。或者其重链序列与这些序列具有不低于80％(例如，80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、990％或100％)同一性。

在本申请的一些实施方式中，所述的uPARAP特异性结合蛋白，其轻链如序列SEQID NO.69、SEQ IDNO.71、SEQ ID NO.73、SEQ ID NO.75、SEQ ID NO.77、SEQ ID NO.79、SEQID NO.81、SEQ ID NO.83、SEQ ID NO.85、SEQ ID NO.87、SEQ ID NO.89、SEQ ID NO.91、SEQID NO.93和SEQ ID NO.95中任一序列所示。或者其轻链序列与这些序列具有不低于80％(例如，80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、990％或100％)同一性。

“同一性”是指两个多核苷酸序列之间或两个多肽之间的序列相似性。当两个比较序列中的位置均被相同碱基或氨基酸单体亚基占据时，例如如果两个DNA分子的每一个位置都被腺嘌呤占据时，那么所述分子在该位置是同源的。两个序列之间的同一性百分率是两个序列共有的匹配或同源位置数除以比较的位置数×100的函数。例如，在序列最佳比对时，如果两个序列中的10个位置有6个匹配或同源，那么两个序列为60％同源；如果两个序列中的100个位置有95个匹配或同源，那么两个序列为95％同源。通常，当比对两个序列时进行比较以给出最大百分比同一性。例如，可以通过BLAST算法执行比较，其中选择算法的参数以在各个参考序列的整个长度上给出各个序列之间的最大匹配。以下参考文献涉及经常用于序列分析的BLAST算法：BLAST算法(BLAST ALGORITHMS):Altschul，S.F.等人，(1990)J.Mol.Biol.215:403-410；Gish，W.等人，(1993)NatureGenet.3:266-272；Madden，T.L.等人，(1996)Meth.Enzymol.266:131-141；Altschul，S.F.等人，(1997)Nucleic AcidsRes.25:3389-3402；Zhang，J.等人，(1997)Genome Res.7:649-656。其他如NCBI BLAST提供的常规BLAST算法也为本领域技术人员所熟知。

本申请实施例的第二方面，提供一种核酸分子，其编码所述的uPARAP特异性结合蛋白。

本文中使用的术语“核酸分子”是指DNA分子和RNA分子。核酸分子可以是单链或双链的，优选是双链DNA或单链mRNA或修饰的mRNA。当将核酸与另一个核酸序列置于功能关系中时，核酸是“有效连接的”。例如，如果启动子或增强子影响编码序列的转录，那么启动子或增强子有效地连接至所述编码序列。

氨基酸序列“同一性”指在比对氨基酸序列时(必要时引入间隙)，以达成最大序列同一性百分比，且不将任何保守性取代视为序列同一性的一部分，第一序列中与第二序列中的氨基酸残基同一的氨基酸残基的百分比。为测定氨基酸序列同一性百分比，比对可以通过属于本领域技术的范围内的多种方式来实现，例如使用公开可得到的计算机软件，诸如BLAST、BLAST-2、ALIGN、ALIGN-2或Megalign(DNASTAR)软件。本领域技术人员可确定适用于测量比对的参数，包括在所比较的序列全长上达成最大比对所需的任何算法。

本申请的核酸分子，主要是指分离的核酸分子。“分离的”指分子基本上不含其他生物分子，例如核酸、蛋白质、脂质、碳水化合物或其他材料，例如细胞碎片和生长培养基。通常，术语“分离的”并不意图指完全不存在这些材料或不存在水、缓冲液或盐，除非它们以显著干扰如本文所述的化合物的实验或治疗用途的量存在。

本申请实施例的第三方面，提供一种载体，其包括所述的核酸分子。

术语“载体”也为“表达载体”是指能够运输已与其连接的另一个核酸的核酸分子。在一个实施方案中，载体是“质粒”，其是指可将另外的DNA区段连接至其中的环状双链DNA环。在另一个实施方案中，载体是病毒载体，其中可将另外的DNA区段连接至病毒基因组中。本文中公开的载体能够在已引入它们的宿主细胞中自主复制(例如，具有细菌的复制起点的细菌载体和附加型哺乳动物载体)或可在引入宿主细胞后整合入宿主细胞的基因组，从而随宿主基因组一起复制(例如，非附加型哺乳动物载体)。整体上，载体可以选自但不限于哺乳动物细胞病毒、细菌质粒、噬菌体、酵母质粒、植物细胞病毒或其组合。

本申请实施例的第四方面，提供一种细胞，其包括所述的核酸分子或者所述的载体。

术语“细胞”也即“宿主细胞”是指已向其中引入了表达载体的细胞。宿主细胞可包括细菌、微生物、植物或动物细胞。易于转化的细菌包括肠杆菌科(enterobacteriaceae)的成员，例如大肠杆菌(Escherichiacoli)或沙门氏菌(Salmonella)的菌株；芽孢杆菌科(Bacillaceae)例如枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)；肺炎球菌(Pneumococcus)；链球菌(Streptococcus)和流感嗜血菌(Haemophilus influenzae)。适当的微生物包括酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)和毕赤酵母(Pichia pastoris)。适当的动物宿主细胞系包括CHO细胞、COS细胞、NSO细胞、HeLa细胞、BHK细胞或HEK293细胞。

本文使用的表述“细胞”、“细胞系”和“细胞培养物”可互换使用，并且所有这类名称都包括后代。因此，“转化体”和“转化细胞”包括原代受试细胞和由其衍生的培养物，而不考虑传代数目。还应当理解的是，由于故意或非有意的突变，所有后代在DNA含量方面不可能精确相同。包括具有与最初转化细胞中筛选的相同的功能或生物学活性的突变后代。在意指不同名称的情况下，其由上下文清楚可见。

本申请实施例的第五方面，提供一种所述的uPARAP特异性结合蛋白的制备方法，其包括：培养所述的细胞，从所得培养物中分离uPARAP特异性结合蛋白。

本申请的抗体或抗原结合片段可用常规方法制备和纯化。比如，编码重链和轻链的cDNA序列，可以克隆并重组至表达载体。重组的免疫球蛋白表达载体可以稳定地转染宿主细胞。作为一种更推荐的现有技术，哺乳动物类表达系统会导致抗体的糖基化，特别是在Fc区的高度保守N端位点。通过表达与人uPARAP特异性结合的抗体得到稳定的克隆。阳性的克隆在生物反应器中扩大培养以生产抗体。分泌了抗体的培养液可以用常规技术纯化。比如，用含调整过的缓冲液的A或G Sepharose FF柱进行纯化。洗去非特异性结合的组分。再用pH梯度法洗脱结合的抗体，用SDS-PAGE检测抗体片段，收集。抗体可用常规方法进行过滤浓缩。可溶的混合物和多聚体，也可以用常规方法去除，比如分子筛、离子交换。得到的产物需立即冷冻，如-70℃，或者冻干。

现有技术中熟知生产和纯化抗体和抗原结合片段的方法，如冷泉港的抗体实验技术指南，5-8章和15章。例如，鼠可以用人uPARAP或其片段免疫，所得到的抗体能被复性、纯化，并且可以用常规的方法进行氨基酸测序。抗原结合片段同样可以用常规方法制备。发明所述的抗体或抗原结合片段用基因工程方法在非人源的CDR区加上一个或多个人源FR区。人FR种系序列可以通过比对IMGT人类抗体可变区种系基因数据库和MOE软件，从ImMunoGeneTics(IMGT)的网站http://imgt.cines.fr得到，或者从免疫球蛋白杂志，2001ISBN012441351上获得。

本申请实施例的第六方面，提供一种抗体偶联物，其包括：

所述的uPARAP特异性结合蛋白，以及，

与所述uPARAP特异性结合蛋白偶联的偶联物。

(1)所述偶联物选自可检测标记物、细胞毒性药物、毒素、化疗药物、细胞因子、放射性核素、酶或其组合；以及，

术语“细胞毒性药物”是指抑制或防止细胞的功能和/或引起细胞死亡或破坏的物质。包括毒素、化疗药物等能用于杀伤细胞的化合物。

术语“毒素”是指能够对细胞的生长或增殖产生有害效果的任何物质，可以是来自细菌、真菌、植物或动物的小分子毒素及其衍生物，包括喜树碱类衍生物如伊沙替康，美登木素生物碱及其衍生物(CN101573384)如DM1、DM3、DM4、奥利斯他汀F(AF)及其衍生物，如MMAF、MMAE、3024(WO2016/127790A1，化合物7)、白喉毒素、外毒素、蓖麻毒蛋白(ricin)A链、相思豆毒蛋白(abrin)A链、modeccin、α-帚曲霉素(sarcin)、油桐(Aleutites fordii)毒蛋白、香石竹(dianthin)毒蛋白、美洲商陆(Phytolaca americana)毒蛋白(PAPI、PAPII和PAP-S)、苦瓜(Momordica charantia)抑制物、麻疯树毒蛋白(curcin)、巴豆毒蛋白(crotin)、肥皂草(sapaonaria officinalis)抑制物、白树毒蛋白(gelonin)、丝林霉素(mitogellin)局限曲霉素(restrictocin)、酚霉素(phenomycin)、依诺霉素(enomycin)和单端孢菌素(trichothecenes)。

术语“化疗药物”是可用于治疗肿瘤的化合物。该定义还包括起调节、降低、阻断或抑制可促进癌生长的激素效果作用的抗激素剂，且常常是系统或全身治疗的形式。它们自身可以是激素。化疗药物实例包括烷化剂，如噻替哌(thiotepa)；环磷酰胺(cyclosphamide)(CYTOXANTM)；烷基磺酸脂如白消安(busulfan)，英丙舒凡(improsulfan)和哌泊舒凡(piposulfan)；氮丙啶(aziridine)如苯并多巴(benaodopa)，卡波醌(carboquone)，美妥替哌(meturedopa)和尿烷亚胺(uredopa)；氮丙啶和甲基蜜胺(methylamelamine)包括六甲蜜胺(altretamine)，三亚胺嗪(triethylenemelamine)，三亚乙基磷酰胺，三亚乙基硫代磷酰胺和三羟甲基蜜胺(trimethylolomelamine)；氮芥(nitrogen mustards)如苯丁酸氮芥，萘氮芥，胆磷酰胺(cholophosphamide)，雌氮芥(estramustine)，异环磷酰胺(ifosfamide)，氮芥(mechlorethamine)，盐酸氧氮芥；左旋苯丙氨酸氮芥(melphalan)，新氮芥(novembichin)，胆甾醇苯乙酸氮芥，松龙苯芥(prednimustine)，曲磷胺(trofosfamide)，尿嘧啶氮芥；亚硝基脲(nitrosureas)如亚硝基脲氮芥(carmustine)，氯脲菌素(chlorozotocin)，福莫司汀(fotemustine)，洛莫司汀(lomustine)，尼莫司汀(nimustine)，雷莫司汀(ranimustine)；抗生素如阿克拉霉素，放线菌素，安曲霉素(authramycin)，重氮丝氨酸，博来霉素，放线菌素C(cactinomycin)，加利车霉素(calicheamicin)，carabicin，洋红霉素(chromomycin)，嗜癌素(carzinophilin)，色霉素，放线菌素D，柔红菌素(daunorubicin)，地托比星(detorubicin)，6-重氮-5-氧-L-正亮氨酸，阿霉素(doxorubicin)，表阿霉素(epirubicin)，依索比星(esorubicin)，伊达比星(idarubicin)，发波霉素(marcellomycin)，丝裂霉素，霉酚酸，诺加霉素(nogalamycin)，橄榄霉素(olivomycin)，培洛霉素(peplomycin)，potfiromycin,嘌呤霉素，三铁阿霉素(quelamycin)，罗多比星(rodorubicin)，链黑菌素；链脲霉素(streptozocin)，杀结核菌素，乌苯美司(ubenimex)，净司他丁(zinostatin)，佐柔比星(zorubicin)；抗代谢药如氨甲蝶吟，5-氟尿嘧啶(5-FU)；叶酸类似物如二甲叶酸(denopterin)，氨甲蝶呤，蝶罗呤，三甲曲沙(trimetrexate)；喋吟类似物氟达拉滨(f1udarabine)，6-巯基蝶呤，硫咪蝶呤，硫鸟蝶呤；嘧啶类似物如安西他滨(ancitabine)，阿扎胞苷(azacitidine)，6-氮尿苷，卡莫氟(carmofur)，阿糖胞苷，双脱氧尿苷，去氟氧尿苷(doxitluridine)，依诺他滨(enocitabine)，氟尿苷，5-FU；雄激素类如二甲睾酮(calusterone)，丙酸甲雄烷酮(dromostanolong propionate)，环硫雄醇(epitiostanol)，美雄氨(mepitiostane)，睾内酯(testolactone)；抗肾上腺类如氨鲁米特(aminoglutethimide)，米托坦(mitotane)，曲洛司坦(trilostane)；叶酸补充剂如亚叶酸(frolinic acid)；醋葡内脂；醛磷酰胺糖苷(aldophosphamideg lycoside)；氨基乙酰丙酸(aminolevulinic acid)；安吖啶(amsacrine)；bestrabucil；比生群(biasntrene)；依达曲沙(edatraxate)；defofamine；秋水仙胺；地吖醌(diaziquone)；elfomithine；依利醋铵(elliptinium acetate)；依托格鲁(etoglucid)；硝酸镓；羟基脲；香菇多糖(lentinan)；氯尼达明(lonidamine)；米托胍腙(mitoguazone)；米托蒽醌(mitoxantrone)；莫哌达醇(mopidamol)；硝呋旦(nitracrine)；喷司他丁(pintostatin)；phenamet；吡柔比星(pirarubicin)；鬼臼树酸(podophyllinicacid)；2-乙基酰肼；丙卡巴肼(procarbazine)；雷佐生(razoxane)；西索菲兰(sizofiran)；锗螺胺(spirogermanium)；细交链孢菌酮酸；三亚胺醌；2，2'，2"-三氯二乙胺(trichlorrotriethylamine)；乌拉坦(urethan)；长春碱酰胺；达卡巴嗪(dacarbazine)；甘露醇氮芥；二溴甘露醇(mitobronitol)；二溴卫矛醇；哌溴烷坑(pipobroman)；gacytosine；阿拉伯糖苷("Ara-C")；环磷酰胺；噻替派(thiotepa)；紫杉烷，如紫杉醇(Bristol-Myers SquibbOncology,Princeton,NJ)和docetaxel(Rhone-Poulenc Rorer,Antony,France)；苯丁酸氮芥；吉西他滨(gemcitabine)；6-硫代鸟嘌呤；巯基嘌呤；氨甲蝶呤；铂类似物如顺铂和卡铂；长春花碱；铂；依托泊甙(etoposide)(VP-16)；异环磷航胶；丝裂霉素C；米托蒽醌；长春新碱；长春瑞宾(vinorelbine)；新霉酰胺(navelbine)；诺肖林(novantrone)；替尼泊甙(teniposide)；柔红霉素；氨基蝶呤；希罗达(xeloda)；伊拜磷酸盐(ibandronate)；CPT-11；拓扑异构酶抑制剂RFS2000；二氟甲基鸟氨酸(DMFO)；维甲酸esperamicins；卡培他滨(capecitabine)；以及上述任何物质的可药用盐，酸或衍生物。此定义还包括能调节或抑制激素对肿瘤的作用的抗激素制剂，如抗雌激素制剂包括他莫昔芬(tamoxifen)，雷洛昔芬(raloxifene)，芳香酶抑制剂4(5)-咪唑，4-羟基他莫昔芬，曲沃昔芬(trioxifene)，雷洛昔芬(keoxifene)，LY117018，奥那斯酮(onapristone)，和托瑞米芬(Fareston)；和抗雄激素制剂如氟他氨(flutamide)，尼鲁米特(nilutamide)，比卡鲁胺(bicalutamide)，亮丙瑞林(leuprolide)和戈舍瑞林(goserelin)；和上述任何物质的可药用盐，酸或衍生物)。

每个抗体分子可能有一个或多个药物单元。药物分子的每个抗体的数量之间的比率表示为药物与抗体的比率(DAR)。DAR可以为1至10，即每个抗体分子将存在1至10个药物单元。特别的，DAR可以为2至8，例如3至6，如4或5。

