CN118076582A - 降低免疫不耐受和治疗自身免疫病症的组合物和方法 - Google Patents

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CN118076582A CN202280068028.1A CN202280068028A CN118076582A CN 118076582 A CN118076582 A CN 118076582A CN 202280068028 A CN202280068028 A CN 202280068028A CN 118076582 A CN118076582 A CN 118076582A
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Abstract

本文提供了化合物及其药学上可接受的盐、包含此类化合物或其药学上可接受的盐的脂质颗粒和前述的组合物，其可用于降低受试者的免疫不耐受以例如治疗自身免疫病症，或与抗原疗法诸如蛋白质或基因疗法组合以改善所述抗原疗法的功效。所述化合物具有以下结构式：

Description

降低免疫不耐受和治疗自身免疫病症的组合物和方法
相关申请
本申请要求2021年8月13日提交的美国临时申请号63/233,163的权益。本申请的整个教导以引用方式并入本文。
背景技术
酶和蛋白质替换疗法是用于治疗其中内源性蛋白质突变、缺失、或以其他方式异常的先天性病症的成功治疗策略。然而，临床施用外来酶或蛋白质与出现针对酶或蛋白质的不当免疫反应相关。不当免疫反应可导致酶/蛋白质的中和、或其药代动力学的改变。在许多情况下，患者不具有替代治疗选项，使得对于疗法的不当免疫反应成为酶和蛋白质替换疗法接受者面临的主要问题。
类似地，基因疗法提供治疗许多先天性病症和其他疾病的有希望的方法。载剂和/或其中携带的遗传物质的免疫原性是基因疗法的临床应用的主要挑战。现有抗载剂抗体是用一些经批准基因疗法的治疗的禁忌症。此外，新生抗载剂抗体可在接受第一剂量的基因疗法的受试者中防止重复给药。
自身免疫病症是身体缺少或失去对于自身抗原的耐受性的病症的集合。这导致身体的免疫系统攻击健康细胞，并且可具有衰弱和破坏性效应。治疗自身免疫病症的当前方法依赖于体液、细胞和/或补体水平的一般免疫抑制，使得患者免疫功能低下和易受机会性感染的影响。
因此，需要可例如通过减轻酶和蛋白质替换疗法和/或基因疗法的免疫原性，或增加对于自身抗原的自身耐受性来减少对于外源性抗原(例如，酶替换疗法、基因疗法)或内源性抗原(例如，导致自身免疫病症的自身抗原)的免疫不耐受的组合物。
发明内容
本文所述的技术涉及外源性抗原的耐受性诱导(例如，抗原特异性和/或抗原独占性耐受性诱导)、或自身抗原的耐受性诱导。所述技术基于接合和调节(例如，激活)T细胞免疫球蛋白粘蛋白(TIM)家族受体。
本文提供了具有以下结构式的化合物：
或其药学上可接受的盐，其中变量(例如，R、X)的值如本文所述。
本文还提供了包含一种或多种脂质、或其药学上可接受的盐、和本公开的化合物的脂质颗粒。
本文还提供了包含本公开的化合物的组合物(例如，药物组合物)。
本文还提供了包含多种本文所述的脂质颗粒的组合物(例如，药物组合物)。
本文还提供了使有需要的受试者免疫耐受的方法。所述方法包括向受试者施用治疗有效量的本文所述的组合物。
本文还提供了使有需要的受试者对抗原免疫耐受和抑制或降低受试者的抗原特异性抗体滴度的方法。所述方法包括向受试者施用抗原和治疗有效量的本文所述的组合物，或向受试者施用包含抗原、或抗原的免疫原性片段的本文所述的组合物。
本文还提供了在受试者中诱导调控性T细胞群(例如，响应于抗原)和增加受试者的耐受原性T细胞的活性或水平的方法。所述方法包括向受试者施用治疗有效量的本文所述的组合物(例如，包含抗原、或抗原的免疫原性片段的本文所述的组合物)。
本文还提供了在受试者中诱导调控性B细胞群(例如，响应于抗原)的方法。所述方法包括向受试者施用治疗有效量的本文所述的组合物(例如，包含抗原、或抗原的免疫原性片段的本文所述的组合物)。
本文还提供了治疗有需要的受试者的自身免疫病症的方法，其包括向受试者施用治疗有效量的本文所述的组合物(例如，包含与自身免疫病症相关的自身抗原的本文所述的组合物)。
本文还提供了用抗原疗法来治疗有需要的受试者的疾病、病症或病状的方法，其包括向受试者施用抗原疗法(例如，治疗有效量的抗原疗法)和足以使受试者对抗原疗法免疫耐受的量的本文所述的组合物，或治疗有效量的包含抗原疗法的本文所述的组合物。
本文还提供了用于本文所述的用途(例如，治疗自身免疫病症；治疗可用抗原疗法来治疗的疾病、病症或病状)的组合物(例如，药物组合物)，其中组合物是本文所述的组合物。本文还提供了本文所述的组合物用于制造用于本文所述的用途(例如，治疗自身免疫病症；治疗可用抗原疗法来治疗的疾病、病症或病状)的药物的用途。
附图说明
专利或申请文件含有至少一张彩色附图。在提出请求并支付必要费用后，本事务所将提供具有彩色附图的本专利或专利申请公布的副本。
上述从示例性实施方案的以下更具体描述显而易知。
图1示出了实施例2中描述的活性成分决策树。
图2A示出了淋巴结内B细胞聚类的代表性图像。箭头指示淋巴结的皮质。
图2B示出了口服灌胃后60分钟的DilC18(5)淋巴摄取和B细胞共定位。
图2C示出了口服灌胃后60分钟的DMPC淋巴摄取和B细胞共定位。
图2D示出了口服灌胃后60分钟的DOPC淋巴摄取和B细胞共定位。
图2E示出了口服灌胃后60分钟的DSPC淋巴摄取和B细胞共定位。
图2F示出了口服灌胃后60分钟的POPC淋巴摄取和B细胞共定位。
图2G示出了按脂质类型的B细胞/脂质体共定位百分比。
图2H示出了淋巴结内T细胞聚类的代表性图像。
图2I示出了口服灌胃后60分钟的DilC18(5)淋巴摄取和T细胞共定位。
图2J示出了口服灌胃后60分钟的DMPC淋巴摄取和T细胞共定位。
图2K示出了口服灌胃后60分钟的DOPC淋巴摄取和T细胞共定位。
图2L示出了口服灌胃后60分钟的DSPC淋巴摄取和T细胞共定位。
图2M示出了口服灌胃后60分钟的POPC淋巴摄取和T细胞共定位。
图2N示出了按脂质类型的T细胞/脂质体共定位百分比。
图3示出了响应于化合物1或化合物2的FoxP3+/TIM3+CD4 T细胞百分比的变化。
图4A是评价化合物2在小鼠中的药效学(PD)效果的示意图。
图4B示出了化合物2在体内的剂量-PD关系，包括剂量-PD模型拟合以及围绕平均模型预测的剂量-PD的相关置信区间。示出了ED50和ED90值。
图5A是用于确定脂质体化合物2在EAE多发性硬化症(MS)模型中的治疗用途的研究的示意图。
图5B示出了EAE MS模型中疾病发作的时间。
图5C示出了预防性EAE MS模型中治疗组和对照组的临床评分。
图5D示出了治疗性EAE MS模型中治疗组和对照组的临床评分。
图5E示出了EAE MS模型中治疗组和对照组的总体存活。
图6示出了封装在DMPC:GL67:化合物2(85:5:10)脂质体中的AAV9-CMVChry的代表性透射电子显微镜图像，其中红色箭头和圆圈指示封装的AAV9-CMVChry。
具体实施方式
示例性实施方案的描述如下。
定义
本文所述的化合物包括一般描述的那些，并且进一步通过本文公开的类别、子类、和种类来示出。除非另外指示，否则应采用如本文所用的以下定义。出于本发明目的，化学元素根据Periodic Table of the Elements,CAS版本，Handbook of Chemistry andPhysics,第75版来鉴定。另外，有机化学的一般原则描述于“Organic Chemistry”,ThomasSorrell,University Science Books,Sausalito:1999、和“March’s Advanced OrganicChemistry”,第5版，Smith,M.B.和March,J.编,John Wiley&Sons,New York:2001，其相关内容以引用方式并入本文。
除非在本说明书内另外指定，否则本说明书使用的命名法一般遵循Nomenclatureof Organic Chemistry,Sections A,B,C,D,E,F,and H,Pergamon Press,Oxford,1979中陈述的实例和规则，所述文献对于其化学结构名称和关于命名化学结构的规则以引用方式并入本文。任选地，化合物的名称可使用化学命名程序(例如，版本17.0.0.206,PerkinElmer Informatics,Inc.)来产生。
当介绍本文公开的要素时，冠词“一(a/an)”和“所述(the/said)”意欲意谓存在这些要素中的一个或多个。此外，一个或多个要素可相同或不同。
“约”意谓在特定值的可接受误差范围内，如本领域普通技术人员确定。通常，特定值的可接受误差范围至少部分地取决于如何测量或确定所述值，例如，测量系统的限制。例如，“约”可意谓根据在本领域中的实践，在可接受标准偏差内。替代地，“约”可意谓给定值的±20％，例如，±10％、±5％或±1％的范围。应了解术语“约”可先于本文指定的任何特定值，除了例示中使用的特定值。
“烷基”是指具有指定数量碳原子的支链或直链、单价、烃基团。因此，“(C1-C8)烷基”是指具有支链或直链布置的1-8个碳原子的基团。在一些方面，烷基是(C1-C30)烷基，例如，(C5-C30)烷基、(C1-C25)烷基、(C5-C25)烷基、(C10-C25)烷基、(C15-C25)烷基、(C10-C20)烷基、(C15-C20)烷基、(C1-C15)烷基、(C1-C10)烷基、(C1-C6)烷基或(C1-C5)烷基。烷基的实例包括甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、正戊基、异戊基、新戊基、2-甲基戊基、正己基等。在一些方面，烷基任选地例如被一个或多个本文所述的取代基取代。
“烯基”是指具有至少一个碳-碳双键和指定数量碳原子的支链或直链、单价、烃基团。因此，“(C2-C8)烯基”是指具有至少一个碳-碳双键和支链或直链布置的2-8个碳原子的基团。在一些方面，烯基是(C1-C30)烯基，例如，(C5-C30)烯基、(C1-C25)烯基、(C5-C25)烯基、(C10-C25)烯基、(C15-C25)烯基、(C10-C20)烯基、(C15-C20)烯基、(C1-C15)烯基、(C1-C10)烯基、(C1-C6)烯基或(C1-C5)烯基。烯基的实例包括乙烯基、2-丙烯基、1-丙烯基、2-甲基-1-丙烯基、1-丁烯基、2-丁烯基、1-戊烯基、2-戊烯基、3-戊烯基、烯丙基、1,3-丁二烯基、1,3-二戊烯基、1,4-二戊烯基、1-己烯基、1,3-己烯基、1,4-己烯基、1,3,5-三己烯基、2,4-二己烯基等。在一些方面，烯基任选地例如被一个或多个本文所述的取代基取代。
“芳基”是指具有指定数量环原子的单环或多环(例如，双环、三环)、芳族、烃环系统，并且包括稠合至非芳族环的芳族环，只要稠合环中的一个是芳族烃即可。因此，“(C6-C15)芳基”是指具有6-15个环原子的环系统。芳基的实例包括苯基、萘基和芴基。在一些方面，芳基任选地例如被一个或多个本文所述的取代基取代。
“杂芳基”是指具有指定数量环原子的单环或多环(例如，双环、三环)、芳族、烃环系统，其中环系统中的至少一个碳原子被选自氮、硫和氧的杂原子替换。因此，“(C5-C15)杂芳基”是指具有5-15个由碳、氮、硫和氧组成的环原子的杂芳族环系统。“杂芳基”包括稠合至非芳族环的杂芳族环，只要稠合环中的一个是杂芳族烃即可。杂芳基可含有1、2、3或4个(例如，1、2或3个)独立地选自氮、硫和氧的杂原子。通常，杂芳基是(C5-C20)杂芳基，例如，(C5-C15)杂芳基、(C5-C12)杂芳基、C5杂芳基或C6杂芳基。单环杂芳基包括但不限于呋喃、噁唑、噻吩、三唑、三氮烯、噻二唑、噁二唑、咪唑、异噻唑、异噁唑、吡唑、哒嗪、吡啶、吡嗪、嘧啶、吡咯、四唑和噻唑。双环杂芳基包括但不限于吲嗪、吲哚、异吲哚、吲唑、苯并咪唑、苯并呋喃、苯并噻唑、嘌呤、喹啉、异喹啉、噌啉、酞嗪、喹唑啉、喹噁啉、萘啶和蝶啶。在一些方面，杂芳基任选地例如被一个或多个本文所述的取代基取代。
“烷氧基”是指经由氧连接原子来连接的烷基，其中烷基如本文所述。烷氧基的实例包括但不限于甲氧基、乙氧基、丙氧基、异丙氧基等。
“卤素”和“卤基”在本文中可互换使用并且各自是指氟、氯、溴、或碘。在一些方面，卤基是氟基、氯基或溴基。在一些方面，卤基是氟基。
“卤代烷基”包括单、多、和全卤代烷基，其中每个卤素独立地选自氟、氯、溴和碘(例如，氟、氯和溴)，并且烷基如本文所述。在一方面，卤代烷基是全卤代烷基(例如，全氟烷基)。卤代烷基的实例包括但不限于三氟甲基和全氟乙基。
“卤代烷氧基”是指经由氧连接原子来连接的卤代烷基，其中卤代烷基如本文所述。卤代烷氧基的实例包括但不限于三氟甲氧基。
术语“取代”是指氢原子被合适取代基替换。通常，合适取代基替换结合至碳原子的氢原子，但是取代基还可替换结合至杂原子诸如氮、氧或硫原子的氢。应了解“取代”或“被……取代”包括此类取代根据取代原子的允许化合价的隐含限制条件。取代基、和取代产生例如不会自发地诸如通过重排、环化、消除等来经历转化的稳定化合物也是优选的。用于本文中的用途的合适取代基包括有机化合物的无环和环状、支链和非支链、碳环和杂环、芳族和非芳族取代基。例如，合适取代基可包括卤素、羟基、羰基(诸如羧基、烷氧基羰基、甲酰基、或酰基)、硫代羰基(诸如硫酯、硫代乙酸酯、或硫代甲酸酯)、烷基、烷氧基、硫烷基、酰氧基、磷酰基、磷酸酯、膦酸酯、氨基、酰胺基、脒、亚胺、氰基、硝基、叠氮基、巯基、硫烷基、硫酸酯、磺酸酯、氨磺酰基、亚磺酰氨基、磺酰基、环烷基、杂环基、芳烷基、芳基或杂芳基。本领域技术人员应了解若适当，取代基可本身经取代。因此，取代基可进一步包括例如乙酰胺。
对于适当的有机化合物，可允许的取代基可以是一个或多个并且相同或不同。因此，在一些方面，“任选取代的”基团被0-5个(例如，0-3、0、1、2、3、4、5个)独立地选自以下的取代基取代：卤基、(C1-C6)烷氧基、(C1-C6)卤代烷氧基、(C1-C6)烷基或(C1-C6)卤代烷基、或任选取代的(C6-C15)芳基或(C5-C15)杂芳基。在一些方面，任选取代的芳基或杂芳基被0-5个(例如，0-3、0、1、2、3、4、5个)独立地选自以下的取代基取代：卤基、(C1-C6)烷氧基、(C1-C6)卤代烷氧基、(C1-C6)烷基或(C1-C6)卤代烷基。在一些方面，任选取代的”芳基或杂芳基被0-5个(例如，0-3、0、1、2、3、4、5个)独立地选自以下的取代基取代：卤基、(C1-C3)烷氧基、(C1-C3)卤代烷氧基、(C1-C3)烷基或(C1-C3)卤代烷基。在一些方面，任选取代的烷基或烯基被0-5个(例如，0-3、0、1、2、3、4、5个)独立地选自以下的取代基取代：卤基(例如，氟基)、(C1-C6)烷氧基、(C1-C6)卤代烷氧基(例如，(C1-C6)氟代烷氧基)、(C6-C15)芳基或(C5-C15)杂芳基。
如本文所用，术语“任选取代的”意味着取代是任选的并且因此，指定为“任选取代的”的原子或部分可能是未取代的或取代的。在一些方面，任选取代的基团是未取代的。在一些方面，任选取代的基团是取代的。除非另外指示，例如，对于术语“取代的”或“任选取代的”，本文指定的基团是未取代的。
如本文所用，术语“本公开的化合物”是指本文描绘的任何结构式的化合物(例如，结构式I的化合物、例示的化合物)，以及其异构体，诸如立体异构体(包括非对映体、对映体和外消旋体)和互变异构体、其同位素标记变体(包括具有氘取代的那些)、及其固有地形成部分(例如，多晶型物和/或溶剂化物，诸如水合物)。当存在能够形成盐的部分时，那么也包括盐，特别是其药学上可接受的盐。
本公开的化合物可具有不对称中心、手性轴、和手性平面(例如如E.L.Eliel和S.H.Wilen,Stereo-chemistry of Carbon Compounds,John Wiley&Sons,New York,1994,第1119-1190页中所描述)，并且除非另外指示，否则作为外消旋混合物、个别异构体(例如，非对映体、对映体、几何异构体(包括顺式和反式双键异构体)、构型异构体(包括旋转异构体和阻转异构体)、互变异构体)和中间混合物出现，并且包括所有可能的异构体及其混合物。
当所公开的化合物通过没有指示立体化学的结构来描绘，并且化合物具有一个或多个手性中心时，应了解所述结构涵盖与对应光学异构体分离或基本上分离的化合物的一种对映体或非对映体、化合物的外消旋混合物和相对于其对应光学异构体，富含一种对映体或非对映体的混合物。当所公开的化合物通过指示立体化学的结构来描绘，并且化合物具有一个或多个手性中心时，立体化学指示一个或多个手性中心周围的取代基的绝对构型。“R”和“S”也或替代地可用于指示一个或多个手性碳原子周围的取代基的绝对构型。D-和L-也或替代地可用于指示立体化学。
