CN117916269A - 预防蛋白质聚集的方法 - Google Patents

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Abstract

本文公开了用于预防或抑制形成病理性聚集体的蛋白质的淀粉样蛋白复合物形成的方法和组合物。这些蛋白质的实例包括α‑突触核蛋白、tau蛋白、TDP‑43、甲状腺素运载蛋白、尿调节素、胰岛淀粉样多肽(IAPP)、血清淀粉样蛋白A(SAA)、p53、载脂蛋白E(APOE)、APOE‑4、朊病毒蛋白、纤维蛋白、或神经丝轻链(NFL)、CRP、SUMO、轻链、血小板源生长因子受体(PDGFR)、黑色素瘤细胞黏附分子(MCAM)、补体蛋白C3和/或C9、溶菌酶、胰岛素、天然血红蛋白(Hb)、糖化血红蛋白(HbAIC)、苯丙氨酸(Phe)、谷氨酰胺(Gln)、胆甾醇基(共酯基)、胆固醇、神经源性丝氨酸蛋白酶抑制剂、晶体蛋白AA和/或晶体蛋白AB、半胱氨酸蛋白酶抑制剂‑C和肌生长抑制素前肽。这些方法和组合物涉及结合半乳凝素‑3(Gal3)的抗体或其结合片段。

Description

预防蛋白质聚集的方法
相关申请的交叉引用
本申请要求2021年7月13日提交的美国临时专利申请63/221,395和2021年11月05日提交的美国临时专利申请63/263,622的优先权权益，其中的每一个通过引用以其整体(包括随其提交的任何附录)明确地并入本文。
序列表的引用
本申请与电子格式的序列表一起提交。序列表以题目为IMMUT.031WO.XM的文件提供，该文件创建并且最后在2022年7月12日修改，大小为2,976,441字节。电子序列表中的信息通过引用以其整体并入本文。
领域
本公开的方面总体涉及结合至半乳凝素-3(Gal3)的抗体或其结合片段，以及用于预防或抑制形成病理性聚集体的蛋白质的淀粉样蛋白复合物形成的方法。
背景
半乳凝素-3(Gal3、GAL3)是凝集素或碳水化合物结合蛋白，对β-半乳糖苷具有特异性。在人细胞中，Gal3在细胞核、细胞质、细胞表面中以及在细胞外空间中表达并且可以在其中找到。Gal3识别各种蛋白质上的β-半乳糖缀合物并且与各种蛋白质上的β-半乳糖缀合物相互作用。
概要
半乳凝素-3(Gal3)已被表明具有免疫调节活性。这一点的实例是Gal3与T细胞免疫球蛋白和含有粘蛋白结构域-3(TIM-3)之间的相互作用，其引起抑制诸如T细胞激活等免疫应答，并可使癌细胞逃避免疫清除。结合至Gal3的抗体以及制备和使用它们的方法在WO2019/023247、WO2020/160156和WO2021/113527中进行了例证，其各自通过引用以其整体明确并入本文。
在一些实施方式中，公开了抑制Gal3-介导的蛋白质的淀粉样蛋白聚集的方法。在一些实施方式中，方法包括：使蛋白质与抗Gal3抗体或其结合片段接触，其中抗Gal3抗体或其结合片段与Gal3的结合抑制Gal3-介导的蛋白质的淀粉样蛋白聚集。
在一些实施方式中，公开了抑制Gal3-介导的蛋白质的寡聚化的方法。在一些实施方式中，方法包括：使蛋白质与抗Gal3抗体或其结合片段接触，其中抗Gal3抗体或其结合片段与Gal3的结合抑制Gal3-介导的蛋白质的寡聚化。
在一些实施方式中，公开了治疗有需要的受试者的淀粉样蛋白病的方法。在一些实施方式中，方法包括：向受试者施用抗Gal3抗体或其结合片段，其中抗Gal3抗体或其结合片段与受试者中Gal3的结合抑制受试者中Gal3-介导的蛋白质的淀粉样蛋白聚集，从而治疗受试者的淀粉样蛋白病。
在一些实施方式中，公开了治疗有需要的受试者的蛋白病的方法。在一些实施方式中，方法包括：向受试者施用抗Gal3抗体或其结合片段，其中抗Gal3抗体或其结合片段与受试者中Gal3的结合抑制受试者中Gal3-介导的蛋白质的寡聚化，从而治疗受试者的淀粉样蛋白病。
在一些实施方式中，公开了促进蛋白质的淀粉样蛋白聚集和/或寡聚化的方法。在一些实施方式中，方法包括使蛋白质与Gal3接触，其中Gal3促进蛋白质的淀粉样蛋白聚集和/或寡聚化。
在一些实施方式中，公开了一种组合物，其包含蛋白质和Gal3，其中Gal3促进蛋白质的淀粉样蛋白聚集和/或寡聚化。
在一些实施方式中，公开了抑制Gal3-介导的淀粉样蛋白β40和/或淀粉样蛋白β42的淀粉样蛋白聚集的方法。在一些实施方式中，方法包括：使蛋白质与抗Gal3抗体或其结合片段接触，其中抗Gal3抗体或其结合片段与Gal3的结合抑制Gal3-介导的淀粉样蛋白β40和/或淀粉样蛋白β42的淀粉样蛋白聚集。
在一些实施方式中，公开了治疗有需要的受试者的阿尔茨海默病的方法。在一些实施方式中，方法包括：向受试者施用抗Gal3抗体或其结合片段，其中抗Gal3抗体或其结合片段与受试者中Gal3的结合抑制受试者中Gal3-介导的淀粉样蛋白β40和/或淀粉样蛋白β42的淀粉样蛋白聚集，从而治疗受试者的阿尔茨海默病。
在一些实施方式中，公开了治疗有需要的受试者的CAA的方法。在一些实施方式中，方法包括：向受试者施用抗Gal3抗体或其结合片段，其中抗Gal3抗体或其结合片段与受试者中Gal3的结合抑制受试者中Gal3-介导的淀粉样蛋白β40和/或淀粉样蛋白β42的聚集，从而治疗受试者的CAA。
在一些实施方式中，公开了抑制Gal3-介导的磷酸tau的淀粉样蛋白聚集的方法。在一些实施方式中，方法包括：使蛋白质与抗Gal3抗体或其结合片段接触，其中抗Gal3抗体或其结合片段与Gal3的结合抑制Gal3-介导的磷酸tau的寡聚化。
在一些实施方式中，公开了治疗有需要的受试者的阿尔茨海默病的方法。在一些实施方式中，方法包括：向受试者施用抗Gal3抗体或其结合片段，其中抗Gal3抗体或其结合片段与受试者中Gal3的结合抑制受试者中Gal3-介导的磷酸tau的寡聚化，从而治疗受试者的阿尔茨海默病。
在一些实施方式中，公开了治疗有需要的受试者的tau蛋白病的方法。在一些实施方式中，方法包括：向受试者施用抗Gal3抗体或其结合片段，其中抗Gal3抗体或其结合片段与受试者中Gal3的结合抑制受试者中Gal3-介导的磷酸tau的寡聚化，从而治疗受试者的tau蛋白病。
在一些实施方式中，公开了抑制Gal3-介导的α突触核蛋白的寡聚化的方法。在一些实施方式中，方法包括：使蛋白质与抗Gal3抗体或其结合片段接触，其中抗Gal3抗体或其结合片段与Gal3的结合抑制Gal3-介导的α突触核蛋白的寡聚化。
在一些实施方式中，公开了治疗有需要的受试者的路易体病的方法。在一些实施方式中，方法包括：向受试者施用抗Gal3抗体或其结合片段，其中抗Gal3抗体或其结合片段与受试者中Gal3的结合抑制受试者中Gal3-介导的α突触核蛋白的寡聚化，从而治疗受试者的路易体病。
在一些实施方式中，公开了治疗有需要的受试者的多系统萎缩的方法。在一些实施方式中，方法包括：向受试者施用抗Gal3抗体或其结合片段，其中抗Gal3抗体或其结合片段与受试者中Gal3的结合抑制受试者中Gal3-介导的α突触核蛋白的寡聚化，从而治疗受试者的多系统萎缩。
在一些实施方式中，公开了抑制Gal3-介导的APOE-4的寡聚化的方法。在一些实施方式中，方法包括：使蛋白质与抗Gal3抗体或其结合片段接触，其中抗Gal3抗体或其结合片段与Gal3的结合抑制Gal3-介导的APOE-4的寡聚化。
在一些实施方式中，公开了治疗有需要的受试者的阿尔茨海默病的方法。在一些实施方式中，方法包括：向受试者施用抗Gal3抗体或其结合片段，其中抗Gal3抗体或其结合片段与受试者中Gal3的结合抑制受试者中Gal3-介导的APOE-4的寡聚化，从而治疗受试者的阿尔茨海默病。
在一些实施方式中，公开了治疗有需要的受试者的CAA的方法。在一些实施方式中，方法包括：向受试者施用抗Gal3抗体或其结合片段，其中抗Gal3抗体或其结合片段与受试者中Gal3的结合抑制受试者中Gal3-介导的α突触核蛋白的寡聚化，从而治疗受试者的CAA。
在一些实施方式中，公开了抑制Gal3-介导的胆固醇的寡聚化的方法。在一些实施方式中，方法包括：使蛋白质与抗Gal3抗体或其结合片段接触，其中抗Gal3抗体或其结合片段与Gal3的结合抑制Gal3-介导的胆固醇的寡聚化。
在一些实施方式中，公开了治疗有需要的受试者的阿尔茨海默病的方法。在一些实施方式中，方法包括：向受试者施用抗Gal3抗体或其结合片段，其中抗Gal3抗体或其结合片段与受试者中Gal3的结合抑制受试者中Gal3-介导的胆固醇的寡聚化，从而治疗受试者的阿尔茨海默病。
在一些实施方式中，公开了治疗有需要的受试者的心血管疾病的方法。在一些实施方式中，方法包括：向受试者施用抗Gal3抗体或其结合片段，其中抗Gal3抗体或其结合片段与受试者中Gal3的结合抑制受试者中Gal3-介导的胆固醇的寡聚化，从而治疗受试者的心血管疾病。
在一些实施方式中，公开了治疗有需要的受试者的动脉粥样硬化疾病的方法。在一些实施方式中，方法包括：向受试者施用抗Gal3抗体或其结合片段，其中抗Gal3抗体或其结合片段与受试者中Gal3的结合抑制受试者中Gal3-介导的胆固醇的寡聚化，从而治疗受试者的动脉粥样硬化。
在一些实施方式中，公开了抑制Gal3-介导的胆甾醇基的寡聚化的方法。在一些实施方式中，方法包括：使蛋白质与抗Gal3抗体或其结合片段接触，其中抗Gal3抗体或其结合片段与Gal3的结合抑制Gal3-介导的胆甾醇基的寡聚化。
在一些实施方式中，公开了治疗有需要的受试者的阿尔茨海默病的方法。在一些实施方式中，方法包括：向受试者施用抗Gal3抗体或其结合片段，其中抗Gal3抗体或其结合片段与受试者中Gal3的结合抑制受试者中Gal3-介导的胆甾醇基的寡聚化，从而治疗受试者的阿尔茨海默病。
在一些实施方式中，公开了治疗有需要的受试者的心血管疾病的方法。在一些实施方式中，方法包括：向受试者施用抗Gal3抗体或其结合片段，其中抗Gal3抗体或其结合片段与受试者中Gal3的结合抑制受试者中Gal3-介导的胆甾醇基的寡聚化，从而治疗受试者的心血管疾病。
在一些实施方式中，公开了治疗有需要的受试者的动脉粥样硬化疾病的方法。在一些实施方式中，方法包括：向受试者施用抗Gal3抗体或其结合片段，其中抗Gal3抗体或其结合片段与受试者中Gal3的结合抑制受试者中Gal3-介导的胆甾醇基的寡聚化，从而治疗受试者的动脉粥样硬化。
在一些实施方式中，公开了抑制Gal3-介导的神经源性丝氨酸蛋白酶抑制剂的寡聚化的方法。在一些实施方式中，方法包括：使蛋白质与抗Gal3抗体或其结合片段接触，其中抗Gal3抗体或其结合片段与Gal3的结合抑制Gal3-介导的神经源性丝氨酸蛋白酶抑制剂的寡聚化。
在一些实施方式中，公开了治疗有需要的受试者的神经源性丝氨酸蛋白酶抑制剂包涵体家族性脑病(FENIB)的方法。在一些实施方式中，方法包括：向受试者施用抗Gal3抗体或其结合片段，其中抗Gal3抗体或其结合片段与受试者中Gal3的结合抑制受试者中Gal3-介导的神经源性丝氨酸蛋白酶抑制剂的寡聚化，从而治疗受试者的神经源性丝氨酸蛋白酶抑制剂包涵体家族性脑病(FENIB)。
在一些实施方式中，公开了抑制Gal3-介导的胰岛素的寡聚化的方法。在一些实施方式中，方法包括：使蛋白质与抗Gal3抗体或其结合片段接触，其中抗Gal3抗体或其结合片段与Gal3的结合抑制Gal3-介导的胰岛素的寡聚化。
在一些实施方式中，公开了治疗有需要的受试者的胰岛素源性淀粉样变性的方法。在一些实施方式中，方法包括：向受试者施用抗Gal3抗体或其结合片段，其中抗Gal3抗体或其结合片段与受试者中Gal3的结合抑制受试者中Gal3-介导的胰岛素的寡聚化，从而治疗受试者的胰岛素源性淀粉样变性。
在一些实施方式中，公开了治疗有需要的受试者的糖尿病的方法。在一些实施方式中，方法包括：向受试者施用抗Gal3抗体或其结合片段，其中抗Gal3抗体或其结合片段与受试者中Gal3的结合抑制受试者中Gal3-介导的胰岛素的寡聚化，从而治疗受试者的糖尿病。
在一些实施方式中，公开了抑制Gal3-介导的半胱氨酸蛋白酶抑制剂-c的寡聚化的方法。在一些实施方式中，方法包括：使蛋白质与抗Gal3抗体或其结合片段接触，其中抗Gal3抗体或其结合片段与Gal3的结合抑制Gal3-介导的半胱氨酸蛋白酶抑制剂-c的寡聚化。
在一些实施方式中，公开了治疗有需要的受试者的阿尔茨海默病的方法。在一些实施方式中，方法包括：向受试者施用抗Gal3抗体或其结合片段，其中抗Gal3抗体或其结合片段与受试者中Gal3的结合抑制受试者中Gal3-介导的半胱氨酸蛋白酶抑制剂-c的寡聚化，从而治疗受试者的阿尔茨海默病。
在一些实施方式中，公开了治疗有需要的受试者的CAA的方法。在一些实施方式中，方法包括：向受试者施用抗Gal3抗体或其结合片段，其中抗Gal3抗体或其结合片段与受试者中Gal3的结合抑制受试者中Gal3-介导的半胱氨酸蛋白酶抑制剂-c的寡聚化，从而治疗受试者的CAA。
在一些实施方式中，公开了治疗有需要的受试者的肾脏疾病的方法。在一些实施方式中，方法包括：向受试者施用抗Gal3抗体或其结合片段，其中抗Gal3抗体或其结合片段与受试者中Gal3的结合抑制受试者中Gal3-介导的半胱氨酸蛋白酶抑制剂-c的寡聚化，从而治疗受试者的肾脏疾病。
在一些实施方式中，公开了抑制Gal3-介导的朊病毒蛋白的寡聚化的方法。在一些实施方式中，方法包括：使蛋白质与抗Gal3抗体或其结合片段接触，其中抗Gal3抗体或其结合片段与Gal3的结合抑制Gal3-介导的朊病毒蛋白的寡聚化。
在一些实施方式中，公开了治疗有需要的受试者的朊病毒病的方法。在一些实施方式中，方法包括：向受试者施用抗Gal3抗体或其结合片段，其中抗Gal3抗体或其结合片段与受试者中Gal3的结合抑制受试者中Gal3-介导的朊病毒蛋白的寡聚化，从而治疗受试者的朊病毒病。
在一些实施方式中，公开了治疗有需要的受试者的传染性海绵状脑病(TSE)的方法。在一些实施方式中，方法包括：向受试者施用抗Gal3抗体或其结合片段，其中抗Gal3抗体或其结合片段与受试者中Gal3的结合抑制受试者中Gal3-介导的朊病毒蛋白的寡聚化，从而治疗受试者的传染性海绵状脑病(TSE)。
在一些实施方式中，公开了治疗有需要的受试者的家族性克雅氏病(CJD)的方法。在一些实施方式中，方法包括：向受试者施用抗Gal3抗体或其结合片段，其中抗Gal3抗体或其结合片段与受试者中Gal3的结合抑制受试者中Gal3-介导的朊病毒蛋白的寡聚化，从而治疗受试者的家族性克雅氏病。
在一些实施方式中，公开了治疗有需要的受试者的致命性家族性失眠症的方法。在一些实施方式中，方法包括：向受试者施用抗Gal3抗体或其结合片段，其中抗Gal3抗体或其结合片段与受试者中Gal3的结合抑制受试者中Gal3-介导的朊病毒蛋白的寡聚化，从而治疗受试者的致命性家族性失眠症。
在一些实施方式中，公开了治疗有需要的受试者的格斯特曼-斯特劳斯勒-沙因克病(Gerstmann--Scheinker disease)的方法。在一些实施方式中，方法包括：向受试者施用抗Gal3抗体或其结合片段，其中抗Gal3抗体或其结合片段与受试者中Gal3的结合抑制受试者中Gal3-介导的朊病毒蛋白的寡聚化，从而治疗受试者的格斯特曼-斯特劳斯勒-沙因克病。
在一些实施方式中，公开了抑制Gal3-介导的肌生长抑制素的寡聚化的方法。在一些实施方式中，方法包括：使蛋白质与抗Gal3抗体或其结合片段接触，其中抗Gal3抗体或其结合片段与Gal3的结合抑制Gal3-介导的肌生长抑制素的寡聚化。
在一些实施方式中，公开了治疗有需要的受试者的特发性炎性肌病(IIM)的方法。在一些实施方式中，方法包括：向受试者施用抗Gal3抗体或其结合片段，其中抗Gal3抗体或其结合片段与受试者中Gal3的结合抑制受试者中Gal3-介导的肌生长抑制素的寡聚化，从而治疗受试者的特发性炎性肌病(IIM)。
在一些实施方式中，公开了抑制Gal3-介导的甲状腺素运载蛋白的寡聚化的方法。在一些实施方式中，方法包括：使蛋白质与抗Gal3抗体或其结合片段接触，其中抗Gal3抗体或其结合片段与Gal3的结合抑制Gal3-介导的甲状腺素运载蛋白的寡聚化。
在一些实施方式中，公开了治疗有需要的受试者中的甲状腺素运载蛋白淀粉样变性的方法。在一些实施方式中，方法包括：向受试者施用抗Gal3抗体或其结合片段，其中抗Gal3抗体或其结合片段与受试者中Gal3的结合抑制受试者中Gal3-介导的甲状腺素运载蛋白的寡聚化，从而治疗受试者的甲状腺素运载蛋白淀粉样变性。
在一些实施方式中，公开了治疗有需要的受试者的心脏和/或肾脏疾病的方法。在一些实施方式中，方法包括：向受试者施用抗Gal3抗体或其结合片段，其中抗Gal3抗体或其结合片段与受试者中Gal3的结合抑制受试者中Gal3-介导的甲状腺素运载蛋白的寡聚化，从而治疗受试者的心脏和/或肾脏疾病。
在一些实施方式中，公开了治疗有需要的受试者的先兆子痫的方法。在一些实施方式中，方法包括：向受试者施用抗Gal3抗体或其结合片段，其中抗Gal3抗体或其结合片段与受试者中Gal3的结合抑制受试者中Gal3-介导的甲状腺素运载蛋白的寡聚化，从而治疗受试者的先兆子痫。
在一些实施方式中，公开了抑制Gal3-介导的苯丙氨酸的寡聚化的方法。在一些实施方式中，方法包括：使蛋白质与抗Gal3抗体或其结合片段接触，其中抗Gal3抗体或其结合片段与Gal3的结合抑制Gal3-介导的苯丙氨酸的寡聚化。
在一些实施方式中，公开了治疗有需要的受试者的苯丙酮尿症的方法。在一些实施方式中，方法包括：向受试者施用抗Gal3抗体或其结合片段，其中抗Gal3抗体或其结合片段与受试者中Gal3的结合抑制受试者中Gal3-介导的苯丙氨酸的寡聚化，从而治疗受试者的苯丙酮尿症。
在一些实施方式中，公开了抑制Gal3-介导的谷氨酰胺的寡聚化的方法。在一些实施方式中，方法包括：使蛋白质与抗Gal3抗体或其结合片段接触，其中抗Gal3抗体或其结合片段与Gal3的结合抑制Gal3-介导的谷氨酰胺的寡聚化。
在一些实施方式中，公开了治疗有需要的受试者的亨廷顿病的方法。在一些实施方式中，方法包括：向受试者施用抗Gal3抗体或其结合片段，其中抗Gal3抗体或其结合片段与受试者中Gal3的结合抑制受试者中Gal3-介导的谷氨酰胺的寡聚化，从而治疗受试者的亨廷顿病。
在一些实施方式中，公开了抑制Gal3-介导的神经丝轻链(NFL)的寡聚化的方法。在一些实施方式中，方法包括：使蛋白质与抗Gal3抗体或其结合片段接触，其中抗Gal3抗体或其结合片段与Gal3的结合抑制Gal3-介导的NFL的寡聚化。
在一些实施方式中，公开了治疗有需要的受试者的运动神经元变性的方法在一些实施方式中，方法包括：向受试者施用抗Gal3抗体或其结合片段，其中抗Gal3抗体或其结合片段与受试者中Gal3的结合抑制受试者中Gal3-介导的NFL的寡聚化，从而治疗受试者的运动神经元变性。
在一些实施方式中，公开了抑制Gal3-介导的纤维蛋白的淀粉样蛋白聚集的方法。在一些实施方式中，方法包括：使蛋白质与抗Gal3抗体或其结合片段接触，其中抗Gal3抗体或其结合片段与Gal3的结合抑制Gal3-介导的纤维蛋白的寡聚化。
在一些实施方式中，公开了治疗有需要的受试者的脑血管损伤的方法。在一些实施方式中，方法包括：向受试者施用抗Gal3抗体或其结合片段，其中抗Gal3抗体或其结合片段与受试者中Gal3的结合抑制受试者中Gal3-介导的纤维蛋白的寡聚化，从而治疗受试者的脑血管损伤。
在一些实施方式中，公开了治疗有需要的受试者的中风的方法。在一些实施方式中，方法包括：向受试者施用抗Gal3抗体或其结合片段，其中抗Gal3抗体或其结合片段与受试者中Gal3的结合抑制受试者中Gal3-介导的纤维蛋白的寡聚化，从而治疗受试者的中风。
在一些实施方式中，公开了治疗有需要的受试者的CAA的方法。在一些实施方式中，方法包括：向受试者施用抗Gal3抗体或其结合片段，其中抗Gal3抗体或其结合片段与受试者中Gal3的结合抑制受试者中Gal3-介导的纤维蛋白的寡聚化，从而治疗受试者的CAA。
在一些实施方式中，公开了治疗有需要的受试者的阿尔茨海默病的方法。在一些实施方式中，方法包括：向受试者施用抗Gal3抗体或其结合片段，其中抗Gal3抗体或其结合片段与受试者中Gal3的结合抑制受试者中Gal3-介导的纤维蛋白的寡聚化，从而治疗受试者的阿尔茨海默病。
在一些实施方式中，公开了抑制Gal3-介导的溶菌酶的寡聚化的方法。在一些实施方式中，方法包括：使蛋白质与抗Gal3抗体或其结合片段接触，其中抗Gal3抗体或其结合片段与Gal3的结合抑制Gal3-介导的溶菌酶的寡聚化。
在一些实施方式中，公开了治疗有需要的受试者的人全身性淀粉样蛋白疾病的方法。在一些实施方式中，方法包括：向受试者施用抗Gal3抗体或其结合片段，其中抗Gal3抗体或其结合片段与受试者中Gal3的结合抑制受试者中Gal3-介导的溶菌酶的寡聚化，从而治疗受试者的人全身性淀粉样蛋白疾病。
在一些实施方式中，公开了抑制Gal3-介导的补体蛋白C3和/或C9的淀粉样蛋白聚集的方法。在一些实施方式中，方法包括：使蛋白质与抗Gal3抗体或其结合片段接触，其中抗Gal3抗体或其结合片段与Gal3的结合抑制Gal3-介导的补体蛋白C3和/或C9的寡聚化。
在一些实施方式中，公开了治疗有需要的受试者的先天免疫系统破坏的方法。在一些实施方式中，方法包括：向受试者施用抗Gal3抗体或其结合片段，其中抗Gal3抗体或其结合片段与受试者中Gal3的结合抑制受试者中Gal3-介导的补体蛋白C3和/或C9的寡聚化，从而治疗受试者的先天免疫系统破坏。
在一些实施方式中，公开了抑制Gal3-介导的晶体蛋白的寡聚化的方法。在一些实施方式中，方法包括：使蛋白质与抗Gal3抗体或其结合片段接触，其中抗Gal3抗体或其结合片段与Gal3的结合抑制Gal3-介导的晶体蛋白的寡聚化。
在一些实施方式中，公开了治疗有需要的受试者的受试眼睛的晶状体损伤和/或视力模糊的方法。在一些实施方式中，方法包括：向受试者施用抗Gal3抗体或其结合片段，其中抗Gal3抗体或其结合片段与受试者中Gal3的结合抑制受试者中Gal3-介导的晶体蛋白的寡聚化，从而治疗受试者的受试眼睛的晶状体损伤和/或视力模糊。
在一些实施方式中，公开了抑制Gal3-介导的心房钠尿肽(ANP)的寡聚化的方法。在一些实施方式中，方法包括：使蛋白质与抗Gal3抗体或其结合片段接触，其中抗Gal3抗体或其结合片段与Gal3的结合抑制Gal3-介导的ANP的寡聚化。
在一些实施方式中，公开了治疗有需要的受试者的充血性心力衰竭(CHF)的方法。在一些实施方式中，方法包括：向受试者施用抗Gal3抗体或其结合片段，其中抗Gal3抗体或其结合片段与受试者中Gal3的结合抑制受试者中Gal3-介导的ANP的寡聚化，从而治疗受试者的CHF。
在一些实施方式中，公开了治疗有需要的受试者的心脏淀粉样变性的方法。在一些实施方式中，方法包括：向受试者施用抗Gal3抗体或其结合片段，其中抗Gal3抗体或其结合片段与受试者中Gal3的结合抑制受试者中Gal3-介导的ANP的寡聚化，从而治疗受试者的心脏淀粉样变性。
在一些实施方式中，公开了抑制Gal3-介导的B-型钠尿肽(BNP)的寡聚化的方法。在一些实施方式中，方法包括：使蛋白质与抗Gal3抗体或其结合片段接触，其中抗Gal3抗体或其结合片段与Gal3的结合抑制Gal3-介导的BNP的寡聚化。
在一些实施方式中，公开了治疗有需要的受试者的充血性心力衰竭(CHF)的方法。在一些实施方式中，方法包括：向受试者施用抗Gal3抗体或其结合片段，其中抗Gal3抗体或其结合片段与受试者中Gal3的结合抑制受试者中Gal3-介导的BNP的寡聚化，从而治疗受试者的CHF。
在一些实施方式中，公开了治疗有需要的受试者的心脏淀粉样变性的方法。在一些实施方式中，方法包括：向受试者施用抗Gal3抗体或其结合片段，其中抗Gal3抗体或其结合片段与受试者中Gal3的结合抑制受试者中Gal3-介导的BNP的寡聚化，从而治疗受试者的心脏淀粉样变性。
在一些实施方式中，公开了抑制Gal3-介导的寡聚降钙素的方法。在一些实施方式中，方法包括：使蛋白质与抗Gal3抗体或其结合片段接触，其中抗Gal3抗体或其结合片段与Gal3的结合抑制Gal3-介导的降钙素的淀粉样蛋白聚集。
在一些实施方式中，公开了治疗有需要的受试者的甲状腺髓样癌(MTC)的方法。在一些实施方式中，方法包括：向受试者施用抗Gal3抗体或其结合片段，其中抗Gal3抗体或其结合片段与受试者中Gal3的结合抑制受试者中Gal3-介导的降钙素的寡聚化，从而治疗受试者的MTC。
在一些实施方式中，公开了治疗有需要的受试者的骨质疏松症的方法。在一些实施方式中，方法包括：向受试者施用抗Gal3抗体或其结合片段，其中抗Gal3抗体或其结合片段与受试者中Gal3的结合抑制受试者中Gal3-介导的降钙素的寡聚化，从而治疗受试者的骨质疏松症。
在一些实施方式中，公开了治疗有需要的受试者的佩吉特氏病的方法。在一些实施方式中，方法包括：向受试者施用抗Gal3抗体或其结合片段，其中抗Gal3抗体或其结合片段与受试者中Gal3的结合抑制受试者中Gal3-介导的降钙素的寡聚化，从而治疗受试者的佩吉特氏病。
在一些实施方式中，公开了抑制Gal3-介导的血清淀粉样蛋白(A)(SAA)的寡聚化的方法。在一些实施方式中，方法包括：使蛋白质与抗Gal3抗体或其结合片段接触，其中抗Gal3抗体或其结合片段与Gal3的结合抑制Gal3-介导的血清淀粉样蛋白(A)(SAA)的寡聚化。
在一些实施方式中，公开了治疗有需要的受试者的外周淀粉样变性的方法。在一些实施方式中，方法包括：向受试者施用抗Gal3抗体或其结合片段，其中抗Gal3抗体或其结合片段与受试者中Gal3的结合抑制受试者中Gal3-介导的血清淀粉样蛋白(A)(SAA)的寡聚化，从而治疗受试者的外周淀粉样变性。
在一些实施方式中，公开了抑制Gal3-介导的胰岛淀粉样多肽(IAPP)的淀粉样蛋白聚集的方法。在一些实施方式中，方法包括：使蛋白质与抗Gal3抗体或其结合片段接触，其中抗Gal3抗体或其结合片段与Gal3的结合抑制Gal3-介导的IAPP的寡聚化。
在一些实施方式中，公开了治疗有需要的受试者的2型糖尿病的方法。在一些实施方式中，方法包括：向受试者施用抗Gal3抗体或其结合片段，其中抗Gal3抗体或其结合片段与受试者中Gal3的结合抑制受试者中Gal3-介导的IAPP的寡聚化，从而治疗受试者的2型糖尿病。
在一些实施方式中，公开了抑制Gal3-介导的TAR DNA结合蛋白43(TDP-43)的淀粉样蛋白聚集的方法。在一些实施方式中，方法包括：使蛋白质与抗Gal3抗体或其结合片段接触，其中抗Gal3抗体或其结合片段与Gal3的结合抑制Gal3-介导的TDP-43的寡聚化。
在一些实施方式中，公开了治疗有需要的受试者的肌萎缩侧索硬化症(ALS)的方法。在一些实施方式中，方法包括：向受试者施用抗Gal3抗体或其结合片段，其中抗Gal3抗体或其结合片段与受试者中Gal3的结合抑制受试者中Gal3-介导的TDP-43的寡聚化，从而治疗受试者的ALS。
在一些实施方式中，公开了治疗有需要的受试者的额颞叶变性(FTLD)的方法。在一些实施方式中，方法包括：向受试者施用抗Gal3抗体或其结合片段，其中抗Gal3抗体或其结合片段与受试者中Gal3的结合抑制受试者中Gal3-介导的TDP-43的寡聚化，从而治疗受试者的FTLD。
在一些实施方式中，公开了抑制Gal3-介导的寡聚化的方法。在一些实施方式中，方法包括：使一种或多种单体与抗Gal3抗体或其结合片段接触，其中抗Gal3抗体或其结合片段与Gal3的结合抑制Gal3-介导的一种或多种单体的寡聚化。
附图的简要说明
除了上述特征之外，从以下附图和示例性实施方式的描述，其他特征和变化将是显而易见的。应当理解，这些附图描绘典型的实施方式并且不旨在限制范围。
图1是描绘抑制Gal3-介导的蛋白质聚集的方法的实施方式的流程图。
图2是描绘促进Gal3-介导的蛋白质聚集的方法的实施方式的流程图。
图3是描绘治疗受试者的淀粉样蛋白病的方法的实施方式的流程图。
图4A-C描述了Gal3对α-突触核蛋白聚集的促进。图4A显示了与或不与Gal3孵育0-5小时的α-突触核蛋白的蛋白质印迹。图4B显示了经过0-5小时时间点有Gal3的α-突触核蛋白聚集的量化。图4C显示了斑点印迹，其显示当与Gal3孵育时α-突触核蛋白的寡聚化。
图5A-F描绘了Gal3对Tau蛋白聚集的促进。图5A显示了在0和5小时时间点与或不与Gal3孵育的Tau蛋白的蛋白质印迹。图5B显示了在0和5小时时间点在有或没有与或不与Gal3孵育情况下的Tau蛋白二聚化和三聚化的量化。图5C显示了斑点印迹，其显示当与Gal3混合时非磷酸化Tau寡聚化非常轻微。图5D显示了斑点印迹，其显示当与Gal3混合时磷酸化Tau(磷酸-tau(S396))显著寡聚化。图5E和图5F显示了用A11、总Tau(Tau 5)、磷酸Tau(Ser396)和半乳凝素-3(804)Ab探测的与100μg的重组人半乳凝素-3孵育的4RTau(图5E)和磷酸Tau(图5F)(0.1mg/mL)的时间进程聚集。
图6描绘了用抗体A11、抗TDP-43抗体和抗Gal3抗体检测的与或不与Gal3孵育的TDP-43聚集的斑点印迹。
图7A-C描绘了Gal3对TDP-43聚集的促进。图7A显示了用抗Gal3抗体检测的与或不与Gal3孵育0-5小时的TDP-43的蛋白质印迹。图7B显示了用抗TDP-43抗体检测的与或不与Gal3孵育0-5小时的TDP-43的蛋白质印迹，其显示TDP-43的多聚化。图7C描绘了经过0-5小时时间点、在有或没有Gal3的情况下的TDP-43聚集的量化。
图8A-D描绘了Gal3对TTR聚集的促进。图8A显示了用抗TTR抗体检测的与或不与Gal3孵育0-24小时的TTR的蛋白质印迹。图8B描绘了经过0-24小时时间点在有或没有Gal3的情况下的TTR聚集的量化。图8C显示了经过1-6天时间点的与或不与Gal3孵育的TTR的蛋白质印迹。图8D描绘了经过1-6天时间点的在有或没有Gal3的情况下的TTR聚集的量化。
图9A-D描绘了Gal3对IAPP聚合的促进。图9A描绘了单独的IAPP、与Gal3混合的IAPP以及单独的Gal3的蛋白质印迹，其显示在单独的IAPP条件下存在～60kDa条带，并且在IAPP+Gal3条件下条带的增强。图9B描绘了图9A的条带强度的量化，其反映了通过I11抗体检测的蛋白质聚集体。图9C描绘了单独的IAPP、与Gal3混合的IAPP以及单独的Gal3在孵育0、0.5、3和5小时时间点的蛋白质印迹，表明与Gal3孵育3小时后的IAPP寡聚化。图9D是图9C的IAPP条带强度的量化。
图10描绘了展现出致病性聚集的Gal3和示例性蛋白质的蛋白质序列。
图11描绘了用于生成和分析抗体的Gal3的肽序列。
图12A描绘了用于本文公开的抗Gal3抗体的示例性可变重链互补决定区(CDR)1。在一些实施方式中，本文提供的任何组合物或方法可包括本文提供的一个或多个可变重链CDR1。
图12B描绘了用于本文公开的抗Gal3抗体的示例性可变重链CDR2。在一些实施方式中，本文提供的任何组合物或方法可包括本文提供的一个或多个可变重链CDR2。
图12C描绘了用于本文公开的抗Gal3抗体的示例性可变重链CDR3。在一些实施方式中，本文提供的任何组合物或方法可包括本文提供的一个或多个可变重链CDR3。
图13A描绘了用于本文公开的抗Gal3抗体的示例性可变轻链CDR1。在一些实施方式中，本文提供的任意组合物或方法可包括本文提供的一个或多个可变轻链CDR1。
图13B描绘了本文公开的抗Gal3抗体的示例性可变轻链CDR2。在一些实施方式中，本文提供的任意组合物或方法可包括本文提供的一个或多个可变轻链CDR2。
图13C描绘了本文公开的抗Gal3抗体的示例性可变轻链CDR3。在一些实施方式中，本文提供的任意组合物或方法可包括本文提供的一个或多个可变轻链CDR3。
图14描绘了用于本文公开的抗Gal3抗体的示例性重链可变区(VH)序列。在一些实施方式中，本文提供的任何组合物或方法可包括本文提供的一个或多个VH序列。
图15描绘了用于本文公开的抗Gal3抗体的示例性轻链可变区(VL)序列。在一些实施方式中，本文提供的任何组合物或方法可包括本文提供的一个或多个VL序列。
图16描绘了本文公开的示例性抗Gal3抗体的重和轻链CDR(CDR1、CDR2和CDR3)的示例性组合。在一些实施方式中，本文提供的任何组合物或方法可包括本文提供的一种或多种重链和轻链CDR组合。
图17描绘了本文公开的示例性抗Gal3抗体的重和轻链可变区的示例性组合。在一些实施方式中，本文提供的任何组合物或方法可包括本文提供的一种或多种重和轻链可变区组合。
图18描绘了示例性重链(HC)序列和轻链(LC)序列，以及本文公开的示例性抗Gal3抗体的可能的配对。在一些实施方式中，本文提供的任意组合物或方法可包括本文提供的一个或多个HC或LC、或HC和LC序列对。
图19描绘了贯穿本公开使用的抗体名称是指相同的抗体(具有在本公开其他地方提供并且合适地被认为是至少一个所描述的名称的示例性肽和核酸序列)并且可以互换使用。在列中显示的名称对应相同的抗体。
图20描绘了野生型人免疫球蛋白G1(IgG1)、IgG2和IgG4以及它们的σ变体的铰链和恒定重链结构域2(CH2)结构域氨基酸序列的比对。以上比对使用EU编号。与野生型IgG1相同的残基用点表示；间隙用连字符表示。如果序列与野生型IgG1或σ变体的亲本亚型不同，则明确给出序列。比对下方的开放框对应于国际免疫遗传学信息系统(InternationalImmunogenetics Information System)(IMGT)链定义。比对下方的框对应于野生型IgG1的链和螺旋二级结构分配。残基267-273形成BC环，并且残基322-332形成FG环。还提供了人IgG4重链(S228P突变体)和轻(κ)链(SEQ ID NO：931-932)和鼠IgG2A(LALAPG和LALA突变体)(SEQ ID NO：933-934)的示例性恒定区。在一些实施方式中，其他附图中提供的或本文其他方面公开的任意一个或多个VH/VL和/或CDR可与本文中提供的任意一个或多个示例性恒定区配对。
图21描绘了编码本文公开的抗Gal3抗体的示例性重链可变区的核酸序列。在一些实施方式中，本文提供的任何组合物或方法可包括由本文提供的核酸编码的一种或多种重链可变区。
图22描绘了编码本文公开的抗Gal3抗体的示例性轻链可变区的核酸序列。在一些实施方式中，本文提供的任何组合物或方法可包括由本文提供的核酸编码的一种或多种的轻链可变区。
图23描绘了编码本文公开的抗Gal3抗体的示例性重链的核酸序列。在一些实施方式中，本文提供的任何组合物或方法可包括由本文提供的核酸编码的一种或多种重链。
图24描绘了编码本文公开的抗Gal3抗体的示例性轻链的核酸序列。在一些实施方式中，本文提供的任何组合物或方法可包括由本文提供的核酸编码的一种或多种轻链。
图25A-B描绘了本文公开的示例性抗Gal3抗体的重链CDR(图25A)和轻链CDR(图25B)的示例性比对。
图26A-C描绘了Gal3对载脂蛋白E(APOE)的某些多态性等位基因聚集的促进。图26A显示了与Gal3混合的APO-E2的斑点印迹。图26B显示了与Gal3混合的APO-E3的斑点印迹。当与Gal3混合时，APO-E2或APO-E3均未显示出显著的寡聚化。图26C显示了与Gal3混合的APO-E4的斑点印迹，其显示当与Gal3混合时APO-E4被寡聚化。
图27A-C通过斑点印迹描绘了示例性抗Gal3抗体TB006对APOE-4寡聚体的降解。图27A显示了TB006降解APO-E4寡聚体的剂量依赖性能力。图27B显示了图27A的3小时抗体孵育时间点。图27C是图27B的TB006处理条件的量化。
图28A-C描绘了通过斑点印迹检测的Gal3对朊病毒蛋白(PrP)聚集的促进。图28A描绘了与用A11抗体探测的100μg的Gal-3孵育的重组朊病毒蛋白经过5小时的时间进程聚集。图28B描绘了与用A11抗体探测并且用重组朊病毒小鼠抗体再次探测的100μg的Gal-3孵育的重组朊病毒蛋白经过5小时的时间进程聚集。图28C描绘了与用(A11)抗体探测并且用重组朊病毒小鼠抗体再次探测的100μg的Gal-3孵育的重组朊病毒蛋白经过1小时的时间进程聚集。
图29A-B描绘了通过斑点印迹检测的Gal3对神经丝轻链(NFL)蛋白聚集的促进。
图30A-C描绘了通过斑点印迹检测的Gal3对Aβ40聚集的促进。图30A-C显示了与用A11(图30A)、6E10(Biolegend，目录#SIG-39300)(图30B)和804(QC 190207)(图30C)抗体探测的100μg的Gal-3孵育的Aβ40的24小时时间进程聚集。
图31A-D描绘了通过斑点印迹检测的有毒Aβ42寡聚体的降解。图31A描绘了用A11和6E10抗体探测的hTB006对有毒Aβ422寡聚体的24小时时间进程降解。图31B描绘了经过24小时时间进程Aβ42寡聚体降解的量化。图31C描绘了用A11和6E10抗体探测的hTB006对有毒Aβ42寡聚体的5小时时间进程降解。图31D描绘了不同浓度的hTB006对Gal-3诱导的Aβ42寡聚体的影响的量化。
图32A-F描绘了通过斑点印迹检测的与用A11抗体探测的100μg的Gal-3孵育的纤维蛋白聚集的时间进程。图32A描绘了通过斑点印迹检测的与用A11抗体探测的100μg的Gal-3孵育的纤维蛋白聚集的时间进程。图32B描绘了Gal-3内在促进纤维蛋白寡聚化的量化。图32C描绘了通过斑点印迹检测的TB001和TB006对有毒纤维蛋白寡聚体的降解。图32D描绘了用A11抗体探测的不同Gal-3抗体克隆对纤维蛋白寡聚化的筛选。图32E描绘了用A11抗体探测的不同Gal-3抗体克隆对纤维蛋白寡聚化的量化。图32F是描绘所筛选的Gal-3抗体克隆的身份和同种型的表格。
图33描绘了通过斑点印迹检测的与用A11抗体探测的100μg的Gal-3孵育的CRP和SUMO的时间进程聚集。
图34A-C描绘了通过斑点印迹检测的与用A11抗体探测的100μg的Gal-3孵育的轻链、PDGFR和MCAM的时间进程聚集。图34A描绘了通过斑点印迹检测的与用A11抗体探测的100μg的Gal-3孵育的轻链的时间进程聚集。图34B描绘了通过斑点印迹检测的与用A11抗体探测的100μg的Gal-3孵育的PDGFR的时间进程聚集。图34C描绘了通过斑点印迹检测的，与用A11抗体探测的100μg的Gal-3孵育的MCAM的时间进程聚集。
图35A-B描绘了通过斑点印迹检测的，与用A11抗体探测的100μg的Gal-3孵育的补体蛋白(C3&C9)的24小时时间进程聚集。图35A描绘了通过斑点印迹检测的，与用A11抗体探测的100μg的Gal-3孵育的补体蛋白C3的24小时时间进程聚集。图35B描绘了通过斑点印迹检测的，与用A11抗体探测的100μg的Gal-3孵育的补体蛋白C9的24小时时间进程聚集。
图36描绘了通过斑点印迹检测的，与用A11抗体探测的100μg的Gal-3孵育的溶菌酶的24小时时间进程聚集。
图37描绘了通过斑点印迹检测的，在50℃下与用A11抗体探测的100μg和200μg的Gal-3孵育的胰岛素的4小时时间进程聚集。
图38A-B描绘了通过斑点印迹检测的，在室温(RT)和37℃下与用A11抗体探测的100μg的Gal-3孵育的天然血红蛋白(Hb)和糖化血红蛋白(HbAIC)的5小时时间进程聚集。图38A描绘了通过斑点印迹检测的，在室温(RT)和37℃下与用A11抗体探测的100μg的Gal-3孵育的天然血红蛋白(Hb)的5小时时间进程聚集。图38B描绘了通过斑点印迹检测的，在室温(RT)和37℃下与用A11抗体探测的100μg的Gal-3孵育的糖化血红蛋白(HbAIC)的5小时时间进程聚集。
图39A-B描绘了通过斑点印迹检测的，在室温(RT)和37℃下与用A11抗体探测的100μg的Gal-3孵育的苯丙氨酸(Phe)的5小时时间进程聚集。
图40描绘了通过斑点印迹检测的，在室温(RT)下与用A11抗体探测的100μg的Gal-3孵育的谷氨酰胺(GLN)的5小时时间进程聚集。
图41描绘了通过斑点印迹检测的，在室温(RT)下与用A11抗体探测的100μg的Gal-3孵育的胆甾醇基(共酯基)的5小时时间进程聚集。
图42A-B描绘了通过斑点印迹检测的，在室温(RT)下与用抗体探测的100μg的Gal-3孵育的胆固醇的5小时时间进程聚集。
图43A-B描绘了在室温(RT)下与用抗体探测的100μg的Gal-3孵育的神经源性丝氨酸蛋白酶抑制剂的聚集。图43A描绘了通过斑点印迹检测的神经源性丝氨酸蛋白酶抑制剂的5小时时间进程聚集。图43B描绘了使用荧光显微镜检测的，含和不含Gal-3的神经源性丝氨酸蛋白酶抑制剂聚集的可视化。
图44A-B描绘了通过斑点印迹检测的，在室温下孵育并且用寡聚体A116E10降解抗体探测的TB139和TB006对Aβ42寡聚体的比较降解。图44A描绘了通过斑点印迹检测的，在室温下孵育并且用寡聚体A11降解抗体探测的TB139和TB006对Aβ42寡聚体的比较降解。图44B描绘了通过斑点印迹检测的，在室温下孵育并且用6E10降解抗体探测的TB139和TB006对Aβ42寡聚体的比较降解。
图45A-B描绘了与用A11抗体探测的100μg的Gal-3孵育的晶体蛋白AA的时间进程聚集。图45A描绘了使用荧光显微镜检测的含和不含Gal-3的晶体蛋白AA聚集的可视化。图45B描绘了通过斑点印迹检测的，与用A11抗体探测的100μg的Gal-3孵育的晶体蛋白AA的时间进程聚集。
图46A-B描绘了与用A11抗体探测的100μg的Gal-3孵育的晶体蛋白AA的时间进程聚集。图46A描绘了使用荧光显微镜检测的含和不含Gal-3的晶体蛋白AB聚集的可视化。图46B描绘了通过斑点印迹检测的，与用A11抗体探测的100μg的Gal-3孵育的晶体蛋白AB聚集的时间进程。
图47A-F描绘了通过斑点印迹检测的，与用A11抗体探测的100μg的Gal-3孵育的半胱氨酸蛋白酶抑制剂-C的时间进程聚集。图47A描绘了通过斑点印迹检测的，与用A11抗体探测的100μg的Gal-3孵育的半胱氨酸蛋白酶抑制剂-C的24小时时间进程聚集。图47B描绘了通过斑点印迹检测的，与用半胱氨酸蛋白酶抑制剂-C抗体探测的100μg的Gal-3孵育的半胱氨酸蛋白酶抑制剂-C的24小时时间进程聚集。图47C描绘了通过斑点印迹检测的，与用804抗体探测的100μg的Gal-3孵育的半胱氨酸蛋白酶抑制剂-C的24小时时间进程聚集。图47D描绘了通过斑点印迹检测的，与用A11抗体探测的Gal-3孵育的半胱氨酸蛋白酶抑制剂-C的5小时时间进程聚集。图47E描绘了通过斑点印迹检测的，与用半胱氨酸蛋白酶抑制剂-C抗体探测的Gal-3孵育的半胱氨酸蛋白酶抑制剂-C的5小时时间进程聚集。图47F描绘了通过斑点印迹检测的，与用804抗体探测的Gal-3孵育的半胱氨酸蛋白酶抑制剂-C的5小时时间进程聚集。
图48A-C描绘了与用A11抗体探测的100μg的Gal-3孵育的肌生长抑制素前肽的24小时时间进程聚集。图48A描绘了通过斑点印迹检测的，与用A11抗体探测的100μg的Gal-3孵育的肌生长抑制素前肽的24小时时间进程聚集。图48B-C描绘了使用荧光显微镜检测的含和不含Gal-3的在5、24和48小时处的肌生长抑制素前肽聚集的可视化。
图49A-G描绘了Gal-3的胰岛素寡聚化以及针对用寡聚体降解A11抗体探测的胰岛素寡聚化的降解筛选不同Gal-3抗体克隆。图49A描绘了通过斑点印迹检测的，在50℃下与用A11抗体探测的Gal-3孵育的胰岛素的3小时时间进程聚集。图49B描绘了通过斑点印迹检测的，与Gal-3孵育48小时并且用A11抗体探测的胰岛素聚集。图49C描绘了当与Gal-3孵育48小时并且用A11抗体探测时胰岛素聚集的量化。图49D描绘了图表，其描绘所筛选的Gal-3抗体克隆的身份(identity)和同种型。图49E描绘了使用荧光显微镜检测的含和不含Gal-3的在三小时处的胰岛素聚集的可视化。图49F描绘了与用A11抗体探测的100μg的Gal-3孵育的胰岛素的4小时时间进程聚集。图49F描绘了与用抗Gal3抗体探测的100μg的Gal-3孵育的胰岛素的4小时时间进程聚集。
图50描绘了通过斑点印迹检测的，当与用A11抗体探测的100μg的Gal-3孵育时，重组人降钙素(hCT)聚集的48小时时间进程。
图51A-B描绘了Gal-3促进心房钠尿肽(ANP)聚集。图51A描绘了通过斑点印迹检测的，当与用A11抗体探测的100μg的Gal-3孵育时，ANP聚集的80小时时间进程的实施方式。图51B描绘了当与用A11抗体探测的100μg Gal-3孵育时，ANP聚集的荧光显微镜可视化的实施方式。
图52A-B描绘了Gal-3促进B型钠尿肽(BNP)原(Pro-B type NatriureticPeptide)聚集。图52A描绘了通过斑点印迹检测的，当与用A11抗体探测的100μg的Gal-3孵育时的BNP聚集的48小时时间进程的实施方式。图52B描绘了当与用A11抗体探测的100μg的Gal-3孵育并在室温下孵育24小时时BNP聚集的荧光显微镜可视化的实施方式。
图53描绘了通过斑点印迹检测的，当与用A11抗体探测的100μg的Gal-3孵育时，血清淀粉样蛋白A(SAA1)聚集的72小时时间进程的实施方式。
图54A-B描绘了当与或不与Gal-3孵育时胰岛淀粉样蛋白多肽(IAPP)的实施方式。图54A描绘了通过斑点印迹检测的，当与用A11抗体探测的100μg的Gal-3孵育时，IAPP聚集的24小时时间进程的实施方式。图54B描绘了当与用A11抗体探测的100μg的Gal-3孵育时IAPP聚集的荧光显微镜可视化的实施方式。
图55A-F描绘了当与或不与Gal-3孵育时TDP43聚集的实施方式。图55A描绘了当与用A11抗体探测的100μg的Gal-3孵育时TDP43聚集的24小时时间进程的实施方式。图55B描绘了当与用TDP43抗体探测的100μg的Gal-3孵育时TDP43聚集的24小时时间进程的实施方式。图55C描绘了当与用Gal-3抗体探测的100μg的Gal-3孵育时TDP43聚集的24小时时间进程的实施方式。图55D描绘了用TDP43抗体探测的含和不含rhGal-3的TDP43的5小时时间进程聚集概况。图55E描绘了用TDP43抗体探测的含和不含rhGal-3的TDP43的5小时时间进程聚集概况的量化的一些实施方式。图55F描绘了用TDP43抗体探测的含和不含rhGal-3的TDP43的5天时间进程聚集概况。
图56是描绘淀粉样蛋白的替代途径和组装状态的一些实施方式的说明性代表。
图57是描绘用于抑制Gal3-介导的蛋白质聚集的方法的一些实施方式的流程图。
图58是描绘治疗受试者的淀粉样蛋白病的方法的实施方式的流程图。
图59描绘了编码hGal3和表位肽的多肽序列的一些实施方式，其用于通过微阵列&ELISA对与Gal 3肽结合的TB006、TB101和2D10 Ab进行表位作图分析。
图60描绘了通过微阵列对TB006 Ab与Gal 3肽结合的突变分析的一些实施方式。
图61描绘了通过微阵列对TB101Ab与Gal 3肽结合的突变分析的一些实施方式。
图62描绘了通过微阵列对2D10 Ab与Gal 3肽结合的突变分析的一些实施方式。
图63描绘了通过微阵列对TB006、TB101、2D10 Ab与Gal3肽结合的突变分析的一些实施方式。
图64是显示表位作图分析的一些实施方式的比较的说明性实施方式。
图65是显示表位作图分析的一些实施方式的比较的说明性实施方式。链A代表18个氨基酸肽上的氨基酸编号，链B代表TB006 FAb重链上的氨基酸编号，以及链L代表轻链。
图66A-k描绘了显示抗Gal3阻断抗体对各种Gal3残基的亲和力的热图的一些说明性实施方式。图66A是列出抗Gal3阻断抗体的一些示例性实施方式的表格。图66B-66K是显示抗Gal3阻断抗体对Gal3表位的一些实施方式的亲和力的说明性热图。
图67是描绘33种不同的抗Gal3阻断抗体阻断hTB001、hTB006、Aβ42、Aβ40、Aβ42α突触核蛋白和hTau与Gal3结合的能力的表格。即，这些抗体与上述蛋白质竞争结合Gal3。
图68是描绘通过Elisa测量的33种不同的抗Gal3阻断抗体阻断hTB006as与Gal3结合的能力的表格。即，这些抗体与上述蛋白质竞争结合Gal3。
图69描绘了检查hGal3与聚集的朊病毒蛋白的结合的ELISA测定的结果。
图70描绘了检查hGal3与聚集的Aβ40的结合的ELISA测定的结果。
图71描绘了ELISA阻断测定的结果。
图72是量化各种抗Gal3抗体阻断hGal3与Aβ40结合的效果的表格。
图73描绘了检查hGal3与聚集的磷酸-Tau结合的ELISA测定的结果。
图74是描绘ELISA筛选的量化结果的表格。
图75是描绘ELISA筛选的量化结果的表格。
图76描绘了检查hGal3与聚集的朊病毒蛋白结合的ELISA测定的结果。
图77描绘了检查hGal3与聚集的胆固醇结合的ELISA测定的结果。
图78描绘了检查hGal3与5小时聚集的胆固醇结合的ELISA测定的结果。
图79描绘了检查hGal3与聚集的胰岛素结合的ELISA测定的结果。
图80描绘了检查hGal3与聚集的朊病毒蛋白结合的ELISA测定的结果。
图81描绘了检查各种抗体针对hGal3与聚集的朊病毒蛋白结合的阻断效力的ELISA测定的结果。
图82描绘了检查hGal3与聚集的NFL结合的ELISA测定的结果。
图83描绘了检查hGal3与聚集的NFL结合的ELISA测定的结果。
图84描绘了检查hGal3与聚集的C3结合的ELISA测定的结果。
图85描绘了确定抗hGal3抗体针对hGal3：C3的IC50的ELISA测定的结果。
图86描绘了检查hGal3与聚集的C9结合的ELISA测定的结果。
图87描绘了确定抗hGal3抗体针对hGal3：C9的IC50的ELISA测定的结果。
图88描绘了检查hGal3与聚集的和未聚集的ANP结合的ELISA测定的结果。
图89描绘了用hGal3检查hGal3与各种形式的降钙素结合的ELISA测定的结果。
图90描绘了检查hGal3与聚集的和未聚集的IAPP结合的ELISA测定的结果。
图91描绘了检查hGal3与聚集的α-突触核蛋白结合的ELISA测定的结果。
图92描绘了通过Elisa测量的阻断效力测定的结果。
图93是描绘QC200137IMTAB0172 14H10.2C9-hIgG4(S228P)、IMTAB0111F798-9C.13H12.2F8-hIgG4(S228P)、QC200172IMTAB0196846.1H12-hIgG4(S228P)、TB006(QC200208)、hIgG4synagis(QC200234)(阴性对照)的阻断效力的表格。
图94显示了TB006 Fab的分离。
图95描绘了TB006 Fab和hGal-3肽的晶体结构分析。a-d.与hGal3复合的TB006Fab整体结构的侧视图(a和b)和俯视图(c和d)。TB006 Fab的轻链和重链分别以浅粉色和浅青色表示。轻链和重链的CDR分别用洋红色和海洋色(marine)着色。金色带代表hGal3肽。e.TB006 Fab和hGal3肽的相互作用界面。f和g.TB006 Fab轻链(f)或重链(g)与hGal3肽之间详细的相互作用氨基酸。黑色破折号表示距离为的氢键。未突出显示的相互作用是疏水相互作用。
图96描绘了TB006 Fab和hGal-3肽之间的相互作用的总结。虚线表示CDR和hGal-3肽之间的相互作用。突出显示的残基不在CDR框架内。
图97描绘了与单独的胰岛素治疗相比，当使用Gal3+胰岛素聚集体时，L-6细胞中的GLUT-4易位减少。
本公开的详细说明
已知半乳凝素-3(Gal3，GAL3)在细胞增殖、粘附、分化、血管生成和细胞凋亡中起重要作用。这种活性至少一部分是由于免疫调节性质和对其他免疫调节蛋白、信号传导蛋白和其他细胞表面标志物的结合亲和力。
Gal3通过不同的N-末端和C-末端结构域发挥功能。N-末端结构域(同种型1：氨基酸1-111，同种型3：氨基酸1-125)包括串联重复结构域(TRD，同种型1：氨基酸36-109，同种型3：氨基酸50-123)，并且主要负责Gal3的寡聚化。C-末端结构域(同种型1：氨基酸112-250，同种型3：氨基酸126-264)包括碳水化合物识别结合结构域(CRD)，其结合至β-半乳糖苷。人Gal3的同种型1的示例性序列(NCBI参考号NP_002297.2)如SEQ ID NO：1所示。人Gal3的同种型3的示例性序列(NCBI参考号NP_001344607.1)如SEQ ID NO：2所示。
如本文所提供的，Gal3显示促进各种蛋白质的寡聚化，诸如α-突触核蛋白、tau蛋白、TDP-43、甲状腺素运载蛋白、尿调节素、胰岛淀粉样多肽(IAPP)、血清淀粉样蛋白A(SAA)、p53、载脂蛋白E(APOE)、APOE-4、朊病毒蛋白、纤维蛋白、或神经丝轻链(NFL)、CRP、SUMO、轻链、血小板源生长因子受体(PDGFR)、黑色素瘤细胞黏附分子(MCAM)、补体蛋白C3和/或C9、溶菌酶、胰岛素、天然血红蛋白(Hb)、糖化血红蛋白(HbAIC)、苯丙氨酸(Phe)、谷氨酰胺(Gln)、胆甾醇基(共酯基)、胆固醇、神经源性丝氨酸蛋白酶抑制剂、晶体蛋白AA和/或晶体蛋白AB、半胱氨酸蛋白酶抑制剂-C或肌生长抑制素前肽或其任意组合。
这些蛋白质以寡聚体聚集可引起广泛的蛋白病，包括但不限于淀粉样变性蛋白病(amylodiopathy)，阿尔茨海默病、脑β-淀粉样血管病、青光眼视网膜神经节细胞变性、帕金森氏病、路易体痴呆症、多系统萎缩、共核蛋白病、皮克氏病、皮质基底节变性、tau蛋白病、进行性核上性麻痹、TDP-43蛋白病、肌萎缩侧索硬化症、额颞叶变性、亨廷顿病、齿状核红核苍白球路易核体萎缩、脊髓性球部肌肉萎缩、脊髓小脑共济失调、脆性X综合征、Baratela-Scott综合征、弗里德里希共济失调、肌强直性营养不良、亚历山大症、家族性英国型痴呆、家族性丹麦型痴呆、佩梅病、seipin蛋白病、SAA淀粉样变性、AA(继发性)淀粉样变性、II型糖尿病、纤维蛋白原淀粉样变性、透析淀粉样变性、包涵体肌炎/肌病、家族性淀粉样变性神经病、老年全身性淀粉样变性、蛇形病变(serpinopathy)、TTR淀粉样变性、心脏淀粉样变性、心房淀粉样变性、尿调节素-相关肾脏疾病、IAPP淀粉样变性、类风湿性关节炎、炎性关节炎、脊柱关节病、幼年特发性关节炎、强直性脊柱炎、银屑病关节炎、炎性肠病、溃疡性结肠炎、克罗恩病、乳糜泻、血管炎、结节病、家族性地中海热、肿瘤坏死因子受体-相关周期性综合征(TRAPS)、垂体泌乳素瘤、胰岛素淀粉样变性、角膜乳铁蛋白淀粉样变性、肺泡蛋白沉积症、精囊淀粉样变性、皮肤地衣淀粉样变性、马洛里小体、牙源性(Pindborg)肿瘤淀粉样蛋白、癌症、由淀粉样蛋白聚集促进的衰老、或由蛋白质的错误折叠或聚集引起的或本领域技术人员已知的其它疾病。
本文公开了通过抑制Gal3的寡聚体促进活性来治疗、减少、改善或预防细胞或受试者的蛋白病发生率的方法。这可使用结合至Gal3的抗体或其结合片段来完成。
定义
在以下详细的描述中，参考了构成其一部分的附图。在附图中，除非上下文另有说明，否则相似的符号通常表明相似的组分。在具体实施方式、说明书附图和权利要求书中描述的阐释性实施方式并不意味着是限制性的。在不脱离本文提出的主题的精神或范围的情况下，可利用其他实施方式，并且可做出其他改变。容易理解本公开的方面如本文一般描述的和在附图中阐释的，可以以各种不同配置进行排列、替代、组合、分离和设计，所有这些都被本文明确地预期。
除非另有定义，否则本文使用的所有技术和科学术语具有与要求保护的主题所属领域的技术人员通常理解的相同的含义。应当理解，前述一般描述和下述详细描述仅是示例性和解释性的，并且不是对要求保护的任何主题的限制。
本文使用的章节标题仅用于组织目的，并且不应被解释为限制所描述的主题。
在本申请中，除非另外具体说明，否则单数的使用包括复数。必须注意的是，如说明书和所附权利要求中所使用的，单数形式“一/一个/一种(a)”、“一/一个/一种(an)”和“该/这个/所述(the)”包括复数指示物，除非上下文另外明确指出。在本申请中，除非另有说明，否则“或”的使用表示“和/或”。此外，术语“包括”以及其他形式的使用，诸如“包含/含有”不是限制性的。
“约”意思是提及质量、水平、值、数量、频率、百分数、尺寸、大小、量、重量或长度的变化30、25、20、15、10、9、8、7、6、5、4、3、2或1％一样多的质量、水平、值、数量、频率、百分数、尺寸、大小、量、重量或长度。
在整个本说明书中，除非上下文另有要求，否则词语“包括”、“包含”和“含有”将被理解为暗示包括所陈述的步骤或元素或步骤或元素的组，但不排除任何其他步骤或元素或步骤或元素的组。“由......组成”意味着包括并且限于跟随短语“由......组成”的任何内容。因此，短语“由......组成”指示列出的元素是必需的或强制性的，并且可不存在其他元素。“基本上由......组成”意味着包括伴随短语列出的任何元素，并且限于不干扰或有助于列出的元素的公开中指定的活性或动作的其他元素。因此，短语“基本上由......组成”指示列出的元素是必需的或强制性的，但其他要素是可替选的，并且取决于它们是否实质性影响列出的元素的活性或动作可能存在或不存在。
如本文使用的，术语“个体”、“受试者”和“患者”意味着任何哺乳动物。在一些实施方式中，哺乳动物是人。在一些实施方式中，哺乳动物是非人的。这些术语均不要求或仅限于特征在于卫生保健工作者(例如医生、注册护士、执业护士、医师助理、医护人员或临终关怀工作者)的监督(例如持续或间歇性)的状况。
本文互换地使用术语“多肽”、“肽”和“蛋白质”指任何长度的氨基酸的聚合物。聚合物可以是线性的、环状的或支化的，它可以包括修饰的氨基酸，并且它可以被非氨基酸中断。术语还涵盖已经被修饰的氨基酸聚合物，例如，经硫酸化、糖基化、脂质化、乙酰化、磷酸化、碘化、甲基化、氧化、蛋白水解加工、磷酸化、异戊二烯化、外消旋化、硒化(selenoylation)、转移-RNA介导的添加氨基酸为蛋白质，比如精氨酸化、泛素化或任何其他操作，比如与标记组分缀合。
如本文使用的术语“氨基酸”是指天然和/或非天然或合成氨基酸，包括甘氨酸和D或L光学异构体二者，以及氨基酸类似物和肽模拟物。
如本文使用的，术语“肽模拟物(peptidomimetic)”是指能够模拟天然肽的结构元件和功能性同时还保留与生物靶相互作用并产生与其相应的天然肽相同的生物效应的能力的任何肽类似物。
如本文使用的，术语“寡聚体”是指包括几个相似或相同的重复单元的分子，所述重复单元可衍生自较小分子、其单体的拷贝。在一些实施方式中，寡聚体包含蛋白质单体的重复单元。在一些实施方式中，寡聚体包含α-突触核蛋白、tau蛋白、TDP-43、甲状腺素运载蛋白、尿调节素、胰岛淀粉样多肽(IAPP)、血清淀粉样蛋白A(SAA)、p53、载脂蛋白E(APOE)、APOE-4、朊病毒蛋白、纤维蛋白、或神经丝轻链(NFL)、CRP、SUMO、轻链、血小板源生长因子受体(PDGFR)、黑色素瘤细胞黏附分子(MCAM)、补体蛋白C3和/或C9、溶菌酶、胰岛素、天然血红蛋白(Hb)、糖化血红蛋白(HbAIC)、苯丙氨酸(Phe)、谷氨酰胺(Gln)、胆甾醇基(共酯基)、胆固醇、神经源性丝氨酸蛋白酶抑制剂、晶体蛋白AA和/或晶体蛋白AB、半胱氨酸蛋白酶抑制剂-C、或肌生长抑制素前肽、和/或其任意组合的重复单元。在一些实施方式中，寡聚体是已知聚集成寡聚体的任何重复生物分子或单元。
“源自(derived from)”指定蛋白质的多肽或氨基酸序列是指多肽的来源。优选地，多肽具有与在序列中编码的多肽的氨基酸序列基本上相同的氨基酸序列或其部分，其中该部分由至少10-20个氨基酸、或至少20-30个氨基酸、或至少30-50个氨基酸组成，或可与序列中编码的多肽免疫地鉴定。该术语还包括从指定的核酸序列表达的多肽。考虑了与本文公开的任何一种肽序列具有至少80％、85％、90％、95％、99％或100％同源性并且具有相同或相似功能特性的肽序列。同源性百分比可根据两个肽序列之间的氨基酸取代、缺失或添加来确定。与本文公开的任何一种肽序列具有一定同源性百分比的肽序列可由本领域技术人员通过常规方法产生和测试。
如本文使用的，术语“抗体”表示本领域技术人员认为其含有的含义，并且进一步其旨在包括具有适合并且识别表位的特定形状的任何含多肽链的分子结构，其中一种或多种非共价结合相互作用稳定分子结构和表位之间的复合。抗体可以是多克隆抗体，尽管单克隆抗体可以是优选的，因为它们可以通过细胞培养或重组来复制并且可以被修饰以降低它们的抗原性。
除了完整的免疫球蛋白(或其重组对应物)，包括表位结合位点的免疫球蛋白片段或“结合片段”(例如，Fab′、F(ab′)2、单链可变片段(scFv)、双抗体、微抗体、纳米抗体、单域抗体(sdAb)或其他片段)可用作本发明中的抗体部分。这种抗体片段可通过蓖麻蛋白、胃蛋白酶、木瓜蛋白酶或其他蛋白酶裂解从整个免疫球蛋白产生。可以利用重组免疫球蛋白技术设计最小免疫球蛋白。例如，用于本发明的“Fv”免疫球蛋白可以通过经肽连接体(例如，聚甘氨酸或不形成α螺旋或β片状基序的另一序列)将可变轻链区连接至可变重链区来产生。纳米抗体或单域抗体还可源自可替选的生物体，比如单峰驼、骆驼、美洲驼、羊驼或鲨鱼。在一些实施方式中，抗体可以是缀合物，例如聚乙二醇化抗体、药物、放射性同位素或毒素缀合物。针对特定表位或表位组合的单克隆抗体将允许靶向和/或消耗表达标志物的细胞群体。可以利用各种技术使用单克隆抗体来筛选表达标志物的细胞群体，并且包括使用抗体包被的磁珠进行磁分离、使用附着在固体基质(即，板)上的抗体“淘选”和流式细胞术(例如美国专利号5，985，660，本文通过参考以其整体明确地并入)。
如本领域已知的，术语“Fc区”用于定义免疫球蛋白重链的C-末端区。“Fc区”可以是天然序列Fc区或变体Fc区。尽管免疫球蛋白重链Fc区的边界可能不同，但人IgG重链Fc区通常定义为从位置Cys226或从Pro230处的氨基酸残基延伸至其羧基末端。Fc区中残基的编号是如Kabat中的EU索引编号。Kabat等，Sequence of Proteins of ImmunologicalInterest，第5版，Public Health Service，National Institutes of Health，Bethesda，Md.，1991。免疫球蛋白的Fc区通常包含两个恒定结构域，CH2和CH3。如本领域已知的，Fc区可以以二聚体或单体形式存在。
如本领域已知的，抗体的“恒定区”是指单独或组合的抗体轻链的恒定区或抗体重链的恒定区。
抗体的“可变区”是指单独或组合的抗体轻链可变区或抗体重链可变区。如本领域已知的，重链和轻链的可变区各自由通过三个也称为高变区的互补决定区(CDR)连接的四个框架区(FR)组成，并且有助于形成抗体的抗原结合位点。如果受试者可变区的变体是期望的，特别是具有CDR区外(即，在框架区中)的氨基酸残基中的取代，可以通过比较受试者可变区与含有与受试者可变区相同规范类别中的CDRl、CDR2和CDR3序列的其他抗体的可变区来鉴定适当的氨基酸取代，优选保守氨基酸取代(Chothia和Lesk，J Mol Biol 196(4)：901-917，1987)。
在某些实施方式中，通过解析抗体的结构和/或解析抗体-配体复合物的结构来完成CDR的明确描绘和包括抗体结合位点的残基的鉴定。在某些实施方式中，这可以通过本领域技术人员已知的各种技术的任一种，比如X射线晶体学来完成。在某些实施方式中，可以采用各种分析方法来鉴定或模拟(approximate)CDR区。在某些实施方式中，可以采用各种分析方法来鉴定或模拟CDR区。这种方法的示例包括但不限于Kabat定义、Chothia定义、IMGT方法(Lefranc等，2003)Dev Comp Immunol.27：55-77)、计算程序比如Paratome(Kunik等，2012，Nucl Acids Res.W521-4)、AbM定义和构象定义。
Kabat定义是抗体中编号残基的标准，并且通常用于鉴定CDR区。参见，例如，Johnson&Wu，2000，Nucleic Acids Res.，28：214-8。Chothia定义类似于Kabat定义，但Chothia定义考虑了某些结构环区域的位置。参见，例如，Chothia等，1986，J.Mol.Biol.，196：901-17；Chothia等，1989，Nature，342：877-83。AbM定义使用由模型抗体结构的OxfordMolecular Group产生的一套集成的计算机程序。参见，例如，Martin等，1989，Proc NatlAcad Sci(USA)，86：9268-9272；“AbM.TM.，AComputer Program for Modeling VariableRegions of Antibodies”，Oxford，UK；Oxford Molecular，Ltd。AbM定义使用知识数据库和ab initio方法的组合建模来自一级序列的抗体的三级结构，比如由Samudrala等，1999，“Ab Initio Protein Structure Prediction Using a Combined HierarchicalApproach”，PROTEINS，Structure，Function and Genetics Suppl.，3：194-198中描述的那些。接触定义基于可用的复合物晶体结构的分析。参见，例如MacCallum等，1996，J.Mol.Biol.，5：732-45。在另一方法中，本文称为CDR的“构象定义”，CDR的位置可以被鉴定为对抗原结合做出焓贡献的残基。参见，例如，Makabe等，2008，Journal of BiologicalChemistry，283：1156-1166。还有其他CDR边界定义可能不严格遵循以上方法之一，但仍将与至少一部分Kabat CDR重叠，尽管根据特定残基或残基组不会显著影响抗原结合的预测或实验发现，它们可被缩短或延长。如本文使用的，CDR可以指由本领域已知的任何方法，包括方法的组合定义的CDR。本文使用的方法可以利用根据这些方法中的任一种定义的CDR。对于含有不只一个CDR的任何给定的实施方式，CDR可以按照Kabat、Chothia、extended、IMGT、Paratome、AbM和/或构象定义中的任一种，或任何前述的组合来定义。
如本文公开的，设想并且可使用与本文公开的任意序列具有％同一性的序列。术语“％同一性”是指两个或多个序列之间相同的单位(即氨基酸或核苷酸)相对于序列长度的百分比。当被比较的两个或多个序列长度相同时，％同一性将分别是该长度。当被比较的两个或多个序列长度不同时，可引入缺失和/或插入以获得最佳比对。在一些实施方式中，这些序列可包括肽序列、核酸序列、CDR序列、可变区序列、或重链或轻链序列。在一些实施方式中，可使用与本文公开的任意序列具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的任意序列。在一些实施方式中，可使用相对于本文公开的任意序列具有至少0、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50个取代、缺失或添加的任意序列。序列的改变可应用于例如单个氨基酸、单个核酸碱基或核酸密码子；然而，还设想在序列更长延伸中的差异。当应用于抗体序列时，这些序列差异可应用于抗原结合区(例如，CDR)或不与抗原结合或仅邻接于(secondary to)抗原结合的区(例如，框架区)。
如本文公开的，设想并且可使用与本文公开的任意序列具有％同源性的序列。术语“％同源性”是指当考虑两个序列的三维结构时它们之间的保守程度。例如，两个蛋白质序列之间的同源性可取决于结构基序，诸如β链、α螺旋和其他折叠，以及它们遍及序列的分布。同源性可通过结构测定来确定，无论是经验上的还是计算机模拟的(in silico)。在一些实施方式中，可使用与本文公开的任意序列具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同源性的任意序列。在一些实施方式中，可使用相对于本文公开的任意序列具有至少0、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50个取代、缺失或添加(其可能或可能不影响总体％同源性)的任意序列。
如本文所应用的，设想并且可使用与本文公开的任意序列具有一定％相似性的序列。在一些实施方式中，这些序列可包括肽序列、核酸序列、CDR序列、可变区序列、或重链或轻链序列。如本领域关于肽序列所理解的，“相似性”是指基于氨基酸的性质的氨基酸的比较，所述性质包括但不限于大小、极性、电荷、pK、芳香性、氢键性质或官能团(例如羟基、硫醇、胺、羧基等)的存在。术语“％相似性”是指两个或多个序列之间相同的单位(即氨基酸)相对于序列长度的百分比。当被比较的两个或多个序列长度相同时，％相似性将分别是该长度。当被比较的两个或多个序列长度不同时，可引入缺失和/或插入以获得最佳比对。两个氨基酸的相似性可决定某个取代是保守的或是非保守的。确定氨基酸取代的保守性的方法是本领域公知的并且可涉及取代矩阵。常用的取代矩阵包括BLOSUM45、BLOSUM62、BLOSUM80、PAM100、PAM120、PAM160、PAM200、PAM250，但是本领域技术人员认为合适的情况下也可使用其他取代矩阵或方法。当考虑诸如相关序列的严格性、保守性和/或差异(例如，在相同种类或更广泛的种类内)以及所讨论的序列的长度等方面时，某个取代矩阵可能优先于其他矩阵。如本文所使用的，与另一序列具有一定％相似性的肽序列将具有由所使用的相似性测定方法所控制的相同或可接受取代的达至该％的氨基酸。在一些实施方式中，可使用与本文公开的任意序列具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列相似性的序列。在一些实施方式中，可使用相对于本文公开的任意序列具有至少0、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50个相似的取代的任意序列。当应用于抗体序列时，这些相似的取代可应用于抗原结合区(即CDR)或不与抗原结合或仅邻接于抗原结合的区(即框架区)。
如本文使用的，关于序列的术语“共有序列”是指代表一组序列的每个位置处允许的氨基酸的所有不同组合的概括序列。共有序列可提供对相关序列的保守区域(其中大部分或所有序列中的单位(例如氨基酸或核苷酸)是相同的)以及序列之间表现出差异的区的了解。就抗体而言，CDR的共有序列可表明对于抗原结合重要或可有可无的氨基酸。设想可以用本文提供的任意序列来制备共有序列，并且可验证源自共有序列的所得的各种序列以具有与模板序列相似的效果。
如本文使用的，关于抗体的术语“竞争”意思是第一抗体或其抗原结合部分，以与第二抗体或其抗原结合部分的足够相似的方式结合表位，使得与在第二抗体不存在的情况下第一抗体的结合相比，在第二抗体存在的情况下第一抗体与其同源表位的结合结果可检测地降低。其中第二抗体与其表位的结合在第一抗体存在的情况下也可检测地降低的替代方案可以但不一定是这种情况。即，第一抗体可以抑制第二抗体与其表位的结合，而第二抗体不抑制第一抗体与其相应表位的结合。然而，每种抗体可检测地抑制另一抗体与其同源表位或配体的结合的情况，无论是在相同、更大还是更小程度上，抗体被称为彼此“交叉竞争”，用于结合它们各自的表位。本发明涵盖竞争和交叉竞争性抗体。无论这种竞争或交叉竞争发生的机制(例如，位阻、构象变化或结合至共同表位或其部分)如何，基于本文提供的教导，技术人员将认识到，涵盖这种竞争和/或交叉竞争性抗体并且可以用于本文公开的方法。
“优先地结合”或“特异性结合”(本文可互换地使用的)至表位的抗体是本领域理解很好的术语，并且确定这种特异性或优先结合的方法也是本领域熟知的。如果与分子与可选细胞或物质相比，分子与特定细胞或物质反应或结合更频繁和/或更迅速地，和/或具有更长的持续时间和/或更大的亲和力，则称该分子展现出“特异性结合”或“优先地结合”。如果与抗体结合至其他物质比，抗体结合具有更大亲和力和/或亲合力(avidity)，和/或更容易地，和/或具有更长的持续时间，则抗体“特异性结合”或“优先地结合”至靶。例如，特异或优先结合至CFD表位的抗体是与抗体结合至其他CFD表位或非CFD表位比，具有更大亲和力和/或亲合力，和/或更容易地，和/或具有更长的持续时间结合该表位的抗体。通过阅读该定义还可以理解，例如，特异或优先结合至第一靶的抗体(或部分或表位)可以或不可以特异或优先的合第二靶。因此，“特异结合”或“优先结合”不一定需要(尽管它可以包括)排他结合。通常，但不一定，提及结合意味着优先结合。
如本文使用的，术语“抑制”是指预期活性(诸如细胞活性)的降低或减少。该降低或减少可以是至少5％、10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％或100％，或由任何两个前述值定义的范围内的任意百分比，其中降低或减少100％表示完全抑制，并且任何较低的百分比表示部分抑制。预期活性的降低或减少可以以直接或间接的方式观察到。
如本文使用的，关于抗体的术语“阻断”或“破坏”是指抗体干扰生物过程，包括但不限于酶的活性、两种或多种生物分子(例如两种或更多种蛋白质、肽、核酸、脂质等)的结合或信号传导级联的进展的能力。一般而言，干扰生物过程将涉及抗体与其靶或其表位结合，从而干扰所述靶的正常功能，诸如封闭靶的活性位点、封闭靶的对其功能重要的另一区，或改变靶的定位和/或传输。抗体的阻断或破坏活性可根据所讨论的生物过程相对于生物过程未被破坏的对照条件的减少来量化。在其他情况下，抗体的阻断或破坏活性可根据已知与靶生物过程相关的另一生物过程的调节来量化，无论其是直接相关还是负相关。在一些实施方式中，相对于对照条件，阻断或破坏活性可引起至少5％、10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％或100％，或由任意两个前述值定义的范围内的任意百分比的变化。在本文提供的一些实施方式中，Gal3与形成淀粉样蛋白聚集体的蛋白质之间的相互作用是可被抗Gal3抗体或其结合片段破坏的生物过程。设想Gal3与形成淀粉样蛋白聚集体的蛋白质之间的相互作用可能是或可能不是直接相互作用，并且抗Gal3抗体或其结合片段可干扰Gal3或形成淀粉样蛋白聚集体的蛋白质的活性的一些其他方面。
如本文使用的，术语“抗原结合分子”是指这样的分子，其包括结合至抗原的抗原结合部分，和任选地包括允许抗原结合部分采用促进抗原结合部分结合或为抗原结合分子提供一些另外的性质的构象的支架或框架部分。在一些实施方式中，抗原是Gal3。在一些实施方式中，抗原结合部分包括来自结合至抗原的抗体的至少一个CDR。在一些实施方式中，抗原结合部分包括来自结合至抗原的抗体重链或来自结合至抗原的抗体轻链的所有三个CDR。在一些实施方式中，抗原结合部分包括来自结合至抗原的抗体的所有六个CDR(三个来自重链，和三个来自轻链)。在一些实施方式中，抗原结合部分是抗体片段。
抗原结合分子的非限制性示例包括抗体、抗体片段(例如，抗体的抗原结合片段)、抗体衍生物和抗体类似物。其他具体示例包括但不限于单链可变片段(scFv)、纳米抗体(例如骆驼重链抗体的VH结构域；VHH片段，参见Cortez-Retamozo等，Cancer Research，第64卷：2853-57，2004)、Fab片段、Fab′片段、F(ab′)2片段、Fv片段、Fd片段和互补决定区(CDR)片段。这些分子可以源自任何哺乳动物来源，比如人、小鼠、大鼠、兔、猪、狗、猫、马、驴、豚鼠、山羊或骆驼。抗体片段可以与完整的抗体竞争结合靶抗原，并且片段可以通过完整的抗体的修饰(例如酶促或化学切割)产生或使用重组DNA技术或肽合成从头合成。抗原结合分子可以包括例如具有移植的CDR或CDR衍生物的可替选的蛋白质支架或人工支架。这种支架包括但不限于包括引入以例如稳定抗原结合分子的三维结构的突变的抗体衍生支架，以及包括例如生物相容聚合物的全合成支架。参见，例如，Korndorfer等，2003，Proteins：Structure，Function，and Bioinformatics，第53卷，出版1：121-129(2003)；Roque等，Biotechnol.Prog.20：639-654(2004)。另外，可以使用肽抗体模拟物(“PAM”)，以及基于利用纤连蛋白组分作为支架的抗体模拟物的支架。