“连接子”“接头”是抗体和活性剂之间的稳定连接的一个重要方面。接头可以例如基于包括二硫化物、腙或肽(可裂解的)或硫醚(不可裂解)的化学基序，并且控制细胞毒素剂向靶细胞的分布和递送。在临床前和临床试验中，已证明可切割和不可切割的接头类型是安全的。例如，Brentuximab Vedotin包含一种酶敏感性可切割接头，可将有效且高度毒性的抗微管剂单甲基奥瑞他汀E(MMAE)(一种合成的抗肿瘤药)递送至细胞。TrastuzumabEmtansine是另一种经过批准的ADC，是由稳定的不可切割接头连接的美登素衍生物微管形成抑制剂mertansine(DM-1)和抗体曲妥珠单抗(HerceptinTM，Genentech/Roche)的组合。

接头的类型，可切割或不可切割，赋予递送药物特定的性质。例如，可切割的接头可以例如被靶细胞中的酶切割，导致活性剂(例如细胞毒性剂)的细胞内有效释放。相反，含有不可切割接头的ADC没有药物释放机制，并且必须依赖诸如靶向抗体降解的机制来释放药物。此外，如本领域技术人员所理解的，接头组成可以影响整个ADC的关键因素，例如溶解度和药代动力学性质。

对于这两种类型的接头，药物释放对于获得细胞效应是至关重要的。能够自由地扩散穿过细胞膜的药物可以从靶细胞中逃逸，并且在称为“旁观者杀死”的过程中，也攻击相邻细胞，例如表达uPARAP的靶细胞附近的癌细胞。

本申请实施例的第七方面，提供一种药物组合物，其包括

所述的抗体偶联物以及药学上可以接受的载体。

“药物组合物”表示含有一种或多种本文所述化合物或其生理学上/可药用的盐或前体药物与其他化学组分的混合物，所述其他组分例如生理学/可药用的载体和赋形剂。药物组合物的目的是促进对生物体的给药，利于活性成分的吸收进而发挥生物活性。

术语“药学上可接受的载体”指适合用于制剂中用于递送抗体或抗原结合片段的任何无活性物质。载体可以是抗粘附剂、粘合剂、包衣、崩解剂、充填剂或稀释剂、防腐剂(如抗氧化剂、抗菌剂或抗真菌剂)、增甜剂、吸收延迟剂、润湿剂、乳化剂、缓冲剂等。合适的药学上可接受的载体的示例包括水、乙醇、多元醇(例如甘油、丙二醇、聚乙二醇等)右旋糖、植物油(例如橄榄油)、盐水、缓冲液、缓冲的盐水和等渗剂例如糖、多元醇、山梨糖醇和氯化钠。

本申请包括用于治疗与目标抗原(例如uPARAP)阳性细胞相关的疾病的药剂，所述药剂包含本申请的抗uPARAP抗体或其抗原结合片段作为活性成分。

“治疗用途”，如本文所述的针对uPARAP引导的ADC可用于将活性剂(例如治疗剂或细胞毒性剂)递送至表达uPARAP的细胞，并因此用于治疗一系列以uPARAP表达、特别是uPARAP过表达为特征的疾病和病症。本申请内容提供药物组合物，其包含有效量的如本文所述的抗uPARAP ADC，以及药学上可接受的缓冲剂、稀释剂、载体、佐剂或赋形剂。

本申请实施例的uPARAP表达相关疾病(或者病症)的患者的病灶细胞表达uPARAP。

本申请实施例的第八方面，提供所述的uPARAP特异性结合蛋白、所述的核酸分子、所述的载体、所述的细胞、所述的抗体偶联物或者所述的药物组合物在制备uPARAP表达相关疾病的药物中的用途。

本申请中与uPARAP相关的疾病没有限制，只要它是与uPARAP相关的疾病即可，例如为癌症、骨退化疾病(如骨质疏松症)、纤维化和与巨噬细胞相关的疾病(如动脉粥样硬化)、关节炎(例如骨关节炎、炎症性关节炎、类风湿性关节炎、银屑病性关节炎、痛风、假痛风、强直性脊柱炎、狼疮或者莱姆病诱发的关节炎，莱姆病诱发的关节炎为莱姆关节炎)或者慢性炎症。本申请的分子诱导的治疗反应包括：(1)通过结合人类uPARAP，阻遏uPARAP与其受体/配体的结合，或(2)杀伤过表达uPARAP的肿瘤细胞。因此，当处于适于治疗应用的制备物和制剂中时，本申请的分子对这样一些人是非常有用的，例如他们患有癌症，可以是肉瘤、骨肉瘤、脑癌、神经胶质瘤、多形性成胶质细胞瘤、神经母细胞瘤、中枢神经系统癌、神经内分泌肿瘤、间皮瘤、前列腺癌、来自前列腺癌的骨转移瘤、乳腺癌、来自乳腺癌的骨转移瘤、头颈癌、咽喉癌、咽鳞癌、口腔鳞癌、鼻咽癌、食管癌、食管胃连接部癌、胃癌、胃肠道癌、肠癌、结肠癌、结肠直肠癌、肺癌、肾癌、透明细胞肾细胞癌、胆道癌、佩吉特病、胰腺癌、卵巢癌、子宫内膜癌、子宫颈癌、膀胱癌、尿路上皮癌、胃肠道间质瘤、宫颈癌、鳞状细胞癌、腹膜癌、肝癌、肝胆癌、肝细胞癌、外阴癌、甲状腺癌、阴茎癌、皮肤癌、白血病、恶性淋巴瘤、浆细胞瘤、骨癌、骨髓瘤、多发性骨髓瘤、骨髓异常增生综合征、库肯勃氏瘤、骨髓增生性肿瘤、黑色素瘤和梅克尔细胞癌。

本申请实施例的第九方面，提供所述的uPARAP特异性结合蛋白、所述的核酸分子、所述的载体或者所述的细胞在制备uPARAP相关疾病诊断产品中的用途。

uPARAP相关疾病的定义参照第八方面。

本申请实施例的第十方面，提供一种uPARAP相关疾病诊断产品，其包括所述的uPARAP特异性结合蛋白。

可选地，所述uPARAP相关疾病诊断产品为诊断试剂、试纸条、检测板或者试剂盒。

本申请对诊断产品中的uPARAP特异性结合蛋白竞争结合待测品中的uPARAP。

当术语“竞争”用于竞争相同表位的抗原结合蛋白的情况中时，意指在抗原结合蛋白之间竞争，其通过以下测定法来测定：在所述测定法中，待检测的抗原结合蛋白(例如抗体或其功能片段)防止或抑制(例如降低)参考抗原结合蛋白(例如配体或参考抗体)与共同抗原(例如uPARAP抗原或其片段)的特异性结合。众多类型的竞争性结合测定可用于确定一种抗原结合蛋白是否与另一种竞争，这些测定例如：固相直接或间接放射免疫测定(RIA)、固相直接或间接酶免疫测定(EIA)、夹心竞争测定(参见例如Stahli等，1983，MethodsinEnzymology 9：242-253)；固相直接生物素-亲和素EIA(参见例如Kirkland等，1986，J.Immunol.137：3614-3619)、固相直接标记测定、固相直接标记夹心测定(参见例如Harlow和Lane，1988，Antibodies，A Laboratory Manual(抗体，实验室手册)，Cold SpringHarborPress)；用I-1 2 5标记物的固相直接标记RIA(参见例如Morel等，1988，Molec.Immunol.25：7-15)；固相直接生物素-亲和素EIA(参见例如Cheung，等，1990，Virology176：546-552)；和直接标记的RIA(Moldenhauer等，1990，Scand.J.Immunol.32：77-82)。通常所述测定法涉及使用结合荷有未标记的检测抗原结合蛋白及标记的参考抗原结合蛋白任一种的固态表面或细胞的纯化的抗原。通过测量在所测抗原结合蛋白存在下结合固态表面或细胞的标记的量来测量竞争性抑制。通常所测抗原结合蛋白过量存在。由竞争性测定(竞争抗原结合蛋白)鉴定的抗原结合蛋白包括：结合与参考抗原结合蛋白同一表位的抗原结合蛋白；和结合充分接近参考抗原结合蛋白的结合表位的邻近表位的抗原结合蛋白，所述两个表位在空间上互相妨碍发生结合。在本文实施例中提供关于用于测定竞争性结合的方法的其它详细资料。通常当竞争的抗原结合蛋白过量存在时，其将抑制(例如降低)至少40-45％、45-50％、50-55％、55-60％、60-65％、65-70％、70-75％或75％或更多参考抗原结合蛋白与共同抗原的特异性结合。在某些情况下，结合被抑制至少80-85％、85-90％、90-95％、95-97％或97％或更多。本申请实施例的第十一方面，提供一种uPARAP的检测方法，其包括用上述uPARAP特异性结合蛋白捕获待测品中的uPARAP。

本申请涉及用于免疫检测或测定目标抗原(例如uPARAP)的方法、用于免疫检测或测定目标抗原(例如uPARAP)的试剂、用于免疫检测或测定表达目标抗原(例如uPARAP)的细胞的方法和用于诊断与目标抗原(例如uPARAP)阳性细胞相关的疾病的诊断剂，其包含本申请的特异性识别目标抗原(例如人uPARAP)并与胞外区的氨基酸序列或其三维结构结合的抗体或抗体片段作为活性成分。

在本申请中，用于检测或测定目标抗原(例如uPARAP)的量的方法可以是任何已知方法。例如，它包括免疫检测或测定方法。免疫检测或测定方法是使用标记的抗原或抗体检测或测定抗体量或抗原量的方法。免疫检测或测定方法的实例包括放射性物质标记的免疫抗体方法(RIA)、酶免疫测定法(EIA或ELISA)、荧光免疫测定法(FIA)、发光免疫测定法、蛋白质免疫印迹法、物理化学方法等。上述与uPARAP阳性细胞相关的疾病可以通过用本公开的抗体或抗体片段检测或测定表达uPARAP的细胞来诊断。

为了检测表达多肽的细胞，可以使用已知的免疫检测方法，并优选使用免疫沉淀法、荧光细胞染色法、免疫组织染色法等。此外，可以使用利用FMAT8100HTS系统(AppliedBiosystem)的荧光抗体染色法等。

在申请中，对用于检测或测定目标抗原(例如uPARAP)的待测样品没有特别限制，只要它具有包含表达目标抗原(例如uPARAP)的细胞的可能性即可，例如组织细胞、血液、血浆、血清、胰液、尿液、粪便、组织液或培养液。

根据所需的诊断方法，含有本申请的单克隆抗体或其抗体片段的诊断剂还可以含有用于执行抗原-抗体反应的试剂或用于检测反应的试剂。用于执行抗原-抗体反应的试剂包括缓冲剂、盐等。用于检测的试剂包括通常用于免疫检测或测定方法的试剂，例如识别所述单克隆抗体、其抗体片段或其结合物的标记的第二抗体和与所述标记对应的底物等。

本申请实施例的第十二方面，提供一种uPARAP相关疾病的治疗方法，其包括给受试者施用有效量的上述抗体偶联物或者药物组合物。

“施用”、“给予”和“处理”当应用于动物、人、实验受试者、细胞、组织、器官或生物流体时，是指外源性药物、治疗剂、诊断剂或组合物与动物、人、受试者、细胞、组织、器官或生物流体的接触。“施用”、“给予”和“处理”可以指例如治疗、药物代谢动力学、诊断、研究和实验方法。细胞的处理包括试剂与细胞的接触，以及试剂与流体的接触，其中所述流体与细胞接触。“施用”、“给予”和“处理”还意指通过试剂、诊断、结合组合物或通过另一种细胞体外和离体处理例如细胞。“处理”当应用于人、兽医学或研究受试者时，是指治疗处理、预防或预防性措施，研究和诊断应用。

“治疗”意指给予患者内用或外用治疗剂，例如包含本公开的任一种抗体或抗原结合片段的组合物，所述患者具有一种或多种疾病症状，而已知所述治疗剂对这些症状具有治疗作用。通常，在受治疗患者或群体中以有效缓解一种或多种疾病症状的量给予治疗剂，以诱导这类症状退化或抑制这类症状发展到任何临床右测量的程度。有效缓解任何具体疾病症状的治疗剂的量(也称作“治疗有效量”)可根据多种因素变化，例如患者的疾病状态、年龄和体重，以及药物在患者产生需要疗效的能力。通过医生或其它专业卫生保健人士通常用于评价该症状的严重性或进展状况的任何临床检测方法，可评价疾病症状是否已被减轻。尽管本公开的实施方案(例如治疗方法或制品)在缓解每个目标疾病症状方面可能无效，但是根据本领域已知的任何统计学检验方法如Student t检验、卡方检验、依据Mann和Whitney的U检验、Kruskal-Wallis检验(H检验)、Jonckheere-Terpstra检验和Wilcoxon检验确定，其在统计学显著数目的患者中应当减轻目标疾病症状。

“有效量”或“有效剂量”指指获得任一种或多种有益的或所需的治疗结果所必需的药物、化合物或药物组合物的量。对于预防用途，有益的或所需的结果包括消除或降低风险、减轻严重性或延迟病症的发作，包括病症、其并发症和在病症的发展过程中呈现的中间病理表型的生物化学、组织学和/或行为症状。对于治疗应用，有益的或所需的结果包括临床结果，诸如减少各种本公开靶抗原相关病症的发病率或改善所述病症的一个或多个症状，减少治疗病症所需的其它药剂的剂量，增强另一种药剂的疗效，和/或延缓患者的本公开靶抗原相关病症的进展。

下面将结合实施例对本申请的实施方案进行详细描述。应理解，这些实施例仅用于说明本申请而不用于限制本申请的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，优先参考本申请中给出的指引，还可以按照本领域的实验手册或常规条件，还可以按照制造厂商所建议的条件，或者参考本领域已知的实验方法。

下述的具体实施例中，涉及原料组分的量度参数，如无特别说明，可能存在称量精度范围内的细微偏差。涉及温度和时间参数，允许仪器测试精度或操作精度导致的可接受的偏差。

人uPARAP的N端前4个结构域(即CysR-FN-II-CTLD-I-CTLD-II)对于uPARAP摄取胶原并内吞进入胞内降解，从而参与机体生理和病理过程十分重要。因此靶向人uPARAP的N端前4个结构域的抗uPARAP抗体用于开发ADC药物非常有效。为获得靶向人uPARAP的N端前4个结构域的抗uPARAP抗体，本申请通过重组表达人uPARAP胞外结构域N端CysR-FN-II-CTLD-I-CTLD-II结构域(31-522AA，SEQ ID NO.2)蛋白免疫Balb/c小鼠。筛选与uPARAP的CysR-FN-II-CTLD-I-CTLD-II结构域结合的高亲和力抗体用于开发ADC药物。

本申请实施例通过构建人uPARAP过表达细胞株(H-MRC2-CHO-K1)介入抗体筛选，获得可特异性高亲和力结合人uPARAP蛋白，且具有高内吞活性的抗体。筛选的抗体与细胞毒性药物偶联后可高活性杀伤uPARAP阳性的肿瘤细胞，具有较高的抗肿瘤活性。

实施例1

步骤一：高表达uPARAP的H-MRC2 CHO-K1细胞株构建

1、H-MRC2载体质粒构建：根据GenBank数据库uPARAP的氨基酸序列(AAI53885.1，SEQ ID NO.1，1479aa)设计合成全长uPARAP目的基因，并克隆到慢病毒载体lenti-CMV-MCS-T2A-Puro上，得到含目的基因的载体质粒lenti-CMV-H-MRC2(Codon opt)-T2A-Puro。

2、制备慢病毒颗粒：转染GM easyTM Lentiviral Mix、HG TransgeneTMReagent和步骤1构建的载体质粒的混合物到HEK-293T细胞中，收集含有病毒的培养基上清，过滤并进行超高速离心，即可得到浓缩的慢病毒颗粒。

GM easyTM Lentiviral Mix含有慢病毒包装的所有必要元件，并把原病毒的env基因替换为水疱性口炎病毒的G糖蛋白基因(VSV-G)，用以增多可感染细胞类型。

3、感染和筛选：使用浓缩后的慢病毒颗粒感染人CHO-K1细胞，经puromycin筛选两至三周，再进行FACS验证基因表达效果。挑选流式检测高表达的转染克隆，通过有限稀释法筛选单克隆。

4、将挑选出的单克隆细胞株扩大培养，冻存备库以便后续实验。

步骤二：重组的人、食蟹猴和小鼠uPARAP胞外结构域蛋白的制备

1、重组表达载体构建

(1)构建编码人uPARAP蛋白(AAI53885.1)细胞外N端4个结构域(即氨基酸31-522，SEQ ID NO.2，492aa)的cDNA表达载体，通过将人uPARAP多核苷酸的核苷酸91-1566进行密码子优化后(SEQ ID NO.3，1476bp)克隆到含His标签的pcDNA3.4表达载体，来制备重组的人uPARAP胞外结构域蛋白。

