CN117881680A

CN117881680A - 作为kras抑制剂的三环化合物

Info

Publication number: CN117881680A
Application number: CN202280058054.6A
Authority: CN
Inventors: 甘霈; J·杨; 李勇; 赵乐; 何春红; C·M·劳; 王晓钊; 姚文庆
Original assignee: Incyte Corp
Current assignee: Incyte Corp
Priority date: 2021-07-07
Filing date: 2022-07-06
Publication date: 2024-04-12

Abstract

公开了式(I)的化合物、使用所述化合物抑制KRAS活性的方法以及包含此类化合物的药物组合物。所述化合物可用于治疗、预防或改善与KRAS活性相关的疾病或病症，例如癌症。

Description

作为KRAS抑制剂的三环化合物

相关申请

本申请涉及2021年7月7日提出申请的美国临时申请号63/219,274；2021年12月22日提出申请的美国临时申请号63/292,774；和2022年2月16日提出申请的美国临时申请号63/310,811，所述申请的内容以引用的方式整体并入。

技术领域

本公开提供了化合物以及其组合物和使用方法。所述化合物调节KRAS活性并且可用于治疗包括癌症在内的各种疾病。

背景技术

Ras蛋白是被生长因子和各种细胞外刺激物活化的小GTP酶家族的一部分。Ras家族调控负责细胞生长、迁移、存活和分化的细胞内信号传导路径。细胞膜处RAS蛋白的活化引起关键效应物的结合以及细胞内包括RAF和PI3K激酶路径在内的细胞内信号传导路径级联的活化。RAS的体细胞突变引起不受控制的细胞生长和恶性转化，而RAS蛋白的活化在正常细胞中受到密切调控(Simanshu,D.等人Cell 170.1(2017):17-33)。

Ras家族包含三个成员：KRAS、NRAS和HRAS。RAS突变型癌症占人类癌症的约25％。KRAS是最常见突变的同功型，占所有RAS突变的85％，而NRAS和HRAS分别是占所有Ras突变型癌症12％和3％的突变(Simanshu,D.等人Cell 170.1(2017):17-33)。KRAS突变在以下前三种致死率最高的癌症类型中普遍存在：胰腺癌(97％)、结直肠癌(44％)和肺癌(30％)(Cox,A.D.等人Nat Rev Drug Discov(2014)13:828-51)。大部分的RAS突变出现在氨基酸残基12、13和61处。特定突变的频率在RAS基因同功型间不同，并且G12和Q61突变分别在KRAS和NRAS中占主导，而G12、G13和Q61突变在HRAS中最常见。此外，RAS同功型的突变谱随癌症类型而不同。例如，KRAS G12D在胰腺癌(51％)中占主导，其次是结直肠腺癌(45％)和肺癌(17％)，而KRAS G12 V突变与胰腺癌(30％)相关，其次是结直肠腺癌(27％)和肺腺癌(23％)(Cox,A.D.等人Nat Rev Drug Discov(2014)13:828-51)。相比之下，KRAS G12C突变在非小细胞肺癌(NSCLC)占主导，包含11-16％的肺腺癌，以及2-5％的胰腺癌和结直肠腺癌(Cox,A.D.等人Nat.Rev.Drug Discov.(2014)13:828-51)。对数百个癌症细胞系进行的基因组研究展示，带有KRAS突变的癌细胞在很大程度上依赖于KRAS功能进行细胞生长和存活(McDonald,R.等人Cell 170(2017):577-592)。突变型KRAS作为致癌驱动因子的作用又得到了深入体内实验证据的支持，实验显示突变型KRAS是动物模型中早期肿瘤发生和维持所需的(Cox,A.D.等人Nat Rev Drug Discov(2014)13:828-51)。

总体而言，这些发现表明，KRAS突变在人类癌症中起到关键作用；因此，靶向突变型KRAS的抑制剂的开发可用于在临床上治疗以KRAS突变为特征的疾病。

发明内容

本公开尤其提供一种式I的化合物：

或其药学上可接受的盐，其中组成变量如本文所定义。

本公开还提供了一种药物组合物，该药物组合物包含本公开的化合物或其药学上可接受的盐，以及至少一种药学上可接受的载体或赋形剂。

本公开还提供了抑制KRAS活性的方法，所述方法包括向个体施用本公开的化合物，或其药学上可接受的盐。本公开也提供了本文所描述的化合物在制造用于疗法中的药剂中的用途。本公开也提供了用于疗法中的本文所描述的化合物。

本公开还提供了治疗患者的疾病或病症的方法，所述方法包括向所述患者施用治疗有效量的本公开的化合物或其药学上可接受的盐。

具体实施方式

化合物

在一方面，本文提供一种具有式(I)的化合物：

或其药学上可接受的盐，其中：

Y是N或CH；

R¹选自Cl、CH₃、CH₂F、CHF₂和CF₃；

Cy¹选自

R²选自F和Cl；

R³选自

并且

Cy²选自

条件是所述式I化合物不是

在式I或其药学上可接受的盐的一个实施方案中，

Y是N或CH；

R¹选自Cl、CH₃、CH₂F、CHF₂和CF₃；

Cy¹选自

R²选自F和Cl；

R³选自

并且

Cy²选自

条件是所述式I化合物不是

在又另一实施方案中，所述式I的化合物是式II的化合物：

或其药学上可接受的盐，其中：

R¹选自Cl和CH₃；

Cy¹选自

R³选自

并且

Cy²选自

在式I或其药学上可接受的盐的一个实施方案中，

Y是N或CH；

R¹选自Cl、CH₃、CH₂F、CHF₂和CF₃；

Cy¹选自

R²选自F和Cl；

R³选自

并且

Cy²选自

在一个实施方案中，Y是CH。在一个实施方案中，Y是N。

在一个实施方案中，Cy¹选自Cy¹-c、Cy¹-l、Cy¹-m、Cy¹-n、Cy¹-o、Cy¹-p、Cy¹-q、Cy¹-r、Cy¹-s和Cy¹-t。在一个实施方案中，Cy¹选自Cy¹-l、Cy¹-m、Cy¹-n、Cy¹-o、Cy¹-p、Cy¹-q、Cy¹-r、Cy¹-s和Cy¹-t。在一个实施方案中，Cy¹选自Cy¹-c、Cy¹-m、Cy¹-n、Cy¹-o、Cy¹-p、Cy¹-q、Cy¹-r、Cy¹-s和Cy¹-t。在一个实施方案中，Cy¹选自Cy¹-f、Cy¹-g、Cy¹-h、Cy¹-i、Cy¹-j、Cy¹-k和Cy¹-l。在一个实施方案中，Cy¹选自Cy¹-a、Cy¹-m、Cy¹-n、Cy¹-o、Cy¹-p和Cy¹-q。在一个实施方案中，Cy¹选自Cy¹-c、Cy¹-d、Cy¹-e、Cy¹-r、Cy¹-s和Cy¹-t。

在一个实施方案中，Cy¹选自Cy¹-a、Cy¹-c和Cy¹-r。在一个实施方案中，Cy¹选自Cy¹-c和Cy¹-r。在一个实施方案中，Cy¹选自Cy¹-s和Cy¹-t。

在一个实施方案中，Cy¹是Cy¹-l。在一个实施方案中，Cy¹是Cy¹-m。在一个实施方案中，Cy¹是Cy¹-n。在一个实施方案中，Cy¹是Cy¹-o。在一个实施方案中，Cy¹是Cy¹-p。在一个实施方案中，Cy¹是Cy¹-q。在一个实施方案中，Cy¹是Cy¹-r。在一个实施方案中，Cy¹是Cy¹-s。在一个实施方案中，Cy¹是Cy¹-t。

在一个实施方案中，Cy¹选自Cy¹-a、Cy¹-b、Cy¹-c、Cy¹-d、Cy¹-e、Cy¹-f、Cy¹-g、Cy¹-i和Cy¹-j。在一个实施方案中，Cy¹选自Cy¹-a、Cy¹-b、Cy¹-c、Cy¹-d和Cy¹-e。在一个实施方案中，Cy¹选自Cy¹-f、Cy¹-g、Cy¹-h、Cy¹-i、Cy¹-j和Cy¹-k。在一个实施方案中，Cy¹选自Cy¹-c、Cy¹-d和Cy¹-e。在一个实施方案中，Cy¹选自Cy¹-a、Cy¹-b和Cy¹-k。在一个实施方案中，Cy¹选自Cy¹-a和Cy¹-b。在一个实施方案中，Cy¹选自Cy¹-h和Cy¹-k。

在一个实施方案中，Cy¹是Cy¹-a。在一个实施方案中，Cy¹是Cy¹-b。在一个实施方案中，Cy¹是Cy¹-c。在一个实施方案中，Cy¹是Cy¹-d。在一个实施方案中，Cy¹是Cy¹-e。在一个实施方案中，Cy¹是Cy¹-f。在一个实施方案中，Cy¹是Cy¹-g。在一个实施方案中，Cy¹是Cy¹-h。在一个实施方案中，Cy¹是Cy¹-i。在一个实施方案中，Cy¹是Cy¹-j。在一个实施方案中，Cy¹是Cy¹-k。

在一个实施方案中，R¹选自CH₃、CH₂F、CHF₂和CF₃。在一个实施方案中，R¹选自Cl、CH₃、CHF₂和CF₃。在一个实施方案中，R¹选自CH₂F、CHF₂和CF₃。在一个实施方案中，R¹选自Cl、CH₂F、CHF₂和CF₃。在一个实施方案中，R¹选自Cl和CH₃。在一个实施方案中，R¹选自Cl和CF₃。在一个实施方案中，R¹选自CH₃和CF₃。在一个实施方案中，R¹是Cl。在一个实施方案中，R¹是CH₂F。在一个实施方案中，R¹是CHF₂。在一个实施方案中，R¹是CH₃。在一个实施方案中，R¹是CF₃。

在一个实施方案中，R²是F。在一个实施方案中，R²是Cl。

在一个实施方案中，R³选自R³-a和R³-b。在一个实施方案中，R³选自R³-b和R³-c。在一个实施方案中，R³选自R³-a和R³-c。在一个实施方案中，R³是R³-a。在一个实施方案中，R³是R³-b。在一个实施方案中，R³是R³-c。

在一个实施方案中，R³选自R³-b、R³-c和R³-d。在一个实施方案中，R³选自R³-b和R³-d。在一个实施方案中，R³选自R³-c和R³-d。在一个实施方案中，R³选自R³-a和R³-d。在一个实施方案中，R³是R³-d。

在一个实施方案中，Cy²选自Cy²-b、Cy²-d、Cy²-e和Cy²-f。在一个实施方案中，Cy²选自Cy²-b和Cy²-d。在一个实施方案中，Cy²选自Cy²-c和Cy²-d。

在一个实施方案中，Cy²选自Cy²-a、Cy²-c和Cy²-d。在一个实施方案中，Cy²选自Cy²-a、Cy²-b和Cy²-d。在一个实施方案中，Cy²选自Cy²-a、Cy²-b和Cy²-c。在一个实施方案中，Cy²选自Cy²-d、Cy²-e和Cy²-f。在一个实施方案中，Cy²选自Cy²-a和Cy²-b。在一个实施方案中，Cy²选自Cy²-c和Cy²-f。在一个实施方案中，Cy²选自Cy²-e和Cy²-f。

在一个实施方案中，Cy²是Cy²-a。在一个实施方案中，Cy²是Cy²-b。在一个实施方案中，Cy²是Cy²-c。在一个实施方案中，Cy²是Cy²-d。在一个实施方案中，Cy²是Cy²-e。在一个实施方案中，Cy²是Cy²-f。

在另一实施方案中，所述式I化合物不是

在一个实施方案中，所述式I化合物不是

在另一实施方案中，本文各式的化合物是各式的化合物或其药学上可接受的盐。

在一个实施方案中，所述式I的化合物选自

2-((2S,4S)-4-(4-(3-(二甲基氨基)-3-甲基氮杂环丁烷-1-基)-6-氟-7-(5-氟喹啉-8-基)-8-(三氟甲基)-1H-[1,2,3]三唑并[4,5-c]喹啉-1-基)-1-((E)-4-氟丁-2-烯酰基)哌啶-2-基)乙腈；

2-((2S,4S)-4-(4-(3-(二甲基氨基)-3-甲基氮杂环丁烷-1-基)-6-氟-7-(2-甲氧基-3-甲基苯基)-8-(三氟甲基)-1H-[1,2,3]三唑并[4,5-c]喹啉-1-基)-1-((E)-4-氟丁-2-烯酰基)哌啶-2-基)乙腈；

2-((2S,4S)-4-(7-(3-氯-2-甲氧基苯基)-4-(3-(二甲基氨基)-3-甲基氮杂环丁烷-1-基)-6-氟-8-(三氟甲基)-1H-[1,2,3]三唑并[4,5-c]喹啉-1-基)-1-((E)-4-氟丁-2-烯酰基)哌啶-2-基)乙腈；

2-((2S,4S)-4-(6-氟-7-(5-氟喹啉-8-基)-4-((S)-1-((S)-1-甲基吡咯烷-2-基)乙氧基)-8-(三氟甲基)-1H-[1,2,3]三唑并[4,5-c]喹啉-1-基)-1-((E)-4-氟丁-2-烯酰基)哌啶-2-基)乙腈；

1-(4-(6-氟-7-(5-氟喹啉-8-基)-4-((S)-1-((S)-1-甲基吡咯烷-2-基)乙氧基)-8-(三氟甲基)-1H-[1,2,3]三唑并[4,5-c]喹啉-1-基)哌啶-1-基)丙-2-烯-1-酮；

2-((2S,4S)-4-(4-(3-(二甲基氨基)-3-甲基氮杂环丁烷-1-基)-7-(2,3-二甲基苯基)-6-氟-8-甲基-1H-[1,2,3]三唑并[4,5-c]喹啉-1-基)-1-((E)-4-甲氧基丁-2-烯酰基)哌啶-2-基)乙腈；

2-((2S,4S)-4-(6-氟-8-甲基-7-(1-甲基-1H-吲唑-6-基)-4-((S)-1-((S)-1-甲基吡咯烷-2-基)乙氧基)-1H-[1,2,3]三唑并[4,5-c]喹啉-1-基)-1-((E)-4-氟丁-2-烯酰基)哌啶-2-基)乙腈；

2-((2S,4S)-4-(6-氟-8-甲基-7-(6-甲基吡啶-3-基)-4-((S)-1-((S)-1-甲基吡咯烷-2-基)乙氧基)-1H-[1,2,3]三唑并[4,5-c]喹啉-1-基)-1-((E)-4-氟丁-2-烯酰基)哌啶-2-基)乙腈；

2-((2S,4S)-4-(6-氟-8-甲基-7-(1-甲基-1H-吲唑-3-基)-4-((S)-1-((S)-1-甲基吡咯烷-2-基)乙氧基)-1H-[1,2,3]三唑并[4,5-c]喹啉-1-基)-1-((E)-4-甲氧基丁-2-烯酰基)哌啶-2-基)乙腈；

2-((2S,4S)-4-(6-氟-7-(4-氟苯基)-8-甲基-4-((S)-1-((S)-1-甲基吡咯烷-2-基)乙氧基)-1H-[1,2,3]三唑并[4,5-c]喹啉-1-基)-1-((E)-4-甲氧基丁-2-烯酰基)哌啶-2-基)乙腈；

8-(1-(1-丙烯酰基哌啶-4-基)-6-氟-8-甲基-4-((S)-1-((S)-1-甲基吡咯烷-2-基)乙氧基)-1H-[1,2,3]三唑并[4,5-c]喹啉-7-基)-1-萘甲腈；

2-((2S,4S)-4-(7-(2-氯-3-甲基苯基)-4-(3-(二甲基氨基)-3-甲基氮杂环丁烷-1-基)-6-氟-8-甲基-1H-咪唑并[4,5-c]喹啉-1-基)-1-((E)-4-氟丁-2-烯酰基)哌啶-2-基)乙腈；

2-((2S,4S)-4-(7-(2-氯-3-甲基苯基)-6-氟-8-甲基-4-((S)-1-((S)-1-甲基吡咯烷-2-基)乙氧基)-1H-咪唑并[4,5-c]喹啉-1-基)-1-(2-氟丙烯酰基)哌啶-2-基)乙腈；

8-(1-((2R,4S)-1-丙烯酰基-2-甲基哌啶-4-基)-6-氟-8-甲基-4-((S)-1-((S)-1-甲基吡咯烷-2-基)乙氧基)-1H-[1,2,3]三唑并[4,5-c]喹啉-7-基)-1-萘甲腈；

2-((2S,4S)-4-(7-(5,6-二甲基-1H-吲唑-4-基)-4-(3-(乙基(甲基)氨基)氮杂环丁烷-1-基)-6-氟-8-甲基-1H-[1,2,3]三唑并[4,5-c]喹啉-1-基)-1-(2-氟丙烯酰基)哌啶-2-基)乙腈；

8-(6-氟-1-(1-((E)-4-氟丁-2-烯酰基)哌啶-4-基)-8-甲基-4-((S)-1-((S)-1-甲基吡咯烷-2-基)乙氧基)-1H-[1,2,3]三唑并[4,5-c]喹啉-7-基)-1-萘甲腈；

8-(1-((2S,4S)-2-(氰基甲基)-1-(2-氟丙烯酰基)哌啶-4-基)-4-(3-(二甲基氨基)-3-甲基氮杂环丁烷-1-基)-6-氟-8-甲基-1H-[1,2,3]三唑并[4,5-c]喹啉-7-基)-1-萘甲腈；

2-((2S,4S)-4-(6,8-二氯-4-(3-(二甲基氨基)-3-甲基氮杂环丁烷-1-基)-7-(5-氟喹啉-8-基)-1H-[1,2,3]三唑并[4,5-c]喹啉-1-基)-1-((E)-4-甲氧基丁-2-烯酰基)哌啶-2-基)乙腈；

2-((2S,4S)-4-(6,8-二氯-4-(3-(二甲基氨基)-3-甲基氮杂环丁烷-1-基)-7-(5-氟喹啉-8-基)-1H-[1,2,3]三唑并[4,5-c]喹啉-1-基)-1-((E)-4-氟丁-2-烯酰基)哌啶-2-基)乙腈；以及

2-((2S,4S)-4-(4-(3-(二甲基氨基)-3-甲基氮杂环丁烷-1-基)-6-氟-7-(5-氟喹啉-8-基)-8-(三氟甲基)-1H-[1,2,3]三唑并[4,5-c]喹啉-1-基)-1-((E)-4-甲氧基丁-2-烯酰基)哌啶-2-基)乙腈；

或其药学上可接受的盐。

在另一实施方案中，所述式I的化合物选自

或其药学上可接受的盐。

在另一实施方案中，所述式I的化合物选自：

2-((2S,4S)-4-(6-氟-7-(4-氟异喹啉-1-基)-8-甲基-4-((S)-1-((S)-1-甲基吡咯烷-2-基)乙氧基)-1H-[1,2,3]三唑并[4,5-c]喹啉-1-基)-1-((E)-4-甲氧基丁-2-烯酰基)哌啶-2-基)乙腈；