“对映体”是彼此为不重叠镜像的立体异构体对，最通常因为其含有充当手性中心的不对称取代碳原子。
“非对映体”是不作为镜像而相关的立体异构体，最通常因为其含有两个或更多个不对称取代碳原子。
如本文所用，“外消旋体”或“外消旋混合物”是指含有化合物的等摩尔数量的两个对映体的混合物。此类混合物不展现光学活性(即，其不使偏振光的平面旋转)。
对映体过量(ee)百分比定义为每个对映体的摩尔分数之间的绝对差异乘以100％并且可通过以下公式来表示：其中R和S表示混合物中的每个对映体的相应分数，以使得R+S＝1。对映体可以至少或约50％、约60％、约70％、约80％、约90％、约95％、约98％、约99％或约99.9％的ee存在。
非对映体过量(de)百分比定义为每个非对映体的摩尔分数之间的绝对差异乘以100％并且可通过以下公式来表示：其中D1和(D2+D3+D4…)表示混合物中的每个非对映体的相应分数，以使得D1+(D2+D3+D4…)＝1。非对映体可以至少或约50％、约60％、约70％、约80％、约90％、约95％、约98％、约99％或约99.9％的de存在。
除非另外说明，否则本公开的化合物包括只在一个或多个同位素富集原子的存在方面不同的化合物。例如，通过用氘或氚来替换氢，或用13C或14C富集碳来替换碳而产生的化合物在本发明范围内。在所有提供的结构中，任何氢原子也可独立地选自氘(2H)、氚(3H)和/或氟(18F)。此类化合物可适用例如作为分析工具、作为生物测定中的探针、或作为根据本发明的治疗剂。
短语“药学上可接受的”意味着在合理医学判断范围内，所述短语修饰的物质或组合物适合用于与人和低级动物的组织接触而没有不适当的毒性、刺激、过敏反应等，并且与合理益处/风险比相称。
如本文所用，术语“药学上可接受的盐”是指在合理医学判断范围内，适合用于与哺乳动物的组织接触而没有不适当的毒性、刺激、过敏反应等，并且与合理益处/风险比相称的那些盐。药学上可接受的盐在本领域中是熟知的。例如，S.M.Berge等人在J.Pharmaceutical Sciences,1977,66,1–19中详细地描述药学上可接受的盐，其相关教导以引用方式整体并入本文。本文所述的化合物的药学上可接受的盐包括衍生自合适无机和有机酸、和合适无机和有机碱的盐。
衍生自合适酸的盐的实例包括氨基与无机酸诸如盐酸、氢溴酸、磷酸、硫酸和高氯酸，或与有机酸诸如乙酸、草酸、马来酸、酒石酸、柠檬酸、琥珀酸或丙二酸形成的盐，或通过使用在本领域中使用的其他方法，诸如离子交换形成的盐。衍生自合适酸的其他药学上可接受的盐包括己二酸盐、藻酸盐、抗坏血酸盐、天冬氨酸盐、苯磺酸盐、苯甲酸盐、硫酸氢盐、硼酸盐、丁酸盐、樟脑酸盐、樟脑磺酸盐、肉桂酸盐、柠檬酸盐、环戊烷丙酸盐、二葡糖酸盐、十二烷基硫酸盐、乙磺酸盐、甲酸盐、富马酸盐、葡庚酸盐、甘油磷酸盐、葡糖酸盐、戊二酸盐、羟乙酸盐、半硫酸盐、庚酸盐、己酸盐、氢碘酸盐、羟苯酸盐、2-羟基乙磺酸盐、羟基马来酸盐、乳糖酸盐、乳酸盐、月桂酸盐、月桂基硫酸盐、苹果酸盐、马来酸盐、丙二酸盐、甲磺酸盐、2-萘磺酸盐、烟酸盐、硝酸盐、油酸盐、草酸盐、棕榈酸盐、双羟萘酸盐、果胶酸盐、过硫酸盐、2-苯氧基苯甲酸盐、苯乙酸盐、3-苯基丙酸盐、磷酸盐、特戊酸盐、丙酸盐、丙酮酸盐、水杨酸盐、硬脂酸盐、琥珀酸盐、硫酸盐、酒石酸盐、硫氰酸盐、对甲苯磺酸盐、十一酸盐、戊酸盐等。
可形成单、二或三酸盐，并且此类盐可以水合、溶剂化或基本上无水形式存在。
衍生自适当碱的盐包括衍生自无机碱，诸如碱金属、碱土金属、和铵碱的盐，和衍生自脂族、脂环族或芳族有机胺，诸如甲胺、三甲胺和甲基吡啶的盐，或N+((C1-C4)烷基)4盐。代表性碱金属盐或碱土金属盐包括钠、锂、钾、钙、镁、钡等。其他药学上可接受的盐包括，在适当时，使用抗衡离子诸如卤离子、氢氧根、羧基、硫酸根、磷酸根、硝酸根、低级烷基磺酸根和芳基磺酸根形成的无毒的铵、季铵和胺阳离子。
本文所述的化合物还可作为“溶剂化物”或“水合物”存在。“水合物”是存在于具有一个或多个水分子的组合物中的化合物。水合物可包括化学计量的水，诸如一水合物或二水合物，或者可包括随机量的水。“溶剂化物”与水合物类似，不同之处在于用除水之外的溶剂诸如甲醇、乙醇、二甲基甲酰胺、二乙醚等替换水。也可制备此类溶剂化物或水合物的混合物。此类溶剂化物或水合物的来源可以是来自结晶的溶剂、制备或结晶的溶剂中固有的或对于此类溶剂是外来的。
“药学上可接受的载剂”是指无毒载剂或赋形剂，其不会破坏与之配制的剂的药理活性，并且当以足以递送治疗量的剂的剂量施用时是无毒的。可在本文所述的组合物中使用的药学上可接受的载剂包括但不限于离子交换剂、氧化铝、硬脂酸铝、卵磷脂、血清蛋白(诸如人血清白蛋白)、缓冲物质(诸如磷酸盐)、甘氨酸、山梨酸、山梨酸钾、饱和植物脂肪酸的偏甘油酯混合物、水、盐或电解质诸如硫酸鱼精蛋白、磷酸氢二钠、磷酸氢钾、氯化钠、锌盐、胶体二氧化硅、三硅酸镁、聚乙烯吡咯烷酮、纤维素基物质、聚乙二醇、羧甲基纤维素钠、聚丙烯酸酯、蜡、聚乙烯-聚氧丙烯嵌段聚合物、聚乙二醇和羊毛脂。
如本文所用，“抗原”是指可被免疫系统识别的任何物质。“抗原”广泛地涵盖蛋白质，诸如酶、肽(诸如多肽)、碳水化合物(诸如多糖)、半抗原、核酸和移植物。抗原可以是自身抗原，即在正常条件下或作为病症的一部分由身体产生的抗原，或外来抗原，即非自身抗原。自身抗原的实例包括与自身免疫病症相关的自身抗原，包括本文所述的任何自身抗原。外来抗原的实例包括抗原疗法(例如，治疗性蛋白质、基因疗法、细胞疗法)、过敏原和同种异体抗原。
如本文所用，“治疗”是指采取步骤将疗法递送至有需要的受试者，诸如哺乳动物(例如，如通过向哺乳动物施用一种或多种治疗剂)。“治疗”包括抑制疾病或病状(例如，通过减缓或停止其进展或引起疾病或病状消退)，以及缓解由疾病或病状引起的症状。
“治疗有效量”是在必要的剂量和时间段内有效实现所需治疗结果(例如，诱导免疫耐受、治疗、治愈、抑制或改善生理反应或病状等)的量。完全的治疗效果并不一定由于施用一次剂量而出现，并且可仅在施用一系列剂量之后才出现。因此，可以一次或多次施用来施用治疗有效量。治疗有效量可根据诸如哺乳动物的疾病状态、年龄、性别和体重、施用模式和治疗剂或治疗剂组合在个体中引发所需反应的能力的因素而变化。
如本文所用，“受试者”包括人、家养动物，诸如实验室动物(例如，狗、猴、猪、大鼠、小鼠等)、家庭宠物(例如，猫、狗、兔等)和牲畜(例如猪、牛、绵羊、山羊、马等)和非家养动物。在一些方面，受试者是人。
化合物
第一实施方案提供具有以下结构式的化合物：
或其药学上可接受的盐，其中：
X是-N(R1)C(O)-、-N(R1)C(O)O-、-N(R1)C(O)N(R2)-、-N(R1)-、-N(R1)SO2-、-O-、-S-、-S(O)-、-S(O)2-或-OP(O)2O-；
R是任选地被一个或多个氟基取代的(C1-C30)烷基或(C1-C30)烯基；
R1是H或(C1-C5)烷基；并且
R2是H或(C1-C5)烷基。
在第一实施方案的第一方面，X是-N(R1)C(O)-或-N(R1)C(O)O-。其余变量的值如第一实施方案所描述。
在第一实施方案的第二方面，X是-N(R1)C(O)-*或-N(R1)C(O)O-*，其中*指示X与R的连接点。其余变量的值如第一实施方案、或其第一方面所描述。
在第一实施方案的第三方面，X是-N(R1)C(O)-*。其余变量的值如第一实施方案、或其第一或第二方面所描述。
在第一实施方案的第四方面，X是-N(R1)C(O)O-*。其余变量的值如第一实施方案、或其第一至第三方面所描述。
在第一实施方案的第五方面，R是任选地被一个或多个氟基取代的(C5-C30)烷基或(C5-C30)烯基。其余变量的值如第一实施方案、或其第一至第四方面所描述。
在第一实施方案的第六方面，R是任选地被一个或多个氟基取代的(C5-C30)烷基。其余变量的值如第一实施方案、或其第一至第五方面所描述。
在第一实施方案的第七方面，R1和R2各自是H。其余变量的值如第一实施方案、或其第一至第六方面所描述。
在第一实施方案的第八方面，X是-N(R1)C(O)-*、-N(R1)C(O)O-*、-N(R1)C(O)N(R2)-*、-N(R1)-、-N(R1)SO2-*、-O-、-S-、-S(O)-、-S(O)2-或-OP(O)2O-，其中*指示X与R的连接点。其余变量的值如第一实施方案、或其第一至第七方面所描述。
在第一实施方案的第九方面，R是任选地被一个或多个氟基取代的(C10-C25)烷基或(C10-C25)烯基。其余变量的值如第一实施方案、或其第一至第八方面所描述。
在第一实施方案的第十方面，R是任选地被一个或多个氟基取代的(C10-C20)烷基或(C10-C20)烯基。其余变量的值如第一实施方案、或其第一至第九方面所描述。
在第一实施方案的第十一方面，R是任选地被一个或多个氟基取代的(C15-C25)烷基或(C15-C25)烯基。其余变量的值如第一实施方案、或其第一至第十方面所描述。
在第一实施方案的第十二方面，R是任选地被一个或多个氟基取代的(C15-C20)烷基或(C15-C20)烯基。其余变量的值如第一实施方案、或其第一至第十一方面所描述。
第二实施方案提供具有以下结构式的化合物：
或其药学上可接受的盐，其中：
X是-N(R1)C(O)-*或-N(R1)C(O)O-*，其中*指示X与R的连接点；
R是任选地被一个或多个氟基取代的(C5-C30)烷基或(C5-C30)烯基；并且
R1是H或(C1-C5)烷基，
前提是所述化合物不是(S)-2-氨基-3-((2E,4E)-己-2,4-二烯酰胺基)丙酸、(S)-2-氨基-3-己酰胺基丙酸、(S)-2-氨基-3-庚酰胺基丙酸、(S)-2-氨基-3-辛酰胺基丙酸或(S)-2-氨基-3-棕榈酰胺基丙酸、或任何前述的盐。
变量的替代值如第一实施方案、或其任何方面所描述。
在第二实施方案的第一方面，R1是H。其余变量的值如第一实施方案、或其任何方面、或第二实施方案所描述。
具有结构式I的化合物的实例包括：
或前述的药学上可接受的盐。
制备具有结构式I的化合物的方法在本文的例示中描述。
组合物和药盒
通常，为了向受试者施用，本公开的化合物与一种或多种药学上可接受的载剂一起配制。本公开提供了此类组合物，包括药物组合物。因此，一个实施方案是包含本公开的化合物和药学上可接受的载剂的组合物(例如，药物组合物)。本文所述的组合物可用于本文所述的方法中，例如，以便提供本公开的化合物。
本文所述的化合物和组合物也可呈脂质颗粒制剂，诸如脂质体制剂形式。因此，一个实施方案是包含一种或多种脂质和本公开的化合物的脂质颗粒(例如，脂质体)。
本文还提供了固体脂质颗粒(例如，脂质体)，其包含至少一种磷脂(例如，含有C4-C30酰基链，诸如饱和C4-C30酰基链的磷脂，如在二肉豆蔻酰磷脂酰胆碱(DMPC)中)和可嵌入脂质颗粒的脂质双层中的治疗剂(例如，本公开的化合物)。已经发现，口服施用此类固体脂质颗粒可用于将脂质颗粒(从而将治疗剂)靶向例如免疫细胞和/或淋巴结，从而增强脂质颗粒和免疫细胞(例如，在淋巴结中)的共定位和/或增强淋巴结对脂质颗粒的摄取。
如本文所用，“脂质颗粒”是指包含至少一种脂质，例如磷脂，诸如溶血磷脂的颗粒。脂质颗粒的实例包括脂质体、胶束和脂质纳米颗粒。脂质颗粒，诸如脂质体，可以是单层的或多层的。脂质颗粒，诸如脂质体，可具有流体脂质膜、或凝胶状或固体脂质膜，例如在高于人的正常体温或约37℃时熔化的脂质膜。在一些方面，脂质颗粒是脂质体。在一些方面，脂质颗粒是脂质纳米颗粒。在一些方面，脂质颗粒是固体。在一些方面，脂质颗粒具有高于约37℃，例如高于约40℃、高于约45℃、高于约50℃、高于约55℃或约55℃的熔化温度。
磷脂的实例包括二肉豆蔻酰磷脂酰胆碱(DMPC)、1,2-二油酰-sn-甘油-3-磷酸胆碱18:1Δ9-Cis PC(DOPC)、1,2-二硬脂酰-sn-甘油-3-磷酸胆碱18:0(DSPC)、1-棕榈酰-2-油酰-甘油-3-磷酸胆碱16:0-18:1(POPC)、磷脂酰丝氨酸(PS)、磷脂酰胆碱(PC)、磷脂酰乙醇胺、磷脂酰肌醇、双磷脂酰甘油、磷脂酸、磷脂酰醇和磷脂酰甘油。磷脂可以是饱和的或不饱和的，即含有一个或多个不饱和单元，并且可含有各种长度的酰基链。在一些方面，磷脂含有C4-C30酰基链，例如，C8-C26、C12-C22、C10-C25、C14-C18或C16-C26酰基链。磷脂可从多种来源获得，包括天然的和合成的。例如，PS可从猪脑PS或植物性大豆(soy)(大豆(soya bean))PS中获得。鸡蛋PC和PS以及合成PC是可商购获得的。在一些方面，磷脂不是PS或其盐(例如，其药学上可接受的盐)。
适合包含在本文所述的脂质颗粒中的其他脂质包括N4-胆固醇-精胺或其盐，诸如N4-胆固醇-精胺HCl盐。N4-胆固醇-精胺HCl盐也称为Genzyme Lipid 67(GL67)，并且是一种用精胺衍生的胆固醇，以便产生阳离子脂质HCl盐。
通常，治疗剂(例如，本公开的化合物)在包含治疗剂的脂质颗粒(例如，脂质体)中的摩尔百分比将是约1％至约50％，例如约1％至约35％、约1％至约25％、约1％至约15％、约3％至约10％、约5％至约50％、约5％至约45％、约15％至约40％、约25％至约35％、约1％、约2％、约3％、约4％、约5％、约6％、约7％、约8％、约9％、约10％、约15％、约25％、约30％或约35％。在一些方面，包含治疗剂的脂质颗粒(例如，脂质体)中治疗剂(例如，本公开的化合物)的摩尔百分比将小于35％，例如小于30％、小于15％、或约1％至约10％。
通常，本文所述的脂质颗粒(例如，脂质体)中脂质的摩尔百分比(单独地或集体地)将是约50％至约99％，例如约50％至约75％、约85％至约99％、约70％、约75％、约85％、约90％、约91％、约92％、约93％、约94％、约95％、约96％、约97％、约98％或约99％。本文所述的脂质颗粒(例如脂质体)中每种脂质的摩尔百分比可以是约1％至约99％，例如约1％至约50％、约1％至约35％、约1％至约25％、约1％至约15％、约3％至约10％、约5％至约50％、约5％至约45％、约15％至约40％、约25％至约35％、约1％、约2％、约3％、约4％、约5％、约6％、约7％、约8％、约9％、约10％、约15％、约25％、约30％或约35％。
本公开的化合物可被封装在本文所述的脂质颗粒，诸如脂质体内，其与脂质头基结合(共价或非共价)，或者优选地全部或部分地、共价或非共价地嵌入于脂质双层(例如，脂质体的脂质双层)中。不希望受任何特定理论的约束，据信本公开的化合物可嵌入脂质体的脂质双层中，从而使本公开的化合物的氨基酸残基暴露于脂质体的外部，从而模仿例如PS的自然表面呈递。
在一些方面，所述一种或多种脂质包括磷脂或其药学上可接受的盐，例如1,2-二肉豆蔻酰-sn-甘油-3-磷酸胆碱(DMPC)或其药学上可接受的盐。在一些方面，磷脂是饱和磷脂，例如含有C4-C30酰基链的饱和磷脂。在一些方面，磷脂是不饱和的，例如，含有C4-C30酰基链的不饱和磷脂。在一些方面，磷脂选自DMPC、DSPC、DOPC或POPC、或前述的药学上可接受的盐。在一些方面，磷脂是DMPC或DSPC、或前述的药学上可接受的盐。
在一些方面，脂质颗粒(例如，脂质体)还包含抗原，诸如本文所述的任何抗原。因此，在一些方面，脂质颗粒还包含基因疗法。在一些其他方面，基因疗法包含DNA和/或RNA以及病毒载体。在一些方面，病毒载体衍生自腺相关病毒(AAV)，诸如重组AAV。在一些方面，AAV是AAV9。适用于本公开内容的病毒载体的其他实例包括衍生自逆转录病毒、疱疹病毒、腺病毒、慢病毒、狂犬病病毒、慢病毒、VSV、痘病毒(例如痘苗病毒、天花病毒、金丝雀痘)、呼肠孤病毒、塞姆利基森林病毒、黄热病病毒、辛德比斯病毒、披膜病毒、杆状病毒、噬菌体、甲病毒和黄病毒的病毒载体。在一些方面，抗原，例如包含DNA和/或RNA和病毒载体的基因疗法，被封装在脂质颗粒内。
预期还包含抗原的脂质颗粒和包含此类脂质颗粒的制剂特别可用于涉及向受试者递送基因疗法(例如，包含DNA和/或RNA的基因疗法)的应用。脂质颗粒预期促进基因疗法和本公开的化合物向免疫系统的共同呈递。此类颗粒可配制用于口服和/或肠胃外(例如皮下、肌内、静脉内、皮内)施用，例如通过注射。
另一个实施方案是包含多个脂质颗粒(例如，包含本公开的化合物的多个脂质颗粒)的组合物(例如，药物组合物)。在一些方面，组合物还包含药学上可接受的载剂。