抗原结合分子还可以包括包含一个或多个抗体片段的蛋白质，所述抗体片段并入至单个多肽链或多个多肽链中。例如，抗原结合分子可以包括但不限于双抗体(参见，例如，EP 404，097；WO 93/11161和Hollinger等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，第90卷：6444-6448，1993)；胞内抗体；结构域抗体(单个VL或VH结构域或通过肽连接体连接的两个或多个VH结构域；参见Ward等，Nature，第341卷：544-546，1989)；大抗体(maxibody)(融合至Fc区的2个scFv，参见Fredericks等，Protein Engineering，Design&Selection，第17卷：95-106，2004和Powers等，Journal of Immunological Methods，第251卷：123-135，2001)；三抗(triabody)；四抗tetrabody)；微抗体(融合至CH3结构域的scFv；参见Olafsen等，ProteinEng Des Sel.，第17卷：315-23，2004)；肽体(peptibody)(一个或多个附着至Fc区的肽，参见WO 00/24782)；线性抗体(一对串联的Fd片段(VH-CH1-VH-CH1)，它与互补的轻链多肽一起形成一对抗原结合区，参见Zapata等，Protein Eng.，第8卷：1057-1062，1995)；小型模块化免疫药物(参见美国专利公开号20030133939)；和免疫球蛋白融合蛋白(例如IgG-scFv、IgG-Fab、2scFv-IgG、4scFv-IgG、VH-IgG、IgG-VH和Fab-scFv-Fc)。
在某些实施方式中，抗原结合分子可具有例如免疫球蛋白的结构。“免疫球蛋白”是四聚体分子，每个四聚体包括两对相同的多肽链，每对具有一条“轻”链(约25kDa)和一条“重”链(约50-70kDa)。每条链的氨基末端部分包括主要负责抗原识别的约100至110个或更多个氨基酸的可变区。每条链的羧基末端部分限定了主要负责效应子功能的恒定区。
除非另有说明，本文公开的互补决定区遵循IMGT定义。在一些实施方式中，本文公开的CDR中的任一个可替代地由Kabat、Chothia或本领域技术人员接受的其他定义来解释。
适用于非人(例如啮齿类或灵长类)抗体的术语“人源化”是含有衍生自非人免疫球蛋白的最小序列的杂合免疫球蛋白、免疫球蛋白链或其片段。
如本文使用的，术语“治疗”(和本领域中很好理解的)意味着用于在受试者的病症中获得有益或期望的结果，包括临床结果的方法。有益的或期望的临床结果可包括但不限于减轻或改善一种或多种症状或病症、减轻疾病的程度、稳定(即，不恶化)疾病状态、预防疾病的传递或传播、延迟或减慢疾病进展、改善或减轻疾病状态、减轻疾病复发和缓解，无论是部分的还是全部的，无论是可检测的还是不可检测的。如本文使用的“治疗”还包括预防性治疗。治疗方法包括向受试者施用治疗有效量的活性剂。施用步骤可由单次施用组成或可包括一系列施用。将组合物以足以治疗受试者的量和持续时间施用至受试者。治疗周期的长度取决于多种因素，比如病症的严重程度、受试者的年龄和遗传特征、活性剂的浓度、治疗中使用的组合物的活性或其组合。还应当理解，用于治疗或预防的试剂的有效剂量可以在特定治疗或预防方案的过程中增加或降低。通过本领域已知的标准诊断测定可以导致剂量的变化并且变得显而易见。在一些情况中，可能需要长期施用。
如本文使用的术语“有效量”或“有效剂量”具有依据说明书理解的它们的简单和普通的含义，并且是指导致可观察到的指定效果的所述组合物或化合物的量。可以改变目前公开主题的活性组合物中活性成分的实际剂量水平，以施用有效实现具体受试者和/或应用的指定响应的活性组合物或化合物的量。选择的剂量水平可以基于多种因素而变化，包括但不限于组合物的活性、制剂、施用途径、与其他药物或治疗的组合、正治疗病症的严重程度以及身体状况和正治疗的受试者的既往病史。在一些实施方式中，施用最小剂量，并且在不存在剂量限制性毒性的情况下将剂量逐步增加至最小有效量。本文预期了有效剂量的确定和调整，以及评估何时以及如何进行这种调整。
在一些非限制性实施方式中，组合物或化合物的有效量或有效剂量可指针对治疗本文提供的任意一种或多种疾病(诸如共核蛋白病、帕金森氏病、路易体痴呆症、多系统萎缩、tau蛋白病、阿尔茨海默病、进行性核上性麻痹、皮质基底节变性、皮克氏病、TDP-43蛋白病、肌萎缩侧索硬化症、额颞叶变性、TTR淀粉样变性(ATTR)、心脏淀粉样变性、尿调节素-相关肾脏疾病、IAPP淀粉样变性、SAA淀粉样变性、类风湿性关节炎、炎性关节炎、脊柱关节病、幼年特发性关节炎、强直性脊柱炎、银屑病关节炎、炎性肠病、溃疡性结肠炎、克罗恩病、乳糜泻、血管炎、结节病、家族性地中海热、肿瘤坏死因子受体-相关周期性综合征(TRAPS)、癌症、由淀粉样蛋白聚集促进的衰老或其任意组合)提供显著的、可测量的或足够的治疗效果的量或剂量。在一些实施方式中，组合物或化合物的有效量或有效剂量可治疗、改善本文提供的任意一种或多种疾病的症状、或预防本文提供的任意一种或多种疾病的症状的进展。
术语“施用”包括口服施用、局部接触、作为栓剂施用、静脉内、腹膜内、肌内、病灶内、鞘内、鼻内或皮下施用，或植入缓释装置，例如微型渗透泵至受试者。通过任何途径，包括肠胃外和经粘膜(例如，颊、舌下、腭、牙龈、鼻、阴道、直肠或经皮)施用。肠胃外施用包括例如，静脉内、肌内、微动脉内、皮内、皮下、腹膜内、心室内和颅内。其他递送方式包括但不限于使用脂质体制剂、静脉内输注、透皮贴剂等。通过“共同施用”意思是在施用本文所述的第二化合物同时，刚好在其之前或刚好在其之后施用本文所述的第一化合物。
如本文使用的，术语“治疗性靶”指在调节其活性后可以提供疾病表型的调节(例如，通过调节表达、生物活性等)的基因或基因产物。如通篇所使用的，“调节”意思是指所指现象的增加或降低(例如，生物活性的调节指生物活性的增加或生物活性的降低)。
如本文使用的，“药学上可接受的”具有根据说明书所理解的其简单和普通的含义，并且是指载体、赋形剂和/或稳定剂，其对暴露于其的细胞或哺乳动物在所采用的剂量和浓度是无毒的或具有可接受的毒性水平。如本文使用的，“药学上可接受的”、“稀释剂”、“赋形剂”和/或“载体”具有根据说明书理解的它们简单和普通的含义，并且旨在包括任意和所有溶剂、分散介质、涂料、抗菌剂和抗真菌剂、等渗和吸收延迟剂等，与向人、猫、狗或其他脊椎动物宿主的施用相容。通常，药学上可接受的稀释剂、赋形剂和/或载体是由联邦、州政府或其他监管机构的监管机构批准的、或在美国药典或用于动物(包括人以及非人哺乳动物(如猫和狗))的其他一般公认的药典中列出的稀释剂、赋形剂和/或载体。术语稀释剂、赋形剂和/或载体可指与药物制剂一起施用的稀释剂、佐剂、赋形剂或媒介物。这类药物稀释剂、赋形剂和/或载体可以是无菌液体，例如水和油，包括石油、动物、植物或合成来源的那些。水、盐溶液和右旋糖水溶液和甘油溶液可用作液体稀释剂、赋形剂和/或载体，特别是用于可注入溶液。合适的药物稀释剂和/或赋形剂包括糖、淀粉、葡萄糖、果糖、乳糖、蔗糖、麦芽糖、明胶、麦芽、大米、面粉、白垩、硅胶、硬脂酸钠、单硬脂酸甘油、滑石、盐、氯化钠、脱脂奶粉、甘油、丙烯、乙二醇、水、乙醇等。生理上可接受的载体的非限制性示例是pH缓冲水溶液。生理上可接受的载体还可包含下述的一种或多种：抗氧化剂(例如抗坏血酸)、低分子量(小于约10个残基)多肽、蛋白质(比如血清白蛋白、明胶、免疫球蛋白)、亲水聚合物(比如聚乙烯吡咯烷酮)、氨基酸、碳水化合物(比如葡萄糖、甘露糖或糊精)、螯合剂(比如EDTA)、糖醇(比如甘油、红糖醇、苏糖醇、阿拉伯糖醇、木糖醇、核糖醇、甘露醇、山梨糖醇、半乳糖醇、岩藻糖醇、二糖醇、肌醇、异麦芽、麦芽糖醇或乳糖醇)、形成盐的反离子(比如钠)以及非离子表面活性剂(比如聚乙二醇(PEG)和)。如果需要，制剂还可含有少量的润湿剂、填充剂、乳化剂或pH缓冲剂。这些制剂可采用溶液、悬浮液、乳液、缓释制剂等形式。制剂应适合施用方式。
术语“药学上可接受的盐”具有根据说明书理解的其简单和普通的含义，并且包括组合物或赋形剂的相对无毒的无机和有机酸或碱加成盐，包括但不限于镇痛剂、治疗剂、其他材料等。药学上可接受的盐的示例包括衍生自无机酸如盐酸和硫酸的那些，以及衍生自有机酸如乙磺酸、苯磺酸、对甲苯磺酸等的那些。用于形成盐的合适的无机碱的示例包括氨、钠、锂、钾、钙、镁、铝、锌等的氢氧化物、碳酸盐和碳酸氢盐。盐也可以用合适的有机碱包括那些无毒且足够强大以形成这种盐的那些来形成。例如，这类有机碱可以包括但不限于单-、二-和三烷基胺，包括甲胺、二甲胺和三乙胺；单-、二-或三羟基烷基胺，包括单-、二-和三乙醇胺；氨基酸，包括甘氨酸、精氨酸和赖氨酸；胍；N-甲基葡糖胺(N-methylglucosamine)；N-甲葡糖胺(N-methylglucamine)；L-谷氨酰胺；N-甲基哌嗪；吗啉；乙二胺；N-苄基苯乙胺；三羟甲基氨基乙烷。
如本文使用的，“载体”是指促进化合物通过、递送和/或掺入细胞、组织和/或身体器官的化合物、颗粒、固体、半固体、液体或稀释剂。例如但不限于，脂质纳米颗粒(LNP)，其是一种载体，其可封装寡核苷酸，从而保护寡核苷酸在通过血流期间免于降解和/或促进递送至期望器官，诸如至肺。
如本文使用的，“稀释剂”是指药物组合物中缺乏药理学活性但可以是药学上必需或期望的成分。例如，稀释剂可用于增加对于制造和/或施用而言质量太小的有效药物的体积。它也可以是用于溶解通过注入、摄入或吸入施用的药物的液体。本领域稀释剂的常见形式是缓冲水溶液，诸如但不限于模拟人血液组成的磷酸盐缓冲盐水。
术语“赋形剂”具有根据说明书理解的它的普通含义，并且是指添加到药物组合物中以向组合物提供但不限于体积、稠度、稳定性、结合能力、润滑、崩解能力等的惰性物质、化合物或材料。具有所需性质的赋形剂包括但不限于防腐剂、佐剂、稳定剂、溶剂、缓冲剂、稀释剂、增溶剂、去污剂、表面活性剂、螯合剂、抗氧化剂、醇、酮、醛、乙二胺四乙酸(EDTA)、柠檬酸、盐、氯化钠、碳酸氢钠、磷酸钠、硼酸钠、柠檬酸钠、氯化钾、磷酸钾、硫酸镁糖、右旋糖、葡聚糖、果糖、甘露糖、乳糖、半乳糖、蔗糖、山梨糖醇、纤维素、甲基纤维素、羟丙基甲基纤维素(羟丙甲纤维素)、甘油、聚乙烯醇、聚维酮、丙二醇、血清、氨基酸、聚乙二醇、聚山梨醇酯20、聚山梨醇酯80、脱氧胆酸钠、牛磺脱氧胆酸钠、硬脂酸镁、辛基酚乙氧基化物、苄索氯铵、硫柳汞、明胶、酯类、醚类、2-苯氧基乙醇、尿素或维生素，或其任意组合。药物组合物中发现的赋形剂的量可以为0％、0.1％、0.2％、0.3％、0.4％、0.5％、0.6％、0.7％、0.8％、0.9％、1％、2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％、10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、95％、100％w/w的百分比，或由任意两个前述数值定义的范围内的任意重量百分比。
具有所需性质的另外的赋形剂包括但不限于防腐剂、佐剂、稳定剂、溶剂、缓冲剂、稀释剂、增溶剂、去污剂、表面活性剂、螯合剂、抗氧化剂、醇、酮、醛、乙二胺四乙酸(EDTA)、三(羟甲基)氨基甲烷(Tris)、柠檬酸、抗坏血酸、乙酸、盐、磷酸盐、柠檬酸盐、乙酸盐、琥珀酸盐、氯化物、碳酸氢盐、硼酸盐、硫酸盐、氯化钠、碳酸氢钠、磷酸钠、硼酸钠、柠檬酸钠、氯化钾、磷酸钾、硫酸镁糖、右旋糖、葡聚糖40、果糖、甘露糖、乳糖、海藻糖、半乳糖、蔗糖、山梨糖醇、甘露醇、纤维素、血清、氨基酸、丙氨酸、精氨酸、天冬酰胺、天冬氨酸、半胱氨酸、谷氨酰胺、谷氨酸、甘氨酸、组氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、赖氨酸、甲硫氨酸、苯丙氨酸、脯氨酸、丝氨酸、苏氨酸、色氨酸、酪氨酸、缬氨酸、聚山梨醇酯20、聚山梨醇酯40、聚山梨醇酯60、聚山梨醇酯80、泊洛沙姆、泊洛沙姆188、脱氧胆酸钠、牛磺脱氧胆酸钠、硬脂酸镁、辛基酚乙氧基化物、苄索氯铵、硫柳汞、明胶、酯类、醚类、2-苯氧基乙醇、尿素或维生素，或其任意组合。一些赋形剂可以是残留量或制造过程中的污染物，包括但不限于血清、白蛋白、卵蛋白、抗生素、灭活剂、甲醛、戊二醛、β-丙内酯、明胶、细胞碎片、核酸、肽、氨基酸或生长培养基组分或其任何组合。制剂中发现的赋形剂的量可以是至少0％、0.1％、0.2％、0.3％、0.4％、0.5％、0.6％、0.7％、0.8％、0.9％、1％、2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％、10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、95％、100％w/W的百分比，或由任意两个前述数值定义的范围内的任意重量百分比。
本文使用的任何给定物质、化合物或材料的术语“纯度”是指物质、化合物或材料相对于预期丰度的实际丰度。例如、物质、化合物或材料可以是至少80、85、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99或100％纯度，包括其间的所有小数。纯度可受不需要的杂质包括但不限于副产物、异构体、对映异构体、降解产物、溶剂、载体、媒介物或污染物或其任何组合的影响。纯度可通过技术包括但不限于色谱法、液相色谱法、气相色谱法、光谱法、紫外-可见光谱法、红外光谱法、质谱法、核磁共振法、重量法或滴定法或它们的任何组合测量。
如本文使用的，术语“标准护理(standard of care)”、“最佳实践”和“标准疗法”是指被医疗从业者接受为对某些疾病的合适的、适当的、有效的和/或广泛使用的治疗的治疗。某些疾病的标准护理取决于许多不同的因素，包括治疗的生物效应、体内区域或位置、患者状态(例如年龄、体重、性别、遗传风险、其他残疾、继发性病症)、毒性、代谢、生物积累、治疗指数、剂量和本领域已知的其他因素。确定疾病的标准护理还取决于在由管理机构比如美国食品和药物管理局、国际协调委员会、加拿大卫生部、欧洲药品管理局、治疗用品管理局、中央药品标准控制机构、国家药品监督管理局、药品和医疗器械管理局、食品药品安全部和世界卫生组织制定标准的临床试验中建立安全性和有效性。疾病的标准护理可包括但不限于手术、放射、化学疗法、靶向疗法或免疫疗法。
如本文使用的，术语“蛋白病”是指由蛋白质的异常折叠或积累引起的疾病。异常蛋白质可获得毒性功能或失去它们的正常功能。错误折叠的蛋白质可诱导以其他方式正常折叠的蛋白质的错误折叠，产生疾病(如阮病毒病)的扩大是可能的。蛋白病可以是由蛋白质淀粉样蛋白的致病性积累引起的淀粉样蛋白病。蛋白病的一些非限制性实例包括阿尔茨海默病、脑β-淀粉样血管病、青光眼视网膜神经节细胞变性、帕金森氏病、路易体痴呆症、多系统萎缩、共核蛋白病、皮克氏病、皮质基底节变性、tau蛋白病、进行性核上性麻痹、TDP-43蛋白病、肌萎缩侧索硬化症、额颞叶变性、亨廷顿病、齿状核红核苍白球路易核体萎缩、脊髓性球部肌肉萎缩、脊髓小脑共济失调、脆性X综合征、Baratela-Scott综合征、弗里德里希共济失调、肌强直性营养不良、亚历山大症、家族性英国型痴呆、家族性丹麦型痴呆、佩梅病、seipin蛋白病、SAA淀粉样变性、AA(继发性)淀粉样变性、II型糖尿病、纤维蛋白原淀粉样变性、透析性淀粉样变性、包涵体肌炎/肌病、家族性淀粉样变性神经病、老年全身性淀粉样变性、蛇形病变、TTR淀粉样变性、心脏淀粉样变性、心房淀粉样变性、尿调节素-相关肾脏疾病、IAPP淀粉样变性、类风湿性关节炎、炎性关节炎、脊柱关节病、幼年特发性关节炎、强直性脊柱炎、银屑病关节炎、炎性肠病、溃疡性结肠炎、克罗恩病、乳糜泻、血管炎、结节病、家族性地中海热、肿瘤坏死因子受体-相关周期性综合征(TRAPS)、垂体泌乳素瘤、胰岛素淀粉样变性、角膜乳铁蛋白淀粉样变性、肺泡蛋白沉积症、精囊淀粉样变性、皮肤苔藓淀粉样变性、马洛里小体、牙源性(Pindborg)肿瘤淀粉样蛋白、癌症、由淀粉样蛋白聚集促进的衰老、或由蛋白质的错误折叠或聚集引起的或本领域技术人员已知的其它疾病。术语“蛋白质病(proteinopathy)”可以与本领域所理解的“蛋白病(proteopathy)”互换使用。
如本文使用的，术语“淀粉样蛋白(amyloid)”是指包括堆叠的β-片层构型的纤维状蛋白质结构。这些纤维状结构可能是由于具有正常或非致病性结构的蛋白质的错误折叠而形成的，尽管也有天然存在和/或非致病性的蛋白质淀粉样蛋白。各种天然存在的蛋白质的聚集与多种致病性疾病有关。这些纤维状沉积物的积累可干扰正常细胞的结构和功能，并且还会诱导额外的蛋白质分子形成聚集体形式。淀粉样蛋白形成的组织病理学鉴定可通过使用染料来完成，诸如刚果红，它优先插入堆叠的β-片层之间。如本文使用的，术语“淀粉样蛋白聚集”是指这些蛋白质淀粉样蛋白诸如在细胞中的形成，并且其可能导致致病性蛋白病。
如本文使用的，“聚集相关疾病”是指与一种或多种天然存在的蛋白质的聚集相关的疾病。聚集相关疾病包括但不限于阿尔茨海默病(AD)、脑淀粉样血管病、额颞叶变性(FTLD)、皮克氏病(PiD)、进行性核上性麻痹(PSP)、皮质基底节变性(CBD)、全局神经胶质tau蛋白病(GGT)、路易体病(LBD)、帕金森氏病(PD)、弥漫性路易体病(DLBD)、阿尔茨海默病路易体变异型(LBV)、共核蛋白病、多系统萎缩(MSA)、心血管疾病、动脉粥样硬化、冠心病、中风、TIA、外周动脉疾病、主动脉疾病、脑部疾病、肾脏疾病、眼部疾病、高细胞内胆甾醇酯/胆固醇积累、炎症、神经源性丝氨酸蛋白酶抑制剂包涵体家族性脑病(FENIB)、胰岛素源性淀粉样变性(LIDA)、脑内出血(ICH)、认知障碍、肌萎缩侧索硬化症(ALS)、朊病毒病、传染性海绵状脑病(TSE)、克雅氏病(CJD)、致命性家族性失眠症、格斯特曼-斯特劳斯勒-沙因克病、肌病、少肌症、特发性炎性肌病(IIM)、散发性包涵体肌炎(sIBM)、皮肌炎(DM)、多发性肌炎(PM)、坏死性自身免疫性肌病(NAM)、甲状腺素运载蛋白淀粉样变性(ATTR)、甲状腺素运载蛋白淀粉样变性心肌病(ATTR-CM)、苯丙酮尿症(PKU)或人全身性淀粉样蛋白疾病。
β淀粉样蛋白(Aβ40和42)-在AD这种最常见的痴呆类型中，Aβ肽的聚集和老年斑的形成是核心成分并且被认为发生在发病机制的早期。Aβ肽从淀粉样前体蛋白(APP)上裂解并聚集成各种形式，包括寡聚体、原纤丝和淀粉样纤丝。大的且不溶性的Aβ纤丝组装成淀粉样斑块，而Aβ寡聚体是可溶的，并且对神经元有毒。脑淀粉样血管病(CAA)的特征是Aβ在脑血管中沉积，并且被认为是AD脑血管病变的主要原因。
磷酸Tau和tau蛋白病-微管相关蛋白tau的过度磷酸化在阿尔茨海默病(AD)和其他tau蛋白病(包括皮质基底节变性、脑炎后帕金森氏综合征和嗜银颗粒痴呆)的发病机理中起关键作用。Tau过度磷酸化导致功能丧失、毒性增加及其聚集，形成神经丝缠结(NFT)。基因突变导致家族形式的额颞叶变性(FTLD)，包括皮克氏病(PiD)、进行性核上性麻痹(PSP)、皮质基底节变性(CBD)和球状神经胶质tau蛋白病(GGT)。
α-突触核蛋白-路易体病、多系统萎缩：α-突触核蛋白通常参与脑中突触小泡(SV)的运输，但其聚集导致称为路易体(LB)和细胞外路易神经突(LN)的神经元内沉积物。路易体(LB)是路易体病的病理标志，其包括帕金森氏病(PD)、弥漫性路易体病(DLBD)和阿尔茨海默病路易体变异型(LBV)。路易体痴呆(LBD)包括路易体痴呆症和帕金森氏病痴呆，路易体痴呆(LBD)是继阿尔茨海默病之后最常见的痴呆类型之一。大多数共核蛋白病病例是散发性的，然而α-突触核蛋白的家族性变异导致PD的早期发作。在多系统萎缩(MSA)中，α-突触核蛋白内含物主要存在于少突胶质细胞中。参见de Oliveira GAP，Silva JL.Alpha-synuclein stepwise aggregation reveals features of an early onset mutation inParkinson’s disease.Commun Biol.2019Oct 11；2：374；Schweighauser M，Shi Y，Tarutani A，Kametani F，Murzin AG，Ghetti B，Matsubara T，Tomita T，Ando T，HasegawaK，Murayama S，Yoshida M，Hasegawa M，Scheres SHW，Goedert M.Structures ofα-synuclein filaments from multiple system atrophy.Nature.2020 Sep；585(7825)：464-469。
APOE2、E3、E4-AD：载脂蛋白E(APOE)是重要的脂质转运蛋白，对其脂化和聚集具有同种型依赖性作用。APOE及其脂蛋白受体还介导Aβ转运。APOE4等位基因是晚发性阿尔茨海默病最强的基因风险因素，其脂化低于APOE3和APOE2，后者对阿尔茨海默病具有保护作用。APOE4似乎强烈影响寡聚淀粉样蛋白β聚集和稳定，从而促进阿尔茨海默病脑中淀粉样蛋白β纤丝形成，并改变其脂化状态，减少淀粉样蛋白β斑块负担。参见Husain MA，Laurent B，Plourde M.APOE and Alzheimer’s Disease：From Lipid Transport toPhysiopathology and Therapeutics.Front Neurosci.2021年2月17日；15：630502；Parhizkar S，Holtzman DM.APOE mediated neuroinflammation and neurodegenerationin Alzheimer’s disease.Semin Immunol.2022，2月26日；101594。
胆固醇-动脉粥样硬化、心血管疾病和阿尔茨海默病：在血液中，胆固醇由两种类型的脂蛋白携带，其中低密度脂蛋白(LDL)有助于动脉中胆固醇聚集和动脉粥样硬化斑块的形成。然后动脉会变厚和变硬(动脉硬化)，限制血流，血栓可形成，并且甚至动脉可破裂。动脉粥样硬化可导致高血压和心血管疾病，包括冠心病、中风和TIA、外周动脉疾病和主动脉疾病，并导致包括脑、肾脏和眼睛等其他器官的损伤。在AD脑中，细胞膜中的胆固醇积聚在所谓的脂筏和相关的游离胆固醇中，充当Aβ聚集的种子并促进纤丝的形成。参见Abdullah SM，Defina LF，Leonard D，Barlow CE，Radford NB，Willis BL，Rohatgi A，McGuire DK，de Lemos JA，Grundy SM，Berry JD，Khera A.Long-Term Association ofLow-Density Lipoprotein Cholesterol With Cardiovascular Mortality inIndividuals at Low 10-Year Risk of Atherosclerotic Cardiovascular DiseaseCirculation.2018年11月20日；138(21)：2315-2325；Habchi J，Chia S，Galvagnion C，Michaels TCT，Bellaiche MMJ，Ruggeri FS，Sanguanini M，IdiniI，Kumita JR，Sparr E，Linse S，Dobson CM，Knowles TPJ，Vendruscolo M.Cholesterol catalyses Aβ42aggregation through a heterogeneous nucleation pathway in the presence oflipid membranes.Nat Chem.2018年6月；10(6)：673-683；Hashemi M，Banerjee S，Lyubchenko YL.Free cholesterol Accelerates AβSelf-Assembly on Membranes atPhysiological Concentration.Int J Mol Sci.2022年3月3日；23(5)：2803；GellermannGP，Appel TR，Tannert A，Radestock A，Hortschansky P，Schroeckh V，Leisner C，Lütkepohl T，Shtrasburg S，C，Pras M，Linke RP，Diekmann S，M.Raftlipids as common components of human extracellular amyloid fibrils.Proc NatlAcad Sci U S A.2005年5月3日；102(18)：6297-302。
胆甾醇基(共酯基)-动脉粥样硬化、心血管疾病：胆固醇酯是胆固醇的无活性且更疏水的形式，其中胆固醇与脂肪酸酯化以便被转运至靶器官。因此，它是脂蛋白中胆固醇的主要形式。在动脉粥样硬化斑块处，聚集的LDL和胆固醇酯被LDLr-相关蛋白(LRP1)吸收进入血管平滑肌细胞、内皮细胞和巨噬细胞(然后形成泡沫巨噬细胞)，导致高细胞内胆固醇酯/胆固醇积累和炎症。Llorente-Cortés V，Otero-M，Camino-López S，CostalesP，Badimon L.Cholesteryl Esters of Aggregated LDL Are Internalized bySelective Uptake in Human Vascular Smooth Muscle Cells.Arterioscler ThrombVasc Biol.2006年1月；26(1)：117-23。
神经源性丝氨酸蛋白酶抑制剂-FENIB：丝氨酸蛋白酶抑制剂神经源性丝氨酸蛋白酶抑制剂是主要在脑中表达的抑制性丝氨酸蛋白酶抑制剂，在突触发育和可塑性中具有生理功能。神经源性丝氨酸蛋白酶抑制剂的结构对其功能至关重要，并导致聚合和包涵体的形成，这是蛇形病变的标志。神经源性丝氨酸蛋白酶抑制剂包涵体家族性脑病(FENIB)是罕见的基因退行性紊乱，影响脑和脊髓，临床表现包括痴呆、肌阵挛发作和癫痫。参见D′Acunto E，Fra A，Visentin C，Manno M，Ricagno S，Galliciotti G，MirandaE.Neuroserpin：structure，function，physiology and pathology.Cell MolLifeSci.2021年10月；78(19-20)：6409-6430。
胰岛素-LIDA：随着胰岛素的长期施用，在注入部位胰岛素聚集成不溶性纤丝可导致局部胰岛素源性淀粉样变性(LIDA)，其是皮肤损伤。参见Ansari AM，Osmani L，Matsangos AE，Li QK.Current insight in the localized insulin-derivedamyloidosis(LIDA)：clinico-pathological characteristics and differentialdiagnosis.Pathol Res Pract.2017年10月；213(10)：1237-1241；Das A，Shah M，SaraogiI.Molecular Aspects of Insulin Aggregation and Various TherapeuticInterventions.ACS Bio&Med Chem Au，2022年1月，10.1021/acsbiomedchemau.1c00054。
半胱氨酸蛋白酶抑制剂C-CAA，可能是ALS：半胱氨酸蛋白酶抑制剂C是控制溶酶体活性和细胞外蛋白酶的半胱氨酸蛋白酶抑制剂，并且随着聚集，半胱氨酸蛋白酶抑制剂C似乎失去其功能。在脑淀粉样血管病(CAA)中发现它与Aβ肽一起聚集并沉积在血管壁上，主要临床表现为脑内出血(ICH)和认知障碍。半胱氨酸蛋白酶抑制剂C的突变增加了其在遗传性CAA中的聚集特性。半胱氨酸蛋白酶抑制剂C存在于布尼纳小体(Bunina body)中，布尼纳小体是肌萎缩侧索硬化症(ALS)脊髓运动神经元中发现的包涵体。参见Sheikh AM，Wada Y，Tabassum S，Inagaki S，Mitaki S，Yano S，Nagai A.Aggregation of Cystatin CChanges Its Inhibitory Functions on Protease Activities and AmyloidβFibrilFormation.Int J Mol Sci.2021年9月7日；22(18)：9682；March ME，Gutierrez-UzquizaA，Snorradottir AO，Matsuoka LS，Balvis NF，Gestsson T，Nguyen K，Sleiman PMA，KaoC，Isaksson HJ，Bragason BT，Olafsson E，Palsdottir A，Hakonarson H.NAC blocksCystatin C amyloid complex aggregation in a cell system and in skin of HCCAApatients.Nat Commun.2021年3月23日；12(1)：1827；Wada Y，Nagai A，Sheikh AM，OnodaK，Terashima M，Shiota Y，Araki A，Yamaguchi S.Co-localization of cystatin C andprosaposin in cultured neurons and in anterior horn neurons with amyotrophiclateral sclerosis.J Neurol Sci.2018年1月15日；384：67-74。
朊病毒蛋白-朊病毒病，包括CJD：朊病毒病或传染性海绵状脑病(TSE)是由朊病毒蛋白PrP的错误折叠随后在神经元细胞中聚集和积累引起的，并且最终看到海绵状变性。它本质上具有高度传染性，并且大多数病例是散发性的，但基因形式由家族性克雅氏病(CJD)、致命性家族性失眠症和格斯特曼-斯特劳斯勒-沙因克病组成。
肌生长抑制素-肌病、少肌症和肌炎：肌生长抑制素负调节肌肉生长并对不同肌病和少肌症中的萎缩和肥大的分子调节剂有影响。肌生长抑制素在特发性炎性肌病(IIM)中上调。IIM或肌炎是以肌肉无力为特征的自身免疫性疾病，并且包括5种亚型。在散发性包涵体肌炎(sIBM)中，肌生长抑制素与Aβ聚集并积累，并且错误折叠的肌生长抑制素的分泌受损。
甲状腺素运载蛋白-甲状腺素运载蛋白淀粉样变性、心脏和肾脏疾病以及先兆子痫：四聚体甲状腺素转运蛋白甲状腺素运载蛋白(TTR)当解离成单体时形成可溶性寡聚体和淀粉样蛋白聚集体。TTR的聚集是甲状腺素运载蛋白淀粉样变性(ATTR)的原因，ATTR是全身性淀粉样变性，可导致心脏和肾脏疾病以及先兆子痫。甲状腺素运载蛋白淀粉样变性心肌病(ATTR-CM)是心力衰竭的原因。
苯丙氨酸-苯丙酮尿症：苯丙酮尿症(PKU)是遗传性代谢疾病，其特征在于血液和脑中必需氨基酸L-苯丙氨酸的异常高浓度，并且其可导致慢性肾脏疾病。与PKU相关的众多健康问题包括与其相关的紊乱，包括贫血、佝偻病、特应性皮炎、冠心病、糖尿病型病症和关节炎。苯丙氨酸纤丝的形成可在生理条件下引发蛋白质的聚集，并且产生的纤丝可引起严重的溶血。
NFL-运动神经元变性：突变的神经丝(NF)蛋白的特征在于缺陷的运输或组装以及NF聚集或积累，导致萎缩和运动神经元变性。神经丝轻链(NFL)亚基中的突变导致夏科-玛丽-图思病，这是最常见的遗传性周围神经病，并且NF突变已在早发性PD、AD和散发性肌萎缩侧索硬化症(ALS)患者中发现。在ALS中，NFL的聚集也可促进由错义突变而不稳定的野生表达蛋白的聚集。
纤维蛋白-脑血管损伤、AD、CAA：铁诱导的自由基可产生抗血栓溶解的纤维蛋白样聚合物。这些纤维蛋白纤维可以不可逆地捕获红细胞(RBC)，并且以这种方式诱导脑中的慢性缺氧并导致其他脑血管损伤。纤维蛋白和Aβ聚集体的不溶性沉积物存在于AD脑和神经脉管系统中，导致CAA和血栓。
溶菌酶-人全身性淀粉样蛋白疾病：溶菌酶与许多其他良好折叠的球状蛋白一样，在应激条件下产生纳米级寡聚体组装和淀粉样蛋白样纤丝状聚集体。利用拉曼显微镜，我们对从母鸡蛋蛋清中获得的溶菌酶的寡聚体和其他组装结构进行了关键的结构分析，并对其纤维性颤动(fibrillation)的不同状态下的蛋白质二级结构进行了量化估计。由溶菌酶(HuL)突变变体构成的淀粉样纤丝在重要器官中的积累与人全身性淀粉样蛋白疾病有关。
补体蛋白C3和C9聚集：补体级联是先天免疫系统的关键效应机制，其有助于病原体和死亡或垂死细胞的快速清除，以及有助于炎症免疫响应的程度和限制。已经证明，无论淀粉样蛋白类型、器官类型或组织类型如何，淀粉样蛋白沉积物中C9都存在普遍的、空间的和特异性的富集。我们的研究结果支持了下述假设：淀粉样变性可能激活补体级联，这可导致膜攻击复合物的形成和细胞死亡。
晶体蛋白：白内障是眼晶状体的常见蛋白质错误折叠疾病，其影响大约50％的超过65岁的群体。这种疾病由晶体蛋白的积累损伤引起，这使其折叠不稳定并引起它们聚集，导致视力模糊。目前，白内障的唯一治疗是在疾病晚期进行侵入性手术摘除。因此，人们对了解白内障的原因以及形成它们的机制非常感兴趣。Kate L.Moreau，JonathanA.King.Protein Misfolding and Aggregation in Cataract Disease and Prospectsfor Prevention.Trends Mol Med.2012年5月；18(5)：273-282。
心房钠尿肽：含有心房钠尿肽(ANP)的淀粉样蛋白经常在老年人的心脏中发现。在生理病理性充血性心力衰竭(CHF)条件下，b-ANP在ANP淀粉样蛋白沉积中起着至关重要的作用。它还表明，早期孤立性心房淀粉样变性(IAA)-相关的ANP沉积可能发生在CHF中，并建议应监测这些后者患者的心脏淀粉样变性的发展。Millucci L，Paccagnini E，Ghezzi L，Bernardini G，Braconi D，Laschi M，等人，(2011)Different Factors Affecting HumanANP Amyloid Aggregation and Their Implications in Congestive HeartFailure.PLoS ONE 6(7)：e21870。
降钙素：降钙素是由甲状腺产生的激素，甲状腺是位于喉咙附近的小型蝴蝶形腺体。降钙素有助于控制身体利用钙。降钙素是一种肿瘤标志物。肿瘤标志物是体内癌细胞或正常细胞响应癌症而产生的物质。Belfiore，M.，Cariati，I.，Matteucci，A.等人，Calcitonin native prefibrillar oligomers but not monomers induce membranedamage that triggers NMDA-mediated Ca2+-influx，LTP impairment andneurotoxicity.Sci Rep 9，5144(2019)。
21B-型钠尿肽(BNP)：响应于心室壁应力的增加和心肌缺血，BNP及其N-末端片段(NT-proBNP)从心室心肌细胞释放。BNP和NT-proBNP均已被证明是心力衰竭患者可靠的诊断和预后生物标志物。Weber M，Mitrovic V，Hamm C.B-type natriuretic peptide andN-terminal pro-B-type natriuretic peptide-Diagnostic role in stable coronaryartery disease.Exp Clin Cardiol.2006年夏；11(2)：99-101。
血清淀粉样蛋白A(SAA)：血清淀粉样蛋白A(SAA)蛋白在正常条件下在肝脏中合成，但在AA淀粉样变性中，在AEF的刺激下，SAA蛋白聚集成纤丝并沉积在肝脏中。JayaramanS.，Gantz D.L.，Haupt C.，Gursky O.Serum amyloid A forms stable oligomers thatdisrupt vesicles at lysosomal pH and contribute to the pathogenesis ofreactive amyloidosis.Proc Natl Acad Sci U S A.2017；114：E6507-E6515。
胰岛淀粉样多肽(IAPP)：糖尿病型病症是影响全世界估计3.83亿人的代谢疾病，其中约90％患有T2D。T2D特点是成人发病，并且其进展的特点是胰腺β-细胞死亡，导致胰岛素分泌减少。T2D的发病机制很大程度上是未知的，并且也没有已知的治愈方法。鉴于该疾病的复杂性，β-细胞死亡的原因可能是多种因素相互作用的结果。例如，由于在尸检中约90％的患者在胰腺中发现了IAPP(又名胰淀素)的淀粉样蛋白聚集体，因此许多研究努力集中在了解IAPP聚集及其与疾病的关联上。Nedumpully-Govindan，P.，Ding，F.Inhibitionof IAPP aggregation by insulin depends on the insulin oligomeric stateregulated by zinc ion concentration.Sci Rep 5，8240(2015)。
如本文使用的，术语“焦磷酸锝(99mTc-PYP)闪烁扫描”是涉及使用锝放射性示踪剂的诊断方法，所述锝放射性示踪剂结合积累的淀粉样蛋白沉积物并可用于通过γ射线检测来定位积累的淀粉样蛋白沉积物。一个非限制性实例是检测由TTR淀粉样变性引起的心肌病。虽然闪烁扫描是二维的，但相同的过程可用于99mTc-PYP单光子发射计算机断层扫描(SPECT)中进行三维扫描。
术语“％w/w”或“％wt/wt”意味着根据成分或试剂的重量占组合物总重乘以100表达的百分比。
应当理解，具有本文所述抗体名称的抗体可以使用抗体名称的缩写版本来指代，只要与本文所述的另一种抗体没有冲突即可。例如，F846C.1B2也可称为846C.1B2或846.1B2。这也可指抗体的片段(例如，具有相同的1、3或6个CDR)。
示例性使用方法
本文公开的任何抗Gal3抗体或其结合片段、或蛋白质可用于本文提供的方法中。
本公开的一些方面涉及促进蛋白质的淀粉样蛋白聚集和/或寡聚化的方法，所述方法包括使蛋白质与Gal3接触，其中Gal3促进蛋白质的淀粉样蛋白聚集和/或寡聚化。
图1是描绘促进蛋白质的淀粉样蛋白聚集和/或寡聚化的方法的一些实施方式的流程图。
在一些实施方式中，公开了促进蛋白质的淀粉样蛋白聚集和/或寡聚化的方法100。在一些实施方式中，方法包括使蛋白质与Gal3接触101。在一些实施方式中，Gal3结合102促进蛋白质的淀粉样蛋白聚集和/或寡聚化103。在一些实施方式中，蛋白质与Gal3在水性溶液中接触。在一些实施方式中，Gal3促进蛋白质的淀粉样蛋白聚集和/或寡聚化大约0.5、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23或24小时。在一些实施方式中，蛋白质包括α-突触核蛋白、tau蛋白、TDP-43、甲状腺素运载蛋白、尿调节素、胰岛淀粉样多肽(IAPP)、血清淀粉样蛋白A(SAA)、p53、载脂蛋白E(APOE)、APOE-4、朊病毒蛋白、纤维蛋白、或神经丝轻链(NFL)、CRP、SUMO、轻链、血小板源生长因子受体(PDGFR)、黑色素瘤细胞黏附分子(MCAM)、补体蛋白C3和/或C9、溶菌酶、胰岛素、天然血红蛋白(Hb)、糖化血红蛋白(HbAIC)、苯丙氨酸(Phe)、谷氨酰胺(Gln)、胆甾醇基(共酯基)、胆固醇、神经源性丝氨酸蛋白酶抑制剂、晶体蛋白AA和/或晶体蛋白AB、半胱氨酸蛋白酶抑制剂-C、或肌生长抑制素前肽或其任意组合。在一些实施方式中，tau蛋白是4R tau和/或磷酸化tau(磷酸tau)。在一些实施方式中，磷酸化tau是磷酸-tau(S396)。在一些实施方式中，当与Gal3接触时，磷酸化tau形成三聚体、四聚体或更高级的寡聚体。在一些实施方式中，与单独的tau蛋白的自发聚集和/或寡聚化、或当与肝素和/或蛛网膜酸(arachnoid acid)混合时tau蛋白的聚集和/或寡聚化相比，更快地实现tau蛋白的淀粉样蛋白聚集和/或寡聚化。在一些实施方式中，与当在37℃或约37℃下与肝素和/或蛛网膜酸混合时tau蛋白的聚集和/或寡聚化相比，更快地实现tau蛋白的淀粉样蛋白聚集和/或寡聚化。在一些实施方式中，以不超过0.5、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23或24小时的tau蛋白与Gal3的接触，实现tau蛋白的淀粉样蛋白聚集和/或寡聚化。通过Gal3的tau蛋白的聚集和/或寡聚化比以前的方法(诸如涉及使用肝素和/或蛛网膜酸的方法)更快地发生。在一些实施方式中，蛋白质包括APOE、朊病毒蛋白或NFL或其任何组合。在一些实施方式中，APOE是APO-E4。在一些实施方式中，聚集体或寡聚体的这种积极的形成允许用于测试和/或确认可逆转和/或抑制这些寡聚体/聚集体的形成的分子的模型。
在一些实施方式中，使蛋白质与Gal3在约10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44或45℃的温度下、或由任意两个前述温度定义的范围内的任意温度下接触。在一些实施方式中，使蛋白质与Gal3在体温、37℃或约37℃接触。在一些实施方式中，使蛋白质与Gal3在体温以下、37℃以下或约37℃以下接触。在一些实施方式中，使蛋白质与Gal3在室温或约室温接触。在一些实施方式中，使蛋白质与Gal3在约18、19、20、21、22、23或24℃的温度下或由前述温度中的任意两个限定的范围内的任何温度下接触。
在使用Gal3促进蛋白质的淀粉样蛋白聚集和/或寡聚化的方法的一些实施方式中，将蛋白质和Gal3组合并在水性溶液中孵育。在一些实施方式中，以10、20、30、40、50、60、70、80、90、100、110、120、130、140、150、160、170、180、190、200、250、300、350、400、450、500、550、600、650、700、750、800、850、900、950或1000μg/mL、或由任意两个前述浓度定义的范围内的任意浓度提供蛋白质。在一些实施方式中，以10、20、30、40、50、60、70、80、90、100、110、120、130、140、150、160、170、180、190、200、250、300、350、400、450、500、550、600、650、700、750、800、850、900、950或1000μg/mL、或由任意两个前述浓度定义的范围内的任意浓度提供Gal3。在一些实施方式中，以相同、大约相同或相似浓度提供蛋白质和Gal3，其中相似浓度可以指是或约是1％、2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％或100％彼此内的浓度。在一些实施方式中，以50、60、70、80、90、100、110、120、130、140或150μg/mL、或由任意两个前述浓度定义的范围内的任意浓度提供蛋白质和/或Gal3。在一些实施方式中，以100μg/mL或约100μg/mL提供蛋白质和/或Gal3。在一些实施方式中，水性溶液是与蛋白质相容的任何溶液(例如，等渗的、模拟生物条件的、缓冲的、最小化蛋白质变性或降解的、或维持适当的蛋白质折叠的任何一种或多种)。在一些实施方式中，水性溶液是盐水或磷酸钠缓冲液，任选地10mM磷酸钠缓冲液。在一些实施方式中，首先在与蛋白质相容的溶液中制备蛋白质和Gal3，并将其混合在一起以获得水性溶液。在一些实施方式中，可稀释水性溶液，诸如以调节水性溶液(例如缓冲液)中组分的浓度或调节蛋白质和/或Gal3的浓度。在一些实施方式中，将蛋白质和Gal3组合并孵育足以促进蛋白质的淀粉样蛋白聚集和/或寡聚化的一段时间。在一些实施方式中，将蛋白质和Gal3组合并孵育一段时间，该时间是或约是0、0.5、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、42、43、44、45、46、47或48小时、或由任意两个前述时间段定义的范围内的任意时间段。在一些实施方式中，将蛋白质和Gal3组合并在足以促进蛋白质的淀粉样蛋白聚集和/或寡聚化的温度下孵育。在一些实施方式中，将蛋白质和Gal3组合并在约10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44或45℃的温度下、或由任意两个前述温度定义的范围内的任意温度下孵育。在一些实施方式中，将蛋白质和Gal3组合并在体温、37℃或约37℃孵育。在一些实施方式中，将蛋白质和Gal3组合并在体温以下、37℃以下或约37℃以下孵育。在一些实施方式中，将蛋白质和Gal3组合并在室温或约室温孵育。在一些实施方式中，将蛋白质和Gal3组合并在约18、19、20、21、22、23或24℃的温度下、或由任意两个前述温度定义的范围内的任意温度下孵育。所得蛋白质及其淀粉样蛋白聚集体和/或其寡聚体可通过本领域公知的方法，诸如蛋白质印迹、斑点印迹和ELISA来评估。
在一些实施方式中，可以a)在Eppendorf管中在恒定搅拌下将各自浓度为100μg/mL的Gal3与IAPP(诸如人IAPP)孵育，b)以规则间隔诸如0、0.5、1、2、3、4和5小时，等分试样可保存在-20℃下，以使用蛋白质印迹或斑点印迹进行寡聚化分析，以及c)可使用特异性识别寡聚体构象的i11抗体进行印迹，以确定在Gal3存在下随着时间的推移的IAPP寡聚化。在一些实施方式中，蛋白质可替换为α-突触核蛋白、tau蛋白、TAR DNA-结合蛋白43(TDP-43)、甲状腺素运载蛋白(TTR)、尿调节素、血清淀粉样蛋白A(SAA)、p53或本文公开的任何其他蛋白。在一些实施方式中，i11抗体可替换为A11抗体，其也结合蛋白质寡聚体。
本公开的一些方面涉及抑制Gal3-介导的蛋白质的淀粉样蛋白聚集的方法，所述方法包括：使蛋白质与抗Gal3抗体或其结合片段接触，其中抗Gal3抗体或其结合片段与Gal3的结合抑制Gal3-介导的蛋白质的淀粉样蛋白聚集。
图2是描绘用于抑制Gal3-介导的蛋白质的聚集的方法的一些实施方式的流程图。
在一些实施方式中，公开了抑制蛋白质的Gal3-介导的淀粉样蛋白聚集的方法200。在一些实施方式中，方法包括使蛋白质与抗Gal3抗体或其结合片段接触201。在一些实施方式中，抗Gal3抗体或其结合片段与Gal3与Gal3的结合202抑制Gal3-介导的蛋白质的淀粉样蛋白聚集203。在一些实施方式中，蛋白质在细胞中。在一些实施方式中，蛋白质204包括α-突触核蛋白、tau蛋白、磷酸tau、TAR DNA结合蛋白(TDP-43)、甲状腺素运载蛋白、尿调节素、胰岛淀粉样多肽(IAPP)、血清淀粉样蛋白A(SAA)、p53、载脂蛋白E(APOE)、APOE-4、朊病毒蛋白、纤维蛋白、神经丝轻链(NFL)、CRP、SUMO、轻链、血小板源生长因子受体(PDGFR)、黑色素瘤细胞黏附分子(MCAM)、补体蛋白C3、补体蛋白C9、溶菌酶、胰岛素、天然血红蛋白(Hb)、糖化血红蛋白(HbAIC)、苯丙氨酸(Phe)、谷氨酰胺(Gln)、胆甾醇基(共酯基)、胆固醇、神经源性丝氨酸蛋白酶抑制剂、晶体蛋白AA、晶体蛋白AB、半胱氨酸蛋白酶抑制剂-C、肌生长抑制素前肽、心房钠尿肽(ANP)、B-型钠尿肽(BNP)或其中的任意组合。
本文还公开了抑制细胞中Gal3-介导的蛋白质的淀粉样蛋白聚集的方法。在一些实施方式中，方法包括使细胞与抗Gal3抗体或其结合片段接触。在一些实施方式中，细胞中抗Gal3抗体或其结合片段与Gal3的结合抑制Gal3-介导的蛋白质的淀粉样蛋白聚集。
在一些实施方式中，方法在体外或体内进行。
在一些实施方式中，相对于未与抗Gal3抗体或其结合片段接触的细胞，在与抗Gal3抗体或其结合片段接触后，Gal3-介导的蛋白质的淀粉样蛋白聚集被抑制至少5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％或99％、或由任意两个前述百分比定义的范围内的任意百分比。
在一些实施方式中，蛋白质包括α-突触核蛋白、tau蛋白、磷酸tau、TAR DNA结合蛋白(TDP-43)、甲状腺素运载蛋白、尿调节素、胰岛淀粉样多肽(IAPP)、血清淀粉样蛋白A(SAA)、p53、载脂蛋白E(APOE)、APOE-4、朊病毒蛋白、纤维蛋白、神经丝轻链(NFL)、CRP、SUMO、轻链、血小板源生长因子受体(PDGFR)、黑色素瘤细胞黏附分子(MCAM)、补体蛋白C3、补体蛋白C9、溶菌酶、胰岛素、天然血红蛋白(Hb)、糖化血红蛋白(HbAIC)、苯丙氨酸(Phe)、谷氨酰胺(Gln)、胆甾醇基(共酯基)、胆固醇、神经源性丝氨酸蛋白酶抑制剂、晶体蛋白AA、晶体蛋白AB、半胱氨酸蛋白酶抑制剂-C、肌生长抑制素前肽、心房钠尿肽(ANP)、B-型钠尿肽(BNP)或其中的任意组合。在一些实施方式中，当与Gal3接触时，磷酸化tau形成三聚体、四聚体或更高级的寡聚体。
在一些实施方式中，抗Gal3抗体或其结合片段包括(1)重链可变区，其包括VH-CDR1、VH-CDR2和VH-CDR3；以及(2)轻链可变区，其包括VL-CDR1、VL-CDR2和VL-CDR3。在一些实施方式中，VH-CDR1包含与SEQ ID NO：27-70的氨基酸序列中的任一个具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列。在一些实施方式中，VH-CDR2包含与SEQ IDNO：71-111、801、951、952的氨基酸序列中的任一个具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列。在一些实施方式中，VH-CDR3包含与SEQ ID NO：112-169、802、953、954的氨基酸序列中的任一个具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列。在一些实施方式中，VL-CDR1包含与SEQ ID NO：170-220的氨基酸序列中的任一个具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列。在一些实施方式中，VL-CDR2包含与SEQ ID NO：211-247的氨基酸序列中的任一个具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列。在一些实施方式中，VL-CDR3包含与SEQ ID NO：248-296的氨基酸序列中的任一个具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列。在一些实施方式中，抗Gal3抗体或其结合片段包括如图13中阐释的VH-CDR1、VH-CDR2、VH-CDR3、VL-CDR1、VL-CDR2和VL-CDR3的组合。在一些实施方式中，重链可变区包含与选自SEQ ID NO：374-447、821-835、941-943、969-982、1110-1152、1440-1464的序列具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的序列。在一些实施方式中，轻链可变区包含与选自SEQ ID NO：374-447、821-835、941-943、969-982、1110-1152、1440-1464的序列具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的序列。在一些实施方式中，抗Gal3抗体或其结合片段包括重链，其中所述重链包含与选自SEQ ID NO：448-494、804、836-850、983-996、1153-1195、1411、1465-1489的序列具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的序列。在一些实施方式中，抗Gal3抗体或其结合片段包括轻链，其中所述轻链包含与选自SEQ ID NO：495-538、805、851-865、997-1010、1196-1238、1412、1490-1514的序列具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的序列。在一些实施方式中，竞争结合至任何一种或多种前述抗体(任选地，以如本实施例(例如实施例54)中定义的至少80％竞争)的任何抗体(人的、人源化的或非人的)也可在方法中使用。在一些实施方式中，抗体结合至任何一种或多种前述抗体的相同或重叠表位。
在一些实施方式中，抗Gal3抗体或其结合片段选自由下述至少一种组成的组：TB001、TB006、12G5.D7、13A12.2E5、14H10.2C9、15F10.2D6、19B5.2E6、20D11.2C6、20H5.A3、23H9.2E4、2D10.2B2、3B11.2G2、7D8.2D8、mIMT001、4A11.2B5、4A11.H1L1、4A11.H4L2、4G2.2G6、6B3.2D3、6H6.2D6、9H2.2H10、13G4.2F8、13H12.2F8、15G7.2A7、19D9.2E5、23B10.2B12、24D12.2H9、F846C.1B2、F846C.1F5、F846C.1H12、F846C.1H5、F846C.2H3、F846TC.14A2、F846TC.14E4、F846TC.16B5、F846TC.7F10、F847C.10B9、F847C.11B1、F847C.12F12、F847C.26F5、F847C.4B10、F849C.8D10、F849C.8H3、846.2B11、846.4D5、846T.1H2、847.14H4、846.2D4、846.2F11、846T.10B1、846T.2E3、846T.4C9、846T.4E11、846T.4F5、846T.8D1、847.10C9、847.11D6、847.15D12、847.15F9、847.15H11、847.20H7、847.21B11、847.27B9、847.28D1、847.2B8、847.3B3、849.1D2、849.2D7、849.2F12、849.4B2、849.4F12、849.4F2、849.5C2、849.8D12、F847C.21H6、849.5H1、847.23F11、847.16D10、847.13E2-mH0mL1、847.13E2-mH0mL2、847.12C4、847.4D3、2D10-VH0-VL0、2D10-hVH4-HVL1、2D10-hVH4-HVL2、2D10-hVH4-HVL3、2D10-hVH4-HVL4、2D10-hVH3-HVL1、2D10-hVH3-HVL2、2D10-hVH3-HVL3、2D10-hVH3-HVL4、20H5.A3-VH3VL1、20H5.A3-VH3VL3、20H5.A3-VH4VL1、20H5.A3-VH5VL1、20H5.A3-VH5VL3、20H5.A3-VH6VL1、20H5.A3-VH6VL3或其结合片段。在一些实施方式中，抗Gal3抗体或其结合片段选自由下述至少一种组成的组：2D10-VH0-VL0、2D10-hVH4-HVL1、2D10-hVH4-HVL2、2D10-hVH4-HVL3、2D10-hVH4-HVL4、2D10-hVH3-HVL1、2D10-hVH3-HVL2、2D10-hVH3-HVL3、2D10-hVH3-HVL4或其结合片段。在一些实施方式中，抗Gal3抗体或其结合片段选自由下述至少一种组成的组：21H6-H0L0、21H6-H1L1、21H6-H1L2、21H6-H1L3、21H6-H1L4、21H6-H2L1、21H6-H2L2、21H6-H2L3、21H6-H2L4、21H6-H3L1、21H6-H3L2、21H6-H3L3、21H6-H3L4、21H6-H4L1、21H6-H4L2、21H6-H4L3、21H6-H4L4、21H6-H5L1、21H6-H5L2、21H6-H5L3、21H6-H5L4、21H6-H6L1、21H6-H6L2、21H6-H6L3、21H6-H6L4或其结合片段。在一些实施方式中，竞争结合至任何一种或多种前述抗体(任选地，以如本实施例(例如实施例54)中定义的至少80％竞争)的任何抗体(人的、人源化的或非人的)也可在方法中使用。在一些实施方式中，抗体结合至任何一种或多种前述抗体的相同或重叠表位。
本公开的一些方面涉及一种治疗有需要的受试者的淀粉样蛋白病的方法，所述方法包括：向受试者施用抗Gal3抗体或其结合片段，其中抗Gal3抗体或其结合片段与受试者中Gal3的结合抑制受试者中Gal3-介导的蛋白质的淀粉样蛋白聚集，从而治疗受试者的淀粉样蛋白病。
本公开的一些方面涉及一种治疗有需要的受试者的蛋白病的方法，所述方法包括：向受试者施用抗Gal3抗体或其结合片段，其中抗Gal3抗体或其结合片段与受试者中Gal3的结合抑制受试者中Gal3-介导的蛋白质的寡聚化，从而治疗受试者的蛋白病。
图3是描绘治疗淀粉样蛋白病的方法的一些实施方式的流程图。
在一些实施方式中，公开了治疗有需要的受试者的淀粉样蛋白病的方法300。在一些实施方式中，公开了治疗有需要的受试者的蛋白病的方法。在一些实施方式中，方法包括向受试者施用抗Gal3抗体或其结合片段301。在一些实施方式中，抗Gal3抗体或其结合片段与受试者中Gal3的结合302抑制受试者中Gal3-介导的蛋白质的淀粉样蛋白聚集303。在一些实施方式中，抗Gal3抗体或其结合片段与受试者中Gal3的结合抑制受试者中Gal3-介导的蛋白质的寡聚化。在一些实施方式中，蛋白质包括α-突触核蛋白、tau蛋白、磷酸tau、TARDNA结合蛋白(TDP-43)、甲状腺素运载蛋白、尿调节素、胰岛淀粉样多肽(IAPP)、血清淀粉样蛋白A(SAA)、p53、载脂蛋白E(APOE)、APOE-4、朊病毒蛋白、纤维蛋白、神经丝轻链(NFL)、CRP、SUMO、轻链、血小板源生长因子受体(PDGFR)、黑色素瘤细胞黏附分子(MCAM)、补体蛋白C3、补体蛋白C9、溶菌酶、胰岛素、天然血红蛋白(Hb)、糖化血红蛋白(HbAIC)、苯丙氨酸(Phe)、谷氨酰胺(Gln)、胆甾醇基(共酯基)、胆固醇、神经源性丝氨酸蛋白酶抑制剂、晶体蛋白AA、晶体蛋白AB、半胱氨酸蛋白酶抑制剂-C、肌生长抑制素前肽、心房钠尿肽(ANP)、B-型钠尿肽(BNP)或其中的任意组合。在一些实施方式中，淀粉样蛋白聚集和/或寡聚化的抑制导致受试者淀粉样蛋白病的治疗304。在一些实施方式中，蛋白病或淀粉样蛋白病包括家族性克雅氏病(CJD)、阿尔茨海默病、CAA、tau蛋白病、路易体病、多系统萎缩、动脉粥样硬化、心血管疾病、神经源性丝氨酸蛋白酶抑制剂包涵体家族性脑病(FENIB)、胰岛素源性淀粉样变性、糖尿病、2型糖尿病、糖尿病型病症、肾脏疾病、朊病毒病、传染性海绵状脑病(TSE)、人全身性淀粉样蛋白疾病、致命性家族性失眠症、格斯特曼-斯特劳斯勒-沙因克病、特发性炎性肌病(IIM)、甲状腺素运载蛋白淀粉样变性、心脏病、先兆子痫、苯丙酮尿症、亨廷顿病、运动神经元变性、脑血管损伤、中风、先天免疫系统破坏、晶状体损伤、视力模糊、充血性心力衰竭(CHF)、心脏淀粉样变性、甲状腺髓样癌(MTC)、骨质疏松症、佩吉特氏病、外周淀粉样变性、肌萎缩侧索硬化症(ALS)、额颞叶变性(FTLD)、高血糖症、轻链淀粉样变性(AL)、共核蛋白病、帕金森氏病、路易体痴呆症、进行性核上性麻痹、皮质基底节变性、皮克氏病、TDP-43蛋白病、TTR淀粉样变性(ATTR)、尿调节素-相关肾脏疾病、类风湿性关节炎、炎性关节炎、脊柱关节病、幼年特发性关节炎、强直性脊柱炎、银屑病关节炎、炎性肠病、溃疡性结肠炎、克罗恩病、乳糜泻、血管炎、结节病、家族性地中海热、肿瘤坏死因子受体-相关周期性综合征(TRAPS)、癌症、由淀粉样蛋白聚集促进的衰老或其任意组合。
在一些实施方式中，蛋白质在细胞中。在一些实施方式中，蛋白质包括α-突触核蛋白、tau蛋白、磷酸tau、TAR DNA结合蛋白(TDP-43)、甲状腺素运载蛋白、尿调节素、胰岛淀粉样多肽(IAPP)、血清淀粉样蛋白A(SAA)、p53、载脂蛋白E(APOE)、APOE-4、朊病毒蛋白、纤维蛋白、神经丝轻链(NFL)、CRP、SUMO、轻链、血小板源生长因子受体(PDGFR)、黑色素瘤细胞黏附分子(MCAM)、补体蛋白C3、补体蛋白C9、溶菌酶、胰岛素、天然血红蛋白(Hb)、糖化血红蛋白(HbAIC)、苯丙氨酸(Phe)、谷氨酰胺(Gln)、胆甾醇基(共酯基)、胆固醇、神经源性丝氨酸蛋白酶抑制剂、晶体蛋白AA、晶体蛋白AB、半胱氨酸蛋白酶抑制剂-C、肌生长抑制素前肽、心房钠尿肽(ANP)、B-型钠尿肽(BNP)或其中的任意组合。
在一些实施方式中，抗Gal3抗体或其结合片段包括TB001、TB006、12G5.D7、13A12.2E5、14H10.2C9、15F10.2D6、19B5.2E6、20D11.2C6、20H5.A3、23H9.2E4、2D10.2B2、3B11.2G2、7D8.2D8、mIMT001、4A11.2B5、4A11.H1L1、4A11.H4L2、4G2.2G6、6B3.2D3、6H6.2D6、9H2.2H10、13G4.2F8、13H12.2F8、15G7.2A7、19D9.2E5、23B10.2B12、24D12.2H9、F846C.1B2、F846C.1F5、F846C.1H12、F846C.1H5、F846C.2H3、F846TC.14A2、F846TC.14E4、F846TC.16B5、F846TC.7F10、F847C.10B9、F847C.11B1、F847C.12F12、F847C.26F5、F847C.4B10、F849C.8D10、F849C.8H3、846.2B11、846.4D5、846T.1H2、847.14H4、846.2D4、846.2F11、846T.10B1、846T.2E3、846T.4C9、846T.4E11、846T.4F5、846T.8D1、847.10C9、847.11D6、847.15D12、847.15F9、847.15H11、847.20H7、847.21B11、847.27B9、847.28D1、847.2B8、847.βB3、849.1D2、849.2D7、849.2F12、849.4B2、849.4F12、849.4F2、849.5C2、849.8D12、F847C.21H6、849.5H1、847.23F11、847.16D10、847.13E2-mH0mL1、847.13E2-mH0mL2、847.12C4、847.4D3、2D10-VH0-VL0、2D10-hVH4-HVL1、2D10-hVH4-HVL2、2D10-hVH4-HVL3、2D10-hVH4-HVL4、2D10-hVH3-HVL1、2D10-hVH3-HVL2、2D10-hVH3-HVL3、2D10-hVH3-HVL4、20H5.A3-VH3VL1、20H5.A3-VH3VL3、20H5.A3-VH4VL1、20H5.A3-VH5VL1、20H5.A3-VH5VL3、20H5.A3-VH6VL1、20H5.A3-VH6VL3、2D10-VH0-VL0、2D10-hVH4-HVL1、2D10-hVH4-HVL2、2D10-hVH4-HVL3、2D10-hVH4-HVL4、2D10-hVH3-HVL1、2D10-hVH3-HVL2、2D10-hVH3-HVL3、2D10-hVH3-HVL4、21H6-H0L0、21H6-H1L1、21H6-H1L2、21H6-H1L3、21H6-H1L4、21H6-H2L1、21H6-H2L2、21H6-H2L3、21H6-H2L4、21H6-H3L1、21H6-H3L2、21H6-H3L3、21H6-H3L4、21H6-H4L1、21H6-H4L2、21H6-H4L3、21H6-H4L4、21H6-H5L1、21H6-H5L2、21H6-H5L3、21H6-H5L4、21H6-H6L1、21H6-H6L2、21H6-H6L3、和/或21H6-H6L4。在一些实施方式中，竞争结合至任何一种或多种前述抗体(任选地，以如本实施例(例如实施例54)中定义的至少80％竞争)的任何抗体(人的、人源化的或非人的)也可在方法中使用。在一些实施方式中，抗体结合至任何一种或多种前述抗体的相同或重叠表位。
在一些实施方式中，与不存在抗Gal3阻断抗体的抗Gal3抗体结合相比，抗Gal3阻断抗体阻断抗Gal3抗体与Gal3的结合的约50％、60％、70％、75％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％，或阻断抗Gal3抗体与Gal3的结合的由任意两个前述值定义的范围。例如，在一些实施方式中，与不存在抗Gal3阻断抗体的抗Gal3抗体结合相比，抗Gal3阻断抗体阻断抗Gal3抗体结合介于约50％和100％、50％和95％、50％和90％、50％和85％、50％和80％、50％和75％、50％和70％、50％和60％、60％和100％、60％和95％、60％和90％、60％和85％、60％和80％、60％和75％、75％和100％、75％和95％、75％和90％或75％和85％之间。
在一些实施方式中，抗Gal3阻断抗体结合一个或多个与抗Gal3抗体相同的表位。在一些实施方式中，抗体是以至少80％竞争的水平(例如实施例54)竞争结合至任何一种或多种前述抗体的抗体。
在一些实施方式中，抗Gal3抗体以至少50％、60％、70％、80％、90％、100％效率抑制Gal3-介导的淀粉样蛋白聚集。例如，在一些实施方式中，抗Gal3抗体的结合以至少50％-100％、50％-90％、50％-80％、50％-70％或70％-100％效率抑制Gal3-介导的淀粉样蛋白聚集。在一些实施方式中，抗Gal3抗体抑制Gal3-介导的淀粉样蛋白聚集至少1倍、2倍、3倍、4倍、5倍、6倍、7倍、8倍、9倍或10倍，或由任意两个前述值定义的范围。例如，在一些实施方式中，抗Gal3抗体的结合抑制Gal3-介导的淀粉样蛋白聚集至少1倍至10倍、1倍至7倍、1倍至5倍、1倍-3倍、3倍至10倍、3倍至7倍、3倍至5倍、5倍至10倍、或5倍至7倍。
在一些实施方式中，方法进一步包括在施用步骤之前鉴定受试者是否需要淀粉样蛋白病的治疗。
在一些实施方式中，方法进一步包括在施用步骤之后检测受试者中淀粉样蛋白病的改善。在一些实施方式中，通过活检、血或尿测试、超声心动图或焦磷酸锝(99mTc-PYP)闪烁扫描来完成鉴定受试者是否需要淀粉样蛋白病的治疗和/或检测淀粉样蛋白病的改善。
在一些实施方式中，公开了抑制Gal3-介导的淀粉样蛋白β40和/或淀粉样蛋白β42的淀粉样蛋白聚集的方法。在一些实施方式中，方法包括：使蛋白质与抗Gal3抗体或其结合片段接触，其中抗Gal3抗体或其结合片段与Gal3的结合抑制Gal3-介导的淀粉样蛋白β40和/或淀粉样蛋白β42的淀粉样蛋白聚集。
在一些实施方式中，公开了治疗有需要的受试者的阿尔茨海默病的方法。在一些实施方式中，方法包括：向受试者施用抗Gal3抗体或其结合片段，其中抗Gal3抗体或其结合片段与受试者中Gal3的结合抑制受试者中Gal3-介导的淀粉样蛋白β40和/或淀粉样蛋白β42的淀粉样蛋白聚集，从而治疗受试者的阿尔茨海默病。
在一些实施方式中，公开了治疗有需要的受试者的CAA的方法。在一些实施方式中，方法包括：向受试者施用抗Gal3抗体或其结合片段，其中抗Gal3抗体或其结合片段与受试者中Gal3的结合抑制受试者中Gal3-介导的淀粉样蛋白β40和/或淀粉样蛋白β42的淀粉样蛋白聚集，从而治疗受试者的CAA。
在一些实施方式中，公开了抑制Gal3-介导的磷酸tau的淀粉样蛋白聚集的方法。在一些实施方式中，方法包括：使蛋白质与抗Gal3抗体或其结合片段接触，其中抗Gal3抗体或其结合片段与Gal3的结合抑制Gal3-介导的磷酸tau的淀粉样蛋白聚集。
在一些实施方式中，公开了治疗有需要的受试者的阿尔茨海默病的方法。在一些实施方式中，方法包括：向受试者施用抗Gal3抗体或其结合片段，其中抗Gal3抗体或其结合片段与受试者中Gal3的结合抑制受试者中Gal3-介导的磷酸tau的淀粉样蛋白聚集，从而治疗受试者的阿尔茨海默病。
在一些实施方式中，公开了治疗有需要的受试者的tau蛋白病的方法。在一些实施方式中，方法包括：向受试者施用抗Gal3抗体或其结合片段，其中抗Gal3抗体或其结合片段与受试者中Gal3的结合抑制受试者中Gal3-介导的磷酸tau的淀粉样蛋白聚集，从而治疗受试者的tau蛋白病。
在一些实施方式中，公开了抑制Gal3-介导的α突触核蛋白的淀粉样蛋白聚集的方法。在一些实施方式中，方法包括：使蛋白质与抗Gal3抗体或其结合片段接触，其中抗Gal3抗体或其结合片段与Gal3的结合抑制Gal3-介导的α突触核蛋白的淀粉样蛋白聚集。
在一些实施方式中，公开了治疗有需要的受试者的路易体病的方法。在一些实施方式中，方法包括：向受试者施用抗Gal3抗体或其结合片段，其中抗Gal3抗体或其结合片段与受试者中Gal3的结合抑制受试者中Gal3-介导的α突触核蛋白的淀粉样蛋白聚集，从而治疗受试者的路易体病。
在一些实施方式中，公开了治疗有需要的受试者的多系统萎缩的方法。在一些实施方式中，方法包括：向受试者施用抗Gal3抗体或其结合片段，其中抗Gal3抗体或其结合片段与受试者中Gal3的结合抑制受试者中Gal3-介导的α突触核蛋白的淀粉样蛋白聚集，从而治疗受试者的多系统萎缩。
在一些实施方式中，公开了抑制Gal3-介导的APOE-4的淀粉样蛋白聚集的方法。在一些实施方式中，方法包括：使蛋白质与抗Gal3抗体或其结合片段接触，其中抗Gal3抗体或其结合片段与Gal3的结合抑制Gal3-介导的APOE-4的淀粉样蛋白聚集。
在一些实施方式中，公开了治疗有需要的受试者的阿尔茨海默病的方法。在一些实施方式中，方法包括：向受试者施用抗Gal3抗体或其结合片段，其中抗Gal3抗体或其结合片段与受试者中Gal3的结合抑制受试者中Gal3-介导的APOE-4的寡聚化，从而治疗受试者的阿尔茨海默病。
在一些实施方式中，公开了治疗有需要的受试者的CAA的方法。在一些实施方式中，方法包括：向受试者施用抗Gal3抗体或其结合片段，其中抗Gal3抗体或其结合片段与受试者中Gal3的结合抑制受试者中Gal3-介导的α突触核蛋白的淀粉样蛋白聚集，从而治疗受试者的CAA。
在一些实施方式中，公开了抑制Gal3-介导的胆固醇的淀粉样蛋白聚集的方法。在一些实施方式中，方法包括：使蛋白质与抗Gal3抗体或其结合片段接触，其中抗Gal3抗体或其结合片段与Gal3的结合抑制Gal3-介导的胆固醇的淀粉样蛋白聚集。
在一些实施方式中，公开了治疗有需要的受试者的阿尔茨海默病的方法。在一些实施方式中，方法包括：向受试者施用抗Gal3抗体或其结合片段，其中抗Gal3抗体或其结合片段与受试者中Gal3的结合抑制受试者中Gal3-介导的胆固醇的淀粉样蛋白聚集，从而治疗受试者的阿尔茨海默病。
在一些实施方式中，公开了治疗有需要的受试者的心血管疾病的方法。在一些实施方式中，方法包括：向受试者施用抗Gal3抗体或其结合片段，其中抗Gal3抗体或其结合片段与受试者中Gal3的结合抑制受试者中Gal3-介导的胆固醇的淀粉样蛋白聚集，从而治疗受试者的心血管疾病。
在一些实施方式中，公开了治疗有需要的受试者的动脉粥样硬化疾病的方法。在一些实施方式中，方法包括：向受试者施用抗Gal3抗体或其结合片段，其中抗Gal3抗体或其结合片段与受试者中Gal3的结合抑制受试者中Gal3-介导的胆固醇的淀粉样蛋白聚集，从而治疗受试者的动脉粥样硬化。
在一些实施方式中，公开了抑制Gal3-介导的胆甾醇基的淀粉样蛋白聚集的方法。在一些实施方式中，方法包括：使蛋白质与抗Gal3抗体或其结合片段接触，其中抗Gal3抗体或其结合片段与Gal3的结合抑制Gal3-介导的胆甾醇基的淀粉样蛋白聚集。
在一些实施方式中，公开了治疗有需要的受试者的阿尔茨海默病的方法。在一些实施方式中，方法包括：向受试者施用抗Gal3抗体或其结合片段，其中抗Gal3抗体或其结合片段与受试者中Gal3的结合抑制受试者中Gal3-介导的胆甾醇基的淀粉样蛋白聚集，从而治疗受试者的阿尔茨海默病。
在一些实施方式中，公开了治疗有需要的受试者的心血管疾病的方法。在一些实施方式中，方法包括：向受试者施用抗Gal3抗体或其结合片段，其中抗Gal3抗体或其结合片段与受试者中Gal3的结合抑制受试者中Gal3-介导的胆甾醇基的淀粉样蛋白聚集，从而治疗受试者的心血管疾病。
在一些实施方式中，公开了治疗有需要的受试者的动脉粥样硬化疾病的方法。在一些实施方式中，方法包括：向受试者施用抗Gal3抗体或其结合片段，其中抗Gal3抗体或其结合片段与受试者中Gal3的结合抑制受试者中Gal3-介导的胆甾醇基的淀粉样蛋白聚集，从而治疗受试者的动脉粥样硬化。
在一些实施方式中，公开了抑制Gal3-介导的神经源性丝氨酸蛋白酶抑制剂的淀粉样蛋白聚集的方法。在一些实施方式中，方法包括：使蛋白质与抗Gal3抗体或其结合片段接触，其中抗Gal3抗体或其结合片段与Gal3的结合抑制Gal3-介导的神经源性丝氨酸蛋白酶抑制剂的淀粉样蛋白聚集。
在一些实施方式中，公开了治疗有需要的受试者的神经源性丝氨酸蛋白酶抑制剂包涵体家族性脑病(FENIB)的方法。在一些实施方式中，方法包括：向受试者施用抗Gal3抗体或其结合片段，其中抗Gal3抗体或其结合片段与受试者中Gal3的结合抑制受试者中Gal3-介导的神经源性丝氨酸蛋白酶抑制剂的淀粉样蛋白聚集，从而治疗受试者的神经源性丝氨酸蛋白酶抑制剂包涵体家族性脑病(FENIB)。
在一些实施方式中，公开了抑制Gal3-介导的胰岛素的淀粉样蛋白聚集的方法。在一些实施方式中，方法包括：使蛋白质与抗Gal3抗体或其结合片段接触，其中抗Gal3抗体或其结合片段与Gal3的结合抑制Gal3-介导的胰岛素的淀粉样蛋白聚集。
在一些实施方式中，公开了治疗有需要的受试者的胰岛素源性淀粉样变性的方法。在一些实施方式中，方法包括：向受试者施用抗Gal3抗体或其结合片段，其中抗Gal3抗体或其结合片段与受试者中Gal3的结合抑制受试者中Gal3-介导的胰岛素的淀粉样蛋白聚集，从而治疗受试者的胰岛素源性淀粉样变性。
在一些实施方式中，公开了治疗有需要的受试者的糖尿病的方法。在一些实施方式中，方法包括：向受试者施用抗Gal3抗体或其结合片段，其中抗Gal3抗体或其结合片段与受试者中Gal3的结合抑制受试者中Gal3-介导的胰岛素的淀粉样蛋白聚集，从而治疗受试者的糖尿病。
在一些实施方式中，公开了抑制Gal3-介导的半胱氨酸蛋白酶抑制剂-c的淀粉样蛋白聚集的方法。在一些实施方式中，方法包括：使蛋白质与抗Gal3抗体或其结合片段接触，其中抗Gal3抗体或其结合片段与Gal3的结合抑制Gal3-介导的半胱氨酸蛋白酶抑制剂-c的淀粉样蛋白聚集。
在一些实施方式中，公开了治疗有需要的受试者的阿尔茨海默病的方法。在一些实施方式中，方法包括：向受试者施用抗Gal3抗体或其结合片段，其中抗Gal3抗体或其结合片段与受试者中Gal3的结合抑制受试者中Gal3-介导的半胱氨酸蛋白酶抑制剂-c的淀粉样蛋白聚集，从而治疗受试者的阿尔茨海默病。
在一些实施方式中，公开了治疗有需要的受试者的CAA的方法。在一些实施方式中，方法包括：向受试者施用抗Gal3抗体或其结合片段，其中抗Gal3抗体或其结合片段与受试者中Gal3的结合抑制受试者中Gal3-介导的半胱氨酸蛋白酶抑制剂-c的淀粉样蛋白聚集，从而治疗受试者的CAA。
在一些实施方式中，公开了治疗有需要的受试者的肾脏疾病的方法。在一些实施方式中，方法包括：向受试者施用抗Gal3抗体或其结合片段，其中抗Gal3抗体或其结合片段与受试者中Gal3的结合抑制受试者中Gal3-介导的半胱氨酸蛋白酶抑制剂-c的淀粉样蛋白聚集，从而治疗受试者的肾脏疾病。
在一些实施方式中，公开了抑制Gal3-介导的朊病毒蛋白的淀粉样蛋白聚集的方法。在一些实施方式中，方法包括：使蛋白质与抗Gal3抗体或其结合片段接触，其中抗Gal3抗体或其结合片段与Gal3的结合抑制Gal3-介导的朊病毒蛋白的淀粉样蛋白聚集。