2-((2S,4S)-4-(6-氟-7-(4-氟异喹啉-1-基)-8-甲基-4-((S)-1-((S)-1-甲基吡咯烷-2-基)乙氧基)-1H-[1,2,3]三唑并[4,5-c]喹啉-1-基)-1-(2-氟丙烯酰基)哌啶-2-基)乙腈；

2-((2S,4S)-4-(6-氟-8-甲基-7-(3-甲基异喹啉-4-基)-4-((S)-1-((S)-1-甲基吡咯烷-2-基)乙氧基)-1H-[1,2,3]三唑并[4,5-c]喹啉-1-基)-1-(2-氟丙烯酰基)哌啶-2-基)乙腈；

2-((2S,4S)-4-(6-氟-8-甲基-7-(3-甲基异喹啉-4-基)-4-((S)-1-((S)-1-甲基吡咯烷-2-基)乙氧基)-1H-[1,2,3]三唑并[4,5-c]喹啉-1-基)-1-((E)-4-甲氧基丁-2-烯酰基)哌啶-2-基)乙腈；

2-((2S,4S)-4-(6-氟-7-(7-氟-2-甲基喹啉-8-基)-8-甲基-4-((S)-1-((S)-1-甲基吡咯烷-2-基)乙氧基)-1H-[1,2,3]三唑并[4,5-c]喹啉-1-基)-1-(2-氟丙烯酰基)哌啶-2-基)乙腈；

2-((2S,4S)-4-(6-氟-8-甲基-7-(1-甲基异喹啉-4-基)-4-((S)-1-((S)-1-甲基吡咯烷-2-基)乙氧基)-1H-[1,2,3]三唑并[4,5-c]喹啉-1-基)-1-((E)-4-甲氧基丁-2-烯酰基)哌啶-2-基)乙腈；

2-((2S,4S)-4-(6-氟-7-(7-氟喹啉-8-基)-8-甲基-4-((S)-1-((S)-1-甲基吡咯烷-2-基)乙氧基)-1H-[1,2,3]三唑并[4,5-c]喹啉-1-基)-1-(2-氟丙烯酰基)哌啶-2-基)乙腈；

2-(4-(1-((2R,4S)-1-丙烯酰基-2-甲基哌啶-4-基)-6-氟-8-甲基-4-((S)-1-((S)-1-甲基吡咯烷-2-基)乙氧基)-1H-[1,2,3]三唑并[4,5-c]喹啉-7-基)-1-甲基-1H-吲唑-3-基)乙腈；

2-((2S,4S)-4-(4-(3-(乙基(甲基)氨基)-3-甲基氮杂环丁烷-1-基)-6-氟-7-(6-氟-5-甲基-1H-吲唑-4-基)-8-甲基-1H-[1,2,3]三唑并[4,5-c]喹啉-1-基)-1-(2-氟丙烯酰基)哌啶-2-基)乙腈；

2-((2S,4S)-4-(7-(5,6-二甲基-1H-吲唑-4-基)-4-(3-(乙基(甲基)氨基)-3-甲基氮杂环丁烷-1-基)-6-氟-8-甲基-1H-[1,2,3]三唑并[4,5-c]喹啉-1-基)-1-(2-氟丙烯酰基)哌啶-2-基)乙腈；

2-(4-(1-((2R,4S)-1-丙烯酰基-2-甲基哌啶-4-基)-6-氟-8-甲基-4-((S)-1-((S)-1-甲基吡咯烷-2-基)乙氧基)-1H-[1,2,3]三唑并[4,5-c]喹啉-7-基)-1-甲基-1H-吲哚-3-基)乙腈；

2-(4-(1-(1-丙烯酰基哌啶-4-基)-6-氟-8-甲基-4-((S)-1-((S)-1-甲基吡咯烷-2-基)乙氧基)-1H-[1,2,3]三唑并[4,5-c]喹啉-7-基)-1-甲基-1H-吲哚-3-基)乙腈；

2-((2S,4S)-4-(8-氯-7-(5,6-二甲基-1H-吲唑-4-基)-4-(3-(乙基(甲基)氨基)-3-甲基氮杂环丁烷-1-基)-6-氟-1H-[1,2,3]三唑并[4,5-c]喹啉-1-基)-1-(2-氟丙烯酰基)哌啶-2-基)乙腈；

2-((2S,4S)-4-(6-氟-7-(2-氟-6-甲氧基苯基)-8-甲基-4-((S)-1-((S)-1-甲基吡咯烷-2-基)乙氧基)-1H-[1,2,3]三唑并[4,5-c]喹啉-1-基)-1-(2-氟丙烯酰基)哌啶-2-基)乙腈；以及

2-((2S,4S)-4-(8-氯-4-(3-(乙基(甲基)氨基)-3-甲基氮杂环丁烷-1-基)-6-氟-7-(6-氟-5-甲基-1H-吲唑-4-基)-1H-[1,2,3]三唑并[4,5-c]喹啉-1-基)-1-(2-氟丙烯酰基)哌啶-2-基)乙腈；

或其药学上可接受的盐。

在一个实施方案中，所述式I的化合物选自

或其药学上可接受的盐。

还应了解，为清楚起见而在独立实施方案的上下文中描述的本发明的某些特征也可按组合形式提供于单一实施方案中(而意图组合这些实施方案，就如同以多重独立形式书写一般)。相反，为简洁起见而在单一实施方案的上下文中描述的本发明的各个特征也可分开地或以任何适合子组合形式提供。因此，经审慎考虑，描述为式I的化合物的实施方案的特征可呈任何适合组合形式组合。

本文所描述的化合物可以是不对称的(例如具有一个或多个立体中心)。除非另外指示，否则包含所有立体异构体，例如对映异构体和非对映异构体。含有不对称取代的碳原子的本发明化合物可以呈光学活性形式或外消旋形式分离。有关如何由无光学活性的起始物质制备光学活性形式的方法是本领域中已知的，例如通过拆分外消旋混合物或通过立体选择性合成实现。烯烃、C＝N双键等的许多几何异构体也可存在于本文所描述的化合物中，并且所有此类稳定异构体都涵盖在本发明中。本发明化合物的顺式和反式几何异构体都有描述并且可分离为异构体混合物或独立的异构形式。

化合物的外消旋混合物的拆分可通过本领域中已知的多种方法中的任一种进行。一种方法包括使用手性拆分酸进行的分步重结晶，所述拆分酸是由光学活性的成盐有机酸。适用于分步重结晶方法的拆分剂是例如光学活性酸，例如酒石酸、二乙酰基酒石酸、二苯甲酰基酒石酸、杏仁酸、苹果酸、乳酸或各种光学活性樟脑磺酸如β-樟脑磺酸的D形式和L形式。适用于分步重结晶方法的其它拆分剂包括α-甲基苯甲胺、2-苯基甘氨醇、去甲肾上腺素、麻黄素、N-甲基麻黄素、环己基乙胺、1,2-二氨基环己烷等的立体异构纯形式(例如S和R形式，或非对映异构纯形式)。

外消旋混合物的拆分也可通过在填充有光学活性拆分剂(例如二硝基苯甲酰基苯基甘氨酸)的柱上洗脱来进行。适合洗脱溶剂组合物可由本领域技术人员决定。

在一些实施方案中，本发明化合物具有(R)-构型。在其它实施方案中，所述化合物具有(S)-构型。在具有多个手性中心的化合物中，除非另外指示，否则化合物中的每个手性中心可独立地为(R)或(S)的。

本发明化合物还包括互变异构形式。互变异构形式由单键与相邻双键交换以及质子的伴随迁移产生。互变异构形式包括质子转移互变异构体，所述互变异构体是具有相同经验式和总电荷的异构性质子化状态。示例性质子转移互变异构体包括酮-烯醇对、酰胺-亚胺酸对、内酰胺-内酰亚胺对、烯胺-亚胺对以及环状形式，其中质子可占据杂环系统的两个或更多个位置，例如1H-咪唑和3H-咪唑、1H-三唑、2H-三唑和4H-1,2,4-三唑、1H-异吲哚和2H-异吲哚以及1H-吡唑和2H-吡唑。互变异构形式可处于平衡或因适当取代而在空间上锁定于一种形式。

本发明化合物还可包括中间体或最终化合物中出现的原子的所有同位素。同位素包括具有相同原子数但质量数不同的原子。例如，氢的同位素包括氚和氘。本发明化合物的一个或多个组成原子可被所述原子的天然或非天然丰度的同位素置换或取代。在一些实施方案中，所述化合物包括至少一个氘原子。例如，本公开化合物中的一个或多个氢原子可被氘置换或取代。在一些实施方案中，所述化合物包括两个或更多个氘原子。在一些实施方案中，所述化合物包括1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11或12个氘原子。将同位素纳入有机化合物中的合成方法是本领域中已知的(Deuterium Labeling in Organic Chemistry,AlanF.Thomas(New York,N.Y.,Appleton-Century-Crofts,1971；The Renaissance of H/DExchange,Jens Atzrodt,Volker Derdau,Thorsten Fey和Jochen Zimmermann,Angew.Chem.Int.Ed.2007,7744-7765；The Organic Chemistry of Isotopic Labelling,James R.Hanson,Royal Society of Chemistry,2011)。同位素标记的化合物可用于各种研究中，例如NMR光谱法、代谢实验和/或测定。

用如氘之类较重同位素取代可因较高的代谢稳定性，例如延长的体内半衰期或降低的剂量需求而提供某些治疗益处，并因此在某些情况下可以是优选的。(A.Kerekes等人,J.Med.Chem.2011,54,201-210；R.Xu等人,J.Label Compd.Radiopharm.2015,58,308-312)。

如本文所使用，术语“化合物”意图包括所描绘结构的所有立体异构体、几何异构体、互变异构体和同位素。该术语还意图指本发明化合物，无论是如何通过例如合成、生物方法(例如代谢或酶转化)或其组合制备这些化合物的。

所有化合物和其药学上可接受的盐均可与其它物质如水和溶剂(例如水合物和溶剂化物)一起发现，或可被分离。当呈固体状态时，本文所描述的化合物和其盐可以呈各种形式，并且可以例如呈包括水合物在内的溶剂化物形式。所述化合物可以呈任何固态形式，例如多晶型物或溶剂化物，因此除非另外清楚指示，否则本说明书中提到化合物和其盐应理解为涵盖该化合物的任何固体状态形式。

在一些实施方案中，本发明化合物或其盐是大体上分离的。“大体上分离”意味着，所述化合物至少部分或大体上与形成或检测该化合物的环境分离。部分分离可包括例如富含本发明化合物的组合物。大体上分离可包括含有以重量计至少约50％、至少约60％、至少约70％、至少约80％、至少约90％、至少约95％、至少约97％或至少约99％的本发明化合物或其盐的组合物。

短语“药学上可接受”在本文中用于指在合理医学判断的范围内，适于与人体和动物组织接触使用而无过度毒性、刺激、过敏反应或其它问题或并发症，并且与合理的效益/风险比相称的化合物、材料、组合物和/或剂型。

如本文所使用，表述“环境温度”和“室温”是本领域中所理解的，并且一般是指大致为进行反应的室内的温度的温度，例如反应温度，例如约20℃至约30℃的温度。

本发明还包括本文所描述的化合物的药学上可接受的盐。术语“药学上可接受的盐”是指所公开化合物的衍生物，其中母化合物通过将现有酸或碱部分转化成其盐形式而经历修饰。药学上可接受的盐的实例包括但不限于碱性残基如胺的无机酸或有机酸盐；酸性残基如羧酸的碱金属或有机盐等。本发明的药学上可接受的盐包括由例如无毒无机酸或有机酸形成的母化合物的无毒盐。本发明的药学上可接受的盐可以由含有碱性部分或酸性部分的母化合物，通过常规化学方法合成。一般来说，此类盐可以通过使这些化合物的游离酸或碱形式与化学计算量的适当碱或酸在水中或在有机溶剂中，或在两者的混合物中反应来制备；一般优选非水性介质，如乙醚、乙酸乙酯、醇类(例如甲醇、乙醇、异丙醇或丁醇)或乙腈(MeCN)。适合盐的清单见于Remington's Pharmaceutical Sciences,第17版,(MackPublishing Company,Easton,1985),第1418页,Berge等人,J.Pharm.Sci.,1977,66(1),1-19；以及Stahl等人,Handbook of Pharmaceutical Salts:Properties,Selection,andUse,(Wiley,2002)。在一些实施方案中，本文所描述的化合物包括N-氧化物形式。

合成

本发明化合物，包括其盐在内，可使用已知的有机合成技术制备并且可以根据众多可能的合成途径，例如以下方案中的合成途径中的任一种合成。

用于制备本发明化合物的反应可以在适合溶剂中进行，所述溶剂可以由有机合成领域的技术人员容易地选择。适合溶剂可在反应进行的温度，例如可在溶剂的冷冻温度至溶剂的沸腾温度范围内的温度下与起始物质(反应物)大体上无反应性。给定反应可在一种溶剂或多种溶剂的混合物中进行。取决于特定反应步骤，用于特定反应步骤的适合溶剂可以由本领域技术人员选择。

本发明化合物的制备可涉及各种化学基团的保护和脱保护。关于饱和与脱保护的需求以及适当保护基的选择可易于由本领域技术人员决定。保护基的化学性质描述于例如Kocienski,Protecting Groups,(Thieme,2007)；Robertson,Protecting GroupChemistry,(Oxford University Press,2000)；Smith等人,March's Advanced OrganicChemistry:Reactions,Mechanisms,and Structure,第6版,(Wiley,2007)；Peturssion等人,“Protecting Groups in Carbohydrate Chemistry,”J.Chem.Educ.,1997,74(11),1297；以及Wuts等人,Protective Groups in Organic Synthesis,第4版,(Wiley,2006)。

反应可根据本领域中已知的任何适合方法监测。例如，产物形成可通过以下方式监测：光谱手段，例如核磁共振光谱法(例如¹H或¹³C)、红外光谱法、分光光度法(例如UV-可见光)、质谱法；或色谱法，例如高效液相色谱法(HPLC)或薄层色谱法(TLC)。

以下方案提供了与制备本发明化合物有关的一般指导。本领域技术人员应理解，方案中所示制备方法可使用有机化学的一般知识修改或优化以制备本发明的各种化合物。

方案1

式1-18的化合物可以通过方案1中概述的合成途径制备。用适当试剂，例如N-氯-琥珀酰亚胺(NCS)将起始物质1-1卤化，得到中间体1-2(Hal是卤基，例如F、Cl、Br或I)。化合物1-3可通过用三光气等试剂处理1-2来制备。接着，中间体1-3可与酯1-4反应以得到硝基化合物1-5，然后该硝基化合物可以用适当试剂(例如POCl₃)处理以得到化合物1-6。中间体1-6与胺1-7(PG是适当保护基，例如Boc)可进行S_NAr反应以产生化合物1-8。1-8中的硝基可在还原剂(例如在乙酸或连二亚硫酸钠中的Fe)存在下还原成NH₂。接着，中间体1-9可经历环化反应(例如使用原甲酸三乙酯)，得到中间体1-10，随后与硫代甲醇钠发生SnAr反应，以提供1-11。与1-12(其中M是硼酸、硼酸酯或适当取代的金属或类金属[例如M是B(OR)₂、Sn(烷基)₃、Zn-Hal或CF₃TMS])在标准铃木交叉偶合(Suzuki Cross-Coupling)条件(例如在钯催化剂和适合碱存在下)或标准斯蒂尔交叉偶合(Stille cross-coupling)条件(例如在钯催化剂存在下)或标准根岸交叉偶合(Negishi cross-coupling)条件(例如在钯催化剂存在下)或三氟甲基化条件(例如在铜催化剂存在下)下发生交叉偶合反应，得到1-13。中间体1-15可通过1-13与式1-14的加合物(其中M是硼酸、硼酸酯或适当取代的金属[例如M是B(OR)₂、Sn(烷基)₃或Zn-Hal])在标准铃木交叉偶合条件(例如在钯催化剂和适合碱存在下)或标准斯蒂尔交叉偶合条件(例如在钯催化剂存在下)或标准根岸交叉偶合条件(例如在钯催化剂存在下)下发生交叉偶合反应来制备。中间体1-15可通过以下方式转化成中间体1-16：用适合氧化剂(例如m-CPBA)氧化硫基，随后进行SnAr反应或交叉偶合反应(Org.Lett.2002,4,979-981)。去除1-16中的保护基，得到胺1-17。接着，将所得到的胺官能化(例如与酰氯化物，例如丙烯酰氯偶合)，得到所需产物1-18。适当时，以上描述的化学反应的次序可重新布置或省略以适合不同类似物的制备。

KRAS蛋白

Ras家族包含三个成员：KRAS、NRAS和HRAS。RAS突变型癌症占人类癌症的约25％。KRAS是人类癌症中最常见的突变同功型：所有RAS突变中有85％是在KRAS中，12％在NRAS中，并且3％在HRAS中(Simanshu,D.等人Cell 170.1(2017):17-33)。KRAS突变在以下前三种致死性最高的癌症类型中普遍存在：胰腺癌(97％)、结直肠癌(44％)和肺癌(30％)(Cox,A.D.等人Nat Rev Drug Discov(2014)13:828-51)。大部分RAS突变出现在氨基酸残基/密码子12、13和61处；密码子12突变在KRAS中最常见。特定突变的频率随RAS基因不同，并且G12D突变在KRAS中占最大比例，而Q61R和G12R突变在NRAS和HRAS中最为常见。此外，RAS同功型的突变谱随癌症类型而不同。例如，KRAS G12D突变在胰腺癌中占主导(51％)，其次是结直肠腺癌(45％)和肺腺癌(17％)(Cox,A.D.等人Nat Rev Drug Discov(2014)13:828-51)。相比之下，KRAS G12C突变在非小细胞肺癌(NSCLC)中占主导，分别包含11-16％的肺腺癌(近半数的突变型KRAS是G12C)，以及2-5％的胰腺癌和结直肠腺癌(Cox,A.D.等人Nat.Rev.Drug Discov.(2014)13:828-51)。使用shRNA敲除数百个癌症细胞系内的数千个基因，基因组研究展示，展现KRAS突变的癌细胞高度依赖KRAS功能进行细胞生长(McDonald,R.等人Cell 170(2017):577-592)。综上所述，这些发现表明，KRAS突变在人类癌症中起到至关重要的作用，因此，靶向突变型KRAS的抑制剂的开发可用于在临床上治疗以KRAS突变为特征的疾病。