本文所述的组合物以及因此本公开的化合物可口服、肠胃外(包括皮下、肌内、静脉内和皮内)、通过吸入喷雾、局部、直肠、鼻内、口腔、阴道或通过植入的储存器来施用。如本文所用，术语“肠胃外(parenteral)”和“肠胃外(parenterally)”包括皮下、皮内、静脉内、肌内、眼内、玻璃体内、关节内、动脉内、滑膜内、胸骨内、鞘内、病灶内、肝内、腹膜内、病灶内和颅内注射或输注技术。在一些方面，本文所述的组合物可静脉内和/或腹膜内施用。在一些方面，本文所述的组合物可口服施用。在一些方面，本文所述的组合物可皮下施用。优选地，本文所述的组合物口服、皮下、腹膜内或静脉内施用。
本文提供的组合物可以任何口服可接受的剂型口服施用，所述剂型包括但不限于胶囊、片剂、水性悬浮液、分散液和溶液。在口服使用的片剂的情况下，常用的载剂包括乳糖和玉米淀粉。也通常添加润滑剂诸如硬脂酸镁。对于胶囊形式的口服施用，有用的稀释剂包括乳糖和干的玉米淀粉。当口服使用需要水性悬浮液和/或乳液时，活性成分可悬浮或溶解于油性相中并且与乳化和/或助悬剂组合。如果需要，也可添加某些甜味剂、调味剂或着色剂。
在一些实施方案中，口服制剂被配制用于立即释放或持续/延迟释放。
用于口服施用的固体剂型包括胶囊、片剂、丸剂、粉末和颗粒剂。在此类固体剂型中，活性化合物与至少一种惰性的药学上可接受的赋形剂或载剂(诸如柠檬酸钠或磷酸二钙)和/或以下物质混合：(a)填充剂或增量剂，诸如淀粉、乳糖、蔗糖、葡萄糖、甘露醇以及硅酸，(b)粘合剂，诸如羧甲基纤维素、藻酸盐、明胶、聚乙烯吡咯烷酮、蔗糖以及阿拉伯胶，(c)湿润剂，诸如甘油，(d)崩解剂，诸如琼脂、碳酸钙、马铃薯淀粉或木薯淀粉、藻酸、某些硅酸盐以及碳酸钠，(e)溶液阻滞剂，诸如石蜡，(f)吸收促进剂，诸如季铵盐，(g)润湿剂，诸如鲸蜡醇和单硬脂酸甘油酯，(h)吸附剂，诸如高岭土和膨润土，以及(i)润滑剂，诸如滑石、硬脂酸钙、硬脂酸镁、固体聚乙二醇、月桂基硫酸钠以及其混合物。在胶囊、片剂以及丸剂的情况下，剂型还可包括缓冲剂。
用于口服施用的液体剂型包括药学上可接受的乳液、微型乳液、溶液、悬浮液、糖浆剂以及酏剂。除本公开的化合物外，液体剂型还可含有本领域中常用的惰性稀释剂，诸如水或其他溶剂；增溶剂和乳化剂，诸如乙醇(ethyl alcohol/ethanol)、异丙醇、碳酸乙酯、乙酸乙酯、苯甲醇、苯甲酸苯甲酯、丙二醇、1,3-丁二醇、油(特别是棉籽油、花生油、玉米油、胚芽油、橄榄油、蓖麻油以及芝麻油)、甘油、四氢糠醇、聚乙二醇以及脱水山梨糖醇的脂肪酸酯或其混合物。除惰性稀释剂外，口服组合物还可包括佐剂，诸如润湿剂、乳化剂和助悬剂、甜味剂、调味剂、着色剂、芳香剂以及防腐剂。
适合口腔或舌下施用的组合物包括片剂、锭剂和软锭剂，其中活性成分与载剂诸如糖和阿拉伯胶、黄芪胶或明胶和甘油一起配制。
在使用诸如乳糖(lactose/milk sugar)以及高分子量聚乙二醇等的赋形剂的软填充和硬填充明胶胶囊中也可使用类似类型的固体组合物作为填充剂。可制备具有诸如肠溶包衣和药物配制领域中熟知的其他包衣的包衣和外壳的片剂、糖衣丸、胶囊、丸剂以及颗粒剂的固体剂型。所述固体剂型可任选地含有乳浊剂，并且还可具有使其任选地以延迟方式、仅仅或优先在肠道的某一部分中释放活性成分的组成。可使用的嵌入组合物的实例包括聚合物物质和蜡。
本公开的化合物还可用如上所述的一种或多种赋形剂来微封装。在此类固体剂型中，化合物可与至少一种惰性稀释剂诸如蔗糖、乳糖或淀粉混合。通常的做法是，此类剂型还可包含除惰性稀释剂之外的另外的物质，例如制片润滑剂以及诸如硬脂酸镁和微晶纤维素的其他制片助剂。
用于口服施用的组合物可被设计成保护活性成分在其通过消化道时免遭降解，例如通过片剂或胶囊上的制剂的外包衣。
在另一个方面，本公开的化合物可以延长的(或“延迟的”或“持续的”)释放组合物的形式提供。此延迟释放组合物包含本公开的化合物和延迟释放组分。这种组合物允许将化合物靶向释放到例如下胃肠道中，例如释放到小肠、大肠、结肠和/或直肠中。在某些方面，延迟释放组合物还包含肠溶或pH依赖性包衣，诸如邻苯二甲酸醋酸纤维素和其他邻苯二甲酸酯(例如聚醋酸乙烯邻苯二甲酸酯、甲基丙烯酸酯(Eudragits))。替代地，延迟释放组合物可通过提供pH敏感的甲基丙烯酸酯包衣、pH敏感的聚合物微球或通过水解而经受降解的聚合物来向小肠和/或结肠提供受控释放。延迟释放组合物可与疏水性或胶凝赋形剂或包衣一起配制。结肠递送还可通过被细菌酶(诸如直链淀粉或果胶)消化的包衣、通过pH依赖性聚合物、通过随时间膨胀的水凝胶塞(Pulsincap)、通过时间依赖性水凝胶包衣和/或通过连接至偶氮芳族键包衣的丙烯酸来提供。
本文所述的组合物还可例如以无菌可注射制剂的形式，例如作为无菌可注射水性或油性悬浮液来皮下、腹膜内或静脉内施用。可根据本领域已知的技术使用合适的分散或湿润剂(诸如例如Tween 80)及助悬剂来配制这种悬浮液。无菌可注射制剂还可以是在无毒肠胃外可接受的稀释剂或溶剂中的无菌可注射溶液或悬浮液，例如在1,3-丁二醇中的溶液。可采用的可接受的媒介物和溶剂是甘露糖醇、右旋糖、水、林格氏溶液(Ringer'ssolution)、乳酸林格氏溶液和等渗氯化钠溶液。此外，无菌、不挥发性油通常用作溶剂或悬浮介质。为了此目的，可采用任何温和不挥发性油，包括合成的单甘油酯或二甘油酯。脂肪酸诸如油酸及其甘油酯衍生物可用于注射剂的制备，如同尤其处于其聚氧乙烯化形式的天然药学上可接受的油诸如橄榄油或蓖麻油一样。这些油溶液或悬浮液还可含有长链醇稀释剂或分散剂，或羧甲基纤维素或通常用于配制药学上可接受的剂型(诸如乳液和或悬浮液)的类似分散剂。其他常用的表面活性剂，诸如Tween或Span和/或通常用于制造药学上可接受的固体、液体或其他剂型的其他类似乳化剂或生物利用度增强剂也可用于达成制剂的目的。
本文所述的组合物还可以用于直肠施用的栓剂的形式施用。这些可通过将本公开的化合物与合适的无刺激性的赋形剂混合来制备，所述赋形剂在室温下是固体但在直肠温度下是液体，并因此将在直肠中熔化以释放药物。此类材料包括可可脂、蜂蜡和聚乙二醇。
本文所述的组合物还可局部施用，尤其当治疗目标包括通过局部施用容易达到的区域或器官，包括眼、皮肤或下肠道的疾病。对于这些区域或器官中的每一者，容易制备合适的局部制剂。
下肠道的局部施用可以直肠栓剂制剂(参见上文)或以合适的灌肠制剂实现。还可使用局部的透皮贴剂。
对于其他局部施用，可将组合物配制成含有悬浮或溶解于一种或多种载剂中的活性组分的合适软膏剂。用于本文所述的化合物的局部施用的载剂包括但不限于矿物油、液体凡士林、白凡士林、丙二醇、聚氧乙烯、聚氧丙烯化合物、乳化蜡和水和渗透增强剂。替代地，可将组合物配制成含有悬浮或溶解于一种或多种药学上可接受的载剂中的活性化合物的合适洗剂或霜剂。替代地，可将组合物配制成含有悬浮或溶解于载剂中的活性化合物与合适乳化剂的合适洗剂或霜剂。合适的载剂包括但不限于矿物油、单硬脂酸脱水山梨糖醇酯、聚山梨酯60、鲸蜡基酯蜡、鲸蜡硬脂醇、2-辛基十二烷醇、苄醇和水。合适的载剂还包括但不限于矿物油、单硬脂酸脱水山梨糖醇酯、聚山梨酯60、鲸蜡基酯蜡、鲸蜡硬脂醇、2-辛基十二烷醇、苄醇和水和渗透增强剂。
对于眼科用途，可在使用或不使用诸如苯扎氯铵的防腐剂的情况下，将组合物在等渗的、经pH调整的无菌生理盐水中配制成微粉化悬浮液，或者，优选地，在等渗的、经pH调整的无菌生理盐水中配制成溶液。替代地，对于眼科用途，可将组合物配制成诸如凡士林的软膏。
组合物还可通过鼻气雾剂或吸入来施用。根据药物配制领域中熟知的技术制备此类组合物，并且可采用苄醇或其他合适的防腐剂、增强生物利用率的吸收促进剂、碳氟化合物和/或其他常规增溶或分散剂将此类组合物制备成在生理盐水中的溶液。不希望受任何特定理论的约束，据信可例如通过鼻气雾剂或吸入实现的本文所述的组合物的局部递送可降低组合物的全身后果的风险，例如，对红细胞的影响。
可用于本文所述的组合物中的其他药学上可接受的载剂包括但不限于离子交换剂、氧化铝、硬脂酸铝、卵磷脂、自乳化药物递送系统(SEDDS)诸如d-α-生育酚聚乙二醇1000琥珀酸酯、用于药物剂型中的表面活性剂诸如Tween或其他类似聚合物递送基质、血清蛋白诸如人血清白蛋白、缓冲物质诸如磷酸盐、甘氨酸、山梨酸、山梨酸钾、饱和植物脂肪酸的偏甘油酯混合物、水、盐或电解质诸如硫酸鱼精蛋白、磷酸氢二钠、磷酸氢钾、氯化钠、锌盐、胶体二氧化硅、三硅酸镁、聚乙烯吡咯烷酮、纤维素基物质、聚乙二醇、羧甲基纤维素钠、聚丙烯酸酯、蜡、聚乙烯-聚氧丙烯嵌段聚合物、聚乙二醇和羊毛脂。环糊精诸如α-、β-和γ-环糊精，或其化学修饰的衍生物，诸如羟烷基环糊精，包括羟丙基-β-环糊精，诸如2-和/或3-羟丙基-β-环糊精或其其他增溶的衍生物也可有利地用作本文所述的组合物中的药学上可接受的载剂，例如以增强本文所述的剂的递送。
一个实施方案是包含本公开的化合物(例如，包含本公开的化合物的多个脂质颗粒，诸如本文所述的任何脂质颗粒)和环糊精或其化学修饰的衍生物的组合物。在一些方面，环糊精或其化学修饰的衍生物包含羟烷基环糊精，例如羟丙基-β-环糊精。在一些方面，本公开的化合物和环糊精(例如，羟烷基环糊精，诸如羟丙基-β-环糊精)以约1至约50重量/重量(w/w)至约1至约250重量/重量，例如，约1至约50重量/重量至约1至约100重量/重量，约1至约80重量/重量或约1至约166重量/重量的比率存在。在一些方面，组合物还包含稀释剂，诸如水。在一些方面，组合物还包含甜味剂和/或调味剂。
在一些方面，所述组合物是液体剂型；在其他方面，所述组合物是用于口服施用的液体剂型。
在一些方面，本文所述的组合物还包含一种或多种另外的治疗剂，例如，用于与本公开的化合物组合使用。
一些实施方案提供了包含本公开的化合物(例如，包含本公开的化合物的本文所述的组合物)和一种或多种另外的治疗剂(例如，包括一种或多种另外的治疗剂的一种或多种组合物)的组合(例如，药物组合)。例如，当本公开的化合物和一种或多种另外的治疗剂分开施用时，此类组合特别有用。在本文提供的组合中，本公开的化合物和一种或多种另外的治疗剂可通过相同的施用途径或通过不同的施用途径施用。
一个实施方案是包括本公开的化合物(例如，包含本公开的化合物的本文所述的组合物)和抗原(例如，本文所述的任何抗原，诸如抗原疗法)的药盒。在一方面，药盒包括治疗有效量的本公开化合物(例如，足以使受试者对拟施用的抗原免疫耐受的量；治疗有效量的治疗本文所述的疾病、病症或病状的化合物)。在一些方面，其中抗原是抗原疗法，药盒包括治疗有效量的治疗疾病、病症或病状的抗原疗法。在一些方面，药盒还包括另外的治疗剂(例如，包含另外的治疗剂的组合物)。在一些方面，药盒还包括用于向受试者施用本公开的化合物和/或抗原和/或另外的剂以治疗本文所述的疾病、病症或病状的书面说明书。
合适的另外的治疗剂包括本文关于组合疗法描述的那些。
本文所述的组合物可以单位剂型提供。可与载剂组合以产生单位剂型的活性成分的量将根据例如所治疗受试者和特定施用模式而变化。通常，单位剂型将含有约1至约1,000mg活性成分，例如约1至约500mg、约1至约250mg、约1至约150mg、约0.5至约100mg、或约1至约50mg的活性成分。在一些方面，单位剂型含有约0.01mg至约100mg活性成分，例如约0.1mg至约50mg、约0.1mg至约10mg、约0.5mg至约50mg活性成分。在一些方面，单位剂型含有约1mg至约5,000mg活性成分，例如约10mg至约2,500mg、约15mg至约1,000mg、或约100mg至约1,000mg活性成分。在一些方面，单位剂型含有约15mg、约30mg、约50mg、约100mg、约125mg或约150mg活性成分。
在一些方面，药物组合物中提供的一种或多种治疗剂的浓度小于100％、90％、80％、70％、60％、50％、40％、30％、20％、19％、18％、17％、16％、15％,14％、13％、12％、11％、10％、9％、8％、7％、6％、5％、4％、3％、2％、1％、0.5％、0.4％、0.3％、0.2％、0.1％、0.09％、0.08％、0.07％、0.06％、0.05％、0.04％、0.03％、0.02％、0.01％、0.009％、0.008％、0.007％、0.006％、0.005％、0.004％、0.003％、0.002％、0.001％、0.0009％、0.0008％、0.0007％、0.0006％、0.0005％、0.0004％、0.0003％、0.0002％、或0.0001％重量/重量、重量/体积或体积/体积；和/或大于90％、80％、70％、60％、50％、40％、30％、20％、19.75％、19.50％、19.25％19％、18.75％、18.50％、18.25％18％、17.75％、17.50％、17.25％17％、16.75％、16.50％、16.25％16％、15.75％、15.50％、15.25％15％、14.75％、14.50％、14.25％14％、13.75％、13.50％、13.25％13％、12.75％、12.50％、12.25％12％、11.75％、11.50％、11.25％11％、10.75％、10.50％、10.25％10％、9.75％、9.50％、9.25％9％、8.75％、8.50％、8.25％8％、7.75％、7.50％、7.25％7％、6.75％、6.50％、6.25％6％、5.75％、5.50％、5.25％5％、4.75％、4.50％、4.25％、4％、3.75％、3.50％、3.25％、3％、2.75％、2.50％、2.25％、2％、1.75％、1.50％、125％、1％、0.5％、0.4％、0.3％、0.2％、0.1％、0.09％、0.08％、0.07％、0.06％、0.05％、0.04％、0.03％、0.02％、0.01％、0.009％、0.008％、0.007％、0.006％、0.005％、0.004％、0.003％、0.002％、0.001％、0.0009％、0.0008％、0.0007％、0.0006％、0.0005％、0.0004％、0.0003％、0.0002％、或0.0001％重量/重量、重量/体积或体积/体积。
在一些方面，药物组合物中提供的一种或多种治疗剂的浓度在约0.0001％至约50％、约0.001％至约40％、约0.01％至约30％、约0.02％至约29％、约0.03％至约28％、约0.04％至约27％、约0.05％至约26％、约0.06％至约25％、约0.07％至约24％、约0.08％至约23％、约0.09％至约22％、约0.1％至约21％、约0.2％至约20％、约0.3％至约19％、约0.4％至约18％、约0.5％至约17％、约0.6％至约16％、约0.7％至约15％、约0.8％至约14％、约0.9％至约12％、约1％至约10％重量/重量、重量/体积或体积/体积的范围内。在一些实施方案中，药物组合物中提供的一种或多种治疗剂的浓度在约0.001％至约10％、约0.01％至约5％、约0.02％至约4.5％、约0.03％至约4％、约0.04％至约3.5％、约0.05％至约3％、约0.06％至约2.5％、约0.07％至约2％、约0.08％至约1.5％、约0.09％至约1％、约0.1％至约0.9％重量/重量、重量/体积或体积/体积的范围内。
使用方法
现已发现，本公开的多种化合物和本文所述的组合物能够例如以比其天然配体磷脂酰丝氨酸(PS)更高的亲和力结合TIM，并减弱免疫反应。
一个实施方案是调节T细胞免疫球蛋白和粘蛋白结构域(TIM)受体的表达或活性的方法，其包括使细胞(例如，表达TIM受体的细胞，诸如免疫细胞)与本公开的化合物(例如，治疗有效量的本公开的化合物)接触。TIM受体是1型细胞表面糖蛋白，并且在人中表达的TIM受体TIM1、TIM3和TIM4已被鉴定为磷脂酰丝氨酸受体。TIM1优先在T辅助细胞2上表达，并作为T细胞激活的有效共刺激分子。TIM3优先在T辅助细胞1、1型T细胞和树突状细胞上表达，并产生抑制信号，导致T辅助细胞1和1型T细胞凋亡。TIM4在抗原呈递细胞上表达，并且介导凋亡细胞的吞噬作用，从而促进耐受。在一些方面，TIM受体是TIM3受体。在一些方面，TIM受体是TIM4受体。在一些方面，TIM受体是TIM1受体。例如，在文献中，“TIM”也被称为“Tim”。
现在还发现TIM受体激动剂至少抑制Toll样受体(TLR)3和TLR7的活性，而基本上不抑制TLR 2和4的活性，TLR 2和4很大程度上识别由细菌呈递的模式。Toll样受体(TLR)形成在先天免疫细胞上表达的模式识别受体家族，并且构成免疫系统对抗微生物的第一道防线。迄今为止，已鉴定出十种人TLR亚型。TLR 1、2、4、5、6和10在细胞表面上表达，并且TLR3、7、8和9定位于内质网、内体和溶酶体。TLR 1、2和6识别并结合细菌脂蛋白和糖脂。TLR 3、7、8和9识别并结合核酸，诸如病毒dsRNA(TLR3)、ssRNA(TLR7、TLR8)和未甲基化的CpG DNA(TLR9)。TLR4识别并结合纤连蛋白和LPS。TLR5识别并结合细菌鞭毛蛋白。不希望受任何特定理论的约束，据信本公开的化合物不会导致一般的免疫抑制，但可以更具选择性和特异性的方式发挥其作用。