(2)构建编码食蟹猴uPARAP蛋白(XP_005584671.2)细胞外结构域(即氨基酸31-522，SEQ ID NO.4，492aa)的cDNA表达载体，通过将食蟹猴uPARAP多核苷酸的核苷酸91-1566进行密码子优化后(SEQ IDNO.5，1476bp)克隆到含His标签的pcDNA3.4表达载体，来制备重组的食蟹猴uPARAP胞外结构域蛋白。

(3)构建编码小鼠uPARAP蛋白(NP_0321652.3)细胞外结构域(即氨基酸31-521，SEQ ID NO.6，491aa)的cDNA表达载体，通过将小鼠uPARAP多核苷酸的核苷酸91-1566进行密码子优化后(SEQ IDNO.7，1473bp)克隆到含His标签的pcDNA3.4表达载体，来制备重组的小鼠uPARAP胞外结构域蛋白。

2、制备重组uPARAP胞外结构域蛋白

使用Lipo2000(Invitrogen)分别将上述构建的重组表达载体转染HEK293细胞，细胞培养7天后，收集培养上清液，经镍螯合柱纯化分别得到重组的人、食蟹猴和小鼠的uPARAP胞外结构域蛋白。

图1所示列出了重组的人、食蟹猴和小鼠uPARAP胞外结构域蛋白的SEC-HPLC检测结果。图1(a)、图1(b)、图1(c)分别为重组的人、食蟹猴和小鼠uPARAP胞外结构域蛋白的电泳结果，图中，M对应Marker，NR对应非还原的重组uPARAP胞外结构域蛋白，R对应还原的重组uPARAP胞外结构域蛋白。

步骤三：鼠源抗人uPARAP单克隆抗体产生

1、免疫

选择6周BALB/c雌性小鼠，使用步骤二的重组的人uPARAP胞外结构域蛋白与弗氏佐剂等体积混合，50μg/只后腿肌肉注射免疫。初次免疫三周后，进行加强免疫，于第3次免疫后7天对免疫小鼠采血，ELISA检测免疫小鼠血清滴度。选择血清滴度达到1:128000的小鼠进行冲击免疫，取25μg重组的人uPARAP胞外结构域蛋白腹腔接种免疫小鼠。

2、脾细胞融合

冲击免疫三天后取小鼠脾和外周淋巴结，分离得到B细胞。取适量的B细胞和SP2/0细胞融合，在含有HAT的DMEM完全培养基(含20％FBS、1×HAT和1×DMEM培养基)中筛选，杂交瘤细胞置于5％CO₂、37℃条件下培养5-7天至形成克隆，去除上清，加入200μL/孔的HT完全培养基(含20％FBS、1×HT和1×DMEM培养基)，37℃、5％CO₂培养3天后进行ELISA检测。

3、杂交瘤筛选

包被步骤二制备的重组的人uPARAP胞外结构域蛋白(1μg/mL)，ELISA检测杂交瘤培养上清，挑选与重组的人uPARAP胞外结构域蛋白结合能力强的阳性克隆进一步介入流式检测筛选。

选择与步骤一构建的H-MRC2 CHO-K1细胞结合能力强，同时与CHO-K1细胞不结合的克隆扩增冻存保种，同时进行亚克隆，经过2-3轮亚克隆直至获得单克隆。每轮亚克隆细胞均需进行ELISA结合检测和细胞流式结合检测。

最终筛选获得14个阳性杂交瘤单克隆细胞株，分别命名为MM01、MM02、MM03、MM04、MM05、MM06、MM07、MM08、MM09、MM10、MM11、MM12、MM13和MM14。

将杂交瘤单克隆细胞株进行扩增并用无血清培养基培养，收集培养上清液并用蛋白G柱从中纯化，以获得纯化鼠源抗uPARAP单克隆抗体MM01、MM02、MM03、MM04、MM05、MM06、MM07、MM08、MM09、MM10、MM11、MM12、MM13和MM14，-80℃保存纯化单克隆抗体供活性检测用。

步骤四:鼠源单克隆抗体的可变区测序和嵌合抗体重组表达

对筛选获得的14株杂交瘤单克隆细胞进行抗体可变区克隆，再与人IgG1重链恒定区和人源Kappa轻链恒定区连接从而构建表达载体，瞬时转染CHO细胞进行嵌合抗体重组表达用于活性评价。嵌合抗体的编号ch01至ch014分别与上述MM01至MM14对应。

1、从杂交瘤中克隆抗体可变区的过程如下。收集对数生长期杂交瘤细胞，用Trizol(Invitrogen，15596-018)提取RNA(按照试剂盒说明书步骤)并进行反转录(PrimeScriptTM Reverse Transcriptase，Takara,cat#2680A)。将反转录得到的cDNA采用mouse Ig-PrimerSet(Novagen,TB326 Rev.B 0503)进行PCR扩增，送测序公司测序，得到的抗体可变区的DNA序列和对应的氨基酸序列如SEQ ID NO.8至SEQID NO.63所示。

2、上述鼠源重链可变区和轻链可变区，分别与下述人IgG1抗体的重链恒定区和人源κ轻链恒定区连接，对应形成嵌合抗体ch01、ch02、ch03、ch04、ch05、ch06、ch07、ch08、ch09、ch10、ch11、ch12、ch13和ch14。恒定区选自序列SEQ ID NO.64至SEQ ID NO.67。人IgG1重链恒定区：氨基酸序列如SEQID NO.64所示，330aa；编码核酸序列如SEQ ID NO.65所示，990bp。人源Kappa轻链恒定区：氨基酸序列如SEQ ID NO.66所示，107aa；编码核酸序列如SEQ ID NO.67所示，321bp。

3、上述重链可变区与SEQ ID NO.64所示的人IgG1重链恒定区连接形成全长抗体的重链，轻链可变区与SEQ ID NO.66所示的人κ轻链恒定区连接形成全长抗体的轻链。示例性的，嵌合抗体全长序列如SEQID NO.68至SEQ ID NO.95所示。

4、嵌合抗体全长序列连接进行基因合成，经酶切后连入相应质粒中。将构建好的质粒瞬时转染至CHO细胞中进行表达，经过7-10天表达，细胞培养上清液用相应缓冲液(如磷酸盐缓冲液，pH7.4)平衡的MabSelect柱(GE Healthcare)进行纯化，之后用柠檬酸钠或其它缓冲液进行洗脱，经此步骤获得的抗体，可通过SDS-PAGE或SEC-HPLC进行纯度等鉴定，并用于后续其它表征研究。

表1、抗uPARAP嵌合抗体序列汇总

步骤五：抗体序列表征及分析

根据步骤四的测序结果对抗体序列进行分析得到Kabat及IMGT系统界定的CDRs，下表(表2、表3)基于Kabat及IMGT系统的定义列出14个抗uPARAP抗体的CDRs。

表2、基于Kabat系统界定抗uPARAP抗体CDRs

表3、基于IMGT系统界定抗uPARAP抗体CDRs

步骤六：活性评价

本实施例阳性对照抗体为YZ-18-29(来自WO2017/133745)，YZ-18-29全长抗体重链和轻链氨基酸序列如SEQ ID NO.96至SEQ ID NO.97所示。用一样的方法合成阳性对照抗体基因，转染CHO细胞进行重组表达，经纯化获得阳性对照抗体用于后续活性评价比较。

测试例1、嵌合抗体与重组的人、食蟹猴和小鼠uPARAP胞外结构域蛋白ELISA结合实验

将步骤二制备的重组的人、食蟹猴和小鼠uPARAP胞外结构域蛋白稀释至1μg/mL，96孔酶标板100μL/孔包被抗原蛋白。洗涤及封闭后加入3×梯度稀释的抗体，室温孵育1h；洗涤3次后加入辣根过氧化物酶偶联山羊抗人Fc抗体(Abcam，ab6858)，室温孵育1h，3次洗涤后加入四甲基联苯胺(TMB，4A Biotech，4AMB200)显色，1M硫酸终止显色，酶标仪读取450nm吸光值。

14株人源化的抗uPARAP抗体均以剂量依赖的方式结合至重组的人、食蟹猴和小鼠uPARAP胞外结构域蛋白，ELISA结合曲线及EC50见图2以及表4。

表4、EC50汇总

测试例2、嵌合抗体与uPARAP同家族蛋白结合实验

将步骤二制备的重组的人uPARAP胞外结构域蛋白、DEC205(Acro，LY5-H52H3)、MRC1(Acro，CD6-H52H9)和PLA2R(迪腾敏生物科技，13036)稀释至1μg/mL，96孔酶标板100μL/孔包被抗原蛋白。洗涤及封闭后加入稀释至1μg/mL的抗体，室温孵育1h；洗涤3次后加入辣根过氧化物酶偶联山羊抗人Fc抗体(Abcam，ab6858)，室温孵育1h，3次洗涤后加入四甲基联苯胺(TMB，4A Biotech，4AMB200)显色，1M硫酸终止显色，酶标仪读取450nm吸光值。

14株人源化的抗uPARAP抗体均可特异性结合重组的人uPARAP胞外结构域蛋白，不结合DEC205、MRC 1和PLA2R，检测结果见图3。

测试例3、嵌合抗体细胞水平流式结合实验(H-MRC2-CHO-K1、CHO-K1)

1、将步骤一构建的稳转表达人uPARAP的H-MRC2-CHO-K1细胞和空白CHO-K1细胞用FACS缓冲液制备成1×10⁶/mL的细胞悬液，100μL/孔加入1.5mL EP管(Axygen，MCT-150-C)中。FACS缓冲液包含2％胎牛血清(Gibco，10099141)以及pH7.4的PBS(Solarbio，P1020)。

2、离心去除上清后加入50μL/孔用FACS缓冲液稀释的终浓度5μg/mL的待测uPARAP抗体，放于4℃冰箱中避光孵育1h。以FACS缓冲液400g离心洗涤3次后，加入工作浓度的Allophycocyanin(APC)AffiniPure F(ab‘)2Fragment Donkey Anti-Human IgG(H+L)(Jackson Immunoresearch/709-136-149)，每孔加入100μL重悬，4℃孵育30min；放于4℃冰箱中避光孵育40min。

3、以FACS缓冲液300g离心洗涤3次后，在BD FACS CantoII流式细胞仪上检测几何平均数荧光强度，分析uPARAP抗体对稳转表达uPARAP的CHO-K1细胞和空白CHO-K1细胞的结合情况。

结果见图4，14株候选嵌合抗体和阳性对照抗体均可特异性结合过表达uPARAP的CHO-K1细胞(H-MRC2-CHO-K1)，而不结合空白CHO-K1细胞。

测试例4、嵌合抗体内吞活性检测

将预标记了pHAb Amine染料(Promega，G9831)的待测抗uPARAP嵌合抗体、阳性对照抗体和阴性同型对照抗体，以10μg/mL终浓度加入1×10⁶/mL高表达uPARAP的THP-1细胞和U937细胞中，放于37℃，5％CO₂细胞培养箱避光孵育，分别在0、0.5、1、2、4、6、12、24h后取出细胞，300g低温离心收集细胞，去除上清，以FACS缓冲液400g离心洗涤3次，在BD FACSCantoII流式细胞仪上检测几何平均数荧光强度，计算抗体对高表达uPARAP的THP-1细胞和U937细胞的内吞效率。

结果显示(见图5)，14株嵌合抗体均具有良好的细胞内吞效率，其中，嵌合抗体ch01、ch11、ch14在THP-1细胞和U937细胞上的内吞效率优于阳性对照抗体YZ-18-29。

测试例5、抗体药物偶联物的制备和检测

以下涉及候选抗体与vc-MMAE偶联物的制备和检测，包括如下步骤：

1、抗体药物偶联物的制备

(1)各取10mg的待偶联抗体，使用15mL的30KD超滤装置置换到还原缓冲液(25mM硼酸钠，pH8.0，25mM NaCl，5mM EDTA)中，共三次置换；终体积约为1mL。

(2)将置换后的抗体溶液转移至新的Eppendorf离心管中；检测蛋白浓度，计算蛋白总量。

(3)向抗体中加入2.5倍摩尔数的DTT，室温保温2h，连续混匀；使用15mL的30KD超滤装置置换到偶联缓冲液(50mM Tris，pH7.2，150mM NaCl，5mM EDTA)中，共三次置换。取样以A280测定蛋白浓度，并称重，计算蛋白总量。

(4)取10μL样品，以Ellman’s方法测定自由巯基数。

以下列公式计算其自由巯基的摩尔浓度：

b:比色皿光路长度(通常1cm)。

根据自由巯基的摩尔浓度和总蛋白溶液体积计算自由巯基摩尔数。

(5)向还原后的抗体中加入1.1倍于自由巯基摩尔数的vc-MMAE即MC-vc-PAB-MMAE(溶于DMSO)，混匀后室温反应2h，间断混匀。向反应体系中加入20倍于所投入之vc-MMAE(即MC-vc-PAB-MMAE)摩尔数的N-乙酰半胱氨酸于反应液中，混匀，静置5min。使用15mL的30KD超滤装置置换到偶联物储存液(20mM组氨酸Histidine)，3％蔗糖Sucrose，0.03％Tween-80，pH5.5)中，共三次置换，即得到抗体药物偶联物产物Anti-uPARAP-ADC(嵌合抗体或阳性对照抗体与同型对照抗体制备的抗体药物偶联物的统称)于4℃保存。

2、抗体药物偶联物的DAR值测定

抗体与vc-MMAE药物偶联物的载药量(DAR)是用疏水作用色谱法(HIC-HPLC)检测确定的。检测和计算方法参考专利文献CN114366818A。

典型的抗体与vc-MMAE药物偶联物HSP340001-ADC的图谱见图6，根据该图谱峰面积计算得到平均载药数DAR为3.96。类似地可得，其余抗体药物偶联物的平均载药数DAR值，各抗体与偶联药物的DAR值汇总如下表5。

表5、抗体与vc-MMAE药物偶联物的平均载药数汇总

抗体药物偶联物编号	偶联抗体编号	Linker-payload	DAR
				HSP340001-ADC	ch01	vc-MMAE	3.96
HSP340003-ADC	ch02	vc-MMAE	3.97
				HSP340005-ADC	ch04	vc-MMAE	3.94
HSP340007-ADC	ch05	vc-MMAE	3.88
				HSP340009-ADC	ch06	vc-MMAE	3.74
HSP3400011-ADC	ch08	vc-MMAE	3.83
				HSP3400013-ADC	ch09	vc-MMAE	3.92
HSP3400015-ADC	ch10	vc-MMAE	3.82
				HSP3400017-ADC	ch14	vc-MMAE	3.85
HSP3400019-ADC	YZ-18-29	vc-MMAE	3.97
				HSP3400023-ADC	human IgG1-Isotype antibody(Anti-HEL)	vc-MMAE	3.79

测试例6、阳参抗体流式检测筛选uPARAP表达阳性肿瘤细胞系

通过阳性对照抗体YZ-18-29流式检测不同肿瘤细胞系表面uPARAP的表达水平，筛选表达量的细胞系用于抗体药物偶联物的杀伤活性检测。

1、细胞复苏和培养：

将购自武汉尚恩生物的人结肠癌细胞系(HT-29)、人单核细胞白血病细胞系(THP-1)，人组织细胞淋巴瘤细胞系(U937)、人急性早幼粒白血病细胞系(NB-4)、人骨肉瘤细胞系(MG-63)、人成骨肉瘤细胞系(Saos-2)、人恶性胚胎横纹肌瘤细胞系(RD)、人纤维肉瘤细胞系(HT-1080)、仓鼠卵巢细胞株(CHO-K1)和过表达uPARAP的CHO-K1细胞(H-MRC2-CHO-K1)复苏传达培养。各细胞生长所需培养基及培养条件如下表6。