使用方法

涉及带有G12C、G12V和G12D突变的KRAS的癌症类型包括但不限于：癌瘤(例如胰腺癌、结直肠癌、肺癌、膀胱癌、胃癌、食道癌、乳癌、头颈癌、子宫颈癌、皮肤癌、甲状腺癌)；造血系统恶性疾病(例如骨髓增生性赘瘤(MPN)、骨髓增生异常综合征(MDS)、慢性和幼年型粒单核细胞性白血病(CMML和JMML)、急性骨髓性白血病(AML)、急性淋巴细胞性白血病(ALL)和多发性骨髓瘤(MM))；以及其它赘瘤(例如成胶质细胞瘤和肉瘤)。此外，还在针对抗EGFR疗法的获得性抗性中发现KRAS突变(Knickelbein,K.等人,Genes&Cancer,(2015):4-12)。KRAS突变见于免疫病症和炎症性病症(Fernandez-Medarde,A.等人,Genes&Cancer,(2011):344-358)，例如由KRAS或NRAS的体细胞突变引起的Ras相关淋巴细胞增生性病症(RALD)或幼年型粒单核细胞性白血病(JMML)。

本公开的化合物可抑制KRAS蛋白的活性。例如，可使用本公开的化合物抑制细胞中或需要抑制所述酶的个体或患者体内KRAS的活性，该抑制是通过向所述细胞、个体或患者施用抑制量的一种或多种本公开的化合物实现。

本公开的化合物作为KRAS抑制剂可用于治疗与KRAS的异常表达或活性相关的各种疾病。抑制KRAS的化合物在提供预防肿瘤生长或诱导肿瘤中细胞凋亡，或通过抑制血管生成的手段方面将是有用的。因此，预期本公开的化合物被证实可用于治疗或预防增生性病症，例如癌症。具体点说，具有受体酪氨酸激酶的活化突变体或受体酪氨酸激酶上调的肿瘤可能对所述抑制剂特别敏感。

在一方面，本文提供了一种抑制KRAS活性的方法，所述方法包括使本公开的化合物与KRAS接触。在一个实施方案中，所述接触包括向患者施用所述化合物。

在一方面，本文提供一种抑制带有G12C突变的KRAS蛋白的方法，所述方法包括使本公开的化合物与KRAS接触。

在一方面，本文提供一种抑制带有G12D突变的KRAS蛋白的方法，所述方法包括使本公开的化合物与KRAS接触。

在一方面，本文提供一种抑制带有G12V突变的KRAS蛋白的方法，所述该方法包括使本公开的化合物与KRAS接触。

在另一方面，本文提供了一种治疗与抑制KRAS相互作用相关的疾病或病症的方法，所述方法包括向有需要的患者施用治疗有效量的本文所公开各式的化合物或其药学上可接受的盐。

在另一方面，本文提供一种治疗与抑制带有G12C突变的KRAS蛋白相关的疾病或病症的方法，所述方法包括向有需要的患者施用治疗有效量的本文所公开各式的化合物或其药学上可接受的盐。

在又一方面，本文还提供一种治疗有需要的患者的癌症的方法，所述方法包括向患者施用治疗有效量的本文所公开的化合物，其中所述癌症以与带有G12C突变的KRAS蛋白相互作用为特征。

在又一方面，本文提供一种用于治疗患者的癌症的方法，所述方法包括向患者施用治疗有效量的本文所公开的化合物中的任一者或其药学上可接受的盐。

在一方面，本文提供一种用于治疗有需要的患者的与抑制KRAS相互作用或其突变体相关的疾病或病症的方法，所述方法包括以下步骤：向患者施用本文所公开的化合物或其药学上可接受的盐，或者包含本文所公开的化合物或其药学上可接受的盐的组合物，以及本文所描述的另一疗法或治疗剂。

在一个实施方案中，癌症选自血液系统癌症、肉瘤、肺癌、胃肠癌、泌尿生殖道癌症、肝癌、骨癌、神经系统癌症、妇科癌症和皮肤癌。

在另一实施方案中，肺癌选自非小细胞肺癌(NSCLC)、小细胞肺癌、支气管源性癌、鳞状细胞支气管源性癌、未分化的小细胞支气管源性癌、未分化的大细胞支气管源性癌、腺癌、支气管源性癌、肺泡癌、细支气管癌、支气管腺瘤、软骨瘤样错构瘤、间皮瘤、小细胞性和非小细胞性癌、支气管腺瘤和胸膜肺母细胞瘤。

在又另一实施方案中，肺癌是非小细胞肺癌(NSCLC)。在另一实施方案中，肺癌是腺癌。

在一个实施方案中，胃肠癌选自食道鳞状细胞癌、食道腺癌、食道平滑肌肉瘤、食道淋巴瘤、胃癌、胃淋巴瘤、胃平滑肌肉瘤、外分泌胰腺癌、胰腺导管腺癌、胰腺胰岛素瘤、胰高血糖素瘤、胰促胃液素瘤、胰腺类癌瘤、胰腺血管活性肠肽瘤、小肠腺癌、小肠淋巴瘤、小肠类癌瘤、卡波西氏肉瘤(Kaposi's sarcoma)、小肠平滑肌肉瘤、小肠血管瘤、小肠脂肪瘤、小肠神经纤维瘤、小肠纤维瘤、大肠腺癌、大肠管状腺瘤、大肠绒毛状腺瘤、大肠错构瘤、大肠平滑肌肉瘤、结直肠癌、胆囊癌和肛门癌。

在一个实施方案中，胃肠癌是结直肠癌。

在另一实施方案中，癌症是癌瘤。在又另一实施方案中，癌瘤选自胰腺癌、结直肠癌、肺癌、膀胱癌、胃癌、食道癌、乳癌、头颈癌、子宫颈癌、皮肤癌和甲状腺癌。

在又另一实施方案中，癌症是造血系统恶性疾病。在一个实施方案中，造血系统恶性疾病选自多发性骨髓瘤、急性髓细胞白血病和骨髓增生性赘瘤。

在另一实施方案中，癌症是赘瘤。在又另一个实施方案中，赘瘤是成胶质细胞瘤或肉瘤。

在某些实施方案中，本公开提供了一种用于治疗有需要的患者的KRAS介导的病症的方法，该方法包括以下步骤：向所述患者施用根据本发明的化合物或其药学上可接受的组合物。

在一些实施方案中，可使用本公开的化合物治疗的疾病和适应症包括但不限于血液系统癌症、肉瘤、肺癌、胃肠癌、泌尿生殖道癌症、肝癌、骨癌、神经系统癌症、妇科癌症和皮肤癌。

例示性血液系统癌症包括淋巴瘤和白血病，例如急性淋巴母细胞性白血病(ALL)、急性髓细胞白血病(AML)、急性早幼粒细胞白血病(APL)、慢性淋巴细胞性白血病(CLL)、慢性髓细胞白血病(CML)、弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)、套细胞淋巴瘤、非霍奇金氏淋巴瘤(Non-Hodgkin lymphoma)(包括复发性或难治性NHL和重现性滤泡性淋巴瘤)、霍奇金氏淋巴瘤、骨髓增生性疾病(例如原发性骨髓纤维化(PMF)、真性红细胞增多症(PV)、原发性血小板增多症(ET)、8p11骨髓增生综合征、骨髓增生异常综合征(MDS)、T细胞急性淋巴母细胞性淋巴瘤(T-ALL)、多发性骨髓瘤、皮肤T细胞淋巴瘤、成人T细胞白血病、瓦尔登斯特仑氏巨球蛋白血症(Waldenstrom's Macroglubulinemia)、毛细胞淋巴瘤、边缘区淋巴瘤、慢性骨髓性淋巴瘤和伯基特氏淋巴瘤(Burkitt's lymphoma)。

例示性肉瘤包括软骨肉瘤、尤文氏肉瘤(Ewing’s sarcoma)、骨肉瘤、横纹肌肉瘤、血管肉瘤、纤维肉瘤、脂肪肉瘤、黏液瘤、横纹肌肉瘤、横纹肌肉瘤、纤维瘤、脂肪瘤、错构瘤、淋巴肉瘤、平滑肌肉瘤和畸胎瘤。

例示性肺癌包括非小细胞肺癌(NSCLC)、小细胞肺癌、支气管源性癌(鳞状细胞支气管源性癌、未分化小细胞支气管源性癌、未分化大细胞支气管源性癌、腺癌)、肺泡(细支气管)癌、支气管腺瘤、软骨瘤样错构瘤、间皮瘤、小细胞性和非小细胞性癌、支气管腺瘤和胸膜肺母细胞瘤。

例示性胃肠癌包括食道癌(鳞状细胞癌、腺癌、平滑肌肉瘤、淋巴瘤)、胃癌(癌瘤、淋巴瘤、平滑肌肉瘤)、胰腺癌(外分泌胰腺癌、胰腺导管腺癌、胰岛素瘤、胰高血糖素瘤、促胃泌素瘤、类癌瘤、血管活性肠肽瘤)、小肠癌(腺癌、淋巴瘤、类癌瘤、卡波西氏肉瘤、平滑肌肉瘤、血管瘤、脂肪瘤、神经纤维瘤、纤维瘤)、大肠癌(腺癌、管状腺瘤、绒毛状腺瘤、错构瘤、平滑肌肉瘤)、结直肠癌、胆囊癌和肛门癌。

例示性泌尿生殖道癌症包括肾癌(腺瘤、威尔姆氏肿瘤(Wilm's tumor)[肾母细胞瘤]、肾细胞癌)、膀胱和尿道癌(鳞状细胞癌、移行细胞癌、腺癌)、前列腺癌(腺癌、肉瘤)、睾丸癌(精原细胞瘤、畸胎瘤、胚胎癌、畸胎癌、绒毛膜癌、肉瘤、间质细胞癌、纤维瘤、纤维腺瘤、腺瘤样瘤、脂肪瘤)和尿路上皮癌。

例示性肝癌包括肝细胞瘤(肝细胞癌)、胆管癌、肝母细胞瘤、血管肉瘤、肝细胞腺瘤和血管瘤。

例示性骨癌包括例如骨生肉瘤(骨肉瘤)、纤维肉瘤、恶性纤维组织细胞瘤、软骨肉瘤、尤文氏肉瘤、恶性淋巴瘤(网状细胞肉瘤)、多发性骨髓瘤、恶性巨细胞瘤脊索瘤、骨软骨瘤(骨软骨外生性骨疣)、良性软骨瘤、软骨母细胞瘤、软骨粘液样纤维瘤、骨样骨瘤和巨细胞肿瘤。

例示性神经系统癌症包括颅骨癌(骨瘤、血管瘤、肉芽肿、黄瘤、畸形性骨炎)、脑膜癌症(脑膜瘤、脑膜肉瘤、胶质瘤病)、脑癌(星形细胞瘤、髓母细胞瘤、胶质瘤、室管膜瘤、胚组织瘤(松果腺瘤)、成胶质细胞瘤、多形性成胶质细胞瘤、少突胶质细胞瘤、许旺细胞瘤(schwannoma)、视网膜母细胞瘤、先天性肿瘤、神经外胚层瘤)和脊髓癌症(神经纤维瘤、脑膜瘤、胶质瘤、肉瘤)、神经母细胞瘤、Lhermitte-Duclos病和松果体瘤。

例示性妇科癌症包括乳癌(乳腺导管癌、乳腺小叶癌、乳房肉瘤、三阴性乳癌、HER2阳性乳癌、炎症性乳癌、乳头状癌)、子宫癌(子宫内膜癌)、子宫颈癌(子宫颈癌瘤、癌前子宫颈非典型性增生)、卵巢癌(卵巢癌瘤(浆液性囊腺癌、黏液性囊腺癌、未分类癌瘤)、颗粒-卵泡膜细胞瘤、支持-莱迪细胞瘤(Sertoli-Leydig cell tumor)、无性细胞瘤、恶性畸胎瘤)、外阴癌(鳞状细胞癌、上皮内癌、腺癌、纤维肉瘤、黑色素瘤)、阴道癌(透明细胞癌、鳞状细胞癌、葡萄状肉瘤(胚胎性横纹肌肉瘤)和输卵管癌(癌瘤)。

例示性皮肤癌包括黑色素瘤、基底细胞癌、鳞状细胞癌、卡波西氏肉瘤、梅克尔细胞皮肤癌、痣发育不良痣、脂肪瘤、血管瘤、皮肤纤维瘤和瘢痕疙瘩。

例示性头颈癌包括成胶质细胞瘤、黑色素瘤、横纹肌肉瘤、淋巴肉瘤、骨肉瘤、鳞状细胞癌、腺癌、口腔癌、喉癌、鼻咽癌、鼻和鼻旁癌、甲状腺和甲状旁腺癌、眼部肿瘤、唇和口腔肿瘤以及鳞状头颈癌。

本公开的化合物还可用于抑制肿瘤转移。

除致癌性赘瘤外，本发明的化合物可用于治疗骨骼和软骨细胞病症，包括但不限于软骨发育不全、软骨发育欠全、侏儒症、致死性发育不良(TD)(临床表现TD I和TD II)、阿佩尔氏综合征(Apert syndrome)、克鲁宗氏综合征(Crouzon syndrome)、杰克逊-韦斯综合征(Jackson-Weiss syndrome)、贝尔-史蒂文森氏环形皮纹综合征(Beare-Stevensoncutis gyrate syndrome)、菲佛氏综合征(Pfeiffer syndrome)和颅缝早闭综合征。在一些实施方案中，本公开提供了一种用于治疗罹患骨骼和软骨细胞病症的患者的方法。

在一些实施方案中，本文所描述的化合物可用于治疗阿尔茨海默氏病(Alzheimer’s disease)、HIV或结核病。

如本文所使用，术语“8p11骨髓增生性综合征”意图指与嗜酸性粒细胞增多和FGFR1异常相关的髓系/淋巴系赘瘤。

如本文所使用，术语“细胞”意图指体外、离体或体内细胞。在一些实施方案中，离体细胞可以是从如哺乳动物之类生物体切除的组织样本的部分。在一些实施方案中，体外细胞可以是细胞培养物中的细胞。在一些实施方案中，体内细胞是在如哺乳动物之类生物体中生活的细胞。

如本文所使用，术语“接触”是指使指定部分在体外系统或体内系统中聚集在一起。例如，使KRAS与本文所描述的化合物“接触”包括向具有KRAS的个体或患者，例如人类施用本文所描述的化合物，以及例如，将本文所描述的化合物引入包括含KRAS的细胞或纯化制剂的样本中。

如本文所使用，术语“个体”、“受试者”或“患者”可互换使用，意思指任何动物，包括哺乳动物，优选地小鼠、大鼠、其它啮齿动物、兔、狗、猫、猪、牛、绵羊、马或灵长类动物，并且最优选人类。

如本文所使用，短语“治疗有效量”是指在组织、系统、动物、个体或人体中引起研究人员、兽医、医学博士或其他临床医师所寻求的生物或医学反应的活性化合物或药剂的量，例如本文所公开的任何固体形式或其盐的量。在任何个别情况下，适当“有效”量可以使用本领域技术人员已知的技术确定。

短语“药学上可接受”在本文中用于指在合理医学判断的范围内，适于与人体和动物组织接触使用而无过度毒性、刺激、过敏反应、免疫原性或其它问题或并发症，并且与合理的效益/风险比相称的化合物、材料、组合物和/或剂型。

如本文所使用，术语“药学上可接受的载体或赋形剂”是指药学上可接受的材料、组合物或媒剂，例如液体或固体填充剂、稀释剂、溶剂或囊封材料。赋形剂或载体一般是安全、无毒的并且不会在生物学上以及其它方面不合需要，而且包括兽类使用以及人类药物使用可接受的赋形剂或载体。在一个实施方案中，各组分是“药学上可接受的”，如本文所定义。参见例如Remington:The Science and Practice of Pharmacy,第21版；LippincottWilliams&Wilkins:Philadelphia,Pa.,2005；Handbook of Pharmaceutical Excipients,第6版；Rowe等人编辑；The Pharmaceutical Press and the American PharmaceuticalAssociation:2009；Handbook of Pharmaceutical Additives,第3版；Ash and Ash编辑；Gower Publishing Company:2007；Pharmaceutical Preformulation and Formulation,第2版；Gibson编辑；CRC Press LLC:Boca Raton,Fla.,2009。

如本文所使用，术语“治疗(treating/treatment)”是指抑制疾病；例如，抑制正经历或展示疾病、疾患或病症的病理学或症状学的个体的疾病、疾患或病症(即，停滞病理学和/或症状学的进一步发展)或改善疾病；例如，改善正经历或展示疾病、疾患或病症的病理学或症状学的个体的疾病、疾患或病症(即，逆转病理学和/或症状学)，例如降低疾病的严重程度。

如本文所使用，术语“预防(prevent/preventing/prevention)”包含预防至少一种与所预防的状态、疾病或病症相关或者由该状态、疾病或病症引起的症状。

应了解，为清楚起见而在独立实施方案的上下文中描述的本发明的某些特征也可按组合形式提供于单一实施方案中(而意图组合这些实施方案，就如同以多重独立形式书写一般)。相反，为简洁起见而在单一实施方案的上下文中描述的本发明的各个特征也可分开地或以任何适合子组合形式提供。

组合疗法

I.癌症疗法

癌细胞生长和存活可受多个信号传导路径中功能异常影响。因此，组合在活性受酶/蛋白质/受体抑制剂调节的靶标中展现不同偏好的不同酶/蛋白质/受体抑制剂治疗此类疾患将是有用的。靶向多个信号传导路径(或给定信号传导路径中所涉及的多个生物分子)可降低细胞群体中产生药物抗性的可能性，和/或降低治疗毒性。

一种或多种额外药剂，例如化学治疗剂、抗炎剂、类固醇、免疫抑制剂、免疫肿瘤剂、代谢酶抑制剂、趋化因子受体抑制剂和磷酸酶抑制剂，以及靶向疗法，例如Bcr-Abl、Flt-3、EGFR、HER2、JAK、c-MET、VEGFR、PDGFR、c-Kit、IGF-1R、RAF、FAK和CDK4/6激酶抑制剂，例如WO 2006/056399中描述者可与本公开的化合物组合使用以治疗CDK2相关疾病、病症或疾患。其它剂，例如治疗性抗体可与本公开的化合物组合使用以治疗CDK2相关疾病、病症或疾患。所述一种或多种额外药剂可同时或依序施用给患者。