另一个实施方案是调节(例如，抑制)TLR3、TLR7、TLR8和/或TLR9的活性的方法，其包括使细胞(例如，表达TLR3、TLR7、TLR8和/或TLR9的细胞；免疫细胞)与本公开的化合物(例如，治疗有效量的本公开的化合物)接触。在一些方面，本公开的化合物选择性调节(例如，抑制)TLR3、TLR7、TLR8和/或TLR9的活性，例如与调节TLR 1、2、4、5、6和/或10的活性相比，在更大程度上调节(例如，抑制)TLR3、TLR7、TLR8和/或TLR9的活性。例如，与本公开的化合物对于TLR 1、2、4、5、6和/或10的活性的调节(例如，抑制)相比，所述化合物对于TLR3、TLR7、TLR8和/或TLR9的活性的调节(例如，抑制)可大两倍以上，例如，五倍以上、10倍以上、25倍以上或100倍以上。在一些方面，所述化合物不在可测量的程度上调节(例如，抑制)TLR1、2、4、5、6和/或10的活性。
在本文所述的方法的一些方面，细胞是免疫细胞，例如T细胞，诸如调控性T细胞、自然杀伤(NK)细胞、巨噬细胞、嗜中性粒细胞、骨髓源性抑制细胞或树突状细胞。在一些方面，免疫细胞是FoxP3+和/或CD4+，诸如FoxP3+和/或CD4+T细胞。在一些方面，免疫细胞是B细胞，诸如调控性B细胞。在一些方面，免疫细胞(例如调控性B细胞)是CD19+、CD71+、IgM+、CD24+、CD38+和/或CD27+。
在本文所述的方法的一些方面，所述方法在体外进行。在本文所述的方法的其他方面，所述方法在体内进行。因此，在一些方面，细胞(例如，免疫细胞)位于受试者(例如，患有本文所述的疾病、病症或病状的受试者)中。
另一个实施方案是使有需要的受试者(例如，患有自身免疫病症，诸如本文所述的自身免疫病症的受试者)免疫耐受的方法，其包括向受试者施用治疗有效量的例如呈本文所述的组合物形式的本公开的化合物。
另一个实施方案是使有需要的受试者对抗原(例如抗原疗法)免疫耐受的方法，其包括向受试者施用治疗有效量的例如呈本文所述的组合物形式的本公开的化合物。一些方面包括向受试者施用抗原或其免疫原性片段以及治疗有效量的例如呈本文所述的组合物形式的本公开的化合物。一些方面包括向受试者施用本文所述的包含本公开的化合物和抗原或其免疫原性片段的组合物，例如包含多个脂质颗粒的组合物，其中每个脂质颗粒包含本公开的化合物和抗原或其免疫原性片段。在一些方面，抗原或其免疫原性片段和本公开的化合物以单独制剂施用于受试者。
如本文所用，“免疫耐受”是指减少和/或消除例如针对抗原的免疫反应。例如，免疫反应可通过免疫机能亢进、炎性细胞因子释放和/或免疫细胞(诸如巨噬细胞、嗜中性粒细胞、嗜酸性粒细胞、T细胞和B细胞)的激活来证明。如本文所用，“免疫耐受”涵盖例如降低免疫机能亢进、抑制炎性细胞因子释放和/或抑制激活和/或中和免疫细胞，诸如巨噬细胞、嗜中性粒细胞、嗜酸性粒细胞、T细胞和B细胞。在临床环境中，免疫耐受可通过例如自身免疫疾病的严重程度降低和/或所施用的抗原疗法的活性改善来证明。
因此，免疫耐受的过程可沿着从例如针对抗原的免疫机能亢进到免疫机能减退到免疫无反应的连续体来观察。“免疫耐受”涵盖沿着这个连续体朝着免疫无反应，以及诱导免疫机能减退或免疫无反应的逐步改善。换句话说，免疫耐受包括降低免疫不耐受水平和诱导免疫耐受。在本文所述的某些优选实施方案中，所述方法诱导免疫耐受。
在一些方面，表现出免疫不耐受的受试者或免疫不耐受受试者具有例如针对抗原的可测量的免疫反应，诸如响应于抗原的可测量的抗体产生。在一些方面，表现出免疫不耐受的受试者或免疫不耐受受试者不具有例如针对抗原的可测量的免疫反应，诸如响应于抗原的可测量的抗体产生。ELISA和/或活性测定法，包括本文所述的那些，是本领域已知的，并且可用于测量指示免疫不耐受的抗体产生。
在一些自身免疫疾病中，抗体并不总是存在。此类情况下的免疫不耐受可通过自身免疫疾病的临床症状和/或自身反应性T细胞或B细胞的存在和/或其他炎症免疫细胞(诸如嗜中性粒细胞、嗜酸性粒细胞等)的增加来明显体现。在一些方面，表现出免疫不耐受的受试者或免疫不耐受受试者(例如，患有自身免疫疾病，诸如本文所述的自身免疫疾病的受试者)具有可测量的细胞因子反应。例如，患有类风湿性关节炎的受试者可能具有可测量的TNF-α反应。在一些方面，表现出免疫不耐受的受试者或免疫不耐受受试者(例如，患有自身免疫疾病，诸如本文所述的自身免疫疾病的受试者)不具有可测量的细胞因子反应。
免疫耐受可以一般或抗原特异性方式实现，分别导致例如一般或抗原特异性免疫耐受(例如，一般或特异性、获得性或适应性免疫耐受)。一般免疫耐受的指标包括，例如：(a)免疫机能亢进和/或抗炎细胞因子释放的不存在和/或减少；(b)中和免疫细胞，诸如巨噬细胞、嗜中性粒细胞、嗜酸性粒细胞、T细胞和B细胞；(c)调控性T细胞数量和/或耐受原性T细胞(例如，FoxP3+/CD4+T细胞；CD4+/CD25hi/Foxp3+/CTLA4+/Tim3+/NRP1+/ICOS-T细胞；CD4+/CD25hi/Foxp3+/CT LA4+/Tim3+T细胞；和/或CD4+/CD25hi/Foxp3+/CTLA4+/NRP1+/ICOS-T细胞)的活性或水平增加；和/或(d)调控性B细胞(例如，CD19+/CD71+/IgM+/CD24+/CD38+/CD27+B细胞；和/或CD19+/CD71+/IgM+B细胞)数量的增加。抗原特异性免疫耐受的指标包括，例如：(a)抗原特异性调控性T细胞(例如，CD$+/Fo xP3+T细胞；CD4+/CD25hi/Foxp3+/CTLA4+/Tim3+/NRP1+/ICOS-T细胞；CD4+/CD25hi/Foxp3+/CTLA4+/Tim3+T细胞；和/或CD4+/CD25hi/Foxp3+/CTLA4+/NRP1+/ICOS-T细胞)数量的增加；(b)抗原特异性抗体滴度和/或B细胞(包括抗原特异性记忆B细胞)数量的减少；(c)IL-6和/或IL-17的减少；(d)TGF-β、IL-10、IL-35、CD40、CD80和/或CD86的增加；(e)用抗原再次攻击后反应低下；和/或(f)抗原特异性调控性B细胞(例如，CD19+/CD71+/IgM+/CD24+/CD38+/CD 27+B细胞；和/或CD19+/CD71+/IgM+B细胞)数量的增加。用于评价这些指标的技术是本领域已知的并且在本文中进行了描述。例如，可使用培养条件来评价上述某些指标。
在自身免疫疾病中，用本公开的化合物治疗导致天然调控性T细胞的扩增。这种治疗不会干扰先天免疫反应，诸如先天免疫细胞响应于病原体危险信号而产生的反应，但会导致一般适应性免疫耐受。因此，本文可在没有一般先天免疫抑制的情况下实现免疫耐受，使得例如受试者仍然可对抗原(例如病原体)产生先天免疫反应。在一些方面，免疫耐受是一般适应性免疫耐受。在一些方面，免疫耐受是抗原特异性的，例如，导致针对特定抗原的免疫不耐受降低或针对特定抗原的免疫耐受。
在一些方面，免疫耐受是普遍的，例如，导致免疫不耐受普遍降低或一般免疫耐受。
应了解，根据本文所述的方法，不仅可通过向受试者施用特异性抗原和治疗有效量的本公开的化合物或本文所述的组合物，还可或替代地通过向受试者施用特定抗原的免疫原性片段和治疗有效量的本公开的化合物或本文所述的组合物来实现抗原特异性免疫耐受。
如本文所用，抗原的“免疫原性片段”是指诱导针对所述抗原的免疫反应的抗原片段。抗原的免疫原性片段可在受试者中诱导免疫反应，其程度与抗原本身诱导的免疫反应相似，但不需要诱导与抗原本身相同程度的免疫反应，只要当根据本文所述的方法施用时，其具有免疫耐受作用。
另一个实施方案是抑制或降低受试者中的抗原特异性抗体滴度的方法，其包括向受试者施用抗原或其免疫原性片段以及治疗有效量的例如呈本文所述的组合物形式的本公开的化合物。一些方面包括向受试者施用本文所述的包含本公开的化合物和抗原或其免疫原性片段的组合物，例如包含多个脂质颗粒的组合物，其中每个脂质颗粒包含本公开的化合物和抗原或其免疫原性片段。在一些方面，抗原或其免疫原性片段和本公开的化合物以单独制剂施用于受试者。
在本文所述的方法的一些方面，抗原是过敏原，诸如食物过敏原或乳胶过敏原。食物过敏原的实例包括花生过敏原，诸如Ara h I或Ara h II；核桃过敏原，诸如Jug r I；巴西坚果过敏原，诸如白蛋白；虾过敏原，诸如Pen a I；鸡蛋过敏原，诸如卵类粘蛋白；牛奶过敏原，诸如牛β-乳珠蛋白；小麦麸质抗原，诸如麦醇溶蛋白)；和鱼类过敏原，诸如小清蛋白。乳胶过敏原的实例是Hey b 7。其他过敏原包括抗原E或Amb a I(豚草花粉)；来自草的蛋白质抗原，诸如Lol p 1(草)；尘螨过敏原，诸如Der pI和Der PII(尘螨)；Fel d I(家猫)；以及来自树木花粉的蛋白质抗原，诸如Bet v1(白桦)、和Cry j 1和Cry j 2(日本雪松)。每种过敏原旁边括号中列出的过敏原来源表示与指示的过敏原通常相关的来源。
另一个实施方案是在受试者中诱导调控性T细胞群的方法，其包括向受试者施用治疗有效量的例如呈本文所述的组合物形式的本公开的化合物。一些方面还包括向受试者施用抗原或其免疫原性片段，响应于所述抗原或其免疫原性片段而诱导调控性T细胞群。一些方面包括向受试者施用本文所述的包含本公开的化合物和抗原或其免疫原性片段的组合物，例如包含多个脂质颗粒的组合物，其中每个脂质颗粒包含本公开的化合物和抗原或其免疫原性片段。在一些方面，抗原或其免疫原性片段和本公开的化合物以单独制剂施用于受试者。
不希望受任何特定理论的约束，据信本公开的化合物主要通过扩增天然调控性T细胞(nTreg，例如，作为FoxP3+/NRP1+的调控性T细胞)群来诱导调控性T细胞群。本公开的化合物还诱导或上调可诱导的调控性T细胞(iTreg，例如FoxP3+T细胞、FoxP3+/TIM3+T细胞)。因此，在一些方面，诱导调控性T细胞群的方法是例如在基本上不诱导可诱导的调控性T细胞的情况下，扩增天然调控性T细胞(例如，作为FoxP3+/NRP1+的调控性T细胞)群的方法。神经毡蛋白-1(Nrp1)表达可用于区分例如如本文所述的天然和可诱导的调控性T细胞。因此，在一些方面，诱导调控性T细胞群的方法是例如通过扩增天然调控性T细胞群来诱导表达Nrp1的调控性T细胞(例如，FoxP3+/NRP1+T细胞)群的方法。不希望受任何特定理论的约束，预期例如在基本上不诱导可诱导的调控性T细胞的情况下，扩增天然调控性T细胞(例如，FoxP3+/NRP1+的调控性T细胞)群的能力将有利于治疗自身免疫疾病，而不影响一般的免疫抑制。
在一些方面，调控性T细胞是FoxP3+，例如，FoxP3+/TIM3+、FoxP3+/NRP1+。调控性T细胞对于任何上述标志物是阳性(+)还是阴性(-)可例如通过流式细胞术分析来确定。
另一个实施方案是增加受试者的耐受原性T细胞的活性或水平的方法，其包括向受试者施用治疗有效量的例如呈本文所述的组合物形式的本公开的化合物。
另一个实施方案是在受试者中诱导调控性B细胞群的方法，其包括向受试者施用治疗有效量的例如呈本文所述的组合物形式的本公开的化合物。一些方面还包括向受试者施用抗原或其免疫原性片段，响应于所述抗原或其免疫原性片段而诱导调控性B细胞群。一些方面包括向受试者施用本文所述的包含本公开的化合物和抗原或其免疫原性片段的组合物，例如包含多个脂质颗粒的组合物，其中每个脂质颗粒包含本公开的化合物和抗原或其免疫原性片段。在一些方面，抗原或其免疫原性片段和本公开的化合物以单独制剂施用于受试者。
已经发现本公开的化合物增加B细胞上的某些调控性标志物诸如CD19、CD71和IgM的表达，并且由此诱导CD19+/CD71+/IgM+B细胞群。在一些方面，调控性B细胞是CD19+、CD71+、IgM+、CD24+、CD38+和/或CD27+，例如CD19+/CD71+/IgM+。调控性B细胞对于任何上述标志物是阳性(+)还是阴性(-)可例如通过流式细胞术分析来确定。
另一个实施方案是治疗受试者的自身免疫病症的方法，其包括向受试者施用治疗有效量的例如呈本文所述的组合物形式的本公开的化合物。应理解，在自身免疫病症中，可能需要例如通过诱导调控性T细胞群来诱导一般适应性免疫耐受(immunotolerization)(例如，免疫耐受(immune tolerance))，或例如通过使受试者对与自身免疫病症相关的自身抗原或其免疫原性片段免疫耐受来诱导特异性免疫耐受(immunotolerization)(例如，免疫耐受(immune tolerance))。因此，在治疗自身免疫病症的方法的一些方面，所述方法还包括向受试者施用(例如共同施用)与自身免疫病症相关的自身抗原或其免疫原性片段。一些方面包括向受试者施用本文所述的包含本公开的化合物和自身抗原或其免疫原性片段的组合物，例如包含多个脂质颗粒的组合物，其中每个脂质颗粒包含本公开的化合物和自身抗原或其免疫原性片段。在一些方面，自身抗原或其免疫原性片段和本公开的化合物以单独制剂施用于受试者。
可根据本文所述的方法治疗的自身免疫病症的具体实例包括贲门失弛缓症、阿狄森病(Addison’s disease)、成人斯蒂尔病(adult Still's disease)、无丙种球蛋白血症、斑秃、淀粉样变性、强直性脊柱炎、抗GBM/抗TBM肾炎、抗磷脂综合征、自身免疫血管性水肿、自身免疫自主神经功能障碍、自身免疫脑脊髓炎、自身免疫肝炎、自身免疫内耳病(AIED)、自身免疫心肌炎、自身免疫卵巢炎、自身免疫睾丸炎、自身免疫胰腺炎、自身免疫视网膜病变、自身免疫荨麻疹、轴突和神经元神经病(AMAN)、病、白塞氏病(Behcet’s disease)、良性粘膜类天疱疮、大疱性类天疱疮、卡斯尔曼病(Castleman disease，CD)、乳糜泻、恰加斯病(Chagas disease)、慢性炎性脱髓鞘性多发性神经病(CIDP)、慢性复发性多灶性骨髓炎(CRMO)、Churg-Strauss综合征(CSS)或嗜酸性肉芽肿病(EGPA)、疤痕性类天疱疮、科根氏综合征(Cogan’s syndrome)、冷凝集素病、先天性心脏传导阻滞、柯萨奇心肌炎(Coxsackiemyocarditis)、CREST综合征、克罗恩病、疱疹样皮炎、皮肌炎、德维克氏病(Devic’sdisease)(视神经脊髓炎)、盘状狼疮、德雷斯勒综合征(Dressler’s syndrome)、子宫内膜异位症、嗜酸粒细胞性食管炎(EoE)、嗜酸性粒细胞性筋膜炎、结节性红斑、原发性混合性冷球蛋白血症、埃文斯综合征(Evans syndrome)、纤维肌痛、纤维化肺泡炎、巨细胞动脉炎(颞动脉炎)、巨细胞心肌炎、肾小球肾炎、古德帕斯彻综合征(Goodpasture’s syndrome)、肉芽肿性多血管炎、格雷夫斯病(Graves’disease)、格林巴利综合征(Guillain-Barresyndrome)、桥本甲状腺炎、溶血性贫血、过敏性紫癜(HSP)、妊娠疱疹或妊娠类天疱疮(PG)、化脓性汗腺炎(HS)(反痤疮)、低丙球蛋白血症、IgA肾病、IgG4相关硬化性疾病、免疫性血小板减少性紫癜(ITP)、包涵体肌炎(IBM)、间质性膀胱炎(IC)、幼年关节炎、幼年糖尿病(1型糖尿病)、幼年肌炎(JM)、川崎病、Lambert-Eaton综合征、白细胞破碎性血管炎、扁平苔藓、硬化性苔藓、木质结膜炎、线性IgA疾病(LAD)、狼疮、慢性莱姆病(Lyme disease chronic)、梅尼埃病(Meniere’s disease)、显微镜下多血管炎(MPA)、混合结缔组织病(MCTD)、蚕蚀性溃疡、穆哈-哈伯曼病、多灶性运动神经病(MMN)或MMNCB、多发性硬化症、重症肌无力、肌炎、发作性睡病、新生儿狼疮、视神经脊髓炎、中性粒细胞减少症、眼部瘢痕性类天疱疮、视神经炎、回文性风湿病(PR)、PANDAS、副肿瘤性小脑变性(PCD)、阵发性睡眠性血红蛋白尿症(PNH)、Parry Romberg综合征、扁平部炎(周围性葡萄膜炎)、Parsonage-Turner综合征、天疱疮、周围神经病、静脉周围脑脊髓炎、恶性贫血(PA)、POEMS综合征、结节性多动脉炎、I、II和III型多腺体综合征、风湿性多肌痛、多发性肌炎、心肌梗死后综合征、心包切开术后综合征、原发性胆汁性肝硬化、原发性硬化性胆管炎、黄体酮皮炎、银屑病、银屑病关节炎、纯红细胞再生障碍性贫血(PRCA)、坏疽性脓皮病、雷诺现象、反应性关节炎、反射性交感神经营养不良、复发性多软骨炎、不安腿综合征(RLS)、腹膜后纤维化、风湿病发热、类风湿性关节炎、结节病、施密特综合征(Schmidt syndrome)、巩膜炎、硬皮病、干燥综合征、精子和睾丸自身免疫、僵人综合征(SPS)、亚急性细菌性心内膜炎(SBE)、苏萨克综合征(Susac’ssyndrome)、交感性眼炎(SO)、大动脉炎、颞动脉炎/巨细胞动脉炎、血小板减少性紫癜(TTP)、甲状腺眼病(TED)、Tolosa-Hunt综合征(THS)、横贯性脊髓炎、1型糖尿病、溃疡性结肠炎(UC)、未分化结缔组织病(UCTD)、葡萄膜炎、血管炎、白癜风或沃格特-小柳-原田病。