表6、细胞系及培养条件汇总

细胞系	生长培养基	培养条件
			HT-29	McCoy’s 5a+10％FBS+1％P/S	37℃，5％CO₂，95％湿度
THP-1	1640+10％FBS+50μmol/Lβ-mercaptoethanol+1％P/S	37℃，5％CO₂，95％湿度
			U937	1640+10％FBS+1％P/S	37℃，5％CO₂，95％湿度
NB-4	1640+10％FBS+1％P/S	37℃，5％CO₂，95％湿度
			MG-63	DMEM+10％FBS+1％P/S	37℃，5％CO₂，95％湿度
Saos-2	McCoy’s 5a+10％FBS+1％P/S	37℃，5％CO₂，95％湿度
			RD	DMEM+10％FBS+1％P/S	37℃，5％CO₂，95％湿度
HT-1080	DMEM+10％FBS+1％P/S	37℃，5％CO₂，95％湿度
			CHO-K1	F12K+10％FBS+4μg/mL Puromycin+1％P/S	37℃，5％CO₂，95％湿度
H-MRC2-CHO-K1	F12K+10％FBS+4μg/mL Puromycin+1％P/S	37℃，5％CO₂，95％湿度

2、流式检测：

(1)将对数生长期的上表中各细胞消化收集，调整浓度至5×10⁵个/mL，每管200μL加入到1.5mL EP管，400rpm室温离心3min，去除培养基上清。每管中加入1mL含1％FBS的PBS重悬细胞，再次离心去除残余培养基和血清。

(2)将阳参抗体和human IgG1同型对照抗体(Anti-HEL Human IgG1-KappaIsotype control(百英生物，B117901))用4℃预冷的含1％FBS的PBS稀释至终浓度为5μg/mL，100μL/管加入各组细胞中，4℃，静置孵育30min。

(3)离心去除多余抗体，用4℃预冷的含1％FBS的PBS重悬细胞，离心洗涤3次。用4℃预冷的含1％FBS的PBS按照1:100稀释二抗Goat anti-Human IgG Fc antibody PE(abcam，ab98596)，100μL/管加入各组细胞中，4℃，避光静置孵育30min。

(4)离心去除多余抗体，用4℃预冷的含1％FBS的PBS重悬细胞，离心洗涤3次。在BDFACS CantoII流式细胞仪上检测几何平均数荧光强度，各细胞表明表达uPARAP的情况。

结果见图7。检测的10株细胞中，H-MRC2-CHO-K1表达uPARAP水平最高，其次Saos-2、THP-1、NB-4、U937、MG63、HT-1080和RD细胞也高表达uPARAP，HT-29和CHO-K1细胞uPARAP表达阴性。

测试例7、嵌合抗体ADC和阳参抗体偶联ADC对肿瘤细胞杀伤活性检测

1、将测试例6中验证的HT-29、MG63、Saos-2、NB-4、THP-1、U937、RD、HT-1080、H-MRC2-CHO-K1和CHO-K1细胞传代扩增培养。将对数生长期的细胞用胰蛋白酶消化收集，细胞计数仪计数后调整细胞浓度至3×10⁴个/mL。

2、将细胞在96孔细胞培养板上以3000个细胞/孔进行铺板，培养24h后，按3复孔加入抗体药物偶联物HSP340001-ADC～HSP3400023-ADC。ADC的起始终浓度为200nM，随后按3倍向下稀释9个剂量梯度。ADC药物和细胞37℃，5％CO₂恒温培养72h后，每孔加入CCK-8显色试剂，用酶标仪检测450nm波长处的吸光度值，计算细胞活率，并实用Graphpad Prism9.0对数据进行非线性拟合，计算各ADC药物对不同细胞杀伤的IC50。

图8显示当将每种抗体-药物缀合物添加至细胞时的浓度依赖性的细胞生长抑制活性。结果表明，各候选抗体和阳参抗体偶联的ADC均可特异性杀伤uPARAP表达阳性的细胞，对uPARAP高表达细胞具有较高生长抑制活性。其中，候选抗体ch01、ch08、ch09、ch10、ch14偶联ADC均表现出优于阳参抗体偶联ADC的细胞杀伤活性，预期具有更高的抗肿瘤活性。

综上，本申请实施例提供了一种特异性强、内吞活性更高、偶联细胞毒性药物具有更强杀伤活性的抗uPARAP抗体，还提供了所述抗体的制备方法和用途，本申请实施例的抗uPARAP抗体可以用于疾病诊断检测，或与细胞毒性药物偶联用于癌症治疗等。与现有技术相比，本申请实施例研发的抗uPARAP N端结构域CysR-FN-II-CTLD-I-CTLD-II的抗体或其抗原结合片段具有更高的内吞活性，并且可用作ADC偶联抗体。并且，本发明公开的抗体经由具有特定结构的接头与在细胞中发挥毒性的药物偶联的抗uPARAP抗体药物偶联物，表现出比现有抗uPARAP抗体药物偶联物更强的细胞杀伤活性和抗肿瘤活性。

本申请实施例涉及的序列包括：

uPARAP氨基酸序列Genbank:AAI53885.1SEQ ID NO.1)

MGPGRPAPAPWPRHLLRCVLLLGCLHLGRPGAPGDAALPEPNVFLIFSHGLQGCLEAQGGQVRVTPA

CNTSLPAQRWKWVSRNRLFNLGTMQCLGTGWPGTNTTASLGMYECDREALNLRWHCRTLGDQL

SLLLGARTSNISKPGTLERGDQTRSGQWRIYGSEEDLCALPYHEVYTIQGNSHGKPCTIPFKYDNQ

WFHGCTSTGREDGHLWCATTQDYGKDERWGFCPIKSNDCETFWDKDQLTDSCYQFNFQSTLSWR

EAWASCEQQGADLLSITEIHEQTYINGLLTGYSSTLWIGLNDLDTSGGWQWSDNSPLKYLNWESDQ

PDNPSEENCGVIRTESSGGWQNRDCSIALPYVCKKKPNATAEPTPPDRWANVKVECEPSWQPFQGH

CYRLQAEKRSWQESKKACLRGGGDLVSIHSMAELEFITKQIKQEVEELWIGLNDLKLQMNFEWSD

GSLVSFTHWHPFEPNNFRDSLEDCVTIWGPEGRWNDSPCNQSLPSICKKAGQLSQGAAEEDHGCRK

GWTWHSPSCYWLGEDQVTYSEARRLCTDHGSQLVTITNRFEQAFVSSLIYNWEGEYFWTALQDLNSTGS

FFWLSGDEVMYTHWNRDQPGYSRGGCVALATGSAMGLWEVKNCTSFRARYICRQSLGTPVTPELPGPDP

TPSLTGSCPQGWASDTKLRYCYKVFSSERLQDKKSWVQAQGACQELGAQLLSLASYEEEHFVANMLNKI

FGESEPEIHEQHWFWIGLNRRDPRGGQSWRWSDGVGFSYHNFDRSRHDDDDIRGCAVLDLASLQWVAM

QCDTQLDWICKIPRGTDVREPDDSPQGRREWLRFQEAEYKFFEHHSTWAQAQRICTWFQAELTSVHSQA

ELDFLSHNLQKFSRAQEQHWWIGLHTSESDGRFRWTDGSIINFISWAPGKPRPVGKDKKCVYMTASRED

WGDQRCLTALPYICKRSNVTKETQPPDLPTTALGGCPSDWIQFLNKCFQVQGQEPQSRVKWSEAQFSCEQ

QEAQLVTITNPLEQAFITASLPNVTFDLWIGLHASQRDFQWVEQEPLMYANWAPGEPSGPSPAPSGNKPTS

CAVVLHSPSAHFTGRWDDRSCTEETHGFICQKGTDPSLSPSPAALPPAPGTELSYLNGTFRLLQKPLRWHD

ALLLCESHNASLAYVPDPYTQAFLTQAARGLRTPLWIGLAGEEGSRRYSWVSEEPLNYVGWQDGEPQQP

GGCTYVDVDGAWRTTSCDTKLQGAVCGVSSGPPPPRRISYHGSCPQGLADSAWIPFREHCYSFHMELLLG

HKEARQRCQRAGGAVLSILDEMENVFVWEHLQSYEGQSRGAWLGMNFNPKGGTLVWQDNTAVNYSN

WGPPGLGPSMLSHNSCYWIQSNSGLWRPGACTNITMGVVCKLPRAEQSSFSPSALPENPAALVVVLMAVLLLLALLTAALILYRRRQSIERGAFEGARYSRSSSSPTEATEKNILVSDMEMNEQQE。

人uPARAP 31-522氨基酸序列Genbank:AAI53885.1((SEQ ID NO.2)：

GAPGDAALPEPNVFLIFSHGLQGCLEAQGGQVRVTPACNTSLPAQRWKWVSRNRLFNLGTMQCLGTGW

PGTNTTASLGMYECDREALNLRWHCRTLGDQLSLLLGARTSNISKPGTLERGDQTRSGQWRIYGSEEDLC

ALPYHEVYTIQGNSHGKPCTIPFKYDNQWFHGCTSTGREDGHLWCATTQDYGKDERWGFCPIKSNDCET

FWDKDQLTDSCYQFNFQSTLSWREAWASCEQQGADLLSITEIHEQTYINGLLTGYSSTLWIGLNDLDTSG

GWQWSDNSPLKYLNWESDQPDNPSEENCGVIRTESSGGWQNRDCSIALPYVCKKKPNATAEPTPPDRWA

NVKVECEPSWQPFQGHCYRLQAEKRSWQESKKACLRGGGDLVSIHSMAELEFITKQIKQEVEELWIGLN

DLKLQMNFEWSDGSLVSFTHWHPFEPNNFRDSLEDCVTIWGPEGRWNDSPCNQSLPSICKKAGQLSQGAAEEDHGCR。

人uPARAP 91-1566核苷酸序列(SEQ ID NO.3)：

GGGGCCCCCGGCGACGCCGCCCTGCCCGAGCCCAACGTGTTCCTGATCTTCAGCCACGGCCTCCAAG

GCTGTCTGGAGGCCCAAGGCGGGCAAGTGCGGGTGACCCCCGCTTGCAACACAAGCCTGCCCGCTC

AGAGATGGAAGTGGGTGAGCAGAAACAGACTGTTCAACCTGGGCACCATGCAGTGCCTGGGCACCG

GCTGGCCCGGCACCAACACCACCGCTAGCCTGGGCATGTACGAGTGCGACAGAGAGGCCCTGAACC

TGAGATGGCACTGCAGAACCCTGGGCGATCAGCTGAGCCTGCTCCTGGGCGCTAGAACAAGCAACAT

CAGCAAGCCCGGCACCCTGGAGAGAGGCGATCAGACAAGAAGCGGGCAGTGGAGAATCTATGGGAG

CGAGGAGGACCTGTGCGCTCTGCCCTACCATGAGGTGTACACCATCCAAGGCAACAGCCACGGCAAG

CCCTGCACCATCCCCTTCAAGTACGACAATCAGTGGTTCCACGGCTGCACAAGCACCGGCAGAGAGG

ACGGCCACCTGTGGTGCGCCACCACCCAAGACTACGGCAAGGACGAGAGATGGGGCTTCTGCCCCAT

CAAGAGCAACGACTGCGAGACCTTCTGGGACAAGGATCAGCTGACCGACAGCTGCTATCAGTTCAAC

TTTCAGAGCACCCTGAGCTGGCGGGAGGCTTGGGCTAGCTGCGAGCAGCAAGGCGCCGACCTGCTG

AGCATCACCGAGATCCACGAGCAGACCTACATCAACGGCCTGCTGACCGGCTACAGCAGCACCCTGT

GGATCGGGCTCAACGATCTGGACACAAGCGGCGGCTGGCAGTGGAGCGACAACAGCCCCCTGAAGT

ACCTGAACTGGGAGAGCGATCAGCCCGACAACCCTAGCGAGGAGAACTGCGGCGTGATCAGAACCG

AGAGCAGCGGCGGGTGGCAGAACAGAGACTGCAGCATCGCCCTGCCCTACGTGTGCAAGAAAAAGC

CCAACGCCACCGCCGAGCCCACCCCCCCCGACAGATGGGCCAACGTGAAGGTGGAGTGCGAGCCTA

GCTGGCAGCCCTTCCAAGGCCACTGCTACAGACTGCAAGCCGAGAAGAGAAGCTGGCAAGAGAGCA

AGAAGGCCTGCCTGAGAGGCGGGGGCGACCTGGTGAGCATCCACAGCATGGCCGAGCTGGAGTTCA

TCACCAAGCAGATCAAGCAAGAGGTGGAGGAGCTGTGGATTGGCCTGAACGACCTGAAGCTGCAGA

TGAACTTCGAGTGGTCCGACGGCAGCCTGGTGAGCTTCACCCACTGGCACCCCTTCGAGCCCAACAA

CTTCAGAGACAGCCTGGAGGACTGCGTGACCATCTGGGGCCCCGAGGGCAGATGGAACGACAGCCC

CTGCAATCAGAGCCTGCCTAGCATTTGTAAGAAGGCCGGGCAGCTGAGCCAAGGCGCCGCCGAGGAGGACCACGGCTGCAGA。

食蟹猴uPARAP 31-522氨基酸序列Genbank:XP_005584671.2(SEQ ID NO.4)：GAPGDAALPEPNVFLIFSHGLQGCLEAQGGQVRVTPACNTSLPAQRWKWVSRNRLFNLGTMQCLGTGWPGTNTTASLGMYECDREALNLRWHCRTLGDQLSLLLGARTSNISKPGTLERGDQTRSGQWRIYGSEEDLCALPYHEVYTIQGNSHGKPCTIPFKYDNQWFHGCTSTGREDGHLWCATTQDYGKDERWGFCPIKSNDCETFWDKDQLTDSCYQFNFQSTLSWREAWASCEQQGADLLSITEIHEQTYINGLLTGYSSTLWIGLNDLDTSGGWQWSDNSPLKYLNWESDQPDNPSEENCGVIRTESSGGWQNRDCSIALPYVCKKKPNATAEPTPPDRWANVKVECEPSWQPFQGHCYRLQAEKRSWQESKKACLRGGGDLVSIHSMAELEFITKQIKQEVEELWIGLNDLKLQMNFEWSDGSLVSFTHWHPFEPNNFRDSLEDCVTIWGPEGRWNDSPCNQSLPSICKKAGQLSQGAAEEDHGCR。