在一些实施方案中，CDK2抑制剂是与BCL2抑制剂或CDK4/6抑制剂组合施用或使用。

本文所公开的化合物可与一种或多种其它酶/蛋白质/受体抑制剂疗法组合使用以治疗疾病，例如癌症和本文所描述的其它疾病或病症。可用组合疗法治疗的疾病和适应症的实例包括本文所描述者。癌症的实例包括实体肿瘤和非实体肿瘤，例如液体肿瘤、血液癌症。感染的实例包括病毒感染、细菌感染、真菌感染或寄生虫感染。例如，本公开的化合物可与以下激酶的一种或多种抑制剂组合以治疗癌症：Akt1、Akt2、Akt3、BCL2、CDK4/6、TGF-βR、PKA、PKG、PKC、CaM-激酶、磷酸酶激酶、MEKK、ERK、MAPK、mTOR、EGFR、HER2、HER3、HER4、INS-R、IDH2、IGF-1R、IR-R、PDGFαR、PDGFβR、PI3K(α、β、γ、δ和多种或选择性)、CSF1R、KIT、FLK-II、KDR/FLK-1、FLK-4、flt-1、FGFR1、FGFR2、FGFR3、FGFR4、c-Met、PARP、Ron、Sea、TRKA、TRKB、TRKC、TAM激酶(Axl、Mer、Tyro3)、FLT3、VEGFR/Flt2、Flt4、EphA1、EphA2、EphA3、EphB2、EphB4、Tie2、Src、Fyn、Lck、Fgr、Btk、Fak、SYK、FRK、JAK、ABL、ALK和B-Raf。在一些实施方案中，本公开的化合物可与以下抑制剂中的一种或多种组合以治疗癌症或感染。可与本公开的化合物组合以治疗癌症和感染的抑制剂的非限制性实例包括FGFR抑制剂(FGFR1、FGFR2、FGFR3或FGFR4，例如培米替尼(pemigatinib)(INCB54828)、INCB62079)、EGFR抑制剂(又称为ErB-1或HER-1；例如厄洛替尼(erlotinib)、吉非替尼(gefitinib)、凡德他尼(vandetanib)、奥希替尼(orsimertinib)、西妥昔单抗(cetuximab)、耐昔妥珠单抗(necitumumab)或帕尼单抗(panitumumab))、VEGFR抑制剂或路径阻断剂(例如贝伐珠单抗(bevacizumab)、帕唑帕尼(pazopanib)、舒尼替尼(sunitinib)、索拉非尼(sorafenib)、阿西替尼(axitinib)、瑞戈非尼(regorafenib)、普纳替尼(ponatinib)、卡博替尼(cabozantinib)、凡德他尼、雷莫芦单抗(ramucirumab)、乐伐替尼(lenvatinib)、ziv-阿柏西普(ziv-aflibercept))、PARP抑制剂(例如奥拉帕尼(olaparib)、鲁卡帕尼(rucaparib)、维利帕尼(veliparib)或尼拉帕尼(niraparib))、JAK抑制剂(JAK1和/或JAK2；例如鲁索利替尼(ruxolitinib)或巴瑞替尼(baricitinib)或JAK1；例如伊他替尼(itacitinib)(INCB39110)、INCB052793或INCB054707)、IDO抑制剂(例如艾卡哚司他(epacadostat)、NLG919或BMS-986205、MK7162)、LSD1抑制剂(例如GSK2979552、INCB59872和INCB60003)、TDO抑制剂、PI3K-δ抑制剂(例如帕萨西布(parsaclisib)(INCB50465)或INCB50797)、PI3K-γ抑制剂(例如PI3K-γ选择性抑制剂)、Pim抑制剂(例如INCB53914)、CSF1R抑制剂、TAM受体酪氨酸激酶(Tyro-3、Axl和Mer；例如INCB081776)、腺苷受体拮抗剂(例如A2a/A2b受体拮抗剂)、HPK1抑制剂、趋化因子受体抑制剂(例如CCR2或CCR5抑制剂)、SHP1/2磷酸酶抑制剂、组蛋白去乙酰化酶抑制剂(HDAC)(例如HDAC8抑制剂)、血管生成抑制剂、白细胞介素受体抑制剂、溴结构域和超末端结构域家族成员抑制剂(例如溴结构域抑制剂或BET抑制剂，例如INCB54329和INCB57643)、c-MET抑制剂(例如卡马替尼(capmatinib))、抗CD19抗体(例如他法西他单抗(tafasitamab))、ALK2抑制剂(例如INCB00928)；或其组合。

在一些实施方案中，将本文所描述的化合物或盐与PI3Kδ抑制剂一起施用。在一些实施方案中，将本文所描述的化合物或盐与JAK抑制剂一起施用。在一些实施方案中，将本文所描述的化合物或盐与JAK1或JAK2抑制剂(例如巴瑞替尼或鲁索利替尼)一起施用。在一些实施方案中，将本文所描述的化合物或盐与JAK1抑制剂一起施用。在一些实施方案中，将本文所描述的化合物或盐与相对于JAK2具有选择性的JAK1抑制剂一起施用。

此外，为了治疗癌症和其它增生性疾病，也可将本文所描述的化合物与靶向疗法组合使用，所述靶向疗法是例如c-MET抑制剂(例如卡马替尼)、抗CD19抗体(例如他法西他单抗)、ALK2抑制剂(例如INCB00928)或其组合。

用于组合疗法中的示例性抗体包括但不限于曲妥珠单抗(trastuzumab)(例如抗HER2)、雷尼株单抗(ranibizumab)(例如抗VEGF-A)、贝伐珠单抗(AVASTIN^TM，例如抗VEGF)、帕尼单抗(例如抗EGFR)、西妥昔单抗(例如抗EGFR)、利妥昔单抗(rituxan)(例如抗CD20)和针对c-MET的抗体。

以下剂中的一种或多种可与本公开的化合物组合使用并呈现于非限制性清单中：细胞生长抑制剂、顺铂(cisplatin)、多柔比星(doxorubicin)、紫杉特尔(taxotere)、紫杉醇(taxol)、依托泊苷(etoposide)、伊立替康(irinotecan)、坎普托萨(camptosar)、托泊替康(topotecan)、太平洋紫杉醇(paclitaxel)、多西他赛(docetaxel)、埃博霉素(epothilones)、他莫昔芬(tamoxifen)、5-氟尿嘧啶、甲胺蝶呤(methotrexate)、替莫唑胺(temozolomide)、环磷酰胺(cyclophosphamide)、SCH 66336,R115777、L778,123、BMS214662、IRESSA^TM(吉非替尼)、TARCEVA^TM(厄洛替尼)、抗EGFR抗体、内含子、ara-C、阿霉素(adriamycin)、癌得星(cytoxan)、吉西他滨(gemcitabine)、尿嘧啶氮芥(uracilmustard)、氮芥(chlormethine)、异环磷酰胺(ifosfamide)、美法仑(melphalan)、苯丁酸氮芥(chlorambucil)、哌泊溴烷(pipobroman)、三亚乙基蜜胺(triethylenemelamine)、三亚乙基硫代磷酰胺(triethylenethiophosphoramine)、白消安(busulfan)、卡莫司汀(carmustine)、洛莫司汀(lomustine)、链脲霉素(streptozocin)、达卡巴嗪(dacarbazine)、氟尿苷(floxuridine)、阿糖胞苷(cytarabine)、6-巯基嘌呤、6-硫鸟嘌呤、磷酸氟达拉滨(fludarabine phosphate)、奥沙利铂(oxaliplatin)、甲酰四氢叶酸(leucovirin)、ELOXATIN^TM(奥沙利铂)、喷司他丁(pentostatine)、长春花碱(vinblastine)、长春新碱(vincristine)、长春地辛(vindesine)、博莱霉素(bleomycin)、放线菌素D(dactinomycin)、道诺霉素(daunorubicin)、多柔比星、表柔比星(epirubicin)、伊达比星(idarubicin)、光神霉素(mithramycin)、脱氧助间型霉素(deoxycoformycin)、丝裂霉素-C(mitomycin-C)、L-天冬酰胺酶、替尼泊苷(teniposide)、17.α.-乙炔雌二醇、己烯雌酚(diethylstilbestrol)、睾酮(testosterone)、泼尼松(Prednisone)、氟羟甲基睾丸酮(Fluoxymesterone)、屈他雄酮丙酸酯(Dromostanolone propionate)、睾内酯(testolactone)、醋酸甲地孕酮(megestrolacetate)、甲泼尼龙(methylprednisolone)、甲睾酮(methyltestosterone)、泼尼松龙(prednisolone)、氟羟泼尼松龙(triamcinolone)、氯烯雌醚(chlorotrianisene)、羟基黄体酮(hydroxyprogesterone)、氨鲁米特(aminoglutethimide)、雌莫司汀(estramustine)、醋酸甲羟孕酮(medroxyprogesteroneacetate)、亮丙瑞林(leuprolide)、氟他胺(flutamide)、托瑞米芬(toremifene)、戈舍瑞林(goserelin)、卡铂(carboplatin)、羟基脲(hydroxyurea)、安吖啶(amsacrine)、丙卡巴肼(procarbazine)、米托坦(mitotane)、米托蒽醌(mitoxantrone)、左旋咪唑(levamisole)、诺维本(navelbene)、阿那曲唑(anastrazole)、来曲唑(letrazole)、卡培他滨(capecitabine)、雷洛昔芬(reloxafine)、屈洛昔芬(droloxafine)、六甲蜜胺(hexamethylmelamine)、阿瓦斯汀(avastin)、HERCEPTIN^TM(曲妥珠单抗(trastuzumab))、BEXXAR^TM(托西莫单抗(tositumomab))、VELCADE^TM(硼替佐米(bortezomib))、ZEVALIN^TM(替伊莫单抗(ibritumomab tiuxetan))、TRISENOX^TM(三氧化二砷)、XELODA^TM(卡培他滨)、长春瑞滨(vinorelbine)、卟吩姆(porfimer)、ERBITUX^TM(西妥昔单抗(cetuximab))、噻替派(thiotepa)、六甲三聚氰胺(altretamine)、美法仑、曲妥珠单抗(trastuzumab)、来曲唑(lerozole)、氟维司群(fulvestrant)、依西美坦(exemestane)、异环磷酰胺、利妥昔单抗(rituximab)、C225(西妥昔单抗)、坎帕斯(Campath)(阿仑单抗(alemtuzumab))、氯法拉滨(clofarabine)、克拉屈滨(cladribine)、阿非迪霉素(aphidicolon)、美罗华、舒尼替尼、达沙替尼(dasatinib)、替扎他滨(tezacitabine)、Sml1、氟达拉滨、喷司他丁、曲阿平(triapine)、迪多克斯(didox)、曲美多(trimidox)、阿米多斯(amidox)、3-AP及MDL-101,731。

本公开的化合物可另外与其它治疗癌症的方法，例如化学疗法、放射疗法、肿瘤靶向疗法、辅助疗法、免疫疗法或手术组合使用。免疫疗法的实例包括细胞因子治疗(例如干扰素、GM-CSF、G-CSF、IL-2)、CRS-207免疫疗法、癌症疫苗、单克隆抗体、双特异性或多特异性抗体、抗体药物缀合物、过继性T细胞转移、Toll受体激动剂、RIG-I激动剂、溶瘤病毒疗法和免疫调节小分子，包括沙利度胺(thalidomide)或JAK1/2抑制剂、PI3Kδ抑制剂等。所述化合物可与一种或多种抗癌药物，例如化学治疗剂组合施用。化学治疗剂的实例包括以下任一种：阿巴瑞克(abarelix)、阿地白介素(aldesleukin)、阿仑单抗、阿利维甲酸(alitretinoin)、别嘌呤醇(allopurinol)、六甲三聚氰胺、阿那曲唑、三氧化二砷、天冬酰胺酶、阿扎胞苷(azacitidine)、贝伐珠单抗、贝沙罗汀(bexarotene)、巴瑞替尼、博莱霉素、硼替佐米、白消安注射溶液(busulfan intravenous)、口服白消安、卡普睾酮(calusterone)、卡培他滨、卡铂、卡莫司汀、西妥昔单抗、苯丁酸氮芥、顺铂、克拉屈滨、氯法拉滨、环磷酰胺、阿糖胞苷、达卡巴嗪、放线菌素D、达肝素钠(dalteparin sodium)、达沙替尼、道诺霉素、地西他滨(decitabine)、地尼白介素(denileukin)、地尼白介素迪托斯(denileukin diftitox)、右雷佐生(dexrazoxane)、多西他赛、多柔比星、屈他雄酮丙酸酯、依库珠单抗(eculizumab)、表柔比星、厄洛替尼、雌莫司汀、磷酸依托泊苷、依托泊苷、依西美坦、柠檬酸芬太尼(fentanyl citrate)、非格司亭(filgrastim)、氟尿苷、氟达拉滨、氟尿嘧啶、氟维司群、吉非替尼、吉西他滨、吉妥珠单抗奥加米星(gemtuzumab ozogamicin)、醋酸戈舍瑞林、醋酸组胺瑞林(histrelin acetate)、替伊莫单抗、伊达比星、异环磷酰胺、甲磺酸伊马替尼(imatinib mesylate)、干扰素α2a、伊立替康、二甲苯磺酸拉帕替尼(lapatinib ditosylate)、来那度胺(lenalidomide)、来曲唑、甲酰四氢叶酸、醋酸亮丙瑞林、左旋咪唑、洛莫司汀、二氯甲基二乙胺(meclorethamine)、醋酸甲地孕酮(megestrolacetate)、美法仑、巯基嘌呤、甲胺蝶呤、甲氧沙林(methoxsalen)、丝裂霉素C、米托坦、米托蒽醌、苯丙酸诺龙(nandrolone phenpropionate)、奈拉滨(nelarabine)、诺非妥莫单抗(nofetumomab)、奥沙利铂、太平洋紫杉醇、帕米膦酸盐(pamidronate)、帕尼单抗、培门冬酶(pegaspargase)、聚乙二醇非格司亭(pegfilgrastim)、培美曲塞二钠(pemetrexeddisodium)、喷司他丁、哌泊溴烷(pipobroman)、普卡霉素(plicamycin)、丙卡巴肼、喹吖因(quinacrine)、拉布立酶(rasburicase)、利妥昔单抗、鲁索利替尼、索拉非尼、链脲霉素、舒尼替尼、顺丁烯二酸舒尼替尼、他莫昔芬(tamoxifen)、替莫唑胺、替尼泊苷、睾内酯、沙利度胺、硫鸟嘌呤(thioguanine)、噻替派、托泊替康、托瑞米芬、托西莫单抗、曲妥珠单抗、维甲酸(tretinoin)、尿嘧啶氮芥、戊柔比星(valrubicin)、长春花碱、长春新碱、长春瑞滨、伏立诺他(vorinostat)及唑来膦酸盐(zoledronate)。

化学治疗剂的额外实例包括蛋白酶体抑制剂(例如硼替佐米)、沙利度胺、瑞复美(revlimid)及DNA损伤剂，例如美法仑、多柔比星、环磷酰胺、长春新碱、依托泊苷、卡莫司汀等。

示例性类固醇包括皮质类固醇，例如地塞米松(dexamethasone)或泼尼松。

示例性Bcr-Abl抑制剂包括甲磺酸伊马替尼(GLEEVAC^TM)、尼洛替尼(nilotinib)、达沙替尼(dasatinib)、博舒替尼(bosutinib)和普纳替尼，以及药学上可接受的盐。其它示例性适合Bcr-Abl抑制剂包括美国专利号5,521,184、WO 04/005281和美国系列号60/578,491中所公开的属和种类的化合物和其药学上可接受的盐。

示例性适合Flt-3抑制剂包括米哚妥林(midostaurin)、来他替尼(lestaurtinib)、利尼伐尼(linifanib)、舒尼替尼、顺丁烯二酸舒尼替尼、索拉非尼、奎扎替尼(quizartinib)、克莱拉尼(crenolanib)、帕克替尼(pacritinib)、坦度替尼(tandutinib)、PLX3397和ASP2215，以及其药学上可接受的盐。其它示例性适合Flt-3抑制剂包括WO 03/037347、WO 03/099771和WO 04/046120中所公开的化合物和其药学上可接受的盐。

示例性适合RAF抑制剂包括达拉菲尼(dabrafenib)、索拉非尼和维罗非尼(vemurafenib)，以及其药学上可接受的盐。其它示例性适合RAF抑制剂包括WO 00/09495和WO 05/028444中所公开的化合物和其药学上可接受的盐。

示例性适合FAK抑制剂包括VS-4718、VS-5095、VS-6062、VS-6063、BI853520和GSK2256098，以及其药学上可接受的盐。其它示例性适合FAK抑制剂包括WO 04/080980、WO04/056786、WO 03/024967、WO 01/064655、WO 00/053595和WO 01/014402中所公开的化合物和其药学上可接受的盐。

示例性适合CDK4/6抑制剂包括帕博西尼(palbociclib)、瑞博西尼(ribociclib)、曲拉西利(trilaciclib)、来罗西利(lerociclib)和阿贝西利(abemaciclib)，以及其药学上可接受的盐。其它示例性适合CDK4/6抑制剂包括WO 09/085185、WO 12/129344、WO 11/101409、WO 03/062236、WO 10/075074和WO 12/061156中所公开的化合物和其药学上可接受的盐。

在一些实施方案中，本公开的化合物可与一种或多种其它激酶抑制剂组合使用，所述激酶抑制剂包括伊马替尼，特别是对于治疗对伊马替尼具有抗性的患者，或其它激酶抑制剂。

在一些实施方案中，本公开的化合物可与化学治疗剂组合使用以治疗癌症，并且相较于对单独化学治疗剂的反应，可改善治疗反应，并且无过度有毒作用。在一些实施方案中，本公开的化合物可与本文所提供的化学治疗剂组合使用。例如，用于治疗多发性骨髓瘤的额外药剂可包括但不限于美法仑、美法仑加泼尼松[MP]、多柔比星、地塞米松和万珂(Velcade)(硼替佐米)。用于治疗多发性骨髓瘤的其它额外剂包括Bcr-Abl、Flt-3、RAF和FAK激酶抑制剂。在一些实施方案中，所述剂是烷基化剂、蛋白酶体抑制剂、皮质类固醇或免疫调节剂。烷基化剂的实例包括环磷酰胺(CY)、美法仑(MEL)和苯达莫司汀(bendamustine)。在一些实施方案中，蛋白酶体抑制剂是卡非佐米(carfilzomib)。在一些实施方案中，皮质类固醇是地塞米松(DEX)。在一些实施方案中，免疫调节剂是来那度胺(LEN)或泊马度胺(pomalidomide；POM)。累加或协同作用是组合本公开的CDK2抑制剂与额外剂所希望的结果。

所述剂可与呈单一剂型或连续剂型的本发明化合物组合，或所述剂可按分开的剂型同时或依序施用。

本公开的化合物可与一种或多种其它抑制剂或者一种或多种疗法组合使用以治疗感染。感染的实例包括病毒感染、细菌感染、真菌感染或寄生虫感染。

在一些实施方案中，将皮质类固醇，例如地塞米松与本公开的化合物组合施用给患者，其中地塞米松是间歇性施用的，与连续施用相对。

式(I)或本文所描述任何式的化合物、任何权利要求中所列举和本文所描述的化合物或其盐可与另一种免疫原剂，例如癌细胞、纯化的肿瘤抗原(包括重组蛋白、肽和碳水化合物分子)、细胞和用编码免疫刺激性细胞因子的基因转染的细胞组合。可使用的肿瘤疫苗的非限制性实例包括黑色素瘤抗原肽，例如gp100、MAGE抗原、Trp-2、MARTI和/或酪氨酸酶的肽，或者被转染成表达细胞因子GM-CSF的肿瘤细胞。