在一些方面，自身免疫病症是神经性自身免疫病症。神经性自身免疫病症的实例包括多发性硬化症、视神经脊髓炎、重症肌无力、抗髓鞘少突胶质细胞糖蛋白抗体疾病(MOG)、MOG抗体相关病症(MOGAD，例如MOG相关儿童脱髓鞘疾病)、自身免疫脑炎、急性播散性脑脊髓炎(ADEM)、慢性脑膜炎、中枢神经系统血管炎、吉兰-巴利综合征(Guillain-Barresyndrome)、桥本甲状腺炎、与自身免疫甲状腺炎相关的类固醇反应性脑病(SREAT)、神经结节病、视神经炎和横贯性脊髓炎。
在一些方面，自身免疫病症是类风湿性关节炎、系统性红斑狼疮、炎性肠病(IBD)、多发性硬化症、1型糖尿病、吉兰-巴利综合征、慢性炎性脱髓鞘性多发性神经病、牛皮癣、格雷夫斯病、桥本甲状腺炎、重症肌无力或血管炎。在一些方面，自身免疫病症是系统性红斑狼疮。在一些方面，自身免疫病症是IBD。
在一些方面，自身免疫病症是多发性硬化症、视神经脊髓炎、髓鞘少突胶质细胞糖蛋白抗体相关疾病(MOGAD)、类风湿性关节炎或重症肌无力。在一些方面，自身免疫病症是多发性硬化症。在一些方面，自身免疫病症是视神经脊髓炎。在一些方面，自身免疫病症是MOGAD。在一些方面，自身免疫病症是类风湿性关节炎。在一些方面，自身免疫病症是重症肌无力。
多发性硬化症的临床管理通常遵循两种范式之一：升级范式或诱导/维持范式。在升级范式中，在低效力和低功效的DMT治疗失败后，给予增加功效和效力(且发生严重不良事件的风险更大)的疾病修饰疗法(DMT)。通常，升级范式中的标准护理疗法涉及醋酸格拉替雷(glatiramer acetate)、干扰素β和/或特立氟胺(teriflunimude)治疗，在治疗失败后升级为芬戈莫德(fingolimod)和/或富马酸二甲酯，在治疗失败后进一步升级为那他珠单抗(natalizumab)和/或抗B细胞，在治疗失败后进一步升级为阿仑单抗(alemtuzumab)和/或米托蒽醌(mitoxantrone)。
用于多发性硬化症临床管理的诱导/维持治疗范式包括诱导阶段，随后是维持阶段。患者在诱导阶段接受高效力DMT治疗以诱导疾病控制，随后在维持阶段切换至更安全、效力较低的DMT进行维持疗法。
用于治疗多发性硬化症的疾病修饰疗法(DMT)包括干扰素β-1a(例如，)、干扰素β-1b(例如，/>)、醋酸格拉替雷(例如，/>)、奥法妥木单抗(ofatumumab)(例如，/>)、聚乙二醇干扰素β-1a(例如，/>)、特立氟胺(例如，/>)、富马酸单甲酯(例如，BAFIERTAMTM)、富马酸二甲酯(例如，/>)、芬戈莫德(例如，/>)、克拉屈滨(cladribine)(例如，/>)、西尼莫德(siponimod)(例如，)、波奈西莫(ponesimob)(例如，/>)、富马酸地罗西美(diroximelfumarate)(例如，/>)、奥扎尼莫(ozanimob)(例如，/>)、阿仑单抗(例如，/>)、米托蒽醌(例如，/>)、奥瑞利珠单抗(ocrelizumab)(例如，/>)和那他珠单抗(例如，/>)。高效力DMT的实例包括但不限于那他珠单抗、阿仑单抗、抗B细胞和米托蒽醌。低效力DMT的实例包括但不限于醋酸格拉替雷、干扰素β、特立氟酰亚胺、DMF和芬戈莫布(fingolimob)。
那他珠单抗是在鼠骨髓瘤细胞中产生的重组人源化IgG4κ单克隆抗体。那他珠单抗与除嗜中性粒细胞外所有白细胞表面表达的α4β1和α4β7整合素的α4亚基结合，并抑制α4介导的白细胞与其反受体粘附。那他珠单抗注射液被指定为用于治疗成人复发型多发性硬化症，包括临床孤立综合征、复发缓解型疾病和活动性继发性进行性疾病的单一疗法。醋酸格拉替雷注射液被指定用于治疗成人复发型多发性硬化症，包括临床孤立综合征、复发缓解型疾病和继发性进行性疾病。用于口服使用的富马酸二甲酯被指定用于治疗复发型多发性硬化症。
在一些方面，多发性硬化症先前未经治疗。在替代的方面，多发性硬化症先前例如用标准护理疗法，诸如那他珠单抗醋酸格拉替雷和/或富马酸二甲酯、或DMT治疗。
在一些方面，多发性硬化症是原发性进行性多发性硬化症(PPMS)。在一些方面，多发性硬化症是复发缓解型多发性硬化症(RRMS)。在一些方面，多发性硬化症是临床孤立综合征(CIS)。在一些方面，多发性硬化症是继发性进行性多发性硬化症(SPMS)。
在一些方面(例如，其中自身免疫疾病是多发性硬化症)，所述方法包括向受试者施用治疗有效量的诱导疗法，所述诱导疗法包含例如呈药物组合物形式的本公开的化合物。在一些方面(例如，其中自身免疫疾病是多发性硬化症)，所述方法包括向受试者施用治疗有效量的维持疗法，所述维持疗法包含例如呈药物组合物形式的本公开的化合物。在一些方面(例如，其中自身免疫疾病是多发性硬化症)，所述方法包括向受试者施用治疗有效量的诱导疗法，所述诱导疗法包含例如呈药物组合物形式的本公开的化合物，以及(例如，随后)治疗有效量的维持疗法，所述维持疗法包含例如呈药物组合物形式的本公开的化合物。
在一些方面(例如，其中自身免疫疾病是多发性硬化症)，本公开的化合物与DMT(诸如那他珠单抗和/或醋酸格拉替雷和/或富马酸二甲酯)组合施用，并且在一些其他方面，所述方法还包括向受试者施用DMT，诸如那他珠单抗和/或醋酸格拉替雷和/或富马酸二甲酯。
在一些方面，自身免疫病症先前未经治疗。在替代的方面，自身免疫病症先前例如用标准护理疗法，诸如用于多发性硬化症的那他珠单抗或醋酸格拉替雷治疗。
与自身免疫病症相关的自身抗原的实例包括甲状腺的促甲状腺激素受体(格雷夫氏病)；甲状腺抗原，诸如甲状腺过氧化物酶(桥本甲状腺炎)；β细胞抗原，诸如谷氨酸脱羧酶和胰岛素(I型糖尿病)；细胞色素P450抗原(阿狄森氏病)；髓鞘蛋白，诸如髓鞘碱性蛋白(多发性硬化症)；葡萄膜抗原(葡萄膜炎)；胃壁细胞抗原，诸如H+/ATP酶和内因子(恶性贫血)；转谷氨酰胺酶(麸质肠病)；心肌细胞蛋白，诸如肌球蛋白(心肌炎、风湿性心脏病)；血小板抗原，诸如GP IIb/IIIa(特发性血小板减少性紫癜)；红细胞膜蛋白(自身免疫溶血性贫血)；中性粒细胞膜蛋白(自身免疫中性粒细胞减少症)；基底膜抗原，诸如IV型胶原α3链(古德帕斯彻氏病)；肝内胆管/线粒体抗原，诸如2-含氧酸脱氢酶复合物(原发性胆汁性肝硬化)；肝细胞抗原，诸如细胞色素P450和206(自身免疫肝炎)；乙酰胆碱受体(重症肌无力)；桥粒芯糖蛋白(天疱疮和其他大疱性疾病)。每种自身抗原旁边的括号中列出的病症表示与指定的自身抗原通常相关的自身免疫病症。
本公开的化合物和本文所述的组合物预期例如通过抑制对抗原疗法的不期望的免疫反应和/或实现给予和/或重复给予抗原疗法，在抗原疗法诸如基因疗法的背景下是有用的辅助疗法。另一个实施方案是用抗原疗法治疗有需要的受试者的疾病、病症或病状的方法，其包括向受试者施用例如呈本文所述的组合物形式的本公开的化合物。在一些方面，本公开的化合物以足以使受试者对抗原疗法免疫耐受的量施用。在一些方面，所述方法还包括例如与本公开的化合物并行或依序，向受试者施用(例如，共同施用)抗原疗法(例如，治疗有效量的抗原疗法)。一些方面包括向受试者施用本文所述的包含本公开的化合物和抗原疗法的组合物，例如包含多个脂质颗粒的组合物，其中每个脂质颗粒包含本公开的化合物和抗原疗法。在一些方面，抗原疗法和本公开的化合物以单独制剂施用于受试者。
在一些方面，抗原疗法是抗体疗法(例如，单克隆抗体疗法)，包括嵌合抗体疗法、人源化抗体疗法和全人抗体疗法。抗体疗法的具体实例包括抗肿瘤坏死因子(抗TNF)疗法，诸如阿达木单抗(adalimumab)(用于类风湿性关节炎、幼年特发性关节炎、银屑病关节炎、强直性脊柱炎、克罗恩病、溃疡性结肠炎、斑块状银屑病、化脓性汗腺炎、葡萄膜炎)和英夫利西单抗(infliximab)(/>用于克罗恩病、小儿克罗恩病、溃疡性结肠炎、小儿溃疡性结肠炎、类风湿性关节炎、强直性脊柱炎、银屑病关节炎、斑块状银屑病)、戈利木单抗(golimumab)(/>用于类风湿性关节炎、银屑病关节炎、强直性脊柱炎、多关节型幼年特发性关节炎)、依那西普(etanercept)(/>用于类风湿性关节炎、多关节型幼年特发性关节炎、银屑病关节炎、强直性脊柱炎、斑块状银屑病)和赛妥珠单抗聚乙二醇(/>用于克罗恩病、类风湿性关节炎、银屑病关节炎、强直性脊柱炎、非放射学中轴脊柱关节炎、斑块状银屑病)。
在一些方面，抗原疗法是蛋白质替换疗法，例如酶替换疗法。蛋白质替换疗法的实例包括用于凝血病症的替换疗法，诸如用于A型和B型血友病的因子VIII和因子IX；用于溶酶体贮积病的酶替换疗法，诸如用于庞贝病(Pompe disease)的阿葡萄糖苷酶α(和/>)；用于Hurler综合征的α-L-艾杜糖醛酸酶；和用于成人型腺苷脱氨酶缺乏症的腺苷脱氨酶。
在一些方面，抗原疗法是基因疗法。基因疗法通常通过以下三种机制之一发挥作用：(1)通过向受试者提供致病基因的健康副本(例如voretigene neparvovec-rzyl)；(2)通过使致病基因(例如ASO和siRNA)失活；或(3)通过将基因引入体内来帮助治疗疾病。基因疗法包括DNA(例如，反义寡核苷酸(ASO))和/或RNA(例如，siRNA)，其可通过多种产品在体内或离体递送至受试者。体内基因递送产品包括质粒DNA、病毒载体(例如AAV，诸如AAV9)和非病毒载体，诸如细菌载体或脂质纳米颗粒。适用于体内基因递送的非病毒载体的其他实例包括外泌体、聚合物颗粒、无机颗粒和脂质-聚合物杂化颗粒。离体基因递送产品包括源自受试者的细胞基因治疗产品。基因疗法还包括基因编辑技术，诸如CRISPR。基因编辑技术，诸如CRISPR，可通过本文所述的用于体内基因递送的任何产品方便地递送至受试者。基因疗法的具体实例包括voretigene neparvovec-rzyl/>用于视网膜营养不良)；和onasemnogene abeparvovec-xioi/>用于小儿脊髓性肌萎缩症)。
在一些方面，基因疗法包含DNA和/或RNA以及病毒载体。在一些方面，病毒载体衍生自腺相关病毒(AAV)，诸如重组AAV。在一些方面，AAV是AAV9。适用于本公开内容的病毒载体的其他实例包括衍生自逆转录病毒、疱疹病毒、腺病毒、慢病毒、狂犬病病毒、慢病毒、VSV、痘病毒(例如痘苗病毒、天花病毒、金丝雀痘)、呼肠孤病毒、塞姆利基森林病毒、黄热病病毒、辛德比斯病毒、披膜病毒、杆状病毒、噬菌体、甲病毒和黄病毒的病毒载体。
在一些方面，抗原疗法是细胞疗法。细胞疗法的实例是axicabtagene ciloleucel(用于复发或难治性大B细胞淋巴瘤)。细胞疗法的另一个实例是CAR-T细胞。
同种异体抗原，存在于一个物种的一些但不是全部个体中，并且被那些缺乏它的个体识别为外来抗原的抗原，通常是移植物排斥反应的基础。因此，另一个实施方案是治疗有需要的受试者的移植物抗宿主疾病的方法，其包括向受试者施用治疗有效量的本公开的化合物或本文所述的组合物。
同种异体抗原的实例包括但不限于主要组织相容性复合物(MHC)I类和II类抗原、次要组织相容性抗原、内皮糖蛋白(诸如血型抗原)和碳水化合物决定簇。
另一个实施方案是促进有需要的受试者的伤口愈合的方法，其包括向受试者施用治疗有效量的例如呈本文所述的组合物形式的本公开的化合物。
在本文所述的任何方法的一些方面，所述方法还包括向受试者施用抗原或其免疫原性片段。在一些其他方面，抗原或其免疫原性片段和本公开的化合物是共同施用的。例如，有时需要诱导抗原特异性免疫耐受(例如，当施用本公开的化合物以使受试者对抗原疗法免疫耐受时)。当需要抗原特异性免疫耐受时，优选共同施用抗原或其免疫原性片段和例如呈本文所述的组合物形式的本公开的化合物。
如本文所用，“共同施用(co-administer)”、“共同施用(co-administration)”等是指在受试者身体上相同或几乎相同的部位通过相同的施用途径，同时或几乎同时但依序施用两种或更多种剂(例如，本公开的化合物和抗原)。
当共同施用是同时的(例如，并行的)时，第一剂(例如，本公开的化合物)和第二剂(例如，另外的治疗剂、抗原或其免疫原性片段)可在单独的制剂或相同的制剂中。替代地，所述第一剂和第二剂可作为单独的组合物依序施用。当共同施用是依序的时，随后的组合物的施用发生在施用第一组合物的24小时内，并且优选地，在施用第一组合物的12小时内，例如在10小时、5小时、4小时、3小时、2小时、60分钟、30分钟、15分钟、10分钟或5分钟内。通常，当共同施用是依序的时，在第一组合物施用完成后立即施用随后的组合物，考虑到施用组合物的临床医生或受试者可能需要进行的任何操作以准备好用于施用的随后的组合物。
当共同施用是口服的时，施用部位是口腔，并且共同施用的两种或更多种剂通过口腔在相同部位施用，无论它们是否以单一制剂或单独制剂的形式给出。然而，当通过注射两种或更多种组合物共同施用时，施用部位更典型地几乎相同。在此类情况下，施用的解剖部位通常彼此间隔小于2英寸，例如彼此间隔小于约0.5英寸、小于约1英寸或小于约1.5英寸。
在一些方面，抗原或其免疫原性片段和本公开的化合物是共同施用的。在其他方面，抗原或其免疫原性片段的施用在本公开的化合物的施用之前。在替代的其他方面，本公开的化合物的施用在抗原或其免疫原性片段的施用之前。在替代的其他方面，本公开的化合物和抗原或其免疫原性片段的施用是并行的。
共同施用可通过本文所述的任何施用途径进行。在一些方面，本公开的化合物和抗原、或其免疫原性片段口服共同施用。在一些方面，本公开的化合物和抗原、或其免疫原性片段皮下共同施用。
不希望受任何特定理论的约束，据信有时需要受试者的免疫系统一起遇到抗原和本公开的化合物，或者抗原和本公开的化合物“共同呈递”给受试者的免疫系统。当本公开的化合物与抗原共同施用且抗原是蛋白质，诸如蛋白质替换疗法时，例如通过注射抗原和本公开的化合物的单独制剂的共同施用预期提供本公开的化合物和抗原向受试者的免疫系统的有效共同呈递。在此类应用中，本公开的化合物可以但不必掺入脂质颗粒中。在此类应用的优选方面，共同施用是皮下的，例如通过注射。在涉及基因疗法(例如，包含DNA和/或RNA的基因疗法)的递送的应用中，为了促进基因疗法和本公开的化合物向受试者的免疫系统的有效共同呈递，可能需要将基因疗法和本公开的化合物配制为包含基因疗法和本公开的化合物的脂质颗粒。在优选方面，此类颗粒经配制用于口服和/或肠胃外(例如皮下、肌内、静脉内、皮内)施用，例如通过注射。
也不希望受任何特定理论的约束，据信本文鉴定的本公开的特定化合物嵌入脂质体中。例如根据本文公开的方法使用此类化合物在以下方面可能是有利的，其中通过将本公开的化合物和抗原掺入包含本公开的化合物和抗原的脂质颗粒中，促进本公开的化合物和抗原向受试者的免疫系统的有效共同呈递。
本公开的化合物还可与一种或多种非抗原疗法组合施用以治疗疾病、病症或病状。当与此类非抗原疗法“组合”施用时，本公开的化合物可在其他疗法(例如，另外的治疗剂)之前、之后或并行施用。当同时(例如并行)施用时，本公开的化合物和另一种疗法可在单独的制剂或相同的制剂中。替代地，本公开的化合物和另一种疗法可作为单独的组合物在大约相同的时间或在不同的时间依序施用。当本公开的化合物和其他疗法(例如，治疗剂)作为单独的制剂或组合物施用时，本公开的化合物和其他疗法可通过相同的施用途径或通过不同的施用途径施用。熟练的临床医生可确定组合使用的每种疗法的施用的适当时机(例如，足以允许疗法的药物作用重叠的时机)。通常，组合疗法将在治疗本文所述的疾病、病状或病症中提供药物组合的有益作用。
在一些方面，本文所述的方法还包括向受试者施用(例如治疗有效量的)另外的非抗原疗法，例如与本公开的化合物或本文所述的组合物组合。在一些方面，本公开的化合物或本文所述的组合物在另外的疗法之前施用。在一些方面，本公开的化合物或本文所述的组合物在另外的疗法之后施用。在一些方面，本公开的化合物或本文所述的组合物与另外的疗法并行施用。
待施用的剂的治疗有效量可由普通技术的临床医生使用本文提供的指导和本领域已知的其他方法来确定。例如，合适的剂量可以是每次治疗约0.001mg/kg至约100mg/kg、约0.01mg/kg至约100mg/kg、约0.01mg/kg至约10mg/kg、约0.01mg/kg至约1mg/kg体重。确定特定剂、受试者和疾病的剂量完全在本领域技术人员的能力范围内。优选地，所述剂量不会引起不良副作用或产生最小的不良副作用。