在一些实施方式中，公开了治疗有需要的受试者的朊病毒病的方法。在一些实施方式中，方法包括：向受试者施用抗Gal3抗体或其结合片段，其中抗Gal3抗体或其结合片段与受试者中Gal3的结合抑制受试者中Gal3-介导的朊病毒蛋白的淀粉样蛋白聚集，从而治疗受试者的朊病毒病。
在一些实施方式中，公开了治疗有需要的受试者的传染性海绵状脑病(TSE)的方法。在一些实施方式中，方法包括：向受试者施用抗Gal3抗体或其结合片段，其中抗Gal3抗体或其结合片段与受试者中Gal3的结合抑制受试者中Gal3-介导的朊病毒蛋白的淀粉样蛋白聚集，从而治疗受试者的传染性海绵状脑病(TSE)。
在一些实施方式中，公开了治疗有需要的受试者的家族性克雅氏病(CJD)的方法。在一些实施方式中，方法包括：向受试者施用抗Gal3抗体或其结合片段，其中抗Gal3抗体或其结合片段与受试者中Gal3的结合抑制受试者中Gal3-介导的朊病毒蛋白的淀粉样蛋白聚集，从而治疗受试者的家族性克雅氏病(CJD)。
在一些实施方式中，公开了治疗有需要的受试者的致命性家族性失眠症的方法。在一些实施方式中，方法包括：向受试者施用抗Gal3抗体或其结合片段，其中抗Gal3抗体或其结合片段与受试者中Gal3的结合抑制受试者中Gal3-介导的朊病毒蛋白的淀粉样蛋白聚集，从而治疗受试者的致命性家族性失眠症。
在一些实施方式中，公开了治疗有需要的受试者的格斯特曼-斯特劳斯勒-沙因克病的方法。在一些实施方式中，方法包括：向受试者施用抗Gal3抗体或其结合片段，其中抗Gal3抗体或其结合片段与受试者中Gal3的结合抑制受试者中Gal3-介导的朊病毒蛋白的淀粉样蛋白聚集，从而治疗受试者的格斯特曼-斯特劳斯勒-沙因克病。
在一些实施方式中，公开了抑制Gal3-介导的肌生长抑制素的淀粉样蛋白聚集的方法。在一些实施方式中，方法包括：使蛋白质与抗Gal3抗体或其结合片段接触，其中抗Gal3抗体或其结合片段与Gal3的结合抑制Gal3-介导的肌生长抑制素的淀粉样蛋白聚集。
在一些实施方式中，公开了治疗有需要的受试者的特发性炎性肌病(IIM)的方法。在一些实施方式中，方法包括：向受试者施用抗Gal3抗体或其结合片段，其中抗Gal3抗体或其结合片段与受试者中Gal3的结合抑制受试者中Gal3-介导的肌生长抑制素的淀粉样蛋白聚集，从而治疗受试者的特发性炎性肌病(IIM)。
在一些实施方式中，公开了抑制Gal3-介导的甲状腺素运载蛋白的淀粉样蛋白聚集的方法。在一些实施方式中，方法包括：使蛋白质与抗Gal3抗体或其结合片段接触，其中抗Gal3抗体或其结合片段与Gal3的结合抑制Gal3-介导的甲状腺素运载蛋白的淀粉样蛋白聚集。
在一些实施方式中，公开了治疗有需要的受试者中的甲状腺素运载蛋白淀粉样变性的方法。在一些实施方式中，方法包括：向受试者施用抗Gal3抗体或其结合片段，其中抗Gal3抗体或其结合片段与受试者中Gal3的结合抑制受试者中Gal3-介导的甲状腺素运载蛋白的淀粉样蛋白聚集，从而治疗受试者的甲状腺素运载蛋白淀粉样变性。
在一些实施方式中，公开了治疗有需要的受试者的心脏和/或肾脏疾病的方法。在一些实施方式中，方法包括：向受试者施用抗Gal3抗体或其结合片段，其中抗Gal3抗体或其结合片段与受试者中Gal3的结合抑制受试者中Gal3-介导的甲状腺素运载蛋白的淀粉样蛋白聚集，从而治疗受试者的心脏和/或肾脏疾病。
在一些实施方式中，公开了治疗有需要的受试者的先兆子痫的方法。在一些实施方式中，方法包括：向受试者施用抗Gal3抗体或其结合片段，其中抗Gal3抗体或其结合片段与受试者中Gal3的结合抑制受试者中Gal3-介导的甲状腺素运载蛋白的淀粉样蛋白聚集，从而治疗受试者的先兆子痫。
在一些实施方式中，公开了抑制Gal3-介导的苯丙氨酸的淀粉样蛋白聚集的方法。在一些实施方式中，方法包括：使蛋白质与抗Gal3抗体或其结合片段接触，其中抗Gal3抗体或其结合片段与Gal3的结合抑制Gal3-介导的苯丙氨酸的淀粉样蛋白聚集。
在一些实施方式中，公开了治疗有需要的受试者的苯丙酮尿症的方法。在一些实施方式中，方法包括：向受试者施用抗Gal3抗体或其结合片段，其中抗Gal3抗体或其结合片段与受试者中Gal3的结合抑制受试者中Gal3-介导的苯丙氨酸的淀粉样蛋白聚集，从而治疗受试者的苯丙酮尿症。
在一些实施方式中，公开了抑制Gal3-介导的谷氨酰胺的淀粉样蛋白聚集的方法。在一些实施方式中，方法包括：使蛋白质与抗Gal3抗体或其结合片段接触，其中抗Gal3抗体或其结合片段与Gal3的结合抑制Gal3-介导的谷氨酰胺的淀粉样蛋白聚集。
在一些实施方式中，公开了治疗有需要的受试者的亨廷顿病的方法。在一些实施方式中，方法包括：向受试者施用抗Gal3抗体或其结合片段，其中抗Gal3抗体或其结合片段与受试者中Gal3的结合抑制受试者中Gal3-介导的谷氨酰胺的淀粉样蛋白聚集，从而治疗受试者的亨廷顿病。
在一些实施方式中，公开了抑制Gal3-介导的神经丝轻链(NFL)的淀粉样蛋白聚集的方法。在一些实施方式中，方法包括：使蛋白质与抗Gal3抗体或其结合片段接触，其中抗Gal3抗体或其结合片段与Gal3的结合抑制Gal3-介导的NFL的淀粉样蛋白聚集。
在一些实施方式中，公开了治疗有需要的受试者的运动神经元变性的方法。在一些实施方式中，方法包括：向受试者施用抗Gal3抗体或其结合片段，其中抗Gal3抗体或其结合片段与受试者中Gal3的结合抑制受试者中Gal3-介导的NFL的淀粉样蛋白聚集，从而治疗受试者的运动神经元变性。
在一些实施方式中，公开了抑制Gal3-介导的纤维蛋白的淀粉样蛋白聚集的方法。在一些实施方式中，方法包括：使蛋白质与抗Gal3抗体或其结合片段接触，其中抗Gal3抗体或其结合片段与Gal3的结合抑制Gal3-介导的纤维蛋白的淀粉样蛋白聚集。
在一些实施方式中，公开了治疗有需要的受试者的脑血管损伤的方法。在一些实施方式中，方法包括：向受试者施用抗Gal3抗体或其结合片段，其中抗Gal3抗体或其结合片段与受试者中Gal3的结合抑制受试者中Gal3-介导的纤维蛋白的淀粉样蛋白聚集，从而治疗受试者的脑血管损伤。
在一些实施方式中，公开了治疗有需要的受试者的中风的方法。在一些实施方式中，方法包括：向受试者施用抗Gal3抗体或其结合片段，其中抗Gal3抗体或其结合片段与受试者中Gal3的结合抑制受试者中Gal3-介导的纤维蛋白的淀粉样蛋白聚集，从而治疗受试者的中风。
在一些实施方式中，公开了治疗有需要的受试者的CAA的方法。在一些实施方式中，方法包括：向受试者施用抗Gal3抗体或其结合片段，其中抗Gal3抗体或其结合片段与受试者中Gal3的结合抑制受试者中Gal3-介导的纤维蛋白的淀粉样蛋白聚集，从而治疗受试者的CAA。
在一些实施方式中，公开了治疗有需要的受试者的阿尔茨海默病的方法。在一些实施方式中，方法包括：向受试者施用抗Gal3抗体或其结合片段，其中抗Gal3抗体或其结合片段与受试者中Gal3的结合抑制受试者中Gal3-介导的纤维蛋白的淀粉样蛋白聚集，从而治疗受试者的阿尔茨海默病。
在一些实施方式中，公开了抑制Gal3-介导的溶菌酶的淀粉样蛋白聚集的方法。在一些实施方式中，方法包括：使蛋白质与抗Gal3抗体或其结合片段接触，其中抗Gal3抗体或其结合片段与Gal3的结合抑制Gal3-介导的溶菌酶的淀粉样蛋白聚集。
在一些实施方式中，公开了治疗有需要的受试者的人全身性淀粉样蛋白疾病的方法。在一些实施方式中，方法包括：向受试者施用抗Gal3抗体或其结合片段，其中抗Gal3抗体或其结合片段与受试者中Gal3的结合抑制受试者中Gal3-介导的溶菌酶的淀粉样蛋白聚集，从而治疗受试者的人全身性淀粉样蛋白疾病。
在一些实施方式中，公开了抑制Gal3-介导的补体蛋白C3和/或C9的淀粉样蛋白聚集的方法。在一些实施方式中，方法包括：使蛋白质与抗Gal3抗体或其结合片段接触，其中抗Gal3抗体或其结合片段与Gal3的结合抑制Gal3-介导的补体蛋白C3和/或C9的淀粉样蛋白聚集。
在一些实施方式中，公开了治疗有需要的受试者的先天免疫系统破坏的方法。在一些实施方式中，方法包括：向受试者施用抗Gal3抗体或其结合片段，其中抗Gal3抗体或其结合片段与受试者中Gal3的结合抑制受试者中Gal3-介导的补体蛋白C3和/或C9的淀粉样蛋白聚集，从而治疗受试者的先天免疫系统破坏。
在一些实施方式中，公开了抑制Gal3-介导的晶体蛋白的淀粉样蛋白聚集的方法。在一些实施方式中，方法包括：使蛋白质与抗Gal3抗体或其结合片段接触，其中抗Gal3抗体或其结合片段与Gal3的结合抑制Gal3-介导的晶体蛋白的淀粉样蛋白聚集。
在一些实施方式中，公开了治疗有需要的受试者的晶状体损伤和/或视力模糊的方法。在一些实施方式中，方法包括：向受试者施用抗Gal3抗体或其结合片段，其中抗Gal3抗体或其结合片段与受试者中Gal3的结合抑制受试者中Gal3-介导的晶体蛋白的淀粉样蛋白聚集，从而治疗受试者的晶状体损伤和/或视力模糊。
在一些实施方式中，公开了抑制Gal3-介导的心房钠尿肽(ANP)的淀粉样蛋白聚集的方法。在一些实施方式中，方法包括：使蛋白质与抗Gal3抗体或其结合片段接触，其中抗Gal3抗体或其结合片段与Gal3的结合抑制Gal3-介导的ANP的淀粉样蛋白聚集。
在一些实施方式中，公开了治疗有需要的受试者的充血性心力衰竭(CHF)的方法。在一些实施方式中，方法包括：向受试者施用抗Gal3抗体或其结合片段，其中抗Gal3抗体或其结合片段与受试者中Gal3的结合抑制受试者中Gal3-介导的ANP的淀粉样蛋白聚集，从而治疗受试者的CHF。
在一些实施方式中，公开了治疗有需要的受试者的心脏淀粉样变性的方法。在一些实施方式中，方法包括：向受试者施用抗Gal3抗体或其结合片段，其中抗Gal3抗体或其结合片段与受试者中Gal3的结合抑制受试者中Gal3-介导的ANP的淀粉样蛋白聚集，从而治疗受试者的心脏淀粉样变性。
在一些实施方式中，公开了抑制Gal3-介导的B-型钠尿肽(BNP)的淀粉样蛋白聚集的方法。在一些实施方式中，方法包括：使蛋白质与抗Gal3抗体或其结合片段接触，其中抗Gal3抗体或其结合片段与Gal3的结合抑制Gal3-介导的BNP的淀粉样蛋白聚集。
在一些实施方式中，公开了治疗有需要的受试者的充血性心力衰竭(CHF)的方法。在一些实施方式中，方法包括：向受试者施用抗Gal3抗体或其结合片段，其中抗Gal3抗体或其结合片段与受试者中Gal3的结合抑制受试者中Gal3-介导的BNP的淀粉样蛋白聚集，从而治疗受试者的CHF。
在一些实施方式中，公开了治疗有需要的受试者的心脏淀粉样变性的方法。在一些实施方式中，方法包括：向受试者施用抗Gal3抗体或其结合片段，其中抗Gal3抗体或其结合片段与受试者中Gal3的结合抑制受试者中Gal3-介导的BNP的淀粉样蛋白聚集，从而治疗受试者的心脏淀粉样变性。
在一些实施方式中，公开了抑制Gal3-介导的降钙素的淀粉样蛋白聚集的方法。在一些实施方式中，方法包括：使蛋白质与抗Gal3抗体或其结合片段接触，其中抗Gal3抗体或其结合片段与Gal3的结合抑制Gal3-介导的降钙素的淀粉样蛋白聚集。
在一些实施方式中，公开了治疗有需要的受试者的甲状腺髓样癌(MTC)的方法。在一些实施方式中，方法包括：向受试者施用抗Gal3抗体或其结合片段，其中抗Gal3抗体或其结合片段与受试者中Gal3的结合抑制受试者中Gal3-介导的降钙素的淀粉样蛋白聚集，从而治疗受试者的MTC。
在一些实施方式中，公开了治疗有需要的受试者的骨质疏松症的方法。在一些实施方式中，方法包括：向受试者施用抗Gal3抗体或其结合片段，其中抗Gal3抗体或其结合片段与受试者中Gal3的结合抑制受试者中Gal3-介导的降钙素的淀粉样蛋白聚集，从而治疗受试者的骨质疏松症。
在一些实施方式中，公开了治疗有需要的受试者的佩吉特氏病的方法。在一些实施方式中，方法包括：向受试者施用抗Gal3抗体或其结合片段，其中抗Gal3抗体或其结合片段与受试者中Gal3的结合抑制受试者中Gal3-介导的降钙素的淀粉样蛋白聚集，从而治疗受试者的佩吉特氏病。
在一些实施方式中，公开了抑制Gal3-介导的血清淀粉样蛋白(A)(SAA)的淀粉样蛋白聚集的方法。在一些实施方式中，方法包括：使蛋白质与抗Gal3抗体或其结合片段接触，其中抗Gal3抗体或其结合片段与Gal3的结合抑制Gal3-介导的血清淀粉样蛋白(A)(SAA)的淀粉样蛋白聚集。
在一些实施方式中，公开了治疗有需要的受试者的外周淀粉样变性的方法。在一些实施方式中，方法包括：向受试者施用抗Gal3抗体或其结合片段，其中抗Gal3抗体或其结合片段与受试者中Gal3的结合抑制受试者中Gal3-介导的血清淀粉样蛋白(A)(SAA)的淀粉样蛋白聚集，从而治疗受试者的外周淀粉样变性。
在一些实施方式中，公开了抑制Gal3-介导的胰岛淀粉样多肽(IAPP)的淀粉样蛋白聚集的方法。在一些实施方式中，方法包括：使蛋白质与抗Gal3抗体或其结合片段接触，其中抗Gal3抗体或其结合片段与Gal3的结合抑制Gal3-介导的IAPP的淀粉样蛋白聚集。
在一些实施方式中，公开了治疗有需要的受试者的2型糖尿病的方法。在一些实施方式中，方法包括：向受试者施用抗Gal3抗体或其结合片段，其中抗Gal3抗体或其结合片段与受试者中Gal3的结合抑制受试者中Gal3-介导的IAPP的淀粉样蛋白聚集，从而治疗受试者的2型糖尿病。
在一些实施方式中，公开了抑制Gal3-介导的TAR DNA结合蛋白43(TDP-43)的淀粉样蛋白聚集的方法。在一些实施方式中，方法包括：使蛋白质与抗Gal3抗体或其结合片段接触，其中抗Gal3抗体或其结合片段与Gal3的结合抑制Gal3-介导的TDP-43的淀粉样蛋白聚集。
在一些实施方式中，公开了治疗有需要的受试者的肌萎缩侧索硬化症(ALS)的方法。在一些实施方式中，方法包括：向受试者施用抗Gal3抗体或其结合片段，其中抗Gal3抗体或其结合片段与受试者中Gal3的结合抑制受试者中Gal3-介导的TDP-43的淀粉样蛋白聚集，从而治疗受试者的ALS。
在一些实施方式中，公开了治疗有需要的受试者的额颞叶变性(FTLD)的方法。在一些实施方式中，方法包括：向受试者施用抗Gal3抗体或其结合片段，其中抗Gal3抗体或其结合片段与受试者中Gal3的结合抑制受试者中Gal3-介导的TDP-43的淀粉样蛋白聚集，从而治疗受试者的FTLD。
在一些实施方式中，相对于施用步骤之前的淀粉样蛋白病，在施用步骤之后，淀粉样蛋白病被减少至少5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％或99％、或由任意两个前述百分比定义的范围内的任意百分比。在一些实施方式中，蛋白质包括α-突触核蛋白、tau蛋白、磷酸tau、TAR DNA结合蛋白(TDP-43)、甲状腺素运载蛋白、尿调节素、胰岛淀粉样多肽(IAPP)、血清淀粉样蛋白A(SAA)、p53、载脂蛋白E(APOE)、APOE-4、朊病毒蛋白、纤维蛋白、神经丝轻链(NFL)、CRP、SUMO、轻链、血小板源生长因子受体(PDGFR)、黑色素瘤细胞黏附分子(MCAM)、补体蛋白C3、补体蛋白C9、溶菌酶、胰岛素、天然血红蛋白(Hb)、糖化血红蛋白(HbAIC)、苯丙氨酸(Phe)、谷氨酰胺(Gln)、胆甾醇基(共酯基)、胆固醇、神经源性丝氨酸蛋白酶抑制剂、晶体蛋白AA、晶体蛋白AB、半胱氨酸蛋白酶抑制剂-C、肌生长抑制素前肽、心房钠尿肽(ANP)、B-型钠尿肽(BNP)或其任意组合。在一些实施方式中，tau蛋白是4R tau或磷酸化tau(磷酸tau)。在一些实施方式中，磷酸化tau是磷酸-tau(S396)。在一些实施方式中，当与Gal3接触时，磷酸化tau形成三聚体、四聚体或更高级的寡聚体。在一些实施方式中，淀粉样蛋白病包括家族性克雅氏病(CJD)、阿尔茨海默病、CAA、tau蛋白病、路易体病、多系统萎缩、动脉粥样硬化、心血管疾病、神经源性丝氨酸蛋白酶抑制剂包涵体家族性脑病(FENIB)、胰岛素源性淀粉样变性、糖尿病、2型糖尿病、糖尿病型病症、肾脏疾病、朊病毒病、传染性海绵状脑病(TSE)、人全身性淀粉样蛋白疾病、致命性家族性失眠症、格斯特曼-斯特劳斯勒-沙因克病、特发性炎性肌病(IIM)、甲状腺素运载蛋白淀粉样变性、心脏病、先兆子痫、苯丙酮尿症、亨廷顿病、运动神经元变性、脑血管损伤、中风、先天免疫系统破坏、晶状体损伤、视力模糊、充血性心力衰竭(CHF)、心脏淀粉样变性、甲状腺髓样癌(MTC)、骨质疏松症、佩吉特氏病、外周淀粉样变性、肌萎缩侧索硬化症(ALS)、额颞叶变性(FTLD)、高血糖症、轻链淀粉样变性(AL)、共核蛋白病、帕金森氏病、路易体痴呆症、进行性核上性麻痹、皮质基底节变性、皮克氏病、TDP-43蛋白病、TTR淀粉样变性(ATTR)、尿调节素-相关肾脏疾病、类风湿性关节炎、炎性关节炎、脊柱关节病、幼年特发性关节炎、强直性脊柱炎、银屑病关节炎、炎性肠病、溃疡性结肠炎、克罗恩病、乳糜泻、血管炎、结节病、家族性地中海热、肿瘤坏死因子受体-相关周期性综合征(TRAPS)、癌症、由淀粉样蛋白聚集促进的衰老或其任意组合。
在一些实施方式中，抗Gal3抗体或其结合片段包括(1)重链可变区，其包括VH-CDR1、VH-CDR2和VH-CDR3；以及(2)轻链可变区，其包括VL-CDR1、VL-CDR2和VL-CDR3。在一些实施方式中，VH-CDR1包含与SEQ ID NO：27-70的氨基酸序列中的任一个具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列。在一些实施方式中，VH-CDR2包含与SEQ IDNO：71-111、801、951、952的氨基酸序列中的任一个具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列。在一些实施方式中，VH-CDR3包含与SEQ ID NO：112-169、802、953、954的氨基酸序列中的任一个具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列。在一些实施方式中，VL-CDR1包含与SEQ ID NO：170-220的氨基酸序列中的任一个具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列。在一些实施方式中，VL-CDR2包含与SEQ ID NO：211-247的氨基酸序列中的任一个具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列。在一些实施方式中，VL-CDR3包含与SEQ ID NO：248-296的氨基酸序列中的任一个具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列。在一些实施方式中，抗Gal3抗体或其结合片段包括如图13中阐释的VH-CDR1、VH-CDR2、VH-CDR3、VL-CDR1、VL-CDR2和VL-CDR3的组合。在一些实施方式中，重链可变区包含与选自SEQ ID NO：297-373、803、806-820、955-968、1067-1109、1415-1439的序列具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的序列。在一些实施方式中，轻链可变区包含与选自SEQ ID NO：374-447、821-835、941-943、969-982、1110-1152、1440-1464的序列具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的序列。在一些实施方式中，抗Gal3抗体或其结合片段包括重链，其中所述重链包含与选自SEQ ID NO：448-494、804、836-850、983-996、1153-1195、1411、1465-1489的序列具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的序列。在一些实施方式中，抗Gal3抗体或其结合片段包括轻链，其中所述轻链包含与选自SEQ ID NO：495-538、805、851-865、997-1010、1196-1238、1412、1490-1514的序列具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的序列。在一些实施方式中，抗Gal3抗体或其结合片段选自由下述至少一种组成的组：TB001、TB006、12G5.D7、13A12.2E5、14H10.2C9、15F10.2D6、19B5.2E6、20D11.2C6、20H5.A3、23H9.2E4、2D10.2B2、3B11.2G2、7D8.2D8、mIMT001、4A11.2B5、4A11.H1L1、4A11.H4L2、4G2.2G6、6B3.2D3、6H6.2D6、9H2.2H10、13G4.2F8、13H12.2F8、15G7.2A7、19D9.2E5、23B10.2B12、24D12.2H9、F846C.1B2、F846C.1F5、F846C.1H12、F846C.1H5、F846C.2H3、F846TC.14A2、F846TC.14E4、F846TC.16B5、F846TC.7F10、F847C.10B9、F847C.11B1、F847C.12F12、F847C.26F5、F847C.4B10、F849C.8D10、F849C.8H3、846.2B11、846.4D5、846T.1H2、847.14H4、846.2D4、846.2F11、846T.10B1、846T.2E3、846T.4C9、846T.4E11、846T.4F5、846T.8D1、847.10C9、847.11D6、847.15D12、847.15F9、847.15H11、847.20H7、847.21B11、847.27B9、847.28D1、847.2B8、847.3B3、849.1D2、849.2D7、849.2F12、849.4B2、849.4F12、849.4F2、849.5C2、849.8D12、F847C.21H6、849.5H1、847.23F11、847.16D10、847.13E2-mH0mL1、847.13E2-mH0mL2、847.12C4、847.4D3、2D10-VH0-VL0、2D10-hVH4-HVL1、2D10-hVH4-HVL2、2D10-hVH4-HVL3、2D10-hVH4-HVL4、2D10-hVH3-HVL1、2D10-hVH3-HVL2、2D10-hVH3-HVL3、2D10-hVH3-HVL4、20H5.A3-VH3VL1、20H5.A3-VH3VL3、20H5.A3-VH4VL1、20H5.A3-VH5VL1、20H5.A3-VH5VL3、20H5.A3-VH6VL1、20H5.A3-VH6VL3或其结合片段。在一些实施方式中，抗Gal3抗体或其结合片段选自由下述至少一种组成的组：2D10-VH0-VL0、2D10-hVH4-HVL1、2D10-hVH4-HVL2、2D10-hVH4-HVL3、2D10-hVH4-HVL4、2D10-hVH3-HVL1、2D10-hVH3-HVL2、2D10-hVH3-HVL3、2D10-hVH3-HVL4或其结合片段。在一些实施方式中，抗Gal3抗体或其结合片段选自由下述至少一种组成的组：21H6-H0L0、21H6-H1L1、21H6-H1L2、21H6-H1L3、21H6-H1L4、21H6-H2L1、21H6-H2L2、21H6-H2L3、21H6-H2L4、21H6-H3L1、21H6-H3L2、21H6-H3L3、21H6-H3L4、21H6-H4L1、21H6-H4L2、21H6-H4L3、21H6-H4L4、21H6-H5L1、21H6-H5L2、21H6-H5L3、21H6-H5L4、21H6-H6L1、21H6-H6L2、21H6-H6L3、21H6-H6L4或其结合片段。在一些实施方式中，竞争结合至任何一种或多种前述抗体(任选地，以如本实施例(例如实施例54)中定义的至少80％竞争)的任何抗体(人的、人源化的或非人的)也可在方法中使用。在一些实施方式中，抗体结合至任何一种或多种前述抗体的相同或重叠表位。
当应用于本文公开的任意使用方法时，在一些实施方式中，抗Gal3抗体或其结合片段结合至SEQ ID NO：3-26中的一个或多个肽。在一些实施方式中，抗Gal3抗体或其结合片段结合至存在于由肽1(ADNFSLHDALSGSGNPNPQG；SEQ ID NO：3)、肽4(GAGGYPGASYPGAYPGQAPP；SEQ ID NO：6)、肽6(GAYPGQAPPGAYPGAPGAYP；SEQ ID NO：8)、肽7(AYPGAPGAYPGAPAPGVYPG；SEQ ID NO：9)或其组合定义的Gal3的区域内的表位。在一些实施方式中，涉及抗Gal3抗体或结合片段的本文公开的任何方法可以用结合至Gal3的抗原结合分子进行。在一些实施方式中，竞争结合至任何一种或多种前述抗体(任选地，以如本实施例(例如实施例54)中定义的至少80％竞争)的任何抗体(人的、人源化的或非人的)也可在方法中使用。在一些实施方式中，抗体结合至任何一种或多种前述抗体的相同或重叠表位
当应用于本文公开的任意使用方法时，在一些实施方式中，抗Gal3抗体或其结合片段结合至包括GxYPG基序的Gal3的表位，其中x是氨基酸丙氨酸(A)、甘氨酸(G)或缬氨酸(V)。在一些实施方式中，本文所述的抗Gal3抗体结合至Gal3的表位，其包括由三个氨基酸分开的两个GxYPG基序，其中x是A、G或V。在一些实施方式中，涉及抗Gal3抗体或结合片段的本文公开的任何方法可以用结合至Gal3的抗原结合分子进行。
当应用于本文公开的任意使用方法时，在一些实施方式中，抗Gal3抗体或其结合片段包括(1)重链可变区，其包括VH-CDR1、VH-CDR2和VH-CDR3；以及(2)轻链可变区，其包括VL-CDR1、VL-CDR2和VL-CDR3。在一些实施方式中，VH-CDR1包含与根据SEQ ID NO：27-70的任意氨基酸序列具有至少60％、至少70％、至少80％、至少90％或100％序列同一性的氨基酸序列。在一些实施方式中，VH-CDR2包含与根据SEQ ID NO：71-111、801、951、952的任意氨基酸序列具有至少60％、至少70％、至少80％、至少90％或100％序列同一性的氨基酸序列。在一些实施方式中，VH-CDR3包含与根据SEQ ID NO：112-169、802、953、954的任意氨基酸序列具有至少60％、至少70％、至少80％、至少90％或100％序列同一性的氨基酸序列。在一些实施方式中，VL-CDR1包含与根据SEQ ID NO：170-220的任意氨基酸序列具有至少60％、至少70％、至少80％、至少90％或100％序列同一性的氨基酸序列。在一些实施方式中，VL-CDR2包含与根据SEQ ID NO：211-247的任意氨基酸序列具有至少60％、至少70％、至少80％、至少90％或100％序列同一性的氨基酸序列。在一些实施方式中，VL-CDR3包含与根据SEQ IDNO：248-296的任意氨基酸序列具有至少60％、至少70％、至少80％、至少90％或100％序列同一性的氨基酸序列。在一些实施方式中，涉及抗Gal3抗体或结合片段的本文公开的任何方法可以用结合至Gal3的抗原结合分子进行。在一些实施方式中，竞争结合至任何一种或多种前述抗体(任选地，以如本实施例(例如实施例54)中定义的至少80％竞争)的任何抗体(人的、人源化的或非人的)也可在方法中使用。在一些实施方式中，抗体结合至任何一种或多种前述抗体的相同或重叠表位。
当应用于本文公开的任意使用方法时，在一些实施方式中，示例性VH-CDR1序列描绘在图9A中。在一些实施方式中，示例性VH-CDR2序列描绘在图9B中。在一些实施方式中，示例性VH-CDR3序列描绘在图9C中。在一些实施方式中，示例性VL-CDR1序列描绘在图10A中。在一些实施方式中，示例性VL-CDR2序列描绘在图10B中。在一些实施方式中，示例性VL-CDR3序列描绘在图10C中。
当应用于本文公开的任意使用方法时，在一些实施方式中，本文公开的任一抗Gal3抗体或其结合片段的重链可变区包含与根据SEQ ID NO：297-373、803、806-820、955-968、1067-1109、1415-1439的任意序列具有至少75％、80％、85％、90％、95％或100％序列同一性的氨基酸序列。在一些实施方式中，本文公开的任一抗Gal3抗体或其结合片段的重链可变区选自由下述至少一种组成的组：SEQ ID NO：297-373、803、806-820、955-968、1067-1109、1415-1439。在一些实施方式中，示例性VH描绘在图11中。在一些实施方式中，涉及抗Gal3抗体或结合片段的本文公开的任何方法可以用结合至Gal3的抗原结合分子进行。在一些实施方式中，竞争结合至任何一种或多种前述抗体(任选地，以如本实施例(例如实施例54)中定义的至少80％竞争)的任何抗体(人的、人源化的或非人的)也可在方法中使用。在一些实施方式中，抗体结合至任何一种或多种前述抗体的相同或重叠表位。
当应用于本文公开的任意使用方法时，在一些实施方式中，本文公开的任一抗Gal3抗体或其结合片段的轻链可变区包含与根据SEQ ID NO：374-447、821-835、941-943、969-982、1110-1152、1440-1464的任意序列具有至少75％、80％、85％、90％、95％或100％序列同一性的氨基酸序列。在一些实施方式中，本文公开的任一抗Gal3抗体或其结合片段的轻链可变区选自由下述至少一种组成的组：SEQ ID NO：374-447、821-835、941-943、969-982、1110-1152、1440-1464。在一些实施方式中，示例性VL描绘在图12中。在一些实施方式中，本文公开的任何方法涉及抗Gal3抗体或其结合片段。在一些实施方式中，竞争结合至任何一种或多种前述抗体(任选地，以如本实施例(例如实施例54)中定义的至少80％竞争)的任何抗体(人的、人源化的或非人的)也可在方法中使用。在一些实施方式中，抗体结合至任何一种或多种前述抗体或其结合片段的相同或重叠表位，可以用结合至Gal3的抗原结合分子进行。
当应用于本文公开的任意使用方法时，在一些实施方式中，抗Gal3抗体或其结合片段包括SEQ ID NO：448-494、804、836-850、983-996、1153-1195、1411、1465-1489中的任意一个的重链序列。在一些实施方式中，抗Gal3抗体或其结合片段包括SEQ ID NO：495-538、805、851-865、997-1010、1196-1238、1412、1490-1514中的任意一个的轻链序列。在一些实施方式中，竞争结合至任何一种或多种前述抗体(任选地，以如本实施例(例如实施例54)中定义的至少80％竞争)的任何抗体(人的、人源化的或非人的)也可在方法中使用。在一些实施方式中，抗体结合至任何一种或多种前述抗体的相同或重叠表位。
当应用于本文公开的任意使用方法时，在一些实施方式中，抗Gal3抗体或其结合片段选自由下述至少一种组成的组：TB001、TB006、12G5.D7、13A12.2E5、14H10.2C9、15F10.2D6、19B5.2E6、20D11.2C6、20H5.A3、23H9.2E4、2D10.2B2、3B11.2G2、7D8.2D8、mIMT001、4A11.2B5、4A11.H1L1、4A11.H4L2、4G2.2G6、6B3.2D3、6H6.2D6、9H2.2H10、13G4.2F8、13H12.2F8、15G7.2A7、19D9.2E5、23B10.2B12、24D12.2H9、F846C.1B2、F846C.1F5、F846C.1H12、F846C.1H5、F846C.2H3、F846TC.14A2、F846TC.14E4、F846TC.16B5、F846TC.7F10、F847C.10B9、F847C.11B1、F847C.12F12、F847C.26F5、F847C.4B10、F849C.8D10、F849C.8H3、846.2B11、846.4D5、846T.1H2、847.14H4、846.2D4、846.2F11、846T.10B1、846T.2E3、846T.4C9、846T.4E11、846T.4F5、846T.8D1、847.10C9、847.11D6、847.15D12、847.15F9、847.15H11、847.20H7、847.21B11、847.27B9、847.28D1、847.2B8、847.3B3、849.1D2、849.2D7、849.2F12、849.4B2、849.4F12、849.4F2、849.5C2、849.8D12、F847C.21H6、849.5H1、847.23F11、847.16D10、847.13E2-mH0mL1、847.13E2-mH0mL2、847.12C4、847.4D3、2D10-VH0-VL0、2D10-hVH4-HVL1、2D10-hVH4-HVL2、2D10-hVH4-HVL3、2D10-hVH4-HVL4、2D10-hVH3-HVL1、2D10-hVH3-HVL2、2D10-hVH3-HVL3、2D10-hVH3-HVL4、20H5.A3-VH3VL1、20H5.A3-VH3VL3、20H5.A3-VH4VL1、20H5.A3-VH5VL1、20H5.A3-VH5VL3、20H5.A3-VH6VL1、20H5.A3-VH6VL3或其结合片段。在一些实施方式中，抗Gal3抗体或其结合片段选自由下述至少一种组成的组：2D10-VH0-VL0、2D10-hVH4-HVL1、2D10-hVH4-HVL2、2D10-hVH4-HVL3、2D10-hVH4-HVL4、2D10-hVH3-HVL1、2D10-hVH3-HVL2、2D10-hVH3-HVL3、2D10-hVH3-HVL4或其结合片段。在一些实施方式中，抗Gal3抗体或其结合片段选自由下述至少一种组成的组：21H6-H0L0、21H6-H1L1、21H6-H1L2、21H6-H1L3、21H6-H1L4、21H6-H2L1、21H6-H2L2、21H6-H2L3、21H6-H2L4、21H6-H3L1、21H6-H3L2、21H6-H3L3、21H6-H3L4、21H6-H4L1、21H6-H4L2、21H6-H4L3、21H6-H4L4、21H6-H5L1、21H6-H5L2、21H6-H5L3、21H6-H5L4、21H6-H6L1、21H6-H6L2、21H6-H6L3、21H6-H6L4或其结合片段。在一些实施方式中，竞争结合至任何一种或多种前述抗体(任选地，以如本实施例(例如实施例54)中定义的至少80％竞争)的任何抗体(人的、人源化的或非人的)也可在方法中使用。在一些实施方式中，抗体结合至任何一种或多种前述抗体的相同或重叠表位。
当应用于本文公开的任意使用方法时，在一些实施方式中，抗Gal3抗体或其结合片段包括载荷。在一些实施方式中，载荷缀合至抗Gal3抗体或其结合片段。在一些实施方式中，载荷是细胞毒素载荷、微管破坏剂、DNA修饰剂、Akt抑制剂、聚合酶抑制剂、可检测部分、免疫调节剂、免疫调制剂、免疫毒素、核酸聚合物、适配体、肽或其任意组合。在一些实施方式中，载荷是可检测部分。在一些实施方式中，本文公开的涉及抗Gal3抗体或结合片段的任意方法可以用结合至Gal3的抗原结合分子来进行。
当应用于本文公开的任意使用方法时，在一些实施方式中，抗Gal3抗体或其结合片段是或包括人源化抗体。在一些实施方式中，抗Gal3抗体或其结合片段是或包括全长抗体或其结合片段。在一些实施方式中，抗Gal3抗体或其结合片段是或包括双特异性抗体或其结合片段。在一些实施方式中，抗Gal3抗体或其结合片段是或包括单价Fab’、二价Fab2、单链可变片段(scFv)、双抗体、微抗体、纳米抗体、单域抗体(sdAb)或骆驼抗体或其结合片段。在一些实施方式中，抗Gal3抗体或其结合片段是或包括IgG框架。在一些实施方式中，抗Gal3抗体或其结合片段是或包括IgG1、IgG2或IgG4框架。在一些实施方式中，本文公开的涉及抗Gal3抗体或结合片段的任意方法可以用结合至Gal3的抗原结合分子来进行。
当应用于本文公开的任意治疗方法时，在一些实施方式中，抗Gal3抗体或其结合片段经肠、口服、鼻内、肠胃外、颅内、皮下、肌内、皮内、或静脉内或其任意组合施用。
当应用于本文公开的任意治疗方法时，在一些实施方式中，抗Gal3抗体或其结合片段被配制用于全身施用。在一些实施方式中，抗Gal3抗体或其结合片段被配制用于肠胃外施用。在一些实施方式中，施用多于一种抗Gal3抗体或结合片段。在一些实施方式中，当施用多于一种抗Gal3抗体或结合片段时，多于一种抗Gal3抗体或其结合片段可选自本文公开的抗Gal3抗体或其结合片段。在一些实施方式中，本文公开的涉及抗Gal3抗体或结合片段的任意方法可以用结合至Gal3的抗原结合分子来进行。
当应用于本文公开的任意使用或治疗方法时，受试者是哺乳动物。在一些实施方式中，哺乳动物是人类、猫、狗、小鼠、大鼠、仓鼠、啮齿动物、猪、牛、马、绵羊或山羊。在一些实施方式中，哺乳动物是人。
示例性抗Gal3抗体及其结合片段
本文公开并且适用于本文公开的任意方法或用途的是抗Gal3抗体或其结合片段。在一些实施方式中，抗Gal3抗体或其结合片段结合至Gal3的N-末端结构域、Gal3的N-末端或Gal3的串联重复结构域(TRD)。在一些实施方式中，抗Gal3抗体或其结合片段不结合至Gal3的N-末端、Gal3的N-末端结构域或Gal3的TRD。在一些实施方式中，抗Gal3抗体或其结合片段结合至Gal3的C-末端、Gal3的C-末端结构域或Gal3的CRD。在一些实施方式中，抗Gal3抗体或其结合片段不结合至Gal3的C-末端、Gal3的C-末端结构域或Gal3的CRD。在一些实施方式中，本文提供的任意抗Gal3抗体或其结合片段或任意抗Gal3抗体或结合片段的任意排列可以用结合至Gal3的抗原结合分子取代。
在一些实施方式中，提供了抗体或其结合片段。在一些实施方式中，抗体是抗Gal3抗体或其结合片段。在一些实施方式中，抗Gal3抗体或其结合片段包括重链可变区，其包括VH-CDR1、VH-CDR2和VH-CDR3。在一些实施方式中，抗Gal3抗体或其结合片段包括轻链可变区，其包括VL-CDR1、VL-CDR2和VL-CDR3。在一些实施方式中，VH-CDR1包括与根据SEQ ID NO：27-70的任意氨基酸序列具有至少60％、61％、62％、63％、64％、65％、66％、67％、68％、69％、70％、71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列性同一性的氨基酸序列。在一些实施方式中，VH-CDR2包括与根据SEQ IDNO：71-111、801、951、952的任意氨基酸序列具有至少60％、61％、62％、63％、64％、65％、66％、67％、68％、69％、70％、71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列性同一性的氨基酸序列。在一些实施方式中，VH-CDR3包括与根据SEQ ID NO：112-169、802、953、954的任意氨基酸序列具有至少60％、61％、62％、63％、64％、65％、66％、67％、68％、69％、70％、71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列性同一性的氨基酸序列。在一些实施方式中，VL-CDR1包括与根据SEQ ID NO：170-220的任意氨基酸序列具有至少60％、61％、62％、63％、64％、65％、66％、67％、68％、69％、70％、71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列性同一性的氨基酸序列。在一些实施方式中，VL-CDR2包括与根据SEQ ID NO：211-247的任意氨基酸序列具有至少60％、61％、62％、63％、64％、65％、66％、67％、68％、69％、70％、71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列性同一性的氨基酸序列。在一些实施方式中，VL-CDR3包括与根据SEQ ID NO：248-296的任意氨基酸序列具有至少60％、61％、62％、63％、64％、65％、66％、67％、68％、69％、70％、71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列性同一性的氨基酸序列。在一些实施方式中，抗体包括与来自如图18所示的重链和轻链序列的VL序列、VH序列、VL/VH对、和/或VH-CDR1、VH-CDR2、VH-CDR3、VL-CDR1、VL-CDR2、VL-CDR3(包含这些CDR中的任一个或多个的1、2、3、4、5个氨基酸取代)组具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的一个或多个序列。在一些实施方式中，竞争结合至任何一种或多种前述抗体(任选地，以如本实施例(例如实施例54)中定义的至少80％竞争)的任何抗体(人的、人源化的或非人的)也可在方法中使用。在一些实施方式中，抗体结合至任何一种或多种前述抗体的相同或重叠表位。
在一些实施方式中，提供了抗体或其结合片段。在一些实施方式中，抗体是抗Gal3抗体或其结合片段。在一些实施方式中，抗Gal3抗体或其结合片段包括重链可变区，其包括VH-CDR1、VH-CDR2和VH-CDR3。在一些实施方式中，抗Gal3抗体或其结合片段包括轻链可变区，其包括VL-CDR1、VL-CDR2和VL-CDR3。在一些实施方式中，VH-CDR1包括与根据SEQ ID NO：27-70的任意氨基酸序列具有至少60％、61％、62％、63％、64％、65％、66％、67％、68％、69％、70％、71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列相似性的氨基酸序列。在一些实施方式中，VH-CDR2包括与根据SEQ IDNO：71-111、801、951、952的任意氨基酸序列具有至少60％、61％、62％、63％、64％、65％、66％、67％、68％、69％、70％、71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列相似性的氨基酸序列。在一些实施方式中，VH-CDR3包括与根据SEQ ID NO：112-169、802、953、954的任意氨基酸序列具有至少60％、61％、62％、63％、64％、65％、66％、67％、68％、69％、70％、71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列相似性的氨基酸序列。在一些实施方式中，VL-CDR1包括与根据SEQ ID NO：170-220的任意氨基酸序列具有至少60％、61％、62％、63％、64％、65％、66％、67％、68％、69％、70％、71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列相似性的氨基酸序列。在一些实施方式中，VL-CDR2包括与根据SEQ ID NO：211-247的任意氨基酸序列具有至少60％、61％、62％、63％、64％、65％、66％、67％、68％、69％、70％、71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列相似性的氨基酸序列。在一些实施方式中，VL-CDR3包括与根据SEQ ID NO：248-296的任意氨基酸序列具有至少60％、61％、62％、63％、64％、65％、66％、67％、68％、69％、70％、71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列相似性的氨基酸序列。在一些实施方式中，抗体包括与来自如图18中描绘的重链和轻链序列的VL序列、VH序列、VL/VH对、和/或VH-CDR1、VH-CDR2、VH-CDR3、VL-CDR1、VL-CDR2、VL-CDR3(包含这些CDR中的任一个或多个的1、2、3、4、5个氨基酸取代)组具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相似性的一个或多个序列。在一些实施方式中，竞争结合至任何一种或多种前述抗体(任选地，以如本实施例(例如实施例54)中定义的至少80％竞争)的任何抗体(人的、人源化的或非人的)也可在方法中使用。在一些实施方式中，抗体结合至任何一种或多种前述抗体的相同或重叠表位。
在一些实施方式中，提供了抗体或其结合片段。在一些实施方式中，抗体或其结合片段是抗Gal3抗体或其结合片段。在一些实施方式中，抗Gal3抗体或其结合片段包括重链可变区，其包括VH-CDR1、VH-CDR2和VH-CDR3。在一些实施方式中，抗Gal3抗体或其结合片段包括轻链可变区，其包括VL-CDR1、VL-CDR2和VL-CDR3。在一些实施方式中，VH-CDR1包括相对于根据SEQ ID NO：27-70的任意氨基酸序列具有至少0、1、2、3、4、5或6个取代的氨基酸序列。在一些实施方式中，VH-CDR2包括相对于根据SEQ ID NO：71-111、801、951、952的任意氨基酸序列具有至少0、1、2、3、4、5或6个取代的氨基酸序列。在一些实施方式中，VH-CDR3包括相对于根据SEQ ID NO：112-169、802、953、954的任意氨基酸序列具有至少0、1、2、3、4、5或6个取代的氨基酸序列。在一些实施方式中，VL-CDR1包括相对于根据SEQ ID NO：170-220的任意氨基酸序列具有至少0、1、2、3、4、5或6个取代的氨基酸序列。在一些实施方式中，VL-CDR2包括相对于根据SEQ ID NO：211-247的任意氨基酸序列具有至少0、1、2、3、4、5或6个取代的氨基酸序列。在一些实施方式中，VL-CDR3包括相对于根据SEQ ID NO：248-296的任意氨基酸序列具有至少0、1、2、3、4、5或6个取代的氨基酸序列。在一些实施方式中，竞争结合至任何一种或多种前述抗体(任选地，以如本实施例(例如实施例54)中定义的至少80％竞争)的任何抗体(人的、人源化的或非人的)也可在方法中使用。在一些实施方式中，抗体结合至任何一种或多种前述抗体的相同或重叠表位。
在一些实施方式中，抗体或其结合片段包括如图16中阐释的VL-CDR1、VL-CDR2、VL-CDR3、VH-CDR1、VH-CDR2和VH-CDR3的组合。
在一些实施方式中，抗体或其结合片段包括VH-CDR1、VH-CDR2、VH-CDR3、VL-CDR1、VL-CDR2和VL-CDR3的组合，其中这些CDR中的一个或多个由共有序列定义。本文提供的共有序列源自图25A-B中所示的CDR的比对。然而，设想可以进行替代性比对(例如，使用全局或局部比对，或使用不同的算法，诸如Hidden Markov模型、种子引导树(seeded guidetrees)、Needleman-Wunsch算法或Smith-Waterman算法)，并且因此，可推导出替代性共有序列。
在一些实施方式中，VH-CDR1由式X1X2X3X4X5X6X7X8X9X10定义，其中X1是E、G或R；X2是F、N或Y；X3是A、I、K、N、S或T；X4是F、I或L；X5是I、K、N、R、S或T；X6是D、G、I、N、S或T；X7是F、G、H、S或Y；X8是无氨基酸、A、D、G、I、M、N、T、V、W或Y；X9是无氨基酸、M或Y；X10是无氨基酸或G；在一些实施方式中，VH-CDR1包括与该共有序列具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的序列。在一些实施方式中，VH-CDR1包括具有来自该共有序列的0、1、2、3、4、5或6个取代的序列。
在一些实施方式中，VH-CDR2由式X1X2X3X4X5X6X7X8X9X10定义，其中X1是无氨基酸、I或L；X2是无氨基酸或R；X3是无氨基酸、F、I、L或V；X4是A、D、F、H、K、L、N、S、W或Y；X5是A、D、P、S、T、W或Y；X6是D、E、G、H、K、N、S、V或Y；X7是D、E、G、N、S或T；X8是D、G、I、K、N、Q、R、S、V或Y；X9是A、D、E、G、I、K、N、P、S、T、V或Y；X10是无氨基酸、I、P、S或T。在一些实施方式中，VH-CDR2包括与该共有序列具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的序列。在一些实施方式中，VH-CDR2包括具有来自该共有序列的0、1、2、3、4、5或6个取代的序列。
在一些实施方式中，VH-CDR3由式X1X2X3X4X5X6X7X8X9X10X11X12X13X14X15X16X17X18X19X2 0X21X22X23X24X25定义，其中X1是无氨基酸或A；X2是无氨基酸、A、R或Y；X3是无氨基酸、A、F、H、K、L、R、S或V；X4是无氨基酸、A、D、K、N、R、S或T；X5是无氨基酸、A、D、G、H、I、L、N、P、R、S、T、V或Y；X6是无氨基酸、A、D、G、H、K、N、P、Q、R、S或Y；X7是无氨基酸、D、F、G、H、P、R、S、W或Y；X8是无氨基酸、A、D、E、G、I、R或S；X9是无氨基酸、A、C、D、E、F、G、I、N、R、S、T、V或Y；X10是无氨基酸、A、D、M、P、R、S、T、V或Y；X11是无氨基酸、A、D、E、F、L、T、V或Y；X12是无氨基酸、A、G、L、M、R或T；X13是无氨基酸、A、D、E、F、G、R、S、T或V；X14是无氨基酸、A、D、G、L、P、Q、R、S、T、V或Y；X15是无氨基酸、A、D、G、N、S、V、W或Y；X16是无氨基酸、A、D、E、F、L、P、T、V、W或Y；X17是无氨基酸、F、I、L、M、R或Y；X18是无氨基酸、A、D、G、N或T；X19是无氨基酸、F、N、S、T、V或Y；X20是无氨基酸或L；X21是无氨基酸或A；X22是无氨基酸或W；X23是无氨基酸或F；X24是无氨基酸或A；X25是无氨基酸或Y。在一些实施方式中，VH-CDR3包括与该共有序列具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的序列。在一些实施方式中，VH-CDR3包括具有来自该共有序列的0、1、2、3、4、5或6个取代的序列。
在一些实施方式中，VL-CDR1由式X1X2X3X4X5X6X7X8X9X10X11X12X13X14X15X16X17定义，其中X1是无氨基酸或R；X2是无氨基酸或S；X3是无氨基酸、S或T；X4是无氨基酸、E、G、K、Q或R；X5是无氨基酸、A、D、G、I、N或S；X6是无氨基酸、I、L或V；X7是无氨基酸、F、L、S或V；X8是无氨基酸、D、E、H、N、S、T或Y；X9是无氨基酸、D、E、I、K、N、R、S、T或V；X10是无氨基酸、D、H、N、R、S或Y；X11是无氨基酸、A、G、N、S、T或V；X12是无氨基酸、A、I、K、N、Q、T、V或Y；X13是无氨基酸、D、G、H、K、N、S、T或Y；X14是无氨基酸、C、F、I、N、S、T、V或Y；X15是无氨基酸、D、L、N、W或Y；X16是无氨基酸、N或D；X17是无氨基酸或D。在一些实施方式中，VL-CDR1包括与该共有序列具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的序列。在一些实施方式中，VL-CDR1包括具有来自该共有序列的0、1、2、3、4、5或6个取代的序列。
在一些实施方式中，VL-CDR2由式X1X2X3X4X5X6X7X8定义，其中X1是无氨基酸、K、L、N、Q或R；X2是无氨基酸、A、L、M或V；X3是无氨基酸、C、K或S；X4是无氨基酸或T；X5是无氨基酸、A、E、F、G、H、K、Q、R、S、W或Y；X6是无氨基酸、A、G或T；X7是无氨基酸、I、K、N、S或T；X8是无氨基酸、N或S。在一些实施方式中，VL-CDR2包括与该共有序列具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的序列。在一些实施方式中，VL-CDR2包括具有来自该共有序列的0、1、2、3、4、5或6个取代的序列。
在一些实施方式中，VL-CDR3由式X1X2X3X4X5X6X7X8X9X10定义，其中X1是无氨基酸、A、E、F、H、L、M、Q、S、V或W；X2是A、H或Q；X3是D、F、G、H、L、M、N、Q、S、T、W或Y；X4是无氨基酸或W；X5是A、D、I、K、L、N、Q、R、S、T、V或Y；X6是D、E、H、I、K、L、N、Q、S或T；X7是D、F、K、L、N、P、S、T、V、W或Y；X8是H、P或S；X9是F、L、P、Q、R、T、W或Y；X10是无氨基酸、T或V。在一些实施方式中，VL-CDR3包括与该共有序列具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的序列。在一些实施方式中，VL-CDR3包括具有来自该共有序列的0、1、2、3、4、5或6个取代的序列。
在一些实施方式中，抗Gal3抗体或其结合片段的重链可变区包括与选自SEQ IDNO：297-373、803、806-820、955-968、1067-1109、1415-1439的序列具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的序列。在一些实施方式中，抗体或其结合片段的轻链可变区包括与选自SEQ ID NO：374-447、821-835、941-943、969-982、1110-1152、1440-1464的序列具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的序列。在一些实施方式中，抗体或其结合片段是抗Gal3抗体或其结合片段。
在一些实施方式中，抗Gal3抗体或其结合片段的重链可变区包括与选自SEQ IDNO：297-373、803、806-820、955-968、1067-1109、1415-1439的序列具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相似性的序列。在一些实施方式中，抗体或其结合片段的轻链可变区包括与选自SEQ ID NO：374-447、821-835、941-943、969-982、1110-1152、1440-1464的序列具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相似性的序列。在一些实施方式中，抗体或其结合片段是抗Gal3抗体或其结合片段。
在一些实施方式中，抗体包括与来自如图18所示的重链和轻链序列的VL序列、VH序列、VL/VH对、和/或VL-CDR1、VL-CDR2、VL-CDR3、VH-CDR1、VH-CDR2、VH-CDR3(包含这些CDR中的任一个或多个的1、2、3、4、5个氨基酸取代)组具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的一个或多个序列。
在一些实施方式中，提供了抗体或其结合片段。在一些实施方式中，抗体是抗Gal3抗体或其结合片段。在一些实施方式中，抗Gal3抗体或其结合片段包括重链可变区，其包括VH-CDR1、VH-CDR2和VH-CDR3。在一些实施方式中，抗Gal3抗体或其结合片段包括轻链可变区，其包括VL-CDR1、VL-CDR2和VL-CDR3。在一些实施方式中，VH-CDR1包括SEQ ID NO：27-70的氨基酸序列之一，VH-CDR2包括SEQ ID NO：71-111、801、951、952的氨基酸序列之一、VH-CDR3包括SEQ ID NO：112-169、802、953、954的氨基酸序列之一，VL-CDR1包括SEQ ID NO：170-220的氨基酸序列之一、VL-CDR2包括SEQ ID NO：211-247的氨基酸序列之一，VL-CDR3包括SEQ ID NO：248-296的氨基酸序列之一，重链可变区具有与SEQ ID NO：374-447、821-835、969-982、1110-1152、1440-1464的氨基酸序列之一具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的序列，以及轻链可变区具有与SEQ ID NO：374-447、821-835、927-929的氨基酸序列之一具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的序列。
在一些实施方式中，抗Gal3抗体或其结合片段包括重链，其中重链包括与选自SEQID NO：448-494、804、836-850、983-996、1153-1195、1465-1489的序列具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的序列。在一些实施方式中，抗体或其结合片段包括轻链，其中轻链包括与选自SEQ ID NO：495-538、805、851-865、997-1010、1196-1238、1490-1514的序列具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的序列。在一些实施方式中，抗体或其结合片段是抗Gal3抗体或其结合片段。
在一些实施方式中，抗Gal3抗体或其结合片段包括重链，其中重链包括与选自SEQID NO：448-494、804、836-850、983-996、1153-1195、1465-1489的序列具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相似性的序列。在一些实施方式中，抗体或其结合片段包括轻链，其中轻链包括与选自SEQ ID NO：495-538、805、851-865、997-1010、1196-1238、1490-1514的序列具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相似性的序列。在一些实施方式中，抗体或其结合片段是抗Gal3抗体或其结合片段。
在一些实施方式中，提供了抗体或其结合片段。在一些实施方式中，抗体是抗Gal3抗体或其结合片段。在一些实施方式中，抗Gal3抗体或其结合片段包括重链可变区和轻链可变区。在一些实施方式中，重链可变区与IgG4重链恒定结构域或IgG2重链恒定结构域配对。在一些实施方式中，IgG4重链恒定结构域或IgG2重链恒定结构域是人或鼠的。在一些实施方式中，IgG4重链恒定结构域包括与SEQ ID NO：931具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的序列。在一些实施方式中，IgG4重链恒定结构域是S228P突变体。在一些实施方式中，IgG2重链恒定结构域包括与SEQ ID NO：933或SEQ ID NO：934具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的序列。在一些实施方式中，IgG2重链恒定结构域是LALAPG或LALA突变体。在一些实施方式中，轻链可变区与IgG4κ链恒定结构域配对。在一些实施方式中，IgG4κ链恒定结构域包括与SEQ ID NO：932具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的序列。示例性重链和轻链恒定结构域可在图20中找到。在一些实施方式中，轻链可变区和/或重链可变区可选自图14和15中所示的那些和/或图20中所示的轻链可变区和重链可变区的组合。在一些实施方式中，轻链可变区和/或重链可变区包括图12A-C、13A-C中所示的一种或多种CDR和/或图16中所示的CDR的组合。在一些实施方式中，竞争结合至任何一种或多种前述抗体(任选地，以如本实施例(例如实施例54)中定义的至少80％竞争)的任何抗体(人的、人源化的或非人的)也可在方法中使用。在一些实施方式中，抗体结合至任何一种或多种前述抗体的相同或重叠表位。
在一些实施方式中，抗体或其结合片段选自由下述至少一种组成的组：TB001、TB006、12G5.D7、13A12.2E5、14H10.2C9、15F10.2D6、19B5.2E6、20D11.2C6、20H5.A3、23H9.2E4、2D10.2B2、3B11.2G2、7D8.2D8、mIMT001、4A11.2B5、4A11.H1L1、4A11.H4L2、4G2.2G6、6B3.2D3、6H6.2D6、9H2.2H10、13G4.2F8、13H12.2F8、15G7.2A7、19D9.2E5、23B10.2B12、24D12.2H9、F846C.1B2、F846C.1F5、F846C.1H12、F846C.1H5、F846C.2H3、F846TC.14A2、F846TC.14E4、F846TC.16B5、F846TC.7F10、F847C.10B9、F847C.11B1、F847C.12F12、F847C.26F5、F847C.4B10、F849C.8D10、F849C.8H3、846.2B11、846.4D5、846T.1H2、847.14H4、846.2D4、846.2F11、846T.10B1、846T.2E3、846T.4C9、846T.4E11、846T.4F5、846T.8D1、847.10C9、847.11D6、847.15D12、847.15F9、847.15H11、847.20H7、847.21B11、847.27B9、847.28D1、847.2B8、847.3B3、849.1D2、849.2D7、849.2F12、849.4B2、849.4F12、849.4F2、849.5C2、849.8D12、F847C.21H6、849.5H1、847.23F11、847.16D10、847.13E2-mH0mL1、847.13E2-mH0mL2、847.12C4、847.4D3、2D10-VH0-VL0、2D10-hVH4-HVL1、2D10-hVH4-HVL2、2D10-hVH4-HVL3、2D10-hVH4-HVL4、2D10-hVH3-HVL1、2D10-hVH3-HVL2、2D10-hVH3-HVL3、2D10-hVH3-HVL4、20H5.A3-VH3VL1、20H5.A3-VH3VL3、20H5.A3-VH4VL1、20H5.A3-VH5VL1、20H5.A3-VH5VL3、20H5.A3-VH6VL1、20H5.A3-VH6VL3或其结合片段。在一些实施方式中，抗Gal3抗体或其结合片段选自由下述至少一种组成的组：2D10-VH0-VL0、2D10-hVH4-HVL1、2D10-hVH4-HVL2、2D10-hVH4-HVL3、2D10-hVH4-HVL4、2D10-hVH3-HVL1、2D10-hVH3-HVL2、2D10-hVH3-HVL3、2D10-hVH3-HVL4或其结合片段。在一些实施方式中，抗Gal3抗体或其结合片段选自由下述至少一种组成的组：21H6-H0L0、21H6-H1L1、21H6-H1L2、21H6-H1L3、21H6-H1L4、21H6-H2L1、21H6-H2L2、21H6-H2L3、21H6-H2L4、21H6-H3L1、21H6-H3L2、21H6-H3L3、21H6-H3L4、21H6-H4L1、21H6-H4L2、21H6-H4L3、21H6-H4L4、21H6-H5L1、21H6-H5L2、21H6-H5L3、21H6-H5L4、21H6-H6L1、21H6-H6L2、21H6-H6L3、21H6-H6L4或其结合片段。在一些实施方式中，竞争结合至任何一种或多种前述抗体(任选地，以如本实施例(例如实施例54)中定义的至少80％竞争)的任何抗体(人的、人源化的或非人的)也可在方法中使用。在一些实施方式中，抗体结合至任何一种或多种前述抗体的相同或重叠表位。
在一些实施方式中，抗体或其结合片段包括与下述的序列具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的序列(例DR、VL、VH、LC、HC)：TB001、TB006、12G5.D7、13A12.2E5、14H10.2C9、15F10.2D6、19B5.2E6、20D11.2C6、20H5.A3、23H9.2E4、2D10.2B2、3B11.2G2、7D8.2D8、mIMT001、4A11.2B5、4A11.H1L1、4A11.H4L2、4G2.2G6、6B3.2D3、6H6.2D6、9H2.2H10、13G4.2F8、13H12.2F8、15G7.2A7、19D9.2E5、23B10.2B12、24D12.2H9、F846C.1B2、F846C.1F5、F846C.1H12、F846C.1H5、F846C.2H3、F846TC.14A2、F846TC.14E4、F846TC.16B5、F846TC.7F10、F847C.10B9、F847C.11B1、F847C.12F12、F847C.26F5、F847C.4B10、F849C.8D10、F849C.8H3、846.2B11、846.4D5、846T.1H2、847.14H4、846.2D4、846.2F11、846T.10B1、846T.2E3、846T.4C9、846T.4E11、846T.4F5、846T.8D1、847.10C9、847.11D6、847.15D12、847.15F9、847.15H11、847.20H7、847.21B11、847.27B9、847.28D1、847.2B8、847.3B3、849.1D2、849.2D7、849.2F12、849.4B2、849.4F12、849.4F2、849.5C2、849.8D12、F847C.21H6、849.5H1、847.23F11、847.16D10、847.13E2-mH0mL1、847.13E2-mH0mL2、847.12C4、847.4D3、2D10-VH0-VL0、2D10-hVH4-HVL1、2D10-hVH4-HVL2、2D10-hVH4-HVL3、2D10-hVH4-HVL4、2D10-hVH3-HVL1、2D10-hVH3-HVL2、2D10-hVH3-HVL3、2D10-hVH3-HVL4、20H5.A3-VH3VL1、20H5.A3-VH3VL3、20H5.A3-VH4VL1、20H5.A3-VH5VL1、20H5.A3-VH5VL3、20H5.A3-VH6VL1、20H5.A3-VH6VL3或其结合片段。在一些实施方式中，抗Gal3抗体或其结合片段选自由下述至少一种组成的组：2D10-VH0-VL0、2D10-hVH4-HVL1、2D10-hVH4-HVL2、2D10-hVH4-HVL3、2D10-hVH4-HVL4、2D10-hVH3-HVL1、2D10-hVH3-HVL2、2D10-hVH3-HVL3、2D10-hVH3-HVL4或其结合片段。在一些实施方式中，抗Gal3抗体或其结合片段选自由下述至少一种组成的组：21H6-H0L0、21H6-H1L1、21H6-H1L2、21H6-H1L3、21H6-H1L4、21H6-H2L1、21H6-H2L2、21H6-H2L3、21H6-H2L4、21H6-H3L1、21H6-H3L2、21H6-H3L3、21H6-H3L4、21H6-H4L1、21H6-H4L2、21H6-H4L3、21H6-H4L4、21H6-H5L1、21H6-H5L2、21H6-H5L3、21H6-H5L4、21H6-H6L1、21H6-H6L2、21H6-H6L3、21H6-H6L4或其结合片段。在一些实施方式中，竞争结合至任何一种或多种前述抗体(任选地，以如本实施例(例如实施例54)中定义的至少80％竞争)的任何抗体(人的、人源化的或非人的)也可在方法中使用。在一些实施方式中，抗体结合至任何一种或多种前述抗体的相同或重叠表位。
在一些实施方式中，抗体或其结合片段包括与下述的序列具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列相似性的序列(例如CDR、VL、VH、LC、HC)：TB001、TB006、12G5.D7、13A12.2E5、14H10.2C9、15F10.2D6、19B5.2E6、20D11.2C6、20H5.A3、23H9.2E4、2D10.2B2、3B11.2G2、7D8.2D8、mIMT001、4A11.2B5、4A11.H1L1、4A11.H4L2、4G2.2G6、6B3.2D3、6H6.2D6、9H2.2H10、13G4.2F8、13H12.2F8、15G7.2A7、19D9.2E5、23B10.2B12、24D12.2H9、F846C.1B2、F846C.1F5、F846C.1H12、F846C.1H5、F846C.2H3、F846TC.14A2、F846TC.14E4、F846TC.16B5、F846TC.7F10、F847C.10B9、F847C.11B1、F847C.12F12、F847C.26F5、F847C.4B10、F849C.8D10、F849C.8H3、846.2B11、846.4D5、846T.1H2、847.14H4、846.2D4、846.2F11、846T.10B1、846T.2E3、846T.4C9、846T.4E11、846T.4F5、846T.8D1、847.10C9、847.11D6、847.15D12、847.15F9、847.15H11、847.20H7、847.21B11、847.27B9、847.28D1、847.2B8、847.3B3、849.1D2、849.2D7、849.2F12、849.4B2、849.4F12、849.4F2、849.5C2、849.8D12、F847C.21H6、849.5H1、847.23F11、847.16D10、847.13E2-mH0mL1、847.13E2-mH0mL2、847.12C4、847.4D3、2D10-VH0-VL0、2D10-hVH4-HVL1、2D10-hVH4-HVL2、2D10-hVH4-HVL3、2D10-hVH4-HVL4、2D10-hVH3-HVL1、2D10-hVH3-HVL2、2D10-hVH3-HVL3、2D10-hVH3-HVL4、20H5.A3-VH3VL1、20H5.A3-VH3VL3、20H5.A3-VH4VL1、20H5.A3-VH5VL1、20H5.A3-VH5VL3、20H5.A3-VH6VL1、20H5.A3-VH6VL3或其结合片段。在一些实施方式中，抗Gal3抗体或其结合片段选自由下述至少一种组成的组：2D10-VH0-VL0、2D10-hVH4-HVL1、2D10-hVH4-HVL2、2D10-hVH4-HVL3、2D10-hVH4-HVL4、2D10-hVH3-HVL1、2D10-hVH3-HVL2、2D10-hVH3-HVL3、2D10-hVH3-HVL4或其结合片段。在一些实施方式中，抗Gal3抗体或其结合片段选自由下述至少一种组成的组：21H6-H0L0、21H6-H1L1、21H6-H1L2、21H6-H1L3、21H6-H1L4、21H6-H2L1、21H6-H2L2、21H6-H2L3、21H6-H2L4、21H6-H3L1、21H6-H3L2、21H6-H3L3、21H6-H3L4、21H6-H4L1、21H6-H4L2、21H6-H4L3、21H6-H4L4、21H6-H5L1、21H6-H5L2、21H6-H5L3、21H6-H5L4、21H6-H6L1、21H6-H6L2、21H6-H6L3、21H6-H6L4或其结合片段。在一些实施方式中，竞争结合至任何一种或多种前述抗体(任选地，以如本实施例(例如实施例54)中定义的至少80％竞争)的任何抗体(人的、人源化的或非人的)也可在方法中使用。在一些实施方式中，抗体结合至任何一种或多种前述抗体的相同或重叠表位。
在一些实施方式中，抗Gal3抗体或其结合片段结合至Gal3蛋白质内的特异性表位。在一些实施方式中，抗Gal3抗体或其结合片段结合至具有根据图10中提供的SEQ IDNO：1-2的氨基酸序列的Gal3蛋白质内的特异性表位。在一些实施方式中，竞争结合至任何一种或多种前述抗体(任选地，以如本申请实施例(例如实施例54)中定义的至少80％竞争)的任何抗体(人的、人源化的或非人的)也可在方法中使用。在一些实施方式中，抗体结合至任何一种或多种前述抗体的相同或重叠表位。
在一些实施方式中，抗Gal3抗体或其结合片段可结合至图11(SEQ ID NO：3-26)中阐释的肽内的至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20个氨基酸残基。在一些实施方式中，竞争结合至任何一种或多种前述抗体(任选地，以如本申请实施例(例如实施例54)中定义的至少80％竞争)的任何抗体(人的、人源化的或非人的)也可在方法中使用。在一些实施方式中，抗体结合至任何一种或多种前述抗体的相同或重叠表位。
在一些实施方式中，抗Gal3抗体或其结合片段可结合至SEQ ID NO：1-2的氨基酸残基1-20内的至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20个氨基酸残基。在一些实施方式中，抗Gal3抗体或其结合片段可结合至SEQ ID NO：1-2的氨基酸残基31-50内的至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20个氨基酸残基。在一些实施方式中，抗Gal3抗体或其结合片段可结合至SEQ ID NO：1-2的氨基酸残基51-70内的至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20个氨基酸残基。在一些实施方式中，抗Gal3抗体或其结合片段可结合至SEQ ID NO：1-2的氨基酸残基61-80内的至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20个氨基酸残基。在一些实施方式中，竞争结合至任何一种或多种前述抗体(任选地，以如本申请实施例(例如实施例54)中定义的至少80％竞争)的任何抗体(人的、人源化的或非人的)也可在方法中使用。在一些实施方式中，抗体结合至任何一种或多种前述抗体的相同或重叠表位。
在一些实施方式中，抗Gal3抗体或其结合片段可结合至肽1(SEQ ID NO：3)、肽4(SEQ ID NO：6)、肽6(SEQ ID NO：8)或肽7(SEQ ID NO：9)内的至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20个氨基酸残基。在一些实施方式中，抗Gal3抗体或其结合片段可结合至肽1(SEQ ID NO：3)内的至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20个氨基酸残基。在一些实施方式中，抗Gal3抗体或其结合片段可结合至肽4(SEQ ID NO：6)内的至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20个氨基酸残基。在一些实施方式中，抗Gal3抗体或其结合片段可结合至肽6(SEQ ID NO：8)内的至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20个氨基酸残基。在一些实施方式中，抗Gal3抗体或其结合片段可结合至肽7(SEQ ID NO：9)内的至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20个氨基酸残基。在一些实施方式中，抗Gal3抗体或其结合片段结合至存在于由肽1(SEQ ID NO：3)定义的Gal的区域内的表位。在一些实施方式中，抗Gal3抗体或其结合片段结合至存在于由肽4(SEQ ID NO：6)定义的Gal的区域内的表位。在一些实施方式中，抗Gal3抗体或其结合片段结合至存在于由肽6(SEQ ID NO：8)定义的Gal的区域内的表位。在一些实施方式中，抗Gal3抗体或其结合片段结合至存在于由肽7(SEQ ID NO：9)定义的Gal的区域内的表位。在一些实施方式中，抗体是结合至肽1、6和/或7中的1、2或所有3个的抗体。在一些实施方式中，竞争结合至任何一种或多种前述抗体(任选地，以如本申请实施例(例如实施例54)中定义的至少80％竞争)的任何抗体(人的、人源化的或非人的)也可在方法中使用。在一些实施方式中，抗体结合至任何一种或多种前述抗体的相同或重叠表位。