食蟹猴uPARAP 91-1566核苷酸序列(SEQ ID NO.5)-测序序列：

GGGGCCCCCGGCGACGCCGCCCTGCCCGAGCCCAACGTGTTCCTGATCTTCAGCCACGGCCTCCAAG

GCTGTCTGGAGGCCCAAGGCGGGCAAGTGCGGGTGACCCCCGCTTGCAACACAAGCCTGCCCGCTC

AGAGATGGAAGTGGGTGAGCAGAAACAGACTGTTCAACCTGGGCACCATGCAGTGCCTGGGCACCG

GCTGGCCCGGCACCAACACCACCGCTAGCCTGGGCATGTACGAGTGCGACAGAGAGGCCCTGAACC

TGAGATGGCACTGCAGAACCCTGGGCGATCAGCTGAGCCTGCTCCTGGGCGCTAGAACAAGCAACAT

CAGCAAGCCCGGCACCCTGGAGAGAGGCGATCAGACAAGAAGCGGGCAGTGGAGAATCTATGGGAG

CGAGGAGGACCTGTGCGCTCTGCCCTACCATGAGGTGTACACCATCCAAGGCAACAGCCACGGCAAG

CCCTGCACCATCCCCTTCAAGTACGACAATCAGTGGTTCCACGGCTGCACAAGCACCGGCAGAGAGG

ACGGCCACCTGTGGTGCGCCACCACCCAAGACTACGGCAAGGACGAGAGATGGGGCTTCTGCCCCAT

CAAGAGCAACGACTGCGAGACCTTCTGGGACAAGGATCAGCTGACCGACAGCTGCTATCAGTTCAAC

TTTCAGAGCACCCTGAGCTGGCGGGAGGCTTGGGCTAGCTGCGAGCAGCAAGGCGCCGACCTGCTG

AGCATCACCGAGATCCACGAGCAGACCTACATCAACGGCCTGCTGACCGGCTACAGCAGCACCCTGT

GGATCGGGCTCAACGATCTGGACACAAGCGGCGGCTGGCAGTGGAGCGACAACAGCCCCCTGAAGT

ACCTGAACTGGGAGAGCGATCAGCCCGACAACCCTAGCGAGGAGAACTGCGGCGTGATCAGAACCG

AGAGCAGCGGCGGGTGGCAGAACAGAGACTGCAGCATCGCCCTGCCCTACGTGTGCAAGAAAAAGC

CCAACGCCACCGCCGAGCCCACCCCCCCCGACAGATGGGCCAACGTGAAGGTGGAGTGCGAGCCTA

GCTGGCAGCCCTTCCAAGGCCACTGCTACAGACTGCAAGCCGAGAAGAGAAGCTGGCAAGAGAGCA

AGAAGGCCTGCCTGAGAGGCGGGGGCGACCTGGTGAGCATCCACAGCATGGCCGAGCTGGAGTTCA

TCACCAAGCAGATCAAGCAAGAGGTGGAGGAGCTGTGGATTGGCCTGAACGACCTGAAGCTGCAGA

TGAACTTCGAGTGGTCCGACGGCAGCCTGGTGAGCTTCACCCACTGGCACCCCTTCGAGCCCAACAA

CTTCAGAGACAGCCTGGAGGACTGCGTGACCATCTGGGGCCCCGAGGGCAGATGGAACGACAGCCC

小鼠uPARAP 31-521氨基酸序列Genbank:NP_0321652.3(SEQ ID NO.6)：

ADSAAALLEPDVFLIFSQGMQGCLEAQGVQVRVTPVCNASLPAQRWKWVSRNRLFNLGATQCLGTGWP

VTNTTVSLGMYECDREALSLRWQCRTLGDQLSLLLGARASNASKPGTLERGDQTRSGHWNIYGSEEDLC

ARPYYEVYTIQGNSHGKPCTIPFKYDNQWFHGCTSTGREDGHLWCATTQDYGKDERWGFCPIKSNDCET

FWDKDQLTDSCYQFNFQSTLSWREAWASCEQQGADLLSITEIHEQTYINGLLTGYSSTLWIGLNDLDTSG

GWQWSDNSPLKYLNWESDQPDNPGEENCGVIRTESSGGWQNHDCSIALPYVCKKKPNATVEPIQPDRWT

NVKVECDPSWQPFQGHCYRLQAEKRSWQESKRACLRGGGDLLSIHSMAELEFITKQIKQEVEELWIGLN

DLKLQMNFEWSDGSLVSFTHWHPFEPNNFRDSLEDCVTIWGPEGRWNDSPCNQSLPSICKKAGRLSQGAAEEDHGCR。

小鼠uPARAP 91-1563核苷酸序列(SEQ ID NO.7)：

GCCGACAGCGCTGCCGCCCTGCTGGAGCCCGACGTGTTCCTGATCTTCAGCCAAGGCATGCAAGGCT

GCCTGGAGGCCCAAGGCGTGCAAGTGAGAGTGACCCCCGTGTGCAACGCTAGCCTGCCCGCTCAGA

GATGGAAGTGGGTGAGCAGAAACAGACTGTTCAACCTGGGCGCCACACAGTGCCTGGGCACCGGCT

GGCCCGTGACCAACACCACCGTGAGCCTGGGCATGTACGAGTGCGACAGAGAGGCCCTGAGCCTGA

GATGGCAGTGCAGAACCCTGGGCGATCAGCTGAGCCTGCTCCTGGGCGCTAGAGCTAGCAACGCTAG

CAAGCCCGGCACCCTGGAGAGAGGCGATCAAACAAGAAGCGGCCACTGGAACATCTACGGCAGCGA

GGAGGACCTGTGCGCTAGACCCTACTACGAGGTGTACACCATCCAAGGCAACAGCCACGGCAAGCCC

TGCACCATCCCCTTCAAGTACGACAATCAGTGGTTCCACGGCTGCACAAGCACCGGCAGAGAGGACG

GCCACCTGTGGTGCGCCACCACCCAAGACTACGGCAAGGACGAGAGATGGGGCTTCTGCCCCATCAA

GAGCAACGACTGCGAGACCTTCTGGGACAAGGATCAGCTGACCGACAGCTGCTATCAGTTCAATTTT

CAGTCCACCCTGAGCTGGCGGGAGGCCTGGGCTAGCTGCGAGCAGCAAGGCGCCGATCTGCTGTCCA

TCACCGAGATCCACGAGCAGACCTACATCAACGGCCTGCTGACCGGCTACAGCAGCACCCTGTGGAT

CGGCCTGAACGACCTGGACACAAGCGGCGGCTGGCAGTGGTCCGACAACAGCCCCCTGAAGTACCT

GAACTGGGAGAGCGATCAGCCCGACAACCCCGGCGAGGAGAACTGCGGCGTGATCAGAACCGAGA

GCTCCGGGGGCTGGCAGAATCACGACTGCAGCATCGCCCTGCCCTACGTGTGCAAGAAAAAGCCCAA

CGCCACCGTGGAGCCCATTCAGCCCGACAGATGGACCAACGTGAAGGTGGAGTGCGACCCTAGCTG

GCAGCCCTTCCAAGGCCACTGCTACAGACTGCAAGCCGAGAAGAGAAGCTGGCAAGAGAGCAAGA

GAGCCTGCCTGAGAGGCGGGGGCGACCTGCTGTCCATCCACAGCATGGCCGAGCTGGAGTTCATCAC

CAAGCAGATCAAGCAAGAGGTGGAGGAGCTGTGGATTGGCCTGAACGACCTCAAACTGCAGATGAA

CTTCGAGTGGAGCGATGGCAGCCTGGTGAGCTTCACCCACTGGCACCCCTTCGAGCCCAACAACTTC

AGAGACAGCCTGGAGGACTGCGTGACCATCTGGGGCCCCGAGGGCAGATGGAACGACAGCCCCTGC

AATCAGAGCCTGCCTAGCATCTGCAAGAAGGCCGGCAGACTGAGCCAAGGCGCCGCCGAGGAGGACCACGGCTGCAGA。

mAb MM01鼠源重链可变区氨基酸序列(SEQ ID NO.8，120aa)：

QVQLQQSGAELVKPGASVKLSCKASGYTFTSFDINWVRQRPEQGLEWIGWIFPGNTHFKYNEKFKGKATLTTDTSSSTAYMHLSRLTSEDSAVYFCATLYDGYYAGFTYWGQGTLVTVSA。

mAb MM01鼠源重链可变区核苷酸序列(SEQ ID NO.9，360bp)：

CAGGTTCAGCTGCAGCAGTCTGGAGCTGAACTGGTAAAGCCTGGGGCTTCAGTGAAGTTGTCCTGCA

AGGCTTCTGGCTACACCTTCACAAGCTTTGATATAAACTGGGTGAGGCAGAGGCCTGAACAGGGACT

TGAGTGGATTGGATGGATTTTTCCTGGAAATACTCATTTTAAGTACAATGAGAAGTTCAAGGGCAAGG

CCACACTGACTACAGACACATCCTCCAGCACAGCCTACATGCACCTCAGCAGGCTGACATCTGAGGA

CTCTGCTGTCTATTTCTGTGCAACCCTCTATGATGGTTACTACGCCGGGTTTACTTATTGGGGCCAAGGGACTCTGGTCACTGTCTCTGCA。

mAb MM01鼠源轻链可变区氨基酸序列(SEQ ID NO.10，107aa)：

DIQMNQSPSSLSASLGDTITITCHASQNINVWLNWYQQKPGNIPKLLIYKASTLHTGVPSRFSGSGSGTGFTLTISSLQPEDIATYYCQQGQSYPWTFGGGTKLEIK。

mAb MM01鼠源轻链可变区核苷酸序列(SEQ ID NO.11，321bp)：

GACATCCAGATGAACCAGTCTCCATCCAGTCTGTCTGCATCCCTTGGAGACACAATTACCATCACTTG

CCATGCCAGTCAGAACATTAATGTTTGGTTAAACTGGTACCAGCAGAAACCAGGAAATATTCCTAAAC

TATTGATCTATAAGGCTTCCACCTTGCACACAGGCGTCCCATCAAGGTTTAGTGGCAGTGGATCTGGA

ACAGGTTTCACATTAACCATCAGCAGTCTGCAGCCTGAAGACATTGCCACTTACTACTGTCAACAGGGTCAAAGTTATCCGTGGACGTTCGGTGGAGGCACCAAGCTGGAAATCAAA。

mAb MM02鼠源重链可变区氨基酸序列(SEQ ID NO.12，118aa)：

QVQLQQSGVEVVRPGTSVKVSCKASGYAFTNYLIEWVKQRPGQGLEWIGVINPGTSGTHYNEKFKGKATLTADKSSSTAYMHLNSLTSDDSAVYFCARGYRDHSMDYWGQGTSVSVSS。

mAb MM02鼠源重链可变区核苷酸序列(SEQ ID NO.13，354bp)：

CAGGTCCAGTTGCAGCAGTCTGGAGTTGAGGTGGTAAGGCCTGGGACTTCAGTGAAGGTGTCCTGCA

AGGCTTCTGGATACGCCTTCACTAATTACTTAATAGAGTGGGTGAAACAGAGGCCTGGACAGGGCCTT

GAGTGGATTGGGGTGATTAATCCTGGAACTAGTGGTACTCACTACAATGAGAAGTTCAAGGGCAAGG

CAACACTGACTGCAGACAAATCCTCCAGCACTGCCTACATGCACCTCAACAGCCTGACATCTGATGAC

TCTGCGGTCTATTTCTGTGCAAGAGGATATAGGGACCATTCTATGGACTACTGGGGTCAAGGAACCTCAGTCTCCGTCTCCTCA。

mAb MM02鼠源轻链可变区氨基酸序列(SEQ ID NO.14，107aa)：

DIQMTQSPASLSASVGEAVTITCRTSENVYTYLAWFQQKQGKSPHLLVFNAKTLAEGVPSRFSGSGSGTQFSLRINSLQPEDFGNYYCQHHYDTPPTFGGGTKLEIR。

mAb MM02鼠源轻链可变区核苷酸序列(SEQ ID NO.15，321bp)：

GACATCCAGATGACTCAGTCTCCAGCCTCCCTATCTGCATCTGTGGGAGAAGCTGTCACCATCACATG

TCGAACAAGTGAAAATGTTTACACTTATTTAGCATGGTTTCAGCAGAAACAGGGAAAATCTCCTCACC

TCCTGGTCTTTAATGCAAAAACCTTAGCAGAAGGTGTGCCATCAAGGTTCAGTGGCAGTGGATCAGG

CACACAGTTTTCTCTGAGGATCAACAGCCTGCAGCCTGAAGATTTTGGGAATTATTACTGTCAACATCATTATGATACTCCTCCGACGTTCGGTGGAGGCACCAAGCTGGAAATCAGA。

mAb MM03鼠源重链可变区氨基酸序列(SEQ ID NO.16，113aa)：

QVQLKESGPGLVAPSQTLSITCTVSGFSLTSYGVSWVRQPPGKGLEWLGVIWGDGSTNYHSGFISRLSIRKDNSKSQVFLKLNSLQTDDTASYYCARGYFDVWGAGTTVTVIS。

mAb MM03鼠源重链可变区核苷酸序列(SEQ ID NO.17，339bp)：

CAGGTGCAGCTGAAGGAGTCAGGCCCTGGCCTGGTGGCGCCCTCACAGACCCTGTCCATCACATGCA

CTGTCTCAGGGTTCTCATTAACCAGCTATGGTGTAAGCTGGGTTCGCCAGCCTCCAGGAAAGGGTCTG

GAGTGGCTGGGAGTAATATGGGGTGACGGGAGCACAAATTATCATTCAGGTTTCATATCCAGACTGAG

CATCAGGAAGGATAACTCCAAGAGCCAAGTTTTCTTAAAACTGAACAGTCTGCAAACTGATGACACA

GCCTCGTACTACTGTGCCAGAGGGTACTTCGATGTCTGGGGCGCAGGGACCACGGTCACCGTCATTTCA。

mAb MM03鼠源轻链可变区氨基酸序列(SEQ ID NO.18，107aa)：

DIQMTQSPSSLSASLGERVSLTCRASQDIGSRLNWLQQEPDGTIKRLIYATSSLDSGVPKRFSGSRSGSDYSLTISSLESEDFVDYYCLQYASSPYTFGGGTKVEIK。

mAb MM03鼠源轻链可变区核苷酸序列(SEQ ID NO.19，321bp)：

GACATCCAGATGACCCAGTCTCCATCCTCCTTATCTGCCTCTCTGGGAGAAAGAGTCAGTCTCACTTG

TCGGGCAAGTCAGGACATTGGTAGTAGATTAAACTGGCTTCAGCAGGAACCAGATGGAACTATTAAA

CGCCTGATCTACGCCACATCCAGTTTAGATTCTGGTGTCCCCAAAAGGTTCAGTGGCAGTAGGTCTGG

GTCAGATTATTCTCTCACCATCAGCAGCCTTGAGTCTGAAGATTTTGTAGACTATTACTGTCTACAATATGCTAGTTCTCCGTACACGTTCGGAGGGGGGACCAAGGTGGAAATAAAA。

mAb MM04鼠源重链可变区氨基酸序列(SEQ ID NO.20，112aa)：

EFQLQQSGAELVKPGASVKLSCTASGFNIKDTYIHWVKQRPEQGLEWIGRIDPANGDTKYDPKFQDKATITADSSSNTAYLQLSSLTSEDTAVYYCFRLGLWGQGTLVTVSA。

mAb MM04鼠源重链可变区核苷酸序列(SEQ ID NO.21，336bp)：

GAATTTCAGCTGCAGCAGTCTGGGGCAGAACTTGTGAAGCCAGGGGCCTCAGTCAAATTGTCCTGCA

CAGCTTCTGGCTTCAACATTAAAGACACCTATATACACTGGGTGAAACAGAGGCCTGAACAGGGCCT

GGAGTGGATTGGAAGGATTGATCCTGCGAATGGTGATACTAAATATGACCCGAAGTTCCAGGACAAGG

CCACTATAACAGCAGACTCATCCTCCAACACAGCCTACCTGCAGCTCAGCAGCCTGACATCTGAGGACACTGCCGTCTACTACTGTTTTAGGCTGGGACTCTGGGGCCAAGGGACTCTGGTCACTGTCTCTGCA。mAb MM04鼠源轻链可变区氨基酸序列(SEQ ID NO.22，107aa)：