式(I)或本文所描述任何式的化合物、任何权利要求中所列举和本文所描述的化合物或其盐可与用于治疗癌症的疫苗接种方案组合使用。在一些实施方案中，肿瘤细胞被转导成表达GM-CSF。在一些实施方案中，肿瘤疫苗包括来自涉及人类癌症的病毒的蛋白质，所述病毒例如是人乳头瘤病毒(HPV)、肝炎病毒(HBV和HCV)和卡波西氏肉瘤病毒(KHSV)。在一些实施方案中，本公开的化合物可与肿瘤特异性抗原，例如从肿瘤组织本身分离的热休克蛋白组合使用。在一些实施方案中，式(I)或本文所描述任何式的化合物、任何权利要求中所列举和本文所描述的化合物或其盐可与树突状细胞免疫接种组合以活化强效抗肿瘤反应。

本公开的化合物可与双特异性大环肽组合使用，所述肽使表达Feα或Feγ受体的效应细胞靶向肿瘤细胞。本公开的化合物也可与活化宿主免疫反应性的大环肽组合。

在一些其它实施方案中，本公开的化合物与其它治疗剂的组合可在骨髓移植或干细胞移植之前、期间和/或之后施用给患者。本公开的化合物可与骨髓移植组合使用以治疗造血系统起源的多种肿瘤。

式(I)或本文所描述任何式的化合物、任何权利要求中所列举和本文所描述的化合物或其盐可与疫苗组合使用，以刺激针对病原体、毒素和自体抗原的免疫反应。这一治疗方法可能特别有用的病原体的实例包括当前无有效疫苗的病原体或常规疫苗不完全有效的病原体。这些病原体包括但不限于HIV、肝炎(A、B和C型)病毒、流感病毒、疱疹病毒、贾第鞭毛虫、疟疾、利什曼原虫、金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、铜绿假单胞菌(Pseudomonas Aeruginosa)。

可用本公开的方法治疗的病毒引起的感染包括但不限于人乳头瘤病毒、流感、肝炎A型、B型、C型或D型病毒、腺病毒、痘病毒、单纯疱疹病毒、人巨细胞病毒、严重急性呼吸道综合征病毒、埃博拉病毒(Ebola virus)、麻疹病毒、疱疹病毒(例如VZV、HSV-1、HAV-6、HSV-II和CMV、埃-巴二氏病毒(Epstein Barr virus))、黄病毒、埃可病毒(echovirus)、鼻病毒、柯萨奇病毒(coxsackie virus)、冠状病毒、呼吸道合胞病毒、腮腺炎病毒、轮状病毒、麻疹病毒、风疹病毒、细小病毒、牛痘病毒、HTLV病毒、登革病毒(dengue virus)、乳头瘤病毒、软疣病毒、脊髓灰质炎病毒、狂犬病毒、JC病毒和虫媒病毒性脑炎病毒。

引起可利用本公开的方法治疗的感染的致病性细菌包括但不限于衣原体(chlamydia)、立克次体细菌(rickettsial bacteria)、分枝杆菌(mycobacteria)、葡萄球菌(staphylococci)、链球菌(streptococci)、肺炎球菌(pneumococci)、脑膜炎球菌(meningococci)和淋球菌(conococci)、克雷伯氏菌(klebsiella)、变形杆菌(proteus)、沙雷氏菌(serratia)、假单胞菌(pseudomonas)、军团菌(legionella)、白喉(diphtheria)、沙门氏菌(salmonella)、杆菌(bacilli)、霍乱(cholera)细菌、破伤风(tetanus)细菌、肉毒中毒(botulism)、炭疽菌(anthrax)、鼠疫(plague)细菌、钩端螺旋体病(leptospirosis)细菌和莱姆氏病细菌(Lyme's disease bacteria)。

引起可利用本公开的方法治疗的感染的致病性真菌包括但不限于念珠菌(Candida)(白色念珠菌(albicans)、克柔念珠菌(krusei)、光滑念珠菌(glabrata)、热带念珠菌(tropicalis)等)、新型隐球菌(Cryptococcus neoformans)、曲霉菌(Aspergillus)(烟曲霉(fumigatus)、黑曲霉(niger)等)、毛霉目(Genus Mucorales)(毛霉(mucor)、犁头霉(absidia)、根霉(rhizophus))、申克氏孢子丝菌(Sporothrix schenkii)、皮炎芽生菌(Blastomyces dermatitidis)、副球孢子菌(Paracoccidioides brasiliensis)、粗球孢子菌(Coccidioides immitis)和荚膜组织胞浆菌(Histoplasma capsulatum)。

引起可利用本公开的方法治疗的感染的致病性寄生虫包括但不限于溶组织内阿米巴(Entamoeba histolytica)、结肠小袋绦虫(Balantidium coli)、福氏耐格里变形虫(Naegleriafowleri)、棘阿米巴原虫属(Acanthamoeba sp.)、蓝氏贾第鞭毛虫(Giardialambia)、隐孢子虫属(Cryptosporidium sp.)、卡氏肺囊虫(Pneumocystis carinii)、间日疟原虫(Plasmodium vivax)、微小巴贝虫(Babesia microti)、布氏锥虫(Trypanosomabrucei)、克氏锥虫(Trypanosoma cruzi)、杜氏利什曼原虫(Leishmania donovani)、刚地弓形虫(Toxoplasma gondi)和巴西日圆线虫(Nippostrongylus brasiliensis)。

当将多种药剂施用给患者时，所述药剂可同时、分开、依序或组合施用(对于超过两种剂)。

安全且有效地施用大部分这些化学治疗剂的方法本领域技术人员已知的。此外，其施用在标准文献中有描述。例如，许多化学治疗剂的施用描述于“Physicians'DeskReference”(PDR,例如1996版,Medical Economics Company,Montvale,NJ)，其公开内容以引用的方式并入本文中，就如同完整的阐述一般。

II.免疫检查点疗法

本公开的化合物可与一种或多种免疫检查点抑制剂组合使用以治疗疾病，例如癌症或感染。例示性免疫检查点抑制剂包括针对免疫检查点分子的抑制剂，所述免疫检查点分子例如有CBL-B、CD20、CD28、CD40、CD70、CD122、CD96、CD73、CD47、CDK2、GITR、CSF1R、JAK、PI3Kδ、PI3Kγ、TAM、精氨酸酶、HPK1、CD137(又称为4-1BB)、ICOS、A2AR、B7-H3、B7-H4、BTLA、CTLA-4、LAG3、TIM3、TLR(TLR7/8)、TIGIT、CD112R、VISTA、PD-1、PD-L1和PD-L2。在一些实施方案中，免疫检查点分子是选自以下的刺激性检查点分子：CD27、CD28、CD40、ICOS、OX40、GITR和CD137。在一些实施方案中，免疫检查点分子是选自以下的抑制性检查点分子：A2AR、B7-H3、B7-H4、BTLA、CTLA-4、IDO、KIR、LAG3、PD-1、TIM3、TIGIT和VISTA。在一些实施方案中，本文所提供的化合物可与一种或多种选自以下的剂组合使用：KIR抑制剂、TIGIT抑制剂、LAIR1抑制剂、CD160抑制剂、2B4抑制剂和TGFRβ抑制剂。

在一些实施方案中，本文所提供的化合物可与免疫检查点分子的一种或多种激动剂组合使用，所述免疫检查点分子例如有OX40、CD27、GITR和CD137(又称为4-1BB)。

在一些实施方案中，免疫检查点分子的抑制剂是抗PD1抗体、抗PD-L1抗体或抗CTLA-4抗体。

在一些实施方案中，免疫检查点分子的抑制剂是PD-1或PD-L1抑制剂，例如抗PD-1或抗PD-L1单克隆抗体。在一些实施方案中，抗PD-1或抗PD-L1抗体是纳武单抗(nivolumab)、帕博利珠单抗(pembrolizumab)、阿替利珠单抗(atezolizumab)、度伐利尤单抗(durvalumab)、阿维鲁单抗(avelumab)、西米普利单抗(cemiplimab)、阿替利珠单抗、阿维鲁单抗、替雷利珠单抗(tislelizumab)、斯巴达珠单抗(spartalizumab)(PDR001)、西曲利单抗(cetrelimab)(JNJ-63723283)、特瑞普利单抗(toripalimab)(JS001)、卡瑞利珠单抗(camrelizumab)(SHR-1210)、信迪利单抗(sintilimab)(IBI308)、AB122(GLS-010)、AMP-224、AMP-514/MEDI-0680、BMS936559、JTX-4014、BGB-108、SHR-1210、MEDI4736、FAZ053、BCD-100、KN035、CS1001、BAT1306、LZM009、AK105、HLX10、SHR-1316、CBT-502(TQB2450)、A167(KL-A167)、STI-A101(ZKAB001)、CK-301、BGB-A333、MSB-2311、HLX20、TSR-042或LY3300054。在一些实施方案中，PD-1或PD-L1抑制剂是以下各案中公开者：美国专利号7,488,802、7,943,743、8,008,449、8,168,757、8,217,149或10,308,644；美国公开号2017/0145025、2017/0174671、2017/0174679、2017/0320875、2017/0342060、2017/0362253、2018/0016260、2018/0057486、2018/0177784、2018/0177870、2018/0179179、2018/0179201、2018/0179202、2018/0273519、2019/0040082、2019/0062345、2019/0071439、2019/0127467、2019/0144439、2019/0202824、2019/0225601、2019/0300524或2019/0345170；或PCT公开号WO 03042402、WO 2008156712、WO 2010089411、WO 2010036959、WO2011066342、WO 2011159877、WO 2011082400或WO 2011161699，各案以全文引用的方式并入本文中。在一些实施方案中，PD-L1抑制剂是INCB086550。

在一些实施方案中，抗体是抗PD-1抗体，例如抗PD-1单克隆抗体。在一些实施方案中，抗PD-1抗体是纳武单抗、帕博利珠单抗、西米普利单抗、斯巴达珠单抗、卡瑞利珠单抗、西曲利单抗、特瑞普利单抗、信迪利单抗、AB122、AMP-224、JTX-4014、BGB-108、BCD-100、BAT1306、LZM009、AK105、HLX10或TSR-042。在一些实施方案中，抗PD-1抗体是纳武单抗、帕博利珠单抗、西米普利单抗、斯巴达珠单抗、卡瑞利珠单抗、西曲利单抗、特瑞普利单抗或信迪利单抗。在一些实施方案中，抗PD-1抗体是帕博利珠单抗。在一些实施方案中，抗PD-1抗体是纳武单抗。在一些实施方案中，抗PD-1抗体是西米普利单抗。在一些实施方案中，抗PD-1抗体是斯巴达珠单抗。在一些实施方案中，抗PD-1抗体是卡瑞利珠单抗。在一些实施方案中，抗PD-1抗体是西曲利单抗。在一些实施方案中，抗PD-1抗体是特瑞普利单抗。在一些实施方案中，抗PD-1抗体是信迪利单抗。在一些实施方案中，抗PD-1抗体是AB122。在一些实施方案中，抗PD-1抗体是AMP-224。在一些实施方案中，抗PD-1抗体是JTX-4014。在一些实施方案中，抗PD-1抗体是BGB-108。在一些实施方案中，抗PD-1抗体是BCD-100。在一些实施方案中，抗PD-1抗体是BAT1306。在一些实施方案中，抗PD-1抗体是LZM009。在一些实施方案中，抗PD-1抗体是AK105。在一些实施方案中，抗PD-1抗体是HLX10。在一些实施方案中，抗PD-1抗体是TSR-042。在一些实施方案中，抗PD-1抗体是纳武单抗或帕博利珠单抗。在一些实施方案中，抗PD-1单克隆抗体是MGA012(INCMGA0012；瑞弗利单抗(retifanlimab))。在一些实施方案中，抗PD1抗体是SHR-1210。其它抗癌剂包括抗体治疗剂，例如4-1BB(例如乌瑞芦单抗(urelumab)、乌托鲁单抗(utomilumab))。在一些实施方案中，免疫检查点分子的抑制剂是PD-L1抑制剂，例如抗PD-L1单克隆抗体。在一些实施方案中，抗PD-L1单克隆抗体是阿替利珠单抗、阿维鲁单抗、度伐利尤单抗、替雷利珠单抗、BMS-935559、MEDI4736、阿替利珠单抗(MPDL3280A；又称为RG7446)、阿维鲁单抗(MSB0010718C)、FAZ053、KN035、CS1001、SHR-1316、CBT-502、A167、STI-A101、CK-301、BGB-A333、MSB-2311、HLX20或LY3300054。在一些实施方案中，抗PD-L1抗体是阿替利珠单抗、阿维鲁单抗、度伐利尤单抗或替雷利珠单抗。在一些实施方案中，抗PD-L1抗体是阿替利珠单抗。在一些实施方案中，抗PD-L1抗体是阿维鲁单抗。在一些实施方案中，抗PD-L1抗体是度伐利尤单抗。在一些实施方案中，抗PD-L1抗体是替雷利珠单抗。在一些实施方案中，抗PD-L1抗体是BMS-935559。在一些实施方案中，抗PD-L1抗体是MEDI4736。在一些实施方案中，抗PD-L1抗体是FAZ053。在一些实施方案中，抗PD-L1抗体是KN035。在一些实施方案中，抗PD-L1抗体是CS1001。在一些实施方案中，抗PD-L1抗体是SHR-1316。在一些实施方案中，抗PD-L1抗体是CBT-502。在一些实施方案中，抗PD-L1抗体是A167。在一些实施方案中，抗PD-L1抗体是STI-A101。在一些实施方案中，抗PD-L1抗体是CK-301。在一些实施方案中，抗PD-L1抗体是BGB-A333。在一些实施方案中，抗PD-L1抗体是MSB-2311。在一些实施方案中，抗PD-L1抗体是HLX20。在一些实施方案中，抗PD-L1抗体是LY3300054。

在一些实施方案中，免疫检查点分子的抑制剂是结合至PD-L1的小分子或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，免疫检查点分子的抑制剂是结合并内化PD-L1的小分子或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，免疫检查点分子的抑制剂是选自US 2018/0179201、US2018/0179197、US2018/0179179、US 2018/0179202、US2018/0177784、US2018/0177870、美国系列号16/369,654(2019年3月29日申请)和美国系列号62/688,164中的化合物的化合物，或其药学上可接受的盐，各案以全文引用的方式并入本文中。

在一些实施方案中，免疫检查点分子的抑制剂是KIR、TIGIT、LAIR1、CD160、2B4和TGFRβ的抑制剂。

在一些实施方案中，抑制剂是MCLA-145。

在一些实施方案中，免疫检查点分子的抑制剂是CTLA-4抑制剂，例如抗CTLA-4抗体。在一些实施方案中，抗CTLA-4抗体是伊匹单抗(ipilimumab)、曲美木单抗(tremelimumab)、AGEN1884或CP-675,206。

在一些实施方案中，免疫检查点分子的抑制剂是LAG3抑制剂，例如抗LAG3抗体。在一些实施方案中，抗LAG3抗体是BMS-986016、LAG525、INCAGN2385或依替莫德α(eftilagimod alpha)(IMP321)。

在一些实施方案中，免疫检查点分子的抑制剂是CD73抑制剂。在一些实施方案中，CD73抑制剂是奥来鲁单抗(oleclumab)。

在一些实施方案中，免疫检查点分子的抑制剂是TIGIT抑制剂。在一些实施方案中，TIGIT抑制剂是OMP-31M32。

在一些实施方案中，免疫检查点分子的抑制剂是VISTA抑制剂。在一些实施方案中，VISTA抑制剂是JNJ-61610588或CA-170。

在一些实施方案中，免疫检查点分子的抑制剂是B7-H3抑制剂。在一些实施方案中，B7-H3抑制剂是依诺妥珠单抗(enoblituzumab)、MGD009或8H9。

在一些实施方案中，免疫检查点分子的抑制剂是KIR抑制剂。在一些实施方案中，KIR抑制剂是利瑞鲁单抗(lirilumab)或IPH4102。

在一些实施方案中，免疫检查点分子的抑制剂是A2aR抑制剂。在一些实施方案中，A2aR抑制剂是CPI-444。

在一些实施方案中，免疫检查点分子的抑制剂是TGF-β抑制剂。在一些实施方案中，TGF-β抑制剂是曲贝德生(trabedersen)、吉瑞替尼(galusertinib)或M7824。

在一些实施方案中，免疫检查点分子的抑制剂是PI3K-γ抑制剂。在一些实施方案中，PI3K-γ抑制剂是IPI-549。

在一些实施方案中，免疫检查点分子的抑制剂是CD47抑制剂。在一些实施方案中，CD47抑制剂是Hu5F9-G4或TTI-621。

在一些实施方案中，免疫检查点分子的抑制剂是CD73抑制剂。在一些实施方案中，CD73抑制剂是MEDI9447。

在一些实施方案中，免疫检查点分子的抑制剂是CD70抑制剂。在一些实施方案中，CD70抑制剂是古妥珠单抗(cusatuzumab)或BMS-936561。

在一些实施方案中，免疫检查点分子的抑制剂是TIM3抑制剂，例如抗TIM3抗体。在一些实施方案中，抗TIM3抗体是INCAGN2390、MBG453或TSR-022。

在一些实施方案中，免疫检查点分子的抑制剂是CD20抑制剂，例如抗CD20抗体。在一些实施方案中，抗CD20抗体是奥妥珠单抗(obinutuzumab)或利妥昔单抗。

在一些实施方案中，免疫检查点分子的激动剂是OX40、CD27、CD28、GITR、ICOS、CD40、TLR7/8和CD137(又称为4-1BB)的激动剂。

在一些实施方案中，CD137的激动剂是乌瑞芦单抗。在一些实施方案中，CD137的激动剂是乌托鲁单抗。

在一些实施方案中，免疫检查点分子的激动剂是GITR抑制剂。在一些实施方案中，GITR的激动剂是TRX518、MK-4166、INCAGN1876、MK-1248、AMG228、BMS-986156、GWN323、MEDI1873或MEDI6469。在一些实施方案中，免疫检查点分子的激动剂是OX40的激动剂，例如OX40激动剂抗体或OX40L融合蛋白。在一些实施方案中，抗OX40抗体是INCAGN01949、MEDI0562(他利昔珠单抗(tavolimab))、MOXR-0916、PF-04518600、GSK3174998、BMS-986178或9B12。在一些实施方案中，OX40L融合蛋白是MEDI6383。

在一些实施方案中，免疫检查点分子的激动剂是CD40的激动剂。在一些实施方案中，CD40的激动剂是CP-870893、ADC-1013、CDX-1140、SEA-CD40、RO7009789、JNJ-64457107、APX-005M或Chi Lob 7/4。