在一些实施方式中，本文描述的抗Gal3抗体或其结合片段可结合至Gal3的N-末端结构域或其部分。在一些实施方式中，本文描述的抗Gal3抗体或其结合片段可结合至包括GxYPG基序的Gal3的表位，其中x是氨基酸丙氨酸(A)、甘氨酸(G)或缬氨酸(V)。在一些实施方式中，本文描述的抗Gal3抗体或其结合片段可结合至包括由三个氨基酸分开的两个GxYPG基序的Gal3的表位，其中x是A、G或V。
在一些实施方式中，抗Gal3抗体或其结合片段结合至Gal3。在一些实施方式中，抗Gal3抗体或其结合片段结合至Gal3的N-末端、Gal3的N-末端结构域或Gal3的TRD。在一些实施方式中，抗Gal3抗体或其结合片段不结合至Gal3的N-末端、Gal3的N-末端结构域或Gal3的TRD。在一些实施方式中，抗Gal3抗体或其结合片段结合至Gal3的C-末端、Gal3的C-末端结构域或Gal3的CRD。在一些实施方式中，抗Gal3抗体或其结合片段不结合至Gal3的C-末端、Gal3的C-末端结构域或Gal3的CRD。在一些实施方式中，抗Gal3抗体或其结合片段结合至Gal3同种型1。在一些实施方式中，抗Gal3抗体或其结合片段结合至Gal3同种型1的N-末端、Gal3同种型1的N-末端结构域、Gal3同种型1的氨基酸1-111、Gal3同种型1的TRD、或Gal3同种型1的氨基酸36-109。在一些实施方式中，抗Gal3抗体或其结合片段不结合至Gal3同种型1的N-末端、Gal3同种型1的N-末端结构域、Gal3的氨基酸1-111、Gal3同种型1的TRD、或Gal3同种型1的氨基酸36-109。在一些实施方式中，Gal3抗体或其结合片段结合至Gal3同种型1的C-末端、Gal3同种型1的C-末端结构域、Gal3的氨基酸112-250或Gal3的CRD。在一些实施方式中，抗Gal3抗体或其结合片段不结合至Gal3同种型1的C-末端、Gal3同种型1的C-末端结构域、Gal3同种型1的氨基酸112-250、或Gal3的CRD。在一些实施方式中，抗Gal3抗体或其结合片段结合至Gal3同种型3的N-末端、Gal3同种型3的N-末端结构域、Gal3的氨基酸1-125、Gal3同种型3的TRD，或Gal3同种型3的氨基酸50-123。在一些实施方式中，抗Gal3抗体或其结合片段不结合至Gal3同种型3的N-末端、Gal3同种型3的N-末端结构域、Gal3同种型3的氨基酸1-125、Gal3的TRD、或Gal3同种型3的氨基酸50-123。在一些实施方式中，抗Gal3抗体或其结合片段结合至Gal3同种型3的C-末端、Gal3同种型3的C-末端结构域、Gal3同种型3的氨基酸126-264、或Gal3的CRD。在一些实施方式中，抗Gal3抗体或其结合片段不结合至Gal3同种型3的C-末端、Gal3同种型3的C-末端结构域、Gal3同种型3的氨基酸126-264、或Gal3同种型3的CRD。
在一些实施方式中，Gal3与细胞表面标志物之间的相互作用可被降低至小于80％、小于75％、小于70％、小于60％、小于59％、小于50％、小于40％、小于34％、小于30％、小于20％、小于14％、小于10％、小于7％、小于5％、小于4％或小于1％。
在一些实施方式中，抗Gal3抗体或其结合片段以小于1nM、小于1.2nM、小于2nM、小于5nM、小于10nM、小于13.5nM、小于15nM、小于20nM、小于25nM或小于30nM的解离常数(KD)结合至Gal3。在一些实施方式中，抗Gal3抗体或其结合片段以小于1nM的KD结合至Gal3。在一些实施方式中，抗Gal3抗体或其结合片段以小于1.2nM的KD结合至Gal3。在一些实施方式中，抗Gal3抗体或其结合片段以小于2nM的KD结合至Gal3。在一些实施方式中，抗Gal3抗体或其结合片段以小于5nM的KD结合至Gal3。在一些实施方式中，抗Gal3抗体或其结合片段以小于10nM的KD结合至Gal3。在一些实施方式中，抗Gal3抗体或其结合片段以小于13.5nM的KD结合至Gal3。在一些实施方式中，抗Gal3抗体或其结合片段以小于15nM的KD结合至Gal3。在一些实施方式中，抗Gal3抗体或其结合片段以小于20nM的KD结合至Gal3。在一些实施方式中，抗Gal3抗体或其结合片段以小于25nM的KD结合至Gal3。在一些实施方式中，抗Gal3抗体或其结合片段以小于30nM的KD结合至Gal。
在一些实施方式中，抗Gal3抗体或其结合片段包括图12A中阐释的可变重链互补决定区1(VH-CDR1)序列(SEQ ID NO：27-70)中的任一个。在一些实施方式中，抗Gal3抗体包括与SEQ ID NO：27-70中的任一个具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性的VH-CDR1序列。在一些实施方式中，抗Gal3抗体包括与SEQ ID No：27-70中的任一个具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列相似性的VH-CDR1序列。在一些实施方式中，竞争结合至任何一种或多种前述抗体(任选地，以如本申请实施例(例如实施例54)中定义的至少80％竞争)的任何抗体(人的、人源化的或非人的)也可在方法中使用。在一些实施方式中，抗体结合至任何一种或多种前述抗体的相同或重叠表位。
在一些实施方式中，抗Gal3抗体或其结合片段包括图12B中阐释的可变重链互补决定区2(VH-CDR2)序列(SEQ ID NO：71-111、801、951、952)中的任一个。在一些实施方式中，抗Gal3抗体或其结合片段包括与SEQ ID NO：71-111、801、951、952中的任一个具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性的VH-CDR2序列。在一些实施方式中，抗Gal3抗体或其结合片段包括与SEQ ID NO：71-111、801、951、952中的任一个具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列相似性的VH-CDR2序列。在一些实施方式中，竞争结合至任何一种或多种前述抗体(任选地，以如本申请实施例(例如实施例54)中定义的至少80％竞争)的任何抗体(人的、人源化的或非人的)也可在方法中使用。在一些实施方式中，抗体结合至任何一种或多种前述抗体的相同或重叠表位。
在一些实施方式中，抗Gal3抗体或其结合片段包括图12C中阐释的可变重链互补决定区3(VH-CDR3)序列(SEQ ID NO：112-169、802、953、954)中的任一个。在一些实施方式中，抗Gal3抗体或其结合片段包括与SEQ ID NO：112-169、802、953、954中的任一个具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性的VH-CDR3序列。在一些实施方式中，抗Gal3抗体或其结合片段包括与SEQ ID NO：112-169、802、953、954中的任一个具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列相似性的VH-CDR3序列。在一些实施方式中，竞争结合至任何一种或多种前述抗体(任选地，以如本申请实施例(例如实施例54)中定义的至少80％竞争)的任何抗体(人的、人源化的或非人的)也可在方法中使用。在一些实施方式中，抗体结合至任何一种或多种前述抗体的相同或重叠表位。
在一些实施方式中，抗Gal3抗体或其结合片段包括图13A中阐释的可变轻链互补决定区1(VL-CDR1)序列(SEQ ID NO：170-220)中的任一个。在一些实施方式中，抗Gal3抗体或其结合片段包括与SEQ ID NO：170-220中的任一个具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性的VL-CDR1序列。在一些实施方式中，抗Gal3抗体或其结合片段包括与SEQ IDNO：170-220中的任一个具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列相似性的VL-CDR1序列。在一些实施方式中，竞争结合至任何一种或多种前述抗体(任选地，以如本申请实施例中定义的至少80％竞争)的任何抗体(人的、人源化的或非人的)也可在方法中使用。在一些实施方式中，抗体结合至任何一种或多种前述抗体的相同或重叠表位。
在一些实施方式中，抗Gal3抗体或其结合片段包括图13B中阐释的可变轻链互补决定区2(VL-CDR2)序列(SEQ ID NO：221-247)中的任一个。在一些实施方式中，抗Gal3抗体或其结合片段包括与SEQ ID NO：221-247中的任一个具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性的VL-CDR2序列。在一些实施方式中，抗Gal3抗体或其结合片段包括与SEQ IDNO：221-247中的任一个具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列相似性的VL-CDR2序列。在一些实施方式中，竞争结合至任何一种或多种前述抗体(任选地，以如本申请实施例(例如实施例54)中定义的至少80％竞争)的任何抗体(人的、人源化的或非人的)也可在方法中使用。在一些实施方式中，抗体结合至任何一种或多种前述抗体的相同或重叠表位。
在一些实施方式中，抗Gal3抗体或其结合片段包括图13C中阐释的可变轻链互补决定区3(VL-CDR3)序列(SEQ ID NO：248-296)中的任一个。在一些实施方式中，抗Gal3抗体或其结合片段包括与SEQ ID NO：248-296中的任一个具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性的VL-CDR3序列。在一些实施方式中，抗Gal3抗体或其结合片段包括与SEQ IDNO：248-296中的任一个具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列相似性的VL-CDR3序列。在一些实施方式中，竞争结合至任何一种或多种前述抗体(任选地，以如本申请实施例(例如实施例54)中定义的至少80％竞争)的任何抗体(人的、人源化的或非人的)也可在方法中使用。在一些实施方式中，抗体结合至任何一种或多种前述抗体的相同或重叠表位。
在一些实施方式中，抗Gal3抗体或其结合片段包括重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)。在一些实施方式中，VH可包括选自图12A-C的任一个的VH-CDR1、VH-CDR2和/或VH-CDR3。在一些实施方式中，VL可包括选自图13A-C的任一个的VL-CDR1、VL-CDR2和/或VL-CDR3。在一些实施方式中，抗Gal3抗体或其结合片段包括如图14和15中阐释的VH和VL序列内的CDR。在一些实施方式中，竞争结合至任何一种或多种前述抗体(任选地，以如本申请实施例(例如实施例54)中定义的至少80％竞争)的任何抗体(人的、人源化的或非人的)也可在方法中使用。在一些实施方式中，抗体结合至任何一种或多种前述抗体的相同或重叠表位。
在一些实施方式中，抗Gal3抗体或其结合片段包括选自图14的重链可变区(VH)序列(SEQ ID NO：297-373、803、806-820、955-968、1067-1109、1415-1439)。在一些实施方式中，抗Gal3抗体或其结合片段包括与SEQ ID NO：297-373、803、806-820、955-968、1067-1109、1415-1439中的任一个具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性的VH-序列。在一些实施方式中，抗Gal3抗体或其结合片段包括与SEQ ID NO：297-373、803、806-820、955-968、1067-1109、1415-1439中的任一个具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列相似性VH-序列的。在一些实施方式中，竞争结合至任何一种或多种前述抗体(任选地，以如本申请实施例(例如实施例54)中定义的至少80％竞争)的任何抗体(人的、人源化的或非人的)也可在方法中使用。在一些实施方式中，抗体结合至任何一种或多种前述抗体的相同或重叠表位。
在一些实施方式中，抗Gal3抗体或其结合片段包括选自图12的轻链可变区(VL)序列(SEQ ID NO：374-447、821-835、969-982、1110-1152、1440-1464)。在一些实施方式中，抗Gal3抗体或其结合片段包括与SEQ ID NO：374-447、821-835、969-982、1110-1152、1440-1464中的任一个具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性的VL序列。在一些实施方式中，抗Gal3抗体或其结合片段包括与SEQ ID NO：374-447、821-835、969-982、1110-1152、1440-1464中的任一个具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列相似性的VL序列。在一些实施方式中，竞争结合至任何一种或多种前述抗体(任选地，以如本申请实施例(例如实施例54)中定义的至少80％竞争)的任何抗体(人的、人源化的或非人的)也可在方法中使用。在一些实施方式中，抗体结合至任何一种或多种前述抗体的相同或重叠表位。
在一些实施方式中，抗Gal3抗体或其结合片段包括如图17中阐释的重链可变区和轻链可变区的组合。
在一些实施方式中，抗Gal3抗体或其结合片段包括如图18中阐释的重链和轻链序列(SEQ ID NO：448-538、804-805、836-865)。在一些实施方式中，竞争结合至任何一种或多种前述抗体(任选地，以如本申请实施例(例如实施例54)中定义的至少80％竞争)的任何抗体(人的、人源化的或非人的)也可在方法中使用。在一些实施方式中，抗体结合至任何一种或多种前述抗体的相同或重叠表位。
在一些实施方式中，抗Gal3抗体或其结合片段选自下述至少一种的组：TB001、TB006、12G5.D7、13A12.2E5、14H10.2C9、15F10.2D6、19B5.2E6、20D11.2C6、20H5.A3、23H9.2E4、2D10.2B2、3B11.2G2、7D8.2D8、mIMT001、4A11.2B5、4A11.H1L1、4A11.H4L2、4G2.2G6、6B3.2D3、6H6.2D6、9H2.2H10、13G4.2F8、13H12.2F8、15G7.2A7、19D9.2E5、23B10.2B12、24D12.2H9、F846C.1B2、F846C.1F5、F846C.1H12、F846C.1H5、F846C.2H3、F846TC.14A2、F846TC.14E4、F846TC.16B5、F846TC.7F10、F847C.10B9、F847C.11B1、F847C.12F12、F847C.26F5、F847C.4B10、F849C.8D10、F849C.8H3、846.2B11、846.4D5、846T.1H2、847.14H4、846.2D4、846.2F11、846T.10B1、846T.2E3、846T.4C9、846T.4E11、846T.4F5、846T.8D1、847.10C9、847.11D6、847.15D12、847.15F9、847.15H11、847.20H7、847.21B11、847.27B9、847.28D1、847.2B8、847.3B3、849.1D2、849.2D7、849.2F12、849.4B2、849.4F12、849.4F2、849.5C2、849.8D12、F847C.21H6、849.5H1、847.23F11、847.16D10、847.13E2-mH0mL1、847.13E2-mH0mL2、847.12C4、847.4D3、2D10-VH0-VL0、2D10-hVH4-HVL1、2D10-hVH4-HVL2、2D10-hVH4-HVL3、2D10-hVH4-HVL4、2D10-hVH3-HVL1、2D10-hVH3-HVL2、2D10-hVH3-HVL3、2D10-hVH3-HVL4、20H5.A3-VH3VL1、20H5.A3-VH3VL3、20H5.A3-VH4VL1、20H5.A3-VH5VL1、20H5.A3-VH5VL3、20H5.A3-VH6VL1、20H5.A3-VH6VL3或其结合片段。在一些实施方式中，抗Gal3抗体或其结合片段选自由下述至少一种组成的组：2D10-VH0-VL0、2D10-hVH4-HVL1、2D10-hVH4-HVL2、2D10-hVH4-HVL3、2D10-hVH4-HVL4、2D10-hVH3-HVL1、2D10-hVH3-HVL2、2D10-hVH3-HVL3、2D10-hVH3-HVL4或其结合片段。在一些实施方式中，抗Gal3抗体或其结合片段选自由下述至少一种组成的组：21H6-H0L0、21H6-H1L1、21H6-H1L2、21H6-H1L3、21H6-H1L4、21H6-H2L1、21H6-H2L2、21H6-H2L3、21H6-H2L4、21H6-H3L1、21H6-H3L2、21H6-H3L3、21H6-H3L4、21H6-H4L1、21H6-H4L2、21H6-H4L3、21H6-H4L4、21H6-H5L1、21H6-H5L2、21H6-H5L3、21H6-H5L4、21H6-H6L1、21H6-H6L2、21H6-H6L3、21H6-H6L4或其结合片段。在一些实施方式中，竞争结合至任何一种或多种前述抗体(任选地，以如本申请实施例(例如实施例54)中定义的至少80％竞争)的任何抗体(人的、人源化的或非人的)也可在方法中使用。在一些实施方式中，抗体结合至任何一种或多种前述抗体的相同或重叠表位。
在一些实施方式中，抗Gal3抗体或其结合片段包括图12A-C中描绘的一个或多个重链可变区CDR。在一些实施方式中，抗Gal3抗体或其结合片段包括图13A-C中描绘的一个或多个轻链可变区CDR。在一些实施方式中，抗Gal3抗体或其结合片段包括图14中描绘的重链可变区。在一些实施方式中，抗Gal3抗体或其结合片段包括图15中描绘的轻链可变区。在一些实施方式中，抗Gal3抗体或其结合片段包括图17中描绘的重链可变区和轻链可变区的组合。在一些实施方式中，抗Gal3抗体或其结合片段包括图18中描绘的重链和/或轻链。在一些实施方式中，抗Gal3抗体或其结合片段可包括或包含图12A-C、13A-C、14、15、16、17、18中的任一个或多个中提供的任一个或多个序列、或与图12A-C、13A-C、14、15、16、17、18中的任一个或多个至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更大同一性的任一个或多个序列。在一些实施方式中，抗Gal3抗体或其结合片段可包括或包含图12A-C、13A-C、14、15、16、17、18中的任一个或多个中提供的任一个或多个序列，或与图12A-C、13A-C、14、15、16、17、18中的任一个或多个至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更大相似性的任一个或多个序列。在一些实施方式中，竞争结合至任何一种或多种前述抗体(任选地，以如本申请实施例(例如实施例54)中定义的至少80％竞争)的任何抗体(人的、人源化的或非人的)也可在方法中使用。在一些实施方式中，抗体结合至任何一种或多种前述抗体的相同或重叠表位。
在一些实施方式中，抗Gal3抗体或其结合片段包括人源化抗体或其结合片段。在其他情况下，抗Gal3抗体或其结合片段包括嵌合抗体或其结合片段。在一些实施方式中，抗Gal3抗体包括全长抗体或其结合片段。在一些实施方式中，抗Gal3抗体或其结合片段包括双特异性抗体或其结合片段。在一些实施方式中，抗Gal3抗体或其结合片段包括单价Fab’、二价Fab2、单链可变片段(scFv)、双抗体、微抗体、纳米抗体、单域抗体(sdAb)或骆驼抗体或其结合片段。
在一些实施方式中，抗Gal3抗体或其结合片段是双特异性抗体或其结合片段。示例性双特异性抗体形式包括但不限于杵-入-臼(Knobs-into-Holes)(KiH)、不对称再工程化技术-免疫球蛋白(ART-Ig)、Triomab quadroma、双特异性单克隆抗体(BiMAb、BsmAb、BsAb、bsMab、BS-Mab或Bi-MAb)、Azymetric、Biclonics、Fab-scFv-Fc、二合一/双重作用Fab(DAF)、FinomAb、scFv-Fc-(Fab)-融合、对接-和-锁定(DNL)、串联双抗体(TandAb)、双亲和力再靶向(DART)、纳米抗体、三体(triplebody)、串联scFv(taFv)、三头、串联dAb/VHH、三重dAb/VHH或四价dAb/VHH。在一些实施方式中，抗Gal3抗体或其结合片段是双特异性抗体或其结合片段，其包括Brinkmann和Kontermann，“The making of bispecific antibodies，”MABS 9(2)：182-212(2017)中阐释的双特异性抗体形式。
在一些实施方式中，抗Gal3抗体或其结合片段可包括IgM、IgG(例如，IgG1、IgG2、IgG3或IgG4)、IgA或IgE框架。IgG框架可以是IgG1、IgG2、IgG3或IgG4。在一些实施方式中，抗Gal3抗体或其结合片段包括IgG1框架。在一些实施方式中，抗Gal3抗体或其结合片段包括IgG2框架。在一些实施方式中，抗Gal3抗体或其结合片段包括IgG4框架。抗Gal3抗体或其结合片段可进一步包括Fc突变。
在一些实施方式中，Fc区包括调节Fc受体相互作用，例如以增强效应子功能比如ADCC和/或CDC的一个或多个突变。在这种情况下，当突变时调节效应子功能的示例性残基包括S239、K326、A330、I332或E333，其中残基位置对应于IgG1并且残基编号是根据Kabat编号(Kabat等，1991Sequences of Proteins of ImmunoLogicaL Interest的EU索引)。在一些实施方式中，一种或多种突变包括S239D、K326W、A330L、I332E、E333A、E333S或其组合。在一些实施方式中，一种或多种突变包括S239D、I332E或其组合。在一些实施方式中，一种或多种突变包括S239D、A330L、I332E或其组合。在一些实施方式中，一种或多种突变包括K326W、E333S或其组合。在一些实施方式中，突变包括E333A。
在一些实施方式中，抗Gal3抗体或其结合片段包括70以上、80以上、81以上、82以上、83以上、84以上、85以上、86以上、87以上、88以上、89以上、90以上或95以上的人源化得分。在一些实施方式中，抗Gal3抗体或其结合片段包括80以上的人源化得分。在一些实施方式中，抗Gal3抗体或其结合片段包括83以上的人源化得分。在一些实施方式中，抗Gal3抗体或其结合片段包括85以上的人源化得分。在一些实施方式中，抗Gal3抗体或其结合片段包括87以上的人源化得分。在一些实施方式中，抗Gal3抗体或其结合片段包括90以上的人源化得分。在一些实施方式中，抗Gal3抗体或其结合片段包括70以上、80以上、81以上、82以上、83以上、84以上、85以上、86以上、87以上、88以上、89以上、90以上或95以上、任选地80以上、85以上或87以上的重链人源化得分。在一些实施方式中，抗Gal3抗体或其结合片段包括70以上、80以上、81以上、82以上、83以上、84以上、85以上、86以上、87以上、88以上、89以上、90以上或95以上、任选地80以上、83以上或85以上的轻链人源化得分。
本文还公开了蛋白质。在一些实施方式中，蛋白质包括SEQ ID NO：27-538、801-865、955-1010、1067-1238、1415-1514中的一个或多个。在一些实施方式中，蛋白质包括与SEQ ID NO：27-538、801-865、955-1010、1067-1238、1415-1514中的一个或多个具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的序列。在一些实施方式中，蛋白质包括相对于SEQ ID NO：27-538、801-865、955-1010、1067-1238、1415-1514中的任一个或多个序列具有至少0、1、2、3、4、5或6个取代的序列。在一些实施方式中，蛋白质包括选自SEQ ID NO：27-70；SEQ ID NO：71-111、801、951、952；SEQ ID NO：112-169、802、953、954；SEQ ID NO：170-220；SEQ ID NO：211-247；SEQ ID NO：248-296中每一个的六个序列。在一些实施方式中，蛋白质包括选自SEQ ID NO：297-373、803、806-820、940、955-968、1067-1109、1415-1439和SEQ ID NO：374-447、821-835、941-943、969-982、1110-1152、1440-1464中每一个的两个序列。在一些实施方式中，竞争结合至任何一种或多种前述抗体(任选地，以如本申请实施例(例如实施例54)中定义的至少80％竞争)的任何抗体(人的、人源化的或非人的)也可在方法中使用。在一些实施方式中，抗体结合至任何一种或多种前述抗体的相同或重叠表位。
在一些实施方式中，蛋白质包含选自SEQ ID NO：448-494、804、836-850和SEQ IDNO：495-538、805、851-865、997-1010、1196-1238、1412、1490-1514中的每一个的两个序列。在一些实施方式中，蛋白质包括图12A-C、13A-C、14、15、16、17、18中描绘的任何一个或多个序列。在一些实施方式中，竞争结合至任何一种或多种前述抗体(任选地，以如本申请实施例(例如实施例54)中定义的至少80％竞争)的任何抗体(人的、人源化的或非人的)也可在方法中使用。在一些实施方式中，抗体结合至任何一种或多种前述抗体的相同或重叠表位。
在一些实施方式中，蛋白质包括由共有序列定义的一个或多个序列。本文提供的共有序列已源自图25A-B中描绘的CDR比对。然而，设想可进行替代性比对(例如，使用全局或局部比对，或使用不同的算法，诸如Hidden Markov模型、种子引导树、Needleman-Wunsch算法或Smith-Waterman算法)，并且因此，可以推导出替代性共有序列。
在一些实施方式中，蛋白质包括由式X1X2X3X4X5X6X7X8X9X10X11X12X13X14X15X16X17限定的序列，其中X1是无氨基酸或R；X2是无氨基酸或S；X3是无氨基酸、S或T；X4是无氨基酸、E、G、K、Q或R；X5是无氨基酸、A、D、G、I、N或S；X6是无氨基酸、I、L或V；X7是无氨基酸、F、L、S或V；X8是无氨基酸、D、E、H、N、S、T或Y；X9是无氨基酸、D、E、I、K、N、R、S、T或V；X10是无氨基酸、D、H、N、R、S或Y；X11是无氨基酸、A、G、N、S、T或V；X12是无氨基酸、A、I、K、N、Q、T、V或Y；X13是无氨基酸、D、G、H、K、N、S、T或Y；X14是无氨基酸、C、F、I、N、S、T、V或Y；X15是无氨基酸、D、L、N、W或Y；X16是无氨基酸、N或D；X17是无氨基酸或D。在一些实施方式中，蛋白质包括与该共有序列具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的序列。在一些实施方式中，蛋白质包括具有来自该共有序列的0、1、2、3、4、5或6个取代的序列。
在一些实施方式中，蛋白质包括由式X1X2X3X4X5X6X7X8限定的序列，其中X1是无氨基酸、K、L、N、Q或R；X2是无氨基酸、A、L、M或V；X3是无氨基酸、C、K或S；X4是无氨基酸或T；X5是无氨基酸、A、E、F、G、H、K、Q、R、S、W或Y；X6是无氨基酸、A、G或T；X7是无氨基酸、I、K、N、S或T；X8是无氨基酸、N或S。在一些实施方式中，蛋白质包括与该共有序列具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的序列。在一些实施方式中，蛋白质包括具有来自该共有序列的0、1、2、3、4、5或6个取代的序列。
在一些实施方式中，蛋白质包括由式X1X2X3X4X5X6X7X8X9X10限定的序列，其中X1是无氨基酸、A、E、F、H、L、M、Q、S、V或W；X2是A、H或Q；X3是D、F、G、H、L、M、N、Q、S、T、W或Y；X4是无氨基酸或W；X5是A、D、I、K、L、N、Q、R、S、T、V或Y；X6是D、E、H、I、K、L、N、Q、S或T；X7是D、F、K、L、N、P、S、T、V、W或Y；X8是H、P或S；X9是F、L、P、Q、R、T、W或Y；X10是无氨基酸、T或V。在一些实施方式中，蛋白质包括与该共有序列具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的序列。在一些实施方式中，蛋白质包括具有来自该共有序列的0、1、2、3、4、5或6个取代的序列。
在一些实施方式中，蛋白质包括由式X1X2X3X4X5X6X7X8X9X10限定的序列，其中X1是E、G或R；X2是F、N或Y；X3是A、I、K、N、S或T；X4是F、I或L；X5是I、K、N、R、S或T；X6是D、G、I、N、S或T；X7是F、G、H、S或Y；X8是无氨基酸、A、D、G、I、M、N、T、V、W或Y；X9是无氨基酸、M或Y；X10是无氨基酸或G；在一些实施方式中，蛋白质包括与该共有序列具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的序列。在一些实施方式中，蛋白质包括具有来自该共有序列的0、1、2、3、4、5或6个取代的序列。
在一些实施方式中，蛋白质包括由式X1X2X3X4X5X6X7X8X9X10限定的序列，其中X1是无氨基酸、I或L；X2是无氨基酸或R；X3是无氨基酸、F、I、L或V；X4是A、D、F、H、K、L、N、S、W或Y；X5是A、D、P、S、T、W或Y；X6是D、E、G、H、K、N、S、V或Y；X7是D、E、G、N、S或T；X8是D、G、I、K、N、Q、R、S、V或Y；X9是A、D、E、G、I、K、N、P、S、T、V或Y；X10是无氨基酸、I、P、S或T。在一些实施方式中，蛋白质包括与该共有序列具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的序列。在一些实施方式中，蛋白质包括具有来自该共有序列的0、1、2、3、4、5或6个取代的序列。
在一些实施方式中，蛋白质包括由式X1X2X3X4X5X6X7X8X9X10X11X12X13X14X15X16X17X18X1 9X20X21X22X23X24X25限定的序列，其中X1是无氨基酸或A；X2是无氨基酸、A、R或Y；X3是无氨基酸、A、F、H、K、L、R、S或V；X4是无氨基酸、A、D、K、N、R、S或T；X5是无氨基酸、A、D、G、H、I、L、N、P、R、S、T、V或Y；X6是无氨基酸、A、D、G、H、K、N、P、Q、R、S或Y；X7是无氨基酸、D、F、G、H、P、R、S、W或Y；X8是无氨基酸、A、D、E、G、I、R或S；X9是无氨基酸、A、C、D、E、F、G、I、N、R、S、T、V或Y；X10是无氨基酸、A、D、M、P、R、S、T、V或Y；X11是无氨基酸、A、D、E、F、L、T、V或Y；X12是无氨基酸、A、G、L、M、R或T；X13是无氨基酸、A、D、E、F、G、R、S、T或V；X14是无氨基酸、A、D、G、L、P、Q、R、S、T、V或Y；X15是无氨基酸、A、D、G、N、S、V、W或Y；X16是无氨基酸、A、D、E、F、L、P、T、V、W或Y；X17是无氨基酸、F、I、L、M、R或Y；X18是无氨基酸、A、D、G、N或T；X19是无氨基酸、F、N、S、T、V或Y；X20是无氨基酸或L；X21是无氨基酸或A；X22是无氨基酸或W；X23是无氨基酸或F；X24是无氨基酸或A；X25是无氨基酸或Y。在一些实施方式中，蛋白质包括与该共有序列具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的序列。在一些实施方式中，蛋白质包括具有来自该共有序列的0、1、2、3、4、5或6个取代的序列。在一些实施方式中，竞争结合至任何一种或多种前述抗体(任选地，以如本申请实施例(例如实施例54)中定义的至少80％竞争)的任何抗体(人的、人源化的或非人的)也可在方法中使用。在一些实施方式中，抗体结合至任何一种或多种前述抗体的相同或重叠表位
在一些实施方式中，竞争结合至任何一种或多种前述抗体(任选地，以如本申请实施例(例如实施例54)中定义的至少80％竞争)的任何抗体(人的、人源化的或非人的)也可在方法中使用。在一些实施方式中，抗体结合至任何一种或多种前述抗体的相同或重叠表位。在一些实施方式中，80％竞争如下确定：
A)将Ab(诸如，例如TB006)包被到表面上。
B)将已经被Gal3抗体结合的酶联抗体(希望确定Ab是否与例如TB006-“潜在竞争性Ab”竞争的抗体)添加到Elisa板中。
C)孵育ELISA板，然后洗涤(以去除任何被潜在竞争性Ab结合的未结合的Gal3)。
D)然后收集板。如果结合至Gal3的潜在竞争性Ab仍允许结合至固定化Ab(例如TB006)，则Ab不竞争。如果没有(或者做得不够充分)，则存在一定量的竞争。
在一些实施方式中，80％竞争值可如本文实施例54中概述的那样确定。在一些实施方式中，80％竞争值可以如下确定：将Ab如TB006稀释并包被到ELISA板上。将板孵育，并且孵育后，洗涤板，应用封闭溶液，并再次孵育板。孵育后，除去封闭溶液。任何待测试的竞争性抗体均与Flag-标记的Gal-3蛋白在结合溶液中混合，并应用于Elisa。将板孵育并且然后洗涤。然后，将HRP-缀合的抗-FLAG Gal3抗体添加到板中。将板孵育然后洗涤。如果抗Gal3阻断抗体与抗Gal3抗体(如TB006)竞争结合，则洗涤后HRP-缀合的抗-FLAG Gal3将是不可检测的。如果抗Gal3阻断抗体不与抗Gal3抗体竞争结合，则HRP-缀合的抗-FLAG Gal3将是可检测的，或者在洗涤后可检测到较低水平。然后将板显色并在酶标仪中读取。可使用任何适当的方式对数据进行分析和/或绘图。
与TB006竞争结合至GAL3的人或人源化抗体，其中抗体以至少80％竞争的水平竞争。在一些实施方式中，抗体不是下述之一或任一个：F847C.21H6((VH：QIQLVQSGPELKKPGETVKISCKASGYTFTIFGM[NWVKQAPGKGLKWMGWVNTYTGEPTYADDFKGRFAFSLETSASTAYLQINNLKNEDTATYFCARGWFAYWGQGTLVTVSA(SEQ ID NO：367)；VL：DVVMTQTPLTLSVTIGQPASISCKSSRSLLDSDGKTYLNWLLQRPGQSPKRLIYLVSKLDSGVPDRFTGSGSGTDFTLKISRVEAEDLGVYYCWQGTHFPQTFGGGTKLEIN(SEQ ID NO：440))，F846TC.14A2(VH：QIQLVQSGPELKKPGETVKISCKASGYTFTNYGMNWVKQAPGKGLKWMGWINTYTGEPTYAGDLKGRFAFSLETSASTAYLQINNLKNEDTATYFCVRYTMDYWGQGTSVTVSS(SEQID NO：326)；VL：QAVVTQESALTTSPGETVTLTCRSSTGAVTTSNYANWVQEKPDHLFTGLIGGINNRVPGVPARFSGSLIGDKAALTITGAQTEDEAIYFCALWYSNHWVFGGGTKLTVL(SEQ ID NO：403))，F847C.12F12(VH：QIQLVQSGPELKKPGETVKISCKASGYTFTNYGMNWVKQAPGKGLKWMGWINTYTGEPTYVDDFKGRFAFSLETSASTAYLRINNLKNEDTATYFCAKFGNYVGAMDYWGQGTSVTVSS(SEQ ID NO：343)；V L：DIQVIQSPSSLSASLGDTITITCHASQNINVWLSWYQQKPGNIPKLLIYKASNLHTGVPSRFSGSGSGTGFTLTISSLQPEDIATYYCQQGQSYPYTFGGGTKLELK(SEQ ID NO：409))，F846T.16B5(VH：QIQLVQSGPELKKPGETVKISCKASGYTFTNYGMNWVKQAPGKGLKWMGWINTYTGEPAYADDFKGRFAFSLETSASTAYLQINNLKNEDMATYFCARWGGYDGDYYAMDYWGQGTSVTVSS(SEQ ID NO：328)：VL：NIMMTQSPSSLAVSAGEKVTMSCKSSQSVLYSSNQKNYLAWYQQKPGQSPKLLIYWASTRESGVPDRFTGSGSGTDFTLTISSVQAEDLAVYYCHQYLSSLTFGAGTKLELK(SEQ ID NO：405))，F846C.2H3(VH：QIQLVQSGPELKKPGETVKISCKASGYTFTNYGMNWVKQAPGKGLKWMGWINTYTGEPSYADDFKGRFAFSLETSASTAYLQINNLKNEDMATYFCARWGGYDGDYYAMDYWGQGTSVTVSS(SEQ ID NO：323)；VL：NIMMTQSPSSLAVSAGEKVTMSCKSSQSVLYSSNQKNYLAWYQQKPGQSPKLLIYWASTRESGVPDRFTGSGSGTDFTLTISSVQPEDLAVYYCHQYLSSLTFGAGTKLELK(SEQ ID NO：400))，F846C.1F5(VH：QIQLVQSGPELKKPGETVKISCKASGYTFTNYGMNWVKQAPGKGLKWMGWINTYTGEPSYADDFKGRFAFSLETSASTAYLQINNLKNEDMATYFCARWGGYDGDYYAMDYWGQGTSVTVSS(SEQ ID NO：323)；VL：NIMMTQSPSSLAVSAGEKVTMSCKSSQSVLYSSNQKNYLAWYQQKPGQSPKLLIYWASTRESGVPDRFTGSGSGTDFTLTISSVQPEDLAVYYCHQYLSSLTFGAGTKLELK(SEQ ID NO：400))，TB001(VH：QVQLVQSGSELKKPGASVKVSCKASGYTFTNYGMNWVRQAPGQGLKWMGWINTNTGEPTYVEEFTGRFVFSLETSVSTAYLQISSLKAEDTAVYFCAPYDNFFAYWGQGTTVTVSS(SEQ ID NO：297)；VL：DIVLTQSPLSLPVTPGEPASISCRSSKSLLYKDGKTYLNWFLQKPGQSPQLLIYLMSTHASGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCQQLVDYPLTFGGGTKLEIK(SEQ ID NO：374))，或Synagis-hIgG4(VH：QVTLRESGPALVKPTQTLTLTCTFSGFSLSTSGMSVGWIRQPPGKALEWLADIWWDDKKDYNPSLKSRLTISKDTSKNQVVLKVTNMDPADTATYYCARSMITNWYFDVWGAGTTVTVSS(SEQ ID NO：1911)；VL：DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCKCQLSVGYMHWYQQKPGKAPKLLIYDTSKLASGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYCFQGSGYPFTFGGGTKLEIK(SEQ ID NO：1912)).在一些实施方式中，80％竞争如下确定：
A)将Ab如TB006稀释并包被到ELISA板上。
B)将板孵育，并且孵育后洗涤板，应用封闭溶液并再次孵育板。
C)除去封闭溶液。
D)将Ab(潜在竞争性Ab)与Flag-标记的Gal-3蛋白混合并添加到Elisa板中。
E)孵育ELISA板，然后洗涤。
F)然后将板显色并在酶标仪中读取。
G)可使用任何适当的方式对数据进行分析和/或绘图。
在一些实施方式中，80％竞争值可以如本文实施例54中概述的那样确定。在一些实施方式中，80％竞争值可以如下确定：将Gal3Ab如TB006在PBS中稀释并包被在96孔ELISA板中。将板孵育过夜，并且然后洗涤三次，然后应用封闭溶液并轻轻振荡孵育1小时。然后将现有的封闭溶液从板上丢弃。将任何竞争性抗体与Flag-标记的Gal-3蛋白混合，并且然后应用于平板。将板在室温下轻轻振荡孵育1小时，然后用PBST洗涤。其后，将HRP-标记的抗-FLAG Gal3抗体在PBST中稀释并添加到板中。将板在室温下轻轻振荡孵育，然后用PBST洗涤。如果抗Gal3阻断抗体与抗Gal3抗体竞争结合，则洗涤后HRP-标记的抗-FLAGGal3将是不可检测的。如果抗Gal3阻断抗体不与抗Gal3抗体竞争结合，则HRP-标记的抗-FLAG Gal3将是可检测的，或者在洗涤后可检测到较低水平。为了使板显色，将ABTS底物添加到每孔中并孵育，直至获得足够高的信号。在酶标仪中在405nm的吸光度处读取板。然后使用任何适当的方法对数据进行分析和/或可视化，诸如使用GraphPad Prism 8.0软件(GraphPadSoftware Inc)对数据进行绘图。
与TB006竞争结合至GAL3的人或人源化抗体，其中抗体以至少80％竞争的水平竞争。在一些实施方式中，抗体不是以下之一或任一个：F847C.21H6((VH：QIQLVQSGPELKKPGETVKISCKASGYTFTIFGMNWVKQAPGKGLKWMGWVNTYTGEPTYADDFKGRFAFSLETSASTAYLQINNLKNEDTATYFCARGWFAYWGQGTLVTVSA(SEQ ID NO：367)；VL：DVVMTQTPLTLSVTIGQPASISCKSSRSLLDSDGKTYLNWLLQRPGQSPKRLIYLVSKLDSGVPDRFTGSGSGTDFTLKISRVEAEDLGVYYCWQGTHFPQTFGGGTKLEIN(SEQ ID NO：440))，F846TC.14A2(VH：QIQLVQSGPELKKPGETVKISCKASGYTFTNYGMNWVKQAPGKGLKWMGWINTYTGEPTYAGDLKGRFAFSLETSASTAYLQINNLKNEDTATYFCVRYTMDYWGQGTSVTVSS(SEQ IDNO：326)；VL：QAVVTQESALTTSPGETVTLTCRSSTGAVTTSNYANWVQEKPDHLFTGLIGGINNRVPGVPARFSGSLIGDKAALTITGAQTEDEAIYFCALWYSNHWVFGGGTKLTVL(SEQ ID NO：403))，F847C.12F12(VH：QIQLVQSGPELKKPGETVKISCKASGYTFTNYGMNWVKQAPGKGLKWMGWINTYTGEPTYVDDFKGRFAFSLETSASTAYLRINNLKNEDTATYFCAKFGNYVGAMDYWGQGTSVTVSS(SEQ ID NO：343)；VL：DIQVIQSPSSLSASLGDTITITCHASQNINVWLSWYQQKPGNIPKLLIYKASNLHTGVPSRFSGSGSGTGFTLTISSLQPEDIATYYCQQGQSYPYTFGGGTKLELK(SEQ ID NO：409))，F846T.16B5(VH：QIQLVQSGPELKKPGETVKISCKASGYTFTNYGMNWVKQAPGKGLKWMGWINTYTGEPAYADDFKGRFAFSLETSASTAYLQINNLKNEDMATYFCARWGGYDGDYYAMDYWGQGTSVTVSS(SEQ ID NO：328)；VL：NIMMTQSPSSLAVSAGEKVTMSCKSSQSVLYSSNQKNYLAWYQQKPGQSPKLLIYWASTRESGVPDRFTGSGSGTDFTLTISSVQAEDLAVYYCHQYLSSLTFGAGTKLELK(SEQID NO：405))，F846C.2H3(VH：QIQLVQSGPELKKPGETVKISCKASGYTFTNYGMNWVKQAPGKGLKWMGWINTYTGEPSYADDFKGRFAFSLETSASTAYLQINNLKNEDMATYFCARWGGYDGDYYAMDYWGQGTSVTVSS(SEQID NO：323)；VL：NIMMTQSPSSLAVSAGEKVTMSCKSSQSVLYSSNQKNYLAWYQQKPGQSPKLLIYWASTRESGVPDRFTGSGSGTDFTLTISSVQPEDLAVYYCHQYLSSLTFGAGTKLELK(SEQ ID NO：400))，F846C.1F5(VH：QIQLVQSGPELKKPGETVKISCKASGYTFTNYGMNWVKQAPGKGLKWMGWINTYTGEPSYADDFKGRFAFSLETSASTAYLQINNLKNEDMATYFCARWGGYDGDYYAMDYWGQGTSVTVSS(SEQ ID NO：323)；VL：NIMMTQSPSSLAVSAGEKVTMSCKSSQSVLYSSNQKNYLAWYQQKPGQSPKLLIYWASTRESGVPDRFTGSGSGTDFTLTISSVQPEDLAVYYCHQYLSSLTFGAGTKLELK(SEQ ID NO：400))，TB001(VH：QVQLVQSGSELKKPGASVKVSCKASGYTFTNYGMNWVRQAPGQGLKWMGWINTNTGEPTYVEEFTGRFVFSLETSVSTAYLQISSLKAEDTAVYFCAPYDNFFAYWGQGTTVTVSS(SEQ ID NO：297)；VL：DIVLTQSPLSLPVTPGEPASISCRSSKSLLYKDGKTYLNWFLQKPGQSPQLLIYLMSTHASGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCQQLVDYPLTFGGGTKLEIK(SEQ ID NO：374))，或Synagis-hIgG4(VH：QVTLRESGPALVKPTQTLTLTCTFSGFSLSTSGMSVGWIRQPPGKALEWLADIWWDDKKDYNPSLKSRLTISKDTSKNQVVLKVTNMDPADTATYYCARSMITNWYFDVWGAGTTVTVSS(SEQ ID NO：1911)；VL：DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCKCQLSVGYMHWYQQKPGKAPKLLIYDTSKLASGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYCFQGSGYPFTFGGGTKLEIK(SEQ ID NO：1912)).在一些实施方式中，80％竞争如下确定：
A)将Gal3 Ab在PBS中稀释并包被96孔ELISA板。
B)将板孵育过夜，并且然后洗涤三次，然后应用封闭溶液并轻轻振荡孵育1小时。
C)然后将现有的封闭溶液从ELISA板上丢弃。
D)将竞争性抗体与Flag-标记的Gal-3在结合溶液中混合，并且然后应用于ELISA板。
E)将ELISA板在室温下轻轻振荡孵育1小时，然后用PBST洗涤。
F)将HRP-缀合的抗-FLAG Gal3抗体在PBST中稀释并添加到板中。
G)将板在室温下轻轻振荡孵育，然后用PBST洗涤。
H)为了使板显色，将ABTS底物添加到每孔中并孵育，直至获得足够高的信号。
I)在酶标仪中在405nm的吸光度处读取板。然后使用任何适当的方法对数据进行分析和/或可视化，诸如使用GraphPad Prism 8.0软件(GraphPad Software Inc)对数据进行绘图。
在一些实施方式中，80％竞争值可以如本文实施例54中概述的那样确定。在一些实施方式中，80％竞争值可以如下测定：将Ab在PBS中稀释2倍并包被96孔ELISA板。将板在4℃下孵育过夜后，用PBST洗涤板三次，然后使用2％BSA的PBST进行封闭步骤，并在室温(RT)下轻轻振荡孵育1小时。然后将现有的封闭溶液从板上丢弃。结合溶液通过在含有Flag-标记的Gal-3蛋白的2％BSA的PBST缓冲液中从4μg/ml进行2倍稀释来制备。然后将稀释液应用到板，然后在2％BSA的PBST中两倍系列稀释。将板在室温下轻轻振荡孵育1小时，然后用PBST洗涤三次。其后，将HRP-缀合的抗-FLAG Gal3抗体稀释到2％BSA的PBST中，并添加到所有孔中。将板在室温下轻轻振荡孵育40分钟，然后用PBST洗涤三次。为了使板显色，将ABTS底物添加到每孔中并孵育，直至获得足够高的信号。在酶标仪中在405nm的吸光度处读取板。然后使用任何适当的方法对数据进行分析和/或可视化，诸如使用GraphPad Prism 8.0软件(GraphPad Software Inc)对数据进行绘图。如果抗Gal3阻断抗体与抗Gal3抗体竞争结合，则洗涤后HRP-缀合的抗-FLAG Gal3将是不可检测的。如果抗Gal3阻断抗体不与抗Gal3抗体竞争结合，则HRP-标记的抗-FLAG Gal3将是可检测的，或者在洗涤后可检测到较低水平。
与TB006竞争结合至GAL3的人或人源化抗体，其中抗体以至少80％竞争的水平竞争。在一些实施方式中，抗体不是以下之一或任一个：F847C.21H6((VH：QIQLVQSGPELKKPGETVKISCKASGYTFTIFGM[NWVKQAPGKGLKWMGWVNTYTGEPTYADDFKGRFAFSLETSASTAYLQINNLKNEDTATYFCARGWFAYWGQGTLVTVSA(SEQ ID NO：367)；VL：DVVMTQTPLTLSVTIGQPASISCKSSRSLLDSDGKTYLNWLLQRPGQSPKRLIYLVSKLDSGVPDRFTGSGSGTDFTLKISRVEAEDLGVYYCWQGTHFPQTFGGGTKLEIN(SEQ ID NO：440))，F846TC.14A2(VH：QIQLVQSGPELKKPGETVKISCKASGYTFTNYGMNWVKQAPGKGLKWMGWINTYTGEPTYAGDLKGRFAFSLETSASTAYLQINNLKNEDTATYFCVRYTMDYWGQGTSVTVSS(SEQID NO：326)；VL：QAVVTQESALTTSPGETVTLTCRSSTGAVTTSNYANWVQEKPDHLFTGLIGGINNRVPGVPARFSGSLIGDKAALTITGAQTEDEAIYFCALWYSNHWVFGGGTKLTVL(SEQ ID NO：403))，F847C.12F12(VH：QIQLVQSGPELKKPGETVKISCKASGYTFTNYGMNWVKQAPGKGLKWMGWINTYTGEPTYVDDFKGRFAFSLETSASTAYLRINNLKNEDTATYFCAKFGNYVGAMDYWGQGTSVTVSS(SEQ ID NO：343)；VL：DIQVIQSPSSLSASLGDTITITCHASQNINVWLSWYQQKPGNIPKLLIYKASNLHTGVPSRFSGSGSGTGFTLTISSLQPEDIATYYCQQGQSYPYTFGGGTKLELK(SEQ ID NO：409))，F846T.16B5(VH：QIQLVQSGPELKKPGETVKISCKASGYTFTNYGMNWVKQAPGKGLKWMGWINTYTGEPAYADDFKGRFAFSLETSASTAYLQINNLKNEDMATYFCARWGGYDGDYYAMDYWGQGTSVTVSS(SEQ ID NO：328)；VL：NIMMTQSPSSLAVSAGEKVTMSCKSSQSVLYSSNQKNYLAWYQQKPGQSPKLLIYWASTRESGVPDRFTGSGSGTDFTLTISSVQAEDLAVYYCHQYLSSLTFGAGTKLELK(SEQ ID NO：405))，F846C.2H3(VH：QIQLVQSGPELKKPGETVKISCKASGYTFTNYGMNWVKQAPGKGLKWMGWINTYTGEPSYADDFKGRFAFSLETSASTAYLQINNLKNEDMATYFCARWGGYDGDYYAMDYWGQGTSVTVSS(SEQ ID NO：323)：VL：NIMMTQSPSSLAVSAGEKVTMSCKSSQSVLYSSNQKNYLAWYQQKPGQSPKLLIYWASTRESGVPDRFTGSGSGTDFTLTISSVQPEDLAVYYCHQYLSSLTFGAGTKLELK(SEQ ID NO：400))，F846C.1F5(VH：QIQLVQSGPELKKPGETVKISCKASGYTFTNYGMNWVKQAPGKGLKWMGWINTYTGEPSYADDFKGRFAFSLETSASTAYLQINNLKNEDMATYFCARWGGYDGDYYAMDYWGQGTSVTVSS(SEQ ID NO：323)；VL：NIMMTQSPSSLAVSAGEKVTMSCKSSQSVLYSSNQKNYLAWYQQKPGQSPKLLIYWASTRESGVPDRFTGSGSGTDFTLTISSVQPEDLAVYYCHQYLSSLTFGAGTKLELK(SEQ ID NO：400))，TB001(VH：QVQLVQSGSELKKPGASVKVSCKASGYTFTNYGMNWVRQAPGQGLKWMGWINTNTGEPTYVEEFTGRFVFSLETSVSTAYLQISSLKAEDTAVYFCAPYDNFFAYWGQGTTVTVSS(SEQ ID NO：297)；VL：DIVLTQSPLSLPVTPGEPASISCRSSKSLLYKDGKTYLNWFLQKPGQSPQLLIYLMSTHASGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCQQLVDYPLTFGGGTKLEIK(SEQ ID NO：374))，或Synagis-hIgG4(VH：QVTLRESGPALVKPTQTLTLTCTFSGFSLSTSGMSVGWIRQPPGKALEWLADIWWDDKKDYNPSLKSRLTISKDTSKNQVVLKVTNMDPADTATYYCARSMITNWYFDVWGAGTTVTVSS(SEQ ID NO：1911)；VL：DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCKCQLSVGYMHWYQQKPGKAPKLLIYDTSKLASGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYCFQGSGYPFTFGGGTKLEIK(SEQ ID NO：1912))。在一些实施方式中，80％竞争如下确定：
A)将Ab在PBS中稀释2倍并包被96孔ELISA板。
B)将板在4℃下孵育过夜后，用PBST洗涤板三次，然后用2％BSA的PBST进行封闭步骤，并在室温(RT)下轻轻振荡孵育1小时。
C)然后将现有的封闭溶液从板上丢弃。
D)结合溶液在含有Flag-标记的Gal-3蛋白的2％BSA的PBST缓冲液中从4μg/ml竞争性抗体稀释2倍来制备。
E)然后将稀释液应用至板上，然后在2％BSA的PBST中两倍系列稀释。
F)将板在室温下轻轻振荡孵育1小时，然后用PBST洗涤三次。
G)其后，将HRP-缀合的抗-FLAG Gal3抗体在2％BSA的PBST中稀释，并添加到所有孔中。
H)将板在室温下轻轻振荡孵育40分钟，然后用PBST洗涤三次。
I)通过向每孔中添加ABTS底物并孵育直至获得足够高的信号来显色ELISA板。
J)在酶标仪中在405nm的吸光度处读取板。
K)然后使用任何适当的方法对数据进行分析和/或可视化，诸如使用GraphPadPrism 8.0软件(GraphPad Software Inc)对数据进行绘图。
在一些实施方式中，可使用替代测量或竞争量来代替80％竞争测量，只要其相当于通过本文提供的任何ELISA式竞争测定法所确定的80％(或期望的竞争百分比)。因此，在一些实施方式中，表现出与TB006竞争结合至GAL-3的任何抗体(其水平相当于本文提供的ELSIA竞争测定法的任一个)可用于本文提供的任何方法和/或组合物。
在一些实施方式中，80％竞争值可以如本文实施例54中概述的那样确定。在一些实施方式中，80％竞争值可以如下确定：将Ab在PBS中从浓度4μg/ml稀释2倍，并通过每孔添加80μl包被96孔ELISA板。将板在4℃过夜孵育后，用300μl PBST洗涤板三次，然后用每孔150μl的2％BSA的PBST进行封闭步骤，并在室温(RT)下轻轻振荡孵育1小时。然后将现有的封闭溶液从板上丢弃。结合溶液在含有Flag-标记的Gal-3的2％BSA的PBST缓冲液中从4μg/ml竞争性抗体稀释2倍来制备，浓度为4μg/ml。然后通过对于每种半乳凝素-3每孔按列添加60μl，将稀释液应用到板，然后在2％BSA的PBST中纵向(length-wise)两倍系列稀释。将板在室温下轻轻振荡孵育1小时，然后用300μl PBST洗涤三次。其后，将HRP-缀合的抗-FLAG抗体在2％BSA的PBST中稀释至1∶2000，并向所有孔中添加25μl。将板在室温下轻轻振荡孵育40分钟，然后用300μl PBST洗涤三次。为了使板显色，将50μl的ABTS底物添加到每孔中并孵育，直至获得足够高的信号。在酶标仪中在405nm的吸光度处读取板。可使用GraphPadPrism 8.0软件(GraphPad Software Inc)对数据进行绘图。
如本文所指出的，以至少80％的水平(例如，在实施例54的方法中测定的)与TB006竞争结合的抗体可以用于本文提供的任何实施方式中(一些实施方式中)。为了进一步支持本文提供了该类抗体(如实施例54的结果中所示)，值得注意的是实施例53-56提供了关于本文提供的多种抗体的相关表位和竞争方面的结构信息。相关表位信息已由HDX(实施例53中)、实施例54中的竞争数据以及实施例55和56中的晶体结构和其他功能信息提供。因此，在一些实施方式中，与TB006竞争结合至Gal3的任何抗体，可用于本文提供的方法中。
如本文所指出的，以至少50％、60％、70％、80％、90％或100％的水平与TB006竞争结合的抗体可用于本文提供的任何实施方式中(一些实施方式中)，或者以在由任意两个前述值定义的范围内的水平与TB006竞争结合。例如，在一些实施方式中，抗体以介于约50％-100％、50％-80％、50％-70％、60％-100％、60％-90％、60％-70％、70％-100％或70％-90％之间的水平与TB006竞争结合。
在一些实施方式中，人或人源化抗体包括表1中的抗体。
表1
图57是描绘用于抑制Gal3-介导的蛋白质的聚集的方法的一些实施方式的流程图。
在一些实施方式中，公开了抑制Gal3-介导的蛋白质的寡聚化的方法。在一些实施方式中，方法包括：使蛋白质与抗Gal3抗体或其结合片段接触，其中抗Gal3抗体或其结合片段与Gal3的结合抑制Gal3-介导的蛋白质的寡聚化。
在一些实施方式中，公开了抑制Gal3-介导的蛋白质的淀粉样蛋白聚集的方法。在一些实施方式中，方法包括：使蛋白质与抗Gal3抗体或其结合片段接触，其中抗Gal3抗体或其结合片段与Gal3的结合抑制Gal3-介导的蛋白质的寡聚化。
在一些实施方式中，公开了抑制Gal3-介导的蛋白质的聚集或寡聚化的方法5700。在一些实施方式中，方法包括使蛋白质与抗Gal3阻断抗体或其结合片段接触5701。在一些实施方式中，抗Gal3阻断抗体阻断一种或多种抗Gal3抗体与Gal3的结合5702。在一些实施方式中，抗Gal3阻断抗体或其结合片段与Gal3的结合5703抑制Gal3-介导的蛋白质的聚集或寡聚化5704。在一些实施方式中，蛋白质在细胞中。在一些实施方式中，蛋白质包括α-突触核蛋白、tau蛋白、磷酸tau、TAR DNA结合蛋白(TDP-43)、甲状腺素运载蛋白、尿调节素、胰岛淀粉样多肽(IAPP)、血清淀粉样蛋白A(SAA)、p53、载脂蛋白E(APOE)、APOE-4、朊病毒蛋白、纤维蛋白、神经丝轻链(NFL)、CRP、SUMO、轻链、血小板源生长因子受体(PDGFR)、黑色素瘤细胞黏附分子(MCAM)、补体蛋白C3、补体蛋白C9、溶菌酶、胰岛素、天然血红蛋白(Hb)、糖化血红蛋白(HbAIC)、苯丙氨酸(Phe)、谷氨酰胺(Gln)、胆甾醇基(共酯基)、胆固醇、神经源性丝氨酸蛋白酶抑制剂、晶体蛋白AA、晶体蛋白AB、半胱氨酸蛋白酶抑制剂-C、肌生长抑制素前肽、心房钠尿肽(ANP)、B-型钠尿肽(BNP)或其中的任意组合。
本文还公开了抑制细胞中Gal3-介导的蛋白质的聚集或寡聚化的方法。在一些实施方式中，方法包括使细胞与抗Gal3阻断抗体或其结合片段接触。在一些实施方式中，抗Gal3阻断抗体或其结合片段与细胞中Gal3的结合抑制Gal3-介导的蛋白质的聚集或寡聚化。
在一些实施方式中，方法在体外或体内进行。
在一些实施方式中，相对于未与抗Gal3阻断抗体或其结合片段接触的细胞，在与抗Gal3阻断抗体或其结合片段接触后，Gal3-介导的蛋白质的聚集或寡聚化被抑制至少5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％或99％、或由任意两个前述百分比定义的范围内的任意百分比。
在一些实施方式中，蛋白质包括α-突触核蛋白、tau蛋白、磷酸tau、TAR DNA结合蛋白(TDP-43)、甲状腺素运载蛋白、尿调节素、胰岛淀粉样多肽(IAPP)、血清淀粉样蛋白A(SAA)、p53、载脂蛋白E(APOE)、APOE-4、朊病毒蛋白、纤维蛋白、神经丝轻链(NFL)、CRP、SUMO、轻链、血小板源生长因子受体(PDGFR)、黑色素瘤细胞黏附分子(MCAM)、补体蛋白C3、补体蛋白C9、溶菌酶、胰岛素、天然血红蛋白(Hb)、糖化血红蛋白(HbAIC)、苯丙氨酸(Phe)、谷氨酰胺(Gln)、胆甾醇基(共酯基)、胆固醇、神经源性丝氨酸蛋白酶抑制剂、晶体蛋白AA、晶体蛋白AB、半胱氨酸蛋白酶抑制剂-C、肌生长抑制素前肽、心房钠尿肽(ANP)、B-型钠尿肽(BNP)或其中的任意组合。在一些实施方式中，当与Gal3接触时，磷酸化tau形成三聚体、四聚体或更高级的寡聚体。
在一些实施方式中，抗Gal3阻断抗体或结合片段与抗Gal3抗体或其结合片段竞争结合至Gal3，所述抗Gal3抗体或其结合片段包括(1)重链可变区，其包括VH-CDR1、VH-CDR2和VH-CDR3；以及(2)轻链可变区，其包括VL-CDR1、VL-CDR2和VL-CDR3。在一些实施方式中，抗Gal3阻断抗体或结合片段与抗Gal3抗体或其结合片段竞争结合至Gal3，其中VH-CDR1包含与SEQ ID NO：27-70的氨基酸序列中的任一个具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列。在一些实施方式中，抗Gal3阻断抗体或结合片段与抗Gal3抗体或其结合片段竞争结合至Gal3，其中VH-CDR2包含与SEQ ID NO：71-111、801、951、952的氨基酸序列中的任一个具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列。在一些实施方式中，抗Gal3阻断抗体或结合片段与抗Gal3抗体或其结合片段竞争结合至Gal3，其中VH-CDR3包含与SEQ ID NO：112-169、802、953、954的氨基酸序列中的任一个具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列。在一些实施方式中，抗Gal3阻断抗体或结合片段与抗Gal3抗体或其结合片段竞争结合至Gal3，其中VL-CDR1包含与SEQ ID NO：170-220的氨基酸序列中的任一个具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列。在一些实施方式中，抗Gal3阻断抗体或结合片段与抗Gal3抗体或其结合片段竞争结合至Gal3，其中VL-CDR2包含与SEQ ID NO：211-247的氨基酸序列中的任一个具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列。在一些实施方式中，抗Gal3阻断抗体或结合片段与抗Gal3抗体或其结合片段竞争结合至Gal3，其中VL-CDR3包含与SEQ ID NO：248-296的氨基酸序列中的任一个具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列。在一些实施方式中，抗Gal3阻断抗体或结合片段与抗Gal3抗体或其结合片段竞争结合至Gal3，其中抗Gal3抗体或其结合片段包括如图13中阐释的VH-CDR1、VH-CDR2、VH-CDR3、VL-CDR1、VL-CDR2和VL-CDR3的组合。在一些实施方式中，抗Gal3阻断抗体或结合片段与抗Gal3抗体或其结合片段竞争结合至Gal3，其中重链可变区包含与选自SEQ ID NO：374-447、821-835、941-943、969-982、1110-1152、1440-1464的序列具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的序列。在一些实施方式中，抗Gal3阻断抗体或结合片段与抗Gal3抗体或其结合片段竞争结合至Gal3，其中轻链可变区包含与选自SEQ IDNO：374-447、821-835、941-943、969-982、1110-1152、1440-1464的序列具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的序列。在一些实施方式中，抗Gal3阻断抗体或结合片段与抗Gal3抗体或其结合片段竞争结合至Gal3，其中重链包含与选自SEQ ID NO：448-494、804、836-850、983-996、1153-1195、1411、1465-1489的序列具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的序列。在一些实施方式中，抗Gal3阻断抗体或结合片段与抗Gal3抗体或其结合片段竞争结合至Gal3，其中轻链包含与选自SEQ ID NO：495-538、805、851-865、997-1010、1196-1238、1412、1490-1514的序列具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的序列。在一些实施方式中，竞争结合至任何一种或多种前述抗体(任选地，以如本申请实施例中定义的至少80％竞争)的任何抗体(人的、人源化的或非人的)也可在方法中使用。在一些实施方式中，抗体结合至任何一种或多种前述抗体的相同或重叠表位。
在一些实施方式中，抗Gal3阻断抗体或结合片段与抗Gal3抗体或其结合片段竞争结合至Gal3，其中抗Gal3抗体或其结合片段选自由以下的至少一种组成的组：TB001、TB006、12G5.D7、13A12.2E5、14H10.2C9、15F10.2D6、19B5.2E6、20D11.2C6、20H5.A3、23H9.2E4、2D10.2B2、3B11.2G2、7D8.2D8、mIMT001、4A11.2B5、4A11.H1L1、4A11.H4L2、4G2.2G6、6B3.2D3、6H6.2D6、9H2.2H10、13G4.2F8、13H12.2F8、15G7.2A7、19D9.2E5、23B10.2B12、24D12.2H9、F846C.1B2、F846C.1F5、F846C.1H12、F846C.1H5、F846C.2H3、F846TC.14A2、F846TC.14E4、F846TC.16B5、F846TC.7F10、F847C.10B9、F847C.11B1、F847C.12F12、F847C.26F5、F847C.4B10、F849C.8D10、F849C.8H3、846.2B11、846.4D5、846T.1H2、847.14H4、846.2D4、846.2F11、846T.10B1、846T.2E3、846T.4C9、846T.4E11、846T.4F5、846T.8D1、847.10C9、847.11D6、847.15D12、847.15F9、847.15H11、847.20H7、847.21B11、847.27B9、847.28D1、847.2B8、847.3B3、849.1D2、849.2D7、849.2F12、849.4B2、849.4F12、849.4F2、849.5C2、849.8D12、F847C.21H6、849.5H1、847.23F11、847.16D10、847.13E2-mH0mL1、847.13E2-mH0mL2、847.12C4、847.4D3、2D10-VH0-VL0、2D10-hVH4-HVL1、2D10-hVH4-HVL2、2D10-hVH4-HVL3、2D10-hVH4-HVL4、2D10-hVH3-HVL1、2D10-hVH3一HVL2、2D10-hVH3-HVL3、2D10-hVH3-HVL4、20H5.A3-VH3VL1、20H5.A3-VH3VL3、20H5.A3-VH4VL1、20H5.A3-VH5VL1、20H5.A3-VH5VL3、20H5.A3-VH6VL1、20H5.A3-VH6VL3或其结合片段。在一些实施方式中，抗Gal3阻断抗体或结合片段与抗Gal3抗体或其结合片段竞争结合至Gal3，其中抗Gal3抗体或其结合片段选自由以下的至少一种组成的组：2D10-VH0-VL0、2D10-hVH4-HVL1、2D10-hVH4-HVL2、2D10-hVH4-HVL3、2D10-hVH4-HVL4、2D10-hVH3-HVL1、2D10-hVH3-HVL2、2D10-hVH3-HVL3、2D10-hVH3-HVL4或其结合片段。在一些实施方式中，抗Gal3阻断抗体或结合片段与抗Gal3抗体或其结合片段竞争结合至Gal3，其中抗Gal3抗体或其结合片段选自由以下的至少一种组成的组：21H6-H0L0、21H6-H1L1、21H6-H1L2、21H6-H1L3、21H6-H1L4、21H6-H2L1、21H6-H2L2、21H6-H2L3、21H6-H2L4、21H6-H3L1、21H6-H3L2、21H6-H3L3、21H6-H3L4、21H6-H4L1、21H6-H4L2、21H6-H4L3、21H6-H4L4、21H6-H5L1、21H6-H5L2、21H6-H5L3、21H6-H5L4、21H6-H6L1、21H6-H6L2、21H6-H6L3、21H6-H6L4或其结合片段。在一些实施方式中，竞争结合至任何一种或多种前述抗体(任选地，以如本申请实施例中定义的至少80％竞争)的任何抗体(人的、人源化的或非人的)也可在方法中使用。在一些实施方式中，抗体结合至任何一种或多种前述抗体的相同或重叠表位。
图58是描绘治疗受试者的淀粉样蛋白病的方法的实施方式的流程图。
在一些实施方式中，公开了治疗有需要的受试者的淀粉样蛋白病的方法5800。在一些实施方式中，方法包括向受试者施用抗Gal3阻断抗体5801或其结合片段，其中抗Gal3阻断抗体或其结合片段是阻断抗Gal3抗体5802与Gal3结合的阻断抗体；其中抗Gal3阻断抗体或其结合片段与受试者中Gal3的结合5803抑制受试者中Gal3-介导的蛋白质的淀粉样蛋白聚集5804，从而治疗受试者的淀粉样蛋白病5805。在一些实施方式中，淀粉样蛋白病5806包括家族性克雅氏病(CJD)、阿尔茨海默病、CAA、tau蛋白病、路易体病、多系统萎缩、动脉粥样硬化、心血管疾病、神经源性丝氨酸蛋白酶抑制剂包涵体家族性脑病(FENIB)、胰岛素源性淀粉样变性、糖尿病、2型糖尿病、糖尿病型病症、肾脏疾病、朊病毒病、传染性海绵状脑病(TSE)、人全身性淀粉样蛋白疾病、致命性家族性失眠症、格斯特曼-斯特劳斯勒-沙因克病、特发性炎性肌病(IIM)、甲状腺素运载蛋白淀粉样变性、心脏病、先兆子痫、苯丙酮尿症、亨廷顿病、运动神经元变性、脑血管损伤、中风、先天免疫系统破坏、晶状体损伤、视力模糊、充血性心力衰竭(CHF)、心脏淀粉样变性、甲状腺髓样癌(MTC)、骨质疏松症、佩吉特氏病、外周淀粉样变性、肌萎缩侧索硬化症(ALS)、额颞叶变性(FTLD)、高血糖症、轻链淀粉样变性(AL)、共核蛋白病、帕金森氏病、路易体痴呆、进行性核上性麻痹、皮质基底节变性、皮克氏病、TDP-43蛋白病、TTR淀粉样变性(ATTR)、尿调节素-相关肾脏疾病、类风湿性关节炎、炎性关节炎、脊柱关节病、幼年特发性关节炎、强直性脊柱炎、银屑病关节炎、炎性肠病、溃疡性结肠炎、克罗恩病、乳糜泻、血管炎、结节病、家族性地中海热、肿瘤坏死因子受体-相关周期性综合征(TRAPS)、癌症、由淀粉样蛋白聚集促进的衰老或其任意组合。
在一些实施方式中，蛋白质在细胞中。在一些实施方式中，蛋白质包括α-突触核蛋白、tau蛋白、磷酸tau、TAR DNA结合蛋白(TDP-43)、甲状腺素运载蛋白、尿调节素、胰岛淀粉样多肽(IAPP)、血清淀粉样蛋白A(SAA)、p53、载脂蛋白E(APOE)、APOE-4、朊病毒蛋白、纤维蛋白、神经丝轻链(NFL)、CRP、SUMO、轻链、血小板源生长因子受体(PDGFR)、黑色素瘤细胞黏附分子(MCAM)、补体蛋白C3、补体蛋白C9、溶菌酶、胰岛素、天然血红蛋白(Hb)、糖化血红蛋白(HbAIC)、苯丙氨酸(Phe)、谷氨酰胺(Gln)、胆甾醇基(共酯基)、胆固醇、神经源性丝氨酸蛋白酶抑制剂、晶体蛋白AA、晶体蛋白AB、半胱氨酸蛋白酶抑制剂-C、肌生长抑制素前肽、心房钠尿肽(ANP)、B-型钠尿肽(BNP)或其中的任意组合。