DIQMTQSPASLSASVGETVTITCRASGNIHNYLAWYQQKQGKSPQLLVYNAKTLADGVPSRFSGSGSEAQYSLKINSLQPEDFGSYYCQHFWSIPWTFGGGTKLEIK。

mAb MM04鼠源轻链可变区核苷酸序列(SEQ ID NO.23，321bp)：

GACATCCAGATGACTCAGTCTCCAGCCTCCCTATCTGCATCTGTGGGAGAAACTGTCACCATCACATG

TCGAGCAAGTGGGAATATTCACAATTATTTAGCATGGTATCAGCAGAAACAGGGAAAATCTCCTCAGC

TCCTGGTCTATAATGCAAAAACCTTGGCAGATGGTGTGCCATCAAGGTTCAGTGGCAGTGGATCAGAA

GCACAATATTCTCTCAAGATCAACAGCCTGCAGCCTGAAGATTTTGGGAGTTATTACTGTCAGCATTTTTGGAGTATTCCGTGGACGTTCGGTGGAGGCACCAAGCTGGAAATCAAA。

mAb MM05鼠源重链可变区氨基酸序列(SEQ ID NO.24，120aa)：

QVQLQQSGAELVKPGASVKLSCKASGYTFTNFDINWVRQRPEQGLEWIGWIFPGSTNIQYNEKFKGKATLTTDTSSSTAYMYLSRLTSEDSAVYFCATIYDGYYAGFPYWGQGTLVTVSA。

mAb MM05鼠源重链可变区核苷酸序列(SEQ ID NO.25，360bp)：

CAGGTTCAGCTGCAGCAGTCTGGAGCTGAACTGGTGAAGCCTGGGGCTTCAGTGAAGTTGTCCTGCA

AGGCTTCTGGCTACACCTTCACAAACTTTGATATAAACTGGGTGAGGCAGAGGCCTGAACAGGGACT

TGAGTGGATTGGATGGATTTTTCCTGGAAGTACTAATATTCAGTATAATGAGAAGTTCAAGGGCAAGG

CCACACTGACTACAGACACATCCTCCAGCACAGCCTACATGTACCTCAGCAGGCTGACATCTGAGGA

CTCTGCTGTCTATTTCTGTGCAACCATCTATGATGGTTATTATGCCGGGTTTCCTTATTGGGGCCAAGGGACTCTGGTCACTGTCTCTGCA。

mAb MM05鼠源轻链可变区氨基酸序列(SEQ ID NO.26，107aa)：

HIQMSQSPSSLSASLGDTITITCHASQNINVWLNWYQQKPGNIPKLLIYKASNLHTGVPSRFSGSGSGTAFTLTISSLQPEDIATYYCQQGQSYPWTFGGGTKLEIK。

mAb MM05鼠源轻链可变区核苷酸序列(SEQ ID NO.27，321bp)：

CACATCCAGATGAGCCAGTCTCCATCCAGTCTGTCTGCATCCCTTGGAGACACAATTACCATCACTTGC

CATGCCAGTCAGAATATTAATGTTTGGTTAAACTGGTACCAGCAGAAACCAGGAAATATTCCTAAACTA

TTGATCTATAAGGCTTCCAATTTGCACACAGGCGTCCCATCAAGGTTTAGTGGCAGTGGATCTGGAAC

AGCTTTCACATTAACCATCAGCAGCCTGCAGCCTGAAGACATTGCCACTTACTACTGTCAACAGGGTCAAAGTTATCCGTGGACGTTCGGTGGAGGCACCAAGCTGGAAATCAAA。

mAb MM06鼠源重链可变区氨基酸序列(SEQ ID NO.28，118aa)：

QVQLQQSGAELVRPGTSVKVSCKASGYAFTNYLIDWVKQRPGQGLEWIGVIHPGSYGTNYNEKFKGKATLTADKSSSTAYMQVSSLTSDDSAVYFCARGYRDHVVDYWGQGTSVTVSS。

mAb MM06鼠源重链可变区核苷酸序列(SEQ ID NO.29，354bp)：

CAGGTCCAGTTGCAGCAGTCTGGAGCTGAGCTGGTAAGGCCTGGGACTTCAGTGAAGGTGTCCTGCA

AGGCTTCTGGATACGCCTTCACTAATTACTTGATCGACTGGGTAAAACAGAGGCCTGGACAGGGCCTT

GAGTGGATTGGGGTGATTCATCCTGGAAGTTATGGGACTAACTACAATGAGAAGTTCAAGGGCAAGG

CAACACTGACTGCAGACAAATCCTCCAGTACTGCCTACATGCAGGTCAGCAGCCTGACATCTGATGAC

TCTGCGGTCTACTTCTGTGCAAGAGGATATAGGGACCATGTTGTGGACTACTGGGGTCAAGGAACCTCAGTCACCGTCTCCTCA。

mAb MM06鼠源轻链可变区氨基酸序列(SEQ ID NO.30，107aa)：

DIQMTQSPASLSASVGETVTITCRASENIYSYLAWYQQKQGKSPQLLVYNAKTLAEGVPSRFSGSGSGTQFSLKINSLQPEDFGSYYCQHHYDTPPTFGGGTRLEIK。

mAb MM06鼠源轻链可变区核苷酸序列(SEQ ID NO.31，321bp)：

GACATCCAGATGACTCAGTCTCCAGCCTCCCTATCTGCATCTGTGGGAGAAACTGTCACCATCACATG

TCGAGCAAGTGAGAATATTTACAGTTATTTAGCATGGTATCAGCAGAAACAGGGAAAATCTCCTCAGC

TCCTGGTCTATAATGCAAAAACCTTAGCAGAAGGTGTGCCATCAAGGTTCAGTGGCAGTGGATCAGGC

ACACAGTTTTCTCTGAAGATCAACAGCCTGCAGCCTGAAGATTTTGGGAGTTATTACTGTCAACATCATTATGATACTCCTCCGACGTTCGGTGGAGGCACCAGGCTGGAAATCAAA。

mAb MM07鼠源重链可变区氨基酸序列(SEQ ID NO.32，120aa)：

QVQLQQSGAELVKPGTSVKLSCKASGYTFTNYDINWLRQRPEQGLEWIGWIFPGSTNIKYNEKFKGKATLTTDTSSTTAYMHLSRLTSEDSAVYFCATLYDGYFAGFVYWGQGTLVTVSA。

mAb MM07鼠源重链可变区核苷酸序列(SEQ ID NO.33，360bp)：

CAGGTTCAGCTGCAGCAGTCTGGAGCTGAACTGGTAAAGCCTGGGACTTCAGTGAAATTGTCCTGCA

AGGCTTCTGGCTACACCTTCACAAACTATGATATAAATTGGTTGAGGCAGAGGCCTGAACAGGGACTT

GAGTGGATTGGATGGATTTTTCCTGGAAGTACTAATATTAAGTACAATGAGAAGTTCAAGGGCAAGGC

CACACTGACTACAGACACATCCTCCACCACAGCCTACATGCACCTCAGCAGGCTGACATCTGAGGAC

TCTGCTGTCTATTTCTGTGCAACCCTCTATGATGGTTACTTCGCCGGGTTTGTTTATTGGGGCCAAGGGACTCTGGTCACTGTCTCTGCA。

mAb MM07鼠源轻链可变区氨基酸序列(SEQ ID NO.34，107aa)：

DIQMNQSPSSLSASLGDTITITCHASQNINVWLNWYQQRPGNFPKLLIYRASYLHTGVPSRFSGSVSGTGFTLTISSLQPEDIATYYCQQGQSYPWTFGGGTKLEIK。

mAb MM07鼠源轻链可变区核苷酸序列(SEQ ID NO.35，321bp)：

GACATCCAGATGAACCAGTCTCCATCCAGTCTGTCTGCATCCCTTGGAGACACAATTACCATCACTTG

CCATGCCAGTCAGAACATTAATGTTTGGTTAAACTGGTACCAGCAGAGACCAGGAAATTTTCCTAAAC

TATTGATCTATAGGGCTTCCTACTTGCACACAGGCGTCCCATCAAGGTTTAGTGGCAGTGTATCTGGAA

CAGGTTTCACATTAACCATCAGCAGCCTGCAGCCTGAAGACATTGCCACTTACTACTGTCAACAGGGTCAAAGTTATCCGTGGACGTTCGGTGGAGGCACCAAGCTGGAAATCAAA。

mAb MM08鼠源重链可变区氨基酸序列(SEQ ID NO.36，118aa)：

QVQLQQSGAELVRPGTSVKVSCKASGYAFTNYLIEWIKQRPGQGLEWIGVINPGTIGTNYNDKFKGKATLTADKTSSTAYMQLSSLTSDDSAVYFCARGYRDNSMDYWGQGTSVTVSS。

mAb MM08鼠源重链可变区核苷酸序列(SEQ ID NO.37，354bp)：

CAGGTCCAGTTGCAGCAGTCTGGAGCTGAGCTGGTAAGGCCTGGGACTTCAGTGAAGGTGTCCTGCA

AGGCTTCTGGATACGCCTTCACTAATTACTTAATAGAGTGGATAAAGCAGAGGCCTGGACAGGGCCTT

GAGTGGATTGGGGTGATTAATCCTGGAACTATTGGTACTAACTACAATGACAAGTTCAAGGGCAAGGC

AACACTGACTGCAGACAAAACCTCCAGCACTGCCTATATGCAGCTCAGCAGCCTGACATCTGATGACT

CTGCGGTCTATTTCTGTGCAAGAGGATATAGGGACAATTCTATGGACTACTGGGGTCAAGGAACCTCAGTCACCGTCTCCTCA。

mAb MM08鼠源轻链可变区氨基酸序列(SEQ ID NO.38，107aa)：

DIQMTQSPASLSASVGETVTITCRTSENIYSYLAWYQQKQGKSPQLLVYNAKTLAEGVPSRFSGSGSGTQFSLKINSLQPEDFGSYYCQHHYETPPTFGGGTKLEIK。

mAb MM08鼠源轻链可变区核苷酸序列(SEQ ID NO.39，321bp)：

GACATCCAGATGACTCAGTCTCCAGCCTCCCTATCTGCATCTGTGGGAGAAACTGTCACCATCACATG

TCGAACAAGTGAGAATATTTACAGTTATTTAGCATGGTATCAGCAGAAACAGGGAAAATCTCCTCAGC

TCCTGGTCTATAATGCAAAAACCTTAGCAGAAGGTGTGCCATCAAGGTTCAGTGGCAGTGGATCAGGC

ACACAGTTTTCTCTGAAGATCAACAGCCTGCAGCCTGAAGATTTTGGGAGTTATTACTGTCAACATCATTATGAAACTCCTCCGACGTTCGGTGGAGGCACCAAGCTGGAAATCAAA。

mAb MM09鼠源重链可变区氨基酸序列(SEQ ID NO.40，118aa)：

QVQLQQSGAELVRPGTSVKVSCKASGYAFTNYLIEWVKQRPGQGLEWIGVINPGTSGTHYNEKFKGKATLTADKSSTTAYMHLNSLTSDDSAVYFCARGYRDHSMDYWGQGTSVSVSS。

mAb MM09鼠源重链可变区核苷酸序列(SEQ ID NO.41，354bp)：

CAGGTCCAGTTGCAGCAGTCTGGAGCTGAGCTGGTAAGGCCTGGGACTTCAGTGAAGGTGTCCTGCA

AGGCTTCTGGATACGCCTTCACTAATTACTTAATAGAGTGGGTGAAACAGAGGCCTGGACAGGGCCTT

GAGTGGATTGGGGTGATTAATCCTGGAACTAGTGGTACTCACTACAATGAGAAGTTCAAGGGCAAGG

CAACACTGACTGCAGACAAATCCTCCACCACTGCCTACATGCACCTCAACAGCCTGACATCTGATGAC

mAb MM09鼠源轻链可变区氨基酸序列(SEQ ID NO.42，107aa)：

DIQMTQSPASLSASVGETVTITCRTSENIYTYLAWFQQKQGKSPQLLVYNAKTLAVGVPSRFSGSGSGTQFSLRINSLQPEDFGSYYCQHHYDTPPTFGGGTKLEIR。

mAb MM09鼠源轻链可变区核苷酸序列(SEQ ID NO.43，321bp)：

GACATCCAGATGACTCAGTCTCCAGCCTCCCTATCTGCATCTGTGGGAGAAACTGTCACCATCACATG

TCGAACAAGTGAGAATATTTACACTTATTTAGCATGGTTTCAGCAGAAACAGGGAAAATCTCCTCAGC

TCCTGGTCTATAATGCAAAAACCTTAGCGGTAGGTGTGCCATCAAGGTTCAGTGGCAGTGGATCAGGC

ACACAGTTTTCTCTGAGGATCAACAGCCTGCAGCCTGAAGATTTTGGGAGTTATTACTGTCAACATCATTATGATACTCCTCCGACGTTCGGTGGAGGCACCAAGCTGGAAATCAGA。

mAb MM10鼠源重链可变区氨基酸序列(SEQ ID NO.44，118aa)：

QVQLQQSGAELVRPGTSVKVSCKASGYAFTNYLIEWIKQRPGQGLEWIGVINPGTSGTNYNDKFKGKATLTADKSSSTAYMQLSSLTSDDSAVYFCARGYRDYSMDYWGQGTSVTVSS。

mAb MM10鼠源重链可变区核苷酸序列(SEQ ID NO.45，354bp)：

CAGGTCCAGTTGCAGCAGTCTGGAGCTGAGCTGGTAAGGCCTGGGACTTCAGTGAAGGTGTCCTGCA

AGGCTTCTGGATACGCCTTCACTAATTACTTAATAGAGTGGATAAAGCAGAGGCCTGGACAGGGCCTT

GAGTGGATTGGGGTGATTAATCCTGGAACTAGTGGTACTAACTACAATGACAAGTTCAAGGGCAAGG

CAACACTGACTGCAGACAAATCCTCCAGCACTGCCTACATGCAGCTCAGCAGCCTGACATCTGATGAT

TCTGCGGTCTATTTCTGTGCAAGAGGATATAGGGACTATTCTATGGACTACTGGGGTCAAGGAACCTCAGTCACCGTCTCCTCA。

mAb MM10鼠源轻链可变区氨基酸序列(SEQ ID NO.46，107aa)：

DTQMTQSPASLSASVGETVTITCRTSENIYSYLAWYQQKQGRSPQLLVYNAKTLAEGVPSRFSGSGSGTQFSLKINSLQSEDFGSYYCQHHYDTPPTFGGGTKLEIK。

mAb MM10鼠源轻链可变区核苷酸序列(SEQ ID NO.47，321bp)：

GACACCCAGATGACTCAGTCTCCAGCCTCCCTATCTGCATCTGTGGGAGAAACTGTCACCATCACATG

TCGAACAAGTGAGAATATTTACAGTTATTTAGCATGGTATCAGCAGAAACAGGGGAGATCTCCTCAGC

TCCTGGTCTATAATGCAAAAACCTTAGCAGAAGGTGTGCCATCAAGGTTCAGTGGCAGTGGATCAGGC

ACACAGTTTTCTCTGAAGATCAACAGCCTACAGTCTGAAGATTTTGGGAGTTATTACTGTCAACATCATTATGATACTCCTCCGACGTTCGGTGGAGGCACCAAGCTGGAAATCAAA。

mAb MM11鼠源重链可变区氨基酸序列(SEQ ID NO.48，122aa)：

DVQLVESGGGLVQPGGSRKLSCAASGFTFSSFGMYWVRQAPEKGLEWVAYISLGSSTIYYADTVKGRFTISRDNPKNTLFLHMTSLRSEDTAMYYCAREVYYDNPYYAMDNWGQGTPVTVSS。