在一些实施方案中，免疫检查点分子的激动剂是ICOS的激动剂。在一些实施方案中，ICOS的激动剂是GSK-3359609、JTX-2011或MEDI-570。

在一些实施方案中，免疫检查点分子的激动剂是CD28的激动剂。在一些实施方案中，CD28的激动剂是替拉珠单抗(theralizumab)。

在一些实施方案中，免疫检查点分子的激动剂是CD27的激动剂。在一些实施方案中，CD27的激动剂是伐立鲁单抗(varlilumab)。

在一些实施方案中，免疫检查点分子的激动剂是TLR7/8的激动剂。在一些实施方案中，TLR7/8的激动剂是MEDI9197。

本公开的化合物可与双特异性抗体组合使用。在一些实施方案中，双特异性抗体的一个结构域靶向PD-1、PD-L1、CTLA-4、GITR、OX40、TIM3、LAG3、CD137、ICOS、CD3或TGFβ受体。在一些实施方案中，双特异性抗体结合至PD-1和PD-L1。在一些实施方案中，结合至PD-1和PD-L1的双特异性抗体是MCLA-136。在一些实施方案中，双特异性抗体结合至PD-L1和CTLA-4。在一些实施方案中，结合至PD-L1和CTLA-4的双特异性抗体是AK104。

在一些实施方案中，本公开的化合物可与一种或多种代谢酶抑制剂组合使用。在一些实施方案中，代谢酶抑制剂是IDO1、TDO或精氨酸酶的抑制剂。IDO1抑制剂的实例包括艾卡哚司他、NLG919、BMS-986205、PF-06840003、IOM2983、RG-70099和LY338196。精氨酸酶抑制剂的抑制剂包括INCB1158。

如通篇所提供的，所述额外化合物、抑制剂、剂等可与本公开的化合物以单一或连续剂型组合，或它们可作为独立剂型同时或依序施用。

配制物、剂型和施用

当作为药剂使用时，本公开的化合物可按药物组合物形式施用。因此，本公开提供了一种组合物，该组合物包含式I、II或本文所描述的任何式的化合物、如任何权利要求中所列举和本文所描述的化合物或其药学上可接受的盐，或其任何实施方案，以及至少一种药学上可接受的载体或赋形剂。这些组合物可按制药领域中众所周知的方式制备，并且可以取决于适合局部还是全身治疗以及待治疗的区域，通过多种途径施用。施用可以是体表(包括透皮、表皮、眼和粘膜，包括鼻内、阴道和直肠递送)、肺(例如通过吸入或吹入粉末或气雾剂，包括用雾化器；气管内或鼻内)、口服或肠胃外施用。肠胃外施用包括静脉内、动脉内、皮下、腹膜内、肌肉内或注射或输注；或颅内，例如鞘内或室内施用。肠胃外施用可呈单次团注给药形式，或可以例如通过连续灌注泵施用。供体表施用的药物组合物和配制物可包括透皮贴片、油膏、洗剂、乳膏、凝胶剂、滴剂、栓剂、喷雾剂、液体及散剂。常规药物载体、水性、粉末基或油性基质、增稠剂等可能是必要或所希望的。

本发明还包括药物组合物，所述药物组合物含有作为活性成分的本公开的化合物或其药学上可接受的盐，以及一种或多种药学上可接受的载体或赋形剂。在一些实施方案中，所述组合物适合体表施用。在制备本发明的组合物时，典型地将活性成分与赋形剂混合，用赋形剂稀释或包封于例如呈胶囊、药囊、纸或其它容器形式的此类载体内。当赋形剂充当稀释剂时，该赋形剂可以是固体、半固体或液体材料，它充当活性成分的媒剂、载体或介质。因此，所述组合物可呈片剂、丸剂、散剂、口含片、药囊、扁囊剂、酏剂、悬浮液、乳液、溶液、糖浆、气雾剂(呈固体形式或于液体介质中)、含有例如至多10重量％活性化合物的油膏、软和硬明胶胶囊、栓剂、无菌注射溶液和无菌包装粉末形式。

在制备配制物时，活性化合物在与其它成分组合之前，可被研磨以提供适当粒度。如果活性化合物基本上不可溶，则可将其研磨成小于200目的粒度。如果活性化合物基本上溶于水中，则可通过研磨调整粒度以在配制物中提供基本上均匀的分布，例如约40目。

本发明的化合物可使用已知研磨程序，例如湿式研磨进行研磨，以获得适于片剂形成和其它配制物类型的粒度。本发明的化合物的细粉状(纳米颗粒)制剂可通过本领域中已知的方法制备，参见例如WO 2002/000196。

适合赋形剂的一些实例包括乳糖、右旋糖、蔗糖、山梨糖醇、甘露糖醇、淀粉、阿拉伯胶、磷酸钙、海藻酸盐、黄芪胶、明胶、硅酸钙、微晶纤维素、聚乙烯吡咯烷酮、纤维素、水、糖浆和甲基纤维素。所述配制物可另外包括：润滑剂，例如滑石、硬脂酸镁和矿物油；润湿剂；乳化剂和悬浮剂；防腐剂，例如羟基苯甲酸甲酯和羟基苯甲酸丙酯；甜味剂；以及调味剂。本发明的组合物可被配制成在通过采用本领域中已知的程序施用给患者后，提供活性成分的快速、持续或延迟释放。

在一些实施方案中，药物组合物包含硅化微晶纤维素(SMCC)和至少一种本文所描述的化合物，或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，硅化微晶纤维素包含以w/w计约98％的微晶纤维素和约2％的二氧化硅。

在一些实施方案中，所述组合物是持续释放组合物，该组合物包含至少一种本文所描述的化合物或其药学上可接受的盐，以及至少一种药学上可接受的载体或赋形剂。在一些实施方案中，所述组合物包含至少一种本文所描述的化合物或其药学上可接受的盐，以及至少一种选自以下的组分：微晶纤维素、单水合乳糖、羟丙基甲基纤维素和聚氧化乙烯。在一些实施方案中，所述组合物包含至少一种本文所描述的化合物或其药学上可接受的盐，以及微晶纤维素、单水合乳糖和羟丙基甲基纤维素。在一些实施方案中，所述组合物包含至少一种本文所描述的化合物或其药学上可接受的盐，以及微晶纤维素、单水合乳糖和聚氧化乙烯。在一些实施方案中，所述组合物还包含硬脂酸镁或二氧化硅。在一些实施方案中，微晶纤维素是Avicel PH102^TM。在一些实施方案中，单水合乳糖是Fast-flo 316^TM。在一些实施方案中，羟丙基甲基纤维素是羟丙基甲基纤维素2208K4M(例如Methocel K4MPremier^TM)和/或羟丙基甲基纤维素2208K100LV(例如Methocel K00LV^TM)。在一些实施方案中，聚氧化乙烯是聚氧化乙烯WSR 1105(例如Polyox WSR 1105^TM)。

在一些实施方案中，使用了湿式造粒方法来制造组合物。在一些实施方案中，使用了干式造粒方法来制造组合物。

所述组合物可被配制成单位剂型形式，各剂量含有约5至约1,000mg(1g)，更通常含有约100mg至约500mg的活性成分。在一些实施方案中，各剂量含有约10mg活性成分。在一些实施方案中，各剂量含有约50mg活性成分。在一些实施方案中，各剂量含有约25mg活性成分。术语“单位剂型”是指适合以单一剂量用于人类受试者和其它哺乳动物的物理上不连续的单元，各单元含有所计算的产生所希望的治疗作用的预定量的活性材料，以及适合药物赋形剂。

用于配制药物组合物的组分具有该纯度并且基本上不含可能有害的杂质(例如至少是国家食品级，一般至少是分析级，并且更典型地是至少药物级)。特别是对于人类消费来说，组合物优选是根据美国食品与药品管理局的适用法规中所定义的良好作业实践标准制造或配制。例如，适合配制物可以是无菌和/或大体上等渗的和/或完全符合美国食品与药品管理局的所有良好作业实践规范。

活性化合物可在较宽剂量范围内有效并且一般是以治疗有效量施用。然而，应理解，实际施用的化合物的量通常将由医师根据相关情况决定，包括待治疗的病况、所选施用途径、施用的实际化合物、个别患者的年龄、体重和反应、患者症状的严重程度等。

本发明的化合物的治疗剂量可根据例如治疗的特定用途、化合物的施用方式及处方医师的判断而变化。药物组合物中本发明的化合物的比例或浓度可取决于多种因素而变化，所述因素包括剂量、化学特征(例如疏水性)和施用途径。例如，本发明的化合物可以按含有约0.1至约10％w/v化合物的水性生理缓冲液形式提供以供肠胃外施用。一些典型剂量范围是每天每公斤体重约1μg/kg至约1g。在一些实施方案中，剂量范围是每天每公斤体重约0.01mg至约100mg。剂量很可能取决于例如以下变量：疾病或病症的类型和进展程度、特定患者的总体健康状态、所选化合物的相对生物功效、赋形剂的配方以及其施用途径。有效剂量可从由体外或动物模型测试系统得到的剂量-反应曲线外推得到。

为制备固体组合物，例如片剂，将主要活性成分与药物赋形剂混合以形成含有本发明的化合物的均匀混合物的固体预配制组合物。当提到这些预配制组合物是均质的时，典型地将活性成分均匀地分散于整个组合物中，由此使该组合物能够容易地再分成同等有效的单位剂型，例如片剂、丸剂和胶囊。接着，将这一固体预配制物再分成以上所描述的类型的单位剂型，所述单位剂型含有例如约0.1至约1000mg本发明的活性成分。

本发明的片剂或丸剂可被包覆包衣或以其它方式混配以提供具有长期作用优势的剂型。例如，片剂或丸剂可包含内部剂量组分和外部剂量组分，后者呈在前者上的包膜形式。两种组分可利用肠溶层隔开，该肠溶层用于阻止在胃中崩解并容许内部组分完整进入十二指肠中或延迟释放。多种材料可用于此类肠溶层或包衣，此类材料包括多种聚合酸以及聚合酸与如虫胶、鲸蜡醇和乙酸纤维素之类材料的混合物。

可并入本发明的化合物和组合物以供口服施用或通过注射施用的液体形式包括水溶液、适当调味的糖浆、水性或油性悬浮液，以及利用如棉籽油、芝麻油、椰子油或花生油之类可食用油的调味乳液，以及酏剂和类似药物媒剂。

供吸入或吹入的组合物包括于药学上可接受的水性或有机溶剂或其混合物中的溶液和悬浮液，以及粉末。液体或固体组合物可含有如上文所描述的适合药学上可接受的赋形剂。在一些实施方案中，组合物是通过口服或经鼻呼吸道途径施用以获得局部或全身作用。组合物可通过使用惰性气体雾化。雾化溶液可从雾化装置直接吸入，或雾化装置可附接至面罩、围罩或间歇性正压呼吸机。溶液、悬浮液或粉末组合物可从以适当方式递送配制物的装置口服或经鼻施用。

体表配制物可含有一种或多种常规载体。在一些实施方案中，油膏可含有水以及一种或多种选自以下的疏水性载体：例如液体石蜡、聚氧乙烯烷基醚、丙二醇、白凡士林等。乳膏的载体组合物可基于水与甘油和一种或多种其它组分的组合，所述一种或多种其它组分例如甘油单硬脂酸酯、PEG-甘油单硬脂酸酯和鲸蜡硬脂醇。凝胶可使用异丙醇和水，适当地组合如甘油、羟乙基纤维素等其它组分配制。在一些实施方案中，体表配制物含有至少约0.1wt％、至少约0.25wt％、至少约0.5wt％、至少约1wt％、至少约2wt％或至少约5wt％的本发明的化合物。体表配制物可适当地包装于例如100g的管中，所述管任选地附有关于治疗选定适应症，例如牛皮癣或其它皮肤疾患的说明书。

施用给患者的化合物或组合物的量将取决于施用的物质、如预防或治疗等施用目的、患者的状态、施用方式等而变化。在治疗应用中，可将足以治愈或至少部分停滞疾病症状和其并发症的量的组合物施用给已患有疾病的患者。有效剂量将取决于所治疗的疾病以及主治医师依据如疾病的严重程度、患者的年龄、体重和一般状况等因素的判断。

施用给患者的组合物可呈以上描述的药物组合物形式。这些组合物可通过常规灭菌技术进行灭菌，或可以进行无菌过滤。水性溶液可被包装成以原样使用，或被冻干，冻干的制剂在施用之前要与无菌水性载体组合。化合物制备的pH值典型地在3与11之间，更优选是5至9并且最优选是7至8。应理解，使用某些前述赋形剂、载体或稳定剂将引起药物盐的形成。

本发明的化合物的治疗剂量可根据例如治疗的特定用途、化合物的施用方式及处方医师的判断而变化。药物组合物中本发明的化合物的比例或浓度可取决于多种因素而变化，所述因素包括剂量、化学特征(例如疏水性)和施用途径。例如，本发明的化合物可以按含有约0.1至约10％w/v化合物的水性生理缓冲液形式提供以供肠胃外施用。一些典型剂量范围是每天每公斤约1μg至约1g。在一些实施方案中，剂量范围是每天每公斤体重约0.01mg至约100mg。剂量很可能取决于例如以下变量：疾病或病症的类型和进展程度、特定患者的总体健康状态、所选化合物的相对生物功效、赋形剂的配方以及其施用途径。有效剂量可从由体外或动物模型测试系统得到的剂量-反应曲线外推得到。

标记的化合物和测定方法

本发明另一方面涉及被标记的本公开的化合物(放射性标记、荧光标记等)，所述化合物不仅可用于成像技术中，而且还可用于体外和体内测定中，用于定位和定量包括人类在内的组织样本中的KRAS蛋白，以及用于通过抑制被标记的化合物的结合来鉴别KRAS配体。本公开的化合物中一或多个原子的取代也可用于产生有差异的ADME(吸收、分布、代谢和排泄)。因此，本发明包括KRAS结合测定，所述测定含有此类被标记或被取代的化合物。

本公开还包括同位素标记的本公开的化合物。“同位素”或“放射性标记”的化合物是一个或多个原子被原子质量或质量数不同于自然界典型地发现(即，天然存在)的原子质量或质量数的原子置换或取代。可并入本公开的化合物中的适合放射性核素包括但不限于²H(氘，又写为D)、³H(氚，又写为T)、¹¹C、¹³C、¹⁴C、¹³N、¹⁵N、¹⁵O、¹⁷O、¹⁸O、¹⁸F、³⁵S、³⁶Cl、⁸²Br、⁷⁵Br、⁷⁶Br、⁷⁷Br、¹²³I、¹²⁴I、¹²⁵I和¹³¹I。例如，本公开的化合物中的一个或多个氢原子可被氘原子置换(例如式I、II或本文所提供的任何式的C_1-6烷基的一个或多个氢原子可任选地被氘原子取代，例如–CD₃取代-CH₃)。在一些实施方案中，式I、II或本文所提供的任何式的烷基可以是全氘化的。

本文所呈现的化合物的一个或多个组成原子可被天然或非天然丰度的原子的同位素置换或取代。在一些实施方案中，所述化合物包括至少一个氘原子。在一些实施方案中，所述化合物包括两个或更多个氘原子。在一些实施方案中，所述化合物包括1-2、1-3、1-4、1-5或1-6个氘原子。在一些实施方案中，化合物中的所有氢原子可被氘原子置换或取代。

将同位素纳入有机化合物中的合成方法是本领域中已知的(Deuterium Labelingin Organic Chemistry,Alan F.Thomas(New York,N.Y.,Appleton-Century-Crofts,1971；The Renaissance ofH/D Exchange,Jens Atzrodt,Volker Derdau,Thorsten Fey和Jochen Zimmermann,Angew.Chem.Int.Ed.2007,7744-7765；The Organic Chemistry ofIsotopic Labelling,James R.Hanson,Royal Society of Chemistry,2011)。同位素标记的化合物可用于各种研究中，例如NMR光谱法、代谢实验和/或测定。

用如氘之类较重同位素取代可因较高的代谢稳定性，例如延长的体内半衰期或降低的剂量需求而提供某些治疗益处，并因此在某些情况下可以是优选的。(参见例如A.Kerekes等人,J.Med.Chem.2011,54,201-210；R.Xu等人,J.LabelCompd.Radiopharm.2015,58,308-312)。具体点说，在一个或多个代谢位点处的取代可提供一个或多个治疗优势。

并入本发明的放射性标记的化合物中的放射性核酸将取决于放射性标记的化合物的具体应用。例如，对于体外腺苷受体标记和竞争测定，并入³H、¹⁴C、⁸²Br、¹²⁵I、¹³¹I或³⁵S的化合物可以是有用的。对于放射成像应用，¹¹C、¹⁸F、¹²⁵I、¹²³I、¹²⁴I、¹³¹I、⁷⁵Br、⁷⁶Br或⁷⁷Br可以是有用的。

应理解，“放射性标记”或“标记的化合物”是并入了至少一个放射性核素的化合物。在一些实施方案中，放射性核素选自³H、¹⁴C、¹²⁵I、³⁵S和⁸²Br。

本公开还可包括用于将放射性同位素并入本公开的化合物中的合成方法。用于将放射性同位素并入有机化合物中的合成方法是本领域中众所周知的，并且本领域普通技术人员将易于认识到适用于本公开的化合物的方法。

本发明的被标记的化合物可用于筛选测定中以鉴别和/或评估化合物。例如，可以通过追踪标记，监测在与KRAS接触时化合物的浓度变化来评估被标记的新合成或鉴别的化合物(即，测试化合物)结合KRAS蛋白的能力。例如，可评估测试化合物(被标记)减少另一种已知结合至KRAS蛋白的化合物(即，标准化合物)的结合的能力。因此，测试化合物与标准化合物竞争结合至KRAS蛋白的能力与其结合亲和力直接相关。相反，在一些其它筛选测定中，所述标准化合物被标记，而测试化合物未被标记。因此，监测被标记的标准化合物的浓度以便评估标准化合物与测试化合物之间的竞争，并由此确定测试化合物的相对结合亲和力。

试剂盒

本公开还包括可用于例如治疗或预防与KRAS活性相关的疾病或病症，例如癌症或感染的药物试剂盒，所述试剂盒包括一个或多个容纳药物组合物的容器，该药物组合物包含治疗有效量的式I、II的化合物或其任何实施方案。此类试剂盒还可包括各种常规药物试剂盒组件中的一者或多者，例如含有一种或多种药学上可接受的载体的容器、额外容器等，这是本领域技术人员显而易见的。试剂盒中还可包括呈插页或标签形式的说明书，指示待施用的组分的数量、施用指南和/或有关混合各组分的指导。

本发明将借助于具体实例更详细地描述。以下实施例是出于说明性目的提供，并且不打算以任何方式限制本发明。本领域技术人员将易于认识到可被改变或修改以得到基本上相同的结果的多个非关键参数。已根据至少一个本文所描述的测定发现，实施例的化合物可抑制KRAS的活性。