在一些实施方式中，抗Gal3阻断抗体或其结合片段阻断下述与Gal-3的结合：TB001、TB006、12G5.D7、13A12.2E5、14H10.2C9、15F10.2D6、19B5.2E6、20D11.2C6、20H5.A3、23H9.2E4、2D10.2B2、3B11.2G2、7D8.2D8、mIMT001、4A11.2B5、4A11.H1L1、4A11.H4L2、4G2.2G6、6B3.2D3、6H6.2D6、9H2.2H10、13G4.2F8、13H12.2F8、15G7.2A7、19D9.2E5、23B10.2B12、24D12.2H9、F846C.1B2、F846C.1F5、F846C.1H12、F846C.1H5、F846C.2H3、F846TC.14A2、F846TC.14E4、F846TC.16B5、F846TC.7F10、F847C.10B9、F847C.11B1、F847C.12F12、F847C.26F5、F847C.4B10、F849C.8D10、F849C.8H3、846.2B11、846.4D5、846T.1H2、847.14H4、846.2D4、846.2F11、846T.10B1、846T.2E3、846T.4C9、846T.4E11、846T.4F5、846T.8D1、847.10C9、847.11D6、847.15D12、847.15F9、847.15H11、847.20H7、847.21B11、847.27B9、847.28D1、847.2B8、847.3B3、849.1D2、849.2D7、849.2F12、849.4B2、849.4F12、849.4F2、849.5C2、849.8D12、F847C.21H6、849.5H1、847.23F11、847.16D10、847.13E2-mH0mI，1、847.13E2-mH0mL2、847.12C4、847.4D3、2D10-VH0-VL0、2D10-hVH4-HVL1、2D10-hVH4-HVL2、2D10-hVH4-HVL3、2D10-hVH4-HVL4、2D10-hVH3-HVL1、2D10-hVH3-HVL2、2D10-hVH3-HVL3、2D10-hVH3-HVL4、20H5.A3-VH3VL1、20H5.A3-VH3VL3、20H5.A3-VH4VL1、20H5.A3-VH5VL1、20H5.A3-VH5VL3、20H5.A3-VH6VL1、20H5.A3-VH6VL3、2D10-VH0-VL0、2D10-hVH4-HVL1、2D10-hVH4-HVL2、2D10-hVH4-HVL3、2D10-hVH4-HVL4、2D10-hVH3-HVL1、2D10-hVH3-HVL2、2D10-hVH3-HVL3、2D10-hVH3-HVL4、21H6-H0L0、21H6-H1L1、21H6-H1L2、21H6-H1L3、21H6-H1L4、21H6-H2L1、21H6-H2L2、21H6-H2L3、21H6-H2L4、21H6-H3L1、21H6-H3L2、21H6-H3L3、21H6-H3L4、21H6-H4L1、21H6-H4L2、21H6-H4L3、21H6-H4L4、21H6-H5L1、21H6-H5L2、21H6-H5L3、21H6-H5L4、21H6-H6L1、21H6-H6L2、21H6-H6L3，和/或21H6-H6L4。在一些实施方式中，竞争结合至任何一种或多种前述抗体(任选地，以如本申请实施例中定义的至少80％竞争)的任何抗体(人的、人源化的或非人的)也可在方法中使用。在一些实施方式中，抗体结合至任何一种或多种前述抗体的相同或重叠表位。
在一些实施方式中，相对于不存在抗Gal3阻断抗体的抗Gal3抗体结合，抗Gal3阻断抗体阻断抗Gal3抗体结合至Gal3约50％、60％、70％、75％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％、或阻断抗Gal3抗体结合至Gal3由任意两个前述值定义的范围。例如，在一些实施方式中，相对于不存在抗Gal3阻断抗体的抗Gal3抗体结合，抗Gal3阻断抗体阻断抗Gal3抗体结合介于约50％和100％、50％和95％、50％和90％、50％和85％、50％和80％、50％和75％、50％和70％、50％和60％、60％和100％、60％和95％、60％和90％、60％和85％、60％和80％、60％和75％、75％和100％、75％和95％、75％和90％、或75％和85％之间。
在一些实施方式中，抗Gal3阻断抗体结合至一个或多个与抗Gal3抗体相同的表位。
在一些实施方式中，相对于不存在抗Gal3阻断抗体的抗Gal3抗体结合，抗Gal3阻断抗体以至少50％、60％、70％、80％、90％、100％效率、或者以由任意两个前述值定义的范围内的效率抑制Gal3-介导的淀粉样蛋白聚集。例如，在一些实施方式中，相对于不存在抗Gal3阻断抗体的抗Gal3抗体结合，抗Gal3阻断抗体的结合以至少50％-100％、50％-90％、50％-80％、50％-70％、或70％-100％效率抑制Gal3-介导的淀粉样蛋白聚集。在一些实施方式中，相对于不存在抗Gal3阻断抗体的抗Gal3抗体结合，抗Gal3阻断抗体以至少1倍、2倍、3倍、4倍、5倍、6倍、7倍、8倍、9倍或10倍效率、或者以由任意两个前述值定义的范围内的效率抑制Gal3-介导的淀粉样蛋白聚集。例如，在一些实施方式中，相对于不存在抗Gal3阻断抗体的抗Gal3抗体结合，抗Gal3阻断抗体的结合以至少1倍至10倍、1倍至7倍、1倍至5倍、1倍-3倍、3倍至10倍、3倍至7倍、3倍至5倍、5倍至10倍、或5倍至7倍效率抑制Gal3-介导的淀粉样蛋白聚集。
在一些实施方式中，相对于不存在抗Gal3阻断抗体的抗Gal3抗体，施用抗Gal3阻断抗体以至少50％、60％、70％、80％、90％、100％效率、或者以由任意两个前述值定义的范围内的效率治疗受试者的Gal3-介导的淀粉样蛋白病。例如，在一些实施方式中，相对于不存在抗Gal3阻断抗体的抗Gal3抗体，施用抗Gal3阻断抗体以至少50％-100％、50％-90％、50％-80％、50％-70％、或70％-100％效率治疗受试者的Gal3-介导的淀粉样蛋白病。在一些实施方式中，相对于不存在抗Gal3阻断抗体的抗Gal3抗体结合，施用抗Gal3阻断抗体以至少1倍、2倍、3倍、4倍、5倍、6倍、7倍、8-fol、9倍或10倍效率、或者以由前述任意两个前述值定义的范围内的效率治疗受试者的Gal3-介导的淀粉样蛋白病。例如，在一些实施方式中，相对于不存在抗Gal3阻断抗体的抗Gal3抗体结合，施用抗Gal3阻断抗体以至少1倍至10倍、1倍至7倍、1倍至5倍、1倍-3倍、3倍至10倍、3倍至7倍、3倍至5倍、5倍至10倍、或5倍至7倍效率治疗受试者的Gal3-介导的淀粉样蛋白病。
蛋白质聚集体组合物和试剂盒
本文还公开了包含蛋白质和Gal3的组合物。在一些实施方式中，Gal3促进组合物中蛋白质的淀粉样蛋白聚集和/或寡聚化。在一些实施方式中，蛋白质和Gal3在水性溶液中，或者被干燥和/或冻干。在一些实施方式中，蛋白质包括α-突触核蛋白、tau蛋白、TDP-43、甲状腺素运载蛋白、尿调节素、胰岛淀粉样多肽(IAPP)、血清淀粉样蛋白A(SAA)、p53、载脂蛋白E(APOE)、APOE-4、朊病毒蛋白、纤维蛋白、或神经丝轻链(NFL)、CRP、SUMO、轻链、血小板源生长因子受体(PDGFR)、黑色素瘤细胞黏附分子(MCAM)、补体蛋白C3和/或C9、溶菌酶、胰岛素、天然血红蛋白(Hb)、糖化血红蛋白(HbAIC)、苯丙氨酸(Phe)、谷氨酰胺(Gln)、胆甾醇基(共酯基)、胆固醇、神经源性丝氨酸蛋白酶抑制剂、晶体蛋白AA和/或晶体蛋白AB、半胱氨酸蛋白酶抑制剂-C、或肌生长抑制素前肽或其任意组合。在一些实施方式中，tau蛋白是4Rtau和/或磷酸化tau(磷酸tau)。在一些实施方式中，磷酸化tau是磷酸-tau(S396)。在一些实施方式中，当与Gal3接触时，磷酸化tau形成三聚体、四聚体或更高级的寡聚体。
本文还公开了包含本文公开的任何组合物(诸如包含蛋白质和Gal3的组合物)的试剂盒。本文提供的组合物和试剂盒可用于研究淀粉样蛋白聚集和/或寡聚化的生物测定，这与各种病理学有关。如本文所证明的，Gal3在比常规方法快得多的时间尺度上促进蛋白质的聚集和/或寡聚化。例如，在一些实施方式中，相对于单独的tau蛋白的自发聚集和/或寡聚化，或当与肝素和/或蛛网膜酸混合时的tau蛋白的自发聚集和/或寡聚化，tau蛋白的淀粉样蛋白聚集和/或寡聚化旨在更快地实现。在一些实施方式中，相对于当在37℃或约37℃下与肝素和/或蛛网膜酸混合时tau蛋白的聚集和/或寡聚化，旨在更快地实现tau蛋白的淀粉样蛋白聚集和/或寡聚化。在一些实施方式中，tau蛋白的淀粉样蛋白聚集和/或寡聚化旨在以不超过0.5、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23或24小时的tau蛋白与Gal3的接触来实现。通过Gal3的tau蛋白的聚集和/或寡聚化比先前的方法(诸如涉及使用肝素和/或蛛网膜酸的方法)发生得更快。本文公开的试剂盒可进一步包括详细说明使用Gal3实现淀粉样蛋白聚集和/或寡聚化的时间范围和温度的说明书。
在一些实施方式中，组合物和试剂盒的蛋白质旨在于约10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44或45℃的温度、或由任意两个前述温度定义的范围内的任意温度与Gal3接触。在一些实施方式中，组合物和试剂盒的蛋白质旨在于体温、37℃、或约37℃与Gal3接触。在一些实施方式中，组合物和试剂盒的蛋白质旨在于体温以下、37℃以下、或约37℃以下与Gal3接触。在一些实施方式中，组合物和试剂盒的蛋白质旨在于室温或约室温与Gal3接触。在一些实施方式中，组合物和试剂盒的蛋白质旨在于约18、19、20、21、22、23或24℃的温度、或由任意两个前述温度定义的范围内的任意温度下与Gal3接触。
因此，本文提供的组合物和试剂盒比形成用于研究的蛋白质聚集体和/或寡聚体的替代方法具有优势。这些组合物和试剂盒可用于研究的疾病提供在本公开中，并且可包括共核蛋白病、帕金森氏病、路易体痴呆症、多系统萎缩、tau蛋白病、阿尔茨海默病、进行性核上性麻痹、皮质基底节变性、皮克氏病、TDP-43蛋白病、肌萎缩侧索硬化症、额颞叶变性、TTR淀粉样变性(ATTR)、心脏淀粉样变性、尿调节素-相关肾脏疾病、IAPP淀粉样变性、SAA淀粉样变性、类风湿性关节炎、炎性关节炎、脊柱关节病、幼年特发性关节炎、强直性脊柱炎、银屑病关节炎、炎性肠病、溃疡性结肠炎、克罗恩病、乳糜泻、血管炎、结节病、家族性地中海热、肿瘤坏死因子受体-相关周期性综合征(TRAPS)、癌症、由淀粉样蛋白聚集促进的衰老或其任意组合。
药物制剂
用于治疗疾病的药物制剂(诸如本文公开的方法的实施方法中的)可包含上文所述的抗Gal3抗体或其结合片段。抗Gal3抗体或其结合片段可被配制用于全身施用。可替选地，抗Gal3抗体或其结合片段可被配制用于肠胃外施用。
在一些实施方式中，抗Gal3抗体或其结合片段被配制为药物组合物，用于通过但不限于肠胃外(例如，静脉内、皮下、肌内、动脉内、皮内、腹膜内、玻璃体内、脑内或脑室内)、口、鼻内、口腔、直肠或经皮施用途径施用。在一些情况下，本文描述的药物组合物被配制用于肠胃外(例如，静脉内、皮下、肌内、动脉内、皮内、腹膜内、玻璃体内、脑内或脑室内)施用。在其他情况下，本文描述的药物组合物被配制用于全身施用。在其他情况下，本文描述的药物组合物被配制用于口服施用。在仍其他情况下，本文描述的药物组合物被配制用于鼻内施用。
在一些情况下，药物组合物进一步包括pH调节剂或缓冲剂，其包括酸，诸如乙酸、硼酸、柠檬酸、乳酸、磷酸和盐酸；碱，诸如氢氧化钠、磷酸钠、硼酸钠、柠檬酸钠、乙酸钠、乳酸钠和三羟甲基氨基甲烷；以及缓冲剂，诸如柠檬酸盐/右旋糖、碳酸氢钠和氯化铵。此类酸、碱和缓冲剂以将组合物的pH维持在可接受的范围内所需的量被包含。
在一些情况下，药物组合物包括使组合物的渗透压为可接受范围所需的量的一种或多种盐。这种盐包括具有钠、钾或铵阳离子和氯化物、柠檬酸盐、抗坏血酸盐、硼酸盐、磷酸盐、碳酸氢盐、硫酸盐、硫代硫酸盐或亚硫酸氢盐阴离子的盐；合适的盐包括氯化钠、氯化钾、硫代硫酸钠、亚硫酸氢钠和硫酸铵。
在一些情况下，药物组合物进一步包括用于稳定化合物的稀释剂，因为它们可以提供更稳定的环境。溶解在缓冲溶液中的盐(其也可以提供pH控制或维持)在本领域中用作稀释剂，包括但不限于磷酸盐缓冲盐水溶液。在某些情况下，稀释剂增加组合物的体积以促进压缩或产生足够的体积以用于胶囊填充的均质共混物。这种化合物包括例如，乳糖、淀粉、甘露醇、山梨糖醇、右旋糖、微晶纤维素比如磷酸氢钙，磷酸二钙二水合物；磷酸三钙、磷酸钙；无水乳糖、喷雾干燥乳糖；预糊化淀粉、可压缩糖，比如(Amstar)；甘露醇、羟丙基甲基纤维素、醋酸硬脂酸羟丙基甲基纤维素、蔗糖基稀释剂、糖果糖；一水一碱式硫酸钙、二水硫酸钙；三水乳酸钙，葡萄糖结合剂；水解谷物固体，直链淀粉；粉状纤维素、碳酸钙；甘氨酸、高岭土；甘露醇、氯化钠；肌醇、膨润土等。
在一些实施方式中，药物制剂包括但不限于水性液体分散体、自乳化分散体、固溶体、脂质体分散体、气雾剂、固体剂型、粉剂、速释制剂、控释制剂、快速熔融制剂、片剂、胶囊、丸剂、缓释制剂、延长释放制剂、脉冲释放制剂、多颗粒制剂(例如，纳米颗粒制剂)以及混合的速释和控释制剂。
治疗方案
在一些实施方式中，施用本文公开的抗Gal3抗体或其结合片段用于治疗性应用，诸如本文公开的方法的实施方式中。在一些实施方式中，抗Gal3抗体或其结合片段每天一次、每天两次、每天三次或更多次施用。抗Gal3抗体或其结合片段每日、每天、每隔一天、每周五天、每周一次、每隔一周、每月两周、每月三周、每月一次、每月两次、每月三次或更多次施用。在一些实施方式中，抗Gal3抗体或其结合片段施用至少1个月、2个月、3个月、4个月、5个月、6个月、7个月、8个月、9个月、10个月、11个月、12个月、18个月、2年、3年或更长。
在患者状态确实改善的情况下，根据医生的判断，继续给予抗Gal3抗体或其结合片段；可替选地，正在施用的抗Gal3抗体或其结合片段的剂量被暂时降低或暂时暂停一段时间长度(即“休药期”)。在一些情况下，休药期的长度在2天和1年之间变化，仅作为示例包括2天、3天、4天、5天、6天、7天、10天、12天、15天、20天、28天、35天、50天、70天、100天、120天、150天、180天、200天、250天、280天、300天、320天、350天或365天。在休药期期间的剂量降低为10％-100％，仅通过示例包括10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％或100％。
一旦患者的病症出现改善，必要时施用维持剂量。随后，由于症状的作用，将施用的剂量或频率或二者降低至维持治疗的疾病、紊乱或病症的水平。
在一些实施方式中，对应于这种量的给定试剂的量取决于比如具体化合物、疾病的严重程度、需要治疗的受试者或宿主的特征(例如，体重)的因素，但是然而，根据围绕病例的具体情况以本领域已知的方式常规地确定，包括例如正施用的特定药剂、施用途径和正被治疗的受试者或宿主。在一些情况下，所需剂量方便地以单一剂量或作为同时(或在短时间内)或以适当间隔，例如作为每天两个、三个、四个或更多个子剂量(sub-dose)施用的分开剂量提供。
前述范围仅是建议性的，因为关于个体治疗方案的变量数量很大，并且与这些推荐值的相当大的偏移并且不少见。这种剂量取决于许多变量而改变，不限于使用的化合物的活性、待治疗的疾病或病症、施用方式、个体受试者的要求、正治疗的疾病或病症的严重性，以及从业者的判断。
在一些实施方式中，这种治疗性方案的毒性和治疗效力通过细胞培养或实验动物中的标准药物程序确定，包括但不限于LD50(对50％群体致死的剂量)和ED50(在50％的群体中治疗有效的剂量)。毒性作用与治疗作用之间的剂量比是治疗指数，并且用LD50和ED50之间的比表达。优选展示出高治疗指数的化合物。从细胞培养测定和动物研究中获得的数据用于制定一系列用于人的剂量。这种化合物的剂量优选地位于以最小毒性包括ED 50的循环浓度范围内。剂量在该范围内变化，这取决于所采用的剂型和所利用的施用途径。
多核苷酸和载体
在一些实施方式中，本公开提供了编码本文公开的任何抗Gal3抗体或其结合片段的分离的核酸。在另一实施方式中，本公开提供了包括编码本文公开的任何抗Gal3抗体或其结合片段的核酸序列的载体。在一些实施方式中，本公开提供了编码本文公开的抗Gal3抗体或其结合片段的重链可变区、轻链可变区、重链或轻链的分离的核酸。
在一些实施方式中，编码重链可变区的核酸序列描绘在图21中(SEQ ID NO：539-620、797、866-880、1011-1024、1239-1281、1515-1539)。在一些实施方式中，编码轻链可变区的核酸序列描绘在图22中(SEQ ID NO：621-702、798、881-895、1025-1038、1282-1324、1540-1564)。在一些实施方式中，编码重链的核酸序列描绘在图23中(SEQ ID NO：703-749、799、896-910、1039-1052、1325-1367、1565-1589)。在一些实施方式中，编码轻链的核酸序列描绘在图24中(SEQ ID NO：750-796、800、911-925、1053-1066、1368-1410、1590-1614)。在一些实施方式中，本文提供的任何组合物或方法可包括由本文提供的核酸编码的一种或多种抗体组分。
本文所述的任何一种抗Gal3抗体或其结合片段可以通过重组DNA技术、合成化学技术或其组合来制备。例如，使用本领域已知的标准分子技术，通常将编码抗Gal3抗体的所需组分，包括轻链CDR和重链CDR的序列组装克隆至表达载体中。这些序列可以从编码所需蛋白质序列的其他载体、从使用各自的模板核酸的PCR生成的片段或通过编码所需序列的合成寡核苷酸的组装来组装。表达系统可以通过用包括感兴趣的抗Gal3抗体或其结合片段的表达载体转染合适的细胞来创建。
使用常规技术包括但不限于杂交、PCR和DNA测序，可以容易地获得和测序对应于现有抗体的轻链或重链的各种区域的核苷酸序列。产生单克隆抗体的杂交瘤细胞用作抗体核苷酸序列的优选的来源。大量产生一系列单克隆抗体的杂交瘤细胞可以从公共或私人储存库中获得。最大的保藏机构是美国模式培养物保藏所，其提供了多样化的特征明确的杂交瘤细胞系的收集。可替选地，抗体核苷酸可以从免疫或未免疫的啮齿动物或人获得，并且形成器官比如脾和外周血液淋巴细胞。适用于提取和合成抗体核苷酸的具体技术在Orlandi等(1989)Proc.NatL.Acad.Sci.U.S.A 86：3833-3837；Larrick等(1989)Biochem.Biophys.Res.Commun.160：1250-1255；Sastry等(1989)Proc.NatL.Acad.Sci.，U.S.A.86：5728-5732和美国专利号5,969,108中描述。
编码抗Gal3抗体或其结合片段的多核苷酸也可以被修饰，例如，通过人重链和轻链恒定区的编码序列代替同源非人序列来置换。在这种方式中，制备了保留原始抗Gal3抗体或其结合片段的结合特异性的嵌合抗体。
本文还公开了产生抗Gal3抗体或其结合片段的方法。在一些实施方式中，方法包括在细胞中表达编码抗Gal3抗体或其结合片段的核酸，并从细胞分离表达的抗Gal3抗体或其结合片段。在一些实施方式中，方法进一步包括将抗Gal3抗体或其结合片段浓缩至所需浓度。在一些实施方式中，细胞是哺乳动物细胞、昆虫细胞或细菌细胞。在一些实施方式中，抗Gal3抗体或其结合片段是本文公开的抗Gal3抗体或结合片段中的任一个。在细胞中表达抗体和分离所表达的抗体的具体程序是常规已知的并且可以由本领域技术人员实践。
抗体产生
在一些情况中，抗Gal3抗体或其结合片段通过标准方案通过用抗原组合物注入生产动物来产生。参见，例如，HarLow和Lane，Antibodies：A Laboratory ManuaL，CoLdSpring Harbor Laboratory，1988。当利用整个蛋白质或蛋白质的较大部分时，抗体可以通过用蛋白质和合适的佐剂(例如，弗氏、弗氏完全、水包油乳液等)免疫生产动物来产生。当利用较小的肽时，将肽与较大的分子缀合以制备免疫刺激缀合物是有利的。商业上可获得的用于这种用途的常用缀合蛋白包括牛血清白蛋白(BSA)和匙孔血蓝蛋白(KLH)。为了产生针对特定表位的抗体，可以利用源自完整序列的肽。可替选地，为了产生针对蛋白质靶的相对短的肽部分的抗体，如果将多肽连接至载体蛋白，比如卵白蛋白、BSA或KLH，则可以引起优异的免疫应答。
多克隆或单克隆抗Gal3抗体或其结合片段可以从已经基因改变以产生人免疫球蛋白的动物产生。转基因动物可以通过最初产生不产生动物的天然抗体的“敲除”动物，并且用人抗体基因座稳定转化动物(例如，通过使用人的人工染色体)来产生。在这种情况下，然后通过动物仅制造人抗体。用于产生这种动物并且从其中衍生抗体的技术在美国专利号6,162,963和6,150,584中描述，各自通过引用以其整体完全并入本文。这种抗体可称为人异种抗体。
可替选地，抗Gal3抗体或其结合片段可以从含有人可变区的噬菌体文库产生。参见美国专利号6,174,708，通过引用以其整体完全并入本文。
在本文公开的任何实施方式的一些方面中，抗Gal3抗体或其结合片段由杂交瘤产生。
对于单克隆抗Gal3抗体，可以通过分离刺激的免疫细胞，比如来自接种动物的脾的那些来形成杂交瘤。然后这些细胞可融合至永生细胞，比如骨髓瘤细胞或转化细胞，其能够在细胞培养物中无限地复制，从而产生永生化的分泌免疫球蛋白的细胞系。利用的永生细胞系可被选择为缺乏利用某些营养素所必需的酶。许多这种细胞系(比如骨髓瘤)是本领域技术人员已知的，并且包括，例如：胸苷激酶(TK)或次黄嘌呤-鸟嘌呤磷酸基转移酶(HGPRT)。这些缺陷允许根据它们在例如次黄嘌呤氨基蝶呤胸苷培养基(HAT)上的生长能力来选择融合细胞。
另外，抗Gal3抗体或其结合片段可以通过基因工程化产生。
本文公开的抗Gal3抗体或其结合片段可具有降低的诱导人中非期望的免疫应答的倾向，例如，过敏性休克，并且还可展示出引发将防止用抗体治疗剂或显像剂重复剂量的免疫应答(例如，人-抗-鼠-抗体“HAMA”应答)的降低的倾向。这种抗Gal3抗体或其结合片段包括但不限于人源化、嵌合或异种人抗Gal3抗体或其结合片段。
嵌合抗Gal3抗体或其结合片段可以，例如，通过将从鼠(或其他动物来源的)杂交瘤克隆获得的鼠可变轻链和重链区(VK和VH)与人恒定轻链和重链区组合以便产生主要地具有人结构域的抗体的重组方式制备。这种嵌合抗体的产生是本领域熟知的，并且可以通过标准方式实现(如，例如在美国专利号5,624,659中描述的，通过引用完全并入本文)。
适用于非人(例如啮齿动物或灵长类动物)抗体的术语“人源化”是杂交免疫球蛋白、免疫球蛋白链或其片段，其含有源自非人免疫球蛋白的最少序列。在大多数情况下，人源化抗体是人免疫球蛋白(受体抗体)，其中来自受体的互补决定区(CDR)的残基被来自具有所需特异性、亲和力和能力的非人物种(供体抗体)比如小鼠、大鼠、兔子或灵长类动物的CDR的残基取代。在一些情况中，人免疫球蛋白的Fv框架区(FR)残基被相应的非人残基取代。此外，人源化抗体可包括既不在受体抗体中也不在输入的CDR或框架序列中发现的残基。进行这些修饰进一步改进和优化抗体性能并且最小化当引入人体时的免疫原性。在一些示例中，人源化抗体将包括基本上所有的至少一个，并且通常两个可变区，其中所有或基本上所有的CDR区对应于非人免疫球蛋白的那些并且所有或基本上所有的FR区是人免疫球蛋白序列的那些。人源化抗体还可包括免疫球蛋白恒定区(Fc)的至少一部分，通常是人免疫球蛋白的那些。
可以工程化人源化抗体以含有人样免疫球蛋白结构域，并且仅并入动物源性抗体的互补决定区。这可以通过仔细检查单克隆抗原结合单位或单克隆抗体的可变区的高变环的序列，并且将它们与人抗原结合单位或人抗体链的结构相匹配来完成。参见，例如，美国专利号6,187,287，通过引用完全并入本文。
用于人源化非人抗体的方法是本领域熟知的。“人源化”抗体是其中至少一部分序列已经从其初始形式改变以使其更像人免疫球蛋白的抗体。在一些版本中，重(H)链和轻(L)链恒定(C)区用人序列取代。这可以是包括可变(V)区和异源免疫球蛋白C区的融合多肽。在一些版本中，互补决定区(CDR)包括非人抗体序列，而V框架区也已转化为人序列。参见，例如，EP 0329400。在一些版本中，V区通过设计人和小鼠V区的共有序列并且转换共有序列之间不同的CDR之外的残基来人源化。
原则上，来自人源化抗体的框架序列可用作CDR移植的模板；然而，已经表明直接将CDR取代入这种框架中会导致对抗原的结合亲和力的显著丧失。GLaser等(1992)J.ImmunoL.149：2606；Tempest等(1992)BiotechnoLogy 9：266和ShaLaby等(1992)J.Exp.Med.17：217。人抗体(HuAb)与原始鼠抗体(muAb)的同源性越高，人框架将更不可能将可降低亲和力的畸变(distortions)引入鼠CDR。基于针对抗体序列数据库的序列同源性搜索，HuAb IC4为muM4TS.22提供了良好的框架同源性，尽管其他高度同源的HuAb也将适用，尤其是来自人亚组I的κL链或来自人亚组III的H链。Kabat等(1987)。各种计算机程序比如ENCAD(Levitt等(1983)J.MoL.BioL.168：595)可以用来预测V区的理想序列。本公开因此涵盖具有不同可变(V)区的HuAb。确定合适的V区序列并且优化这些序列在本领域技术人员的技能内。获得具有降低的免疫原性的抗体的方法也描述于美国专利号5,270,202和EP699,755，各自通过引用以其整体并入本文。
人源化抗体可以通过使用亲本和人源化序列的三维模型分析亲本序列和各种概念性人源化产物的过程来制备。三维免疫球蛋白模型是本领域技术人员熟悉的。可获得的计算机程序来阐释和显示选定的候选免疫球蛋白序列的可能的三维构象结构。检查这些显示允许分析残基在候选免疫球蛋白序列的功能中的可能作用，即，分析残基影响候选免疫球蛋白结合其抗原的能力。这样，可以从共有序列和输入序列中选择和组合FR残基，从而实现期望的抗体特征，比如对靶抗原的亲和力增加。
用于人源化受试者抗原结合单元的过程可以如下。基于用于移植的人抗体种系的同源性、规范结构和物理性质选择最适合的种系受体重链和轻链可变区。进行mVH/VL与移植hVH/VL的计算机建模，并且生成原型人源化抗体序列。如果建模指示需要框架回复突变，则生成具有指示的FW改变的第二变体。合成编码选定种系框架和鼠CDR的DNA片段。合成的DNA片段被亚克隆至IgG表达载体中，并且通过DNA测序确认序列。人源化抗体在细胞，比如293F中表达，并且测试蛋白质，例如在MDM吞噬测定和抗原结合测定中。将人源化抗原结合单位与亲本抗原结合单位的抗原结合亲和力比较，例如，通过对表达靶抗原的细胞进行FACS。如果亲和力比亲本抗原结合单位低2倍以上，则可以如上所述生成和测试第二轮人源化变体。
如上所述，抗Gal3抗体或其结合片段可以是“单价的”或“多价的”。然而前者每个抗原结合单元具有一个结合位点，后者包含能够结合多于一个相同或不同种类的抗原的多个结合位点。根据结合位点的数量，抗原结合单元可以是二价的(具有两个抗原结合位点)、三价的(具有三个抗原结合位点)、四价的(具有四个抗原结合位点)等。
多价抗Gal3抗体或其结合片段可基于它们结合特异性进一步分类。“单特异性”抗Gal3抗体或其结合片段是能够结合至相同种类的一种或多种抗原的分子。“多特异性”抗Gal3抗体或其结合片段是对至少两种不同抗原具有结合特异性的分子。虽然这种分子通常仅将结合两种不同的抗原(即双特异性抗Gal3抗体)，但在本文中使用时，具有另外特异性的抗体诸如三特异性抗体也被该表达涵盖。本公开进一步提供了多特异性抗Gal3抗体。多特异性抗Gal3抗体或其结合片段是能够结合至少两种不同抗原的多价分子，例如，分别展示出对两种和三种不同抗原的结合特异性的双特异性和三特异性分子。
在一些实施方式中，方法进一步提供筛选或鉴定能够破坏Gal3与靶蛋白之间的相互作用的抗体或其结合片段。在一些方面中，方法可包括：(a)将Gal3蛋白与选择性结合至Gal3的抗体或其结合片段接触，从而形成Gal3-抗体复合物；(b)将Gal3-抗体复合物与靶蛋白接触；(c)去除未结合的靶蛋白；(d)检测结合至Gal3-抗体复合物的靶蛋白，其中当在(d)中未检测到靶蛋白时，抗体或其结合片段能够破坏Gal3与靶蛋白的相互作用。在一些情况下，方法包括免疫测定。在一些情况下，免疫测定是酶联免疫吸附测定(ELISA)。
宿主细胞
在一些实施方式中，本公开提供了表达本文公开的任何一种抗Gal3抗体或其结合片段的宿主细胞。受试者宿主细胞通常包括编码本文公开的任何一种抗Gal3抗体或其结合片段的核酸。
本公开提供了用以上所述的多核苷酸、载体或载体文库转染的宿主细胞。可以通过许多适当的方式的任意一种，包括电穿孔、微弹轰击；脂质转染、感染(其中载体与致病原偶联)、采用氯化钙、氯化铷、磷酸钙、DEAE-葡聚糖或其他物质的转染，将载体引入合适的原核或真核细胞。引入载体的方法的选择通常将取决于宿主细胞的特征。
对于大多数动物细胞，任何以上提到的方法都适合于载体递送。优选的动物细胞是脊椎动物细胞，优选地哺乳动物细胞，其能够大量，例如，以毫克水平表达外源引入的基因产物。优选的细胞的非限制性示例是NIH3T3细胞、COS、HeLa和CHO细胞。
一旦引入至合适的宿主细胞，抗Gal3抗体或其结合片段的表达可以使用本领域已知的任何核酸或蛋白质测定来确定。例如，轻链CDR或重链CDR或抗Gal3抗体或其结合片段的转录mRNA的存在可以通过常规杂交测定(例如Northern印迹分析)、扩增程序(例如RT-PCR)、SAGE(美国专利号5,695,937)和基于阵列的技术(参见例如美国专利号5,405,783、5,412,087和5,445,934)，使用与编码抗Gal3抗体或其结合片段的多核苷酸的任何区域互补的探针来检测和/或量化。
载体的表达还可以通过检查表达的抗Gal3抗体或其结合片段来确定。本领域可获得用于蛋白质分析的各种技术。它们包括但不限于放射免疫测定、ELISA(酶联免疫放射测定)、“夹心”免疫测定、免疫放射测定、原位免疫测定(使用例如，胶体金、酶或放射性同位素标记)、蛋白质印迹分析、免疫沉淀测定、免疫荧光测定和SDS-PAGE。
载荷
在一些实施方式中，本文公开的任何抗Gal3抗体进一步包括载荷。在一些情况下，载荷包括小分子、蛋白质或其功能片段、肽或核酸聚合物。
在一些情况下，与抗Gal3抗体缀合的载荷的数量(例如，药物与抗体比例或DAR)是约1∶1，一种载荷对一种抗Gal3抗体。在一些情况下，载荷与抗Gal3抗体的比例是约2∶1、3∶1、4∶1、5∶1、6∶1、7∶1、8∶1、9∶1、10∶1、11∶1、12∶1、13∶1、14∶1、15∶1、16∶1、17∶1、18∶1、19∶1或20∶1。在一些情况下，载荷与抗Gal3抗体的比例是约2∶1。在一些情况下，载荷与抗Gal3抗体的比例是约3∶1。在一些情况下，载荷与抗Gal3抗体的比例是约4∶1。在一些情况下，载荷与抗Gal3抗体的比例是约6∶1。在一些情况下，载荷与抗Gal3抗体的比例是约8∶1。在一些情况下，载荷与抗Gal3抗体的比例是约12∶1。
在一些实施方式中，载荷是小分子。在一些情况下，小分子是细胞毒素载荷。示例性细胞毒素载荷包括但不限于微管破坏剂、DNA修饰剂或Akt抑制剂。
在一些实施方式中，载荷包括微管破坏剂。示例性微管破坏试剂包括但不限于2-甲氧基雌二醇、澳瑞他汀(auristatin)、查尔酮、秋水仙碱、考布他汀、念珠藻素(cryptophycin)、dictyostatin、盘皮海绵内酯、dolastain、软珊瑚醇、埃博霉素、软海绵素、莱利霉素(laulimalide)、美登素、noscapaxin、紫杉醇、peloruside、拟茎点霉毒素(phomopsin)、鬼臼毒素、根瘤素、海绵抑制素、紫杉烷、tubulysin、长春花生物碱、长春瑞滨或其衍生物或类似物。
在一些实施方式中，美登素是美登木素生物碱。在一些实施方式中，美登木素生物碱是DM1、DM4或安丝菌素。在一些实施方式中，美登木素生物碱是DM1。在一些实施方式中，美登木素生物碱是DM4。在一些实施方式中，美登木素生物碱是安丝菌素。在一些实施方式中，美登木素生物碱是美登木素生物碱衍生物或类似物，比如描述在美国专利号5208020、5416064、7276497和6716821或美国公开号2013029900和US20130323268中的。
在一些实施方式中，载荷是海兔毒素，或其衍生物或类似物。在一些实施方式中，海兔毒素是海兔毒素10或海兔毒素15，其或衍生物或类似物。在一些实施方式中，海兔毒素10类似物是澳瑞他汀、soblidotin、symplostatin 1或symplostatin 3。在一些实施方式中，海兔毒素15类似物是西马多丁或他西多丁。
在一些实施方式中，海兔毒素10类似物是澳瑞他汀或澳瑞他汀衍生物。在一些实施方式中，澳瑞他汀或澳瑞他汀衍生物是澳瑞他汀E(AE)、澳瑞他汀F(AF)、澳瑞他汀E5-苯甲酰基戊酸酯(AEVB)、一甲基澳瑞他汀E(MMAE)、一甲基澳瑞他汀F(MMAF)或一甲基澳瑞他汀D(MMAD)、澳瑞他汀PE或澳瑞他汀PYE。在一些实施方式中，澳瑞他汀衍生物是一甲基澳瑞他汀E(MMAE)。在一些实施方式中，澳瑞他汀衍生物是一甲基澳瑞他汀F(MMAF)。在一些实施方式中，澳瑞他汀是澳瑞他汀衍生物或类似物，比如在美国专利号6884869、7659241、7498298、7964566、7750116、8288352、8703714和8871720中描述的。
在一些实施方式中，载荷包括DNA修饰剂。在一些实施方式中，DNA修饰剂包括DNA切割剂、DNA嵌入剂、DNA转录抑制剂或DNA交联剂。在一些情况下，DNA切割剂包括博来霉素A2、加利车霉素或其衍生物或类似物。在一些情况下，DNA嵌入剂包括多柔比星、表柔比星、PNU-159682、多米卡新、吡咯并且苯二氮卓、寡霉素C、柔红霉素、戊柔比星、拓扑替康或其衍生物或类似物。在一些情况下，DNA转录抑制剂包括更生霉素。在一些情况下，DNA交联剂包括丝裂霉素C。
在一些实施方式中，DNA修饰剂包括安吖啶、蒽环霉素、喜树碱、多柔比星、多米卡新、烯二炔、依托泊苷、吲哚并且苯二氮卓、纺锤菌素、替尼泊苷或其衍生物或类似物。
在一些实施方式中，蒽环霉素是多柔比星、柔红霉素、表柔比星、伊达比星、丝裂霉素-C、更生霉素、光辉霉素、奈莫柔比星、匹蒽醌、沙巴比星或戊柔比星。
在一些实施方式中，喜树碱的类似物是拓扑替康、依立替康、西拉替康、科西替康、依沙替康、勒托替康、吉马替康、贝洛替康、鲁比替康或SN-38。
在一些实施方式中，多米卡新是多米卡新A、多米卡新B1、多米卡新B2、多米卡新C1、多米卡新C2、多米卡新D、多米卡新SA或CC-1065。在一些实施方式中，烯二炔是加利车霉素、埃斯帕霉素或达内霉素A。
在一些实施方式中，吡咯并且苯二氮卓是蒽霉素、赤霉素、契卡霉素、DC-81、甲基氨茴霉素(mazethramycin)、新茴霉素(neothramycins)A、新茴霉素B、porothramycin、prothracarcin、sibanomicin(DC-102)、西伯霉素或茅屋霉素。在一些实施方式中，吡咯并且苯二氮卓是茅屋霉素衍生物，比如在美国专利号8404678和8163736中描述的。在一些实施方式中，吡咯并且苯二氮卓是比如在美国专利号8426402、8802667、8809320、6562806、6608192、7704924、7067511、US7612062、7244724、7528126、7049311、8633185、8501934和8697688和美国公开号US20140294868中描述的。
在一些实施方式中，吡咯并且苯二氮卓是吡咯并且苯二氮卓二聚体。在一些实施方式中，PBD二聚体是对称的二聚体。对称的PBD二聚体的示例包括但不限于SJG-136(SG-2000)、ZC-423(SG2285)、SJG-720，SJG-738、ZC-207(SG2202)和DSB-120。在一些实施方式中，PBD二聚体是非对称的二聚体。非对称的PBD二聚体的示例包括但不限于SJG-136衍生物，比如在美国专利号8697688和9242013和美国公开号20140286970中描述的。
在一些实施方式中，载荷包括Akt抑制剂。在一些情况下，Akt抑制剂包括ipatasertib(GDC-0068)或其衍生物。
在一些实施方式中，载荷包括聚合酶抑制剂，包括但不限于聚合酶II抑制剂比如a-鹅膏菌素和聚(ADP-核糖)聚合酶(PARP)抑制剂。示例性PARP抑制剂包括但不限于Iniparib(BSI 201)、他拉唑帕尼(BMN-673)、奥拉帕尼(AZD-2281)、奥拉帕尼、鲁卡帕尼(AG014699、PF-01367338)、维利帕尼(ABT-888)、CEP 9722、MK 4827、BGB-290或3-氨基苯甲酰胺。
在一些实施方式中，载荷包括可检测部分。如本文使用的，“可检测部分”可包括用于诊断、检测或可视化靶分子、细胞、组织、器官等的位置和/或数量的原子、分子或化合物。可按照本文实施方式使用的可检测部分包括但不限于放射性物质(例如放射性同位素、放射性核素、放射性标记或放射性示踪剂)、染料、造影剂、荧光化合物或分子、生物发光化合物或分子、酶和增强剂(例如顺磁性离子)或特异性结合部分比如链霉抗生物素、亲和素或生物素。另外，一些纳米颗粒，例如量子点或金属纳米粒子可以适合用作可检测部分。
按照本文实施方式可用作可检测部分的示例性放射性物质包括但不限于18F、18F-FAC、32P、33P、45Ti、47Sc、52Fe、59Fe、62Cu、64Cu、67Cu、67Ga、68Ga、75Sc、77As、86Y、90Y、89Sr、89Zr、94Tc、94Tc、99mTc、99Mo、105Pd、105Rh、111Ag、111In、123I、124I、125I、131I、142Pr、143Pr、149Pm、153Sm、154-158Gd、161Tb、166Dy、166Ho、169Er、175Lu、177Lu、186Re、188Re、189Re、194Ir、198Au、199Au、211At、211Pb、212Bi、212Pb、213Bi、223Ra和225Ac。可用作可检测的标志物的示例性顺磁性离子物质包括但不限于过渡金属和镧系金属的离子(例如具有6至9、21-29、42、43、44或57-71的原子序数的金属)。这些金属包括Cr、V、Mn、Fe、Co、Ni、Cu、La、Ce、Pr、Nd、Pm、Sm、Eu、Gd、Tb、Dy、Ho、Er、Tm、Yb和Lu的离子。
当可检测的标志物是放射性金属或顺磁性离子时，在一些实施方式中，标志物可以与具有长尾的试剂反应，所述长尾具有一个或多个附着至长尾的螯合基团以结合这些离子。长尾可以是聚合物比如聚赖氨酸、多糖或其他具有侧基的衍生的或可衍生的链，所述侧基可以结合至螯合基团以结合离子。可根据本文实施方式使用的螯合基团的示例包括但不限于乙二胺四乙酸(EDTA)、二亚乙基三胺五乙酸(DTPA)、DOTA、NOTA、NOGADA、NETA、去铁胺(DfO)、卟啉、聚胺、冠醚、双缩氨基硫脲、聚肟等基团。螯合物可以通过基团连接至抗原结合构建体，所述基团允许与分子形成键，而免疫反应性损失最小，并且聚集和/或内部交联最小。当与本文所述的抗原结合构建体和载体一起使用时，相同的螯合物在与非放射性金属比如锰、铁和钆复合时可用于MRI。大环螯合物比如NOTA、NOGADA、DOTA和TETA分别可用于各种金属和放射性金属，包括但不限于镓、钇和铜的放射性核素。可以使用对稳定结合放射性核素比如用于RAIT的镭-223感兴趣的其他环状型螯合物，比如大环聚醚。在某些实施方式中，螯合部分可用于将PET显像剂比如铝-18F复合物，连接至用于PET分析的靶向分子。
按照本公开的实施方式可用作可检测部分的示例性造影剂包括但不限于钡、泛影酸盐、乙碘化油、柠檬酸镓、碘卡酸、碘西他酸、碘酰胺、胆影酸、碘沙酸、iogulamide、己基碘(iohexyl)、碘帕醇、碘番酸、碘普西酸、碘西法酸、碘丝酸、碘砜葡胺、iosemetic acid、碘酞硫、碘替酸、碘他拉酸、碘托西酸、碘克沙酸、羟泛影酸、碘泊酸盐、葡甲胺、甲泛葡胺、甲泛影酸盐、丙碘酮、氯化亚铊或其组合。
按照本公开的实施方式可用作可检测部分的生物荧光和荧光化合物或分子和染料包括但不限于荧光素、荧光素异硫氰酸酯(FITC)、OREGON GREENTM、若丹明、德克萨斯红、四罗丹明异硫氰酸酯(TRITC)、Cy3、Cy5等)、荧光标志物(例如，绿色荧光蛋白(GFP)、藻红蛋白等)、由肿瘤相关蛋白酶激活的自猝灭荧光化合物、酶(例如，荧光素酶、辣根过氧化物酶、碱性磷酸酶等)、纳米颗粒、生物素、地高辛或其组合。
按照本公开的实施方式可用作可检测部分的酶包括但不限于辣根过氧化物酶、碱性磷酸酶、酸性磷酸酶、葡萄糖氧化酶、β-半乳糖苷酶、β-葡糖苷酸酶或β-内酰胺酶。这种酶可与色原、荧光化合物或发光化合物组合使用以产生可检测的信号。
在一些实施方式中，载荷是纳米颗粒。术语“纳米颗粒”是指其尺寸以纳米度量的微观颗粒，例如，具有至少一个小于约100nm的维度的颗粒。纳米颗粒可用作可检测物质，因为它们足够小，以散射可见光而不是吸收可见光。例如，金纳米颗粒拥有显著的可见光消光性质，并且在溶液中以深红色至黑色呈现。结果，包括缀合至纳米颗粒的抗原结合构建体的组合物可用于受试者T细胞的体内成像。在尺寸范围小的一端，纳米颗粒通常被称为簇。已经形成了金属、电介质和半导体纳米颗粒，以及混合结构(例如核壳纳米颗粒)。纳米球、纳米棒和纳米杯只是已经形成的几种形状。半导体量子点和纳米晶体是其他类型的纳米颗粒的示例。这种纳米级颗粒可用作缀合至本文公开的任何一种抗Gal3抗体的载荷。
在一些实施方式中，载荷包括免疫调节剂。有用的免疫调节剂包括阻断激素对肿瘤作用的抗激素和抑制细胞因子产生、下调自身抗原表达或掩盖MHC抗原的免疫抑制剂。代表性的抗激素包括抗雌激素，包括例如它莫西芬、雷洛昔芬、抑制4(5)-咪唑的芳香酶、4-羟基他莫昔芬、曲沃昔芬、雷洛西芬、LY 117018、奥那司酮(onapnstone)和托瑞米芬；和抗雄激素比如氟他胺、尼鲁米特、比卡鲁胺、亮丙瑞林、戈舍瑞林；和抗肾上腺剂。阐释性免疫抑制剂包括但不限于2-氨基-6-芳基-5-取代的嘧啶、硫唑嘌呤、环磷酰胺、溴隐亭、达那唑、氨苯砜、戊二醛、针对MHC抗原和MHC片段的抗独特型抗体、环孢菌素A、类固醇比如糖皮质激素、链激酶或雷帕霉素。
在一些实施方式中，载荷包括免疫调节剂。示例性免疫调节剂包括但不限于更昔韦洛(gancyclovier)、依那西普、他克莫司、西罗莫司、伏环孢素、环孢菌素、雷帕霉素、环磷酰胺、硫唑嘌呤、吗替麦考酚酯(mycophenolgate mofetil)、甲氨蝶呤(methotrextrate)、糖皮质激素及其类似物、黄嘌呤、干细胞生长因子、淋巴毒素、造血因子、肿瘤坏死因子(TNF)(例如TNFα)、白细胞介素(例如，白细胞介素-1(IL-1)、IL-2、IL-3、IL-6、IL-10、IL-12、IL-18和IL-21)、集落刺激因子(例如，粒细胞集落刺激因子(G-CSF)和粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF))、干扰素(例如干扰素-α、干扰素-β、干扰素-γ)、被称为“S1因子”的干细胞生长因子、促红细胞生成素和血小板生成素或其组合。
在一些实施方式中，载荷包括免疫毒素。免疫毒素包括但不限于蓖麻毒蛋白、放射性核素、商陆抗病毒蛋白、假单胞菌外毒素A、白喉毒素、蓖麻蛋白A链、真菌毒素比如限制性蛋白和磷脂酶。一般而言，参见“Chimeric Toxins”，OLsnes和PihL，Pharmac.Ther.15：355-381(1981)和“MonocLonaL Antibodies用于Cancer Detection and Therapy，”eds.BaLdwin和Byers，第159-179、224-266页，Academic Press(1985)。
在一些情况下，载荷包括核酸聚合物。在这种情况下，核酸聚合物包括短干扰核酸(siNA)、短干扰RNA(siRNA)、双链RNA(dsRNA)、微RNA(miRNA)、短发夹RNA(shRNA)、反义寡核苷酸。在其他情况下，核酸聚合物包括编码，例如细胞毒素蛋白或肽或细胞凋亡触发蛋白或肽的mRNA。示例性细胞毒素蛋白或肽包括细菌细胞毒素比如α-孔形成毒素(例如，来自大肠杆菌的溶细胞素A)，β-孔形成毒素(例如，α一溶血素、PVL-杀白细胞毒素、气溶素、梭菌ε-毒素、产气荚膜梭菌肠毒素)、二元毒素(炭疽热毒素、水肿毒素、肉毒梭菌C2毒素、螺状梭菌毒素、产气荚膜梭菌(C.perfringens iota)毒素、艰难梭菌致死毒素(A和B))、朊病毒、副孢菌素、胆固醇依赖性溶细胞素(例如，肺炎球菌溶血素)、小孔形成毒素(例如，短杆菌肽A)、蓝藻毒素(例如，微囊藻毒素、节球藻素)、血液毒素、神经毒素(例如，肉毒杆菌神经毒素)、细胞毒素、霍乱毒素、白喉毒素、假单胞菌外毒素A、破伤风毒素或免疫毒素(伊达比星、蓖麻蛋白A、CRM9、商陆抗病毒蛋白、DT)。示例性凋亡触发蛋白或肽包括凋亡蛋白酶激活因子-1(Apaf-1)、细胞色素-c、半胱天冬酶起始蛋白(CASP2、CASP8、CASP9、CASP10)、凋亡诱导因子(AIF)、p53、p73、p63、BcL-2、Bax、颗粒酶B、聚ADP核糖聚合酶(PARP)和P 21-活化激酶2(PAK2)。在另外情况下，核酸聚合物包括核酸诱饵。在一些情况下，核酸诱饵是蛋白质结合核酸的模拟物，比如基于RNA的蛋白质结合模拟物。示例性核酸诱饵包括反式激活区(TAR)诱饵和Rev响应元件(RRE)诱饵。
在一些情况下，载荷是适配体。适配体是结合至特定靶分子的小寡核苷酸或肽分子。示例性核酸适配体包括DNA适配体、RNA适配体或XNA适配体，其是包括一种或多种非天然核苷酸的RNA和/或DNA适配体。示例性核酸适配体包括ARC19499(Archemix Corp.)、REG1(Regado Biosciences)和ARC1905(Ophthotech)。
按照本文所述的实施方式的核酸任选地包括天然存在的核酸，或一种或多种核苷酸类似物或具有与天然存在的核酸不同的结构。例如，2’-修饰包括卤基(haLo)、烷氧基和烯丙基氧基。在一些实施方式中，2’-OH基团被选自H、OR、R、卤基、SH、SR、NH2、NHR、NR2或CN的基团取代，其中R是C1-C6烷基、烯基或炔基，并且卤基是F、CL、Br或I。修饰的连接的示例包括硫代磷酸酯和5’-N-亚磷酰胺连接。
按照本文所述的实施方式利用具有各种不同核苷酸类似物、修饰的骨架或非天然存在的核苷间连接的核酸。在一些情况下，核酸包括天然核苷(即腺苷、胸苷、鸟苷、胞苷、尿苷、脱氧腺苷、脱氧胸苷、脱氧鸟苷和脱氧胞苷)或修饰的核苷。修饰的核苷酸的示例包括碱基修饰的核苷(例如，阿糖胞苷、肌苷、异鸟苷、水粉蕈素、假尿苷、2，6-二氨基嘌呤、2-氨基嘌呤、2-硫胸苷、3-脱氮-5-氮杂胞苷、2’-脱氧尿苷、3-硝基吡咯、4-甲基吲哚、4-硫尿苷、4-硫胸苷、2-氨基腺苷、2-硫胸苷、2-硫尿苷、5-溴胞苷、5-碘尿苷、肌苷、6-氮杂尿苷、6-氯嘌呤、7-脱氮杂腺苷、7-脱氮鸟苷、8-氮杂腺苷、8-叠氮腺苷、苯并且咪唑、M1-甲基腺苷、吡咯并且嘧啶、2-氨基-6-氯嘌呤、3-甲基腺苷、5-丙炔基胞苷、5-丙炔基尿苷、5-溴尿苷、5-氟尿苷、5-甲基胞苷、7-脱氮腺苷、7-脱氮鸟苷、8-氧代腺苷、8-氧代鸟苷、O(6)-甲基鸟嘌呤和2-硫胞苷)、化学或生物修饰的碱基(例如，甲基化碱基)、修饰的糖(例如，2’-氟核糖、2’-氨基核糖、2’-叠氮核糖、2’-O-甲基核糖、L-对映体核苷阿拉伯糖和己糖)、修饰的磷酸根基团(例如，硫代磷酸酯和5’-N-亚磷酰胺连接)及其组合。用于核酸化学合成的天然和修饰的核苷酸单体很容易获得。在一些情况下，包括这种修饰的核酸相对于仅由天然存在的核苷酸组成的核酸显示出提高的性质。在一些实施方式中，利用本文所述的核酸修饰以降低和/或防止核酸酶(例如核酸外切酶、核酸内切酶等)的消化。例如，可以通过在一条或两条链的3’端处包括核苷酸类似物以降低消化来稳定核酸的结构。
不同的核苷酸修饰和/或骨架结构可能存在于核酸的不同位置。这种修饰包括吗啉、肽核酸(PNA)、甲基膦酸核苷酸、硫醇膦酸核苷酸、2’-氟N3 P5’-亚磷酰胺、1’，5’-脱水己糖醇核酸(HNA)或其组合。
本文公开的任何抗Gal3抗体可缀合至本文所述的一个或多个(例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个或更多个)载荷。
缀合化学
在一些情况下，载荷通过天然连接缀合至本文所述的抗Gal3抗体。在一些情况下，缀合是如在以下中描述的：Dawson等“Synthesis ofproteins by native chemicaLLigation，”Science 1994，266，776-779；Dawson等“ModuLation of Reactivity inNative ChemicaL Ligation through the Use of ThioL Additives，”J.Am.Chem.Soc.1997，119，4325-4329；Hackeng等“Protein synthesis by nativechemicaL Ligation：Expanded scope by using straightforward methodoLogy.，”Proc.NatL.Acad.Sci.USA 1999，96，10068-10073或Wu等“BuiLding compLexgLycopeptides：DeveLopment ofa cysteine-free native chemicaL LigationprotocoL，”Angew.Chem.Iht.Ed.2006，45，4116-4125。在一些情况下，缀合是如美国专利号8，936，910中描述的。
在一些情况下，通过利用“无痕”偶联技术(PhiLochem)的定向位点方法将载荷缀合至本文所述的抗Gal3抗体。在一些情况下，“无痕”偶联技术利用结合部分上的N-端1，2-氨基硫醇基团，然后将其与含有醛基的聚核酸分子缀合。(参见Casi等，“Site-specifictraceLess coupLing of potent cytotoxic drugs to recombinant antibodies用于pharmacodeLivery，”JACS 134(13)：5887-5892(2012))。
在一些情况下，通过利用并入结合部分的非天然氨基酸的定向位点方法将载荷缀合至本文所述的抗Gal3抗体。在一些情况下，非天然氨基酸包括对乙酰苯丙氨酸(pAcPhe)。在一些情况下，pAcPhe的酮基选择性地偶联至烷氧基-胺衍生的缀合部分以形成肟键。(参见Axup等，“Synthesis of site-specific antibody-drug conjugates using unnaturaLamino acids，”PNAS 109(40)：16101-16106(2012))。
在一些情况下，通过利用酶催化工艺的定向位点方法将载荷缀合至本文所述的抗Gal3抗体。在一些情况下，定向位点方法利用SMARTagTM技术(Redwood)。在一些情况下，SMARTagTM技术包括在醛标签存在下通过甲酰甘氨酸生成酶(FGE)通过氧化过程从半胱氨酸生成甲酰甘氨酸(FGLy)残基，并且随后将FGLy经肼基-Pictet-SpengLer(HIPS)连接缀合至烷基乙酰肼(aLkyLhydrain)官能化的聚核酸分子。(参见Wu等，“Site-specific chemicaLmodification of recombinant proteins produced in mammaLian ceLLs by using thegeneticaLLy encoded aLdehyde tag，”PNAS 106(9)：3000-3005(2009)；AgarwaL等，“APictet-SpengLer Ligation用于protein chemicaL modification，”PNAS 110(1)：46-51(2013))。
在一些情况下，酶催化工艺包括微生物转谷氨酰胺酶(mTG)。在一些情况下，利用微生物转谷氨酰胺酶催化工艺将载荷缀合至抗Gal3抗体。在一些情况下，mTG催化识别序列内谷氨酰胺的酰胺侧链与官能化聚核酸分子的伯胺之间形成的共价键的形成。在一些情况下，mTG是从莫巴链霉菌(Streptomyces mobarensis)产生的。(参见Strop等，“Locationmatters：site of缀合moduLates stabiLity and pharmacokinetics of antibody drugconjugates，”Chemistry andBioLogy 20(2)161-167(2013))。
在一些情况下，载荷通过如PCT公开号WO2014/140317中描述的方法缀合至抗Gal3抗体，该方法利用序列特异性转肽酶并且其通过引用以其整体清楚地并入本文。
在一些情况下，载荷通过如美国专利公开号2015/0105539和2015/0105540中描述的方法缀合至本文所述的抗Gal3抗体。
连接体
在一些情况下，本文所述的连接体包括天然或合成的聚合物，其由支链或非支链单体的长链和/或二维或三维的单体交联网络组成。在一些情况下，连接体包括多糖、木质素、橡胶或聚烷撑氧化物(polyalkylen oxide)(例如，聚乙二醇)。
在一些情况下，连接体包括但不限于α-、ω-二羟基聚乙二醇、可生物降解的内酯基聚合物，例如聚丙烯酸、聚乳酸(PLA)、聚(乙醇酸)(PGA)、聚丙烯、聚苯乙烯、聚烯烃、聚酰胺、聚氰基丙烯酸酯、聚酰亚胺、聚乙烯对苯二甲酸酯(poLyethyLenterephthaLat)(PET、PETG)、聚对苯二甲酸乙二醇酯(poLyethyLene terephthaLate)(PETE)、聚四亚甲基二醇(PTG)或聚氯酯以及其混合物。如本文使用的，混合物是指在相同化合物中使用不同聚合物以及指嵌段共聚物。在一些情况下，嵌段共聚物是聚合物，其中聚合物的至少一个部分由另一聚合物的单体构成。在一些情况下，连接体包括聚环氧烷。在一些情况下，连接体包括PEG。在一些情况下，连接体包括聚乙烯酰亚胺(PEI)或羟乙基淀粉(HES)。
在一些情况下，聚环氧烷(例如，PEG)是多分散或单分散化合物。在一些情况下，多分散材料包括不同分子量的材料的分散分布，其特征在于平均重量(重量平均)大小和分散度。在一些情况下，单分散PEG包括一种大小的分子。在一些实施方式中，连接体是多分散或单分散聚环氧烷(例如，PEG)并且指示的分子量代表聚环氧烷，例如，PEG分子的平均分子量。
在一些实施方式中，连接体包括聚环氧烷(例如，PEG)并且聚环氧烷(例如，PEG)的分子量是约200、300、400、500、600、700、800、900、1000、1100、1200、1300、1400、1450、1500、1600、1700、1800、1900、2000、2100、2200、2300、2400、2500、2600、2700、2800、2900、3000、3250、3350、3500、3750、4000、4250、4500、4600、4750、5000、5500、6000、6500、7000、7500、8000、10,000、12,000、20,000、35,000、40,000、50,000、60,000或100,000Da。
在一些实施方式中，聚环氧烷(例如，PEG)是离散的PEG，其中离散的PEG是包括不只一个重复环氧乙烷单元的聚合的PEG。在一些情况下，离散的PEG(dPEG)包括2至60、2至50或2至48个重复环氧乙烷单元。在一些情况下，dPEG包括约2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、22、24、26、28、30、35、40、42、48、50或更多个重复环氧乙烷单元。在一些情况下，dPEG包括约2或更多个重复环氧乙烷单元。在一些情况下，dPEG是由纯的(例如，约95％、98％、99％或99.5％)起始材料以逐步方式合成为单分子量化合物。在一些情况下，dPEG具有特定的分子量，而不是平均分子量。
在一些情况下，连接体是离散的PEG，任选地包括2至60、2至50或2至48个重复环氧乙烷单元。在一些情况下，连接体包括包含约2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、22、24、26、28、30、35、40、42、48、50或更多个重复环氧乙烷单元的dPEG。
在一些实施方式中，连接体是多肽连接体。在一些情况下，多肽连接体包括至少2、3、4、5、6、7、8、10、15、20、25、30、35、40、45、50、60、70、80、90、100或更多个氨基酸残基。在一些实施方式中，多肽连接体包括至少2、3、4、5、6、7、8或更多个氨基酸残基。在一些情况下，多肽连接体包括至多2、3、4、5、6、7、8或更少个氨基酸残基。在一些情况下，多肽连接体是可切割的多肽连接体(例如，酶促地或化学地)。在一些情况下，多肽连接体是非可切割的多肽连接体。在一些情况下，多肽连接体包括VaL-Cit(缬氨酸-瓜氨酸)、GLy-GLy-Phe-GLy、Phe-Lys、VaL-Lys、GLy-Phe-Lys、Phe-Phe-Lys、ALa-Lys、VaL-Arg、Phe-Cit、Phe-Arg、Leu-Cit、ILe-Cit、Trp-Cit、Phe-ALa、ALa-Leu-ALa-Leu或GLy-Phe-Leu-GLy。在一些情况下，多肽连接体包括肽比如：VaL-Cit(缬氨酸-瓜氨酸)、GLy-GLy-Phe-GLy、Phe-Lys、VaL-Lys、GLy-Phe-Lys、Phe-Phe-Lys、ALa-Lys、VaL-Arg、Phe-Cit、Phe-Arg、Leu-Cit、ILe-Cit、Trp-Cit、Phe-ALa、ALa-Leu-ALa-Leu或GLy-Phe-Leu-GLy。在一些情况下，多肽连接体包括L-氨基酸、D-氨基酸或L-和D-氨基酸二者的混合物。
在一些情况下，连接体包括同基双功能连接体。示例性同基双功能连接体包括但不限于Lomant试剂二硫代双(琥珀酰亚胺基丙酸酯)DSP、3’3’-二硫代双(磺基琥珀酰亚胺基丙酸酯(DTSSP)、双琥珀酰亚胺基辛二酸酯(DSS)、双(磺基琥珀酰亚胺基)辛二酸酯(BS)、双琥珀酰亚胺基酒石酸酯(DST)、双磺基琥珀酰亚胺基酒石酸酯(磺基DST)、乙二醇双(琥珀酰亚胺基琥珀酸酯)(EGS)、双琥珀酰亚胺基戊二酸酯(DSG)、N，N’-双琥珀酰亚胺基碳酸酯(DSC)、己二酰亚胺二甲酯(DMA)、庚二酰亚胺二甲酯(DMP)、二甲基新二亚酰(DMS)、二甲基-3，3’-二硫代双丙酰亚胺酯(DTBP)、1，4-二-3’-(2’′-吡啶基二硫基)丙酰胺基)丁烷(DPDPB)、双马来酰亚胺己烷(BMH)、含芳基卤化物的化合物(DFDNB)，比如例如1，5-二氟-2，4-二硝基苯或1，3-二氟-4，6-二硝基苯、4，4’-二氟-3，3’-二硝基苯砜(DFDNPS)、双-[β-(4-叠氮基水杨酰胺)乙基]二硫化物(BASED)、甲醛、戊二醛、1，4-丁二醇缩水甘油醚、己二酸二酰肼、碳酰肼、邻甲苯胺、3，3’-二甲基联苯胺、联苯胺、α，α’-对二氨基二苯、二碘-对二甲苯磺酸、N，N′-亚乙基-双(碘乙酰胺)或N，N’-六亚甲基-双(碘乙酰胺)。
在一些实施方式中，连接体包括异基双功能连接体。示例性异基双功能连接体包括但不限于胺反应性和巯基交联剂，比如N-琥珀酰亚胺基3-(2-吡啶基二硫)丙酸酯(sPDP)、长链N-琥珀酰亚胺基3-(2-吡啶基二硫)丙酸酯(LC-sPDP)、水溶性长链N-琥珀酰亚胺基3-(2-吡啶基二硫)丙酸酯(磺基-LC-sPDP)、琥珀酰亚胺基氧羰基-α-甲基-α-(2-吡啶基二硫)甲苯(sMPT)、磺基琥珀酰亚胺基-6-[α-甲基-α-(2-吡啶基二硫)甲苯胺]己酸酯(磺基-LC-sMPT)、琥珀酰亚胺基-4-(N-马来酰亚胺甲基)环己烷-1-羧酸酯(sMCC)、磺基琥珀酰亚胺基-4-(N-马来酰亚胺甲基)环己烷-1-羧酸酯(磺基-sMCC)、间马来酰亚胺苯甲酰基-N-羟基琥珀酰亚胺酯(MB s)、间马来酰亚胺苯甲酰基-N-羟基磺基琥珀酰亚胺酯(磺基-MBs)、N-琥珀酰亚胺基(4-碘乙酰基)氨基苯甲酸酯(sIAB)、磺基琥珀酰亚胺基(4-碘乙酰基)氨基苯甲酸酯(磺基-sIAB)、琥珀酰亚胺基-4-(对马来酰亚胺苯基)丁酸酯(sMPB)、磺基琥珀酰亚胺基-4-(对马来酰亚胺苯基)丁酸酯(磺基-sMPB)、N-(γ-马来酰亚胺丁酰氧基)琥珀酸酰亚胺酯(GMB)、N-(γ-马来酰亚胺丁氧基)磺基琥珀酰亚胺酯(磺基-GMB)、琥珀酰亚胺基6-((碘乙酰基)氨基)己酸酯(sIAX)、琥珀酰亚胺基6-[6-(((碘乙酰基)氨基)己酰基)氨基]己酸酯(sIAXX)、琥珀酰亚胺基4-(((碘乙酰)氨基)甲基)环己烷-1-羧酸酯(sIAC)、琥珀酰亚胺基6-(((((4-碘乙酰)氨基)甲基)环己烷-1-羰基)氨基)己酸酯(sIACX)、对硝基苯基碘乙酸酯(NPIA)、羰基反应性和巯基反应性交联剂，比如4-(4-N-马来酰亚胺苯基)丁酸酰肼(MPBH)、4-(N-马来酰亚胺甲基)环己烷-1-羧基-酰肼-8(M2C2H)，3-(2-吡啶基二硫)丙酰基酰肼(PDPH)，胺反应性和光反应性交联剂，比如N-羟基琥珀酰亚胺基-4-叠氮基水杨酸(NHs-AsA)、N-羟基磺基琥珀酰亚胺基-4-叠氮基水杨酸(磺基-NHs-AsA)、磺基琥珀酰亚胺基-(4-叠氮基水杨酰胺基)己酸酯(磺基-NHs-LC-AsA)、磺基琥珀酰亚胺基-2-(对-叠氮基水杨酰胺基)乙基-1，3’-二硫代丙酸酯(sAsD)、N-羟基琥珀酰亚胺基-4-叠氮苯甲酸酯(HsAB)、N-羟基磺基琥珀酰亚胺基-4-叠氮基苯甲酸酯(磺基-HsAB)、N-琥珀酰亚胺基-6-(4’-叠氮基-2’-硝基苯氨基)己酸酯(sANPAH)、磺基琥珀酰亚胺基-6-(4’-叠氮基-2’-硝基苯氨基)己酸酯(磺基-sANPAH)、N-5-叠氮基-2-硝基苯甲酰氧基琥珀酰亚胺(ANB-NOs)、磺基琥珀酰亚胺基-2-(间叠氮基-邻硝基苯甲酰胺)-乙基-1，3’-二硫丙酸酯(sAND)、N-琥珀酰亚胺基-4(4-叠氮苯基)1，3’-二硫丙酸酯(sADP)、N-磺基琥珀酰亚胺基(4-叠氮苯基)-1，3’-二硫丙酸酯(磺基-sADP)、磺基琥珀酰亚胺基4-(对叠氮苯基)丁酸酯(磺基-sAPB)、磺基琥珀酰亚胺基2-(7-叠氮基-4-甲基香豆素-3-乙酰胺)乙基-1，3’-二硫丙酸酯(sAED)、磺基琥珀酰亚胺基7-叠氮基-4-甲基香豆素-3-乙酸酯(磺基-sAMCA)、对硝基苯基重氮丙酮酸酯(ρNPDP)、对硝基苯基-2-重氮-3，3，3-三氟丙酸酯(PNP-DTP)、巯基反应性和光反应性交联剂，比如1-(对叠氮水杨酰胺)-4-(碘乙酰胺)丁烷(AsIB)、N-[4-(对叠氮水杨酰胺)丁基]-3’-(2’-吡啶基二硫)丙酰胺(APDP)、二苯酮-4-碘乙酰胺、二苯酮-4-马来酰亚胺羰基反应性和光反应性交联剂，比如对叠氮苯甲酰肼(ABH)、羧酸酯反应性和光反应性交联剂，比如4-(对叠氮基水杨酰胺)丁胺(AsBA)和精氨酸-反应性和光反应性交联剂，比如对叠氮苯基乙二醛(APG)。
在一些实施方式中，连接体包括苯甲酸基团或其衍生物。在一些情况下，苯甲酸基团或其衍生物包括对氨基苯甲酸(PABA)。在一些情况下，苯甲酸基团或其衍生物包括γ-氨基丁酸(GABA)。
在一些实施方式中，连接体包括马来酰亚胺基团、肽部分和/或苯甲酸基团中的一种或多种，以任何组合。在一些实施方式中，连接体包括马来酰亚胺基团、肽部分和/或苯甲酸基团的组合。在一些情况下，马来酰亚胺基团是马来酰亚胺己酰基(mc)。在一些情况下，肽基团是vaL-cit。在一些情况下，苯甲酸基团是PABA。在一些情况下，连接体包括mc-vaL-cit基团。在一些情况下，连接体包括vaL-cit-PABA基团。在其他情况下，连接体包括mc-vaL-cit-PABA基团。
在一些实施方式中，连接体是自毁连接体(seLf-immoLative Linker)或自消除连接体。在一些情况下，连接体是自毁连接体。在其他情况下，连接体是自消除连接体(例如，环化自消除连接体)。在一些情况下，连接体包括在美国专利号9,089,614或PCT公开号WO2015038426中描述的连接体。
在一些实施方式中，连接体是树突型连接体。在一些情况下，树突型连接体包括分支的，多功能连接体部分。在一些情况下，树突型连接体包括PAMAM树枝状高分子。
在一些实施方式中，连接体是无痕连接体或其中切割后不留下与抗体或载荷的连接体部分(例如，原子或连接体基团)的连接体。示例性无痕连接体包括但不限于锗连接体、硅连接体、硫连接体、硒连接体、氮连接体、磷连接体、硼连接体、铬连接体或苯酰肼连接体。在一些情况下，连接体是如Hejesen等，“A无痕aryL-triazene Linker用于DNA-directedchemistry，”OrgBiomoL Chem 11(15)：2493-2497(2013)中描述的无痕芳基-三氮烯连接体。在一些情况下，连接体是BLaney等，“无痕soLid-phase organic synthesis，”Chem.Rev.102：2607-2024(2002)中描述的无痕连接体。在一些情况下，连接体是如美国专利号6,821,783中描述的无痕连接体。
试剂盒/制品
在某些实施方式中，本文公开了与本文所述的一种或多种组合物和方法使用的试剂盒和制品。这种试剂盒包括载体、包装或容器，其被隔开以容纳一个或多个容器，例如小瓶、管等，每个容器包括用于本文所述的方法的单独元件之一。合适的容器包括，例如瓶子、小瓶、注射器和试管。在一个实施方式中，容器由各种材料比如玻璃或塑料形成。
本文提供的制品含有包装材料。药物包装材料的示例包括但不限于泡罩包装、瓶子、管、袋、容器、瓶子和任何适用于选定制剂和预期施用和治疗模式的包装材料。
例如，容器包括本文公开的抗Gal3抗体、用于产生本文所述的一种或多种抗体的宿主细胞和/或包括编码本文所述抗体的核酸分子的载体。这种试剂盒任选地包括与其在本文所述的方法中的使用相关的识别说明或标签或指令。
试剂盒通常包括列出内容和/或使用说明的标签，以及具有使用说明的包装说插页。通常还将包括一组说明。
在一个实施方式中，标签在容器上或与容器相关。在一个实施方式中，当形成标签的字母、数字或其他字符被附着、模制或蚀刻到容器本身中时，标签位于容器上；当标签存在于也容纳容器的贮器或载体中时，标签与容器相关，例如作为包装插页。在一个实施方式中，标签用于指示内容物将用于特定治疗应用。标签还指示比如在本文所述的方法中使用内容物的指导。
在某些实施方式中，药物组合物存在于包含一种或多种含有本文提供的化合物的单位剂型的包装或分配器装置中。例如，包装含有金属或塑料箔，例如泡罩包装。在一个实施方式中，包装或分配器装置附有施用说明。在一个实施方式中，包装或分配器还附有与容器相关的通知，该通知以管理药物制剂的制造、使用或销售的政府机构规定的形式，该通知反映了该机构对用于人或兽医施用的药物形式的批准。例如，这种通知是美国食品和药物管理局批准的处方药物标签或批准的产品插页。在一个实施方式中，还制备含有在相容的药物载体中配制的本文提供的化合物的组合物，将其置于合适的容器中，并且标记用于治疗指定病症。
本文提供的一些实施方式通过以下提供的带编号的排列A进行描述，并且还提供为可能的组合或重叠实施方式：
1.一种抑制Gal3-介导的蛋白质的淀粉样蛋白聚集的方法，所述方法包括：
使蛋白质与抗Gal3抗体或其结合片段接触，
其中抗Gal3抗体或其结合片段与Gal3的结合抑制Gal3-介导的蛋白质的淀粉样蛋白聚集。
2.排列1所述的方法，其中蛋白质在细胞中。
3.排列1或2所述的方法，其中方法在体外或体内进行。
4.排列1-3中任一项所述的方法，其中相对于未与抗Gal3抗体或其结合片段接触的细胞，在与抗Gal3抗体或其结合片段接触后，Gal3-介导的蛋白质的淀粉样蛋白聚集被抑制至少5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％或99％。
5.排列1-4中任一项所述的方法，其中蛋白质包括α-突触核蛋白、tau蛋白、TARDNA-结合蛋白43(TDP-43)、甲状腺素运载蛋白(TTR)、尿调节素、胰岛淀粉样多肽(IAPP)、血清淀粉样蛋白A(SAA)或p53或其任意组合。
6.排列5所述的方法，其中tau蛋白是4R tau和/或磷酸化tau(磷酸tau)，任选地其中磷酸化tau是磷酸-tau(S396)。
7.排列1-6中任一项所述的方法，其中蛋白质包括载脂蛋白E(APOE)、朊病毒蛋白或神经丝轻链(NFL)或其任意组合，任选地其中载脂蛋白E是APO-E4。
8.一种治疗有需要的受试者的淀粉样蛋白病的方法，所述方法包括：
向受试者施用抗Gal3抗体或其结合片段，
其中抗Gal3抗体或其结合片段与受试者中Gal3的结合抑制受试者中Gal3-介导的蛋白质的淀粉样蛋白聚集、从而治疗受试者的淀粉样蛋白病。
9.排列8所述的方法，进一步包括在施用步骤之前鉴定受试者是否需要淀粉样蛋白病的治疗。
10.排列8或9所述的方法，进一步包括在施用步骤之后检测受试者中淀粉样蛋白病的改善。
11.排列9或10所述的方法，其中通过活检、血或尿测试、超声心动图或焦磷酸锝(99mTc-PYP)闪烁扫描来完成鉴定受试者是否需要淀粉样蛋白病的治疗和/或检测淀粉样蛋白病的改善。
12.排列8-11中任一项所述的方法，其中相对于施用步骤之前的淀粉样蛋白病，在施用步骤之后，淀粉样蛋白病被减少至少5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％或99％。
13.排列8-12中任一项所述的方法，其中蛋白质包括α-突触核蛋白、tau蛋白、TARDNA-结合蛋白43(TDP-43)、甲状腺素运载蛋白(TTR)、尿调节素、胰岛淀粉样多肽(IAPP)、血清淀粉样蛋白A(SAA)或p53或其任意组合。
14.排列13所述的方法，其中tau蛋白是4Rtau和/或磷酸化tau(磷酸tau)，任选地其中磷酸化tau是磷酸-tau(S396)。
15.排列8-14中任一项所述的方法，其中蛋白质包括载脂蛋白E(APOE)、朊病毒蛋白或神经丝轻链(NFL)或其任意组合，任选地其中载脂蛋白E是APO-E4。
16.排列8-15中任一项所述的方法，其中淀粉样蛋白病包括共核蛋白病、帕金森氏病、路易体痴呆症、多系统萎缩、tau蛋白病、阿尔茨海默病、进行性核上性麻痹、皮质基底节变性、皮克氏病、TDP-43蛋白病、肌萎缩侧索硬化症、额颞叶变性、TTR淀粉样变性(ATTR)、心脏淀粉样变性、尿调节素-相关肾脏疾病、IAPP淀粉样变性、SAA淀粉样变性、类风湿性关节炎、炎性关节炎、脊柱关节病、幼年特发性关节炎、强直性脊柱炎、银屑病关节炎、炎性肠病、溃疡性结肠炎、克罗恩病、乳糜泻、血管炎、结节病、家族性地中海热、肿瘤坏死因子受体-相关周期性综合征(TRAPS)、癌症、由淀粉样蛋白聚集促进的衰老或其任意组合。
17.排列1-16中任一项所述的方法，其中抗Gal3抗体或其结合片段包括(1)重链可变区，其包括VH-CDR1、VH-CDR2和VH-CDR3；以及(2)轻链可变区，其包括VL-CDR1、VL-CDR2和VL-CDR3，其中
VH-CDR1包含与SEQ ID NO：27-70的氨基酸序列中的任一个具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列；
VH-CDR2包含与SEQ ID NO：71-111、801的氨基酸序列中的任一个具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列；
VH-CDR3包含与SEQ ID NO：112-169、802的氨基酸序列中的任一个具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列；
VL-CDR1包含与SEQ ID NO：170-220的氨基酸序列中的任一个具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列；
VL-CDR2包含与SEQ ID NO：221-247的氨基酸序列中的任一个具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列；和
VL-CDR3包含与SEQ ID NO：248-296的氨基酸序列中的任一个具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列。
18.排列17所述的方法，其中抗Gal3抗体或其结合片段包括如图13中阐释的VH-CDR1、VH-CDR2、VH-CDR3、VL-CDR1、VL-CDR2和VL-CDR3的组合。
19.排列17或18所述的方法，其中重链可变区包含与选自SEQ ID NO：297-373、803、806-820、926的序列具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的序列。
20.排列17-19中任一项所述的方法，其中轻链可变区包含与选自SEQ ID NO：374-447、821-835、927-929的序列具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的序列。
21.排列1-20中任一项所述的方法，其中抗Gal3抗体或其结合片段包括重链，其中所述重链包含与选自SEQ ID NO：448-494、804、836-850的序列具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的序列。
22.排列1-21中任一项所述的方法，其中抗Gal3抗体或其结合片段包括轻链，其中所述轻链包含与选自SEQ ID NO：495-538、805、851-865的序列具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的序列。
23.排列1-22中任一项所述的方法，其中抗Gal3抗体或其结合片段选自由下述组成的组：TB001、TB006、12G5.D7、13A12.2E5、14H10.2C9、15F10.2D6、19B5.2E6、20D11.2C6、20H5.A3、23H9.2E4、2D10.2B2、3B11.2G2、7D8.2D8、mIMT001、4A11.2B5、4A11.H1L1、4A11.H4L2、4G2.2G6、6B3.2D3、6H6.2D6、9H2.2H10、13G4.2F8、13H12.2F8、15G7.2A7、19D9.2E5、23B10.2B12、24D12.2H9、F846C.1B2、F846C.1F5、F846C.1H12、F846C.1H5、F846C.2H3、F846TC.14A2、F846TC.14E4、F846TC.16B5、F846TC.7F10、F847C.10B9、F847C.11B1、F847C.12F12、F847C.26F5、F847C.4B10、F849C.8D10、F849C.8H3、846.2B11、846.4D5、846T.1H2、847.14H4、846.2D4、846.2F11、846T.10B1、846T.2E3、846T.4C9、846T.4E11、846T.4F5、846T.8D1、847.10C9、847.11D6、847.15D12、847.15F9、847.15H11、847.20H7、847.21B11、847.27B9、847.28D1、847.2B8、847.3B3、849.1D2、849.2D7、849.2F12、849.4B2、849.4F12、849.4F2、849.5C2、849.8D12、1-847C.21H6、849.5H1、847.23F11、847.16D10、847.13E2-mH0mL1、847.13E2-mH0mL2、847.12C4、847.4D3、2D10-VH0-VL0、2D10-hVH4-HVL1、2D10-hVH4-HVL2、2D10-hVH4-HVL3、2D10-hVH4-HVL4、2D10-hVH3-HVL1、2D10-hVH3-HVL2、2D10-hVH3-HVL3、2D10-hVH3-HVL4、20H5.A3-VH3VL1、20H5.A3-VH3VL3、20H5.A3-VH4VL1、20H5.A3-VH5VL1、20H5.A3-VH5VL3、20H5.A3-VH6VL1、20H5.A3-VH6VL3或其结合片段。
24.一种促进蛋白质的淀粉样蛋白聚集和/或寡聚化的方法，所述方法包括使蛋白质与Gal3接触，其中Gal3促进蛋白质的淀粉样蛋白聚集和/或寡聚化。
25.排列24所述的方法，其中蛋白质与Gal3在水性溶液中接触。
26.排列24或25所述的方法，其中Gal3以大约1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23或24小时促进蛋白质的淀粉样蛋白聚集和/或寡聚化。
27.排列24-26中任一项所述的方法，其中蛋白质包括α-突触核蛋白、tau蛋白、TDP-43、TTR、尿调节素、IAPP、SAA或p53或其任意组合。
28.排列27所述的方法，其中tau蛋白是4Rtau和/或磷酸化tau(磷酸tau)，任选地其中磷酸化tau是磷酸-tau(S396)，任选地其中当与Gal3接触时，磷酸化tau形成三聚体、四聚体或更高级的寡聚体。