mAb MM11鼠源重链可变区核苷酸序列(SEQ ID NO.49，366bp)：

GATGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTTAGTGCAGCCTGGAGGGTCCCGGAAACTCTCCTGTG

CAGCCTCTGGATTCACTTTCAGTAGCTTTGGAATGTACTGGGTTCGTCAGGCTCCAGAGAAGGGGCTG

GAGTGGGTCGCATACATTAGTCTTGGCAGTAGTACCATCTACTATGCAGACACAGTGAAGGGCCGATT

CACCATCTCCAGAGACAATCCCAAGAACACCCTGTTCCTGCATATGACCAGTCTGAGGTCTGAGGAC

ACGGCCATGTATTACTGTGCAAGAGAGGTCTACTATGATAACCCCTACTATGCTATGGATAACTGGGGTCAAGGAACCCCAGTCACCGTCTCCTCA。

mAb MM11鼠源轻链可变区氨基酸序列(SEQ ID NO.50，107aa)：

DIQMTQSPASLSVSVGETVTITCRASENIYRNLAWYQQKQGASPQLLVYAATNLPDGVPSRFSGSGSGTQYSLTINSLQSEDFGSYYCQHFWGPPYTFGGGTKLEIR。

mAb MM11鼠源轻链可变区核苷酸序列(SEQ ID NO.51，321bp)：

GACATCCAGATGACTCAGTCTCCAGCCTCCCTATCTGTATCTGTGGGAGAAACTGTCACCATCACATGT

CGAGCAAGTGAAAATATTTACAGGAATTTAGCATGGTATCAGCAGAAACAGGGTGCATCTCCTCAGCT

CCTGGTCTATGCTGCAACAAACTTACCAGATGGTGTGCCATCAAGGTTCAGTGGCAGTGGATCGGGCA

CACAGTATTCCCTCACGATCAACAGCCTGCAGTCTGAAGATTTTGGGAGTTATTACTGTCAACATTTTTGGGGTCCTCCGTACACGTTCGGAGGGGGGACCAAGCTGGAAATAAGA。

mAb MM12鼠源重链可变区氨基酸序列(SEQ ID NO.52，113aa)：

mAb MM12鼠源重链可变区核苷酸序列(SEQ ID NO.53，339bp)：

CAGGTGCAGCTGAAGGAGTCAGGCCCTGGCCTGGTGGCGCCCTCACAGACCCTGTCCATCACATGCA

CTGTCTCAGGGTTCTCATTAACCAGCTATGGTGTAAGCTGGGTTCGCCAGCCTCCAGGAAAGGGTCTG

GAGTGGCTGGGAGTAATATGGGGTGACGGGAGCACAAATTATCATTCAGGTTTCATATCCAGACTGAG

CATCAGGAAGGATAACTCCAAGAGCCAAGTTTTCTTAAAACTGAACAGTCTGCAAACTGATGACACA

GCCTCGTACTACTGTGCCAGAGGGTACTTCGATGTCTGGGGCGCAGGGACCACGGTCACCGTCATTTCA。

mAb MM12鼠源轻链可变区氨基酸序列(SEQ ID NO.54，107aa)：

mAb MM12鼠源轻链可变区核苷酸序列(SEQ ID NO.55，321bp)：

GACATCCAGATGACCCAGTCTCCATCCTCCTTATCTGCCTCTCTGGGAGAAAGAGTCAGTCTCACTTG

TCGGGCAAGTCAGGACATTGGTAGTAGATTAAACTGGCTTCAGCAGGAACCAGATGGAACTATTAAA

CGCCTGATCTACGCCACATCCAGTTTAGATTCTGGTGTCCCCAAAAGGTTCAGTGGCAGTAGGTCTGG

mAb MM13鼠源重链可变区氨基酸序列(SEQ ID NO.56，113aa)：

QVQLKESGPGLVAPSQSLSITCTVSGISLISYGVNWVRQPPGKGLEWLGVIWGDGSTNYHSGLISRLSISKDNSKSQVFLKLNSLQTDDTATYYCARGYLDVWGAGTTVTVSS。

mAb MM13鼠源重链可变区核苷酸序列(SEQ ID NO.57，339bp)：

CAGGTGCAGCTGAAGGAGTCAGGACCTGGCCTGGTGGCGCCCTCACAGAGCCTGTCCATCACATGCA

CTGTCTCAGGGATCTCATTAATCAGCTATGGTGTAAACTGGGTACGCCAGCCTCCAGGAAAGGGTCTG

GAGTGGCTGGGAGTAATCTGGGGTGACGGGAGCACAAATTATCATTCAGGTCTCATATCCAGACTGAG

CATCAGCAAGGATAACTCCAAGAGCCAAGTTTTCTTAAAACTGAACAGTCTGCAAACTGATGACACA

GCCACGTACTACTGTGCCAGAGGGTACCTCGATGTCTGGGGCGCAGGGACCACGGTCACCGTCTCCTCA。

mAb MM13鼠源轻链可变区氨基酸序列(SEQ ID NO.58，107aa)：

DIQMTQSPSSLSASLGERVSLTCRASQDIGSNLNWLQQEPDGTIKRLIYATSSLDSGVPKRFSGSRSGSDYSLTISSLESEDFVDYYCLQYASSPYTFGGGTKLEIK。

mAb MM13鼠源轻链可变区核苷酸序列(SEQ ID NO.59，321bp)：

GACATCCAGATGACCCAGTCTCCATCCTCCTTATCTGCCTCTCTGGGAGAAAGAGTCAGTCTCACTTG

TCGGGCAAGTCAGGACATTGGTAGTAACTTAAACTGGCTTCAGCAGGAACCAGATGGAACTATTAAA

CGCCTGATCTACGCCACATCCAGTTTAGATTCTGGTGTCCCCAAAAGGTTCAGTGGCAGTAGGTCTGG

GTCAGATTATTCTCTCACCATCAGCAGCCTTGAGTCTGAAGATTTTGTAGACTATTACTGTCTACAATATGCTAGTTCTCCGTACACGTTCGGAGGGGGGACCAAGCTGGAAATAAAA。

mAb MM14鼠源重链可变区氨基酸序列(SEQ ID NO.60，118aa)：

QVQLQQSGAELVRPGTSVKVSCKASGYAFTHYLIEWVKQRPGQGLEWIGVINPGTSGSNYNEKFKGKATLTADKSSSTAYMQLSSLTSDDSAVYFCARGYRDHSMDYWGQGTSVTVSS。

mAb MM14鼠源重链可变区核苷酸序列(SEQ ID NO.61，354bp)：

CAGGTCCAGTTGCAGCAGTCTGGAGCTGAGCTGGTAAGGCCTGGGACTTCAGTGAAGGTGTCCTGCA

AGGCTTCTGGATACGCCTTCACTCATTACTTAATAGAGTGGGTAAAGCAGAGGCCTGGACAGGGCCTT

GAGTGGATTGGGGTGATTAATCCTGGAACTAGTGGTTCTAACTACAATGAGAAGTTCAAGGGCAAGG

CAACACTGACTGCAGACAAATCCTCCAGCACTGCCTACATGCAGCTCAGCAGCCTGACATCTGATGA

CTCTGCGGTCTATTTCTGTGCAAGAGGATATAGGGACCATTCTATGGACTACTGGGGTCAAGGAACCTCAGTCACCGTCTCCTCA。

mAb MM14鼠源轻链可变区氨基酸序列(SEQ ID NO.62，107aa)：

DIPMTQSPASLSASVGETVTITCRTSENIYSYLAWYQQKQGKSPQLLVYNAKTLAEGVPSRFSGSGSGTQFSLKINSLQPEDFGSYYCQHHYDTPPTFGGGTKLEIK。

mAb MM14鼠源轻链可变区核苷酸序列(SEQ ID NO.63，321bp)：

GACATCCCGATGACTCAGTCTCCAGCCTCCCTATCTGCATCTGTGGGAGAAACTGTCACCATCACATG

TCGAACAAGTGAGAATATTTACAGTTATTTAGCATGGTATCAGCAGAAACAGGGAAAATCTCCTCAGC

TCCTGGTCTATAATGCAAAAACCTTAGCAGAAGGTGTGCCATCAAGGTTCAGTGGCAGTGGATCAGGC

ACACAGTTTTCTCTGAAGATCAACAGCCTGCAGCCTGAAGATTTTGGGAGTTATTACTGTCAACATCATTATGATACTCCTCCGACGTTCGGTGGAGGCACCAAGCTGGAAATCAAA。

人IgG1抗体的重链恒定区氨基酸序列(SEQ ID NO.64，330aa)：

ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTV

PSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVT

CVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNK

ALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK。

人IgG1抗体的重链恒定区核苷酸序列(SEQ ID NO.65，990bp)：

GCTAGCACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCACCCTCCTCCAAGAGCACCTCTGGGGGCACAG

CGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGC

CCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGC

GTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACCCAGACCTACATCTGCAACGTGAATCACAAGCCCA

GCAACACCAAGGTGGACAAGAAAGTTGAGCCCAAATCTTGTGACAAAACTCACACATGCCCACCGT

GCCCAGCACCTGAACTCCTGGGGGGACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCT

CATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACGTGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAAGACCCCGAGGTC

AAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAG

TACAACAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAATGGCAAGG

AGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGCCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAA

AGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGATGAGCTGACCAAGAACCA

GGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAAT

GGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCT

ACAGCAAGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGTAAA。

人源κ轻链恒定区氨基酸序列(SEQ ID NO.66，107aa)：

RTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC。

人源κ轻链恒定区氨基酸序列(SEQ ID NO.67，321bp)：

CGTACGGTGGCTGCACCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAACTGC

CTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTACAGTGGAAGGTGGATAACG

CCCTCCAATCGGGTAACTCCCAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCC

TCAGCAGCACCCTGACGCTGAGCAAAGCAGACTACGAGAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCACCCATCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGTGT。

嵌合抗体ch01重链氨基酸序列(SEQ ID NO.68，469aa)：

MGWSWVFLFLLSVTAGVHSQVQLQQSGAELVKPGASVKLSCKASGYTFTSFDINWVRQRPEQGLEWIG

WIFPGNTHFKYNEKFKGKATLTTDTSSSTAYMHLSRLTSEDSAVYFCATLYDGYYAGFTYWGQGTLVTVS

AASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVT

VPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEV

TCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNK

嵌合抗体ch01轻链氨基酸序列(SEQ ID NO.69，234aa)：

MRVLAELLGLLLFCFLGVRCDIQMNQSPSSLSASLGDTITITCHASQNINVWLNWYQQKPGNIPKLLIYKA

STLHTGVPSRFSGSGSGTGFTLTISSLQPEDIATYYCQQGQSYPWTFGGGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQ

LKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC。

嵌合抗体ch02重链氨基酸序列(SEQ ID NO.70，469aa)：

MEWSRVFIFLLSVTAGVHSQVQLQQSGVEVVRPGTSVKVSCKASGYAFTNYLIEWVKQRPGQGLEWIGV

INPGTSGTHYNEKFKGKATLTADKSSSTAYMHLNSLTSDDSAVYFCARGYRDHSMDYWGQGTSVSVSSA

STKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPS

SSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTC

VVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKAL

PAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK。

嵌合抗体ch02轻链氨基酸序列(SEQ ID NO.71，234aa)：

MSVPTQVLGLLLLWLTGARCDIQMTQSPASLSASVGEAVTITCRTSENVYTYLAWFQQKQGKSPHLLVFN

AKTLAEGVPSRFSGSGSGTQFSLRINSLQPEDFGNYYCQHHYDTPPTFGGGTKLEIRRTVAAPSVFIFPPSD

EQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC。

嵌合抗体ch03重链氨基酸序列(SEQ ID NO.72，462aa)：

MAVLALLLCLVTFPSCVLSQVQLKESGPGLVAPSQTLSITCTVSGFSLTSYGVSWVRQPPGKGLEWLGVIW

GDGSTNYHSGFISRLSIRKDNSKSQVFLKLNSLQTDDTASYYCARGYFDVWGAGTTVTVISASTKGPSVF

PLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTY

ICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHE

DPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTIS

KAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK。

嵌合抗体ch03轻链氨基酸序列(SEQ ID NO.73，236aa)：

MDMRAPAQIFGFLLLLFPGTRCDIQMTQSPSSLSASLGERVSLTCRASQDIGSRLNWLQQEPDGTIKRLIYA

TSSLDSGVPKRFSGSRSGSDYSLTISSLESEDFVDYYCLQYASSPYTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDE

QLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC。

嵌合抗体ch04重链氨基酸序列(SEQ ID NO.74，461aa)：

MKCSWIIFFLMAVVTGVNSEFQLQQSGAELVKPGASVKLSCTASGFNIKDTYIHWVKQRPEQGLEWIGRI

DPANGDTKYDPKFQDKATITADSSSNTAYLQLSSLTSEDTAVYYCFRLGLWGQGTLVTVSAASTKGPSVFP

LAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYI

CNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHE

DPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTIS

嵌合抗体ch04轻链氨基酸序列(SEQ ID NO.75，234aa)：

MSVLTQVLALVLLWLTGAKCDIQMTQSPASLSASVGETVTITCRASGNIHNYLAWYQQKQGKSPQLLVY

NAKTLADGVPSRFSGSGSEAQYSLKINSLQPEDFGSYYCQHFWSIPWTFGGGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPS

DEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC。

嵌合抗体ch05重链氨基酸序列(SEQ ID NO.76，469aa)：

MGWSWVFLFLLSVTAGVHSQVQLQQSGAELVKPGASVKLSCKASGYTFTNFDINWVRQRPEQGLEWIG

WIFPGSTNIQYNEKFKGKATLTTDTSSSTAYMYLSRLTSEDSAVYFCATIYDGYYAGFPYWGQGTLVTVSA

ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTV

PSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVT

CVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNK

嵌合抗体ch05轻链氨基酸序列(SEQ ID NO.77，234aa)：

MRVLAELLGLLLFCFLGVRCHIQMSQSPSSLSASLGDTITITCHASQNINVWLNWYQQKPGNIPKLLIYKA

SNLHTGVPSRFSGSGSGTAFTLTISSLQPEDIATYYCQQGQSYPWTFGGGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQ

嵌合抗体ch06重链氨基酸序列(SEQ ID NO.78，467aa)：

MEWSRVFIFLLSVTAGVQSQVQLQQSGAELVRPGTSVKVSCKASGYAFTNYLIDWVKQRPGQGLEWIGV

IHPGSYGTNYNEKFKGKATLTADKSSSTAYMQVSSLTSDDSAVYFCARGYRDHVVDYWGQGTSVTVSSA

STKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPS

SSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTC

VVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKAL

嵌合抗体ch06轻链氨基酸序列(SEQ ID NO.79，234aa)：

MSVPTQVLGLLLLWLTGARCDIQMTQSPASLSASVGETVTITCRASENIYSYLAWYQQKQGKSPQLLVYN

AKTLAEGVPSRFSGSGSGTQFSLKINSLQPEDFGSYYCQHHYDTPPTFGGGTRLEIKRTVAAPSVFIFPPSD

嵌合抗体ch07重链氨基酸序列(SEQ ID NO.80，469aa)：

MGWSWVFLFLLSVTAGVHSQVQLQQSGAELVKPGTSVKLSCKASGYTFTNYDINWLRQRPEQGLEWIG

WIFPGSTNIKYNEKFKGKATLTTDTSSTTAYMHLSRLTSEDSAVYFCATLYDGYFAGFVYWGQGTLVTVSA

ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTV

PSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVT

CVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNK

嵌合抗体ch07轻链氨基酸序列(SEQ ID NO.81，234aa)：

MRVLVELLGLLLFCFLGVRCDIQMNQSPSSLSASLGDTITITCHASQNINVWLNWYQQRPGNFPKLLIYRA

SYLHTGVPSRFSGSVSGTGFTLTISSLQPEDIATYYCQQGQSYPWTFGGGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQ

嵌合抗体ch08重链氨基酸序列(SEQ ID NO.82，467aa)：

MEWSRVFIFLLSVTAGVHSQVQLQQSGAELVRPGTSVKVSCKASGYAFTNYLIEWIKQRPGQGLEWIGVI

NPGTIGTNYNDKFKGKATLTADKTSSTAYMQLSSLTSDDSAVYFCARGYRDNSMDYWGQGTSVTVSSAS

TKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSS

SLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCV

VVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALP

APIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK。

嵌合抗体ch08轻链氨基酸序列(SEQ ID NO.83，234aa)：

MSVPTQVLGLLLLWLTGARCDIQMTQSPASLSASVGETVTITCRTSENIYSYLAWYQQKQGKSPQLLVYN

AKTLAEGVPSRFSGSGSGTQFSLKINSLQPEDFGSYYCQHHYETPPTFGGGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDE

嵌合抗体ch09重链氨基酸序列(SEQ ID NO.84，467aa)：

MEWSRVFIFLLSVTAGVHSQVQLQQSGAELVRPGTSVKVSCKASGYAFTNYLIEWVKQRPGQGLEWIGVI

NPGTSGTHYNEKFKGKATLTADKSSTTAYMHLNSLTSDDSAVYFCARGYRDHSMDYWGQGTSVSVSSAS

TKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSS

SLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCV

VVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALP

嵌合抗体ch09轻链氨基酸序列(SEQ ID NO.85，234aa)：

MSVPTQVLGLLLLWLTGARCDIQMTQSPASLSASVGETVTITCRTSENIYTYLAWFQQKQGKSPQLLVYN

AKTLAVGVPSRFSGSGSGTQFSLRINSLQPEDFGSYYCQHHYDTPPTFGGGTKLEIRRTVAAPSVFIFPPSDE

嵌合抗体ch10重链氨基酸序列(SEQ ID NO.86，467aa)：

MEWSRVFIFLLSVTAGVHSQVQLQQSGAELVRPGTSVKVSCKASGYAFTNYLIEWIKQRPGQGLEWIGVI

NPGTSGTNYNDKFKGKATLTADKSSSTAYMQLSSLTSDDSAVYFCARGYRDYSMDYWGQGTSVTVSSAS

TKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSS

SLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCV

VVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALP

嵌合抗体ch10轻链氨基酸序列(SEQ ID NO.87，234aa)：

MSVPTQVLGLLLLWLTGARCDTQMTQSPASLSASVGETVTITCRTSENIYSYLAWYQQKQGRSPQLLVYN

AKTLAEGVPSRFSGSGSGTQFSLKINSLQSEDFGSYYCQHHYDTPPTFGGGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSD

嵌合抗体ch11重链氨基酸序列(SEQ ID NO.88，471aa)：

MDSRLNLVFLVLILKGVQCDVQLVESGGGLVQPGGSRKLSCAASGFTFSSFGMYWVRQAPEKGLEWVAY

ISLGSSTIYYADTVKGRFTISRDNPKNTLFLHMTSLRSEDTAMYYCAREVYYDNPYYAMDNWGQGTPVT

VSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVV

TVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSFDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPE

VTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSN

KALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK。

嵌合抗体ch11轻链氨基酸序列(SEQ ID NO.89，234aa)：

MSVPTQVLGLLLLWLTDARCDIQMTQSPASLSVSVGETVTITCRASENIYRNLAWYQQKQGASPQLLVYA

ATNLPDGVPSRFSGSGSGTQYSLTINSLQSEDFGSYYCQHFWGPPYTFGGGTKLEIRRTVAAPSVFIFPPSD

嵌合抗体ch12重链氨基酸序列(SEQ ID NO.90，462aa)：

MAVLALLLCLVTFPSCVLSQVQLKESGPGLVAPSQTLSITCTVSGFSLTSYGVSWVRQPPGKGLEWLGVIW

GDGSTNYHSGFISRLSIRKDNSKSQVFLKLNSLQTDDTASYYCARGYFDVWGAGTTVTVISASTKGPSVF

PLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTY

ICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHE

DPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTIS

嵌合抗体ch12轻链氨基酸序列(SEQ ID NO.91，236aa)：

MDMRAPAQIFGFLLLLFPGTRCDIQMTQSPSSLSASLGERVSLTCRASQDIGSRLNWLQQEPDGTIKRLIYA

TSSLDSGVPKRFSGSRSGSDYSLTISSLESEDFVDYYCLQYASSPYTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDE

嵌合抗体ch13重链氨基酸序列(SEQ ID NO.92，462aa)：

MAVLALLLCLVTFPSCVLSQVQLKESGPGLVAPSQSLSITCTVSGISLISYGVNWVRQPPGKGLEWLGVIW

GDGSTNYHSGLISRLSISKDNSKSQVFLKLNSLQTDDTATYYCARGYLDVWGAGTTVTVSSASTKGPSVF

PLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTY

ICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHE

DPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTIS

嵌合抗体ch13轻链氨基酸序列(SEQ ID NO.93，236aa)：

MDMRAPAQIFGFLLLLFPGTRCDIQMTQSPSSLSASLGERVSLTCRASQDIGSNLNWLQQEPDGTIKRLIYA

TSSLDSGVPKRFSGSRSGSDYSLTISSLESEDFVDYYCLQYASSPYTFGGGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDE

嵌合抗体ch14重链氨基酸序列(SEQ ID NO.94，467aa)：

MEWSRVFIFLLSVTAGVHSQVQLQQSGAELVRPGTSVKVSCKASGYAFTHYLIEWVKQRPGQGLEWIGVI

NPGTSGSNYNEKFKGKATLTADKSSSTAYMQLSSLTSDDSAVYFCARGYRDHSMDYWGQGTSVTVSSAS

TKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSS

SLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCV

VVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALP

嵌合抗体ch14轻链氨基酸序列(SEQ ID NO.95，234aa)：

MSVPTQVLGLLLLWLTGARCDIPMTQSPASLSASVGETVTITCRTSENIYSYLAWYQQKQGKSPQLLVYN

AKTLAEGVPSRFSGSGSGTQFSLKINSLQPEDFGSYYCQHHYDTPPTFGGGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSD

阳性对照抗体YZ-18-29重链氨基酸序列(SEQ ID NO.96，452aa)：

QVQLQQPGTELVRPGLSVKLSCKASGYTFTSYWMNWVKQRPGQGLEWIGMIHPSNDEKRINQKFKDKA

TLTVDKFSSTVYMQVSSPTSEDSAVYYCARGGGDYVGDYALDFWGQGTSVTVSSASTKGPSVFPLAPSS

KSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVN

HKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVK

FNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQ

PREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK。

阳性对照抗体YZ-18-29轻链氨基酸序列(SEQ ID NO.97，214aa)：

DIQMTQSPASQSASLGESVTITCLASQTIGTWLAWYQQKPGKSPQLLIYAATTLTDGVPSRFSGAGSGTKFS

LKISSLQAEDFASYFCQEFFSTPFTFGSGTKLELKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC。

以上所述实施方式和实施例的各技术特征可以进行任意合适方式的组合，为使描述简洁，未对上述实施方式和实施例中的各个技术特征所有可能的组合都进行描述，然而，只要这些技术特征的组合不存在矛盾，都应当认为在本说明书记载的范围中。

以上所述实施例仅表达了本申请的几种实施方式，便于具体和详细地理解本申请的技术方案，但并不能因此而理解为对申请专利保护范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本申请构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本申请的保护范围。此外应理解，在阅读了本申请的上述讲授内容之后，本领域技术人员可以对本申请作各种改动或修改，得到的等价形式同样落于本申请的保护范围。还应当理解，本领域技术人员在本申请提供的技术方案的基础上，通过合乎逻辑的分析、推理或者有限的试验得到的技术方案，均在本申请所附权利要求的保护范围内。因此，本申请专利的保护范围应以所附权利要求的内容为准，说明书及附图可以用于解释权利要求的内容。

Claims

1.uPARAP特异性结合蛋白，其具有uPARAP结合结构域，所述uPARAP结合结构域选自如下uPARAP结合结构域1至uPARAP结合结构域14中的任一种：

uPARAP结合结构域1具有序列SEQ ID NO.98所示的CDR-H1、序列SEQ ID NO.99所示的CDR-H2、序列SEQ ID NO.100所示的CDR-H3、序列SEQ ID NO.131所示的CDR-L1、序列SEQ IDNO..132所示的CDR-L2和序列SEQ ID NO.133所示的CDR-L3；

uPARAP结合结构域2具有序列SEQ ID NO.101所示的CDR-H1、序列SEQ ID NO.102所示的CDR-H2、序列SEQ ID NO.103所示的CDR-H3、序列SEQ ID NO.134所示的CDR-L1、序列SEQID NO.135所示的CDR-L2和序列SEQ ID NO.136所示的CDR-L3；

uPARAP结合结构域3具有序列SEQ ID NO.104所示的CDR-H1、序列SEQ ID NO.105所示的CDR-H2、序列SEQ ID NO.106所示的CDR-H3、序列SEQ ID NO.137所示的CDR-L1、序列SEQID NO.138所示的CDR-L2和序列SEQ ID NO.139所示的CDR-L3；

uPARAP结合结构域4具有序列SEQ ID NO.107所示的CDR-H1、序列SEQ ID NO.108所示的CDR-H2、序列SEQ ID NO.109所示的CDR-H3、序列SEQ ID NO.140所示的CDR-L1、序列SEQID NO.141所示的CDR-L2和序列SEQ ID NO.142所示的CDR-L3；

uPARAP结合结构域5具有序列SEQ ID NO.110所示的CDR-H1、序列SEQ ID NO.111所示的CDR-H2、序列SEQ ID NO.112所示的CDR-H3、序列SEQ ID NO.131所示的CDR-L1、序列SEQID NO.143所示的CDR-L2和序列SEQ ID NO.133所示的CDR-L3；

uPARAP结合结构域6具有序列SEQ ID NO.113所示的CDR-H1、序列SEQ ID NO.114所示的CDR-H2、序列SEQ ID NO.115所示的CDR-H3、序列SEQ ID NO.144所示的CDR-L1、序列SEQID NO.135所示的CDR-L2和序列SEQ ID NO.136所示的CDR-L3；

uPARAP结合结构域7具有序列SEQ ID NO.116所示的CDR-H1、序列SEQ ID NO.117所示的CDR-H2、序列SEQ ID NO.118所示的CDR-H3、序列SEQ ID NO.131所示的CDR-L1、序列SEQID NO.145所示的CDR-L2和序列SEQ ID NO.133所示的CDR-L3；

uPARAP结合结构域8具有序列SEQ ID NO.101所示的CDR-H1、序列SEQ ID NO.119所示的CDR-H2、序列SEQ ID NO.120所示的CDR-H3、序列SEQ ID NO.146所示的CDR-L1、序列SEQID NO.135所示的CDR-L2和序列SEQ ID NO.147所示的CDR-L3；

uPARAP结合结构域9具有序列SEQ ID NO.101所示的CDR-H1、序列SEQ ID NO.102所示的CDR-H2、序列SEQ ID NO.103所示的CDR-H3、序列SEQ ID NO.148所示的CDR-L1、序列SEQID NO.149所示的CDR-L2和序列SEQ ID NO.136所示的CDR-L3；

uPARAP结合结构域10具有序列SEQ ID NO.101所示的CDR-H1、序列SEQ ID NO.121所示的CDR-H2、序列SEQ ID NO.122所示的CDR-H3、序列SEQ ID NO.146所示的CDR-L1、序列SEQID NO.135所示的CDR-L2和序列SEQ ID NO.136所示的CDR-L3；

uPARAP结合结构域11具有序列SEQ ID NO.123所示的CDR-H1、序列SEQ ID NO.124所示的CDR-H2、序列SEQ ID NO.125所示的CDR-H3、序列SEQ ID NO.150所示的CDR-L1、序列SEQID NO.151所示的CDR-L2和序列SEQ ID NO.152所示的CDR-L3；

uPARAP结合结构域12具有序列SEQ ID NO.104所示的CDR-H1、序列SEQ ID NO.105所示的CDR-H2、序列SEQ ID NO.106所示的CDR-H3、序列SEQ ID NO.137所示的CDR-L1、序列SEQID NO.138所示的CDR-L2和序列SEQ ID NO.139所示的CDR-L3；

uPARAP结合结构域13具有序列SEQ ID NO.126所示的CDR-H1、序列SEQ ID NO.127所示的CDR-H2、序列SEQ ID NO.128所示的CDR-H3、序列SEQ ID NO.153所示的CDR-L1、序列SEQID NO.138所示的CDR-L2和序列SEQ ID NO.139所示的CDR-L3；以及，

uPARAP结合结构域14具有序列SEQ ID NO.129所示的CDR-H1、序列SEQ ID NO.130所示的CDR-H2、序列SEQ ID NO.103所示的CDR-H3、序列SEQ ID NO.146所示的CDR-L1、序列SEQID NO.135所示的CDR-L2和序列SEQ ID NO.136所示的CDR-L3。

2.根据权利要求1所述的uPARAP特异性结合蛋白，其为抗体、抗体的抗原结合片段或者小模块免疫药物；

可选地，所述结合蛋白为单克隆抗体、F(ab’)2片段、Fab’片段、Fab片段、Fv片段、scFv片段、双克隆抗体、多特异性抗体、微型抗体、螯合重组抗体、内抗体、纳米抗体、结合结构域免疫球蛋白融合蛋白或者小模块免疫药物。

3.根据权利要求1或者2所述的uPARAP特异性结合蛋白，其重链可变区和轻链可变区的骨架区的种属来源各自独立地为鼠、人、牛、马、猪、羊、狗、猫、兔、骆驼、驴、鹿、貂、鸡、鸭或者鹅。

4.根据权利要求3所述的uPARAP特异性结合蛋白，其重链可变区如序列SEQ ID NO.8、SEQ ID NO.12、SEQ ID NO.16、SEQ ID NO.20、SEQ ID NO.24、SEQ ID NO.28、SEQ IDNO.32、SEQ ID NO.36、SEQ ID NO.40、SEQ ID NO.44、SEQ ID NO.48、SEQ ID NO.52、SEQ IDNO.56和SEQ ID NO.60中任一序列所示。

5.根据权利要求3所述的uPARAP特异性结合蛋白，其轻链可变区如序列SEQ ID NO.10、SEQ ID NO.14、SEQ ID NO.18、SEQ ID NO.22、SEQ ID NO.26、SEQ ID NO.30、SEQ IDNO.34、SEQ ID NO.38、SEQ ID NO.42、SEQ ID NO.46、SEQ ID NO.50、SEQ ID NO.54、SEQ IDNO.58和SEQ ID NO.62中任一序列所示。

6.根据权利要求1至2以及4至5中任一项所述的uPARAP特异性结合蛋白，其还包括抗体恒定区；

可选地，所述抗体恒定区的序列选自IgG、IgA、IgM、IgE及IgD任何其中之一恒定区的序列；

可选地，所述抗体恒定区中，轻链恒定区和重链恒定区的种属来源各自独立地为鼠、人牛、马、猪、羊、狗、猫、兔、骆驼、驴、鹿、貂、鸡、鸭或者鹅；

7.根据权利要求6所述的uPARAP特异性结合蛋白，其重链如序列SEQ ID NO.68、SEQ IDNO.70、SEQ ID NO.72、SEQ ID NO.74、SEQ ID NO.76、SEQ ID NO.78、SEQ ID NO.80、SEQ IDNO.82、SEQ ID NO.84、SEQ ID NO.86、SEQ ID NO.88、SEQ ID NO.90、SEQ ID NO.92和SEQID NO.94中任一序列所示。

8.根据权利要求6所述的uPARAP特异性结合蛋白，其轻链如序列SEQ ID NO.69、SEQ IDNO.71、SEQ ID NO.73、SEQ ID NO.75、SEQ ID NO.77、SEQ ID NO.79、SEQ ID NO.81、SEQ IDNO.83、SEQ ID NO.85、SEQ ID NO.87、SEQ ID NO.89、SEQ ID NO.91、SEQ ID NO.93和SEQID NO.95中任一序列所示。

9.核酸分子，其编码权利要求1至8中任一项所述的uPARAP特异性结合蛋白。

10.载体，其包括权利要求9所述的核酸分子；

可选地，所述载体选自哺乳动物细胞病毒、细菌质粒、噬菌体、酵母质粒、植物细胞病毒或其组合。

11.细胞，其包括权利要求9所述的核酸分子或者权利要求10所述的载体；

可选地，所述细胞为CHO细胞、COS细胞、NSO细胞、HeLa细胞、BHK细胞或HEK293细胞。

12.权利要求1至8中任一项所述的uPARAP特异性结合蛋白的制备方法，其包括：培养权利要求11所述的细胞，从所得培养物中分离uPARAP特异性结合蛋白。

13.抗体偶联物，其包括：

权利要求1至8中任一项所述的uPARAP特异性结合蛋白，以及，

与所述uPARAP特异性结合蛋白偶联的偶联物；

可选地，所述抗体偶联物满足如下条件中的一个或者多个：

14.药物组合物，其包括权利要求1至8任一项所述的uPARAP特异性结合蛋白、权利要求9所述的核酸分子、权利要求10所述的表达载体、权利要求11所述的细胞或权利要求13所述的抗体偶联物，以及药学上可以接受的载体。

15.权利要求1至8中任一项所述的uPARAP特异性结合蛋白、权利要求9所述的核酸分子、权利要求10所述的载体、权利要求11所述的细胞、权利要求13所述的抗体偶联物或者权利要求14所述的药物组合物在制备uPARAP表达相关疾病的药物中的用途；

可选地，所述药物治疗的uPARAP表达相关疾病为癌症、骨退化疾病、纤维化和巨噬细胞相关疾病、关节炎或者慢性炎症；

进一步可选地，所述关节炎为骨关节炎、炎症性关节炎、类风湿性关节炎、银屑病性关节炎、痛风、假痛风、强直性脊柱炎、狼疮或者莱姆病诱发的关节炎；更进一步可选地，所述莱姆病诱发的关节炎为莱姆关节炎；

进一步可选地，所述癌症为肉瘤、骨肉瘤、脑癌、神经胶质瘤、多形性成胶质细胞瘤、神经母细胞瘤、中枢神经系统癌、神经内分泌肿瘤、间皮瘤、前列腺癌、来自前列腺癌的骨转移瘤、乳腺癌、来自乳腺癌的骨转移瘤、头颈癌、咽喉癌、咽鳞癌、口腔鳞癌、鼻咽癌、食管癌、食管胃连接部癌、胃癌、胃肠道癌、肠癌、结肠癌、结肠直肠癌、肺癌、肾癌、透明细胞肾细胞癌、胆道癌、佩吉特病、胰腺癌、卵巢癌、子宫内膜癌、子宫颈癌、膀胱癌、尿路上皮癌、胃肠道间质瘤、宫颈癌、鳞状细胞癌、腹膜癌、肝癌、肝胆癌、肝细胞癌、外阴癌、甲状腺癌、阴茎癌、皮肤癌、白血病、恶性淋巴瘤、浆细胞瘤、骨癌、骨髓瘤、多发性骨髓瘤、骨髓异常增生综合征、库肯勃氏瘤、骨髓增生性肿瘤、黑色素瘤或者梅克尔细胞癌；

进一步可选地，所述骨退化疾病包括骨质疏松；

进一步可选地，所述纤维化和巨噬细胞相关疾病包括动脉粥样硬化。

16.利要求1至8中任一项所述的uPARAP特异性结合蛋白、权利要求9所述的核酸分子、权利要求10所述的载体或者权利要求11所述的细胞在制备uPARAP相关疾病诊断产品中的用途；

可选地，所述uPARAP相关疾病诊断产品诊断的uPARAP相关疾病为癌症、骨退化疾病、纤维化和巨噬细胞相关疾病、关节炎或者慢性炎症；

进一步可选地，所述骨退化疾病包括骨质疏松；

17.uPARAP相关疾病诊断产品，其包括权利要求1至8中任一项所述的uPARAP特异性结合蛋白；