实施例

本发明的化合物的实验程序提供于下。一些所制备化合物的制备型LC-MS纯化是在Waters质量引导的分步分离系统上执行。有关这些系统的操作的基本设备设置、实验方案和控制软件在文献中有详细描述。参见例如“Two-Pump At Column DilutionConfiguration for Preparative LC-MS”,K.Blom,J.Combi.Chem.,4,295(2002)；“Optimizing Preparative LC-MS Configurations and Methods for ParallelSynthesis Purification”,K.Blom,R.Sparks,J.Doughty,G.Everlof,T.Haque,A.Combs,J.Combi.Chem.,5,670(2003)；以及“Preparative LC-MS Purification:ImprovedCompound Specific Method Optimization”,K.Blom,B.Glass,R.Sparks,A.Combs,J.Combi.Chem.,6,874-883(2004)。分离的化合物典型地经历分析型液相色谱质谱法(LCMS)进行纯度检查。

分离的化合物典型地在以下条件下进行分析型液相色谱质谱法进行纯度检查：仪器：Agilent 1100系列，LC/MSD；柱：Waters Sunfire^TM C₁₈ 5μm粒度，2.1×5.0mm，缓冲液：流动相A：含0.025％TFA的水，和流动相B：以及乙腈；梯度经3分钟2％至80％B，并且流动速率是2.0mL/min。

所制备的一些化合物也是根据实施例中指示，通过利用MS检测器的反相高效液相色谱法(RP-HPLC)或快速色谱法(硅胶)以制备规模分离。典型制备型反相高效液相色谱(RP-HPLC)柱条件如下：

pH＝2纯化：Waters Sunfire^TM C₁₈ 5μm粒度，19×100mm柱，用以下洗脱：流动相A：含0.1％TFA(三氟乙酸)的水，和流动相B：乙腈；流动速率是30mL/min；各化合物的分离梯度是使用文献[参见“Preparative LCMS Purification:Improved Compound SpecificMethod Optimization”,K.Blom,B.Glass,R.Sparks,A.Combs,J.Comb.Chem.,6,874-883(2004)]中所描述的化合物特异性方法优化方案(Compound Specific MethodOptimization protocol)优化。典型地，使用30×100mm柱的流动速率是60mL/min。

pH＝10纯化：Waters XBridge C₁₈ 5μm粒度，19×100mm柱，用以下洗脱：流动相A：含0.15％NH₄OH的水，和流动相B：乙腈；流动速率是30mL/min；各化合物的分离梯度是使用文献[参见“Preparative LCMS Purification:Improved Compound Specific MethodOptimization”,K.Blom,B.Glass,R.Sparks,A.Combs,J.Comb.Chem.,6,874-883(2004)]中所描述的化合物特异性方法优化方案优化。典型地，使用30×100mm柱的流动速率是60mL/min。

本文中可使用以下缩写：AcOH(乙酸)；Ac₂O(乙酸酐)；aq.(水溶液)；atm.(大气压)；Boc(叔丁氧羰基)；BOP((苯并三唑-1-基氧基)三(二甲基氨基)膦鎓六氟磷酸盐)；br(宽峰)；Cbz(羧基苯甲基)；calc.(计算值)；d(双峰)；dd(两个双峰)；DBU(1,8-二氮杂双环[5.4.0]十一碳-7-烯)；DCM(二氯甲烷)；DIAD(N,N'-二异丙基叠氮二甲酸酯)；DIEA(N,N-二异丙基乙胺)；DIPEA(N,N-二异丙基乙胺)；DIBAL(二异丁基氢化铝)；DMF(N,N-二甲基甲酰胺)；Et(乙基)；EtOAc(乙酸乙酯)；FCC(快速柱色谱法)；g(克)；h(小时)；HATU(六氟磷酸N,N,N',N'-四甲基-O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)脲)；HCl(盐酸)；HPLC(高效液相色谱法)；Hz(赫兹)；J(耦合常数)；LCMS(液相色谱-质谱法)；LDA(二异丙基胺基锂)；m(多重峰)；M(摩尔浓度)；mCPBA(3-氯过氧苯甲酸)；MS(质谱法)；Me(甲基)；MeCN(乙腈)；MeOH(甲醇)；mg(毫克)；min.(分钟)；mL(毫升)；mmol(毫摩尔)；N(当量)；NCS(N-氯代琥珀酰亚胺)；NEt₃(三乙胺)；nM(纳摩尔浓度)；NMP(N-甲基吡咯烷酮)；NMR(核磁共振光谱法)；OTf(三氟甲烷磺酸酯)；Ph(苯基)；pM(皮摩尔浓度)；PPT(沉淀)；RP-HPLC(反相高效液相色谱法)；r.t.(室温)；s(单峰)；t(三重峰或叔-)；TBS(叔丁基二甲基硅烷基)；tert(叔)；tt(三个三重峰)；TFA(三氟乙酸)；THF(四氢呋喃)；μg(微克)；μL(微升)；μM(微摩尔浓度)；wt％(重量百分比)。盐水是饱和氯化钠水溶液。真空中是在真空下。

中间体1.7-溴-2,4-二氯-8-氟-6-碘-3-硝基喹啉

步骤1. 2-氨基-4-溴-3-氟-5-碘苯甲酸

将NIS(9.61g，42.7mmol)添加至2-氨基-4-溴-3-氟苯甲酸(10.0g，42.7mmol)于DMF(100mL)中的溶液中，接着在80℃下搅拌反应6小时。用冰水冷却混合物，接着添加水(150mL)并搅拌20分钟，将沉淀过滤并用水洗涤，干燥，得到呈固体状的所需产物。C₇H₅BrFINO₂的LCMS计算值(M+H)⁺:m/z＝359.9；实验值359.8。

步骤2. 7-溴-8-氟-6-碘-2H-苯并[d][1,3]噁嗪-2,4(1H)-二酮

向2-氨基-4-溴-3-氟-5-碘苯甲酸(8.4g，23.34mmol)于1,4-二噁烷(200mL)中的溶液中添加三光气(6.34g，21.37mmol)，并在100℃下搅拌1小时。冷却至室温后，添加冰，直至固体沉淀。接着，将混合物用水(最终体积为约400mL)充分稀释并通过过滤收集固体，接着空气干燥。将粗产物不经进一步纯化即用于下一步骤中。

步骤3. 7-溴-8-氟-6-碘-3-硝基喹啉-2,4-二醇

在室温下，将DIPEA(6.06ml，34.7mmol)添加至2-硝基乙酸乙酯(4.62g，17.36mmol)于甲苯(10.0mL)中的溶液中并搅拌10分钟。接着，将7-溴-8-氟-6-碘-2H-苯并[d][1,3]噁嗪-2,4(1H)-二酮(6.7g，17.36mmol)添加至反应混合物中并在95℃下搅拌反应3小时。将反应物用冰水冷却，接着添加1N HCl(40mL)。通过过滤收集固体沉淀，接着用少量乙酸乙酯洗涤，得到呈黄色固体状的所需产物(6g，81％)。C₉H₄BrFIN₂O₄的LCMS计算值(M+H)⁺:m/z＝428.8；实验值428.8。

步骤4. 7-溴-2,4-二氯-8-氟-6-碘-3-硝基喹啉

将DIPEA(3.67mL，21.03mmol)添加至7-溴-8-氟-6-碘-3-硝基喹啉-2,4-二醇(4.51g，10.51mmol)于POCl₃(4.9mL，52.6mmol)中的混合物中，接着在105℃下搅拌反应3小时。在真空下去除溶剂，接着与甲苯共沸3次，得到粗材料，该粗材料不经进一步纯化即用于下一步骤中。

中间体2.(2S,4S)-4-(7-溴-4-(3-(二甲基氨基)-3-甲基氮杂环丁烷-1-基)-6-氟-8-碘-1H-[1,2,3]三唑并[4,5-c]喹啉-1-基)-2-(2-(叔丁氧基)-2-氧代乙基)哌啶-1-甲酸叔丁酯

步骤1.(2S,4S)-4-((3-氨基-7-溴-2-(3-(二甲基氨基)-3-甲基氮杂环丁烷-1-基)-8-氟-6-碘喹啉-4-基)氨基)-2-(2-(叔丁氧基)-2-氧代乙基)哌啶-1-甲酸叔丁酯

在室温下，将DIPEA(15.37ml，88mmol)添加至7-溴-2,4-二氯-8-氟-6-碘-3-硝基喹啉(中间体1)(20.49g，44mmol)和(2S,4S)-4-氨基-2-(2-(叔丁氧基)-2-氧代乙基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(中间体6)(13.83g，44mmol)于CH₂Cl₂(100mL)中的溶液中。在50℃下搅拌反应3小时。完全转化后，将N,N,3-三甲基氮杂环丁-3-胺二盐酸盐(9.98g，52.8mmol)和另一份2当量的DIPEA(15.37mL，88mmol)添加至反应混合物中并在50℃下搅拌过夜。将反应内容物转移至分液漏斗中，并用饱和NH₄Cl(200mL)和盐水(100mL)洗涤。将有机相经MgSO₄干燥并浓缩。

将浓缩的残余物再溶解于MeOH(50mL)、CH₂Cl₂(10mL)和氢氧化铵水溶液(57mL，440mmol)中。一次性添加连二亚硫酸钠(23g，132mmol)，接着在室温下剧烈搅拌反应过夜。完成后，通过添加H₂O(100mL)淬灭反应，并用CH₂Cl₂(100mL)萃取。将有机相用H₂O洗涤两次，经Na₂SO₄干燥，接着浓缩，得到呈红色粘性油状的所希望的二胺产物(18.21g，经2个步骤56％)。C₃₁H₄₆BrFIN₆O₄的LCMS计算值(M+H)⁺:m/z＝791.2；实验值：791.1。

步骤2.(2S,4S)-4-(7-溴-4-(3-(二甲基氨基)-3-甲基氮杂环丁烷-1-基)-6-氟-8-碘-1H-[1,2,3]三唑并[4,5-c]喹啉-1-基)-2-(2-(叔丁氧基)-2-氧代乙基)哌啶-1-甲酸叔丁酯

将来自步骤1的粗二胺(18.21g，23mmol)溶解于冰乙酸(57.9mL，1012mmol)中。一次性添加亚硝酸钠(2.38g，34.5mmol)。在室温下搅拌反应2小时。完成后，将反应内容物倒入剧烈搅拌的冰水中。通过过滤收集沉淀的固体，用NaHCO₃、水和乙醚洗涤。接着，在真空下干燥固体，得到呈褐色固体状的所需产物(15g，81％产率)。C₃₁H₄₃BrFIN₇O₄的LCMS计算值(M+H)⁺:m/z＝802.2；实验值802.1。

中间体3.(2S,4S)-4-(7-溴-4-(3-(二甲基氨基)-3-甲基氮杂环丁烷-1-基)-6-氟-8-(三氟甲基)-1H-[1,2,3]三唑并[4,5-c]喹啉-1-基)-2-(氰基甲基)哌啶-1-甲酸叔丁酯

步骤1.(2S,4S)-4-(7-溴-4-(3-(二甲基氨基)-3-甲基氮杂环丁烷-1-基)-6-氟-8-(三氟甲基)-1H-[1,2,3]三唑并[4,5-c]喹啉-1-基)-2-(2-(叔丁氧基)-2-氧代乙基)哌啶-1-甲酸叔丁酯

向压力容器中装入中间体2(1.10g，1.37mmol)、碘化铜(I)(39mg，0.21mmol)、1,10-菲咯啉(37mg，0.21mmol)和氟化钾(239mg，411mmol)。添加DMSO(2.74mL)，并用N₂吹扫容器5分钟。添加硼酸三甲酯(0.46ml，4.11mmol)和三甲基(三氟甲基)硅烷(0.61mL，4.11mmol)，随后将压力容器密封并加热至80℃过夜。使容器冷却至室温，接着在冰浴中冷却并小心地打开。将反应混合物用EtOAc(20mL)稀释并用NaHCO₃、盐水洗涤并浓缩。将粗产物在硅胶上纯化(20g，50-100％EtOAc于CH₂Cl₂中)，得到褐色固体(634mg，62％产率)。C₃₂H₄₃BrF₄N₇O₄的LCMS计算值(M+H)⁺:m/z＝744.3；实验值：744.2。

步骤2.(2S,4S)-4-(7-溴-4-(3-(二甲基氨基)-3-甲基氮杂环丁烷-1-基)-6-氟-8-(三氟甲基)-1H-[1,2,3]三唑并[4,5-c]喹啉-1-基)-2-(氰基甲基)哌啶-1-甲酸叔丁酯

将(2S,4S)-4-(7-溴-4-(3-(二甲基氨基)-3-甲基氮杂环丁烷-1-基)-6-氟-8-(三氟甲基)-1H-[1,2,3]三唑并[4,5-c]喹啉-1-基)-2-(2-(叔丁氧基)-2-氧代乙基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(6.5g，8.7mmol)溶解于二噁烷(20mL)中，并添加氢氧化锂溶液(7.27mL，6M于H₂O中)。将反应物加热至80℃过夜。叔丁酯完全水解后，添加饱和NH₄Cl(100mL)，并将反应物用EtOAc(3×100mL)萃取。将合并的有机层经Na₂SO₄干燥并浓缩至干，得到2-((2S,4S)-4-(7-溴-4-(3-(二甲基氨基)-3-甲基氮杂环丁烷-1-基)-6-氟-8-(三氟甲基)-1H-[1,2,3]三唑并[4,5-c]喹啉-1-基)-1-(叔丁氧羰基)哌啶-2-基)乙酸。C₂₈H₃₅BrF₄N₇O₄的LCMS计算值(M+H)⁺:m/z＝688.2；实验值688.1。

将羧酸再溶解于THF(20mL)中。添加DIPEA(3.1mL，17.5mmol)并将反应混合物冷却至0℃。接着，添加氯甲酸异丁酯(1.7mL，13.1mmol)。在0℃下搅拌20分钟后，添加氢氧化铵(11.3mL，87mmol)并将混合物再搅拌10分钟。完成后，将反应物用EtOAc(20mL)稀释，用盐水洗涤，经MgSO₄干燥，浓缩，得到(2S,4S)-2-(2-氨基-2-氧代乙基)-4-(7-溴-4-(3-(二甲基氨基)-3-甲基氮杂环丁烷-1-基)-6-氟-8-(三氟甲基)-1H-[1,2,3]三唑并[4,5-c]喹啉-1-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯。C₂₈H₃₆BrF₄N₈O₃的LCMS计算值(M+H)⁺:m/z＝687.2；实验值687.4。

将粗酰胺再溶解于THF(20mL)中并冷却至0℃。依序添加三乙胺(4.9mL，34.9mmol)和TFAA(1.8mL，13.1mol)。搅拌1小时后，通过添加NaHCO₃水溶液(50mL)淬灭反应，用EtOAc(50mL)萃取，经Na₂SO₄干燥，浓缩并在二氧化硅上纯化(100g，0-100％EtOAc于CH₂Cl₂中)，得到呈黄色固体状的标题产物(4.3g，经3个步骤74％产率)。C₂₈H₃₄BrF₄N₈O₂的LCMS计算值(M+H)⁺:m/z＝669.2；实验值669.4。

中间体4.(2S,4S)-4-(7-溴-6-氟-8-碘-4-(甲硫基)-1H-[1,2,3]三唑并[4,5-c]喹啉-1-基)-2-(2-(叔丁氧基)-2-氧代乙基)哌啶-1-甲酸叔丁酯

步骤1.(2S,4S)-4-(7-溴-4-氯-6-氟-8-碘-1H-[1,2,3]三唑并[4,5-c]喹啉-1-基)-2-(2-(叔丁氧基)-2-氧代乙基)哌啶-1-甲酸叔丁酯

在室温下，将DIPEA(1.92ml，11mmol)添加至7-溴-2,4-二氯-8-氟-6-碘-3-硝基喹啉(中间体1)(2.56g，5.5mmol)和(2S,4S)-4-氨基-2-(2-(叔丁氧基)-2-氧代乙基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(中间体6)(1.73g，5.5mmol)于CH₂Cl₂(10mL)中的溶液中。在50℃下搅拌反应3小时。完全转化后，将反应内容物转移至分液漏斗中，并用饱和NH₄Cl(50mL)和盐水(50mL)洗涤。将有机相经MgSO₄干燥并浓缩。

将浓缩的残余物再溶解于MeOH(5mL)、CH₂Cl₂(5mL)和氢氧化铵水溶液(7.3mL，55mmol)中。一次性添加连二亚硫酸钠(2.88g，16.5mmol)，接着在室温下剧烈搅拌反应过夜。完成后，通过添加H₂O(10mL)淬灭反应，并用CH₂Cl₂(50mL)萃取。将有机相用H₂O洗涤两次，经Na₂SO₄干燥，接着浓缩，得到所希望的二胺产物。

将粗二胺溶解于冰乙酸(7.0mL)中。一次性添加亚硝酸钠(0.76g，11mmol)。在室温下搅拌反应20分钟。完成后，将反应内容物倒入剧烈搅拌的冰水中。将反应混合物用DCM萃取。将粗产物在硅胶上纯化(50g，0-100％EtOAc于CH₂Cl₂中)，得到所需产物(1.8g，70％产率)。C₂₅H₃₀BrClFIN₅O₄的LCMS计算值(M+H)⁺:m/z＝724.0；实验值：724.0。

步骤2.(2S,4S)-4-(7-溴-6-氟-8-碘-4-(甲硫基)-1H-[1,2,3]三唑并[4,5-c]喹啉-1-基)-2-(2-(叔丁氧基)-2-氧代乙基)哌啶-1-甲酸叔丁酯

将(2S,4S)-4-(7-溴-4-氯-6-氟-8-碘-1H-[1,2,3]三唑并[4,5-c]喹啉-1-基)-2-(2-(叔丁氧基)-2-氧代乙基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(1.44g，1.99mmol)溶解于CH₂Cl₂(5mL)和MeOH(5mL)中并在室温下搅拌直至均匀。一次性添加硫代甲醇钠(0.28g，3.97mmol)。搅拌1小时后，通过饱和NH₄Cl(10mL)淬灭反应并用EtOAc(20mL)萃取，接着用NaHCO₃洗涤。将合并的有机层经MgSO₄干燥，过滤并浓缩。C₂₆H₃₃BrFIN₅O₄S的LCMS计算值(M+H)⁺:m/z＝736.1；实验值：736.0。

中间体5.4-(7-溴-6-氟-8-碘-4-(甲硫基)-1H-[1,2,3]三唑并[4,5-c]喹啉-1-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯

本化合物是根据中间体4中所描述的程序，用4-氨基哌啶-1-甲酸叔丁酯替代(2S,4S)-4-氨基-2-(2-(叔丁氧基)-2-氧代乙基)哌啶-1-甲酸叔丁酯制备。C₂₀H₂₃BrFIN₅O₂S的LCMS计算值(M+H)⁺:m/z＝622.0；实验值：622.1。