本公开的化合物、本文所述的组合物、抗原或其他治疗剂可通过多种施用途径施用，包括例如口服、饮食、局部、透皮、直肠、肠胃外(例如，动脉内、静脉内、肌内、皮下注射、皮内注射)、静脉内输注和吸入(例如支气管内、鼻内或口服吸入、鼻内滴剂)施用途径，分别取决于化合物、抗原和/或治疗剂，以及待治疗的特定疾病。如指示，施用可以是局部或全身的。优选的施用模式可根据具体的化合物或剂而变化。
在一些方面，施用(例如，本公开的化合物或本文所述的组合物和/或抗原)是口服的。在一些方面，施用(例如，本公开的化合物或本文所述的组合物和/或抗原的施用)是静脉内的。在一些方面，施用(例如，本公开的化合物或本文所述的组合物和/或抗原的施用)是皮下的。
可根据本文公开的方法预防性地施用本公开的化合物或本文所述的组合物，如当向不具有已知的针对抗原疗法的免疫不耐受的受试者共同施用本公开的化合物或本文所述的组合物与抗原疗法时。本公开的化合物或本文所述的组合物还可以或替代地根据本文公开的方法治疗性施用，如当受试者已表现出针对抗原的免疫不耐受(例如，过敏反应、移植物排斥)时。因此，在一些方面，受试者不具有已知的针对抗原的免疫不耐受，例如，因为受试者未接受过所述抗原。在一些方面，受试者在施用和/或暴露于抗原后不具有已知的针对所述抗原的免疫不耐受。在一些方面，受试者对抗原免疫不耐受，例如，在施用和/或暴露于抗原后出现免疫不耐受，或者对抗原固有免疫不耐受。
本公开的化合物或本文所述的组合物可根据本文公开的方法在第一次暴露于抗原时施用(例如，共同施用)，如当本公开的化合物或本文所述的组合物与第一剂量的抗原疗法一起施用时。此外或替代地，本公开的化合物或本文所述的组合物可根据本文公开的方法在第二次或进一步额外暴露于抗原时施用(例如，共同施用)，如当本公开的化合物或本文所述的组合物与第二或进一步附加剂量(例如，重复剂量)的抗原疗法一起施用时。
本文所述的方法旨在为了受试者的生命，在延长的时间段内，例如，在用本文所述的抗原疗法治疗疾病、病症或病状所必需的时间段内减少针对抗原的免疫不耐受。因此，在本文所述的方法的一些方面，所述方法还包括在不存在本公开的化合物或本文所述的组合物的情况下向受试者施用抗原或其免疫原性片段(例如，抗原疗法，诸如治疗有效量的抗原疗法)。
然而，在本文所述的方法之后，例如在随后暴露于抗原之后，受试者的免疫不耐受可能随着时间的推移而增加。在此类情况下，例如在重复“加强”疫苗时，可重复本文所述的方法，以使受试者对抗原重新免疫耐受。
本公开的化合物或本文所述的其他治疗剂可通过多种施用途径施用，包括例如口服、饮食、局部、透皮、直肠、肠胃外(例如，动脉内、静脉内、肌内、皮下注射、皮内注射)、静脉内输注和吸入(例如支气管内、鼻内或口服吸入、鼻内滴剂)施用途径，取决于化合物和待治疗的特定疾病。如指示，施用可以是局部或全身的。在一些实施方案中，施用(例如，本公开的化合物的施用)是口服的。在一些实施方案中，施用(例如，本公开的化合物的施用)是静脉内的。优选的施用模式可根据具体的化合物或剂而变化。通常，本公开的化合物或其他治疗剂将每天施用约1至约6次(例如，1、2、3、4、5或6次)，也或替代地，作为输注剂(例如，连续输注)。在一些方面，施用(例如，本公开的化合物的施用是QD或BID(例如，QD))。在一些方面，施用(例如，本公开的化合物的施用)是每天。
本文显示，口服施用的脂质体，诸如本文所述的那些，可到达淋巴结，并与淋巴结中的免疫细胞(包括B细胞和T细胞)共定位。因此，本文还提供了将治疗剂(例如，本公开的化合物)递送至受试者(例如，有需要的受试者)的淋巴结的方法，其包括向受试者口服施用治疗有效量的包含多个脂质颗粒(例如，固体脂质颗粒)的组合物，其中每个脂质颗粒包含至少一种磷脂(例如，含有C4-C30酰基链，诸如饱和C4-C30酰基链的磷脂，如在二肉豆蔻酰磷脂酰胆碱(DMPC)中)和可嵌入脂质颗粒的脂质双层中的治疗剂(例如，本公开的化合物)。
本公开的化合物或其他治疗剂可以每4至120小时，或根据特定剂的要求，以约0.001mg/kg至约100mg/kg体重范围内的剂量或者替代地，以约1mg/剂量至约5,000mg/剂量范围内的剂量施用。例如，合适的剂量可以是每次治疗约0.001mg/kg至约100mg/kg、约0.01mg/kg至约100mg/kg、约0.01mg/kg至约10mg/kg、约0.01mg/kg至约1mg/kg体重。在一些方面，合适的剂量(例如每日剂量)是每次治疗约0.1mg/kg至约10mg/kg，例如约0.1mg/kg至约5mg/kg、约0.1mg/kg至约2.5mg/kg或约0.2mg/kg至约2.4mg/kg体重。合适的剂量可以是约0.001mg/剂量至约100mg/剂量、约0.01mg/剂量至约100mg/剂量、约0.1mg/剂量至约50mg/剂量、约0.1mg/剂量至约10mg/剂量、约0.5mg/剂量至约50mg/剂量、约1mg/剂量至约10,000mg/剂量、约1mg/剂量至约7,500mg/剂量、约1mg/剂量至约5,000mg/剂量、约10mg/剂量至约2,500mg/剂量或约100mg/剂量至约1,000mg/剂量。在一些方面，合适的剂量(例如，每日剂量)是约10mg/剂量至约1,000mg/剂量，例如，约15mg/剂量至约1,000mg/剂量、约10mg/剂量至约500mg/剂量、约10mg/剂量至约250mg/剂量或约15mg/剂量至约150mg/剂量。
可能需要低于或高于上述剂量的剂量。任何特定患者的特定剂量和治疗方案将取决于例如多个因素，诸如所用特定剂的活性，年龄，体重，一般健康状况，性别，饮食，施用时间，排泄率，药物组合，疾病、病状或症状的严重程度和病程，受试者的疾病、病状或症状的倾向，和治疗医生的判断。确定特定剂、受试者和疾病、病症或病状的剂量在本领域技术人员的能力范围内。
例示
实施例1.化合物1和化合物2的合成
化合物1和化合物2的合成使用以下Boc-Dap-OH作为共同的起始材料：
(Boc-Dap-OH)。
化合物1：(S)-2-氨基-3-(((十六烷氧基)羰基)氨基)丙酸
在0℃下将Boc-Dap-OH(0.500g)溶解在10％碳酸钠溶液(7mL)中，并且在0℃下逐滴添加氯甲酸十六烷基酯(0.866g)的二噁烷(7mL)溶液。将反应混合物在0℃下搅拌1小时，并且然后在室温(RT)下搅拌1.5小时。然后将反应用60mL水淬灭。用乙醚萃取非均质混合物。将固体悬浮在水层与乙醚层之间。分离水层，并且过滤固体且用过量乙醚洗涤。将固体悬浮在水中，酸化至pH 1，并且立即用EtOAc(2x 35mL)萃取。将分离的有机层用水(3x20mL)和盐水(15mL)洗涤并且经Na2SO4干燥。在减压下去除溶剂，得到(S)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-(((十六烷氧基)羰基)氨基)丙酸。
为了生成(S)-2-氨基-3-(((十六烷氧基)羰基)氨基)丙酸HCl盐，将(S)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-(((十六烷氧基)羰基)氨基)丙酸(0.423g)在4N HCl/二噁烷(7mL)中的溶液在0℃下搅拌2.5小时。随后在减压下去除溶剂，得到(S)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-(((十六烷氧基)羰基)氨基)丙酸。在70℃真空下进一步去除痕量溶剂5小时。
化合物2：(S)-2-氨基-3-硬脂酰胺基丙酸
在0℃下将Boc-Dap-OH(0.500g)溶解在10％碳酸钠溶液(7mL)中，并且在0℃下逐滴添加硬脂酰氯(0.86g)的二噁烷(7mL)溶液。将反应混合物用白色沉淀物增稠，在0℃下搅拌10分钟，并且然后在RT下搅拌2小时。将反应用60mL水淬灭。添加乙醚，使溶液乳化。添加更多乙醚。用乙醚(3x 25mL)洗涤乳液。当乳液酸化至pH 1时，分离出乙醚层，并且水层变得浑浊。将乙醚层分离并且经Na2SO4干燥。在减压下去除溶剂，得到(S)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-(硬脂酰胺基)丙酸。
为了生成(S)-2-氨基-3-硬脂酰胺基丙酸HCl盐，将(S)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-(硬脂酰胺基)丙酸(0.502g)在4N HCl/二噁烷(9mL)中的溶液在0℃下搅拌2.5小时。添加乙醚。过滤沉淀的化合物，并且用过量乙醚洗涤。在高真空下过夜去除痕量溶剂。
实施例2.脂质体合成
在脂质体制备的前一天，基于图1所示的决策树确定合成路线。在选项A和B中，将活性成分溶解在适当的溶剂(例如，氯仿(Sigma-Aldrich,#650498-1L,St.Louis,MO))中并且在-80℃下储存在琥珀色玻璃小瓶中。在选项C中，直到脂质体制备当天才制备储备溶液。
在脂质体制备当天，计算基础脂质和活性成分的量。在选项A中，如果将测试材料溶解在氯仿中，则计算获得所需摩尔浓度的测试材料所需的测试材料体积。还计算了组成剩余摩尔比所需的基础脂质的量。例如，对于30:70摩尔比的测试材料:基础脂质，基础脂质的量为测试材料的量乘以70再除以30。将恰当体积的测试材料和基础脂质等分到5-ml或15-ml圆底烧瓶中，并且添加1至2ml氯仿。
在选项B中，如果测试材料和基础脂质溶解在不混溶的溶剂中或这两种溶剂需要不同的温度和真空设置(例如，DMSO和氯仿)，则如选项A中那样计算获得所需摩尔浓度所需的测试材料的体积和基础载剂脂质的量。蒸发开始于需要较高温度和较高真空的溶剂，之后将材料添加到需要较低温度和真空的溶剂中。相应地调整温度和真空。
在选项C中，如果测试材料是水溶性的，则脂质体由100％基础脂质组成。基础脂质的量基于待装载在完全合成的脂质体上的测试材料的量来确定。例如，对于30:70摩尔比的测试材料:基础脂质，将测试材料的量乘以100再除以30以获得基础脂质的量。将恰当体积的基础脂质等分到5-ml或15-ml圆底烧瓶中，并且添加1至2ml氯仿。
将圆底烧瓶连接到旋转蒸发器(带有V100和I100真空泵和接口的R100旋转蒸发器，Labortechnik AG,Flawil,Switzerland)，并且通过降低可调整臂将烧瓶的一部分浸入水浴中。打开真空泵。为了旋转圆底烧瓶，打开转轴，并将速度设置为“3”。根据需要降低真空以避免烧瓶中溶剂起泡/沸腾。一旦形成均匀的干膜，就关闭旋转轴。在选项B中，添加含有第二材料的第二溶剂，并且重复上述步骤。
为了补液，添加适当的水性缓冲液(例如，PBS(Thermo Fisher Scientific(Gibco),#10010049,Waltham,MA))(在选项A或B中为1ml；在选项C中为0.5ml，并且根据需要调整pH)。涡旋圆底烧瓶直至溶液变成乳状/浑浊。将烧瓶连接回旋转蒸发器，并且降低臂使得烧瓶底部浸入水浴中。打开转轴，设置为“3”，但泵未打开。15分钟后，脂质膜完全水合，脂质体形成并准备施胶。
为了进行挤出和施胶，组装了手动挤出机(Avanti Corporation,Alexandria,VA,AVANTI手动挤出机：610023-1EA，PC膜0.8μm：610009-1EA)。将总体积(不超过1ml)吸入手动挤出机配备的两个注射器之一中。将脂质体制剂挤出20次。转移最终挤出的脂质体制剂，并且根据需要补充体积以获得测试材料的最终所需摩尔浓度。
实施例3.酰基链长度和饱和度对口服施用的含化合物2脂质体的淋巴摄取和免疫细胞共定位的影响
口服途径是一种对患者友好的施用途径。它还提供了通过肠系膜淋巴结靶向免疫系统的独特机会，这可能被证明有助于施用免疫调节疗法。化合物2是一种新型两亲性分子，设计用于跨越脂质体膜的脂质双层，被认为是TIM激动剂。化合物2的初步筛选表明它具有药理学活性，并且确实可在体外和体内诱导耐受原性免疫反应。化合物2可增加体内FoxP3+/CD4+T细胞(实施例5)和体外FoxP3+/TIM3+CD4 T细胞(实施例4)。
目标是优化一种脂质体制剂，所述脂质体制剂可针对B细胞参与的皮质滤泡和T细胞参与的副皮质。选择具有磷脂酰胆碱(PC)头基的天然磷脂作为基础脂质。这部分是由于PC的电荷呈中性。在体内评价不同酰基链长度和饱和度水平对口服施用脂质体后淋巴摄取和免疫细胞共定位的影响。
表1列出了本实验中使用的材料和试剂。
表1
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对于体外优化脂质:DilC18(5)-DS荧光染料比，如实施例2中所述制备DMPC脂质体(AVANTIPolar Lipids Inc.,Birmingham,AL)。用含有不同浓度DilC18(5)-DS荧光染料(100nM至2μM)的PBS水合脂质膜。在96孔板中在Ex/Em 650nm/670nm处测量荧光强度，以确定获得可靠荧光测量结果所需的最低DilC18(5)浓度。
测试材料制备如下。将化合物2溶解在DMSO中。如实施例2中所述以摩尔比为30:70的化合物2:脂质制备四种不同的制剂，表1中的每种脂质各一种。使用含有100nM DilC18(5)染料的PBS来水合脂质膜。在96孔板中在Ex/Em650nm/670nm处测量每种制剂的荧光强度。
通过口服灌胃向动物(每组n＝3)给予200μl 160μM的每种荧光脂质体。无论荧光强度如何，所有动物都接受相同剂量的脂质。对照组接受200μl口服灌胃含100nM DilC18(5)的PBS。为了量化每种脂质体制剂的淋巴摄取和免疫细胞共定位，在口服灌胃后60分钟处死动物。提取肠系膜淋巴结并保存在最佳切割温度(OCT)化合物中以进行切片、标记和成像。
为了对T和B细胞进行染色，口服灌胃后60分钟切除肠系膜淋巴结，并在OCT化合物中速冻。在-20℃下切割十微米切片，并且在室温下将冷冻切片在2％多聚甲醛(PFA)中固定15分钟。将切片在1x PBS中洗涤，随后在4℃下与1x PBS中CD45R或TCR-β的1:100稀释的荧光染料缀合的(FITC)一抗一起孵育过夜。第二天，将载玻片在1x PBS中洗涤三次，并且用含有DAPI的封片剂封片。
对于荧光成像，肠系膜淋巴结的染色切片在落射荧光显微镜(Nikon E-800；NikonInc.,Melville,NY)下可视化。对于DilC-18(5)-DS荧光染料使用通道Cy5(Ex/Em 650nm/670nm)(红色)、对于CD45R或TCR-β使用通道FITC(Ex/Em494nm/518nm)(绿色)并且对于细胞核使用通道DAPI(Ex/Em 358nm/461nm)(蓝色)进行成像。
免疫荧光的目视检查可很好地定性了解脂质体在淋巴结切片内的排列以及与B细胞和T细胞的共定位水平。然而，目视检查并没有考虑到每种脂质体荧光强度的差异，如表2所示。此外，目视检查无法客观区分脂质体制剂。为了进行客观评价，进行了共定位分析和共定位百分比。
在ImageJ中确定脂质体与B细胞和T细胞的共定位。合并来自每个通道(FITC、Cy5和DAPI)的图像。共定位区域百分比是通过将合并图像阈值设置为黄色光谱来计算的，代表绿色(免疫细胞)和红色(脂质体)共定位的区域。通过减去从对照组(仅用游离DilC-18(5)-DS染料处理)获得的背景来归一化图像分析的量化。如前所述，通过将图像阈值分割的结果归一化为每个脂质体的荧光强度(FI)，对每个脂质体的不同荧光强度进行校正，以获得每个切片的校正平均FI。
由于组织切片不均匀，预计免疫荧光染色会产生从一个切片到另一个切片的高度变异性。为了确定脂质体/免疫细胞相互作用的有效性，使用以下公式将共定位区域的平均FI归一化为免疫细胞的平均FI：
对除游离染料对照组之外的所有组中的所有切片进行共定位分析，因为在那些切片中未观察到游离染料/免疫细胞共定位。
PBS中浓度范围为100nM至2μM的DilC18(5)的荧光强度测量结果证实，与掺入脂质体后的荧光相比，所述染料在水介质中的荧光较差(表2)。游离染料的相对荧光强度(RFI)在100nM至1μM的浓度范围内保持较低。在2μM下，DilC18(5)在PBS中的荧光增强，但仍低于脂质体DilC18(5)。与PBS中染料的RFI相比，脂质体制剂中DilC18(5)的RFI在100与500nM之间的范围内增加了>2000％。这在含有1μM染料的脂质体制剂中甚至更大。2μM脂质体制剂中的RFI降低，这可能是由于染料在如此高的浓度下自猝灭或难以掺入脂质体的结果(表2)。此筛选的结果表明100nM DilC18(5)足以检测脂质体的荧光，此外，所述浓度下PBS中染料的RFI较差表明不需要去除游离染料的纯化步骤。
表2.相对荧光强度(RFI)随染料浓度的变化
每种脂质体制剂的荧光强度测量结果揭示了它们之间的差异。用不饱和DOPC和POPC制备的脂质体的RFI(分别为73.2和61.8)高于用饱和DMPC和DSPC制备的脂质体的RFI(分别为35.8和20.4)(表3)。