29.排列28所述的方法，其中相对于单独的tau蛋白的自发聚集和/或寡聚化、或当与肝素和/或蛛网膜酸混合时的tau蛋白的聚集和/或寡聚化，更快地实现tau蛋白的淀粉样蛋白聚集和/或寡聚化，任选地其中tau蛋白与肝素和/或蛛网膜酸在37℃或约37℃下混合。
30.排列28或29所述的方法，其中以不超过0.5、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23或24小时的tau蛋白与Gal3的接触，实现tau蛋白的淀粉样蛋白聚集和/或寡聚化。
31.排列24-30中任一项所述的方法，其中蛋白质包括APOE、朊病毒蛋白或NFL或其任意组合，任选地其中APOE是APO-E4。
32.排列24-31中任一项所述的方法，其中蛋白质与Gal3在室温下接触。
33.一种组合物，其包含蛋白质和Gal3，其中Gal3促进蛋白质的淀粉样蛋白聚集和/或寡聚化。
34.排列33所述的组合物，其中蛋白质和Gal3在水性溶液中，或者被干燥和/或冻干。
35.排列33或34所述的组合物，其中蛋白质包括α-突触核蛋白、tau蛋白、TDP-43、TTR、尿调节素、IAPP、SAA或p53或其任意组合。
36.排列35所述的组合物，其中tau蛋白是4R tau和/或磷酸化tau(磷酸tau)，任选地其中磷酸化tau是磷酸-tau(S396)，任选地其中当与Gal3接触时，磷酸化tau形成三聚体、四聚体或更高级的寡聚体。
37.排列33-36中任一项所述的组合物，其中蛋白质包括APOE、朊病毒蛋白或NFL或其任意组合，任选地其中APOE是APO-E4。
38.一种试剂盒，其包括排列33-37中任一项所述的组合物。
本文提供的一些实施方式通过以下提供的带编号的排列B来描述，并且还被提供为可能的组合或重叠实施方式：
1.一种抑制Gal3-介导的蛋白质的淀粉样蛋白聚集的方法，所述方法包括：
使蛋白质与抗Gal3抗体或其结合片段接触，
其中抗Gal3抗体或其结合片段与Gal3的结合抑制Gal3-介导的蛋白质的淀粉样蛋白聚集。
2.一种抑制Gal3-介导的蛋白质的寡聚化的方法，所述方法包括：
使蛋白质与抗Gal3抗体或其结合片段接触，
其中抗Gal3抗体或其结合片段与Gal3的结合抑制Gal3-介导的蛋白质的寡聚化。
3.前述排列中任一项所述的方法，其中蛋白质在细胞中。
4.前述排列中任一项所述的方法，其中方法在体外或体内进行。
5.前述排列中任一项所述的方法，其中相对于未与抗Gal3抗体或其结合片段接触的细胞，在与抗Gal3抗体或其结合片段接触后，Gal3-介导的蛋白质的淀粉样蛋白聚集或寡聚化被抑制至少5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％或99％。
6.前述排列中任一项所述的方法，其中蛋白质包括α-突触核蛋白、tau蛋白、TDP-43、甲状腺素运载蛋白、尿调节素、胰岛淀粉样多肽(IAPP)、血清淀粉样蛋白A(SAA)、p53、载脂蛋白E(APOE)、APOE-4、朊病毒蛋白、纤维蛋白、或神经丝轻链(NFL)、CRP、SUMO、轻链、血小板源生长因子受体(PDGFR)、黑色素瘤细胞黏附分子(MCAM)、补体蛋白C3和/或C9、溶菌酶、胰岛素、天然血红蛋白(Hb)、糖化血红蛋白(HbAIC)、苯丙氨酸(Phe)、谷氨酰胺(Gln)、胆甾醇基(共酯基)、胆固醇、神经源性丝氨酸蛋白酶抑制剂、晶体蛋白AA和/或晶体蛋白AB、半胱氨酸蛋白酶抑制剂-C或肌生长抑制素前肽和/或其任意组合。
7.一种治疗有需要的受试者的淀粉样蛋白病的方法，所述方法包括：
向受试者施用抗Gal3抗体或其结合片段，
其中抗Gal3抗体或其结合片段与受试者中Gal3的结合抑制受试者中Gal3-介导的蛋白质的淀粉样蛋白聚集，从而治疗受试者的淀粉样蛋白病。
8.一种治疗有需要的受试者的蛋白病的方法，所述方法包括：
向受试者施用抗Gal3抗体或其结合片段，
其中抗Gal3抗体或其结合片段与受试者中Gal3的结合抑制受试者中Gal3-介导的蛋白质的寡聚化，从而治疗受试者的淀粉样蛋白病。
9.前述排列中任一项所述的方法，进一步包括在施用步骤之前鉴定受试者是否需要蛋白病和/或淀粉样蛋白病的治疗。
10.前述排列中任一项所述的方法，进一步包括在施用步骤之后检测受试者的蛋白病和/或淀粉样蛋白病的改善。
11.前述排列中任一项所述的方法，通过活检、血或尿测试、超声心动图或焦磷酸锝(99mTc-PYP)闪烁扫描来完成鉴定受试者是否需要蛋白病和/或淀粉样蛋白病的治疗和/或检测淀粉样蛋白病的改善。
12.前述排列中任一项所述的方法，其中相对于施用步骤之前的淀粉样蛋白病，在施用步骤之后，蛋白病和/或淀粉样蛋白病被减少至少5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％或99％。
13.前述排列中任一项所述的方法，其中蛋白质包括α-突触核蛋白、tau蛋白、TDP-43、甲状腺素运载蛋白、尿调节素、胰岛淀粉样多肽(IAPP)、血清淀粉样蛋白A(SAA)、p53、载脂蛋白E(APOE)、APOE-4、朊病毒蛋白、纤维蛋白、或神经丝轻链(NFL)、CRP、SUMO、轻链、血小板源生长因子受体(PDGFR)、黑色素瘤细胞黏附分子(MCAM)、补体蛋白C3和/或C9、溶菌酶、胰岛素、天然血红蛋白(Hb)、糖化血红蛋白(HbAIC)、苯丙氨酸(Phe)、谷氨酰胺(Gln)、胆甾醇基(共酯基)、胆固醇、神经源性丝氨酸蛋白酶抑制剂、晶体蛋白AA和/或晶体蛋白AB、半胱氨酸蛋白酶抑制剂-C或肌生长抑制素前肽和/或其任意组合。
14.前述排列中任一项所述的方法，其中蛋白病和/或淀粉样蛋白病包括共核蛋白病、帕金森氏病、路易体痴呆症、多系统萎缩、tau蛋白病、阿尔茨海默病、进行性核上性麻痹、皮质基底节变性、皮克氏病、TDP-43蛋白病、肌萎缩侧索硬化症、额颞叶变性、TTR淀粉样变性(ATTR)、心脏淀粉样变性、尿调节素-相关肾脏疾病、IAPP淀粉样变性、SAA淀粉样变性、类风湿性关节炎、炎性关节炎、脊柱关节病、幼年特发性关节炎、强直性脊柱炎、银屑病关节炎、炎性肠病、溃疡性结肠炎、克罗恩病、乳糜泻、血管炎、结节病、家族性地中海热、肿瘤坏死因子受体-相关周期性综合征(TRAPS)、癌症、由淀粉样蛋白聚集促进的衰老或其任意组合。
15.前述排列中任一项所述的方法，其中抗Gal3抗体或其结合片段包括(1)重链可变区，其包括VH-CDR1、VH-CDR2和VH-CDR3；以及(2)轻链可变区，其包括VL-CDR1、VL-CDR2和VL-CDR3，其中
VH-CDR1包含与SEQ ID NO：27-70的氨基酸序列中的任一个具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列；
VH-CDR2包含与SEQ ID NO：71-111、801、951、952的氨基酸序列中的任一个具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列；
VH-CDR3包含与SEQ ID NO：112-169、802、953、954的氨基酸序列中的任一个具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列；
VL-CDR1包含与SEQ ID NO：170-220的氨基酸序列中的任一个具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列；
VL-CDR2包含与SEQ ID NO：211-247的氨基酸序列中的任一个具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列；和
VL-CDR3包含与SEQ ID NO：248-296的氨基酸序列中的任一个具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列；或者其中抗体或其结合片段包括与任意一种或多种前述抗Gal3抗体或其结合片段竞争结合的阻断抗体，其中阻断抗体在竞争上胜过抗Gal3抗体或其结合片段至少80％有效。
16.前述排列中任一项所述的方法，其中抗Gal3抗体或其结合片段包括如图13中阐释的VH-CDR1、VH-CDR2、VH-CDR3、VL-CDR1、VL-CDR2和VL-CDR3的组合；或者其中抗体或其结合片段包括与任意一种或多种前述抗Gal3抗体或其结合片段竞争结合的阻断抗体，其中阻断抗体在竞争上胜过抗Gal3抗体或其结合片段至少80％有效。
17.前述排列中任一项所述的方法，其中重链可变区包含与选自SEQ ID NO：297-373、803、806-820、940、955-968、1067-1109、1415-1439的序列具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的序列；或者其中抗体或其结合片段包括与任意一种或多种前述抗Gal3抗体或其结合片段竞争结合的阻断抗体，其中阻断抗体在竞争上胜过抗Gal3抗体或其结合片段至少80％有效。
18.前述排列中任一项所述的方法，其中轻链可变区包含与选自SEQ ID NO：374-447、821-835、941-943、969-982、1110-1152、1440-1464的序列具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的序列；或者其中抗体或其结合片段包括与任意一种或多种前述抗Gal3抗体或其结合片段竞争结合的阻断抗体，其中阻断抗体在竞争上胜过抗Gal3抗体或其结合片段至少80％有效。
19.前述排列中任一项所述的方法，其中抗Gal3抗体或其结合片段包括重链，其中所述重链包含与选自SEQ ID NO：448-494、804、836-850、983-996、1153-1195、1411、1465-1489的序列具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的序列；或者其中抗体或其结合片段包括与任意一种或多种前述抗Gal3抗体或其结合片段竞争结合的阻断抗体，其中阻断抗体在竞争上胜过抗Gal3抗体或其结合片段至少80％有效。
20.前述排列中任一项所述的方法，其中抗Gal3抗体或其结合片段包括轻链，其中所述轻链包含与选自SEQ ID NO：495-538、805、851-865、997-1010、1196-1238、1412、1490-1514的序列具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的序列；或者其中抗体或其结合片段包括与任意一种或多种前述抗Gal3抗体或其结合片段竞争结合的阻断抗体，其中阻断抗体在竞争上胜过抗Gal3抗体或其结合片段至少80％有效。
21.前述排列中任一项所述的方法，其中抗Gal3抗体或其结合片段选自由以下的至少一种组成的组：TB001、TB006、12G5.D7、13A12.2E5、14H10.2C9、15F10.2D6、19B5.2E6、20D11.2C6、20H5.A3、23H9.2E4、2D10.2B2、3B11.2G2、7D8.2D8、mIMT001、4A11.2B5、4A11.H1L1、4A11.H4L2、4G2.2G6、6B3.2D3、6H6.2D6、9H2.2H10、13G4.2F8、13H12.2F8、15G7.2A7、19D9.2E5、23B10.2B12、24D12.2H9、F846C.1B2、F846C.1F5、F846C.1H12、F846C.1H5、F846C.2H3、F846TC.14A2、F846TC.14E4、F846TC.16B5、F846TC.7F10、F847C.10B9、F847C.11B1、F847C.12F12、F847C.26F5、F847C.4B10、F849C.8D10、F849C.8H3、846.2B11、846.4D5、846T.1H2、847.14H4、846.2D4、846.2F11、846T.10B1、846T.2E3、846T.4C9、846T.4E11、846T.4F5、846T.8D1、847.10C9、847.11D6、847.15D12、847.15F9、847.15H11、847.20H7、847.21B11、847.27B9、847.28D1、847.2B8、847.3B3、849.1D2、849.2D7、849.2F12、849.4B2、849.4F12、849.4F2、849.5C2、849.8D12、F847C.21H6、849.5H1、847.23F11、847.16D10、847.13E2-mH0mL1、847.13E2-mH0mL2、847.12C4、847.4D3、2D10-VH0-VL0、2D10-hVH4-HVL1、2D10-hVH4-HVL2、2D10-hVH4-HVL3、2D10-hVH4-HVL4、2D10-hVH3-HVL1、2D10-hVH3-HVL2、2D10-hVH3-HVL3、2D10-hVH3-HVL4、20H5.A3-VH3VL1、20H5.A3-VH3VL3、20H5.A3-VH4VL1、20H5.A3-VH5VL1、20H5.A3-VH5VL3、20H5.A3-VH6VL1、20H5.A3-VH6VL3或其结合片段；或者其中抗体或其结合片段包括与任意一种或多种前述抗Gal3抗体或其结合片段竞争结合的阻断抗体，其中阻断抗体在竞争上胜过抗Gal3抗体或其结合片段至少80％有效。
22.前述排列中任一项所述的方法，其中抗Gal3抗体或其结合片段选自由以下的至少一种组成的组：2D10-VH0-VL0、2D10-hVH4-HVL1、2D10-hVH4-HVL2、2D10-hVH4-HVL3、2D10-hVH4-HVL4、2D10-hVH3-HVL1、2D10-hVH3-HVL2、2D10-hVH3-HVL3、2D10-hVH3-HVL4或其结合片段；或者其中抗体或其结合片段包括与任意一种或多种前述抗Gal3抗体或其结合片段竞争结合的阻断抗体，其中阻断抗体在竞争上胜过抗Gal3抗体或其结合片段至少80％有效。
23.前述排列中任一项所述的方法，其中抗Gal3抗体或其结合片段选自由以下的至少一种组成的组：21H6-H0L0、21H6-H1L1、21H6-H1L2、21H6-H1L3、21H6-H1L4、21H6-H2L1、21H6-H2L2、21H6-H2L3、21H6-H2L4、21H6-H3L1、21H6-H3L2、21H6-H3L3、21H6-H3L4、21H6-H4L1、21H6-H4L2、21H6-H4L3、21H6-H4L4、21H6-H5L1、21H6-H5L2、21H6-H5L3、21H6-H5L4、21H6-H6L1、21H6-H6L2、21H6-H6L3、21H6-H6L4或其结合片段；或者其中抗体或其结合片段包括与任意一种或多种前述抗Gal3抗体或其结合片段竞争结合的阻断抗体，其中阻断抗体在竞争上胜过抗Gal3抗体或其结合片段至少80％有效。
24.一种促进蛋白质的淀粉样蛋白聚集和/或寡聚化的方法，所述方法包括使蛋白质与Gal3接触，其中Gal3促进蛋白质的淀粉样蛋白聚集和/或寡聚化。
25.前述排列中任一项所述的方法，其中蛋白质与Gal3在水性溶液中接触。
26.前述排列中任一项所述的方法，其中Gal3以大约1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23或24小时促进蛋白质的淀粉样蛋白聚集和/或寡聚化。
27.前述排列中任一项所述的方法，其中蛋白质包括α-突触核蛋白、tau蛋白、TDP-43、TTR、尿调节素、IAPP、SAA或p53或其任意组合。
28.前述排列中任一项所述的方法，其中tau蛋白是4R tau和/或磷酸化tau(磷酸tau)，任选地其中磷酸化tau是磷酸-tau(S396)，任选地其中当与Gal3接触时，磷酸化tau形成三聚体、四聚体或更高级的寡聚体。
29.前述排列中任一项所述的方法，其中相对于单独的tau蛋白的自发聚集和/或寡聚化、或者当与肝素和/或蜘蛛网酸混合时tau蛋白的聚集和/或寡聚化，更快地实现tau蛋白的淀粉样蛋白聚集和/或寡聚化，任选地其中tau蛋白与肝素和/或蜘蛛网酸在37℃或约37℃下混合。
30.前述排列中任一项所述的方法，其中以不超过0.5、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23或24小时的tau蛋白与Gal3的接触，实现tau蛋白的淀粉样蛋白聚集和/或寡聚化。
31.前述排列中任一项所述的方法，其中蛋白质包括APOE、朊病毒蛋白或NFL或其任意组合，任选地其中APOE是APO-E4。
32.前述排列中任一项所述的方法，其中蛋白质与Gal3在室温下接触。
33.一种组合物，其包含蛋白质和Gal3，其中Gal3促进蛋白质的淀粉样蛋白聚集和/或寡聚化。
34.前述排列中任一项所述的组合物，其中蛋白质和Gal3在水性溶液中，或者被干燥和/或冻干。
35.前述排列中任一项所述的组合物，其中蛋白质包括α-突触核蛋白、tau蛋白、TDP-43、TTR、尿调节素、IAPP、SAA或p53或其任意组合。
36.前述排列中任一项所述的组合物，其中tau蛋白是4R tau和/或磷酸化tau(磷酸tau)，任选地其中磷酸化tau是磷酸-tau(S396)，任选地其中当与Gal3接触时，磷酸化tau形成三聚体、四聚体或更高级的寡聚体。
37.前述排列中任一项所述的组合物，其中蛋白质包括APOE、朊病毒蛋白或NFL或其任意组合，任选地其中APOE是APO-E4。
38.一种试剂盒，其包括前述排列中任一项所述的组合物。
39.一种抑制Gal3-介导的淀粉样蛋白β40和/或淀粉样蛋白β42的淀粉样蛋白聚集的方法，所述方法包括：
使蛋白质与抗Gal3抗体或其结合片段接触，
其中抗Gal3抗体或其结合片段与Gal3的结合抑制Gal3-介导的淀粉样蛋白β40和/或淀粉样蛋白β42的淀粉样蛋白聚集。
40.一种治疗有需要的受试者的阿尔茨海默病的方法，所述方法包括：
向受试者施用抗Gal3抗体或其结合片段，
其中抗Gal3抗体或其结合片段与受试者中Gal3的结合抑制受试者中Gal3-介导的淀粉样蛋白β40和/或淀粉样蛋白β42的淀粉样蛋白聚集、从而治疗受试者的阿尔茨海默病。
41.一种治疗有需要的受试者的CAA的方法，所述方法包括：
向受试者施用抗Gal3抗体或其结合片段，
其中抗Gal3抗体或其结合片段与受试者中Gal3的结合抑制受试者中Gal3-介导的淀粉样蛋白β40和/或淀粉样蛋白β42的聚集，从而治疗受试者的CAA。
42.一种抑制Gal3-介导的磷酸tau的淀粉样蛋白聚集的方法，所述方法包括：
使蛋白质与抗Gal3抗体或其结合片段接触，
其中抗Gal3抗体或其结合片段与Gal3的结合抑制Gal3-介导的磷酸tau的寡聚化。
43.一种治疗有需要的受试者的阿尔茨海默病的方法，所述方法包括：
向受试者施用抗Gal3抗体或其结合片段，
其中抗Gal3抗体或其结合片段与受试者中Gal3的结合抑制受试者中Gal3-介导的磷酸tau的寡聚化，从而治疗受试者的阿尔茨海默病。
44.一种治疗有需要的受试者的tau蛋白病的方法，所述方法包括：
向受试者施用抗Gal3抗体或其结合片段，
其中抗Gal3抗体或其结合片段与受试者中Gal3的结合抑制受试者中Gal3-介导的磷酸tau的寡聚化，从而治疗受试者的tau蛋白病。
45.一种抑制Gal3-介导的α突触核蛋白的寡聚化的方法，所述方法包括：
使蛋白质与抗Gal3抗体或其结合片段接触，
其中抗Gal3抗体或其结合片段与Gal3的结合抑制Gal3-介导的α突触核蛋白的寡聚化。
46.一种治疗有需要的受试者的路易体病的方法，所述方法包括：
向受试者施用抗Gal3抗体或其结合片段，
其中抗Gal3抗体或其结合片段与受试者中Gal3的结合抑制受试者中Gal3-介导的α突触核蛋白的寡聚化，从而治疗受试者的路易体病。
47.一种治疗有需要的受试者的多系统萎缩的方法，所述方法包括：
向受试者施用抗Gal3抗体或其结合片段，
其中抗Gal3抗体或其结合片段与受试者中Gal3的结合抑制受试者中Gal3-介导的α突触核蛋白的寡聚化，从而治疗受试者的多系统萎缩。
48.一种抑制Gal3-介导的APOE-4的寡聚化的方法，所述方法包括：
使蛋白质与抗Gal3抗体或其结合片段接触，
其中抗Gal3抗体或其结合片段与Gal3的结合抑制Gal3-介导的APOE-4的寡聚化。
49.一种治疗有需要的受试者的阿尔茨海默病的方法，所述方法包括：
向受试者施用抗Gal3抗体或其结合片段，
其中抗Gal3抗体或其结合片段与受试者中Gal3的结合抑制受试者中Gal3-介导的APOE-4的寡聚化，从而治疗受试者的阿尔茨海默病。
50.一种治疗有需要的受试者的CAA的方法，所述方法包括：
向受试者施用抗Gal3抗体或其结合片段，
其中抗Gal3抗体或其结合片段与受试者中Gal3的结合抑制受试者中Gal3-介导的α突触核蛋白的寡聚化，从而治疗受试者的CAA。
51.一种抑制Gal3-介导的胆固醇的寡聚化的方法，所述方法包括：
使蛋白质与抗Gal3抗体或其结合片段接触，
其中抗Gal3抗体或其结合片段与Gal3的结合抑制Gal3-介导的胆固醇的寡聚化。
52.一种治疗有需要的受试者的阿尔茨海默病的方法，所述方法包括：
向受试者施用抗Gal3抗体或其结合片段，
其中抗Gal3抗体或其结合片段与受试者中Gal3的结合抑制受试者中Gal3-介导的胆固醇的寡聚化，从而治疗受试者的阿尔茨海默病。
53.一种治疗有需要的受试者的心血管疾病的方法，所述方法包括：
向受试者施用抗Gal3抗体或其结合片段，
其中抗Gal3抗体或其结合片段与受试者中Gal3的结合抑制受试者中Gal3-介导的胆固醇的寡聚化，从而治疗受试者的心血管疾病。
54.一种治疗有需要的受试者的动脉粥样硬化疾病的方法，所述方法包括：
向受试者施用抗Gal3抗体或其结合片段，
其中抗Gal3抗体或其结合片段与受试者中Gal3的结合抑制受试者中Gal3-介导的胆固醇的寡聚化，从而治疗受试者的动脉粥样硬化。
55.一种抑制Gal3-介导的胆甾醇基的寡聚化的方法，所述方法包括：
使蛋白质与抗Gal3抗体或其结合片段接触，
其中抗Gal3抗体或其结合片段与Gal3的结合抑制Gal3-介导的胆甾醇基的寡聚化。
56.一种治疗有需要的受试者的阿尔茨海默病的方法，所述方法包括：
向受试者施用抗Gal3抗体或其结合片段，
其中抗Gal3抗体或其结合片段与受试者中Gal3的结合抑制受试者中Gal3-介导的胆甾醇基的寡聚化，从而治疗受试者的阿尔茨海默病。
57.一种治疗有需要的受试者的心血管疾病的方法，所述方法包括：
向受试者施用抗Gal3抗体或其结合片段，
其中抗Gal3抗体或其结合片段与受试者中Gal3的结合抑制受试者中Gal3-介导的胆甾醇基的寡聚化，从而治疗受试者的心血管疾病。
58.一种治疗有需要的受试者的动脉粥样硬化疾病的方法，所述方法包括：
向受试者施用抗Gal3抗体或其结合片段，
其中抗Gal3抗体或其结合片段与受试者中Gal3的结合抑制受试者中Gal3-介导的胆甾醇基的寡聚化，从而治疗受试者的动脉粥样硬化。
59.一种抑制Gal3-介导的神经源性丝氨酸蛋白酶抑制剂的寡聚化的方法，所述方法包括：
使蛋白质与抗Gal3抗体或其结合片段接触，
其中抗Gal3抗体或其结合片段与Gal3的结合抑制Gal3-介导的神经源性丝氨酸蛋白酶抑制剂的寡聚化。
60.一种治疗有需要的受试者的神经源性丝氨酸蛋白酶抑制剂包涵体家族性脑病(FENIB)的方法，所述方法包括：
向受试者施用抗Gal3抗体或其结合片段，
其中抗Gal3抗体或其结合片段与受试者中Gal3的结合抑制受试者中Gal3-介导的神经源性丝氨酸蛋白酶抑制剂的寡聚化，从而治疗受试者的神经源性丝氨酸蛋白酶抑制剂包涵体家族性脑病(FENIB)。
61.一种抑制Gal3-介导的胰岛素的寡聚化的方法，所述方法包括：
使蛋白质与抗Gal3抗体或其结合片段接触，
其中抗Gal3抗体或其结合片段与Gal3的结合抑制Gal3-介导的胰岛素的寡聚化。
62.一种治疗有需要的受试者的胰岛素源性淀粉样变性的方法，所述方法包括：
向受试者施用抗Gal3抗体或其结合片段，
其中抗Gal3抗体或其结合片段与受试者中Gal3的结合抑制受试者中Gal3-介导的胰岛素的寡聚化，从而治疗受试者的胰岛素源性淀粉样变性。
63.一种治疗有需要的受试者的糖尿病的方法，所述方法包括：
向受试者施用抗Gal3抗体或其结合片段，
其中抗Gal3抗体或其结合片段与受试者中Gal3的结合抑制受试者中Gal3-介导的胰岛素的寡聚化，从而治疗受试者的糖尿病。
64.一种抑制Gal3-介导的半胱氨酸蛋白酶抑制剂-c的寡聚化的方法，所述方法包括：
使蛋白质与抗Gal3抗体或其结合片段接触，
其中抗Gal3抗体或其结合片段与Gal3的结合抑制Gal3-介导的半胱氨酸蛋白酶抑制剂-c的寡聚化。
65.一种治疗有需要的受试者的阿尔茨海默病的方法，所述方法包括：
向受试者施用抗Gal3抗体或其结合片段，
其中抗Gal3抗体或其结合片段与受试者中Gal3的结合抑制受试者中Gal3-介导的半胱氨酸蛋白酶抑制剂-c的寡聚化，从而治疗受试者的阿尔茨海默病。
66.一种治疗有需要的受试者的CAA的方法，所述方法包括：
向受试者施用抗Gal3抗体或其结合片段，
其中抗Gal3抗体或其结合片段与受试者中Gal3的结合抑制受试者中Gal3-介导的半胱氨酸蛋白酶抑制剂-c的寡聚化，从而治疗受试者的CAA。
67.一种治疗有需要的受试者的肾脏疾病的方法，所述方法包括：
向受试者施用抗Gal3抗体或其结合片段，
其中抗Gal3抗体或其结合片段与受试者中Gal3的结合抑制受试者中Gal3-介导的半胱氨酸蛋白酶抑制剂-c的寡聚化，从而治疗受试者的肾脏疾病。
68.一种抑制Gal3-介导的朊病毒蛋白的寡聚化的方法，所述方法包括：
使蛋白质与抗Gal3抗体或其结合片段接触，
其中抗Gal3抗体或其结合片段与Gal3的结合抑制Gal3-介导的朊病毒蛋白的寡聚化。
69.一种治疗有需要的受试者的朊病毒病的方法，所述方法包括：
向受试者施用抗Gal3抗体或其结合片段，
其中抗Gal3抗体或其结合片段与受试者中Gal3的结合抑制受试者中Gal3-介导的朊病毒蛋白的寡聚化，从而治疗受试者的朊病毒病。
70.一种治疗有需要的受试者的传染性海绵状脑病(TSE)的方法，所述方法包括：
向受试者施用抗Gal3抗体或其结合片段，
其中抗Gal3抗体或其结合片段与受试者中Gal3的结合抑制受试者中Gal3-介导的朊病毒蛋白的寡聚化，从而治疗受试者的传染性海绵状脑病(TSE)。
71.一种治疗有需要的受试者的家族性克雅氏病(CJD)的方法，所述方法包括：
向受试者施用抗Gal3抗体或其结合片段，
其中抗Gal3抗体或其结合片段与受试者中Gal3的结合抑制受试者中Gal3-介导的朊病毒蛋白的寡聚化，从而治疗受试者的家族性克雅氏病(CJD)。
72.一种治疗有需要的受试者的致命性家族性失眠症的方法，所述方法包括：
向受试者施用抗Gal3抗体或其结合片段，
其中抗Gal3抗体或其结合片段与受试者中Gal3的结合抑制受试者中Gal3-介导的朊病毒蛋白的寡聚化，从而治疗受试者的致命性家族性失眠症。
73.一种治疗有需要的受试者的格斯特曼-斯特劳斯勒-沙因克病的方法，所述方法包括：
向受试者施用抗Gal3抗体或其结合片段，
其中抗Gal3抗体或其结合片段与受试者中Gal3的结合抑制受试者中Gal3-介导的朊病毒蛋白的寡聚化，从而治疗受试者的格斯特曼-斯特劳斯勒-沙因克病。
74.一种抑制Gal3-介导的肌生长抑制素的寡聚化的方法，所述方法包括：
使蛋白质与抗Gal3抗体或其结合片段接触，
其中抗Gal3抗体或其结合片段与Gal3的结合抑制Gal3-介导的肌生长抑制素的寡聚化。
75.一种治疗有需要的受试者的特发性炎性肌病(IIM)的方法，所述方法包括：
向受试者施用抗Gal3抗体或其结合片段，
其中抗Gal3抗体或其结合片段与受试者中Gal3的结合抑制受试者中Gal3-介导的肌生长抑制素的寡聚化，从而治疗受试者的治疗特发性炎性肌病(IIM)。
76.一种抑制Gal3-介导的甲状腺素运载蛋白的寡聚化的方法，所述方法包括：
使蛋白质与抗Gal3抗体或其结合片段接触，
其中抗Gal3抗体或其结合片段与Gal3的结合抑制Gal3-介导的甲状腺素运载蛋白的寡聚化。
77.一种治疗有需要的受试者的甲状腺素运载蛋白淀粉样变性的方法，所述方法包括：
向受试者施用抗Gal3抗体或其结合片段，
其中抗Gal3抗体或其结合片段与受试者中Gal3的结合抑制受试者中Gal3-介导的甲状腺素运载蛋白的寡聚化，从而治疗受试者的甲状腺素运载蛋白淀粉样变性。
78.一种治疗有需要的受试者的心脏和/或肾脏疾病的方法，所述方法包括：
向受试者施用抗Gal3抗体或其结合片段，
其中抗Gal3抗体或其结合片段与受试者中Gal3的结合抑制受试者中Gal3-介导的甲状腺素运载蛋白的寡聚化，从而治疗受试者的心脏和/或肾脏疾病。
79.一种治疗有需要的受试者的先兆子痫的方法，所述方法包括：
向受试者施用抗Gal3抗体或其结合片段，
其中抗Gal3抗体或其结合片段与受试者中Gal3的结合抑制受试者中Gal3-介导的甲状腺素运载蛋白的寡聚化，从而治疗受试者的先兆子痫。
80.一种抑制Gal3-介导的苯丙氨酸的寡聚化的方法，所述方法包括：
使蛋白质与抗Gal3抗体或其结合片段接触，
其中抗Gal3抗体或其结合片段与Gal3的结合抑制Gal3-介导的苯丙氨酸的寡聚化。
81.一种治疗有需要的受试者的苯丙酮尿症的方法，所述方法包括：
向受试者施用抗Gal3抗体或其结合片段，
其中抗Gal3抗体或其结合片段与受试者中Gal3的结合抑制受试者中Gal3-介导的苯丙氨酸的寡聚化，从而治疗受试者的苯丙酮尿症。
82.一种抑制Gal3-介导的谷氨酰胺的寡聚化的方法，所述方法包括：
使蛋白质与抗Gal3抗体或其结合片段接触，
其中抗Gal3抗体或其结合片段与Gal3的结合抑制Gal3-介导的谷氨酰胺的寡聚化。
83.一种治疗有需要的受试者的亨廷顿病的方法，所述方法包括：
向受试者施用抗Gal3抗体或其结合片段，
其中抗Gal3抗体或其结合片段与受试者中Gal3的结合抑制受试者中Gal3-介导的谷氨酰胺的寡聚化，从而治疗受试者的亨廷顿病。
84.一种抑制Gal3-介导的神经丝轻链(NFL)的寡聚化的方法，所述方法包括：
使蛋白质和抗Gal3抗体或其结合片段接触，
其中抗Gal3抗体或其结合片段与Gal3的结合抑制Gal3-介导的NFL的寡聚化。
85.一种治疗有需要的受试者的运动神经元变性的方法，所述方法包括：
向受试者施用抗Gal3抗体或其结合片段，
其中抗Gal3抗体或其结合片段与受试者中Gal3的结合抑制受试者中Gal3-介导的NFL的寡聚化，从而治疗受试者的运动神经元变性。
86.一种抑制Gal3-介导的纤维蛋白的淀粉样蛋白聚集的方法，所述方法包括：
使蛋白质与抗Gal3抗体或其结合片段接触，
其中抗Gal3抗体或其结合片段与Gal3的结合抑制Gal3-介导的纤维蛋白的寡聚化。
87.一种治疗有需要的受试者的脑血管损伤的方法，所述方法包括：
向受试者施用抗Gal3抗体或其结合片段，
其中抗Gal3抗体或其结合片段与受试者中Gal3的结合抑制受试者中Gal3-介导的纤维蛋白的寡聚化，从而治疗受试者的脑血管损伤。
88.一种治疗有需要的受试者的中风的方法，所述方法包括：
向受试者施用抗Gal3抗体或其结合片段，
其中抗Gal3抗体或其结合片段与受试者中Gal3的结合抑制受试者中Gal3-介导的纤维蛋白的寡聚化，从而治疗受试者的中风。
89.一种治疗有需要的受试者的CAA的方法，所述方法包括：
向受试者施用抗Gal3抗体或其结合片段，
其中抗Gal3抗体或其结合片段与受试者中Gal3的结合抑制受试者中Gal3-介导的纤维蛋白的寡聚化，从而治疗受试者的CAA。
90.一种治疗有需要的受试者的阿尔茨海默病的方法，所述方法包括：
向受试者施用抗Gal3抗体或其结合片段，
其中抗Gal3抗体或其结合片段与受试者中Gal3的结合抑制受试者中Gal3-介导的纤维蛋白的寡聚化，从而治疗受试者的阿尔茨海默病。
91.一种抑制Gal3-介导的溶菌酶的寡聚化的方法，所述方法包括：
使蛋白质与抗Gal3抗体或其结合片段接触，
其中抗Gal3抗体或其结合片段与Gal3的结合抑制Gal3-介导的溶菌酶的寡聚化。
92.一种治疗有需要的受试者的人全身性淀粉样蛋白疾病的方法，所述方法包括：
向受试者施用抗Gal3抗体或其结合片段，
其中抗Gal3抗体或其结合片段与受试者中Gal3的结合抑制受试者中Gal3-介导的溶菌酶的寡聚化，从而治疗受试者的人全身性淀粉样蛋白疾病。
93.一种抑制Gal3-介导的补体蛋白C3和/或C9的淀粉样蛋白聚集的方法，所述方法包括：
使蛋白质与抗Gal3抗体或其结合片段接触，
其中抗Gal3抗体或其结合片段与Gal3的结合抑制Gal3-介导的补体蛋白C3和/或C9的寡聚化。
94.一种治疗有需要的受试者的先天免疫系统破坏的方法，所述方法包括：
向受试者施用抗Gal3抗体或其结合片段，
其中抗Gal3抗体或其结合片段与受试者中Gal3的结合抑制受试者中Gal3-介导的补体蛋白C3和/或C9的寡聚化，从而治疗受试者的先天免疫系统破坏。
95.一种抑制Gal3-介导的晶体蛋白的寡聚化的方法，所述方法包括：
使蛋白质与抗Gal3抗体或其结合片段接触，
其中抗Gal3抗体或其结合片段与Gal3的结合抑制Gal3-介导的晶体蛋白的寡聚化。
96.一种治疗有需要的受试者的受试眼睛的晶状体损伤和/或视力模糊的方法，所述方法包括：
向受试者施用抗Gal3抗体或其结合片段，
其中抗Gal3抗体或其结合片段与受试者中Gal3的结合抑制受试者中Gal3-介导的晶体蛋白的寡聚化，从而治疗受试者的受试眼睛的晶状体损伤和/或视力模糊。
97.一种抑制Gal3-介导的心房钠尿肽(ANP)的寡聚化的方法，所述方法包括：
使蛋白质与抗Gal3抗体或其结合片段接触，
其中抗Gal3抗体或其结合片段与Gal3的结合抑制Gal3-介导的ANP的寡聚化。
98.一种治疗有需要的受试者的充血性心力衰竭(CHF)的方法，所述方法包括：
向受试者施用抗Gal3抗体或其结合片段，
其中抗Gal3抗体或其结合片段与受试者中Gal3的结合抑制受试者中Gal3-介导的ANP的寡聚化，从而治疗受试者的CHF。
99.一种治疗有需要的受试者的心脏淀粉样变性的方法，所述方法包括：
向受试者施用抗Gal3抗体或其结合片段，
其中抗Gal3抗体或其结合片段与受试者中Gal3的结合抑制受试者中Gal3-介导的ANP的寡聚化，从而治疗受试者的心脏淀粉样变性。
100.一种抑制Gal3-介导的B-型钠尿肽(BNP)的寡聚化的方法，所述方法包括：
使蛋白质与抗Gal3抗体或其结合片段接触，
其中抗Gal3抗体或其结合片段与Gal3的结合抑制Gal3-介导的BNP的寡聚化。
101.一种治疗有需要的受试者的充血性心力衰竭(CHF)的方法，所述方法包括：
向受试者施用抗Gal3抗体或其结合片段，
其中抗Gal3抗体或其结合片段与受试者中Gal3的结合抑制受试者中Gal3-介导的BNP的寡聚化，从而治疗受试者的CHF。
102.一种治疗有需要的受试者的心脏淀粉样变性的方法，所述方法包括：
向受试者施用抗Gal3抗体或其结合片段，
其中抗Gal3抗体或其结合片段与受试者中Gal3的结合抑制受试者中Gal3-介导的BNP的寡聚化，从而治疗受试者的心脏淀粉样变性。
103.一种抑制Gal3-介导的降钙素的寡聚化的方法，所述方法包括：
使蛋白质与抗Gal3抗体或其结合片段接触，
其中抗Gal3抗体或其结合片段与Gal3的结合抑制Gal3-介导的降钙素的淀粉样蛋白聚集。
104.一种治疗有需要的受试者的甲状腺髓样癌(MTC)的方法，所述方法包括：
向受试者施用抗Gal3抗体或其结合片段，
其中抗Gal3抗体或其结合片段与受试者中Gal3的结合抑制受试者中Gal3-介导的降钙素的寡聚化，从而治疗受试者的MTC。
105.一种治疗有需要的受试者的骨质疏松症的方法，所述方法包括：
向受试者施用抗Gal3抗体或其结合片段，
其中抗Gal3抗体或其结合片段与受试者中Gal3的结合抑制受试者中Gal3-介导的降钙素的寡聚化，从而治疗受试者的骨质疏松症。
106.一种治疗有需要的受试者的佩吉特氏病的方法，所述方法包括：
向受试者施用抗Gal3抗体或其结合片段，
其中抗Gal3抗体或其结合片段与受试者中Gal3的结合抑制受试者中Gal3-介导的降钙素的寡聚化，从而治疗受试者的佩吉特氏病。
107.一种抑制Gal3-介导的血清淀粉样蛋白(A)(SAA)的寡聚化的方法，所述方法包括：
使蛋白质与抗Gal3抗体或其结合片段接触，
其中抗Gal3抗体或其结合片段与Gal3的结合抑制Gal3-介导的血清淀粉样蛋白(A)(SAA)的寡聚化。
108.一种治疗有需要的受试者的外周淀粉样变性的方法，所述方法包括：
向受试者施用抗Gal3抗体或其结合片段，
其中抗Gal3抗体或其结合片段与受试者中Gal3的结合抑制受试者中Gal3-介导的血清淀粉样蛋白(A)(SAA)的寡聚化，从而治疗受试者的外周淀粉样变性。
109.一种抑制Gal3-介导的胰岛淀粉样多肽(IAPP)的淀粉样蛋白聚集的方法，所述方法包括：
使蛋白质与抗Gal3抗体或其结合片段接触，
其中抗Gal3抗体或其结合片段与Gal3的结合抑制Gal3-介导的IAPP的寡聚化。
110.一种治疗有需要的受试者的2型糖尿病的方法，所述方法包括：
向受试者施用抗Gal3抗体或其结合片段，
其中抗Gal3抗体或其结合片段与受试者中Gal3的结合抑制受试者中Gal3-介导的IAPP的寡聚化，从而治疗受试者的2型糖尿病。
111.一种抑制Gal3-介导的TAR DNA结合蛋白43(TDP-43)的淀粉样蛋白聚集的方法，所述方法包括：
使蛋白质与抗Gal3抗体或其结合片段，
其中抗Gal3抗体或其结合片段与Gal3的结合抑制Gal3-介导的TDP-43的寡聚化。
112.一种治疗有需要的受试者的肌萎缩侧索硬化症(ALS)的方法，所述方法包括：
向受试者施用抗Gal3抗体或其结合片段，
其中抗Gal3抗体或其结合片段与受试者中Gal3的结合抑制受试者中Gal3-介导的TDP-43的寡聚化，从而治疗受试者的ALS。
113.一种治疗有需要的受试者的额颞叶变性(FTLD)的方法，所述方法包括：
向受试者施用抗Gal3抗体或其结合片段，
其中抗Gal3抗体或其结合片段与受试者中Gal3的结合抑制受试者中Gal3-介导的TDP-43的寡聚化，从而治疗受试者的FTLD。
114.前述排列中任一项所述的方法，其中抗Gal3抗体或其结合片段包括(1)重链可变区，其包括VH-CDR1、VH-CDR2和VH-CDR3；以及(2)轻链可变区，其包括VL-CDR1、VL-CDR2和VL-CDR3，其中
VH-CDR1包含与SEQ ID NO：27-70的氨基酸序列中的任一个具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列；
VH-CDR2包含与SEQ ID NO：71-111、801、951、952的氨基酸序列中的任一个具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列；
VH-CDR3包含与SEQ ID NO：112-169、802、953、954的氨基酸序列中的任一个具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列；
VL-CDR1包含与SEQ ID NO：170-220的氨基酸序列中的任一个具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列；
VL-CDR2包含与SEQ ID NO：211-247的氨基酸序列中的任一个具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列；和
VL-CDR3包含与SEQ ID NO：248-296的氨基酸序列中的任一个具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列；或者其中抗体或其结合片段包括与任意一种或多种前述抗Gal3抗体或其结合片段竞争结合的阻断抗体，其中阻断抗体在竞争上胜过抗Gal3抗体或其结合片段至少80％有效。
115.前述排列中任一项所述的方法，其中抗Gal3抗体或其结合片段包括如图13中阐释的VH-CDR1、VH-CDR2、VH-CDR3、VL-CDR1、VL-CDR2和VL-CDR3的组合；或者其中抗体或其结合片段包括与任意一种或多种前述抗Gal3抗体或其结合片段竞争结合的阻断抗体，其中阻断抗体在竞争上胜过抗Gal3抗体或其结合片段至少80％有效。
116.前述排列中任一项所述的方法，其中重链可变区包含与选自SEQ ID NO：297-373、803、806-820、940、955-968、1067-1109、1415-1439的序列具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的序列；或者其中抗体或其结合片段包括与任意一种或多种前述抗Gal3抗体或其结合片段竞争结合的阻断抗体，其中阻断抗体在竞争上胜过抗Gal3抗体或其结合片段至少80％有效。
117.前述排列中任一项所述的方法，其中轻链可变区包含与选自SEQ ID NO：374-447、821-835、941-943、969-982、1110-1152、1440-1464的序列具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的序列；或者其中抗体或其结合片段包括与任意一种或多种前述抗Gal3抗体或其结合片段竞争结合的阻断抗体，其中阻断抗体在竞争上胜过抗Gal3抗体或其结合片段至少80％有效。
118.前述排列中任一项所述的方法，其中抗Gal3抗体或其结合片段包括重链，其中所述重链包含与选自SEQ ID NO：448-494、804、836-850、983-996、1153-1195、1411、1465-1489的序列具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的序列；或者其中抗体或其结合片段包括与任意一种或多种前述抗Gal3抗体或其结合片段竞争结合的阻断抗体，其中阻断抗体在竞争上胜过抗Gal3抗体或其结合片段至少80％有效。
119.前述排列中任一项所述的方法，其中抗Gal3抗体或其结合片段包括轻链，其中所述轻链包含与选自SEQ ID NO：495-538、805、851-865、997-1010、1196-1238、1412、1490-1514的序列具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的序列；或者其中抗体或其结合片段包括与任意一种或多种前述抗Gal3抗体或其结合片段竞争结合的阻断抗体，其中阻断抗体在竞争上胜过抗Gal3抗体或其结合片段至少80％有效。
120.前述排列中任一项所述的方法，其中抗Gal3抗体或其结合片段选自由以下的至少一种组成的组：TB001、TB006、12G5.D7、13A12.2E5、14H10.2C9、15F10.2D6、19B5.2E6、20D11.2C6、20H5.A3、23H9.2E4、2D10.2B2、3B11.2G2、7D8.2D8、mIMT001、4A11.2B5、4A11.H1L1、4A11.H4L2、4G2.2G6、6B3.2D3、6H6.2D6、9H2.2H10、13G4.2F8、13H12.2F8、15G7.2A7、19D9.2E5、23B10.2B12、24D12.2H9、F846C.1B2、F846C.1F5、F846C.1H12、F846C.1H5、F846C.2H3、F846TC.14A2、F846TC.14E4、F846TC.16B5、F846TC.7F10、F847C.10B9、F847C.11B1、F847C.12F12、F847C.26F5、F847C.4B10、F849C.8D10、F849C.8H3、846.2B11、846.4D5、846T.1H2、847.14H4、846.2D4、846.2F11、846T.10B1、846T.2E3、846T.4C9、846T.4E11、846T.4F5、846T.8D1、847.10C9、847.11D6、847.15D12、847.15F9、847.15H11、847.20H7、847.21B11、847.27B9、847.28D1、847.2B8、847.3B3、849.1D2、849.2D7、849.2F12、849.4B2、849.4F12、849.4F2、849.5C2、849.8D12、F847C.21H6、849.5H1、847.23F11、847.16D10、847.13E2-mH0mL1、847.13E2-mH0mL2、847.12C4、847.4D3、2D10-VH0-VL0、2D10-hVH4-HVL1、2D10-hVH4-HVL2、2D10-hVH4-HVL3、2D10-hVH4-HVL4、2D10-hVH3-HVL1、2D10-hVH3-HVL2、2D10-hVH3-HVL3、2D10-hVH3-HVL4、20H5.A3-VH3VL1、20H5.A3-VH3VL3、20H5.A3-VH4VL1、20H5.A3-VH5VL1、20H5.A3-VH5VL3、20H5.A3-VH6VL1、20H5.A3-VH6VL3或其结合片段；或者其中抗体或其结合片段包括与任意一种或多种前述抗Gal3抗体或其结合片段竞争结合的阻断抗体，其中阻断抗体在竞争上胜过抗Gal3抗体或其结合片段至少80％有效。
121.前述排列中任一项所述的方法，其中抗Gal3抗体或其结合片段选自由以下的至少一种组成的组：2D10-VH0-VL0、2D10-hVH4-HVL1、2D10-hVH4-HVL2、2D10-hVH4-HVL3、2D10-hVH4-HVL4、2D10-hVH3-HVL1、2D10-hVH3-HVL2、2D10-hVH3-HVL3、2D10-hVH3-HVL4或其结合片段；或者其中抗体或其结合片段包括与任意一种或多种前述抗Gal3抗体或其结合片段竞争结合的阻断抗体，其中阻断抗体在竞争上胜过抗Gal3抗体或其结合片段至少80％有效；或者其中抗体或其结合片段包括与任意一种或多种前述抗Gal3抗体或其结合片段竞争结合的阻断抗体，其中阻断抗体在竞争上胜过抗Gal3抗体或其结合片段至少80％有效。
122.前述排列中任一项所述的方法，其中抗Gal3抗体或其结合片段选自由以下的至少一种组成的组：21H6-H0L0、21H6-H1L1、21H6-H1L2、21H6-H1L3、21H6-H1L4、21H6-H2L1、21H6-H2L2、21H6-H2L3、21H6-H2L4、21H6-H3L1、21H6-H3L2、21H6-H3L3、21H6-H3L4、21H6-H4L1、21H6-H4L2、21H6-H4L3、21H6-H4L4、21H6-H5L1、21H6-H5L2、21H6-H5L3、21H6-H5L4、21H6-H6L1、21H6-H6L2、21H6-H6L3、21H6-H6L4或其结合片段；或者其中抗体或其结合片段包括与任意一种或多种前述抗Gal3抗体或其结合片段竞争结合的阻断抗体，其中阻断抗体在竞争上胜过抗Gal3抗体或其结合片段至少80％有效。
123.前述排列中任一项所述的方法，其中80％通过实施例54中提供的竞争测定来确定。
124.前述排列中任一项所述的方法，其中80％如下确定：
(A)将Ab在PBS中从浓度4μg/ml稀释2倍，并通过每孔添加80μl包被96孔ELISA板；
(B)将板在4℃下过夜孵育后，用300μl PBST洗涤板三次，然后用每孔150μl的2％BSA的PBST进行封闭步骤，并在室温(RT)下轻轻振荡孵育1小时；
(C)结合溶液通过在2％BSA的PBST缓冲液中从4μg/ml 2倍稀释至4μg/ml的浓度来制备；
(D)然后对于每种半乳凝素-3，通过按列每孔添加60μl将稀释液应用到板上，然后在2％BSA的PBST中纵向两倍系列稀释；
(E)将板在室温下轻轻振荡孵育1小时，然后用300μl PBST洗涤三次；
(F)其后，将HRP-标记的抗FLAG抗体在2％BSA的PBST中稀释至1∶2000，并将25μl添加到所有孔中；
(G)将板在室温下轻轻振荡孵育40分钟，然后用300μl PBST洗涤三次；
(H)为了使板显色，将50μl的ABTS底物添加到每孔中并孵育，直至获得足够高的信号；
(I)在酶标仪中在405nm的吸光度处读取；以及任选地，
(J)可使用GraphPad Prism 8.0软件(GraphPad Software Inc)对数据进行绘图。
125.一种抑制Gal3-介导的寡聚化的方法，所述方法包括：
使一种或多种单体与抗Gal3抗体或其结合片段接触，
其中抗Gal3抗体或其结合片段与Gal3的结合抑制Gal3-介导的一个或多个单体的寡聚化。
实施例
在以下实施例中更详细地公开了以上讨论的实施方式的一些方面，这些实施例不以任何方式旨在限制本公开的范围。本领域技术人员将理解，许多其他实施方式也落入本发明的范围内，如以上本文和权利要求中描述的。
实施例1.Gal3抗体阻断Gal3-诱导的α-突触核蛋白的聚集
α-突触核蛋白的病理性聚集是共核蛋白病的共同特征，所述共核蛋白病包括帕金森氏病(PD)、路易体痴呆症和多系统萎缩。为了测试抗Gal3抗体是否可用于抑制共核蛋白病，首先确定Gal3促进α-突触核蛋白聚集。将α-突触核蛋白与重组人Gal3混合，并通过蛋白质印迹测量复合物的分子量。
通过添加10mM磷酸钠缓冲液(pH 7.4)将α-突触核蛋白(R&D Systems Cat#SP-485-500)稀释至终浓度0.1mg/ml。仅0.1mg/mLα-突触核蛋白、仅0.1mg/mL Gal3、或α-突触核蛋白与Gal-3的组合在室温下用搅拌棒连续搅拌，并在孵育的0、1、2、3、4和5小时取出样品。然后将样品上样到4-12％CriterionTM XT Bis-Tris蛋白质凝胶(Bio-Rad#3450124)上。在SDS-PAGE装置(BioRad)中以100V分离样品，并将解析的蛋白质在300毫安下转移到甲醇激活的硝酸纤维素膜(Amersham GE#10600001)上60分钟。通过将膜在TBS+Tween-20(TBS-T)(Chem Cruz#281695)中的10％脱脂奶粉中在室温下孵育1小时来阻断非特异性结合。然后将印迹与对α-突触核蛋白特异性的Syn1小鼠一抗(BD Biosciences#610787)在4℃下孵育过夜。在TBS-T中洗涤三次5分钟后，将膜与抗小鼠HRP二抗(Abcam#ab6789)在室温下孵育1小时。在TBS-T中洗涤三次5分钟后，将膜与化学发光检测试剂(Advansta Cat#R-03021-D10和#R-03031-D10)孵育1-5秒。在Azure成像仪上捕获图像。
图4A-B表明Gal3促进α-突触核蛋白的积累。图4A显示蛋白质印迹，其中当α-突触核蛋白与Gal3孵育时，存在由α-突触核蛋白抗体特异性检测的较高分子量条带(～50kDa)，但当单独孵育时则不存在。图4B量化了图4A中所示的聚集体随时间的逐渐出现。
在孵育的0、1、2和3小时时间点，对仅α-突触核蛋白、与Gal3孵育的α-突触核蛋白以及仅Gal3的样品进行斑点印迹(图4C)。斑点印迹证实了由A11抗体和α-突触核蛋白特异性抗体检测的α-突触核蛋白聚集体的存在。
使用ELISA测定Gal3与聚集的α-突触核蛋白的结合。在ELISA之前，通过多天搅拌聚集人α-突触核蛋白(R&D Systems，SP-485-500)，按照制造商的说明，使用EZ LinkSulfo-NHS-LC-生物素(ThermoFisher Scientific，A39257)生物素化，并且用Zeba旋转脱盐柱(ThermoFisher Scientific，89882)脱盐。
为了开始ELISA，通过将半乳凝素-3蛋白(TrueBinding，QCB200349)(TrueBinding，QCB200352)(Biolegend，599806)在单独体积的PBS(Corning，21-030-CM)中稀释(每种稀释至4μg/ml的浓度)来制备包被溶液。通过沿96孔ELISA板(ThermoScientific，44-2401-21)的顶行每孔添加80μl(每种蛋白质4个孔)将包被溶液应用到板上，然后在PBS中向下两倍系列稀释。在4℃O/N下孵育板后，用300μl PBST洗涤板三次，然后进行封闭步骤，其中将150μl的2％BSA的PBST添加到每孔中，并在室温下轻轻振荡孵育1小时。然后将现有的封闭溶液从板上丢弃。用于结合的α-突触核蛋白溶液通过将生物素化的聚集的α-突触核蛋白在2％BSA的PBST中稀释至4μg/ml的浓度来制备，然后通过逐列每孔添加60μl进行三列(对于每种半乳凝素-3一列)应用到板上，然后在2％BSA的PBST中纵向向右两倍系列稀释。将板在室温下轻轻振荡孵育1小时，并且然后用300μl PBST洗涤三次。其后，将亲和素-HRP(Biolegend，405103)在2％BSA的PBST中稀释至1∶2000，然后将25μl添加到所有孔中。将板在室温下轻轻振荡孵育1小时，然后用300μl PBST洗涤三次。为了使板显色，将50μl的TMB底物添加到每孔中，孵育直至达到足够的信号，然后每孔用25μl的1N HCl停止。在酶标仪中在450nm的吸光度处读取板。使用GraphPad Prism 8.0软件(GraphPadSoftware Inc)对数据进行绘图。
图91描绘了检查hGal3与聚集的α-突触核蛋白的结合的ELISA测定的结果。如图91中所见，即使在聚集的α-突触核蛋白或hGal3的递减浓度下，hGal3也表现出与聚集的朊病毒蛋白的强结合。
为了鉴定具有治疗潜力的抗Gal3抗体，进行了阻断聚集的抗Gal3抗体的筛选。使用ELISA评估各种抗体对半乳凝素-3：：聚集的α-突触核蛋白的阻断效力。
在ELISA之前，通过多天的搅拌来聚集α-突触核蛋白，按照制造商的说明，使用EZLink Sulfo-NHS-LC-生物素(ThermoFisher Scientific，A39257)进行生物素化，并使用Zeba旋转脱盐柱(ThermoFisher Scientific，89882)进行脱盐。
将人半乳凝素-3(Gal3)蛋白(TrueBinding，QCB200377)在PBS中稀释至4μg/ml的浓度，并通过向每孔应用35μl来包被96孔ELISA板。将板在4℃O/N下孵育后，用300μl PBST将板洗涤三次。然后用150μl的2％BSA的PBST在室温下轻轻振荡将板封闭1小时。此后，弃去2％BSA的PBST，并且将30μl的在2％BSA的PBST中的TB001(TrueBinding，QC190118)、TB006(TrueBinding，QC200208)、几种20H5(TrueBinding，各种QC#)或Synagis hIgG4同种型(TrueBinding，QC190234)(从10μg/ml开始3倍系列稀释)添加到孔中，然后立即添加30μl的在2％BSA的PBST中的1μg/ml的生物素化α-突触核蛋白。将板在室温下轻轻振荡孵育1小时，并且然后用300μl PBST洗涤三次。此后，将亲和素HRP(Biolegend，405103)在2％BSA的PBST中稀释(1∶2000稀释)，并将25μl添加到孔中。将板在室温下轻轻振荡孵育1小时，并且用300μl PBST洗涤三次。将50μl的ABTS(Life Technologies，00-2024)添加到每孔中进行显色，然后使用酶标仪在405nm处读取板。使用GraphPad Prism 8.0软件(GraphPad SoftwareInc)对数据进行绘图。
图74和75是描绘ELISA筛选的量化结果的表格。
如图74中所见，几种抗Gal3阻断抗体，包括13A12.2E5-hIgG4(S228P)[QC200135]、14H10.2C9-hIgG4(S228P)[QC200137]、19B5-H3L2-hIgG4(S228P)(QC200044)、20D11.2C6-hIgG4(S228P)[QC200083]、20H5.A3-hIgG4(S228P)[QC200079]、2D10-VH0-VL0-hIgG4(S228P)[QC190195]、3B11.2G2-hIgG4(S228P)[QC200078]、anti hGal3 pAb RD、846.1B2-hIgG4(S228P)QC200087、846.1F5-hIgG4(S228P)QC200110、846.1H5-hIgG4(S228P)[QC200131]、846.2H3-hIgG4(S228P)QC200109、846T.14A2-hIgG4(S338P)QC200122、846T.14E4-hIgG4(S228P)QC200117、846T.16B5-hIgG4(S228P)QC200101和846T.7F10-hIgG4(S228P)QC200100显示出显著的阻断活性，其中这些克隆具有大于至少70％的半乳凝素-3：：聚集的α-突触核蛋白阻断效力。
如图75中所见，几种抗Gal3阻断抗体，包括849.8D10-hIgG4(S228P)QC200084、847.10B9-hIgG4(S288P)[QC200125]、847.26F5-hIgG4(S288P)[QC200129]、84712F12-hIgG4(S288P)[QC200127]、15G7.2A7-hIgG4(S228P)(QC200074)、anti-hGal3 pAb、TB006(QC200010)、849.8H3-hIgG4(S288P)(QC200086)、IMT006-5-F(ab’)2[QC200147]、847.27B9-hIgG4(S288P)(QC200161)和TB001(QC190118)展示出显著的阻断活性，其中这些克隆具有大于至少70％的半乳凝素-3：：聚集的α-突触核蛋白阻断活性。
实施例2.Gal3抗体阻断α-突触核蛋白聚集体-诱导的细胞毒性
α-突触核蛋白可引起神经元细胞死亡，导致多巴胺能神经元的损失。为了测试抗Gal3抗体是否可用于抑制α-突触核蛋白病理学，将首先确定在Gal3存在下形成的α-突触核蛋白聚集体是否会导致细胞毒性。将比较用α-突触核蛋白或与Gal3聚集的α-突触核蛋白处理后的SH-SY5Y神经母细胞瘤细胞系中的细胞凋亡。
通过将SH-SY5Y细胞与10μM视黄酸孵育四天，将其分化为多巴胺能表型。分化的细胞将被重新铺板并且用仅α-突触核蛋白、与Gal3预混合形成聚集体的α-突触核蛋白或仅Gal3来刺激。未刺激的细胞将作为对照。根据制造商的说明，使用CytoTox非放射性细胞毒性测定(Promega#G1780)在刺激后达至72小时通过乳酸脱氢酶(LDH)释放来测量细胞凋亡。预期α-突触核蛋白与Gal3预混合形成聚集体将比未刺激的细胞或单独的α-突触核蛋白或单独的Gal3诱导多至少10％的细胞死亡。
为了鉴定具有治疗潜力的抗Gal3抗体，将进行阻断细胞毒性的抗Gal3抗体的筛选。在上述测定中将孵育不同浓度的抗体，并评估细胞死亡的减弱。将鉴定阻断细胞毒性的抗体。预期将鉴定出阻断α-突触核蛋白-诱导的细胞毒性至少10％的抗体以及不影响聚集的抗体。可通过表位binning将阻断物(blocker)进一步细分为子类。
实施例3.Gal3抗体阻断α-突触核蛋白聚集体-诱导的小神经胶质细胞激活
α-突触核蛋白可引起小神经胶质激活，导致神经炎症。为了测试抗Gal3抗体是否可用于抑制α-突触核蛋白病理学，首先确定在Gal3存在下形成的α-突触核蛋白聚集体是否导致小神经胶质激活。使用α-突触核蛋白或与Gal3聚集的α-突触核蛋白处理后，将比较人HMC3(ATCC#CRL-3304)和小鼠BV2小神经胶质细胞系的激活。
将小神经胶质细胞铺板并且用仅α-突触核蛋白、与Gal3预混合形成聚集体的α-突触核蛋白、或仅Gal3来刺激。未刺激的细胞将作为对照。根据制造商的说明，通过针对TNFα、IL-1β或IL-6的ELISA在刺激后达至72小时测量激活。预期与Gal3预混合形成聚集体的α-突触核蛋白将比未刺激的细胞、单独的α-突触核蛋白或单独的Gal3诱导多至少10％的TNFα、IL-1β或IL-6。
为了鉴定具有治疗潜力的抗Gal3抗体，将进行阻断激活的抗Gal3抗体的筛选。在上述测定中将孵育不同浓度的抗体，并评估激活的减弱。预期将鉴定出阻断α-突触核蛋白-诱导的激活至少10％的抗体以及不影响激活的抗体。可通过表位binning对阻断物进一步细分为子类
实施例4.Gal3抗体改善小动物模型中的共核蛋白病
帕金森氏病是共核蛋白病的实例，其由脑黑质中α-突触核蛋白聚集体的积累以及随后多巴胺能神经元的死亡引发。为了鉴定减弱共核蛋白病的抗Gal3抗体，将使用抗Gal3抗体治疗帕金森氏病小鼠模型。α-突触核蛋白聚集体将被注入到小鼠的脑中，其导致帕金森氏-样疾病。
通过行为测试(Rotarod用于运动功能)和血浆多巴胺水平(ELISA)来测试动物的帕金森氏病症状。检测到症状后，将用抗Gal3抗体处理动物。研究结束时，将再次测试行为，测量血浆和脑脊液(CSF)的生物标志物，并将使用脑IHC来检测机制(mechanistic)变化。
预期抗Gal3抗体改善运动功能至少10％，显示出改善的生理学。预期抗Gal3抗体提高血浆和脑脊液多巴胺水平以及NeuN(神经元的标志物)的脑IHC染色面积各至少10％，从而阻断产生多巴胺的神经元减少。预期抗Gal3处理后，通过A11磷酸-Ser129α-突触核蛋白抗体(促进寡聚化的翻译后修饰)或刚果红(斑块的标志物)检测的脑切片面积将减少至少10％，显示对引起神经元死亡和多巴胺减少的α-突触核蛋白聚集的阻断。预期抗Gal3处理后，由Iba-1(一种激活的小神经胶质抗体)或GFAP(一种激活的星形胶质细胞标志物)检测的脑切片面积将减少至少10％，表明处理减少神经炎症。
实施例5：Gal3促进Tau的聚集
神经纤丝缠结是Tau的异常不溶性聚集体，其引起微管功能障碍、神经元变性和tau蛋白病，诸如阿尔茨海默病、进行性核上性麻痹、皮质基底节变性和皮克氏病。为了测试抗Gal3抗体是否可用于抑制tau蛋白病，首先确定Gal3促进Tau聚集。将Tau与重组人Gal3混合，并且用蛋白质印记测量复合物的分子量。
通过添加10mM磷酸钠缓冲液(pH 7.4)将1N4R Tau肽(Tau同种型4)(R&D Systems#SP-501-100)稀释至终浓度0.1mg/ml。仅0.1mg/mL Tau肽、仅0.1mg/mL Gal3、或者Tau与Gal3的组合在室温下用搅拌棒连续搅拌0和5小时。然后将样品上样到4-12％CriterionTMXT Bis-Tris蛋白质凝胶(Bio-Rad#3450124)上。然后将凝胶在SDS-PAGE装置(Biorad)中以100V运行，并将解析的蛋白质在300毫安下转移到甲醇激活的硝酸纤维素膜(Amersham GE#10600001)上60分钟。通过将膜在TBS+Tween-20(TBS-T)(Chem Cruz#281695)中的10％脱脂奶粉中室温孵育1小时来阻断非特异性结合。然后将印迹在对总Tau蛋白特异性的Tau-5一抗(Invitrogen#AHB0042)中于4℃孵育过夜。在TBS-T中洗涤三个5分钟后，将膜与抗小鼠HRP二抗(Abcam#ab6789)在室温下孵育1小时。在TBS-T中洗涤三个5分钟后，将膜与预混合在一起的等量化学发光检测试剂(Advansta Cat#R-03021-D10和#R-03031-D10)孵育1-5秒。在Azure成像仪上捕获图像。
图5A表明Gal3促进了较高分子量的Tau聚集体(～75和110kDa)的积累，当单独孵育Tau时，其几乎是不可检测的。除了额外的复合物和寡聚体形成，观察到的较高分子量的聚集体可能是由于Tau蛋白的构象变化。观察到没有Gal3在～75kDa条带处共迁移。图5B显示了图5A中所示的聚集体的量化。
在孵育的0、1、2、3、4和5小时时间点，对用仅1N4R Tau(4RTau)、与Gal3孵育的4RTau以及仅Gal3的样品进行斑点印迹(图5C)。斑点印迹表明4RTau被Gal3轻微寡聚化，如通过A11抗体和Tau-5总tau蛋白特异性抗体检测的。抗Gal3抗体(804)也用于确认斑点印迹中Gal3的存在。
在Gal3/Tau孵育步骤之后，在孵育的0、0.5、1、2、3、4、5和24小时时间点之后，使用磷酸化Tau(磷酸-tau(S396))还进行类似的斑点印迹(图5D)。斑点印迹表明，与4RTau样品不同，Gal3强烈促进磷酸-tau(S396)的寡聚化，如通过A11抗体和磷酸-tau(S396)特异性抗体检测的，而单独的磷酸-tau在测试的时间点上并没有寡聚化到显著的测量。抗Gal3抗体(804)也用于确认斑点印迹中Gal3的存在。
如本文所示，Gal3对Tau(诸如磷酸-tau)的聚集的促进是非常有效的。当与Gal3在室温下孵育时，磷酸-tau寡聚体可在大约数小时获得。这是与先前的方法(其涉及使用其他诱导剂诸如肝素或蛛网膜酸)相比，先前的方法在37℃下仍需要大约3-4天。
实施例6：Gal3结合聚集的磷酸-tau
为了测试抗Gal3抗体是否可用于抑制tau蛋白病，首先使用ELISA确定Gal3参与聚集的磷酸-tau的形成。
在ELISA之前，按照制造商的说明，通过多天的搅拌来聚集人α-突触核蛋白(R&DSystems，SP-485-500)，使用EZ Link Sulfo-NHS-LC-生物素(ThermoFisher Scientific，A39257)进行生物素化，并使用Zeba旋转脱盐柱(ThermoFisher Scientific，89882)进行脱盐。
为了开始ELISA，通过将半乳凝素-3蛋白(TrueBinding，QCB200349)(TrueBinding，QCB200352)(Biolegend，599806)在分开体积的PBS(Corning，21-030-CM)中稀释(每个稀释至4μg/ml的浓度)来制备包被溶液。通过沿96孔ELISA板(ThermoScientific，44-2401-21)顶行每孔添加80μl，将包被溶液应用到板中(每种蛋白质4个孔)，然后在PBS中向下两倍系列稀释。在4℃O/N下孵育板后，用300μl PBST洗涤板三次，然后进行封闭步骤，其中将150μl的2％BSA的PBST添加到每孔中，并在室温下轻轻振荡孵育1小时。然后将现有的封闭溶液从板上丢弃。用于结合的磷酸-tau溶液通过将生物素化的聚集的磷酸-tau在2％BSA的PBST中稀释至4μg/ml的浓度来制备，然后通过逐列每孔添加60μl进行三列(对于每种半乳凝素-3一列)应用到板上，然后在2％BSA的PBST中纵向向右两倍系列稀释。将板在室温下轻轻振荡孵育1小时，并且然后用300μl PBST洗涤三次。其后，将亲和素-HRP(Biolegend，405103)在2％BSA的PBST中稀释至1∶2000，然后将25μl添加到所有孔中。将板在室温下轻轻振荡孵育1小时，然后用300μl PBST洗涤三次。为了使板显色，将50μl的TMB底物添加到每孔中，孵育直至达到足够的信号，然后用每孔25μl的1N HCl终止。在酶标仪中在450nm的吸光度处读取板。使用GraphPad Prism 8.0软件(GraphPad Software Inc)对数据进行绘图。
图73描绘了检查hGal3与聚集的磷酸-tau的结合的ELISA测定的结果。如图73中所见，hGal3表明与聚集的磷酸-tau的弱结合。
实施例7：Gal3抗体阻断Gal3-诱导的磷酸-tau的聚集
为了鉴定具有治疗潜力的抗Gal3抗体，进行了阻断聚集的抗Gal3抗体的筛选。使用ELISA评估各种抗体针对半乳凝素-3：：聚集的磷酸-tau的阻断效力。
在ELISA之前，通过多天的搅拌来聚集磷酸-tau，按照制造商的说明，使用EZ LinkSulfo-NHS-LC-生物素(ThermoFisher Scientific，A39257)进行生物素化，并使用Zeba旋转脱盐柱(ThermoFisher Scientific，89882)进行脱盐。
将人半乳凝素-3(Gal3)蛋白(TrueBinding，QCB200377)在PBS中稀释至4μg/ml的浓度，并且通过向每孔应用35μl来包被96孔ELISA板。将板在4℃O/N下孵育后，用300μlPBST洗涤板三次。然后用150μl的2％BSA的PBST在室温下轻轻振荡将板封闭1小时。此后，弃去2％BSA的PBST，并且将30μl的在2％BSA的PBST中的TB001(TrueBinding，QC190118)、TB006(TrueBinding，QC200208)、几种20H5(TrueBinding，various QC#)或Synagis hIgG4同种型(TrueBinding，QC190234)(从10μg/ml开始系列稀释3倍)添加到孔中，然后立即添加30μl的在2％BSA的PBST中的1μg/ml的生物素化的磷酸-tau。将板在室温下轻轻振荡孵育1小时，并且然后用300μl PBST洗涤三次。此后，将亲和素蛋白HRP(Biolegend，405103)在2％BSA的PBST中稀释(1∶2000稀释)，并将25μl添加到孔中。将板在室温下轻轻振荡孵育1小时，并且用300μl PBST洗涤三次。每孔加入50μl的ABTS(Life Technologies，00-2024)进行显色，然后使用酶标仪在405nm处读取板。使用GraphPad Prism 8.0软件(GraphPad SoftwareInc)对数据进行绘图。
图74和75是描绘ELISA筛选的量化结果的表格。
如图74中所见，几种抗Gal3阻断抗体，包括13A12.2E5-hIgG4(S228P)[QC200135]、14H10.2C9-hIgG4(S228P)[QC200137]、19B5-H3L2-hIgG4(S228P)(QC200044)、20D11.2C6-hIgG4(S228P)[QC200083]、20H5.A3-hIgG4(S228P)[QC200079]、2D10-VH0-VL0-hIgG4(S228P)[QC190195]、3B11.2G2-hIgG4(S228P)[QC200078]、846.1B2-hIgG4(S228P)QC200087、846.1F5-hIgG4(S228P)QC200110、846.2H3-hIgG4(S228P)QC200109、846T.14A2-hIgG4(S338P)QC200122、846T.14E4-hIgG4(S228P)QC200117和846T.16B5-hIgG4(S228P)QC200101，展示出显著的阻断活性，其中这些克隆具有大于至少70％的半乳凝素-3：：聚集的磷酸-tau阻断效力。
如图75中所见，几种抗Gal3阻断抗体，包括847.26F5-hIgG4(S288P)[QC200129]、84712F12-hIgG4(S288P)[QC200127]、15G7.2A7-hIgG4(S228P)(QC200074)、TB006(QC200010)、849.8H3-hIgG4(S288P)(QC200086)、IMT006-5-F(ab’)2[QC200147]、847.27B9-hIgG4(S288P)(QC200161)和TB001(QC190118)，展示出显著的阻断活性，其中这些克隆具有大于至少70％的半乳凝素-3：：聚集的磷酸-tau阻断效力。
实施例8：Gal3抗体阻断Tau聚集体-诱导的神经元细胞毒性
Tau可引起神经元细胞死亡，导致神经元的损失。为了测试抗Gal3抗体是否可用于抑制Tau病理学，首先要确定在Gal3存在下形成的Tau聚集体是否导致细胞毒性。在含或不含Gal3预孵育的Tau处理后将比较SH-SY5Y神经母细胞瘤细胞系中的细胞凋亡。
将SH-SY5Y细胞铺板并且用仅Tau、与Gal3预混合形成聚集体的Tau或仅Gal3来刺激。未刺激的细胞将作为对照。将使用CytoTox非放射性细胞毒性测定(Promega#G1780)在刺激后达至72小时根据制造商的说明通过乳酸脱氢酶(LDH)释放来测量细胞死亡。预期与Gal3预混合形成聚集体的Tau将比未刺激的细胞、单独的α-突触核蛋白或单独的Gal3诱导多至少10％的细胞死亡。
为了鉴定具有治疗潜力的抗Gal3抗体，将进行阻断细胞毒性的抗Gal3抗体的筛选。在上述测定中将孵育不同浓度的抗体，并评估细胞死亡的减弱。将鉴定阻断细胞毒性至少10％的抗体和不影响细胞毒性的抗体。可通过表位binning对阻断物进一步细分为子类。
实施例9：Gal3抗体阻断Tau聚集体-诱导的小神经胶质细胞激活
Tau聚集体可引起小神经胶质激活，导致神经炎症。为了测试抗Gal3抗体是否可用于抑制Tau病理学，首先要确定在Gal3存在下形成的Tau聚集体是否导致小神经胶质激活。在用Tau或与Gal3聚集的Tau处理后，将比较人HMC3(ATCC#CRL-3304)和小鼠BV2小神经胶质细胞系的激活。
将小神经胶质细胞铺板并且用仅Tau、与Gal3预混合形成聚集体的Tau或仅Gal3来刺激。未刺激的细胞将作为对照。根据制造商的说明，将通过针对TNFα、IL-1β或IL-6的ELISA在刺激后达至72小时测定激活。预期与Gal3预混合形成聚集体的Tau将比未刺激的细胞或单独的Tau或Gal3诱导多至少10％的TNFα、IL-1β或IL-6。
为了鉴定具有治疗潜力的抗Gal3抗体，将进行阻断激活的抗Gal3抗体的筛选。在上述测定中将孵育不同浓度的抗体并评估激活的减弱。预期将鉴定阻断Tau-诱导的激活至少10％的抗体以及不影响激活的抗体。可通过表位binning对阻断物进一步细分为子类。
实施例10：Gal3抗体改善小动物模型中的tau蛋白病
阿尔茨海默病是tau蛋白病的实例，可以由Tau聚集体引发。为了鉴定改善由Tau聚集驱动的疾病的抗Gal3抗体，将用抗Gal3抗体处理tau蛋白病的小鼠模型。Tau聚集体注入C57BL/6J小鼠的脑中导致内源性Tau聚集的播种(seeding)和痴呆症状。在第二种模型中，Aβ42聚集体注入到C57BL/6J小鼠的脑中导致Tau过度磷酸化和聚集以及痴呆症状。
Tau或Aβ42聚集体注入后，将以行为测试(Rotarod用于运动功能；Morris水迷宫或Y迷宫用于认知功能)来测试动物的痴呆症状。检测到症状后，用抗Gal3抗体处理动物。研究结束时，将再次测试行为，测量来自血浆和脑脊液(CSF)的生物标志物，并使用脑IHC来检测机制变化。
预期抗Gal3抗体改善运动或认知功能至少10％，显示改善的生理学。预期抗Gal3抗体将减少血浆和CSF生物标志物(例如Aβ42、总Tau、磷酸-tau、神经丝轻链、神经丝重链或Gal3)至少10％，表明使用生物标志物改善病理学或靶点参与。预期NeuN(神经元标志物)的脑IHC染色面积将各增加至少10％，显示神经元减少的阻断。预期抗Gal3处理后，通过A11AT8(过度磷酸化Tau抗体)、AT100(聚集的Tau蛋白)或刚果红(纤丝标志物)检测的脑切片面积将减少至少10％，显示引起神经元死亡的Tau聚集的阻断。预期抗Gal3处理后，通过Iba-1(激活的小神经胶质抗体)或GFAP(激活的星形胶质细胞标志物)检测的脑切片面积将减少至少10％，表明处理减少神经炎症。预期抗Gal3处理后，通过普鲁士蓝检测的脑切片面积将减少至少10％，表明处理减少了微出血。
实施例11.Gal3抗体阻断Gal3-诱导的TDP-43的聚集
TDP-43蛋白病可引起神经变性。例如，肌萎缩侧索硬化症(ALS)和额颞叶变性(FTLD)由错误定位和/或聚集的TDP-43诱导的神经元死亡引起。为了测试抗Gal3抗体是否可用于抑制TDP-43蛋白病，首先确定Gal3促进TDP-43聚集。将TDP-43肽与重组人Gal3混合，并通过斑点印迹和蛋白质印迹测量聚集。
将TDP-43和Gal3或它们在10mM磷酸盐缓冲液(pH7.4)中的组合在37℃下用搅拌棒连续混合，并在0、0.5、1、2、3、4、5和24小时时取出等分试样，并且然后冷冻。为了检测聚集体，将样品在37℃下快速解冻，并且然后将2μL上样到硝酸纤维素膜上，并在室温下风干1小时。用丽春红染色确认了相同的上样。洗去丽春红后，将硝酸纤维素在10％脱脂奶/TBS-Tween-20中封闭，并且然后与A11、抗TDP-43或抗Gal3抗体孵育1小时。洗涤后，将硝酸纤维素与1∶5000驴抗兔HRP检测抗体(Jackson ImmunoResearch#711-035-152)或驴抗小鼠HRP(Jackson ImmunoResearch#715-035-151)二抗孵育1小时。最终洗涤后，使用化学发光底物(Advansta Cat#R-03021-D10和#R-03031-D10的1∶1混合物)检测条带。在Azure成像仪上捕获图像。