表3.脂质体相对荧光强度(RFI)
除来自游离染料对照组的一份样品外，所有样品的切片和免疫荧光染色均成功。染色后，很明显此样品是肠系膜脂肪，而不是肠系膜淋巴结。所有其他切片均成功染色以进行图像分析。
进行免疫荧光染色以评价B细胞和脂质体的共定位。在所有样品中均观察到FITC缀合的抗CD45R，指示B细胞的存在。在来自所有治疗组的所有切片中均看到成熟(明亮)和未成熟(暗淡)B细胞。在一些切片中，B细胞可能聚类在淋巴结的皮质中(图2A中的箭头)，围绕代表没有B细胞的淋巴结区域(例如，副皮质或髓质)的暗中心。
评价200μl口服剂量的含有100nM DilC18(5)的PBS后60分钟的淋巴结摄取和B细胞共定位。DAPI染色显示淋巴结切片的一般结构。CD45R-FITC显示B细胞定位。检测DilC18(5)荧光的Cy5通道在一份样品中显示出信号，主要集中在切片的外周(参见图2B，M2，DilC18(5)图)。然而，没有观察到共定位(图2B，M2，CD45R-FITC/DilC18(5)图)。在来自其他样品的淋巴结中未检测到DilC18(5)(图2B，M3)。
评价200-μl口服剂量的160μM化合物2/DMPC DilC18(5)-DS标记的脂质体后60分钟的淋巴结摄取和B细胞共定位。DAPI染色显示淋巴结切片的一般结构。CD45R-FITC显示B细胞定位。检测DilC18(5)荧光的Cy5通道显示DMPC脂质体渗透到淋巴结中。合并FITC和Cy5通道显示B细胞和DMPC脂质体的共定位(参见图2C，CD45R-FITC/DilC18(5)图中的箭头)。DMPC共定位主要发生在明亮的荧光区域，表明与成熟B细胞共定位。
评价200-μl口服剂量的160μM化合物2/DOPC DilC18(5)-DS标记的脂质体后60分钟的淋巴结摄取和B细胞共定位。DAPI染色用于显示淋巴结切片的一般结构。CD45R-FITC用于显示B细胞定位。检测DilC18(5)荧光的Cy5通道用于显示DOPC脂质体渗透到淋巴结中。合并FITC和Cy5通道显示B细胞和DOPC脂质体的共定位。与DMPC不同，DOPC似乎更深入地渗透到淋巴结中。在明亮和暗淡荧光区域中均看到共定位，表明与成熟和未成熟B细胞共定位(参见图2D，CD45R-FITC/DilC18(5)图中的箭头)。
评价200μl口服剂量的160μM化合物2/DSPC DilC18(5)-DS标记的脂质体后60min的淋巴结摄取和B细胞共定位。DAPI染色显示淋巴结切片的一般结构。CD45R-FITC显示B细胞定位。检测DilC18(5)荧光的Cy5通道显示DSPC脂质体渗透到淋巴结中。合并FITC和Cy5显示B细胞和DSPC脂质体的共定位。与DOPC类似，DSPC似乎深入地渗透到淋巴结中。在明亮和暗淡荧光区域中均可看到共定位，表明与成熟和未成熟B细胞共定位(参见图2E，CD45R-FITC/DilC18(5)图中的箭头)。
评价200-μl口服剂量的160μM化合物2/POPC DilC18(5)-DS标记的脂质体后60分钟的淋巴结摄取和B细胞共定位。DAPI染色用于显示淋巴结切片的一般结构。CD45R-FITC用于显示B细胞定位。检测DilC18(5)荧光的Cy5通道显示POPC脂质体渗透到淋巴结中。合并FITC和Cy5通道显示B细胞和POPC脂质体的共定位。与DOPC和DSPC类似，POPC似乎深入地渗透到淋巴结中。在明亮和暗淡荧光区域中均看到共定位，表明与成熟和未成熟B细胞共定位(参见图2F，CD45R-FITC/DilC18(5)图中的箭头)。
分析了B细胞共定位。所分析的切片中B细胞的求平均的平均荧光强度(FI)在所有组中类似：对于DMPC为17.8(5.9)(平均值(SD))、对于DOPC为16.3(8.7)、对于DSPC为18.3(7.8)，并且对于POPC为25.4(8.8)。所有制剂的未校正和校正的区域平均FI均显示出较高的变异性。然而，定位百分比显示出较小的变异性(表4)，因为它校正了每个切片中B细胞的数量。用饱和脂质(DSPC或DMPC)配制的脂质体比用不饱和脂质(DOPC或POPC)配制的脂质体具有更好的B细胞共定位。对于DSPC的共定位百分比(平均值(SD))为20.2％(3.9％)，对于DMPC的共定位百分比为10.3％(0.8％)，而对于DOPC的共定位百分比为6.8％(2.5％)并且对于POPC的共定位百分比为5.0％(1.6％)。统计分析显示DSPC脂质体在统计学上优于其他三种制剂(图2G)。
表4.按脂质类型的B细胞/脂质体共定位百分比
在所有样品中均观察到FITC缀合的抗TCRβ，指示T细胞的存在。在大多数切片中，看到T细胞均匀分布。预计T细胞将定位在淋巴结的副皮质中。然而，在一些但不是全部切片中观察到局部结构(图2H)。
评价口服给药200μl含有100nM DilC18(5)的PBS后60分钟的淋巴结摄取和T细胞共定位。DAPI染色显示淋巴结切片的一般结构。TCRβ-FITC显示T细胞定位。检测DilC18(5)荧光的Cy5通道没有显示信号，指示淋巴结没有摄取染料(图2I)。
评价200-μl口服剂量的160μM化合物2/DMPC DilC18(5)-DS标记的脂质体后60分钟的淋巴结摄取和T细胞共定位。DAPI染色用于显示淋巴结切片的一般结构。TCRβ-FITC用于显示T细胞定位。检测DilC18(5)荧光的Cy5通道显示DMPC脂质体渗透到淋巴结中。在黑点周围的簇中可看到红色荧光。合并FITC和Cy5通道显示T细胞和DMPC脂质体的共定位(参见图2J，TCRβ-FITC/DilC18(5)图中的箭头)。
评价200-μl口服剂量的160μM化合物2/DOPC DilC18(5)-DS标记的脂质体后60分钟的淋巴结摄取和T细胞共定位。DAPI染色用于显示淋巴结切片的一般结构。TCRβ-FITC用于显示T细胞定位。检测DilC18(5)荧光的Cy5通道显示DOPC脂质体渗透到淋巴结中。与DMPC治疗组一样，在黑点周围的簇中观察到红色荧光。合并FITC和Cy5通道显示T细胞和DOPC脂质体的共定位(参见图2K，TCRβ-FITC/DilC18(5)图中的箭头)。
评价200-μl口服剂量的160μM化合物2/DSPC DilC18(5)-DS标记的脂质体后60分钟的淋巴结摄取和T细胞共定位。DAPI染色用于显示淋巴结切片的一般结构。TCRβ-FITC用于显示T细胞定位。检测DilC18(5)荧光的Cy5通道显示DSPC脂质体渗透到淋巴结中。与DOPC和DMPC处理组一样，在圆形簇中检测到红色荧光。然而，红色荧光更普遍地分布在整个淋巴结切片中。合并FITC和Cy5通道显示T细胞和DSPC脂质体的共定位(参见图2L，TCRβ-FITC/DilC18(5)图中的箭头)。
评价200-μl口服剂量的160μM化合物2/POPC DilC18(5)-DS标记的脂质体后60分钟的淋巴结摄取和T细胞共定位。DAPI染色用于显示淋巴结切片的一般结构。TCRβ-FITC用于显示T细胞定位。检测DilC18(5)荧光的Cy5通道显示POPC脂质体渗透到淋巴结中。与DSPC治疗组一样，在圆形簇中看到红色荧光，并且一些红色荧光更普遍地分布在整个淋巴结切片中。合并FITC和Cy5通道显示T细胞和DSPC脂质体的共定位(参见图2M，TCRβ-FITC/DilC18(5)图中的箭头)。
分析了T细胞共定位。所分析的切片中T细胞的求平均的平均荧光强度(FI)在所有组中类似，对于DMPC为13.7(7.7)、对于DOPC为11.8(3.8)、对于DSPC为8.1(3.0)，并且对于POPC为11.9(3.3)(平均值(SD))。无论制剂如何，未校正和校正的区域平均FI均显示出比用于评价B细胞共定位的切片中观察到的变异性高的变异性。然而，除DMPC外，所有制剂的定位百分比变异性均显著降低(表5)。不同组间的统计分析表明，各组之间没有差异。这主要是由DMPC组的变异性驱动的(图2N中报告的全局方差分析)。然而，成对比较表明DSPC在统计学上优于DOPC和POPC(图2N)。
表5.按脂质类型的T细胞/脂质体共定位百分比
酰基链长度和饱和度水平影响脂质体的物理性质。具有高不饱和度或较短链的脂质往往具有较低的熔化温度，并且可产生流体脂质膜。相比之下，饱和脂质和具有较长酰基链的脂质往往具有较高的熔化温度，并且可能产生具有凝胶状脂质膜的固体脂质体。
口服施用后，脂质体预计会完整地到达肠吸收部位，被吸收，并排入传入淋巴结，在那里进行免疫采样。数据支持口服施用脂质体可到达肠系膜淋巴结的观点。此外，通过改变酰基链长度和饱和度水平，可改善淋巴结内免疫细胞的暴露。
DMPC和DSPC均具有饱和酰基链，并且均优于DOPC和POPC。此外，具有18个碳酰基链的DSPC优于具有14个碳酰基链的DMPC。DSPC在所有测试的脂质中具有最高的熔化温度(Tm＝55.6℃)。用DSPC合成的脂质体预计在体温下为固体。即使掺入了化合物2，DSPC脂质体预计仍具有本研究中测试的所有其他脂质体中最高的熔化温度。
固体脂质体的缺点是难以装载其有效负载。这可从以下看出，与DOPC和POPC相比，DMPC和DSPC脂质体的荧光较低，尽管使用含有相同量DilC18(5)的相同缓冲液进行再水合。这预计不会影响化合物2的装载。化合物2具有模拟溶血磷脂的16碳尾部，并且旨在充当脂质并在水合步骤之前掺入脂质体的膜中。
这些数据表明，口服施用脂质体可以靶向淋巴系统。数据进一步表明，为脂质载剂选择恰当的酰基链有助于靶向特定结构，诸如淋巴结内的免疫细胞。
DSPC脂质体比DMPC、DOPC和POPC具有更好的B细胞共定位。对于T细胞共定位，DSPC的表现优于DOPC和POPC，尽管它与DMPC没有统计学差异。
实施例4.化合物1和化合物2在鼠T细胞中的体外剂量反应分析
化合物1和化合物2各自与二肉豆蔻酰磷脂酰胆碱(DMPC)以30:70的药物与脂质摩尔比一起配制。根据实施例2在PBS中合成脂质体。
将来自初始C57BL/6小鼠的脾细胞用CFSE染色，制备，培养和给药。细胞以2x105个细胞/孔接种。以log2稀释方案向细胞给予48μM至1.5μM的每种化合物。在对FoxP3+/TIM3+CD4 T细胞进行表型分析之前，将细胞孵育72小时。进行流式细胞仪分析以评估FoxP3+/TIM3+CD4 T细胞百分比随治疗和剂量的变化。将浓度与反应拟合到四或五参数对数逻辑模型(使用“R”中的“drc”包)。EC50和EC90值通过模型拟合获得。
在孵育期结束时通过显微镜观察细胞。给予48μM化合物1的细胞看起来并不健康，并且被排除在进一步分析之外。所有细胞看起来健康并且适合流式细胞术分析。
FoxP3+/TIM3+双阳性CD4 T细胞从对于低剂量化合物1和化合物2的平均值分别为3.65％(SD＝0.2)和3.21％(SD＝1.47)增加至对于高剂量化合物1和化合物2的平均值分别为8.26％(SD＝1.2)和7.36％(SD＝1.9)。模型拟合的目视检查表明4参数剂量反应模型足以捕获来自化合物2的数据。然而，由于化合物1缺乏平台，所述模型无法给出Emax和EC50的可靠估计。为了改善模型拟合，Emax固定为7.9％，这是化合物1和化合物2分别在10μM以及10和30μM时的平均响应。图3A示出了数据与4参数剂量反应模型的模型拟合结果。表6总结了通过模型拟合获得的EC50和EC90值。
表6.处理后模型获得的EC50和EC90值总结。
化合物1和化合物2均导致FoxP3+/TIM3+CD4 T细胞剂量依赖性增加。与低剂量化合物1相比，用10μM化合物1处理导致FoxP3+/TIM3+CD4 T细胞增加126％。类似地，与低剂量化合物2相比，用30μM化合物2处理导致FoxP3+/TIM3+CD4 T细胞增加129％。
预计化合物2比化合物1具有更高的稳定性，因为化合物1中存在的酯键联在化合物2中被替换。此外，与化合物1相比，在30μM剂量下，化合物2显示出更低的体外毒性。化合物1和化合物2都是进一步开发的有吸引力的候选者，然而，从稳定性和制剂的角度来看，化合物2可能具有一些优势。
实施例5.化合物2增加小鼠FoxP3+/CD4+T细胞
不受理论的约束，假设化合物2与TIM受体家族的接合诱导耐受原性免疫反应，例如增加耐受原性FoxP3+/CD4+T细胞(T-reg)。在此，评价了给药5天后单PO剂量的化合物2在小鼠中的药效学(PD)效果。
所有动物研究均符合塔夫茨大学/塔夫茨医学中心和人类营养衰老研究中心的要求在IACUC编号B2020-91下进行。每笼饲养四只动物(The Jackson Laboratory,BarHarbor,ME,B57BL6)，并且可随意获取食物和水。
将化合物2溶解在DMSO中，并且如实施例2中所述与1,2-二肉豆蔻酰-sn-甘油-3-磷酸胆碱(DMPC)以摩尔比为10:90的化合物2:DMPC一起配制。根据表7向动物给药。基于初步数据选择剂量，所述初步数据表明42μM为体外最大有效剂量。
表7.给药组
为了评价单剂量化合物2对小鼠的PD效果，根据组别分配向动物施用单次口服灌胃(表7)。口服剂量后五天，处死动物，并收集其脾脏用于T细胞表型分析。所述研究包括离体分析以及随后的剂量反应分析(图4A)。将收集用于脾细胞分析的脾脏制备成单细胞悬浮液用于通过流式细胞术进行细胞表型分析(eBioscience,Inc.,San Diego,CA)。对细胞进行染色并且针对CD4进行设门。使用流式细胞术评价FoxP3+/CD4+T细胞百分比。将剂量与反应曲线拟合到四或五参数对数逻辑模型(使用“R”中的“drc”包)。EC50和EC90值通过模型拟合获得。
FoxP3+/CD4+T细胞的百分比以剂量依赖性方式从低剂量组中的平均值3.87％(SD＝0.37)增加至高剂量组中的11.53％(SD＝1.47)。将数据拟合到四参数剂量反应模型。表8示出了模型估计的药效学参数和相关的标准误差。基于此分析，单次口服剂量的化合物2后，ED50估计为43.1μM，并且ED90估计为218μM(图4B)。
表8.模型估计的药效学参数
来自本研究的数据支持口服施用化合物2可以剂量依赖性方式诱导耐受原性免疫反应的假设。与低剂量组相比，高剂量组中观察到FoxP3+/CD4+T细胞(T-reg)增加了219％。增加超过100％(例如，FoxP3+/CD4+T细胞加倍)通常会导致对靶抗原的耐受。因此，据信以ED50重复给药将足以诱导耐受性。
实施例6.化合物2在MOG35-55诱导的鼠EAE模型中的预防和治疗效果
多发性硬化症是人中枢神经系统(CNS)的慢性、常常致残的疾病。对髓鞘的耐受性丧失会导致免疫系统对其进行攻击，并导致所述疾病的临床表现。这是由识别与主要组织相容性复合体(MHC)分子复合的自身抗原肽的致病性自身反应性T细胞介导的。目前尚无已知的MS治愈方法，但是，阻止自身反应性T细胞进入CNS的能力是改善MS症状的有效治疗选择。抗α4mAb(诸如Tysabri)已被批准用于管理MS。其他治疗选择依赖于诸如类固醇的全身免疫抑制剂。
解决自身反应性T细胞的存在并诱导向更高耐受原性T细胞的转变可为MS提供潜在的治愈性疗法。化合物2是一种所提出的T细胞免疫球蛋白粘蛋白受体家族(TIM)激动剂，可诱导耐受原性T细胞。TIM在适应性和先天免疫反应中发挥关键作用，并且与自身免疫和癌症的调节相关。已知有几种配体可与TIM结合，包括磷脂磷脂酰丝氨酸(PS)。
PS对TIM家族中不同成员的亲和力差别很大，TIM3对PS的亲和力比TIM4低。然而，所有在体内和体外表现出任何功能功效的抗TIM3抗体都会干扰TIM3与PS的结合，这表明PS-TIM3相互作用是TIM3功能的关键，即使在亲和力较低的情况下也是如此。
PS的耐受原性潜力已被肿瘤利用。例如，人卵巢肿瘤微环境中的PS可诱导T细胞信号传导阻滞。此外，PS介导的T细胞阻滞被抗PS抗体阻断。总的来说，关于TIM及其在免疫耐受中的作用的已公布数据表明TIM作为治疗自身免疫病症的潜在靶标。
本研究评价了化合物2(一种TIM激动剂)对实验性自身免疫(过敏性)脑脊髓炎(EAE)小鼠的疾病发作、疾病进展和总体存活的影响。EAE被认为是多发性硬化症(MS)的最佳模型。
所有动物研究均在IACUC编号B2020-91下进行，并且符合塔夫茨大学/塔夫茨医学中心和人类营养衰老研究中心的要求。动物在塔夫茨大学/塔夫茨医学中心和人类营养衰老研究中心内，饲养在指定设施中。一笼饲养四只动物，并且可随意获取食物和水。
表9中提供了材料和试剂。
表9.材料和试剂