图6显示TDP-43聚集后的斑点印迹。指出了收集样品进行分析的时间点。对于所有测试的时间点，当将Gal3添加到混合物中时，淀粉样蛋白寡聚体特异性点的强度更强，表明Gal3促进TDP-43的聚集。通过用抗TDP-43抗体探测的印迹强度证实了相同的上样。通过用抗Gal3抗体探测的印迹强度证实了等量的Gal3。
通过添加10mM磷酸钠缓冲液(pH 7.4)将TDP-43稀释至0.1mg/ml的终浓度。仅0.1mg/mL TDP-43、仅0.1mg/mL Gal3、或者TDP-43和Gal3的组合在室温下用搅拌棒连续搅拌，并在孵育的0、1、2、3、4和5小时时取出样品。然后将样品上样到4-12％CriterionTM XTBis-Tris蛋白质凝胶(Bio-Rad#3450124)上。在SDS-PAGE装置(Biorad)中在100V分离样品，并将解析的蛋白质在300毫安下转移到甲醇激活的硝酸纤维素膜(Amersham GE#10600001)上60分钟。通过将膜在10％脱脂奶粉的TBS+Tween-20(TBS-T)(Chem Cruz#281695)中在室温下孵育1小时来阻断非特异性结合。然后将印迹与TDP-43一抗在4℃下孵育过夜。在TBS-T中洗涤三个5分钟后，将膜与抗小鼠HRP二抗(Abcam#ab6789)在室温下孵育1小时。在TBS-T中洗涤三个5分钟后，将膜在混合等量的化学发光检测试剂(Advansta Cat#R-03021-D10和#R-03031-D10)中孵育1-5秒。在Azure成像仪上捕获并量化图像。然后剥离印迹，用奶封闭，并且用抗Gal3抗体重新探测。洗涤后，使用抗小鼠HRP二抗(Abcam#ab6789)在室温下对Gal3检测1小时。在TBS-T中洗涤三个5分钟后，将膜在预混合在一起的等量化学发光检测试剂(Advansta Cat#R-03021-D10和#R-03031-D10)中孵育1-5秒。在Azure成像仪上捕获图像。
图7A显示蛋白质印迹(如图7B中所示，在用抗TDP-43探测后重新探测的)，其中在孵育期间包含Gal3的所有样品中以相似的强度检测到Gal3。图7B显示蛋白质印迹，其中当TDP-43与Gal3孵育时，存在由TDP-43抗体特异性检测的较高分子量条带，但当单独孵育时则不存在。图7C量化了图7B中所示的蛋白质印迹中二聚体和四聚体随时间的逐渐出现。这证实了A11探测的斑点印迹的结果，表明当Gal3与TDP-43混合时淀粉样蛋白的出现。
为了鉴定具有治疗潜力的抗Gal3抗体，将进行阻断聚集的抗Gal3抗体的筛选。不同浓度的抗体将与含或不含Gal3的TDP-43孵育，并且A11将用于检测斑点印迹上的寡聚体。预期将鉴定出阻断TDP-43聚集至少10％的抗体和不影响TDP-43聚集的抗体。可通过表位binning对阻断物进一步细分为子类。
实施例12.Gal3抗体阻断TDP-43聚集-诱导的神经元细胞毒性和小神经胶质细胞 激活
TDP-43聚集体可经由小神经胶质的激活自主或非自主地引起神经元死亡。为了鉴定减少由TDP-43聚集体诱导的神经元死亡的Gal3抗体，首先要确定Gal3促进TDP-43-诱导的细胞死亡。用TDP-43或与Gal3聚集的TDP-43处理后，将比较在存在或不存在小神经胶质细胞系(小鼠BV2来源；人HMC3 ATCC#CRL-3304)的情况下神经元细胞系的活力。
单独的神经元细胞、单独的小神经胶质细胞或小神经胶质细胞和神经元细胞的共培养物将在96孔板中生长，并且然后将培养基替换为无血清DMEM。单独的TDP-43、与Gal3预混合形成聚集体的TDP-43或单独的Gal3将以2-25μL的浓度添加到铺板细胞中。孵育8-96小时后，收集上清液以测量小神经胶质细胞激活和神经元细胞活力，如下所述。
TDP-43聚集体对小神经胶质的激活将用针对促炎介质IL-6、TNFa和IL-1β的ELISA试剂盒进行测量。预期与单独混合的TDP-43或Gal3相比，当通过与Gal3混合的TDP-43刺激时，至少一种介质将增加至少10％。这表明Gal3-诱导的TDP-43聚集体激活小神经胶质。
对于神经元细胞活力，将细胞针对CD68、NeuN和膜联蛋白V进行染色。将使用膜联蛋白V对细胞凋亡进行评估。样品将在Attune流式细胞仪(Thermo-Fisher)上运行并在FlowJo软件(TreeStar)上分析。样品将门控进入(gated into)CD68+小神经胶质和NeuN+神经元，并且然后对每个门(gate)内的膜联蛋白V阳性细胞百分比进行量化。预期与Gal3和TDP-43的组合孵育的细胞将比与单独的TDP-43或Gal3孵育的细胞活力低至少10％。预期这在共培养物中存在或不存在小神经胶质的情况下发生。这些数据表明Gal3-诱导的TDP-43聚集体以细胞自主或细胞非自主方式降低神经元活力。
为了鉴定具有治疗潜力的抗Gal3抗体，将进行阻断细胞激活或细胞毒性的抗Gal3抗体的筛选。在上述测定中将孵育不同浓度的抗体，并评估激活或细胞死亡的减弱。将鉴定可阻断至少10％激活或细胞毒性的抗体。可通过表位binning对阻断物进一步细分为子类。
实施例13.Gal3抗体改善ALS
ALS(TDP-43蛋白质病的实例)，是由毒性TDP-43聚集体的积累引起的。为了鉴定可改善由TDP-43聚集体引起的ALS的抗Gal3抗体，我们将使用ALS模型。ALS是通过双侧立体定向注入在Gal3存在下寡聚的TDP-43诱导的。未注入的动物将作为健康对照。为了跟踪ALS进展，将使用Rotarod测试评估运动功能，并使用Morris水迷宫和Y迷宫测试评估认知功能。与健康对照相比，下降的运动或认知功能表明患有ALS-样疾病。在TDP-43-注入的动物中发现ALS症状后，将给予抗Gal3抗体或同种型对照。健康对照将保持不处理。处理诱导的运动和认知功能的变化将在达至8周后处死前再次进行评估。Gal3抗体处理引起的病理生理变化将以对脑的IHC和ELISA以及对血浆和CSF的ELISA进行评估。
预期与同种型对照处理的动物相比，Gal3处理的动物的运动功能将改善至少10％。预期，与同种型对照处理的动物相比，Gal3处理的动物的认知功能将在一项或多项测试中改善至少10％。预期在IHC中，与同种型对照处理的动物相比，Gal3处理的动物中Iba-1、MHC-II、GFAP或其他炎症标志物染色的区域将减少至少10％。预期在IHC中，与同种型对照处理的动物相比，抗Gal3处理的动物中MAP-2、NeuN或其他神经元标志物染色的面积将增加至少10％。预期在IHC中，与同种型对照处理的动物相比，抗Gal3处理的动物中TDP-43、Aβ42、总tau、磷酸化tau或其他神经变性标志物染色的面积将减少至少10％。预期在脑裂解物的ELISA中，与同种型对照处理的动物相比，抗Gal3处理的动物中IL-6、IL-1β、TNFα或其他炎症标志物的水平将降低至少10％。预期在血浆或CSF的ELISA中，与同种型对照处理的动物相比，抗Gal3处理的动物中TDP-43、Aβ42、总tau、磷酸化tau、NF-L、NF-M、NF-H、S100β、半胱氨酸蛋白酶抑制剂C、PGRN、GFAP、BDNF、MCP-1、YKL-40、CHIT1、Gal3或其他ALS生物标志物的水平将减少至少10％。
实施例14：Gal3抗体阻断Gal3-诱导的甲状腺素运载蛋白的聚集
心脏淀粉样变性(原发性、继发性、家族性或老年性)是由淀粉样蛋白聚集体的积累或淀粉样蛋白(诸如结蛋白轻链或甲状腺素运载蛋白(TTR))的错误折叠引起的。TTR是携带甲状腺素和视黄醇(维生素A)-视黄醇结合蛋白复合物的转运蛋白。当TTR形成沉积在心肌中的纤丝时，就会发生TTR淀粉样变性(ATTR)，导致心肌病。
为了测试抗Gal3抗体是否可用于抑制心脏淀粉样变性，已确定Gal3促进TTR聚集。将TTR与重组人Gal3混合并测量聚集。在添加或不添加0.1mg/mL的Gal3的情况下，将0.1mg/mL的甲状腺素运载蛋白重组人蛋白(Invitrogen#LFP0054)在室温下连续搅拌混合。在0小时(混合在一起后立即)以及之后达至6天的多个时间点，取出5μL等分试样并立即在-80℃下冷冻。收集所有样品后，通过蛋白质印迹和/或斑点印迹对它们进行分析。
为了检测聚集体中所见的增强的蛋白质尺寸，将样品在37℃下快速解冻，并且然后将5μL上样到4-12％CriterionTM XT Bis-Tris蛋白质凝胶(Bio-Rad#3450124)上，转移到硝酸纤维素(Amersham GE#10600001)上，并且用丽春红染色确认相同上样。洗去丽春红后，将硝酸纤维素在10％脱脂奶/TBS-Tween-20中封闭，然后与1∶2000的TTR抗体(Invitrogen#PA527220)孵育。洗涤后，将硝酸纤维素与1∶5000驴抗兔HRP检测抗体(JacksonImmunoResearch#711-035-152)孵育1小时。最终洗涤后，使用化学发光底物(AdvanstaCat#R-03021-D10和#R-03031-D10的1∶1混合物)检测条带。在Azure成像仪上捕获图像。甲状腺素运载蛋白分子量的变化表明寡聚化。
图8A显示在共孵育后早期(0-5小时)Gal3增强的二聚体TTR的水平，以及图8B量化了二聚体的出现。在上样凝胶之前确定蛋白质浓度，并且观察到的信号差异怀疑是由于部分表位掩蔽所致。24小时后，Gal3还增强了三聚体、四聚体和五聚体的水平。图8C显示了Gal3增强了TTR的聚集直至混合后至少6天，以及图8D量化了图8C的聚集体。
为了鉴定具有治疗潜力的抗Gal3抗体，将进行阻断聚集的抗Gal3抗体的筛选。不同浓度的抗体将与Gal3和TTR孵育，并且如上所述，蛋白质印迹将用于检测阻断聚集的抗体。预期将鉴定出阻断TTR聚集至少10％的抗体和不影响聚集的抗体。可通过表位binning对阻断物进一步细分为子类。
实施例15：Gal3抗体阻断甲状腺素运载蛋白聚集体-诱导的心肌细胞毒性
TTR聚集体可引起心肌细胞凋亡。为了鉴定减少由TTR聚集体诱导的心肌细胞死亡的Gal3抗体，首先要确定Gal3促进TTR诱导的细胞死亡。在用含或不含Gal3预孵育的TTR处理后，将比较H9C2大鼠心肌细胞(ATCC-CRL-1446)、AC16人心肌细胞(Sigma-SCC109)或HL-1心肌(Sigma-SCC065)细胞系的活力。
5x103个细胞将在96孔板中生长过夜，并且然后用无血清DMEM替换培养基。用2-25μL的单独的TTR、与Gal3预混合形成聚集体的TTR或单独的Gal3来刺激细胞。孵育8-48小时后，根据制造商的说明，使用Cell Titer Blue(Promega#G8080)测量细胞活力。预期相比于与单独的TTR或Gal3孵育的细胞，与Gal3和TTR的组合孵育的细胞的活力低至少10％。
为了鉴定具有治疗潜力的抗Gal3抗体，将进行阻断细胞毒性的抗Gal3抗体的筛选。在上述测定中将孵育不同浓度的抗体，并评估细胞死亡的减弱。将鉴定出阻断细胞毒性至少10％的抗体。可通过表位binning对阻断物进一步细分为子类。
实施例16：Gal3抗体改善心脏淀粉样变性
为了鉴定可改善心脏淀粉样变性的抗Gal3抗体，将使用两种心肌病模型。
心肌中的TTR淀粉样蛋白沉积导致心律失常(心房纤维性颤动)和/或心力衰竭。在Gal3存在下在体外产生的TTR聚集体将被注入到C57BL6/J小鼠或Sprague-Dawley大鼠的心尖。将抗Gal3抗体注入腹膜内。使用A11淀粉样蛋白寡聚体IHC和刚果红在心脏切片上检测TTR聚集体和纤丝。TTR聚集将通过检测在蛋白质印迹上以TTR抗体探测的来自心脏裂解物的TTR分子量的移位来确认。心脏中的聚集体沉积将通过焦磷酸锝(99mTc-PYP)单光子发射计算机断层扫描(SPECT)来量化。心脏损伤将通过血浆生物标志物来测量。心脏功能将使用超声心动图来测量。
预期与未处理的动物相比，当用抗Gal3抗体处理动物时，心脏切片和裂解物中的聚集体水平将降低至少10％。预期与未处理的动物相比，当用抗Gal3抗体处理动物时，使用SPECT，心脏中寡聚体沉积将减少至少10％。预期与未处理的动物相比，当用抗Gal3抗体处理动物时，超声心动图上的射血分数将变化至少10％。预期与未处理的对照相比，当用抗Gal3抗体处理动物时，生物标志物水平(例如脑钠尿肽、可溶性肿瘤发生抑制因子-2(Soluble suppression of tumorigenesis-2)、TTR、Gal3)将降低至少10％。
将在C57BL/6J小鼠上进行横向主动脉缩窄(TAC)以诱导心脏肥大。将用抗Gal3抗体处理动物。通过用A11和刚果红对心脏切片进行染色来量化心脏中淀粉样蛋白聚集体的存在。将使用Masson毛状体和天狼猩红在心脏切片上测量纤维化。心脏损伤将通过ELISA量化血浆生物标志物(ssT2、BNP、TTR、结蛋白)的水平来测量。心脏功能将使用超声心动图(左心室壁厚度和射血分数)来确定。
预期与未处理的动物相比，Gal3抗体将减少心脏中的聚集体和纤丝至少10％。预期与未处理的动物相比，Gal3抗体将减少心脏中的纤维化至少10％。预期与未处理的动物相比，Gal3抗体将减少心脏损伤至少10％。预期与未处理的动物相比，Gal3抗体将改善心脏功能至少10％。
实施例17：Gal3抗体阻断Gal3-诱导的尿调节素的聚集
慢性肾脏疾病可由淀粉样蛋白诸如轻链或尿调节素的聚集引起。尿调节素是尿液中最丰富的蛋白质。在某些条件下，它可聚集并凝聚成已知为肾管型(renal cast)的凝胶样物质，其可阻碍液体流动。为了测试抗Gal3抗体是否可用于抑制尿调节素-介导的淀粉样变性，首先将确定Gal3促进尿调节素聚集。尿调节素将与重组人Gal3混合，并且用斑点印迹测量寡聚化。
将尿调节素(15μg)(Biovendor#RD172163100)、Gal3(15μg)或它们的组合用搅拌棒在37℃下连续混合，并在0、1、2、3和24小时取出等分试样，并且然后冷冻。为了检测聚集体，样品将在37℃下快速解冻，并且然后将2μL上样到硝酸纤维素膜上，并在室温下风干1小时。将通过丽春红染色确认相同的上样。洗去丽春红后，将硝酸纤维素在10％脱脂奶/TBS-Tween-20中封闭，并且然后与A11抗体孵育1小时。洗涤后，将硝酸纤维素与1∶5000驴抗兔HRP检测抗体(Jackson ImmunoResearch#711-035-152)孵育1小时。最终洗涤后，将使用化学发光底物(Advansta Cat#R-03021-D10和#R-03031-D10的1∶1混合物)检测条带。将在Azure成像仪上捕获图像。预期在1小时和2小时，当与Gal3共孵育时，淀粉样蛋白寡聚体特异性点的强度会更强，表明Gal3促进尿调节素的聚集。
为了鉴定具有治疗潜力的抗Gal3抗体，将进行阻断聚集的抗Gal3抗体的筛选。不同浓度的抗体将与含或不含Gal3的尿调节素孵育，并且A11将用于检测斑点印迹上的寡聚体。预期将鉴定出完全或部分阻断尿调节素聚集至少10％的抗体以及不影响它的抗体。可通过表位binning对阻断物进一步细分为子类。
实施例18：Gal3抗体改善尿调节素-相关肾脏疾病
由肾小管细胞合成的尿调节素组装成形成网状结构的细丝，其中它以其凝胶样结构捕获细菌和轻链免疫球蛋白。在疾病状态下，尿调节素细丝与钠结合并形成称为管型(cast)的硬结构，其导致肾功能下降。在SHR大鼠中，随着管型的形成，尿调节素淀粉样蛋白随着老化(aging)而发展。
为了测试抗Gal3抗体是否可改善由淀粉样蛋白引起的肾脏疾病，将用Gal3抗体或同种型对照处理老年SHR大鼠。整体健康状况将通过身体、心脏和肾脏重量来衡量。肾功能障碍将通过代谢笼中产生的尿液体积来衡量。动物管型的数量和大小将使用对肾脏切片的H&E染色进行量化。将使用ELISA以血浆和尿液中的生物标志物来检测肾损伤。尿调节素聚集体的存在将通过尿液和肾脏切片中的刚果红以及通过在蛋白质印迹上测量尿调节素的分子量来检测。
预期与同种型对照相比，Gal3抗体将调节肾脏重量至少10％。预期与同种型对照相比，Gal3抗体将使产生的尿液体积增加至少10％。预期与同种型对照相比，Gal3抗体将减少管型的数量或大小至少10％。预期与同种型对照相比，血浆或尿液中的一种或多种下述肾损伤生物标志物将被调节至少10％：N-GAL、KIM-1、IL-6、肌酐、葡萄糖、白蛋白、BUN、K+、磷、Na+、Ca+、tCO2。
实施例19：Gal3抗体阻断Gal3-诱导的IAPP聚集
胰岛淀粉样多肽(IAPP)由胰腺β细胞分泌，并且通常调节骨骼肌中的胰岛素活性，影响能量稳态、饱腹感、血糖水平、肥胖和体重。当聚集时，它会对细胞产生毒性并促进胰岛素抗性和糖尿病。为了测试抗Gal3抗体是否可用于抑制IAPP-介导的疾病，首先确定Gal3促进IAPP聚集。IAPP与重组人Gal3混合，并且用蛋白质印迹测量聚集。
通过添加10mM磷酸钠缓冲液(pH7.4)将IAPP蛋白(Sigma-Aldrich#D2162)稀释至0.1mg/ml的终浓度。仅0.1mg/mL IAPP、仅0.1mg/mL rhGal3、或者IAPP与rhGal3的组合在室温下用搅拌棒连续搅拌，并在孵育的0、0.5、1、2、3、4和5小时时取出等分试样，并在-20℃下冷冻用于后续分析。为了检测寡聚体中所见的蛋白质大小的增加，将样品在37℃下快速解冻，并且然后将5μL上样到4-12％CriterionTM XT Bis-Tris蛋白质凝胶(Bio-Rad#3450124)上，转移到硝酸纤维素(Amersham GE#10600001)上，并且用丽春红染色确认了相同的上样。洗去丽春红后，将硝酸纤维素用10％脱脂奶/TBS-Tween-20封闭，并且然后与I11兔抗淀粉样蛋白寡聚体一抗孵育1小时。洗涤后，将硝酸纤维素与1∶5000驴抗兔HRP检测抗体(Jackson ImmunoResearch#711-035-152)孵育1小时。最终洗涤后，使用化学发光底物(Advansta Cat#R-03021-D10和#R-03031-D10的1∶1混合物)检测条带。在Azure成像仪上捕获图像。
通过添加10mM磷酸钠缓冲液(pH7.4)将IAPP蛋白(Sigma-Aldrich#D2162)稀释至0.1mg/mL的终浓度。IAPP单独孵育或与100μg/mL Gal3孵育，并且单独的100μg/mL Gal3作为对照。将混合物在蛋白质印迹上运行，用I11抗体检测淀粉样蛋白寡聚体。
如图9A中所见，观察到单独的IAPP的～60kDa条带，表明该蛋白质通常形成聚集体。当IAPP与Gal3混合时，该条带的强度增加(图9B)，表明在Gal3存在下发生更多IAPP的聚集。
图9C描绘了在孵育的0、0.5、3和5小时时间点，单独的IAPP、单独的Gal3、或与Gal3孵育的IAPP的样品，显示与Gal3孵育3小时后的IAPP寡聚化。图9D是图9C的～60kDa条带的量化，比较了每种条件下IAPP的相对丰度。
为了鉴定具有治疗潜力的抗Gal3抗体，将进行阻断聚集的抗Gal3抗体的筛选。抗Gal3抗体或同种型对照将与含或不含0.1mg/mL rhGal3的0.1mg/mL IAPP共孵育，连续搅拌混合物达至96小时。IAPP的聚集可通过用I11抗体探测蛋白质印迹来检测。预期将鉴定出完全或部分阻断IAPP聚集至少10％的抗体以及不影响它的抗体。可通过表位binning对阻断物进一步细分为子类。
使用ELISA来评估Gal3与聚集的和未聚集的IAPP的结合。为了开始ELISA，通过将半乳凝素-3蛋白(TrueBinding，QCB200349)(TrueBinding，QCB200352)(Biolegend，599806)在分开体积的PBS(CorBing，21-030-CM)中稀释来制备包被溶液，每种稀释至10μg/ml的浓度。通过沿96孔ELISA板(Thermo Scientific，44-2401-21)的顶行每孔添加80μl(每种蛋白质4个孔)将包被溶液应用到板上，然后在PBS中向下两倍系列稀释。在4℃O/N下孵育板后，用300μl PBST洗涤板三次，然后进行封闭步骤，其中将150μl的2％BSA的PBST添加到每孔中，并在室温下轻轻振荡孵育1小时。然后将现有的封闭溶液从板上丢弃。用于结合的IAPP溶液是通过将生物素化的聚集的IAPP在2％BSA的PBST中稀释至10μg/ml的浓度来制备，然后通过逐列每孔添加60μl进行三列(对于每种半乳凝素-3一列)应用到板上，然后在2％BSA的PBST中纵向向右两倍系列稀释。将板在室温下轻轻振荡孵育1小时，并且然后用300μl PBST洗涤三次。其后，将亲和素-HRP(Biolegend，405103)在2％BSA的PBST中稀释至1∶2000，然后将25μl添加到所有孔中。将板在室温下轻轻振荡孵育1小时，然后用300μl PBST洗涤三次。为了使板显色，将50μl的ABTS(Life Technologies，00-2024)底物添加到每孔中，孵育直至达到足够的信号，然后以每孔25μl的1N HCl终止。在酶标仪中在405nm的吸光度处读取板。使用GraphPad Prism 8.0软件(GraphPad Software Inc)对数据进行绘图。
图90描绘了检查hGal3与聚集的和未聚集的IAPP的结合的ELISA测定的结果。如图90中所见，IAPP是hGal3的弱结合剂。IAPP的聚集引起Gal3结合亲和力略有增加。
实施例20：Gal3抗体阻断IAPP聚集体-诱导的细胞毒性
IAPP聚集体可导致胰腺β细胞死亡。为了鉴定减少由IAPP聚集体诱导的β细胞死亡的Gal3抗体，首先要确定Gal3促进IAPP-诱导的细胞死亡。在用有或没有Gal3预孵育的IAPP处理后，将比较人INS-1832/13(Sigma-Aldrich#SCC207)和小鼠MIN6(ATCC)β细胞系的细胞凋亡。
2x105个细胞将在96孔板中生长过夜，并且然后用IAPP、与Gal3预混合形成聚集体的IAPP、或单独的Gal3刺激细胞。Gal3在没有IAPP的情况下将自行混合，作为对照。将取出2-25μL的预形成的聚集体或对照蛋白质，并与铺板细胞孵育。8-48小时后，根据制造商的说明，通过荧光半胱天冬酶3检测试剂盒(Sigma-Aldrich#CASP3F)和/或使用具有7-AAD的FITC膜联蛋白V细胞凋亡检测试剂盒(Biolegend#640922)通过流式细胞术测量细胞凋亡。预期相比于与单独的IAPP或Gal3孵育的细胞，与Gal3和IAPP的组合孵育的细胞死亡多至少10％。
为了鉴定具有治疗潜力的抗Gal3抗体，将进行阻断细胞毒性的抗Gal3抗体的筛选。在上述测定中将孵育不同浓度的抗体，并评估细胞死亡的减弱。将鉴定出阻断细胞毒性至少10％的抗体。可通过表位binning对阻断物进一步细分为子类。
实施例21：Gal3抗体改善IAPP-诱导的淀粉样变性
胰腺β细胞的损失或功能障碍可导致胰岛素和血糖失调。IAPP聚集体是患者胰腺中发现的细胞毒性淀粉样蛋白沉积物的主要成分。
为了鉴定在体内改善由IAPP聚集体引起的疾病的抗Gal3抗体，将在Gal3存在下体外形成的毒性IAPP聚集体以不同剂量腹膜内注入到小鼠中。血糖失调将通过标准葡萄糖耐量试验(GTT)和胰岛素耐量试验(ITT测定)进行监测。当失调明显时，动物将用Gal3抗体处理或保持不处理。预期与对照相比，在用抗体处理后，GTT和ITT改善至少10％。胰腺中IAPP聚集体的积累将通过IHC使用刚果红对聚集体染色进行评估。预期将看到对刚果红阳性的切片面积减少至少10％。
在IAPP-介导的疾病的第二种模型中，将测试在大鼠胰岛素II启动子的调节控制下表达人胰岛淀粉样多肽(h-IAPP)的RIPHAT小鼠(Jackson Labs，#008232)。老年RIPHAT小鼠发展与β细胞死亡和高血糖症相关的细胞外IAPP淀粉样蛋白沉积。为了测试抗Gal3抗体是否可改善由IAPP聚集体引起的疾病，老年小鼠将用抗Gal3抗体处理或不处理。预期与对照相比，在用抗体处理后，GTT和ITT改善至少10％。胰腺中IAPP聚集体的积累将使用刚果红对聚集体进行染色通过IHC进行评估。预期将看到对刚果红阳性的切片的面积减少至少10％。
实施例22：Gal3抗体阻断Gal3-诱导的SAA1的聚集
血清淀粉样蛋白A(SAA)同种型-1(SAA1)可聚集，其引起或加剧慢性炎性病症，诸如类风湿病(例如关节炎、狼疮)、胃肠道疾病(例如克罗恩病、溃疡性结肠炎)或持续性感染(例如结核病、麻风病)。SAA同种型SAA2不易发生寡聚化，并且是无毒的。为了测试抗Gal3抗体是否可用于抑制SAA淀粉样变性，首先要确定Gal3促进SAA聚集。SAA(与SAA2相似的序列)或SAA1将与重组人Gal3混合，并且用蛋白质印迹和斑点印迹测量聚集。纤丝(一类聚集体)的形成将使用硫磺素T测定来量化。
hSAA(ProSpecBio，#CYT-942)或hSAA1(ProSpecBio，CYT-787)重组人蛋白将在添加或不添加Gal3的情况下在室温下连续搅拌混合。在0小时(混合在一起后立即)以及达至363小时时间点，将取出2-10μL等分试样并立即在-80℃下冷冻。收集所有样品后，将通过蛋白质印迹和斑点印迹来分析。
为了检测聚集体中所见的增强的蛋白质尺寸，将样品在37℃下快速解冻，并且然后将2-5μL上样到4-12％CriterionTM XT Bis-Tris蛋白质凝胶(Bio-Rad#3450124)上，转移至硝酸纤维素(Amersham GE#10600001)，并且用丽春红染色确认相同上样。洗去丽春红后，将硝酸纤维素在10％脱脂奶/TBS-Tween-20中封闭，然后与兔抗SAA一抗(Abcam，#ab190801)孵育1小时。洗涤后，将硝酸纤维素与驴抗兔HRP检测抗体(JacksonImmunoResearch#711-035-152)孵育。最终洗涤后，将用化学发光底物(Advansta#R-03021-D10和#R-03031-D10的1∶1混合物)检测条带。在Azure成像仪上捕获图像。SAA和SAA1聚集体将通过其特异性抗体进行检测，但以与非聚集的蛋白质相比在凝胶上的更高分子量。预期Gal3促进SAA1的较高分子量聚集体的积累，而当SAA1单独孵育时，其几乎是不可检测的。
在检测聚集体的另一种方法中，将样品在37℃下快速解冻，并且然后将2-10μL上样到硝酸纤维素膜上(每个一抗1个膜)并在室温下风干1小时。将通过丽春红染色确认相同的负载。洗去丽春红后，将硝酸纤维素在10％脱脂奶/TBS-Tween-20中封闭，然后与A11抗淀粉样蛋白寡聚体(Thermo-Fisher Scientific，#AHB0052)、OC抗淀粉样蛋白寡聚体(Sigma-Aldrich#AB2286)或抗SAA一抗(Abcam#ab190801)孵育1小时。洗涤后，将硝酸纤维素与1∶5000驴抗兔HRP检测抗体(Jackson ImmunoResearch#711-035-152)孵育1小时。最终洗涤后，将使用化学发光底物(Advansta Cat#R-03021-D10和#R-03031-D10的1∶1混合物)检测点。将在Azure成像仪上捕获并量化图像。预期与未添加Gal3的相同点相比，Gal3将增加由A11或OC检测的点的尺寸至少10％。预期作为上样对照的SAA抗体在所有样品中将保持相同水平。这表明Gal3促进SAA1的聚集。
当硫磺素T结合至富含β-折叠的结构诸如淀粉样纤丝时，它在485nm处发出荧光。为了测量纤丝，在黑色96孔板中将20μM的硫磺素T与100μM的hSAA(ProSpecBio，#CYT-942)或hSAA1(ProSpecBio，CYT-787)重组人蛋白(含或不含300μM的rhGal3)混合为最终体积100μL。对照包括不含SAA或SAA1的rhGal3和硫磺素T，以确保特异性结合淀粉样纤丝。单独孵育的硫磺素T也将包括在内，用于从最终读数中减去背景。每个板将包含重复的条件。将设置两块相同的板，一块在室温下孵育，并且另一块在37℃下在以600rpm振荡的转子上孵育。将在SpectraMax酶标仪上，在激发波长450nm和发射波长485nm处，在达至363小时的不同时间点读取荧光。为了量化纤丝的形成，将计算37℃下的荧光减去背景荧光。表明荧光提高的条件指示纤丝形成增强。预期添加时，Gal3提高荧光至少10％，表明它促进SAA1纤丝形成。
为了鉴定具有治疗潜力的抗Gal3抗体，将进行阻断聚集或纤丝形成的抗Gal3抗体的筛选。将从蛋白质印迹、斑点印迹和硫磺素T测定中选择表明在Gal3存在下的聚集的时间点。各种浓度的抗体将以上述测定孵育，以检测阻断聚集或纤丝形成的抗体。预期将鉴定出阻断SAA1聚集至少10％的抗体和不影响聚集的抗体。可通过表位binning对阻断物进一步细分为子类。
实施例23：Gal3抗体阻断SAA1聚集体-诱导的细胞毒性
SAA1聚集体可引起细胞死亡，这可损害它们积累的器官并导致慢性炎性病症。为了测试抗Gal3抗体是否可用于抑制SAA淀粉样变性，首先要确定在Gal3存在下形成的SAA聚集体是否可导致细胞毒性。在用与或不与Gal3预孵育的SAA和SAA1肽处理后，将比较HEK293T细胞的细胞凋亡。
2x105HEK293T细胞将在96孔板中生长过夜，并且然后在无血清DMEM培养基中用2-25μL单独的SAA1、与Gal3预混合形成聚集体的SAA1、或单独的Gal3来刺激细胞。6小时后，使用CytoTox非放射性细胞毒性测定(Promega#G1780)，根据制造商的说明通过乳酸脱氢酶(LDH)释放来测量细胞毒性。将使用SAA、SAA加Gal3、或单独的SAA1来观察最小的细胞凋亡。预期与Gal3预孵育的SAA1将增加细胞凋亡至少10％。
为了鉴定具有治疗潜力的抗Gal3抗体，将进行阻断细胞毒性的抗Gal3抗体的筛选。在上述测定中将孵育不同浓度的抗体，并评估细胞死亡的减弱。预期将鉴定出阻断细胞毒性至少10％的抗体和不影响细胞毒性的抗体。可通过表位binning对阻断物进一步细分为子类。
实施例24：Gal3抗体改善自身免疫性疾病中的慢性炎症
为了测试抗Gal3抗体是否可以改善炎性疾病，将处理类风湿病和炎性肠病(IBD)的小鼠模型。
在类风湿性关节炎模型中，向野生型和ILlra敲除小鼠(Jackson Labs#25391376)注入体外聚集的SAA和2％AgNO3。然后用抗Gal3抗体或同种型对照处理小鼠。关节炎症将通过基于视觉评估或卡尺测量的关节炎得分来量化。全身性炎症将通过血浆中TNFα、IL-1β、IL-6、CRP或其他促炎生物标志物的水平来量化。脾脏、肝脏、肾脏、心脏、甲状腺、肠、肾上腺或其他器官中的聚集体沉积将使用刚果红来量化。预期接受SAA聚集体的小鼠将具有增加的在未接受聚集体的动物中未见的疾病症状和病理生理学证据。预期与同种型对照相比，在接受SAA聚集体的动物中，Gal3抗体处理的动物的关节炎得分将降低至少10％。预期与同种型对照相比，Gal3抗体处理的动物的至少一种炎症生物标志物将减少至少10％。预期与同种型对照相比，至少一个器官中的SAA聚集体沉积将减少至少10％。
在IBD模型中，在症状发展之前将在IL-2-/-小鼠中检测SAA聚集体，并且预期聚集体的水平将与疾病的严重程度相关。为了测试Gal3治疗性抗体的效果，将用Gal3抗体或同种型对照注入野生型、IL-2+/-和IL-2-/-小鼠(Jackson Labs#002229)。IBD将通过对IHC切片的白细胞浸润和上皮增生进行评分来量化。全身性炎症将通过血浆中TNFα、IL-1β、IL-6、CRP或其他促炎生物标志物的水平来量化。脾脏、肝脏、肾脏、心脏、甲状腺、肠、肾上腺或其他器官中的聚集体沉积将使用刚果红来量化。预期与同种型对照相比，Gal3抗体处理的动物的IBD得分将降低至少10％。预期与同种型对照相比，Gal3抗体处理的动物的至少一种炎症生物标志物将减少至少10％。预期与同种型对照相比，至少一个器官中的SAA聚集体沉积将减少至少10％。
在IBD的第二种模型中，IL-2+/-小鼠将不被处理或被注入体外聚集的SAA以增强SAA--诱导的症状发展。为了测试Gal3治疗性抗体的效果，将用Gal3抗体或同种型对照处理未处理或被注入的小鼠。IBD将通过对IHC切片的白细胞浸润和上皮增生进行评分来量化。全身性炎症将通过血浆中TNFα、IL-1β、IL-6、CRP或其他促炎生物标志物的水平来量化。脾脏、肝脏、肾脏、心脏、甲状腺、肠、肾上腺或其他器官中的聚集体沉积将使用刚果红来量化。预期与同种型对照相比，Gal3抗体处理的动物的IBD得分降低至少10％。预期与同种型对照相比，Gal3抗体处理的动物的至少一种炎症生物标志物将减少至少10％。预期与同种型对照相比，至少一个器官中的SAA聚集体沉积将减少至少10％。
实施例25：Gal3抗体阻断Gal3-诱导的p53的聚集
肿瘤抑制因子p53的错误折叠和聚集可在癌症发展中发挥作用。为了测试抗Gal3抗体是否可以用于抑制癌症，首先要确定Gal3促进p53聚集。p53将与重组人Gal3混合，并且用蛋白质印迹和斑点印迹测量聚集。纤丝(一类聚集体)的形成将使用硫磺素T测定来量化。
将在添加或不添加Gal3的情况下在室温下连续搅拌来混合重组p53人蛋白(Biorbyt#orb418963)。在0小时(混合在一起后立即)以及达至363小时时间点，将取出2-10μL等分试样并立即在-80℃下冷冻。收集所有样品后，将通过蛋白质印迹和斑点印迹对它们分析。
为了检测聚集体中所见增强的蛋白质尺寸，将样品在37℃下快速解冻，并且然后将2-5μL上样到4-12％CriterionTM XT Bis-Tris蛋白质凝胶(Bio-Rad#3450124)，转移至硝酸纤维素(Amersham GE#10600001)上，并且用丽春红染色确认相同的上样。洗去丽春红后，将硝酸纤维素在10％脱脂奶/TBS-Tween-20中封闭，并且然后与兔抗p53一抗(R&D SystemsMAB1355)孵育1小时。洗涤后，将硝酸纤维素与抗小鼠HRP检测抗体(Abcam#ab6789)孵育。最终洗涤后，将用化学发光底物(Advansta#R-03021-D10和#R-03031-D10的1∶1混合物)检测条带。将在Azure成像仪上捕获图像。p53聚集体将被其特异性抗体检测，但以与非聚集的蛋白质相比在凝胶上更高的分子量。预期Gal3促进p53的较高分子量聚集体的积累，而当p53单独孵育时，这种聚集体几乎是不可监测的。
在检测聚集体的另一种方法中，将样品在37℃下下快速解冻，并且然后将2-10μL上样到硝酸纤维素膜上(每种一抗1个膜)并在室温下风干1小时。将通过丽春红染色确认相同的上样。洗去丽春红后，将硝酸纤维素在10％脱脂奶/TBS-Tween-20中封闭，然后与A11抗淀粉样蛋白寡聚体(Thermo-Fisher Scientific，#AHB0052)、OC抗淀粉样蛋白寡聚体(Sigma-Aldrich#AB2286)或抗p53一抗(R&D Systems MAB1355)孵育1小时。洗涤后，将硝酸纤维素与1∶5000驴抗兔HRP检测抗体(Jackson ImmunoResearch#711-035-152)或抗小鼠HRP检测抗体(Abcam#ab6789)孵育1小时。最终洗涤后，将使用化学发光底物(AdvanstaCat#R-03021-D10和#R-03031-D10的1∶1混合物)检测点。将在Azure成像仪上捕获图像并进行量化。预期与未添加Gal3的相同点相比，Gal3增加由A11或OC检测的点的尺寸至少10％。预期作为上样对照的p53抗体在所有样品中保持相同水平。这表明Gal3促进p53的聚集。
当硫磺素T结合至富含β-折叠的结构诸如淀粉样纤丝时，它在485nm处发出荧光。为了测量纤丝，将20μM的硫磺素T与100μM的p53重组人蛋白(含或不含300μM的rhGal3)在黑色96孔板中混合，最终体积为100μL。对照将包括不含p53的Gal3和硫磺素T，以确保特异性结合至淀粉样纤丝。单独孵育的硫磺素T也将包括在内，用于从最终读数中减去背景。每个板将包含重复的条件。将设置两块相同的板，一块在室温下孵育，并且另一块在37℃下在以600rpm振荡的转子上孵育。将在SpectraMax酶标仪上，在激发波长450nm和发射波长485nm处，在达至363小时的各个时间点读取荧光。为了量化纤丝形成，将计算37℃下的荧光减去背景荧光。表明荧光增强的条件指示纤丝形成增强。预期添加时Gal3增加荧光至少10％，表明它促进p53纤丝形成。
为了鉴定具有治疗潜力的抗Gal3抗体，将进行阻断聚集或纤丝形成的抗Gal3抗体的筛选。将从蛋白质印迹、斑点印迹和硫磺素T测定中选择表明在Gal3存在下的聚集的时间点。各种浓度的抗体将以上述测定进行孵育，以检测阻断聚集或纤丝形成的抗体。预期将鉴定出阻断p53聚集至少10％的抗体和不影响聚集的抗体。可通过表位binning对阻断物进一步细分为子类。
实施例26：Gal3抗体阻断p53聚集体-诱导的细胞毒性
细胞摄取的p53聚集体可引发细胞质p53的错误折叠和失活，导致细胞死亡。为了鉴定促进p53聚集抵制的癌细胞死亡的Gal3抗体，我们首先确定Gal3减少p53-诱导的细胞死亡。将评估多种癌细胞系，包括但不限于SH-SY5Y神经母细胞瘤、MCF7和MD-MBA231乳腺癌细胞。
细胞将在96孔板中生长过夜，并且然后用p53、与Gal3预混合形成聚集体的p53或单独的Gal3刺激细胞。Gal3将在不含p53的情况下单独混合作为对照。取出2-25μL并与铺板细胞孵育。8-48小时后，根据制造商的说明，通过CYQUANT MTT测定(Thermo-Fisher#V13154)测量活力。在560nm处的吸光度和在690nm处的背景散射将在SpectraMax酶标仪(Molecular Devices)中测量。在560nm处的吸光度值将用于计算细胞与缓冲液对照相比的活力。预期与单独的未聚集形式的p53或单独的Gal3相比，当添加与Gal3聚集的p53时，活力将降低至少10％。
为了鉴定具有治疗潜力的抗Gal3抗体，将进行促进细胞毒性的抗Gal3抗体的筛选。在上述测定中将孵育不同浓度的抗体，并评估细胞死亡的促进。预期将鉴定出促进细胞毒性至少10％的抗体。可通过表位binning对这些抗体进一步细分为子类。
实施例27：用于治疗蛋白病或淀粉样变性的抗Gal3抗体
患者存在蛋白病例如淀粉样蛋白病或淀粉样变性，诸如共核蛋白病、帕金森氏病、路易体痴呆、多系统萎缩、tau蛋白病、阿尔茨海默病、进行性核上性麻痹、皮质基底节变性、皮克氏病、TDP-43蛋白病、肌萎缩侧索硬化症、额颞叶变性、TTR淀粉样变性、心脏淀粉样变性、尿调节素-相关肾脏疾病、IAPP淀粉样变性、SAA淀粉样变性、类风湿性关节炎、炎性关节炎、脊柱关节病、幼年特发性关节炎、强直性脊柱炎、银屑病关节炎、炎性肠病、溃疡性结肠炎、克罗恩病、乳糜泻、血管炎、结节病、家族性地中海热、肿瘤坏死因子受体-相关周期性综合征(TRAPS)、癌症、由淀粉样蛋白聚集促进的衰老，或由α-突触核蛋白、tau蛋白、TDP-43、甲状腺素运载蛋白、尿调节素、IAPP、SAA或p53的功能障碍引起的疾病。本文公开的一种或多种抗Gal3抗体或其结合片段经肠、口服、鼻内、肠胃外、颅内、皮下、肌内、皮内或静脉内施用于患者。
抗Gal3抗体或其结合片段以1ng的量(或替代地：0.1、10、100、1000ng、或1、10、50、100、200、300、400、500、600、700、800、900、1000μg、或1、10、100、200、300、400、500、600、700、800、900、1000mg、或由任意两个前述量定义的范围内的任意量、或任何其他适合于人的最佳效力的量)的剂量施用。剂量以每1天(或替代地：每2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、24、36或48天、或由任意两个前述时间定义的范围内的任意时间)施用。
重复施用抗Gal3抗体直至患者经历蛋白病或淀粉样变性的减少或改善。蛋白病或淀粉样变性的减少或改善可通过本领域通常已知的诊断方法来检测，包括但不限于活检、血或尿测试、超声心动图、或焦磷酸锝闪烁扫描。相对于在施用步骤之前的蛋白病或淀粉样变性，在施用步骤之后，蛋白病或淀粉样变性的减少或改善可为至少5％(或替代地：10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％或99％)，如通过取得资格的个体评估的。
实施例28：Gal3促进载脂蛋白E的寡聚化
测试了Gal3促进载脂蛋白E(APOE)的寡聚化的能力。将不同多态性等位基因的APOE(APO-E2、APO-E3和APO-E4)的重组形式与Gal3在室温下孵育0、1、2、3、4、5或24小时。仅APOE和仅Gal3制剂用作对照。
进行APOE/Gal3混合物和对照的斑点印迹并且用A11抗体和抗Gal3804抗体探测。图26A-B显示对于APOE等位基因APO-E2和APO-E3，没有检测到寡聚体。然而，图26C显示Gal3在测试的时间点促进APO-E4寡聚化，如通过用A11探测时由阳性信号所指示的。
还使用ELISA来检测Gal3结合至APOE-4。在ELISA之前，通过多天的搅拌来聚集人APOE-4，按照制造商的说明，使用EZ Link Sulfo-NHS-LC-生物素(ThermoFisherScientific，A39257)进行生物素化，并使用Zeba旋转脱盐柱(ThermoFisher Scientific，89882)进行脱盐。为了开始ELISA，通过在分开体积的PBS(Corning，21-030-CM)中稀释半乳凝素-3蛋白(TrueBinding，QCB200349)(TrueBinding，QCB200352)(Biolegend，599806)(每种被稀释至4μg/ml的浓度)来制备包被溶液。通过沿96孔ELISA板(Thermo Scientific，44-2401-21)的顶行每孔添加80μl(每种蛋白质4个孔)，将包被溶液应用到板上，然后在PBS中向下两倍系列稀释。在4℃O/N下孵育板后，用300μl PBST洗涤板三次，然后进行封闭步骤，其中将150μl的2％BSA的PBST添加到每孔中，并在室温下轻轻振荡孵育1小时。然后将现有的封闭溶液从板上丢弃。用于结合的APOE-4溶液通过将生物素化的聚集的APOE-4在2％BSA的PBST中稀释至4μg/ml的浓度来制备，然后通过逐列每孔添加60μl进行三列(对于每种半乳凝素-3一列)应用到板中，然后在2％BSA的PBST中纵向向右两倍系列稀释。将板在室温下轻轻振荡孵育1小时，并且然后用300μl PBST洗涤三次。其后，将亲和素-HRP(Biolegend，405103)在2％BSA的PBST中稀释至1∶2000，然后将25μl添加到所有孔中。将板在室温下轻轻振荡孵育1小时，然后用300μl PBST洗涤三次。为了使板显色，将50μl的ABTS(LifeTechnologies，00-2024)底物添加到每孔中，孵育直至达到足够的信号，然后以每孔25μl的1N HCl终止。在酶标仪中在405nm的吸光度处读取板。使用GraphPad Prism 8.0软件(GraphPad Software Inc)对数据进行绘图。
图76描绘了检查hGal3与聚集的ApoE4蛋白结合的ELISA测定的结果。如图76中所见，没有观察到聚集的APOE-4和Gal3之间的结合。
实施例29：抗Gal3抗体降解毒性载脂蛋白E寡聚体
测试示例性抗Gal3抗体TB006降解APOE-4寡聚体的能力。制备APOE-4/Gal3混合物，以仅APOE-4作为对照。通过添加10mM磷酸钠缓冲液(pH 7.4)将APOE-4肽稀释至终浓度0.1mg/ml。为了研究重组人Gal-3(rhGal-3)对APOE-4的聚集的影响，将100μg/ml的APOE-4肽与rhGal-3蛋白(100μg/ml)混合。在聚集时间进程中使用搅拌棒在室温下连续搅拌溶液24小时。然后测定用A11和APOE4序列依赖性抗体(Syn1)探测的不含和含rhGal-3的APOE4肽的聚集特征。然后将它们在0、3、10或100μg抗体与TB006(或作为同种型对照的MOPC21)组合，并与抗体在室温下孵育0、1、2或3小时。
与相应的二抗孵育1小时后，使用Azure图像显色剂显色图像。
如图27A中所示，TB006显示出降解APO-E4/Gal3混合物中的APO-E4寡聚体的剂量依赖性能力，而MOPC21对照没有效果。
图27B显示了图27B的3小时时间点。图27C是基于信号强度的图27B的TB006处理的3小时时间点的量化。
实施例30：Gal3促进朊病毒蛋白寡聚化
测试了Gal3促进朊病毒蛋白的寡聚化的能力。将重组朊病毒蛋白与Gal3在室温下孵育0、0.5、1、2、3、4或5小时。使用仅朊病毒蛋白和仅Gal3制剂作为对照。
进行朊病毒蛋白/Gal3混合物和对照的斑点印迹并且用A11抗体和朊病毒蛋白(PrP)-特异性抗体进行探测。图25显示，如当用A11探测时的阳性信号所指示的，在测试的时间点，与Gal3孵育的朊病毒蛋白形成寡聚体。
还使用ELISA测试了Gal3与聚集的朊病毒蛋白的结合。在ELISA之前，通过多天的搅拌来聚集人朊病毒蛋白，按照制造商的说明，使用EZ Link Sulfo-NHS-LC-生物素(ThermoFisher Scientific，A39257)进行生物素化，并使用Zeba旋转脱盐柱(ThermoFisher Scientific，89882)进行脱盐。
为了开始ELISA，通过将半乳凝素-3蛋白(TrueBinding，QCB210019)、(TrueBinding，QCB200377)、(Biolegend，599806)在分开体积的PBS中稀释至4μg/ml的浓度来制备包被溶液。通过沿96孔ELISA板(Thermo Scientific，44-2401-21)的顶行每孔添加80μl(每种蛋白质4个孔)，将包被溶液应用到板上，然后在PBS中向下两倍系列稀释。在4℃O/N下孵育板后，用300μl PBST洗涤板三次，然后进行封闭步骤，其中将150μl的2％BSA的PBST添加到每孔中，并在室温下轻轻振荡孵育1小时。然后将现有的封闭溶液从板上丢弃。用于结合的朊病毒蛋白溶液通过将生物素化的聚集的朊病毒蛋白在2％BSA的PBST中稀释至4μg/ml的浓度来制备，然后通过逐列每孔添加60μl进行三列(对于每种半乳凝素-3一列)应用到板中，然后在2％BSA的PBST中纵向向右两倍系列稀释。将板在室温下轻轻振荡孵育1小时，并且然后用300μl PBST洗涤三次。其后，将亲和素-HRP(Biolegend，405103)在2％BSA的PBST中稀释至1∶2000，然后将25μl添加到所有孔中。将板在室温下轻轻振荡孵育1小时，然后用300μl PBST洗涤三次。为了使板显色，将50μl的ABTS(Life Technologies，00-2024)底物添加到每孔中，孵育直至达到足够的信号，然后以每孔25μl的1N HCl终止。在酶标仪中在405nm的吸光度处读取板。使用GraphPad Prism 8.0软件(GraphPad Software Inc)对数据进行绘图。
图80描绘了检查hGal3与聚集的朊病毒蛋白结合的ELISA测定的结果。如图80中所见，甚至在聚集的朊病毒蛋白或hGal3浓度递减的情况下，hGal3表明与聚集的朊病毒蛋白的强结合。
使用ELISA来评估各种抗体针对hGal3与聚集的朊病毒蛋白结合的阻断效力。在ELISA之前，通过多天的搅拌来聚集人朊病毒蛋白，按照制造商的说明，使用EZ LinkSulfo-NHS-LC-生物素(ThermoFisher Scientific，A39257)进行生物素化，并使用Zeba旋转脱盐柱(ThermoFisher Scientific，89882)进行脱盐。
将人半乳凝素-3(Gal3)蛋白(TrueBinding，QCB200377)在PBS中稀释至10μg/ml的浓度并通过向每孔应用35μl来包被96孔ELISA板。将板在4℃O/N下孵育后，用300μl PBST将板洗涤三次。然后用150μl的2％BSA的PBST在室温下轻轻振荡将板封闭1小时。此后，弃去2％BSA的PBST，并且将30μl在2％BSA PBST中的TB001(TrueBinding，QC190118)、TB006(TrueBinding，QC200208)、几种(TrueBinding，各种QC#)或Synagis hIgG4同种型(TrueBinding，QC190234)(从10μg/ml开始3倍系列稀释)添加到孔中，然后立即添加30μl的在2％BSA的PBST中的1μg/ml的生物素化的朊病毒蛋白。将板在室温下轻轻振荡孵育1小时，并且然后用300μl PBST洗涤三次。此后，将亲和素HRP(Biolegend，405103)在2％BSA的PBST中稀释(1∶2000稀释)，并将25μl添加到孔中。将板在室温下轻轻振荡孵育1小时，并且用300μl PBST洗涤三次。将50μl的ABTS(Life Technologies，00-2024)添加到每孔中进行显色，然后使用酶标仪在405nm的吸光度处读取板。使用GraphPad Prism 8.0软件(GraphPadSoftware Inc)对数据进行绘图。
图81描绘了检查各种抗体针对hGal3与聚集的朊病毒蛋白结合的阻断效力的ELISA测定的结果。如图81中所见，即使在聚集的朊病毒蛋白或hGal3浓度递减的情况下，各种抗体也展示显著阻断hGal3与聚集的朊病毒蛋白的结合。
实施例31：Gal3促进神经丝轻链(NFL)寡聚化
测试了Gal3促进神经丝轻链(NFL)蛋白的寡聚化的能力。将重组NFL与Gal3在室温下孵育0、1、2、3、4、5或24小时。仅NFL和仅Gal3制剂用作对照。
进行NFL/Gal3混合物和对照的斑点印迹并且用A11抗体探测。图29A-B描绘了Gal3对神经丝轻(NFL)蛋白的聚集的促进，如通过斑点印迹检测的。
为了测试抗Gal3抗体是否可用于抑制蛋白病，首先使用ELISA确定Gal3参与聚集的NFL的形成。在ELISA之前，通过多天的搅拌来聚集人NFL，按照制造商的说明，使用EZLink Sulfo-NHS-LC-生物素(ThermoFisher Scientific，A39257)进行生物素化，并且用Zeba旋转脱盐柱(ThermoFisher Scientific，89882)进行脱盐。
为了开始ELISA，通过将半乳凝素-3蛋白(TrueBinding，QCB210019)、(TrueBinding，QCB200377)、(Biolegend，599806)在分开体积的PBS中稀释至4μg/ml的浓度来制备包被溶液。通过沿96孔ELISA板(Thermo Scientific，44-2401-21)的顶行每孔添加80μl(每种蛋白质4个孔)将包被溶液应用到板上，然后在PBS中向下两倍系列稀释。在4℃O/N下孵育板后，用300μl PBST洗涤板三次，然后进行封闭步骤，其中将150μl的2％BSA的PBST添加到每孔中，并在室温下轻轻振荡孵育1小时。然后将现有的封闭溶液从板上丢弃。用于结合的NFL溶液通过将生物素化的聚集的NFL在2％BSA的PBST中稀释至4μg/ml的浓度来制备，然后通过逐列每孔添加60μl进行三列(对于每种半乳凝素-3一列)应用到板中，然后在2％BSA的PBST中纵向向右两倍系列稀释。将板在室温下轻轻振荡孵育1小时，并且然后用300μl PBST洗涤三次。其后，将亲和素-HRP((Biolegend，405103)在2％BSA的PBST中稀释至1∶2000，然后将25μl添加到所有孔中。将板在室温下轻轻振荡孵育1小时，然后用300μlPBST洗涤三次。为了使板显色，将50μl的ABTS(Life Techno logies，00-2024)底物添加到每孔中，孵育直至达到足够的信号，然后以每孔25μl的1N HCl终止。在酶标仪中在405nm的吸光度处读取板。使用GraphPad Prism 8.0软件(GraphPad Software Inc)对数据进行绘图。
图82描绘了检查hGal3与聚集的NFL结合的ELISA测定的结果。如图82中所见，观察到hGal3与聚集的NFL的弱结合。
实施例32：Gal3促进Aβ42的聚集：
Aβ42斑块的沉积是阿尔茨海默病和脑淀粉样血管病(CAA)的特征标志。为了测试抗Gal3抗体是否可用于抑制阿尔茨海默病或CAA，首先确定Gal3促进Aβ42聚集。
为了测试抗Gal3抗体是否可用于抑制蛋白病，首先使用斑点印迹确定Gal3参与寡聚化的Aβ42的形成。将1mg的冻干Aβ42肽(r-肽)重悬于90μl的100mM NaOH并孵育10分钟。然后通过添加100mM磷酸钠缓冲液(pH 7.4)将溶液稀释至终浓度0.1mg/ml。然后将合成的Aβ42肽与rhGal-3蛋白混合，并在室温下孵育1小时。1小时后，添加不同浓度的hTB001和hTB006Ab，并将溶液在室温下孵育5小时。在适当的时间点(时间0-5小时)将2μl的每个样品移液到Whatman硝酸纤维素膜上进行斑点印迹，并且用抗体A11探测。为了确认Aβ42，还用抗体6E10探测膜。与各自的二抗孵育1小时后，使用Azure图像显色剂显色图像。
如图31所见，rhGal-3诱导Aβ42的寡聚化。图31A-D描绘了毒性Aβ42寡聚体的降解，如通过斑点印迹检测的。图31A描绘了用A11和6E10抗体探测的hTB006对毒性Aβ42寡聚体的24小时时间进程降解。图31B描绘了经过24小时时间进程中Aβ42寡聚体降解的量化。图31C描绘了用A11和6E10抗体探测的hTB006对毒性Aβ42寡聚体的5小时时间进程降解。图31D描绘了不同浓度的hTB006对Gal-3诱导的Aβ42寡聚体的影响的量化。
为了确定寡聚化的Aβ42是否结合hGal3，还使用Elisa测试了Gal3与寡聚化的Aβ42的结合。在ELISA之前，通过多天的搅拌来聚集人朊病毒蛋白，按照制造商的说明，使用EZLink Sulfo-NHS-LC-生物素(ThermoFisher Scientific，A39257)进行生物素化，并且用Zeba旋转脱盐柱(ThermoFisher Scientific，89882)进行脱盐。
为了开始ELISA，通过将半乳凝素-3蛋白(TrueBinding，QCB210019)、(TrueBinding，QCB200377)(Biolegend，599806)在分开体积的PBS中稀释至4μg/ml的浓度来制备包被溶液。通过沿96孔ELISA板(Thermo Scientific，44-2401-21)的顶行每孔添加80μl(每种蛋白质4个孔)，将包被溶液应用到板上，然后在PBS中向下两倍系列稀释。在4℃O/N下孵育板后，用300μl PBST洗涤板三次，然后进行封闭步骤，其中将150μl的2％BSA的PBST添加到每孔中，并在室温下轻轻振荡孵育1小时。然后将现有的封闭溶液从板上丢弃。用于结合的朊病毒蛋白溶液通过将生物素化的聚集的Aβ42在2％BSA的PBST中稀释至4μg/ml的浓度来制备，然后通过逐列每孔添加60μl进行三列(对于每种半乳凝素-3一列)应用到板中，然后在2％BSA的PBST中纵向向右两倍系列稀释。将板在室温下轻轻振荡孵育1小时，并且然后用300μl PBST洗涤三次。其后，将亲和素-HRP(Biolegend，405103)在2％BSA的PBST中稀释至1∶2000，然后将25μl添加到所有孔中。将板在室温下轻轻振荡孵育1小时，然后用300μl PBST洗涤三次。为了使板显色，将50μl的ABTS(Life Technologies，00-2024)底物添加到每孔中，孵育直至达到足够的信号，然后以每孔25μl的1N HCl终止。在酶标仪中在405nm的吸光度处读取板。使用GraphPad Prism 8.0软件(GraphPad Software Inc)对数据进行绘图。
图69描绘了检查hGal3与聚集的Aβ42蛋白结合的ELISA测定的结果。如图69中所见，即使在Aβ42或hGal3浓度递减的情况下，hGal3表明与Aβ42的中度(moderate)结合。
实施例33：Gal3促进Aβ40的聚集：
Aβ40斑块的沉积是阿尔茨海默病和脑淀粉样血管病(CAA)的晚期特征标志。为了测试抗Gal3抗体是否可用于抑制阿尔茨海默病或CAA，首先确定Gal3促进Aβ40聚集。
为了测定寡聚化的Aβ40是否结合hGal3，使用斑点印迹测试Gal3与寡聚化的Aβ40的结合。将1mg的冻干Aβ40肽重悬于90μl的100mM NaOH中并孵育10分钟。然后通过添加100mM磷酸钠缓冲液(pH7.4)将溶液稀释至0.1mg/ml的终浓度。然后将合成的Aβ40肽与rhGal-3蛋白混合，并在室温下孵育1小时。1小时后，添加不同浓度的hTB001和hTB006Ab并将溶液在室温下孵育5小时。在适当的时间点(时间0-5小时)将2μl的每种样品移液到Whatman硝酸纤维素膜上进行斑点印迹，并且用抗体A11进行探测。为了确认Aβ40，还用抗体6E10探测膜。与各自的二抗孵育1小时后，使用Azure图像显色剂显色图像。
如图30中所见，rhGal-3诱导Aβ40的寡聚化。图30A-C描绘了通过斑点印迹检测的Aβ40的寡聚化。图30A描绘了用A11抗体探测的Aβ40寡聚体的24小时时间进程寡聚化。图30B描绘了用抗体6E10探测的Aβ40寡聚体的24小时时间进程寡聚化。图30C描绘了用Gal3序列804抗体探测的Aβ40寡聚体的24小时时间进程寡聚化。
为了测定寡聚化的Aβ40是否结合hGal3，还使用Elisa测试了Gal3与寡聚化的Aβ0的结合。在ELISA之前，通过多天的搅拌来聚集人朊病毒蛋白，按照制造商的说明，使用EZLink Sulfo-NHS-LC-生物素(ThermoFisher Scientific，A39257)进行生物素化，并且用Zeba旋转脱盐柱(ThermoFisher Scientific，89882)进行脱盐。
为了开始ELISA，通过将半乳凝素-3蛋白(TrueBinding，QCB210019)(TrueBinding，QCB200377)(Biolegend，599806)在分开体积的PBS中稀释至4μg/ml的浓度来制备包被溶液。通过沿96孔ELISA板(Thermo Scientific，44-2401-21)的顶行每孔添加80μl(每种蛋白质4个孔)，将包被溶液应用到板上，然后在PBS中向下两倍系列稀释。在4℃O/N下孵育板后，用300μl PBST洗涤板三次，然后进行封闭步骤，其中将150μl的2％BSA的PBST添加到每孔中，并在室温下轻轻振荡孵育1小时。然后将现有的封闭溶液从板上丢弃。用于结合的朊病毒蛋白溶液通过将生物素化的聚集的Aβ40在2％BSA的PBST中稀释至4μg/ml的浓度来制备，然后通过逐列每孔添加60μl进行三列(对于每种半乳凝素-3一列)应用到板中，然后在2％BSA的PBST中纵向向右两倍系列稀释。将板在室温下轻轻振荡孵育1小时，并且然后用300μl PBST洗涤三次。其后，将亲和素-HRP(Biolegend，405103)在2％BSA的PBST中稀释至1∶2000，然后将25μl添加到所有孔中。将板在室温下轻轻振荡孵育1小时，然后用300μl PBST洗涤三次。为了使板显色，将50μl的ABTS(Life Technologies，00-2024)底物添加到每孔中，孵育直至达到足够的信号，然后以每孔25μl的1N HCl终止。在酶标仪中在405nm的吸光度处读取板。使用GraphPad Prism 8.0软件(GraphPad Software Inc)对数据进行绘图。
图70描绘了检查hGal3与聚集的Aβ40结合的ELISA测定的结果。如图69中所见，即使在Aβ40或hGal3浓度递减的情况下，hGal3也表明与Aβ40的中度结合。
实施例34：Gal3抗体阻断Gal3与Aβ40的结合：
进行ELISA以测定各种抗体针对hGal3与Aβ40结合的阻断效力。在ELISA之前，通过多天的搅拌来聚集人淀粉样蛋白-β40(Aβ40)，按照制造商的说明，使用EZ Link Sulfo-NHS-LC-生物素(ThermoFisher Scientific，A39257)进行生物素化，并且用Zeba旋转脱盐柱(ThermoFisher Scientific，89882)进行脱盐。
将人半乳凝素-3(Gal3)蛋白(TrueBinding，QCB200377)在PBS中稀释至4μg/ml的浓度，并通过将35μl应用到每孔来包被96孔ELISA板。将板在4℃O/N下孵育后，用300μlPBST将板洗涤三次。然后用150μl的2％BSA的PBST在室温下轻轻振荡将板封闭1小时。此后，弃去2％BSA的PBST，并且将30μl在2％BSA的PBST中的TB001(TrueBinding，QC190118)、TB006(TrueBinding，QC200208)、几种20H5(TrueBinding，各种QC#)或Synagis hIgG4同种型(TrueBinding，QC190234)(从10μg/ml开始3倍系列稀释)添加到孔中，然后立即添加30μl的在2％BSA的PBST中的1μg/ml的生物素化的Aβ40。将板在室温下轻轻振荡孵育1小时，并且然后用300μl PBST洗涤三次。此后，将亲和素HRP(Biolegend，405103)在2％BSA的PBST中稀释(1∶2000稀释)，并将25μl添加到孔中。将板在室温下轻轻振荡孵育1小时，并且用300μlPBST洗涤三次。将50μl的ABTS(Life Technologies，00-2024)添加到每孔中进行显色，然后使用酶标仪在405nm的吸光度处读取板。使用GraphPad Prism 8.0软件(GraphPadSoftware Inc)对数据进行绘图。
图71描绘了ELISA阻断测定的结果。如图71中所见，各种抗Gal3抗体，包括TB001、TB006和20H5，展示出阻断hGal3与Aβ40结合的显著能力。
图72是量化各种抗Gal2抗体阻断hGal3与Aβ40结合的效果的表格。如图72中所见，TB001 QC190118、TB006(QC200208)、QC200195IMTAB0219 20H5.A3-hIgG4(S228P)、QC200197IMTAB0278798-9.20H5.A3-mH1mL0-hIgG4(S228P)、QC200201IMTAB0281798-9.20H5.A3-mH1mL1-hIgG4(S228P)和QC210053 IMTAB0361 20H5.A3-VH3VL1-hIgG4(S228P)表明显著的hGAl3：Aβ40阻断能力。
实施例35：Gal3抗体阻断Gal3-诱导的胰岛素聚集的聚集：
胰岛素聚集可导致胰岛素源性淀粉样变性和糖尿病。为了测试抗Gal3抗体是否可用于抑制糖尿病或胰岛素源性淀粉样变性，首先确定Gal3促进胰岛素聚集。
为了确定Gal-3促进胰岛素聚集，以5.165mg/mL的储备浓度(stockconcentration)制备胰岛素储备(stock)(Sigma Cat#91077C Gal-3：QCB210021)。将含或不含gal-3(100，200ug/mL)的胰岛素(200ug/mL)在含有100mM NaCl的20％乙酸溶液中于50度搅拌。在30分钟、1小时、2小时、3小时、4小时点样样品，并且用A11抗体(Invitrogen Cat#AHB0052，1∶1000稀释)在4度下探测印迹过夜。与各自的二抗孵育1小时后，使用Azure图像显色剂显色图像。
如图37中所见，Gal-3促进胰岛素聚集。
图37描绘了通过斑点印迹检测的，在50℃下与100μg和200μg的用A11抗体探测的Gal-3孵育的胰岛素的4小时时间进程聚集。
在测定半乳凝素-3是否与人胰岛素寡聚化的另一个实验中，在用适当处理(胰岛素、胰岛素+Gal 3和单独的Gal 3)标记的3个Eppendorf管中制备胰岛素聚集体。还制备了相应的斑点印迹并标记了30分钟、1小时、2小时和4小时的时间进程。将胰岛素和Gal 3在室温下解冻15-20分钟。称取1mg的胰岛素并在1mL的缓冲液中重构。(胰岛素储备浓度为1mg/mL)。在500uL的缓冲液中制备具有200ug/mL浓度的处理物(treatment)(胰岛素：200ug/mL，胰岛素和Gal 3：两者为(both)200ug/mL，以及单独的Gal 3200ug/mL)。将处理物在50摄氏度下持续搅拌孵育。然后在30分钟、1小时、2小时、3小时、4小时点样样品，并且用A11抗体探测印迹。4小时后，用1X TBST冲洗斑点印迹一次，并且用5％奶的1XTBST封闭膜1小时。封闭后，用1X TBST洗涤膜三次(每次洗涤15分钟)。将膜与1∶1000A11抗体在室温下在5％奶中孵育1.5小时。孵育后，用1XTBST洗涤膜三次(每次洗涤15分钟)，并且然后与1∶1000二抗山羊抗兔IgG H&L(HRP)在室温下孵育1小时。然后用1X TBST再次洗涤膜三次(每次洗涤15分钟)并显色。然后，通过使用剥离缓冲液剥离膜15分钟，制备斑点印迹以用804抗Gal3抗体探测。然后用1X TBST洗涤膜三次(每次洗涤15分钟)，并且用5％奶的TBST封闭1小时。封闭后，将膜与1∶1000小鼠Gal 3804Ab在5％奶的1X TBST中在4度下孵育过夜。然后用1X TBST洗涤膜三次(每次洗涤15分钟)，并且用1∶1000二抗山羊抗小鼠IgG(HRP)在室温下孵育膜1小时。孵育后，用1X TBST洗涤膜三次并显色。
图49F是描绘与Gal3孵育并且用A11抗体探测的胰岛素的时间进程聚集的斑点印迹。如图49F中所见，Gal3在短短30分钟的孵育后促进胰岛素的寡聚化。用单独的胰岛素或半乳凝素-3未观察到聚集。
图49G是描绘与Gal3孵育并且用抗Gal-3抗体804探测的胰岛素的时间进程聚集的斑点印迹。如图49G中所见，Gal3在短短30分钟的孵育后促进胰岛素的寡聚化。
为了测试抗Gal3抗体是否可用于抑制蛋白病，首先使用ELISA确定Gal3参与胰岛素的聚集。在ELISA之前，通过搅拌多天来聚集胰岛素，按照制造商的说明，使用EZ LinkSulfo-NHS-LC-生物素(ThermoFisher Scientific，A39257)进行生物素化，并且用Zeba旋转脱盐柱(ThermoFisher Scientific，89882)进行脱盐。
为了开始ELISA，通过将半乳凝素-3蛋白(TrueBinding，QCB210019)(TrueBinding，QCB200377)(Biolegend，599806)在分开体积的PBS中稀释至4μg/ml的浓度来制备包被溶液。通过沿96孔ELISA板(Thermo Scientific，44-2401-21)的顶行每孔添加80μl(每种蛋白质4个孔)，将包被溶液应用到板上，然后在PBS中向下两倍系列稀释。在4℃O/N下孵育板后，用300μl PBST洗涤板三次，然后进行封闭步骤，其中将150μl的2％BSA的PBST添加到每孔中，并在室温下轻轻振荡孵育1小时。然后将现有的封闭溶液从板上丢弃。用于结合的胰岛素溶液通过将生物素化的聚集的胰岛素在2％BSA的PBST中稀释至10μg/ml的浓度来制备，然后通过逐列每孔添加60μl进行三列(对于每种半乳凝素-3一列)应用到板上，然后在2％BSA的PBST中纵向向右两倍系列稀释。将板在室温下轻轻振荡孵育1小时，并且然后用300μl PBST洗涤三次。其后，将亲和素-HRP(Biolegend，405103)在2％BSA的PBST中稀释至1∶2000，然后将25μl添加到所有孔中。将板在室温下轻轻振荡孵育1小时，然后用300μl PBST洗涤三次。为了使板显色，将50μl的ABTS(Life Technologies，00-2024)底物添加到每孔中，孵育直至达到足够的信号，然后以每孔25μl的1N HCl终止。在酶标仪中在405nm的吸光度处读取板。使用GraphPad Prism 8.0软件(GraphPad Software Inc)对数据进行绘图。
图79描绘了检查hGal3与聚集的胰岛素结合的ELISA测定的结果。如图79中所见，观察到聚集的胰岛素与hGal3的中度结合。
然后测试21种不同的Gal-3抗体克隆以测定抗Gal-3抗体是否阻断胰岛素聚集。如图49中所见，与用Gal-3处理的胰岛素相比，所有Gal-3抗体克隆都展现出减少的胰岛素寡聚化。
图49A-E描绘了通过Gal-3的胰岛素寡聚化(在50℃下孵育的)和筛选不同的Gal-3Ab克隆用于降解用A11 Ab探测的胰岛素寡聚化的实施方式。图49A是描绘在有和没有Gal-3的情况下的胰岛素寡聚化的3小时时间进程的斑点印迹。图49B是描绘筛选21种不同的Gal-3 Ab克隆用于降解胰岛素的斑点印迹。图49C描绘了21种不同的Gal-3 Ab克隆对胰岛素寡聚化的抑制的量化。图49D是描绘筛选的21种不同的Gal-3 Ab克隆中每一个的身份的图表。图49E描绘了使用荧光显微镜检测的在有和没有Gal-3的情况下的胰岛素聚集的可视化。
实施例36：Gal3促进降钙素聚集：
降钙素聚集可导致甲状腺髓样癌(MTC)、骨质疏松症和佩吉特氏病。为了测试抗Gal3抗体是否可用于抑制糖尿病或胰岛素源性淀粉样变性，首先确定Gal3促进降钙素聚集。
图50描绘了如通过斑点印迹检测的，当与用A11抗体探测的100μg Gal-3孵育时，重组人降钙素(hCT)聚集的48小时时间进程。
简言之，将hCT溶解在含有100mM NaCl的50mM PBS缓冲液(pH 7.4)中至终浓度为25μM。在聚集时间进程期间，使用搅拌棒在37℃下连续搅拌溶液24小时。然后通过用寡聚体特异性抗体A11探测来测定不含和含rhGal-3的hCT的聚集特征。与各自的二抗孵育1小时后，使用Azure图像显色剂显色图像。
如图50中所见，Gal-3促进降钙素的聚集。
为了测试抗Gal3抗体是否可用于抑制蛋白病，首先使用ELISA确定Gal3参与降钙素的聚集。在ELISA之前，通过多天(0、1、2天)搅拌来聚集ANP，按照制造商的说明，使用EZLink Sulfo-NHS-LC-生物素(ThermoFisher Scientific，A39257)进行生物素化，并且用Zeba旋转脱盐柱(ThermoFisher Scientific，89882)进行脱盐。
为了开始ELISA，通过将半乳凝素-3蛋白(TrueBinding，QCB210019)(TrueBinding，QCB200377)(Biolegend，599806)在分开体积的PBS中稀释至10μg/ml的浓度来制备包被溶液。通过沿96孔ELISA板(Thermo Scientific，44-2401-21)的顶行每孔添加80μl(每种蛋白质4个孔)，将包被溶液应用到板上，然后在PBS中向下两倍系列稀释。在4℃O/N下孵育板后，用300μl PBST洗涤板三次，然后进行封闭步骤，其中将150μl的2％BSA的PBST添加到每孔中，并在室温下轻轻振荡孵育1小时。然后将现有的封闭溶液从板上丢弃。用于结合的降钙素溶液通过将生物素化的聚集的降钙素在2％BSA的PBST中稀释至10μg/ml的浓度来制备，然后通过逐列每孔添加60μl进行三列(对于每种半乳凝素-3一列)应用到板上，然后在2％BSA的PBST中纵向向右两倍系列稀释。将板在室温下轻轻振荡孵育1小时，并且然后用300μl PBST洗涤三次。其后，将亲和素-HRP(Biolegend，405103)在2％BSA的PBST中稀释至1∶2000，然后将25μl添加到所有孔中。将板在室温下轻轻振荡孵育1小时，然后用300μl PBST洗涤三次。为了使板显色，将50μl的ABTS(Life Technologies，00-2024)底物添加到每孔中，孵育直至达到足够的信号，然后以每孔25μl的1N HCl终止。在酶标仪中在405nm的吸光度处读取板。使用GraphPad Prism 8.0软件(GraphPad Software Inc)对数据进行绘图。
图89描绘了用hGal3检查hGal3与各种版本的降钙素结合的ELISA测定的结果。如图89中所见，降钙素是Gal3的中度结合剂。降钙素的聚集导致结合亲和力小幅增加。
实施例37：Gal3促进苯丙氨酸聚集：
苯丙氨酸(Phe)聚集可导致苯丙酮尿症。为了测试抗Gal3抗体是否可用于抑制苯丙酮尿症，测试了Gal3促进Phe的寡聚化的能力。
图39A-B描绘了通过斑点印迹检测的，在室温(RT)和37℃下与用A11抗体探测的100μg的Gal-3孵育的苯丙氨酸(Phe)的5小时时间进程聚集。
将苯丙氨酸在100mM磷酸盐缓冲盐水(pH 7.4)中稀释。在聚集时间进程期间，使用搅拌棒在37℃下连续搅拌溶液24小时。通过用A11探测来测定不含和含rhGal-3的苯胺的聚集特征。与各自的二抗孵育1小时后，使用Azure图像显色剂显色图像。
如图39A-B中所见，Gal-3促进Phe聚集。
实施例38：Gal3促进谷氨酰胺聚集：
谷氨酰胺聚集可导致亨廷顿病。为了测试抗Gal3抗体是否可用于抑制亨廷顿病，测试了Gal3促进谷氨酰胺的寡聚化的能力。
图40描绘了通过斑点印迹检测的，在室温(RT)下与用A11抗体探测的100μg的Gal-3孵育的谷氨酰胺(GLN)的5小时时间进程聚集。
将谷氨酰胺在100mM磷酸盐缓冲盐水(pH 7.4)中稀释。在聚集时间进程期间，使用搅拌棒在37℃下连续搅拌溶液24小时。用A11抗体探测的不含和含rhGal-3的谷氨酰胺的聚集特征。与各自的二抗孵育1小时后，使用Azure图像显色剂显色图像。
如图40中所见，Gal-3促进谷氨酰胺聚集。
实施例39：Gal3促进肌生长抑制素聚集：
肌生长抑制素聚集可导致特发性炎性肌病(IIM)。为了测试抗Gal3抗体是否可用于抑制IIM，测试了Gal3促进谷氨酰胺的寡聚化的能力。
图48A-C描绘了与用A11抗体探测的100μg的Gal-3孵育的肌生长抑制素前肽的24小时时间进程聚集。图48A描绘了通过斑点印迹检测的，与用A11抗体探测的100μg的Gal-3孵育的肌生长抑制素前肽的24小时时间进程聚集。图48B-C描绘了使用荧光显微镜检测的含和不含Gal-3的肌生长抑制素前肽聚集在5、24和48小时的可视化。
将肌生长抑制素在100mM磷酸盐缓冲盐水(pH 7.4)中稀释。在聚集时间进程期间，使用搅拌棒在室温下连续搅拌溶液24小时。用A11探测的不含和含rhGal-3的肌生长抑制素的聚集特征。与各自的二抗孵育1小时后，使用Azure图像显色剂显色图像。
如图48中所见，Gal-3促进肌生长抑制素的聚集。
实施例40：Gal3促进溶菌酶聚集：
溶菌酶聚集可导致特发性炎性肌病(IIM)。为了测试抗Gal3抗体是否可用于抑制IIM，测试了Gal3促进溶菌酶的寡聚化的能力。
图36描绘了通过斑点印迹检测的，与用A11抗体探测的100μg的Gal-3孵育的溶菌酶的24小时时间进程聚集。
溶菌酶：Sigma Cat#L1667 Gal-3：QCB210021，储备浓度5.165mg/mL。将含或不含gal-3(100ug/mL)的溶菌酶(500ug/mL)在含有2M盐酸胍缓冲液的50mM磷酸钠缓冲液(pH6.0)中于室温下搅拌。在0分钟、15分钟、30分钟、1、2、3、4、5和24小时点样样品。使用A11抗体(Invitrogen Cat#AHB0052，1∶1000稀释)在4度下探测印迹过夜。与各自的二抗孵育1小时后，使用Azure图像显色剂显色图像。
如图36中所见，Gal-3促进溶菌酶聚集。
实施例41：Gal3促进天然血红蛋白(Hb)和糖化血红蛋白(HbAIC)聚集：
测试了Gal3促进天然血红蛋白(Hb)和糖化血红蛋白(HbAIC)的寡聚化的能力。
图38A-B描绘了通过斑点印迹检测的，在室温(RT)和37℃下与用A11抗体探测的100μg的Gal-3孵育的天然血红蛋白(Hb)和糖化血红蛋白(HbAIC)的5小时时间进程聚集。图38A描绘了在室温(RT)和37℃下与用A11抗体探测的100μg的Gal-3孵育的天然血红蛋白(Hb)的5小时时间进程聚集，如通过斑点印迹检测的。图38B描绘了通过斑点印迹检测的，在室温(RT)和37℃下与用A11抗体探测的100μg的Gal-3孵育的糖化血红蛋白(HbAIC)的5小时时间进程聚集。
将Hb和HbA1c溶解在pH 7.4的20mM磷酸盐缓冲液中。在聚集时间进程期间，使用搅拌棒在室温和37℃下连续搅拌溶液24小时。在适当的时间点(时间0-5小时)将2μl的每种样品移液到Whatman硝酸纤维素膜上进行斑点印迹。通过用抗体A11探测来测定含和不含rhGal-3的Hb和HbA1C的聚集特征。与各自的二抗孵育1小时后，使用Azure图像显色剂显色图像。
如图38A-B中所见，半乳凝素-3在室温和37℃下固有地促进HbA1c的聚集，而在存在和不存在半乳凝素-3的情况下，Hb未聚集。
实施例42：Gal3促进轻链聚集：
轻链聚集可导致轻链(AL)淀粉样变性。为了测试抗Gal3抗体是否可用于抑制AL，测试了Gal3促进轻链的寡聚化的能力。
图34A-C描绘了通过斑点印迹检测的，与用A11抗体探测的100μg的Gal-3孵育的轻链、PDGFR和MCAM的时间进程聚集。图34A描绘了通过斑点印迹检测的，与用A11抗体探测的100μg的Gal-3孵育的轻链的时间进程聚集。图34B描绘了通过斑点印迹检测的，与用A11抗体探测的100μg的Gal-3孵育的PDGFR的时间进程聚集。图34C描绘了通过斑点印迹检测的，与用A11抗体探测的100μg的Gal-3孵育的MCAM的时间进程聚集。
将含或不含gal-3(100ug/mL)的轻链(500ug/mL)在100mM磷酸钠缓冲液(pH 7.4)中在室温下搅拌。将样品点在d处的点。然后用A11抗体(Invitrogen Cat#AHB0052，1∶1000稀释度)在4度下探测印迹过夜。与各自的二抗孵育1小时后，使用Azure图像显色剂显色图像。
如图34A-C中所见，Gal-3促进轻链的聚集。
实施例43：Gal3促进胆固醇聚集：
胆固醇聚集可导致动脉粥样硬化、心血管疾病和阿尔茨海默病。为了测试抗Gal3抗体是否可用于抑制动脉粥样硬化、心血管疾病和阿尔茨海默病，测试了Gal3促进胆固醇的寡聚化的能力。
图42A-B描绘了通过斑点印迹检测的，在室温(RT)下与用抗体探测的100μg的Gal-3孵育的胆固醇的5小时时间进程聚集。
将胆固醇以2∶1的比例溶解在氯仿和甲醇中。蒸发氯仿并将胆固醇在PBS(pH 7.4)中稀释。在聚集时间进程期间，使用搅拌棒在37℃下连续搅拌溶液24小时。在适当的时间点(时间0-5小时)将2μl的每种样品移液到Whatman硝酸纤维素膜上进行斑点印迹。用抗体A11探测含和不含rhGal-3的胆固醇的聚集特征。与各自的二抗孵育1小时后，使用Azure图像显色剂显色图像。
如图42A-B中所见，Gal-3促进胆固醇的聚集。
为了测试抗Gal3抗体是否可用于抑制蛋白病，首先使用ELISA确定Gal3参与胆固醇的聚集。在ELISA之前，通过多天的搅拌来聚集人胆固醇(Thermo，C3045)，按照制造商的说明，使用EZLink Sulfo-NHS-LC-生物素(ThermoFisher Scientific，A39257)进行生物素化，并且用Zeba旋转脱盐柱(ThermoFisher Scientific，89882)进行脱盐。
为了开始ELISA，通过将半乳凝素-3蛋白(TrueBinding，QCB210019)(TrueBinding，QCB200377)(Biolegend，599806)在分开体积的PBS中稀释至4μg/ml的浓度来制备包被溶液。通过沿96孔ELISA板(Thermo Scientific，44-2401-21)的顶行每孔添加80μl(每种蛋白质4个孔)，将包被溶液应用到板上，然后在PBS中向下两倍系列稀释。在4℃O/N下孵育板后，用300μl PBST洗涤板三次，然后进行封闭步骤，其中将150μl的2％BSA的PBST添加到每孔中，并在室温下轻轻振荡孵育1小时。然后将现有的封闭溶液从板上丢弃。用于结合的胆固醇溶液通过将生物素化的聚集的胆固醇在2％BSA的PBST中稀释至40μg/ml的浓度来制备，然后通过逐列每孔添加60μl进行三列(对于每种半乳凝素-3一列)应用到板上，然后在2％BSA的PBST中纵向向右两倍系列稀释。将板在室温下轻轻振荡孵育1小时，并且然后用300μl PBST洗涤三次。其后，将亲和素-HRP(Biolegend，405103)在2％BSA的PBST中稀释至1∶2000，然后将25μl添加到所有孔中。将板在室温下轻轻振荡孵育1小时，然后用300μl PBST洗涤三次。为了使板显色，将50μl的ABTS(Life Technologies，00-2024)底物添加到每孔中，孵育直至达到足够的信号，然后以每孔25μl的1N HCl终止。在酶标仪中在405nm的吸光度处读取板。使用GraphPad Prism 8.0软件(GraphPad Software Inc)对数据进行绘图。
图77描绘了检查hGal3与聚集的胆固醇结合的ELISA测定的结果。如图77中所见，没有观察到聚集的胆固醇的结合。
图78描绘了检查hGal3与5小时聚集的胆固醇结合的ELISA测定的结果。如图77中所见，观察到聚集的胆固醇的中度hGAL3结合。
实施例44：Gal3促进胆甾醇基聚集：
胆甾醇基(共酯基)聚集可导致动脉粥样硬化、心血管疾病和阿尔茨海默病。为了测试抗Gal3抗体是否可用于抑制动脉粥样硬化、心血管疾病和阿尔茨海默病，测试了Gal3促进胆甾醇基的寡聚化的能力。
图41描绘了通过斑点印迹检测的，在室温(RT)下与用A11抗体探测的100μg的Gal-3孵育的胆甾醇基(共酯基)的5小时时间进程聚集。
将胆甾醇基溶解在氯仿中。蒸发氯仿并且将胆甾醇基在PBS(pH7.4)中稀释。在聚集时间进程期间，使用搅拌棒在37℃下连续搅拌溶液24小时。在适当的时间点(时间0-5小时)将2μl的每种样品移液到Whatman硝酸纤维素膜上进行斑点印迹。使用A11探测含和不含rhGal-3的胆甾醇基的聚集特征。与各自的二抗孵育1小时后，使用Azure图像显色剂显色图像。
如图41中所见，Gal-3促进胆甾醇基的聚集。
实施例45：Gal3促进心房钠尿肽聚集：
心房钠尿肽(ANP)聚集可导致充血性心力衰竭(CHF)和心脏淀粉样变性。为了测试抗Gal3抗体是否可用于抑制充血性心力衰竭(CHF)和心脏淀粉样变性，测试了Gal3促进ANP的寡聚化的能力。
图51A-B描绘了Gal-3促进心房钠尿肽(ANP)聚集。图51A描绘了通过斑点印迹检测的，当与用A11抗体探测的100μg的Gal-3孵育时，ANP聚集的80小时时间进程的实施方式。图51B描绘了当与用A11抗体探测的100μg的Gal-3孵育时，ANP聚集的荧光显微镜可视化的实施方式。
将浓度各为100ug/ml的三组蛋白质(单独的ANP或Gal3或组合(ANP+Gal3))在pH5.75的蒸馏水中在室温下持续搅拌0-48小时时间点进行孵育。使用斑点印迹分析来测定寡聚化。将所有三组的每个时间点的2ul的蛋白质等分试样添加到硝酸纤维素膜上。将相同的膜用5％脱脂奶粉封闭1小时，然后与ANP、Gal3和A11抗体孵育过夜。与各自的二抗孵育1小时后，使用Azure图像显色剂显色图像。
如图51中所见，Gal-3促进ANP的聚集。
还使用Elisa测试了Gal3与聚集或未聚集的ANP的结合。在ELISA之前，通过多天的搅拌来聚集ANP，按照制造商的说明，使用EZ Link Sulfo-NHS-LC-生物素(ThermoFisherScientific，A39257)进行生物素化，并且用Zeba旋转脱盐柱(ThermoFisher Scientific，89882)进行脱盐。
为了开始ELISA，通过将半乳凝素-3蛋白(TrueBinding，QCB210019)(TrueBinding，QCB200377)(Biolegend，599806)在分开体积的PBS中稀释至4μg/ml的浓度来制备包被溶液。通过沿96孔ELISA板(Thermo Scientific，44-2401-21)的顶行每孔添加80μl(每种蛋白质4个孔)，将包被溶液应用到板上，然后在PBS中向下两倍系列稀释。在4℃O/N下孵育板后，用300μl PBST洗涤板三次，然后进行封闭步骤，其中将150μl的2％BSA的PBST添加到每孔中，并在室温下轻轻振荡孵育1小时。然后将现有的封闭溶液从板上丢弃。用于结合的ANP溶液通过将生物素化的聚集的ANP在2％BSA的PBST中稀释至10μg/ml的浓度来制备，然后通过逐列每孔添加60μl进行三列(对于每种半乳凝素-3一列)应用到板上，然后在2％BSA的PBST中纵向向右两倍系列稀释。将板在室温下轻轻振荡孵育1小时，并且然后用300μl PBST洗涤三次。其后，将亲和素-HRP(Biolegend，405103)在2％BSA的PBST中稀释至1∶2000，然后将25μl添加到所有孔中。将板在室温下轻轻振荡孵育1小时，然后用300μlPBST洗涤三次。为了使板显色，将50μl的ABTS(Life Technologies，00-2024)底物添加到每孔中，孵育直至达到足够的信号，然后以每孔25μl的1N HCl终止。在酶标仪中在405nm的吸光度处读取板。使用GraphPad Prism 8.0软件(GraphPad Software Inc)对数据进行绘图。
图88描绘了检查hGal3与聚集的和未聚集的ANP结合的ELISA测定的结果。如图88中所见，当未聚集时，ANP可能是Gal3的弱结合剂或非结合剂。ANP的聚集导致ANP：Gal3结合的显著增加。
实施例46：Gal3促进B型钠尿肽前体聚集：
B型钠尿肽(BNP)前体聚集可导致充血性心力衰竭(CHF)和心脏淀粉样变性。为了测试抗Gal3抗体是否可用于抑制充血性心力衰竭(CHF)和心脏淀粉样变性，测试了Gal3促进BNP寡聚化的能力。
图52A-B描绘了Gal-3对B型钠尿肽(BNP)前体聚集的促进。图52A描绘了通过斑点印迹检测的，当与用A11抗体探测的100μg的Gal-3孵育时，BNP聚集的48小时时间进程的实施方式。图52B描绘了当与用A11抗体探测的100μg的Gal-3孵育并在室温下孵育24小时时，BNP聚集的荧光显微镜可视化的实施方式。
将浓度各为100ug/ml的三组蛋白质，单独的NT-Pro BNP或Gal3或组合(NT-ProBNP+Gal3)，在pH 5.75的蒸馏水中在室温下持续搅拌0-48小时时间点进行孵育。使用斑点印迹分析来测定寡聚化。将所有三组每个时间点的2ul的蛋白质等分试样添加到硝酸纤维素膜上。将相同的膜用5％脱脂奶粉封闭1小时，然后与BNP、Gal3和A11抗体孵育过夜。与各自的二抗孵育1小时后，使用Azure图像显色剂显色图像。
如图52中所见，Gal-3促进BNP聚集。
实施例47：Gal3促进半胱氨酸蛋白酶抑制剂-C聚集：
半胱氨酸蛋白酶抑制剂-C聚集可导致肾脏疾病、CAA或阿尔茨海默病。为了测试抗Gal3抗体是否可用于抑制肾脏疾病、CAA或阿尔茨海默病，测试了Gal3促进半胱氨酸蛋白酶抑制剂-c的寡聚化的能力。
图47A-F描绘了通过斑点印迹检测的，与用A11抗体探测的100μg的Gal-3孵育的半胱氨酸蛋白酶抑制剂-C的时间进程聚集。图47A描绘了通过斑点印迹检测的，与用A11抗体探测的100μg的Gal-3孵育的半胱氨酸蛋白酶抑制剂-C的24小时时间进程聚集。图47B描绘了通过斑点印迹检测的，与用半胱氨酸蛋白酶抑制剂-C抗体探测的100μg的Gal-3孵育的半胱氨酸蛋白酶抑制剂-C的24小时时间进程聚集。图47C描绘了通过斑点印迹检测的，与用804抗体探测的100μg的Gal-3孵育的半胱氨酸蛋白酶抑制剂-C的24小时时间进程聚集。图47D描绘了通过斑点印迹检测的，与用A11抗体探测的Gal-3孵育的半胱氨酸蛋白酶抑制剂-C的5小时时间进程聚集。图47E描绘了通过斑点印迹检测的，与用半胱氨酸蛋白酶抑制剂-C抗体探测的Gal-3孵育的半胱氨酸蛋白酶抑制剂-C的5小时时间进程聚集。图47F描绘了通过斑点印迹检测的，与用804抗体探测的Gal-3孵育的半胱氨酸蛋白酶抑制剂-C的5小时时间进程聚集。
将三组蛋白质，单独的人半胱氨酸蛋白酶抑制剂C、Gal3或组合(半胱氨酸蛋白酶抑制剂C+Gal3)各100ug/ml，在pH 7.4的磷酸盐缓冲液中在37℃下持续搅拌孵育0-24小时时间点。使用斑点印迹分析来测定寡聚化。将所有三组每个时间点的2u1的蛋白质等分试样添加到硝酸纤维素膜上。将相同的膜用5％脱脂奶粉封闭1小时，然后与半胱氨酸蛋白酶抑制剂C、Gal3和A11抗体孵育过夜。与各自的二抗孵育1小时后，使用Azure图像显色剂显色图像。
对于Gal3抗体，将两倍浓度的2D10、TB006和TB001添加至含有Gal3和半胱氨酸蛋白酶抑制剂C蛋白(100ug/ml)的各反应管中，并且如前持续搅拌进行孵育。
如图47A-F中所见，Gal-3促进半胱氨酸蛋白酶抑制剂-c的聚集。
实施例48：Gal3促进纤维蛋白聚集：
纤维蛋白聚集可导致脑血管损伤、中风、CAA或阿尔茨海默病。为了测试抗Gal3抗体是否可用于脑血管损伤、中风、CAA或阿尔茨海默病，测试了Gal3促进纤维蛋白的寡聚化的能力。
图32A-F描绘了通过斑点印迹检测的，与用A11探测的100μg的Gal-3孵育的纤维蛋白的时间进程聚集。图32A描绘了通过斑点印迹检测的，与用A11探测的100μg的Gal-3孵育的纤维蛋白的时间进程聚集。图32B描述了Gal-3固有促进纤维蛋白寡聚化的量化。图32C描绘了通过斑点印迹检测的，hTB001和hTB006对毒性纤维蛋白寡聚体的降解。图32D描绘了在用A11抗体探测的纤维蛋白寡聚化上筛选不同的Gal-3抗体克隆。图32E描绘了不同Gal-3抗体克隆对用A11抗体探测的纤维蛋白寡聚化的量化。图32F是描绘所筛选的Gal-3抗体克隆的身份和同种型的表格。
将1mg的纤维蛋白肽重悬于90μl的100mM NaOH中并孵育10分钟。然后通过添加10mM磷酸钠缓冲液(pH 7.4)将该溶液稀释至终浓度0.1mg/ml。添加Gal-3和/或抗体以测试其效果。使用搅拌棒连续搅拌溶液，同时在室温下孵育。在混合后的不同时间点，采集样品并在斑点印迹上探测，以使用A11抗体检测寡聚体的形成。与各自的二抗孵育1小时后，使用Azure图像显色剂显色图像。
如图32中所见，Gal-3促进纤维蛋白的聚集。
还使用Elisa测试了Gal3与纤维蛋白的结合。在ELISA之前，通过多天的搅拌来聚集人纤维蛋白，按照制造商的说明，使用EZ Link Sulfo-NHS-LC-生物素(ThermoFisherScientific，A39257)进行生物素化，并且用Zeba旋转脱盐柱(ThermoFisher Scientific，89882)进行脱盐。
为了开始ELISA，通过将半乳凝素-3蛋白(TrueBinding，QCB210019)(TrueBinding，QCB200377)(Biolegend，599806)在分开体积的PBS中稀释至4μg/ml的浓度来制备包被溶液。通过沿96孔ELISA板(ThermO Scientific，44-2401-21)的顶行每孔添加80μl(每种蛋白质4个孔)，将包被溶液应用到板上，然后在PBS中向下两倍系列稀释。在4℃O/N下孵育板后，用300μl PBST洗涤板三次，然后进行封闭步骤，其中将150μl的2％BSA的PBST添加到每孔中，并在室温下轻轻振荡孵育1小时。然后将现有的封闭溶液从板上丢弃。用于结合的纤维蛋白溶液通过将生物素化的聚集的纤维蛋白在2％BSA的PBST中稀释至4μg/ml的浓度来制备，然后通过逐列每孔添加60μl进行三列(对于每种半乳凝素-3一列)应用到板上，然后在2％BSA的PBST中纵向向右两倍系列稀释。将板在室温下轻轻振荡孵育1小时，并且然后用300μl PBST洗涤三次。其后，将亲和素-HRP(Biolegend，405103)在2％BSA的PBST中稀释至1∶2000，然后将25μl添加到所有孔中。将板在室温下轻轻振荡孵育1小时，然后用300μl PBST洗涤三次。为了使板显色，将50μl的ABTS(Life Technologies，00-2024)底物添加到每孔中，孵育直至达到足够的信号，然后以每孔25μl的1N HCl终止。在酶标仪中在405nm的吸光度处读取板。使用GraphPad Prism 8.0软件(GraphPad Software Inc)对数据进行绘图。
图83描绘了检查hGal3与聚集的NFL结合的ELISA测定的结果。如图83中所见，观察到hGal3与聚集的NFL的弱结合。
实施例49：Gal3促进补体蛋白C3的聚集：
补体蛋白C3的寡聚化可导致先天免疫系统破坏。为了测试抗Gal3抗体是否可用于抑制先天免疫系统破坏，首先确定Gal3促进C3聚集。
图35A-B描绘了通过斑点印迹检测的，与用A11抗体探测的100μg的Gal-3孵育的补体蛋白(C3和C9)的24小时时间进程聚集。图35A描绘了通过斑点印迹检测的，与用A11抗体探测的100μg的Gal-3孵育的补体蛋白C3的24小时时间进程聚集。图35B描绘了通过斑点印迹检测的，与用A11抗体探测的100μg的Gal-3孵育的补体蛋白C9的24小时时间进程聚集。
为了测定寡聚化的C3是否结合hGal3，使用斑点印迹测试了Gal3与寡聚化的C3的结合。将1mg的冻干C3肽重悬于90μl的100mM NaOH中并孵育10分钟。然后通过添加100mM磷酸钠缓冲液(pH 7.4)将溶液稀释至终浓度0.1mg/ml。然后将合成的C3和肽与rhGal-3蛋白混合，并在室温下孵育1小时。1小时后，添加不同浓度的hTB001和hTB006Ab，并将溶液在室温下孵育5小时。在适当的时间点(时间0-5小时)将2μl的每种样品移液到Whatman硝酸纤维素膜上进行斑点印迹，并且用抗体A11进行探测。
如图35A-B中所见，rhGal-3诱导C3的寡聚化。
为了测定寡聚化的C3是否结合hGal3，还使用Elisa测试了Gal3与寡聚化的C3的结合。在ELISA之前，通过多天的搅拌来聚集人C3，按照制造商的说明，使用EZ Link Sulfo-NHS-LC-生物素(ThermoFisher Scientific，A39257进行生物素化，并且用Zeba旋转脱盐柱(ThermoFisher Scientific，89882)进行脱盐。
为了开始ELISA，通过将半乳凝素-3蛋白(TrueBinding，QCB210019)(TrueBinding，QCB200377)(Biolegend，599806)在分开体积的PBS中稀释至4μg/ml的浓度来制备包被溶液。通过沿96孔ELISA板(Thermo Scientific，44-2401-21)的顶行每孔添加80μl(每种蛋白质4个孔)，将包被溶液应用到板上，然后在PBS中向下两倍系列稀释。在4℃O/N下孵育板后，用300μl PBST洗涤板三次，然后进行封闭步骤，其中将150μl的2％BSA的PBST添加到每孔中，并在室温下轻轻振荡孵育1小时。然后将现有的封闭溶液从板上丢弃。用于结合的C3溶液通过将生物素化的聚集的C3在2％BSA的PBST中稀释至4μg/ml的浓度来制备，然后通过逐列每孔添加60μl进行三列(对于每种半乳凝素-3一列)应用到板上，然后在2％BSA的PBST中纵向向右两倍系列稀释。将板在室温下轻轻振荡孵育1小时，并且然后用300μl PBST洗涤三次。其后，将亲和素-HRP(Biolegend，405103)在2％BSA的PBST中稀释至1∶2000，然后将25μl添加到所有孔中。将板在室温下轻轻振荡孵育1小时，然后用300μl PBST洗涤三次。为了使板显色，将50μl的ABTS(Life Technologies，00-2024)底物添加到每孔中，孵育直至达到足够的信号，然后以每孔25μl的1N HCl终止。在酶标仪中在405nm的吸光度处读取板。使用GraphPad Prism 8.0软件(GraphPad Software Inc)对数据进行绘图。
图84描绘了检查hGal3与聚集的C3结合的ELISA测定的结果。如图84中所见，即使在Aβ40或hGal3浓度递减的情况下，hGal3也表明出与C3的中度结合。
还使用ELISA来测定针对半乳凝素-3：：聚集的补体C3的各种抗体的IC50。在ELISA之前，通过48小时的搅拌来聚集补体C3(MyBioSource)，按照制造商的说明，使用EZ LinkSulfo-NHS-LC-生物素(ThermoFisher Scientific，A39257)进行生物素化，并且用Zeba旋转脱盐柱(ThermoFisher Scientific，89882)进行脱盐。
将人半乳凝素-3(Gal3)蛋白(TrueBinding，QCB210019)在PBS中稀释至4μg/ml的浓度，并通过向每孔应用35μl来包被96孔ELISA板。在4℃O/N下孵育板后，用300μl PBST洗涤板三次。然后用150μl的2％BSA的PBST在室温下轻轻振荡将板封闭1小时。此后，弃去2％BSA的PBST，并且将30μl的在2％BSA的PBST中的TB001(TrueBinding，QC190118)，TB006(TrueBinding，QC200208)，MOPC21(TrueBinding，QC200153)(从30μg/ml开始3倍系列稀释)添加到孔中，然后立即添加30μl的在2％BSA的PBST中稀释至4μg/ml的生物素化的聚集的补体C3。将板在室温下轻轻振荡孵育1小时，并且然后用300μl PBST洗涤三次。此后，将亲和素HRP(Biolegend，405103)在2％BSA的PBST中稀释(1∶2000稀释)，并将25μl添加到孔中。将板在室温下轻轻振荡孵育1小时，并且用300μl PBST洗涤三次。将50μl的ABTS(LifeTechnologies，00-2024)添加到每孔中进行显色，然后使用酶标仪在405nm的吸光度处读取板。IC50值使用GraphPad Prism 8.0软件(GraphPad Software Inc.)按照制造商的说明生成。
图85描绘了测定抗hGal3抗体针对hGal3：C3的IC50的ELISA测定的结果。如图85中所见，抗hGal3抗体展示出一系列IC50。
实施例50：Gal3促进补体蛋白C9的聚集：
补体蛋白C9的寡聚化可导致先天免疫系统破坏。为了测试抗Gal3抗体是否可用于抑制先天免疫系统破坏，首先确定Gal3促进C3聚集。
为了测定寡聚化的C9是否结合hGal3，使用斑点印迹测试了Gal3与寡聚化的C3的结合。将1mg的冻干C9肽重悬于90μl的100mM NaOH中并孵育10分钟。然后通过添加100mM磷酸钠缓冲液(pH 7.4)将溶液稀释至终浓度0.1mg/ml。然后将合成的C9和肽与rhGal-3蛋白混合，并在室温下孵育1小时。1小时后，添加不同浓度的hTB001和hTB006Ab，并将溶液在室温下孵育5小时。在适当的时间点(时间0-5小时)将2μl的每种样品移液到Whatman硝酸纤维素膜上进行斑点印迹，并且用抗体A11进行探测。
如图35B中所见，rhGal-3诱导C9的寡聚化。
为了测定寡聚化的C9是否结合hGal3，还使用Elisa测试了Gal3与寡聚化的C9的结合。在ELISA之前，通过多天的搅拌来聚集人C9，按照制造商的说明，使用EZ Link Sulfo-NHS-LC-生物素(ThermoFisher Scientific，A39257)进行生物素化，并且用Zeba旋转脱盐柱(ThermoFisher Scientific，89882)进行脱盐。
为了开始ELISA，通过将半乳凝素-3蛋白(TrueBinding，QCB210019)(TrueBinding，QCB200377)(Biolegend，599806)在分开体积的PBS中稀释至4μg/ml的浓度来制备包被溶液。通过沿96孔ELISA板(Thermo Scientific，44-2401-21)的顶行每孔添加80μl(每种蛋白质4个孔)，将包被溶液应用到板上，然后在PBS中向下两倍系列稀释。在4℃O/N下孵育板后，用300μl PBST洗涤板三次，然后进行封闭步骤，其中将150μl的2％BSA的PBST添加到每孔中，并在室温下轻轻振荡孵育1小时。然后将现有的封闭溶液从板上丢弃。用于结合的C9溶液通过将生物素化的聚集的C9在2％BSA的PBST中稀释至4μg/ml的浓度来制备，然后通过逐列每孔添加60μl进行三列(对于每种半乳凝素-3一列)应用到板上，然后在2％BSA的PBST中纵向向右两倍系列稀释。将板在室温下轻轻振荡孵育1小时，并且然后用300μl PBST洗涤三次。其后，将亲和素-HRP(Biolegend，405103)在2％BSA的PBST中稀释至1∶2000，然后将25μl添加到所有孔中。将板在室温下轻轻振荡孵育1小时，然后用300μl PBST洗涤三次。为了使板显色，将50μl的ABTS(Life Technologies，00-2024)底物添加到每孔中，孵育直至达到足够的信号，然后以每孔25μl的1N HCl终止。在酶标仪中在405nm的吸光度处读取板。使用GraphPad Prism 8.0软件(GraphPad Software Inc)对数据进行绘图。
图86描绘了检查hGal3与聚集的C9结合的ELISA测定的结果。如图86中所见，hGal3表明与C9的弱结合。
图87描绘了测定抗hGal3抗体针对hGal3：C9的IC50的ELISA测定的结果。
如图87中所见，抗hGal3抗体展示出一系列IC50。
实施例51：Gal3促进hTGFβR2的聚集：
使用ELISA来评估各种抗hGal3抗体针对hGal3：：hTGFβR2的阻断效力。在ELISA之前，通过48小时的搅拌来聚集hTGFβR2，按照制造商的说明，使用EZ Link Sulfo-NHS-LC-生物素(ThermoFisher Scientific，A39257)进行生物素化，并且用Zeba旋转脱盐柱(ThermoFisher Scientific，89882)进行脱盐。
在ELISA之前，通过多天的搅拌来聚集hTGFβR2，按照制造商的说明，使用EZ LinkSulfo-NHS-LC-生物素(ThermoFisher Scientific，A39257)进行生物素化，并且用Zeba旋转脱盐柱(ThermoFisher Scientific，89882)进行脱盐。
将人半乳凝素-3(Gal3)蛋白(TrueBinding，QCB200377)在PBS中稀释至4μg/ml的浓度，并通过向每孔应用35μl来包被96孔ELISA板。在4℃O/N下孵育板后，用300μl PBST洗涤板三次。然后用150μl的2％BSA的PBST在室温下轻轻振荡将板封闭1小时。此后，弃去2％BSA的PBST，并且将30μl的在2％BSA的PBST中的TB001(TrueBinding，QC190118)、TB006(TrueBinding，QC200208)、几种20H5(TrueBinding，various QC#)或Synagis hIgG4同种型(TrueBinding，QC190234)(从10μg/ml开始3倍稀释)添加到孔中，然后立即添加30μl的在2％BSA的PBST中的1μg/ml的生物素化的hTGFβR2。将板在室温下轻轻振荡孵育1小时，并且然后用300μl PBST洗涤三次。此后，将亲和素HRP(Biolegend，405103)在2％BSA的PBST中稀释(1∶2000稀释)，并将25μl添加到孔中。将板在室温下轻轻振荡孵育1小时，并且用300μlPBST洗涤三次。将50μl的ABTS(Life Technologies，00-2024)添加到每孔中进行显色，然后使用酶标仪在405nm的吸光度处读取板。使用GraphPad Prism 8.0软件(GraphPadSoftware Inc)对数据进行绘图。
图92描绘了通过Elisa测量的阻断效力测定的结果。
图93是描绘QC200137IMTAB0172 14H10.2C9-hIgG4(S228P)、IMTAB0111F798-9C.13H12.2F8-hIgG4(S228P)、QC200172IMTAB0196846.1H12-hIgG4(S228P)、TB006(QC200208)、hIgG4synagis(QC200234)(阴性对照)的阻断效力的表格。
如图92-93中所见，QC200137IMTAB0172 14H10.2C9-hIgG4(S228P)、IMTAB0111F798-9C.13H12.2F8-hIgG4(S228P)、QC200172IMTAB0196846.1H12-hIgG4(S228P)、TB006(QC200208)各自能够以大于90％效力阻断hGal3：：hTGFbR2。
实施例52：小分子Gal-3抑制剂TD139和TB006对Aβ42寡聚体降解的比较效果：
测试了TD139和TB006促进Aβ寡聚体的降解的相对能力。
图44A-B描绘了通过斑点印迹检测的，通过在室温下孵育并且用寡聚体A116E10降解抗体来探测的TB139和TB006对Aβ42寡聚体的比较降解。图44A描绘了通过斑点印迹检测的，通过在室温下孵育并且用寡聚体A11降解抗体探测的TB139和TB006对Aβ42寡聚体的比较降解。图44B描绘了通过斑点印迹检测的，通过在室温下孵育并且用6E10降解抗体探测的TB139和TB006对Aβ42寡聚体的比较降解。
将1mg的冻干Aβ42肽(r-肽)重悬于90μl的100mM NaOH中并孵育10分钟。然后通过添加100mM磷酸钠缓冲液(pH 7.4)将溶液稀释至终浓度0.1mg/ml。将合成的Aβ42肽与100ug的rhGal-3蛋白混合，并在室温下孵育1小时。rhGal-3诱导寡聚化。1小时后，添加不同浓度的TD139(来自Galecto Inc.的小分子)和hTB006Ab(来自Truebinding Inc.的半乳凝素-3抗体)。在室温下将溶液孵育24小时。将2μl的每种样品移至Whatman硝酸纤维素膜上，用于以抗体A11进行斑点印迹探测。为了确认Aβ42，还用抗体6E10探测膜。与各自的二抗孵育1小时后，使用Azure图像显色剂显色图像。
总之，TB006降解了毒性Aβ42寡聚体，而TD139不能降解这些毒性寡聚体。
实施例53：抗Gal3阻断抗体：
测试了抗Gal3阻断抗体以测定与TB006阻断抗体结合后hGal3的表位。氢/氘交换(HDX)(Trajan，紧凑型)质谱(MS)(ThermoFisher，Q-Exactive)(HDX-MS)用于测定抗体和抗原之间的结合位点。蛋白质相互作用减少了其结合位置处的氘吸收，并且因此导致结合和未结合样品之间的质量偏移。可使用质谱仪检测质量偏移。在常规HDX-MS分析中，按照一组优化参数对结合和未结合样品进行分析。使用热图展示残基水平的氘吸收差异(结合-未结合)。在蛋白质序列中，具有负质量偏移的残基指示这可能是结合位点，并且梯度颜色或灰度梯度通常用于显示蛋白质序列中不同残基上的结合相互作用的强度。HDX-MS数据使用PMI Byos或HDExaminer进行处理。
图66A-k描绘了显示抗Gal3阻断抗体对各种Gal3残基的亲和力的热图。图66A是列出抗Gal3阻断抗体的一些示例性实施方式的表格。图66B-66K描绘显示抗Gal3阻断抗体的一些实施方式对Gal3表位的亲和力的热图。
通过将干净的玻璃插入物放入玻璃小瓶中，并且然后使用夹子用新的铝盖密封玻璃小瓶，来制备干净的反应小瓶。玻璃小瓶无需清洁即可重复使用。玻璃插入物在彻底清洁后可重复使用。然后将蛋白酶柱安装在HDX系统的柱室中。当不使用时，蛋白酶柱应储存在4℃下。然后检查氮气供应。HDX运行可消耗达至100psi氮气。HDX样品出口管连接到MS离子源，并且然后配置MS。制备空白缓冲液。1X PBS(0.5mL 10x PBS加入4.5mL milli-Q水中)在干净的HDX缓冲液瓶中稀释。然后将小瓶贴上标签并储存在HDX板1的位置H1R1中。自制备之日起有效期为3个月。制备交换缓冲液。将0.5mL 10xPBS稀释到干净HDX缓冲液小瓶中的4.5mL 99.8％氧化氘中。将小瓶贴上标签并储存在HDX板1的位置H1R2中。为了制备淬灭缓冲液，将1mL 8M盐酸胍和0.04mL 99％甲酸稀释到干净HDX缓冲液小瓶中的3.96mL milli-Q水中。自制备之日起有效期为3个月。制备具有0.8％甲酸淬灭缓冲液的1.6M盐酸胍，并将其储存在HDX板2的位置H2R1中。自制备之日起有效期为3个月。用于不含二硫键的蛋白质(诸如人半乳凝素-3)的淬灭缓冲液。制备蛋白酶柱洗涤缓冲液。为了制备蛋白酶柱洗涤缓冲液，将0.563mL 8M盐酸胍和0.04mL99％甲酸稀释到干净HDX缓冲液小瓶中的4.397mLmilli-Q水中。小瓶储存在HDX板1的位置H1R3中。自制备之日起有效期为3个月。LC相A(0.1％甲酸的milli-Q水)通过在1L LC瓶中混合1mL 99％甲酸和999mL milli-Q水来制备。自制备之日起有效期为3个月。LC相B(0.1％甲酸的CAN)通过在1L LC瓶中混合1mL 99％甲酸和999mL ACN来制备。自制备之日起有效期为3个月。LC相C(0.1％甲酸的milli-Q水)通过在1L LC瓶中混合1mL 99％甲酸和999mL milli-Q水来制备。自制备之日起有效期为3个月。LC密封洗涤缓冲液(10％甲醇)通过在1L LC瓶中混合100mL甲醇和900mL milli-Q水来制备。自制备之日起有效期为3个月。HDX注入器洗涤液1(0.1％甲酸的milli-Q水)通过在1LLC瓶中混合1mL 99％甲酸和999mL milli-Q水来制备。自制备之日起有效期为3个月。HDX注入器洗涤液2(0.1％甲酸的CAN)通过在1L LC瓶中混合1mL 99％甲酸和999mL ACN来制备。自制备之日起有效期为3个月。
然后制备新鲜样品用于HDX-MS分析，未结合和结合的样品分别储存在HDX板2样品位置1和2中。将结合的样品在室温下孵育1小时，然后将其放入HDX板中。在结合的样品中，目标分子与其结合对的摩尔比为1∶5。自制备之日起有效期为1周。
为了确定hGal-3的结合位点，制备了1x PBS缓冲液中的0.5mg/mL未结合的hGal-3和1x PBS缓冲液中包含0.5mg/mL hGal-3和7.5mg/mL抗体的结合样品。
LC参数由以下组成：柱：Hypersil Gold柱，50x1mm，1.9um柱，Thermo Part#25002-051030；上样泵压力上限：250bar；NC泵压力上限：620bar。
MS参数列于表2中。
表2.
HDX参数列于表3中。
表3.
运行样品并处理数据。在数据处理中，hGal3的氘摄取被标准化为具有在N端(氨基酸1-氨基酸112)中的上限10。具有氘摄取＞5(最强结合的一半)的氨基酸被认为是表位。
图66描绘了显示抗Gal3阻断抗体对各种Gal3残基的亲和力的热图。图66A是描绘抗Gal3阻断抗体的一些实施方式的表格。图66B-66K描绘显示一些抗Gal3阻断抗体对Gal3表位的亲和力的热图。HDX结果在G列至IV列中显示为热图。热图上方的第2行和第3行显示了hGal3的氨基酸位置和序列。克隆#0(第4行)显示对照TB006的HDX结果。#1-12(第5-16行)显示了可阻断TB006＞90％的12种抗体的数据。
在热图中，黑色区域指示hGal3与抗体的结合相互作用。灰度越深，相对结合相互作用越强。表位概要显示在E列中。hGal3 C-末端(氨基酸113-氨基酸250)上的结合相互作用(热图中的深色区域)不被视为表位，因为它们与聚糖而不是抗体的CDR结合。
表1列出了用于TB006、TB101和2D10Ab结合的作图分析的不同Gal3肽(SEQ IDNo.：1619-1660)。
图60描绘了通过微阵列对TB006Ab与Gal 3肽(SEQ ID No.1619-1630)结合的突变分析。
图61描绘了通过微阵列对TB101 Ab与Gal 3肽(SEQ IDNo.1619-1630)结合的突变分析。
图62描绘了通过微阵列对2D10Ab与Gal 3肽(SEQ ID No.1619-1623、1631-1634、1641-1644和1651-1654)结合的突变分析。
图63描绘了通过微阵列对TB006、TB101、2D10 Ab与Gal3肽(SEQ ID No.1619-1660)结合的突变分析。
图64是显示表位作图分析的一些实施方式的比较的说明性实施方式。
图65是显示表位作图分析的一些实施方式的比较的说明性实施方式。链A代表18个氨基酸肽上的氨基酸编号，链B代表TB006 FAb重链上的氨基酸编号，以及链L代表轻链。
从图60-66可以清楚地看出，与不存在抗Gal3阻断抗体的抗Gal3结合相比，各种抗Gal3阻断抗体阻断抗Gal3抗体的结合至少80％。
实施例54：竞争结合测定：
评价抗Gal3阻断抗体阻断Gal3与hTB001、hTB006、Aβ42、Aβ40、Aβ42α突触核蛋白和hTau结合的能力。为了鉴定具有阻断Gal3和Aβ42相互作用能力的Gal3靶向抗体，将人半乳凝素-3蛋白(TrueBinding，QCB200375)在PBS中从4μg/ml的浓度稀释2倍，并通过每孔添加80μl包被96孔ELISA。将板在4℃下孵育过夜后，用300μl PBST洗涤板三次，然后用每孔150μl的2％BSA的PBST进行封闭步骤，并在室温(RT)下轻轻振荡孵育1小时。然后将现有的封闭溶液从板上丢弃。结合溶液通过将Aβ42从在2％BSA的PBST缓冲液中的4μg/ml稀释2倍至4μg/ml的浓度来制备。然后，通过向每种半乳凝素-3逐列每孔添加60μl，将Aβ42稀释液应用到板，然后在2％BSA的PBST中纵向两倍系列稀释。将板在室温下轻轻振荡孵育1小时，然后用300μl PBST洗涤三次。其后，将HRP标记的抗FLAG抗体在2％BSA的PBST中稀释至1∶2000，并将25μl添加到所有孔中。将板在室温下轻轻振荡孵育40分钟，然后用300μl PBST洗涤三次。为了使板显色，将50μl的ABTS底物添加到每孔中，并孵育直至获得足够高的信号。在酶标仪中在405nm的吸光度处读取板。使用GraphPad Prism 8.0软件(GraphPad Software Inc)对数据进行绘图。
图67是描绘33种不同的抗Gal3阻断抗体阻断Gal3与hTB001、hTB006、Aβ42、Aβ40、Aβ42α突触核蛋白和hTau结合的能力的表格。
图68是描绘通过Elisa测量的33种不同的抗Gal3阻断抗体阻断Gal3与hTB006结合的能力的表格。也就是说，这些抗体与hTB006竞争结合至Gal3。
如图67-68中所见，许多抗Gal3阻断抗体能够与一种或多种抗Gal3抗体竞争结合至Gal3，hTB001、hTB006、Aβ42、Aβ40、Aβ42α突触核蛋白和hTau以至少80％的效率结合至Gal3。
实施例55：蛋白质晶体样品制备和数据收集：
为了测定与本文公开的抗Gal3抗体一样竞争一个或多个表位的抗Gal3阻断抗体是否适合与本公开的方法一起使用，获得与TB006复合的hGal3的晶体结构以测定抗体和抗原之间的结合位点。XRD用于解析蛋白质3D结构并测定抗体与抗原之间的结合位点。如果蛋白质分子堆叠有序且衍射分辨率足够高则抗体与抗原之间存在稳定的相互作用时可识别电子密度图。两个疏水性氨基酸之间的距离在5埃以内可鉴定为疏水性相互作用。两个亲水性氨基酸之间的距离在3.5埃以内可鉴定为氢键或盐键相互作用。带电氨基酸与芳香族氨基酸的芳香环距离在6埃以内，可鉴定为阳离子-π相互作用。两个芳香族氨基酸之间的距离在4.4埃以内可鉴定为π-π相互作用。XRD数据使用软件组CCP4、Phenix和COOT进行处理。使用软件Pymol或Chemira演示结构结果。最先进的光学显微镜(ThermoFisher，Q-Exactive)、液氮钢瓶(Trajan，compact)、液氮储存器(Waters，M-Class Acquity)、微型工具组(HAMPTON RESEARCH)、迷你离心机(Sigma-Aldrich)、晶体打捞工具(包括CrystalCapSystems、CryoLoops、Cryo Tools、Dewars(HAMPTON RESEARCH))、晶体临时储存圆盘和带冷却系统的运输杜瓦(HAMPTON RESEARCH)、MilliQ Water(或同等物)。
将待结晶的蛋白质在PBS溶液中浓缩至30至50mg/mL。将抗体(Ab)与抗原(Ag)按一定摩尔比混合，形成Ab-Ag复合晶体。为了筛选晶体，将适当体积的溶液从原始结晶条件筛选试剂盒中加入到结晶板孔中。然后将蛋白质溶液和结晶溶液以1∶1的比例混合。然后进行结晶条件优化。pH值和沉淀剂或盐浓度在一定范围内进行优化。根据需要筛选添加剂。然后通过从液滴中捞取晶体来收获晶体。将晶体从生长滴中捞出，浸泡在冷冻保护剂溶液中，其中相应地对于不同的时间梯度增加冷冻保护剂诸如甘油。一旦从最后一滴冷冻保护剂溶液中捞取晶体，立即将装有晶体的环浸入液氮中。然后将晶体安装到圆盘或盖子中。晶体在SSRL或ALS中进行衍射。当晶体能够衍射至3埃时收集数据。从SSRL或ALS传输数据到本地服务器，并使用CCP4软件组进行处理以测定有用的分辨率。Phoenix用于测定相位并构建模型。COOT用于手动调整模型。然后使用Pymol或Chemira分析结构。
实施例56：TB006和Gal3的相互作用：
为了测定与本文公开的抗Gal3抗体一样竞争一个或多个表位的抗Gal3阻断抗体是否适合与本公开的方法一起使用，将与来自氨基酸58至75(58’APPGAYPGAPGAYPGAPA’75)的hGal3肽复合的TB006Fab的结构测定为将来自镍树脂的纯化TB006 Fab应用于PBS缓冲液(137mM NaCl、27mM KCl、10mM Na2HPO4和1.8mM KH2PO4)中的Superdex200。
图94显示了TB006 Fab的分离。
收集来自具有相对高纯度(图94b)的主峰(图94a)的级分，并在假设消光系数为1时将其浓缩至50mg/mL。用PBS缓冲液溶解由ThermoFisher合成的肽，并添加额外的100mM三(羟甲基)氨基甲烷pH 8.0至终浓度9mg/mL。将50mg/mL TB006 Fab和9mg/mL hGal3肽以1∶1比例(v/v)混合以筛选结晶条件。将晶体应用于同步辐射源，在40mM KH2PO4、16％(w/v)聚乙烯甘油8000和20％甘油的条件下结晶。衍射数据在斯坦福同步辐射光源(SSRL)收集，并使用CCP4和Phenix软件组进行处理。使用PDB代码3pp4的坐标文件作为模型，以使用PhenixPhaser MR搜索相位解。使用Phenix autobuild构建结构模型，以及使用COOT进行调整，并使用Phenix refine进行细化。使用Pymol或Chemira阐释结构。
图95描绘了TB006 Fab和hGal-3肽的晶体结构分析。图95a-d描绘了与hGal3复合的TB006 Fab的总体结构的侧视图(图95a和图95b)和俯视图(图95c和图95d)。TB006 Fab的轻链和重链分别如图95a和图95b中描绘的。图95f和图95g描绘了TB006 Fab和hGal3肽的相互作用界面。图95f描绘了TB006 Fab轻链和hGal3肽之间详细的氨基酸相互作用。图95g描绘了TB006 Fab重链和hGal3肽之间详细的氨基酸相互作用。黑色破折号表示距离为的氢键。未突出显示的相互作用是疏水相互作用。浅粉色和浅蓝色分别指示轻链和重链。洋红色和海洋色分别指示来自轻链和重链的CDR。hGal3显示为绿带。
图96描绘了TB006 Fab与hGal-3肽之间相互作用的概要。虚线指示CDR与hGal-3肽之间的相互作用。突出显示的残基不在CDR框架内。
空腔中的hGal3肽系由来自轻链和重链的CDR形成(Fig.94a至94f)。肽中的11个氨基酸参与与TB006 Fab的相互作用。其中，P59至A62以及G65至A69的8个氨基酸与轻链有相互作用(Fig.94f)。而P60、Y63至A69的7个氨基酸与重链有相互作用(Fig.94g)。大多数相互作用是疏水相互作用。详细的交互总结在图96中，简单来说，来自CDR-L1的H51和Y57，来自CDR-L2的R75，来自CDR-L3的M116、L117、E118、F119、P120和L121，来自CDR-H1中的N31和Y32，来自CDR-H3的A99和G101对于Gal3肽结合至关重要。此外，CDR外的一些残基，诸如轻链Y59、L71、Y74和重链Y33、H35、W50，也显示与Gal3肽有相互作用。
实施例57：神经源性丝氨酸蛋白酶抑制剂-FENIB聚集：
为了测试抗Gal3抗体是否可用于抑制蛋白病，首先使用斑点印迹确定Gal3参与神经源性丝氨酸蛋白酶抑制剂聚集。将三组蛋白质，各自为100 ug/ml的单独的人神经源性丝氨酸蛋白酶抑制剂和Gal3或组合(神经源性丝氨酸蛋白酶抑制剂+Gal3)在pH 7.4的磷酸盐缓冲液中在室温下持续搅拌0-24小时时间点孵育。使用斑点印迹分析来测定寡聚化。在适当的时间点(时间0-24小时)将2μl的各个样品移液到Whatman硝酸纤维素膜上，以用构象寡聚体特异性抗体A11进行斑点印迹探测。与各自的二抗孵育1小时后，使用Azure图像显色剂显色图像。
图43A-B描绘了在室温(RT)下与用抗体探测的100μg的Gal-3孵育的神经源性丝氨酸蛋白酶抑制剂的聚集。图43A描绘了通过斑点印迹检测的神经源性丝氨酸蛋白酶抑制剂的5小时时间进程聚集。图43B描绘了使用荧光显微镜检测的含和不含Gal-3的神经源性丝氨酸蛋白酶抑制剂聚集的可视化。
从图43A和43B清楚地看出，Gal3促进神经源性丝氨酸蛋白酶抑制剂的聚集。
实施例58：晶体蛋白聚集：
为了测试抗Gal3抗体是否可用于抑制蛋白病，首先使用斑点印迹确定Gal3参与晶体蛋白聚集。将三组蛋白质，各自为100 ug/ml的单独的人晶体蛋白和Gal3或组合(晶体蛋白+Gal3)在pH 7.4的磷酸盐缓冲液中在室温下持续搅拌0-24小时时间点孵育。使用斑点印迹分析来测定寡聚化。在适当的时间点(时间0-24小时)将2μl的每种样品移液到Whatman硝酸纤维素膜上，以用构象寡聚体特异性抗体A11进行斑点印迹探测。与各自的二抗孵育1小时后，使用Azure图像显色剂显色图像。
图45A-B描绘了与用A11抗体探测的100μg的Gal-3孵育的晶体蛋白AA的时间进程聚集。图45A描绘了使用荧光显微镜检测的含和不含Gal-3的晶体蛋白AA聚集的可视化。图45B描绘了通过斑点印迹检测的，与用A11抗体探测的100μg的Gal-3孵育的晶体蛋白AA的时间进程聚集。
图46A-B描绘了与用A11抗体探测的100μg的Gal-3孵育的晶体蛋白AA的时间进程聚集。图46A描绘了使用荧光显微镜检测的含和不含Gal-3的晶体蛋白AB聚集的可视化。图46B描绘了通过斑点印迹检测的，与用A11抗体探测的100μg的Gal-3孵育的晶体蛋白AB的时间进程聚集。
从图45-46清楚地看出，Gal3促进晶体蛋白的聚集。
实施例59：L6-GLUT4myc成肌细胞中的GLUT4-myc易位：
为了测试抗Gal3抗体是否可用于抑制蛋白病，首先确定胰岛素-Gal3聚集体减少大鼠L6 GLUT4-myc成肌细胞中的葡萄糖转运蛋白-4易位。在开始测定之前，制备Gal3-胰岛素聚集体。将L6 GLUT4-myc成肌细胞用胰蛋白酶处理并添加到96孔板的MEMα生长培养基中。将板在37C下孵育直至达到90-95％汇合。L6 GLUT4-myc成肌细胞在处理前进行血清饥饿。总共测试了3种处理条件：1)胰岛素-Gal 3聚合提，2)对照缓冲液，以及3)单独的胰岛素。胰岛素-Gal 3聚集体在30ng/mL、100ng/mL和300ng/mL下进行测试。细胞在37℃下用指定的处理进行处理1小时。重复测试胰岛素刺激。孵育结束时，用胰岛素处理指定孔20分钟，用冰冷的DPBS快速洗涤两次，并且用多聚甲醛固定。固定后，用PBS洗涤细胞三次，并且用山羊血清封闭。然后将细胞与抗myc多克隆抗体孵育。孵育后，通过抽吸除去一抗并且用1XDPBS洗涤。然后将细胞与山羊抗兔抗体二抗孵育。孵育后，通过抽吸除去二抗并且用PBS洗涤细胞。然后将细胞与TMB孵育。添加1N HCL以终止反应并在450nm处读取板的。
表4描绘了在每种处理条件下一式三份进行的光密度测量。表5描绘了胰岛素刺激后GLUT4易位的量化。表6描绘了胰岛素刺激后GLUT4易位百分比的量化。图97是阐释表6中所示的百分比刺激结果的条形图。
从表4-6和图97清楚地看出，与单独的胰岛素处理相比，Gal3+胰岛素聚集体导致GLUT-4易位减少。
表4
表5
SrNo. 处理 刺激1 刺激2 刺激3
1 聚集体300 0.729616307 0.993674889 1.0874764
2 聚集体300+胰岛素
3 聚集体30 1.383495146 1.014577259 1.379076087
4 聚集体30+胰岛素
7 聚集体100 0.975625 1.330990864 1.192889561
8 聚集体100+胰岛素
9 对照 1.509404389 1.443313953 1.249183007
10 对照+胰岛素
表6
SrNo. 处理 ％刺激1 ％刺激2 ％刺激3
1 聚集体300 52.07825175 70.9261163 77.62144185
2 聚集体300+胰岛素
3 聚集体30 98.75054573 72.41807705 98.43512398
4 聚集体30+胰岛素
7 聚集体100 69.63775874 95.0029168 85.14557896
8 聚集体100+胰岛素
9 对照 107.7376437 103.0202679 89.16366927
10 对照+胰岛素
在至少一些前述实施方式中，在一个实施方式中使用的一个或多个元素可在另一实施方式中互换使用，除非这种替换是技术上不可行的。本领域技术人员将理解，在不脱离所要求保护的主题的范围的情况下，可对上述方法和结构进行各种其他的省略、添加和修饰。所有这些修饰和变化都旨在落入由所附的权利要求限定的主题的范围内。
关于本文中基本上任何复数和/或单数术语的使用，本领域技术人员可以作为适合于上下文和/或应用从复数转换为单数和/或从单数转换为复数。为了清楚起见，本文可以明确地陈述各种单数/复数排列。
本领域技术人员将理解，一般而言，本文使用的术语，尤其是所附权利要求书(例如，所附权利要求书的主体)中的，旨在作为“开放”术语(例如，术语“包括”(“incLuding”)应解释为“包括但不限于”，术语“具有”应解释为“至少具有”，术语“包括”(“incLudes”)应解释为“包括但不限于”等)。本领域技术人员将进一步理解，如果打算引入特定数量的权利要求阐述，则将在权利要求中明确地阐述这种意图，并且在没有这种阐述的情况下不存在这种意图。例如，为了帮助理解，以下所附权利要求可能含有使用介绍性短语“至少一个/一种”和“一个或多个/一种或多种”来介绍权利要求的叙述。然而，这种短语的使用不应被解释为暗示通过不定冠词“一个/一种”(“a”)或“一个/一种”(“an”)引入权利要求阐述将含有这种引入的权利要求阐述的任何特定权利要求限制为仅含有一个这种阐述的实施方式，即使当相同权利要求包括介绍性短语“一个或多个/一种或多种”或“至少一个/一种”和不定冠词，比如“一个/一种”(“a”)或“一个/一种”(“an”)(例如，“一个/一种”(“a”)或“一个/一种”(“an”)应解释为“至少一个/一种”或“一个或多个/一种或多种”)；这同样适用于使用定冠词来介绍权利要求。另外，即使明确阐述了引入的权利要求引用的具体编号，本领域技术人员将认识到，这种阐述应该被解释为意味着至少表示引用的编号(例如，“两次引用”的裸引用，而不是其他修饰语，意味着至少两次引用，或两次或更两次引用)。此外，在那些类似于“A、B和C等中的至少一个/一种”的约定的情况下被使用，一般而言，这种构造旨在在本领域技术人员将理解约定的意义上(例如，“具有A、B和C中的至少一个/一种系统”将包括但不限于以下系统：单独的A、单独的B、单独的C、A和B一起、A和C一起、B和C一起和/或A、B和C一起等)。在那些类似于“A、B或C等的至少一个/一种”的约定的情况下被使用，一般而言，这种构造旨在在本领域技术人员将理解约定的意义上(例如，“具有A、B或C中的至少一个/一种的系统”将包括但不限于以下系统：单独的A、单独的B、单独的C、A和B一起、A和C一起、B和C一起和/或A、B和C一起等)。本领域技术人员将进一步理解，实际上任何呈现两个或多个可替选的术语的分离词和/或短语，无论是在说明书、权利要求或附图中，都应被理解为考虑包括术语之一的可能性，其中一个术语，或两个术语。例如，短语“A或B”将被理解为包括“A”或“B”或“A和B”的可能性。
另外，在根据马库什组描述本公开的特征或方面的情况下，本领域技术人员将认识到，因此也根据马库什组的任何个体成员或成员子组来描述本公开。
如本领域技术人员将理解的，对于任何和所有目的，比如根据提供书面描述，本文公开的所有范围还涵盖任何和所有可能的子范围及其子范围的组合。任何列出的范围都可以很容易地被识别为足够描述并且能够将相同的范围分解为至少相等的一半、三分之一、四分之一、五分之一、十分之一等。作为非限制性实施例，本文讨论的每个范围都可以很容易地分解分为下三分之一、中三分之一和上三分之一等。如本领域技术人员还将理解的所有语言，比如“高达”、“至少”、“大于”、“小于”等和如包括所列举的数字，并且指可以随后分解为子范围的范围，如以上所讨论。最后，如本领域技术人员将理解的，范围包括每个单独的成员。因此，例如，具有1-3个主题的组是指具有1、2或3个主题的组。类似地，具有1-5个主题的组是指具有1、2、3、4或5个主题等的组。
虽然本文已经公开了各种方面和实施方式，但其他方面和实施方式对于本领域技术人员来说将是显而易见的。本文公开的各种方面和实施方式是为了阐述的目的而不旨在限制性的，真实范围和精神是由以下权利要求指示的。
电子格式的序列表随本文提交。序列表中提供的一些序列可由于是其他序列(包括天然存在的序列)的非天然存在的片段或部分而被指定为人工序列。序列表中提供的一些序列可由于是来自不同来源(诸如人源化抗体序列)的序列的组合而被指定为人工序列。
本文引用的所有参考文献，包括但不限于已公开和未公开的申请、专利和参考文献，均通过引用以它们的整体并入本文，并且因此成为本说明书的一部分。在通过引用并入的出版物和专利或专利申请与说明书中含有的公开不一致的范围内，说明书旨在取代和/或优先于任何这种不一致的材料。

Claims (50)

1.一种抑制Gal3-介导的蛋白质的淀粉样蛋白聚集的方法，所述方法包括：
使蛋白质与抗Gal3抗体或其结合片段接触，
其中抗Gal3抗体或其结合片段与Gal3的结合抑制Gal3-介导的蛋白质的淀粉样蛋白聚集。
2.一种抑制Gal3-介导的蛋白质的寡聚化的方法，所述方法包括：
使蛋白质与抗Gal3抗体或其结合片段接触，
其中抗Gal3抗体或其结合片段与Gal3的结合抑制Gal3-介导的蛋白质的寡聚化。
3.一种治疗有需要的受试者的淀粉样蛋白病的方法，所述方法包括：
向受试者施用抗Gal3抗体或其结合片段，
其中抗Gal3抗体或其结合片段与受试者中Gal3的结合抑制受试者中Gal3-介导的蛋白质的淀粉样蛋白聚集，从而治疗受试者的淀粉样蛋白病。
4.一种治疗有需要的受试者的蛋白病的方法，所述方法包括：
向受试者施用抗Gal3抗体或其结合片段，
其中抗Gal3抗体或其结合片段与受试者中Gal3的结合抑制受试者中Gal3-介导的蛋白质的寡聚化，从而治疗受试者的淀粉样蛋白病。
5.一种促进蛋白质的淀粉样蛋白聚集和/或寡聚化的方法，所述方法包括使蛋白质与Gal3接触，其中Gal3促进蛋白质的淀粉样蛋白聚集和/或寡聚化。
6.一种抑制Gal3-介导的淀粉样蛋白β40和/或淀粉样蛋白β42的淀粉样蛋白聚集的方法，所述方法包括：
使蛋白质与抗Gal3抗体或其结合片段接触，
其中抗Gal3抗体或其结合片段与Gal3的结合抑制Gal3-介导的淀粉样蛋白β40和/或淀粉样蛋白β42的淀粉样蛋白聚集。
7.一种治疗有需要的受试者的阿尔茨海默病的方法，所述方法包括：
向受试者施用抗Gal3抗体或其结合片段，
其中抗Gal3抗体或其结合片段与受试者中Gal3的结合抑制受试者中Gal3-介导的淀粉样蛋白β40和/或淀粉样蛋白β42的淀粉样蛋白聚集，从而治疗受试者的阿尔茨海默病。
8.一种治疗有需要的受试者的CAA的方法，所述方法包括：
向受试者施用抗Gal3抗体或其结合片段，
其中抗Gal3抗体或其结合片段与受试者中Gal3的结合抑制受试者中Gal3-介导的淀粉样蛋白β40和/或淀粉样蛋白β42的聚集，从而治疗受试者的CAA。
9.一种抑制Gal3-介导的磷酸tau的淀粉样蛋白聚集的方法，所述方法包括：
使蛋白质与抗Gal3抗体或其结合片段接触，
其中抗Gal3抗体或其结合片段与Gal3的结合抑制Gal3-介导的磷酸tau的寡聚化。
10.一种治疗有需要的受试者的阿尔茨海默病的方法，所述方法包括：
向受试者施用抗Gal3抗体或其结合片段，
其中抗Gal3抗体或其结合片段与受试者中Gal3的结合抑制受试者中Gal3-介导的磷酸tau的寡聚化，从而治疗受试者的阿尔茨海默病。
11.一种治疗有需要的受试者的tau蛋白病的方法，所述方法包括：
向受试者施用抗Gal3抗体或其结合片段，
其中抗Gal3抗体或其结合片段与受试者中Gal3的结合抑制受试者中Gal3-介导的磷酸tau的寡聚化，从而治疗受试者的tau蛋白病。
12.一种抑制Gal3-介导的α突触核蛋白的寡聚化的方法，所述方法包括：
使蛋白质与抗Gal3抗体或其结合片段接触，
其中抗Gal3抗体或其结合片段与Gal3的结合抑制Gal3-介导的α突触核蛋白的寡聚化。
13.一种治疗有需要的受试者的路易体病的方法，所述方法包括：
向受试者施用抗Gal3抗体或其结合片段，
其中抗Gal3抗体或其结合片段与受试者中Gal3的结合抑制受试者中Gal3-介导的α突触核蛋白的寡聚化，从而治疗受试者的路易体病。
14.一种治疗有需要的受试者的多系统萎缩的方法，所述方法包括：
向受试者施用抗Gal3抗体或其结合片段，
其中抗Gal3抗体或其结合片段与受试者中Gal3的结合抑制受试者中Gal3-介导的α突触核蛋白的寡聚化，从而治疗受试者的多系统萎缩。
15.一种抑制Gal3-介导的APOE-4的寡聚化的方法，所述方法包括：
使蛋白质与抗Gal3抗体或其结合片段接触，
其中抗Gal3抗体或其结合片段与Gal3的结合抑制Gal3-介导的APOE-4的寡聚化。
16.一种抑制Gal3-介导的胆固醇的寡聚化的方法，所述方法包括：
使蛋白质与抗Gal3抗体或其结合片段接触，
其中抗Gal3抗体或其结合片段与Gal3的结合抑制Gal3-介导的胆固醇或/和胆甾醇基的寡聚化。
17.一种治疗有需要的受试者的心血管疾病的方法，所述方法包括：
向受试者施用抗Gal3抗体或其结合片段，
其中抗Gal3抗体或其结合片段与受试者中Gal3的结合抑制受试者中Gal3-介导的胆固醇或/和胆甾醇基的寡聚化，从而治疗受试者的心血管疾病。
18.一种抑制Gal3-介导的胰岛素或/和IAPP的寡聚化的方法，所述方法包括：
使蛋白质与抗Gal3抗体或其结合片段接触，
其中抗Gal3抗体或其结合片段与Gal3的结合抑制Gal3-介导的胰岛素或/和IAPP的寡聚化。
19.一种治疗有需要的受试者的糖尿病的方法，所述方法包括：
向受试者施用抗Gal3抗体或其结合片段，
其中抗Gal3抗体或其结合片段与受试者中Gal3的结合抑制受试者中Gal3-介导的胰岛素的寡聚化，从而治疗受试者的糖尿病。
20.一种治疗有需要的受试者的CAA的方法，所述方法包括：
向受试者施用抗Gal3抗体或其结合片段，
其中抗Gal3抗体或其结合片段与受试者中Gal3的结合抑制受试者中Gal3-介导的半胱氨酸蛋白酶抑制剂-c的寡聚化，从而治疗受试者的CAA。
21.一种治疗有需要的受试者的肾脏疾病的方法，所述方法包括：
向受试者施用抗Gal3抗体或其结合片段，
其中抗Gal3抗体或其结合片段与受试者中Gal3的结合抑制受试者中Gal3-介导的半胱氨酸蛋白酶抑制剂-c的寡聚化，从而治疗受试者的肾脏疾病。
22.一种抑制Gal3-介导的甲状腺素运载蛋白的寡聚化的方法，所述方法包括：
使蛋白质与抗Gal3抗体或其结合片段接触，
其中抗Gal3抗体或其结合片段与Gal3的结合抑制Gal3-介导的甲状腺素运载蛋白的寡聚化。
23.一种治疗有需要的受试者的甲状腺素运载蛋白淀粉样变性的方法，所述方法包括：
向受试者施用抗Gal3抗体或其结合片段，
其中抗Gal3抗体或其结合片段与受试者中Gal3的结合抑制受试者中Gal3-介导的甲状腺素运载蛋白的寡聚化，从而治疗受试者的甲状腺素运载蛋白淀粉样变性。
24.一种治疗有需要的受试者的心脏和/或肾脏疾病的方法，所述方法包括：
向受试者施用抗Gal3抗体或其结合片段，
其中抗Gal3抗体或其结合片段与受试者中Gal3的结合抑制受试者中Gal3-介导的甲状腺素运载蛋白的寡聚化，从而治疗受试者的心脏和/或肾脏疾病。
25.一种抑制Gal3-介导的纤维蛋白的淀粉样蛋白聚集的方法，所述方法包括：
使蛋白质与抗Gal3抗体或其结合片段接触，
其中抗Gal3抗体或其结合片段与Gal3的结合抑制Gal3-介导的纤维蛋白的寡聚化。
26.一种治疗有需要的受试者的中风的方法，所述方法包括：
向受试者施用抗Gal3抗体或其结合片段，
其中抗Gal3抗体或其结合片段与受试者中Gal3的结合抑制受试者中Gal3-介导的纤维蛋白的寡聚化，从而治疗受试者的中风。
27.一种治疗有需要的受试者的CAA的方法，所述方法包括：
向受试者施用抗Gal3抗体或其结合片段，
其中抗Gal3抗体或其结合片段与受试者中Gal3的结合抑制受试者中Gal3-介导的纤维蛋白的寡聚化，从而治疗受试者的CAA。
28.一种抑制Gal3-介导的晶体蛋白的寡聚化的方法，所述方法包括：
使蛋白质与抗Gal3抗体或其结合片段接触，
其中抗Gal3抗体或其结合片段与Gal3的结合抑制Gal3-介导的晶体蛋白的寡聚化。
29.一种治疗有需要的受试者的受试眼睛的晶状体损伤和/或视力模糊的方法，所述方法包括：
向受试者施用抗Gal3抗体或其结合片段，
其中抗Gal3抗体或其结合片段与受试者中Gal3的结合抑制受试者中Gal3-介导的晶体蛋白的寡聚化，从而治疗受试者的受试眼睛的晶状体损伤和/或视力模糊。
30.一种抑制Gal3-介导的心房钠尿肽(ANP)或/和B-型钠尿肽(BNP)的寡聚化的方法，所述方法包括：
使蛋白质与抗Gal3抗体或其结合片段接触，
其中抗Gal3抗体或其结合片段与Gal3的结合抑制Gal3-介导的ANP或/和B-型钠尿肽(BNP)的寡聚化。
31.一种治疗有需要的受试者的充血性心力衰竭(CHF)的方法，所述方法包括：
向受试者施用抗Gal3抗体或其结合片段，
其中抗Gal3抗体或其结合片段与受试者中Gal3的结合抑制受试者中Gal3-介导的ANP或/和B-型钠尿肽(BNP)的寡聚化，从而治疗受试者的CHF。
32.一种治疗有需要的受试者的心脏淀粉样变性的方法，所述方法包括：
向受试者施用抗Gal3抗体或其结合片段，
其中抗Gal3抗体或其结合片段与受试者中Gal3的结合抑制受试者中Gal3-介导的ANP或/和B-型钠尿肽(BNP)的寡聚化，从而治疗受试者的心脏淀粉样变性。
33.一种抑制Gal3-介导的TAR DNA结合蛋白43(TDP-43)的淀粉样蛋白聚集的方法，所述方法包括：
使蛋白质与抗Gal3抗体或其结合片段接触，
其中抗Gal3抗体或其结合片段与Gal3的结合抑制Gal3-介导的TDP-43的寡聚化。
34.一种治疗有需要的受试者的肌萎缩侧索硬化症(ALS)的方法，所述方法包括：
向受试者施用抗Gal3抗体或其结合片段，
其中抗Gal3抗体或其结合片段与受试者中Gal3的结合抑制受试者中Gal3-介导的TDP-43的寡聚化，从而治疗受试者的ALS。
35.一种治疗有需要的受试者的额颞叶变性(FTLD)的方法，所述方法包括：
向受试者施用抗Gal3抗体或其结合片段，
其中抗Gal3抗体或其结合片段与受试者中Gal3的结合抑制受试者中Gal3-介导的TDP-43的寡聚化，从而治疗受试者的FTLD。
36.一种组合物，其包含蛋白质和Gal3，其中Gal3促进蛋白质的淀粉样蛋白聚集和/或寡聚化。
37.根据前述权利要求中任一项所述的方法或组合物，其中相对于未与抗Gal3抗体或其结合片段接触的细胞，在与抗Gal3抗体或其结合片段接触后，Gal3-介导的蛋白质的淀粉样蛋白聚集或寡聚化被抑制至少5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％或99％。
38.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中蛋白质包括α-突触核蛋白、tau蛋白、TDP-43、甲状腺素运载蛋白、尿调节素、胰岛淀粉样多肽(IAPP)、血清淀粉样蛋白A(SAA)、p53、载脂蛋白E(APOE)、APOE-4、朊病毒蛋白、纤维蛋白、或神经丝轻链(NFL)、CRP、SUMO、轻链、血小板源生长因子受体(PDGFR)、黑色素瘤细胞黏附分子(MCAM)、补体蛋白C3和/或C9、溶菌酶、胰岛素、天然血红蛋白(Hb)、糖化血红蛋白(HbAIC)、苯丙氨酸(Phe)、谷氨酰胺(Gln)、胆甾醇基(共酯基)、胆固醇、神经源性丝氨酸蛋白酶抑制剂、晶体蛋白AA和/或晶体蛋白AB、半胱氨酸蛋白酶抑制剂-C或肌生长抑制素前肽和/或其任意组合。
39.根据前述权利要求中任一项所述的方法，通过活检、血或尿测试、超声心动图或焦磷酸锝(99mTc-PYP)闪烁扫描来完成鉴定受试者是否需要蛋白病和/或淀粉样蛋白病的治疗和/或检测淀粉样蛋白病的改善。
40.根据前述权利要求中任一项所述的方法或组合物，其中相对于施用步骤之前的淀粉样蛋白病，在施用步骤之后，蛋白病和/或淀粉样蛋白病被减少至少5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％或99％。
41.根据前述权利要求中任一项所述的方法或组合物，其中蛋白质包括α-突触核蛋白、tau蛋白、TDP-43、甲状腺素运载蛋白、尿调节素、胰岛淀粉样多肽(IAPP)、血清淀粉样蛋白A(SAA)、p53、载脂蛋白E(APOE)、APOE-4、朊病毒蛋白、纤维蛋白、或神经丝轻链(NFL)、CRP、SUMO、轻链、血小板源生长因子受体(PDGFR)、黑色素瘤细胞黏附分子(MCAM)、补体蛋白C3和/或C9、溶菌酶、胰岛素、天然血红蛋白(Hb)、糖化血红蛋白(HbAIC)、苯丙氨酸(Phe)、谷氨酰胺(Gln)、胆甾醇基(共酯基)、胆固醇、神经源性丝氨酸蛋白酶抑制剂、晶体蛋白AA和/或晶体蛋白AB、半胱氨酸蛋白酶抑制剂-C或肌生长抑制素前肽和/或其任意组合。
42.根据前述权利要求中任一项所述的方法或组合物，其中蛋白病和/或淀粉样蛋白病包括共核蛋白病、帕金森氏病、路易体痴呆症、多系统萎缩、tau蛋白病、阿尔茨海默病、进行性核上性麻痹、皮质基底节变性、皮克氏病、TDP-43蛋白病、肌萎缩侧索硬化症、额颞叶变性、TTR淀粉样变性(ATTR)、心脏淀粉样变性、尿调节素-相关肾脏疾病、IAPP淀粉样变性、SAA淀粉样变性、类风湿性关节炎、炎性关节炎、脊柱关节病、幼年特发性关节炎、强直性脊柱炎、银屑病关节炎、炎性肠病、溃疡性结肠炎、克罗恩病、乳糜泻、血管炎、结节病、家族性地中海热、肿瘤坏死因子受体-相关周期性综合征(TRAPS)、癌症、由淀粉样蛋白聚集促进的衰老或其任意组合。
43.根据前述权利要求中任一项所述的方法或组合物，其中抗Gal3抗体或其结合片段包括(1)重链可变区，其包括VH-CDR1、VH-CDR2和VH-CDR3；以及(2)轻链可变区，其包括VL-CDR1、VL-CDR2和VL-CDR3，其中
VH-CDR1包含与SEQ ID NO:27-70的氨基酸序列中的任一个具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列；
VH-CDR2包含与SEQ ID NO:71-111、801、951、952的氨基酸序列中的任一个具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列；
VH-CDR3包含与SEQ ID NO:112-169、802、953、954的氨基酸序列中的任一个具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列；
VL-CDR1包含与SEQ ID NO:170-220的氨基酸序列中的任一个具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列；
VL-CDR2包含与SEQ ID NO:211-247的氨基酸序列中的任一个具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列；和
VL-CDR3包含与SEQ ID NO:248-296的氨基酸序列中的任一个具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列；或者其中抗体或其结合片段包括与任意一种或多种前述抗Gal3抗体或其结合片段竞争结合的阻断抗体，其中阻断抗体在竞争上胜过抗Gal3抗体或其结合片段至少80％有效。
44.根据前述权利要求中任一项所述的方法或组合物，其中抗Gal3抗体或其结合片段包括如图13中阐释的VH-CDR1、VH-CDR2、VH-CDR3、VL-CDR1、VL-CDR2和VL-CDR3的组合；或者其中抗体或其结合片段包括与任意一种或多种前述抗Gal3抗体或其结合片段竞争结合的阻断抗体，其中阻断抗体在竞争上胜过抗Gal3抗体或其结合片段至少80％有效。
45.根据前述权利要求中任一项所述的方法或组合物，其中重链可变区包含与选自SEQID NO:297-373、803、806-820、940、955-968、1067-1109、1415-1439的序列具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的序列；或者其中抗体或其结合片段包括与任意一种或多种前述抗Gal3抗体或其结合片段竞争结合的阻断抗体，其中阻断抗体在竞争上胜过抗Gal3抗体或其结合片段至少80％有效。
46.根据前述权利要求中任一项所述的方法或组合物，其中轻链可变区包含与选自SEQID NO:374-447、821-835、941-943、969-982、1110-1152、1440-1464的序列具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的序列；或者其中抗体或其结合片段包括与任意一种或多种前述抗Gal3抗体或其结合片段竞争结合的阻断抗体，其中阻断抗体在竞争上胜过抗Gal3抗体或其结合片段至少80％有效。
47.根据前述权利要求中任一项所述的方法或组合物，其中抗Gal3抗体或其结合片段包括重链，其中所述重链包含与选自SEQ ID NO:448-494、804、836-850、983-996、1153-1195、1411、1465-1489的序列具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的序列；或者其中抗体或其结合片段包括与任意一种或多种前述抗Gal3抗体或其结合片段竞争结合的阻断抗体，其中阻断抗体在竞争上胜过抗Gal3抗体或其结合片段至少80％有效。
48.根据前述权利要求中任一项所述的方法或组合物，其中抗Gal3抗体或其结合片段包括轻链，其中所述轻链包含与选自SEQ ID NO:495-538、805、851-865、997-1010、1196-1238、1412、1490-1514的序列具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的序列；或者其中抗体或其结合片段包括与任意一种或多种前述抗Gal3抗体或其结合片段竞争结合的阻断抗体，其中阻断抗体在竞争上胜过抗Gal3抗体或其结合片段至少80％有效。
49.根据前述权利要求中任一项所述的方法或组合物，其中抗Gal3抗体或其结合片段选自由以下的至少一种组成的组：TB001、TB006、12G5.D7、13A12.2E5、14H10.2C9、15F10.2D6、19B5.2E6、20D11.2C6、20H5.A3、23H9.2E4、2D10.2B2、3B11.2G2、7D8.2D8、mIMT001、4A11.2B5、4A11.H1L1、4A11.H4L2、4G2.2G6、6B3.2D3、6H6.2D6、9H2.2H10、13G4.2F8、13H12.2F8、15G7.2A7、19D9.2E5、23B10.2B12、24D12.2H9、F846C.1B2、F846C.1F5、F846C.1H12、F846C.1H5、F846C.2H3、F846TC.14A2、F846TC.14E4、F846TC.16B5、F846TC.7F10、F847C.10B9、F847C.11B1、F847C.12F12、F847C.26F5、F847C.4B10、F849C.8D10、F849C.8H3、846.2B11、846.4D5、846T.1H2、847.14H4、846.2D4、846.2F11、846T.10B1、846T.2E3、846T.4C9、846T.4E11、846T.4F5、846T.8D1、847.10C9、847.11D6、847.15D12、847.15F9、847.15H11、847.20H7、847.21B11、847.27B9、847.28D1、847.2B8、847.3B3、849.1D2、849.2D7、849.2F12、849.4B2、849.4F12、849.4F2、849.5C2、849.8D12、F847C.21H6、849.5H1、847.23F11、847.16D10、847.13E2-mH0mL1、847.13E2-mH0mL2、847.12C4、847.4D3、2D10-VH0-VL0、2D10-hVH4-HVL1、2D10-hVH4-HVL2、2D10-hVH4-HVL3、2D10-hVH4-HVL4、2D10-hVH3-HVL1、2D10-hVH3-HVL2、2D10-hVH3-HVL3、2D10-hVH3-HVL4、20H5.A3-VH3VL1、20H5.A3-VH3VL3、20H5.A3-VH4VL1、20H5.A3-VH5VL1、20H5.A3-VH5VL3、20H5.A3-VH6VL1、20H5.A3-VH6VL3、2D10-VH0-VL0、2D10-hVH4-HVL1、2D10-hVH4-HVL2、2D10-hVH4-HVL3、2D10-hVH4-HVL4、2D10-hVH3-HVL1、2D10-hVH3-HVL2、2D10-hVH3-HVL3、2D10-hVH3-HVL4、21H6-H0L0、21H6-H1L1、21H6-H1L2、21H6-H1L3、21H6-H1L4、21H6-H2L1、21H6-H2L2、21H6-H2L3、21H6-H2L4、21H6-H3L1、21H6-H3L2、21H6-H3L3、21H6-H3L4、21H6-H4L1、21H6-H4L2、21H6-H4L3、21H6-H4L4、21H6-H5L1、21H6-H5L2、21H6-H5L3、21H6-H5L4、21H6-H6L1、21H6-H6L2、21H6-H6L3、21H6-H6L4或其结合片段；或者其中抗体或其结合片段包括与任意一种或多种前述抗Gal3抗体或其结合片段竞争结合的阻断抗体，其中阻断抗体在竞争上胜过抗Gal3抗体或其结合片段至少80％有效。
50.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中80％被如下确定：
K)将Ab在PBS中从浓度4μg/ml稀释2倍，并通过每孔添加80μl包被96孔ELISA板；
L)将板在4℃下过夜孵育后，用300μlPBST洗涤板3次，然后用每孔150μl的2％BSA的PBST进行封闭步骤，并在室温(RT)下轻轻振荡孵育1小时；
M)结合溶液通过在2％BSA的PBST缓冲液中从4μg/ml 2倍稀释至4μg/ml的浓度来制备；
N)然后通过向每种半乳凝素-3逐列每孔添加60μl，将稀释液应用到板，然后在2％BSA的PBST中纵向两倍系列稀释；
O)将板在室温下轻轻振荡孵育1小时，然后用300μl PBST洗涤三次；
P)其后，将HRP-标记的抗FLAG抗体在2％BSA的PBST中稀释至1:2000，并将25μl添加到所有孔中；
Q)将板在室温下轻轻振荡孵育40分钟，然后用300μl PBST洗涤三次；
R)为了使板显色，将50μl的ABTS底物添加到每孔中并孵育，直至获得足够高的信号；
S)在酶标仪中在405nm的吸光度处读取；以及任选地，
T)可使用GraphPad Prism 8.0软件(GraphPad Software Inc)对数据进行绘图。
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