将化合物2与1,2-二硬脂酰-sn-甘油-3-磷酸胆碱(DSPC)以摩尔比为3.75:96.25的化合物2:DSPC一起配制。配制并测试了两种测试制品。第一种制剂是用化合物2:DSPC与MOG35-55制备的，称为化合物2/MOG35-55。另一种制剂是在不含MOG33-55的情况下制备的，并且称为化合物2。DSPC的选择是基于口服施用后的优异的肠系膜淋巴结靶向和优异的免疫细胞共定位。化合物2与DSPC的比率是基于体外剂量反应研究选择的。如实施例2所述在PBS中制备脂质体并通过100微米过滤器挤出。向动物给予每只小鼠PO QD，100μl的42μM化合物2或100μl的42μM/1μg化合物2/MOG35-55。此剂量是基于体外剂量反应分析选择的。
实验性自身免疫(过敏性)脑脊髓炎(EAE)被认为是多发性硬化症(MS)的最佳非临床模型。EAE的特征为针对CNS组织的免疫反应，并且可通过对动物进行针对CNS蛋白质的免疫接种来诱导。
在主动EAE模型中，在麻醉下通过尾根部皮下注射(0.1mL乳液/小鼠)用弗氏完全佐剂(CFA)中乳化的MOG35-55肽对小鼠进行免疫接种。注射当天(第0天)和2天后，小鼠腹膜内注射PBS中的百日咳毒素(PT)，剂量是600ng/小鼠/剂量(0.1mL)。
小鼠通常在免疫接种(第0天)后9-14天出现症状。对小鼠的每日观察和评分从第9天开始，并且一直持续到研究结束。表10详细说明了本研究中使用的预期临床症状和评分标准。
表10.小鼠EAE临床症状和评分标准
本研究旨在评价化合物2在EAE小鼠模型中的预防和治疗效果，并且评价抗原与化合物2共同配制的效果。在自身免疫疾病的背景下，假设不需要抗原的共同配制/共同呈递，因为抗原是内源性表达的并且由于疾病而自身反应性T细胞丰富。图5A示出了所述研究的概要。
如图5A所示，在用MOG35-55免疫接种小鼠四天后开始预防组中的治疗。在研究期间，向小鼠给予口服QD，100μl的42μM化合物2或100μl的42μM化合物2与1μg MOG35-55的共同配制物(化合物2/MOG35-55)。
为了评价化合物2的治疗效果，在观察到第一个临床症状后开始治疗。一旦小鼠的临床评分达到表11中的评分1，它就被分配到治疗组或对照组。在研究的其余部分中，治疗组接受100μl的42μM化合物2，PO QD。每天监测所有组中的小鼠并对其临床症状进行评分。一旦小鼠达到表11中的评分五或被发现死在笼子里，它就被标记为存活分析中的一个事件。
在研究结束时，从每组小鼠的代表性样品中收集脾脏用于脾细胞分析。制备单细胞悬液用于通过流式细胞术进行细胞表型分析。对细胞进行染色并且针对CD4+T细胞进行设门。通过流式细胞术评价FoxP3+/CD4+T细胞百分比。
为了评价化合物2和化合物2/MOG35-55的预防效果，在EAE模型中评价疾病发作。与对照组相比，化合物2和化合物2/MOG35-55治疗组的疾病发作均延迟。对照组在免疫接种后第9天开始疾病发作，而两个治疗组在第12天开始疾病发作。治疗组中的所有动物均在第13天出现症状，而对照组中的所有动物均在第11天出现症状。事件发生时间统计分析指示，这是一个统计学上显著的延迟。化合物2与化合物2/MOG35-55之间没有差异(图5B)。
疾病发作后，所有组的临床评分均按预期进展。然而，与对照组相比，用化合物2和化合物2/MOG35-55治疗的动物症状不太严重。在第17天观察到对照组的峰值症状，平均评分为4.77(SD＝0.67)，而化合物2和化合物2/MOG35-55治疗的组的平均评分分别为2.6(SD＝0.23)和2.9(SD＝0.41)。在对照组中没有观察到恢复阶段，因为对照组中的大多数动物死于所述疾病(图5C)。然而，在化合物2和化合物2/MOG35-55治疗组中，症状开始消退，并且到研究结束时，化合物2和化合物2/MOG35-55的平均评分分别为2.1(SD＝0.23)和2.4(SD＝0.23)(图5C)。
疾病发作后，与未治疗的动物相比，用化合物2治疗的动物的疾病进展延迟了一天，随后在整个研究的其余时间中症状较轻(图5D)。在疾病发作后第7天观察到对照组的峰值症状，平均评分为4.77(SD＝0.67)，而治疗组的平均评分在症状出现后第6天为2.8(SD＝0.43)。在症状出现后第10天，治疗组的症状在峰值达到平均值2.33(SD＝0.29)后消退。由于未治疗组的死亡率较高，对照组未观察到缓解。
任何小鼠的评分为五或自发死亡被定义为存活分析的事件。在本研究中，未治疗组的死亡率较高，第一只小鼠在疾病发作后三天死亡。总体而言，根据表11，九只动物中有八只自发死亡或被安乐死，而化合物2治疗的组中九只动物中有零只自发死亡或被安乐死(图5E)。这是一种异常具有攻击性的模型，据报道EAE鼠模型的典型死亡率低于30％。
对从对照组最后一只存活小鼠和每个治疗组随机选择的小鼠分离的脾细胞进行流式细胞术分析，结果显示与对照组相比，所有治疗小鼠的Foxp3+/CD4+T细胞有所增加。在预防组中，化合物2和化合物2/MOG35-55治疗的小鼠的Foxp3+/CD4+T细胞百分比分别为10.4％和7.02％，而对照小鼠为3.20％，代表与对照相比分别增加了225％和119％。类似地，症状出现后用化合物2治疗的小鼠中Foxp3+/CD4+T细胞的百分比为26.1％，相比于未治疗组中存活的小鼠增加了715％。
在本研究中，在小鼠中诱导了一种攻击性的EAE模型。这从未治疗组的高临床评分和死亡率中可明显看出，其中九只动物中有八只达到评分5。相比之下，来自EAE出版物样品的对照/未治疗动物的平均临床评分范围为3至4。尽管EAE具有攻击性，但口服化合物2和化合物2/MOG35-55的预防性治疗将疾病发作延迟至少3天，这与Kent等人报道的在EAE模型中用抗α4抗体治疗所观察到的结果一致。化合物2与化合物2/MOG35-55之间没有差异，这表明在自身免疫模型中不需要共同施用/共同呈递抗原。
与未治疗组相比，在症状出现后用化合物2治疗的动物具有更好的存活和更低的临床评分。研究结束时，用化合物2治疗的动物的平均临床评分比未治疗组的平均临床评分低54％。相比之下，Kent等人报道，与未治疗小鼠的平均临床评分相比，抗α4治疗小鼠(研究第15天)在反应峰值时的平均临床评分下降了66％。
对从来自每个组的代表性动物中分离的脾细胞进行的离体分析支持了化合物2的拟议作用机制，即与未治疗动物相比，在所有治疗组中观察到耐受原性T细胞的增加。
实施例7.化合物2与DMPC、GL67的脂质体制剂
为了测试化合物2在DMPC和GL67(N4-胆固醇-精胺HCl盐)中的溶解，将化合物2(3mg)在DMPC(42.47mg)和GL67(2.669mg)中于室温(RT)下在3ml氯仿溶液中孵育，化合物2:DMPC:GL67的摩尔比为10:85:5。具体而言，称取3.0mg化合物2并在容量烧瓶中与3ml氯仿混合。将烧瓶超声处理五分钟，然后短暂涡旋，并且在RT下孵育过夜。过夜孵育后，将烧瓶超声处理五分钟，然后短暂涡旋。将42.47mg DMPC添加到烧瓶中。观察到没有混浊的澄清溶液。将2.669mg GL67添加至烧瓶中，并且将烧瓶超声处理一至三分钟。超声处理后观察到澄清溶液。
将澄清溶液转移至5-ml圆底烧瓶中，并且将其装载到旋转蒸发仪上。旋转蒸发仪最初在800毫巴的真空压力和5的速度下在RT下运行，然后将水浴的温度升高至37℃。然后将真空压力降低至600毫巴持续15分钟，然后进一步降低至400毫巴持续30分钟。在旋转蒸发仪上大约一小时后，有机溶剂完全蒸发，并且在圆底烧瓶上形成薄膜。
接下来，制备水合缓冲液用于薄膜的再水合。具体而言，称取880mg羟丙基β环糊精(HPBCD)，并且将其溶解在50-ml锥形管中的生理盐水中(Q.S.至11ml)。然后将AAV9-CMVChry(3x 106，来自Vigene Biosciences，属于Charles River公司)添加到水合缓冲液中。
然后使用水合缓冲液使膜再水合。这是通过将缓冲液添加到圆底烧瓶中并且在真空下将圆底烧瓶连接到旋转蒸发仪来完成的。旋转蒸发仪的温和旋转导致薄膜再水合并形成脂质体。当薄膜被再水合成脂质体时，AAV9颗粒被捕获在新形成的脂质体的水性中心中。
再水合后使用透射电子显微镜(TEM)对所得脂质体进行成像。图6示出封装在DMPC:GL67:化合物2(85:5:10)脂质体中的AAV9-CMVChry的代表性TEM图像，其中红色箭头和圆圈指示封装的AAV9-CMVChry。
实施例8.化合物2增加小鼠FoxP3+/CD4+T细胞
给药5天后，在小鼠中评价单次PO剂量的封装AAV9-GFP的DMPC:GL67:化合物2(85:5:10)脂质体的PD效果。根据实施例7中描述的程序合成脂质体，不同的是用AAV9-GFP(来自Vigene Biosciences，属于Charles River公司)替换AAV9-CMVChry。使用表11中描述的给药组如实施例5中所述进行实验。
表11.给药组
脂质体 n
初始 -- 3
106AAV9-GFP制剂 100μg 3
在初始组中，通过流式细胞术测量的FoxP3+/CD4+T细胞的百分比分别为4.65、3.91和5.01。在用封装106AAV9-GFP的DMPC:GL67:化合物2(85:5:10)脂质体制剂治疗的组中，通过流式细胞术测量的FoxP3+/CD4+T细胞的百分比为7.94、9.37和8.15。因此，口服施用单剂量100μg/小鼠封装在DMPC:GL76:化合物2(85:5:10)脂质体中的106AAV9-GFP在施用五天后增强Treg表达。
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虽然示例性实施方案已具体示出和描述，但是本领域技术人员应了解，可在不脱离由随附权利要求书所涵盖的实施方案的范围的情况下在其中在形式和细节方面做出各种改变。

Claims (44)

1.一种具有以下结构式的化合物：
或其药学上可接受的盐，其中：
X是-N(R1)C(O)-*或-N(R1)C(O)O-*，其中*指示X与R的连接点；
R是任选地被一个或多个氟基取代的(C5-C30)烷基或(C5-C30)烯基；并且
R1是H或(C1-C5)烷基，
前提是所述化合物不是(S)-2-氨基-3-((2E,4E)-己-2,4-二烯酰胺基)丙酸、(S)-2-氨基-3-己酰胺基丙酸、(S)-2-氨基-3-庚酰胺基丙酸、(S)-2-氨基-3-辛酰胺基丙酸或(S)-2-氨基-3-棕榈酰胺基丙酸、或任何前述的盐。
2.如权利要求1所述的化合物，其中X是-N(R1)C(O)-*。
3.如权利要求1所述的化合物，其中X是-N(R1)C(O)O-*。
4.如权利要求1-3中任一项所述的化合物，其中R是任选地被一个或多个氟基取代的(C5-C30)烷基。
5.如权利要求1-3中任一项所述的化合物，其中R是任选地被一个或多个氟基取代的(C15-C20)烷基或(C15-C20)烯基。
6.如权利要求1-5中任一项所述的化合物，其中R1是H。
7.如权利要求1所述的化合物，其具有以下结构式：
或其药学上可接受的盐。
8.如权利要求1所述的化合物，其具有以下结构式：
或其药学上可接受的盐。
9.一种脂质颗粒，其包含一种或多种脂质或其药学上可接受的盐，以及(i)如权利要求1-8中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，或(ii)具有以下结构式的化合物：
或其药学上可接受的盐，其中：
X是-N(R1)C(O)-、-N(R1)C(O)O-、-N(R1)C(O)N(R2)-、-N(R1)-、-N(R1)SO2-、-O-、-S-、-S(O)-、-S(O)2-或-OP(O)2O-；
R是任选地被一个或多个氟基取代的(C1-C30)烷基或(C1-C30)烯基；
R1是H或(C1-C5)烷基；并且
R2是H或(C1-C5)烷基。
10.如权利要求9所述的脂质颗粒，其呈脂质体的形式。
11.如权利要求9或10所述的脂质颗粒，其中所述一种或多种脂质包括磷脂或其药学上可接受的盐。
12.如权利要求11所述的脂质颗粒，其中所述磷脂是饱和磷脂或其药学上可接受的盐。
13.如权利要求12所述的脂质颗粒，其中所述磷脂是二肉豆蔻酰磷脂酰胆碱(DMPC)或1,2-二硬脂酰-sn-甘油-3-磷酸胆碱18:0(DSPC)。
14.如权利要求9-13中任一项所述的脂质颗粒，其中所述具有结构式I的化合物或其药学上可接受的盐在所述脂质颗粒中的摩尔百分比为约1％至约50％。
15.如权利要求9-14中任一项所述的脂质颗粒，其中所述一种或多种脂质或其药学上可接受的盐在所述脂质颗粒中的摩尔百分比为约50％至约99％。
16.如权利要求9-15中任一项所述的脂质颗粒，其还包含抗原。
17.如权利要求16所述的脂质颗粒，其中所述抗原封装在所述脂质颗粒内。
18.一种组合物，其包含根据权利要求16或17所述的多个脂质颗粒。
19.一种组合物，其包含根据权利要求9-15中任一项所述的多个脂质颗粒。
20.如权利要求19所述的组合物，其还包含抗原。
21.如权利要求18-20中任一项所述的组合物，其还包含药学上可接受的载剂。
22.一种使有需要的受试者对抗原免疫耐受的方法，其包括向所述受试者施用：
(i)所述抗原、或其免疫原性片段、和治疗有效量的如权利要求19或21所述的组合物；或
(ii)治疗有效量的如权利要求18、20或21所述的组合物，其中所述组合物中的所述抗原是使所述受试者对其免疫耐受的所述抗原，或使所述受试者对其免疫耐受的所述抗原的免疫原性片段。
23.一种在受试者中诱导调控性T细胞群的方法，其包括向所述受试者施用治疗有效量的如权利要求18-21中任一项所述的组合物。
24.一种响应于抗原在受试者中诱导调控性T细胞群的方法，其包括向所述受试者施用治疗有效量的如权利要求18、20或21所述的组合物，其中所述组合物中的所述抗原是响应于其诱导所述调控性T细胞群的所述抗原，或响应于其诱导所述调控性T细胞群的所述抗原的免疫原性片段。
25.一种抑制或降低受试者中的抗原特异性抗体滴度的方法，其包括向所述受试者施用：
(i)所述抗原和治疗有效量的如权利要求19或21所述的组合物；或
(ii)治疗有效量的如权利要求18、20或21所述的组合物，其中所述组合物中的所述抗原是针对其的所述抗体滴度被抑制或降低的所述抗原、或针对其的所述抗体滴度被抑制或降低的所述抗原的免疫原性片段。
26.一种增加受试者的耐受原性T细胞的活性或水平的方法，其包括向所述受试者施用治疗有效量的如权利要求18-21中任一项所述的组合物。
27.一种在受试者中诱导调控性B细胞群的方法，其包括向所述受试者施用治疗有效量的如权利要求18-21中任一项所述的组合物。
28.如权利要求22、24或25所述的方法，其中所述抗原或所述其免疫原性片段和所述组合物是共同施用的。
29.如权利要求16或17所述的脂质颗粒、如权利要求18、20或21所述的组合物或如权利要求22、24、25和28中任一项所述的方法，其中所述抗原是外来抗原。
30.如权利要求29所述的脂质颗粒、组合物或方法，其中所述外来抗原是抗原疗法。
31.如权利要求29或30所述的脂质颗粒、组合物或方法，其中所述外来抗原是治疗性蛋白质。
32.如权利要求29-31中任一项所述的脂质颗粒、组合物或方法，其中所述外来抗原是酶替换疗法。
33.如权利要求29或30所述的脂质颗粒、组合物或方法，其中所述外来抗原是基因疗法。
34.一种用抗原疗法来治疗有需要的受试者的疾病、病症或病状的方法，其包括向所述受试者施用：
(i)治疗有效量的所述抗原疗法和足以使所述受试者对所述抗原疗法免疫耐受的量的如权利要求19或21所述的组合物；或
(ii)治疗有效量的如权利要求18、20或21所述的组合物，其中所述组合物中的所述抗原是所述抗原疗法。
35.如权利要求34所述的方法，其中所述抗原疗法和所述组合物是共同施用的。
36.如权利要求34或35所述的方法，其还包括在不存在所述组合物的情况下向所述受试者施用治疗有效量的所述抗原疗法。
37.如权利要求34-36中任一项所述的方法，其中所述抗原疗法是酶替换疗法。
38.如权利要求34-36中任一项所述的方法，其中所述抗原疗法是基因疗法。
39.如权利要求33所述的脂质颗粒、组合物或方法或如权利要求38所述的方法，其中所述基因疗法包含DNA、RNA或DNA和RNA，以及病毒载体。
40.如权利要求39所述的脂质颗粒、组合物或方法，其中所述病毒载体是腺相关病毒(AAV)。
41.如权利要求40所述的脂质颗粒、组合物或方法，其中所述AAV是AAV9。
42.一种治疗有需要的受试者的自身免疫病症的方法，其包括向所述受试者施用：
(i)治疗有效量的如权利要求19或21所述的组合物；或
(ii)治疗有效量的如权利要求18、20或21所述的组合物，其中所述组合物中的所述抗原是与所述自身免疫病症相关的自身抗原、或其免疫原性片段。
43.如权利要求22-42中任一项所述的方法，其还包括向所述受试者施用另外的治疗剂。
44.如权利要求22-43中任一项所述的方法，其中所述组合物口服施用。
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