中间体6.(2S,4S)-4-氨基-2-(2-(叔丁氧基)-2-氧代乙基)哌啶-1-甲酸叔丁酯

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步骤1.(R)-6-氰基-5-羟基-3-氧代己酸叔丁酯

将2.0M LDA(100mL，200mmol)于无水THF(223mL)中的溶液冷却至-78℃，保持1小时，接着在搅拌下，经20分钟逐滴添加乙酸叔丁酯(26.9mL，200mmol)。在-78℃下再维持40分钟后，逐滴添加(R)-4-氰基-3-羟基丁酸乙酯的溶液(10.5g，66.8mmol)。将混合物在-40℃下搅拌4小时，接着将适量HCl(2M)添加至混合物中，将pH值保持在约6。在此淬灭期间，混合物的温度维持在-10℃。完成后，将混合物的温度冷却至0℃。用乙酸乙酯(3×100mL)萃取混合物。将合并的有机层用NaHCO₃(100mL)和盐水(100mL)洗涤，经无水Na₂SO₄干燥并浓缩，得到呈黄色油状的材料(15.0g，99％产率)。

步骤2.(2S,4R)-2-(2-(叔丁氧基)-2-氧代乙基)-4-羟基哌啶-1-甲酸叔丁酯

用水合氧化铂(IV)(0.868g，3.30mmol)处理(R)-6-氰基-5-羟基-3-氧代己酸叔丁酯(15.0g，66.0mmol)于乙酸(110ml)中的溶液。将Parr瓶排空并回填H₂三次，并在22℃下，在H₂气氛(45psi，再充气4次)下搅拌3小时。通过硅藻土过滤混合物并用EtOH洗涤滤饼。浓缩滤液，得到具有约9:1顺式:反式非对映异构体比率的产物。

将残余物溶解于甲醇(100mL)中，接着添加Boc酐(15.32ml，66.0mmol)、碳酸钠(13.99g，132mmol)。将反应混合物在室温下搅拌过夜。将混合物过滤并浓缩。将残余物用硅胶柱纯化，得到所需产物(11.7g，56％)。C₁₆H₂₉NNaO₅的LCMS计算值(M+Na)⁺:m/z＝338.2；实验值：338.2。

步骤3.(2S,4S)-4-叠氮基-2-(2-(叔丁氧基)-2-氧代乙基)哌啶-1-甲酸叔丁酯

在0℃下，向(2S,4R)-2-(2-(叔丁氧基)-2-氧代乙基)-4-羟基哌啶-1-甲酸叔丁酯(2.10g，6.66mmol)于DCM(33ml)中的溶液中添加TEA(1.58ml，11.32mmol)和Ms-Cl(0.67mL，8.66mmol)。搅拌1小时后，将反应物用水稀释，并将有机层分离且经Na₂SO₄干燥，过滤并浓缩，将所得残余物溶解于DMF中并添加叠氮化钠(1.3g，20mmol)，并将反应混合物在70℃下加热5小时。在冷却至室温后，将反应物用EtOAc和水稀释。将有机层分离并经Na₂SO₄干燥，过滤并浓缩。将残余物用硅胶柱纯化，得到所需产物(1.90g，84％)。C₁₁H₂₁N₄O₂的LCMS计算值(产物-Boc)(M+H)⁺:m/z＝241.2；实验值：241.2。

步骤4.(2S,4S)-4-氨基-2-(2-(叔丁氧基)-2-氧代乙基)哌啶-1-甲酸叔丁酯

向(2S,4S)-4-叠氮基-2-(2-(叔丁氧基)-2-氧代乙基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(1.9g，5.58mmol)于甲醇(27.9ml)中的溶液中添加10％钯/碳(0.594g，0.558mmol)。将反应混合物在真空下排空并再填入H₂，在室温下搅拌2小时。将反应混合物通过硅藻土垫过滤并用甲醇洗涤。浓缩滤液，并以原样使用(1.5g，85％)。C₁₆H₃₁N₂O₄的LCMS计算值(M+H)⁺:m/z＝315.2；实验值：315.2。

中间体7.(2S,4S)-4-氨基-2-(氰基甲基)哌啶-1-甲酸叔丁酯

步骤1.(2S,4S)-4-(((苯甲氧基)羰基)氨基)-2-(2-(叔丁氧基)-2-氧代乙基)哌啶-1-甲酸叔丁酯

向中间体6(5.2g，16.54mmol)于CH₂Cl₂(80.0mL)中的搅拌溶液中添加N-(苯甲氧基-羰氧基)琥珀酰亚胺(4.95g，19.85mmol)，随后添加DIPEA(4.33mL，24.81mmol)。将混合物在室温下搅拌2小时，接着用水稀释。用水和盐水萃取混合物。将合并的有机层经MgSO₄干燥，过滤，浓缩并且不经进一步纯化即直接用于下一步骤中。

步骤2. 2-((2S,4S)-4-(((苯甲氧基)羰基)氨基)哌啶-2-基)乙酸

将来自步骤1的浓缩的残余物溶解于CH₂Cl₂(80.0mL)和TFA(50.0mL)中。将混合物在室温下搅拌过夜，接着浓缩至干并且不经进一步纯化即直接用于下一步骤中。

步骤3. 2-((2S,4S)-4-(((苯甲氧基)羰基)氨基)-1-(叔丁氧羰基)哌啶-2-基)乙酸

将来自步骤2的浓缩的残余物溶解于CH₂Cl₂(80.0mL)中并缓慢添加三乙胺(23.1mL，165mmol)。将混合物在室温下搅拌5分钟，接着添加Boc酐(4.33g，19.85mmol)。将混合物在室温下再搅拌30分钟。必要时，再添加Boc酐。完全转化后，将混合物酸化至pH 4-5，接着用EtOAc萃取。将合并的有机层经MgSO₄干燥，过滤，浓缩并且不经进一步纯化即直接用于下一步骤中。

步骤4.(2S,4S)-2-(2-氨基-2-氧代乙基)-4-(((苯甲氧基)羰基)氨基)哌啶-1-甲酸叔丁酯

将来自步骤3的浓缩的残余物溶解于THF(80.0mL)和DIPEA(8.67mL，49.6mmol)中。将混合物冷却至0℃，接着缓慢添加氯甲酸异丁酯(5.43mL，41.3mmol)。将混合物在0℃下再搅拌20分钟，随后将氢氧化铵(28％于水中，23.0mL，165mmol)添加至混合物中。再搅拌5分钟后，将混合物用盐水稀释并用EtOAc萃取。将合并的有机层经MgSO₄干燥，过滤，浓缩，并通过柱色谱法，用0-8％MeOH于DCM中纯化。

步骤5.(2S,4S)-4-(((苯甲氧基)羰基)氨基)-2-(氰基甲基)哌啶-1-甲酸叔丁酯

将来自步骤4的纯化的产物溶解于THF(80.0mL)和三乙胺(6.0mL，43mmol)中。将混合物冷却至0℃，接着缓慢添加TFAA(3.5mL，24.8mmol)。将混合物在0℃下再搅拌30分钟，随后用EtOAc稀释并用盐水萃取。将合并的有机层经MgSO₄干燥，过滤，浓缩至干，并在硅胶上纯化得到所需产物(5.12g，经5个步骤83％)。C₁₆H₂₀N₃O₄的LCMS计算值(M+H-叔丁基)⁺:m/z＝318.1；实验值：318.1。

步骤6.(2S,4S)-4-氨基-2-(氰基甲基)哌啶-1-甲酸叔丁酯

向含有搅拌棒的圆底烧瓶中装入(2S,4S)-4-(((苯甲氧基)羰基)氨基)-2-(氰基甲基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(5.12g，13.71mmol)、钯/碳(10wt％，2.92g，2.74mmol)和MeOH(45mL)。将圆底烧瓶排空并回填H₂(这一过程重复总计三次)并在附接氢气球下，将混合物在室温下剧烈搅拌1.5小时。接着，将混合物经硅藻土过滤并将固体用EtOAc洗涤。浓缩滤液，并且不经进一步纯化即直接用于下一步骤中。

中间体8.(2S,4S)-4-(7-溴-6-氟-8-甲基-4-(甲硫基)-1H-[1,2,3]三唑并[4,5-c]喹啉-1-基)-2-(氰基甲基)哌啶-1-甲酸叔丁酯

步骤1.(2S,4S)-4-(7-溴-6-氟-8-碘-4-(甲硫基)-1H-[1,2,3]三唑并[4,5-c]喹啉-1-基)-2-(氰基甲基)哌啶-1-甲酸叔丁酯

在室温下，将DIPEA(5.62ml，32mmol)添加至7-溴-2,4-二氯-8-氟-6-碘-3-硝基喹啉(中间体1)(10g，21.5mmol)和(2S,4S)-4-氨基-2-(氰基甲基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(中间体7)(5.15g，21.5mmol)于MeCN(100mL)中的溶液中。在50℃下搅拌反应3小时。完全转化后，浓缩反应混合物。

将残余物溶解于MeOH(80mL)中，在室温下一次性添加硫代甲醇钠(3.0g，43mmol)，完全转化后，将反应混合物用水稀释，过滤并用水洗涤，得到褐色固体。

将固体再溶解于MeOH(80mL)、CH₂Cl₂(20mL)和氢氧化铵水溶液(28mL，440mmol)中。一次性添加连二亚硫酸钠(11.2g，132mmol)，接着在室温下剧烈搅拌反应。完成后，通过添加H₂O(100mL)淬灭反应，并用CH₂Cl₂(100mL)萃取。将有机相用H₂O洗涤两次，经Na₂SO₄干燥，接着浓缩，得到呈红色粘性油状的所希望的二胺产物。

将粗二胺溶解于冰乙酸(50mL，875mmol)中。一次性添加亚硝酸钠(2.97g，43.0mmol)。在室温下搅拌反应2小时。完成后，将反应内容物倒入剧烈搅拌的冰水中。通过过滤收集沉淀的固体，用NaHCO₃、水和乙醚洗涤。接着，在真空下干燥固体，得到呈褐色固体状的所需产物(7.1g，50％产率)。C₂₂H₂₄BrFIN₆O₂S的LCMS计算值(M+H)⁺:m/z＝661.0；实验值：660.9。

步骤2.(2S,4S)-4-(7-溴-6-氟-8-甲基-4-(甲硫基)-1H-[1,2,3]三唑并[4,5-c]喹啉-1-基)-2-(氰基甲基)哌啶-1-甲酸叔丁酯

向配备磁力搅拌棒的带螺旋盖的小瓶中装入(2S,4S)-4-(7-溴-6-氟-8-碘-4-(甲硫基)-1H-[1,2,3]三唑并[4,5-c]喹啉-1-基)-2-(氰基甲基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(1.19g，1.832mmol)、甲基硼酸(1.096g，18.32mmol)、磷酸三钾(1.166g，5.49mmol)和双(三苯基膦)-氯化钯(II)(257mg，0.366mmol)，随后添加二噁烷(10.0mL)和水(2.0mL)。将小瓶用带铁氟龙内衬的隔膜密封，排空并回填氮气(这一过程重复总计三次)。接着，在90℃下搅拌反应3小时。冷却至室温后，将混合物用盐水稀释并用EtOAc萃取。将合并的有机层经MgSO₄干燥，过滤，浓缩至干，并在硅胶上纯化得到所需产物。C₂₃H₂₇BrFN₆O₂S的LCMS计算值(M+H)⁺:m/z＝549.1；实验值：549.1。

实施例1a和实施例1b.2-((2S,4S)-4-(4-(3-(二甲基氨基)-3-甲基氮杂环丁烷-1-基)-6-氟-7-(5-氟喹啉-8-基)-8-(三氟甲基)-1H-[1,2,3]三唑并[4,5-c]喹啉-1-基)-1-((E)-4-氟丁-2-烯酰基)哌啶-2-基)乙腈

步骤1.(2S,4S)-2-(氰基甲基)-4-(4-(3-(二甲基氨基)-3-甲基氮杂环丁烷-1-基)-6-氟-7-(5-氟喹啉-8-基)-8-(三氟甲基)-1H-[1,2,3]三唑并[4,5-c]喹啉-1-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯

向反应小瓶中装入中间体3(1.3g，1.9mmol)、XPhos Pd G2(76mg，0.097mmol)、(5-氟喹啉-8-基)硼酸(408mg，2.1mmol)、K₃PO₄(1.24g，5.83mmol)以及二噁烷(5mL)和H₂O(1mL)。向混合物中充入N₂，保持5分钟，随后加热并在90℃下搅拌1小时。完成后，将反应冷却至室温，用EtOAc(20mL)稀释并用NH₄Cl水溶液(20mL)洗涤。将有机相分离，经MgSO₄干燥，过滤，接着浓缩。将粗产物先通过二氧化硅纯化(20g，50-100％EtOAc于CH₂Cl₂中)，接着再使用制备型LCMS(XBridge C18柱，用含有0.15％NH₄OH的乙腈/水梯度洗脱，流速60mL/min)纯化，得到呈非对映异构体对形式的所需产物(白色非晶形粉末，21％合并产率)。

非对映异构体1。峰1。C₃₇H₃₉F₅N₉O₂的LCMS计算值(M+H)⁺m/z＝736.3；实验值736.2。

非对映异构体2。峰2。C₃₇H₃₉F₅N₉O₂的LCMS计算值(M+H)⁺m/z＝736.3；实验值736.2。

步骤2. 2-((2S,4S)-4-(4-(3-(二甲基氨基)-3-甲基氮杂环丁烷-1-基)-6-氟-7-(5-氟喹啉-8-基)-8-(三氟甲基)-1H-[1,2,3]三唑并[4,5-c]喹啉-1-基)-1-((E)-4-氟丁-2-烯酰基)哌啶-2-基)乙腈

在室温下，向装有来自步骤1的(2S,4S)-2-(氰基甲基)-4-(4-(3-(二甲基氨基)-3-甲基氮杂环丁烷-1-基)-6-氟-7-(5-氟喹啉-8-基)-8-(三氟甲基)-1H-[1,2,3]三唑并[4,5-c]喹啉-1-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(非对映异构体1，150mg，0.24mmol)的反应小瓶中添加TFA(1mL)。搅拌15分钟后，去除挥发性物质。将残余物再溶解于乙腈(2mL)中并冷却至0℃。将DIPEA(0.36mL)添加至反应物中，随后添加(E)-4-氟丁-2-烯酸(42mg，0.41mmol)和丙基膦酸酐溶液(50％in EtOAc,0.25mL，0.41mmol)。在0℃下搅拌10分钟后，用NaHCO₃水溶液(5mL)淬灭反应，用EtOAc(5mL)萃取，用盐水洗涤并浓缩。将粗产物再溶解于乙腈中并使用制备型LCMS(XBridge C18柱，用含有0.1％TFA的乙腈/水的梯度洗脱，流速60mL/min)纯化，得到

呈白色非晶形粉末形式的实施例1a(非对映异构体1)，呈TFA盐形式(50mg游离碱当量，34％产率)。C₃₆H₃₄F₆N₉O的LCMS计算值(M+H)⁺m/z＝722.3；实验值722.2。¹H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ10.80(s,1H),8.87(dd,J＝4.2,1.7Hz,1H),8.62(dd,J＝8.5,1.7Hz,1H),8.41(s,1H),7.82(dd,J＝8.0,5.8Hz,1H),7.70(dd,J＝8.5,4.2Hz,1H),7.65(dd,J＝9.8,8.0Hz,1H),6.90–6.77(m,2H),5.93(s,1H),5.32(s,1H),5.24–5.20(m,1H),5.12(dd,J＝3.6,1.2Hz,1H),4.97(s,1H),4.76(s,1H),4.57(s,1H),4.37–4.21(m,2H),3.61(d,J＝12.7Hz,1H),3.39–3.21(m,2H),2.84(s,6H),2.46–2.22(m,4H),1.70(s,3H)。

实施例1b(非对映异构体2)是使用以上程序，用来自步骤1的(2S,4S)-2-(氰基甲基)-4-(4-(3-(二甲基氨基)-3-甲基氮杂环丁烷-1-基)-6-氟-7-(5-氟喹啉-8-基)-8-(三氟甲基)-1H-[1,2,3]三唑并[4,5-c]喹啉-1-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(非对映异构体2)替代来自步骤1的(2S,4S)-2-(氰基甲基)-4-(4-(3-(二甲基氨基)-3-甲基氮杂环丁烷-1-基)-6-氟-7-(5-氟喹啉-8-基)-8-(三氟甲基)-1H-[1,2,3]三唑并[4,5-c]喹啉-1-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(非对映异构体1)来制备。C₃₆H₃₄F₆N₉O的LCMS计算值(M+H)⁺m/z＝722.3；实验值722.2。

实施例2a和实施例2b.2-((2S,4S)-4-(4-(3-(二甲基氨基)-3-甲基氮杂环丁烷-1-基)-6-氟-7-(2-甲氧基-3-甲基苯基)-8-(三氟甲基)-1H-[1,2,3]三唑并[4,5-c]喹啉-1-基)-1-((E)-4-氟丁-2-烯酰基)哌啶-2-基)乙腈

步骤1.(2S,4S)-2-(氰基甲基)-4-(4-(3-(二甲基氨基)-3-甲基氮杂环丁烷-1-基)-6-氟-7-(2-甲氧基-3-甲基苯基)-8-(三氟甲基)-1H-[1,2,3]三唑并[4,5-c]喹啉-1-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯

向反应小瓶装入中间体3(100mg，0.15mmol)、(2-甲氧基-3-甲基苯基)硼酸(30mg，0.18mmol)、Pd(PPh₃)₄(17mg，0.015mmol)、K₃PO₄(95mg，0.45mmol)以及二噁烷(2.0mL)和H₂O(0.4mL)。向混合物中充入N₂，保持5分钟，随后在90℃下加热1小时。完成后，将反应冷却至室温，用EtOAc(5.0ml)稀释并用NH₄Cl水溶液(5.0ml)洗涤。将有机相分离，经MgSO₄干燥并浓缩。将粗产物通过二氧化硅(10g，50-100％EtOAc于DCM中)纯化，得到呈浅黄色黏性油状的所需产物(92mg，87％产率)。C₃₆H₄₃F₄N₈O₃的LCMS计算值(M+H)⁺m/z＝711.3；实验值711.2。

步骤2. 2-((2S,4S)-4-(4-(3-(二甲基氨基)-3-甲基氮杂环丁烷-1-基)-6-氟-7-(2-甲氧基-3-甲基苯基)-8-(三氟甲基)-1H-[1,2,3]三唑并[4,5-c]喹啉-1-基)-1-((E)-4-氟丁-2-烯酰基)哌啶-2-基)乙腈

本化合物是根据实施例1a和实施例1b步骤2中所描述的程序，用(2S,4S)-2-(氰基甲基)-4-(4-(3-(二甲基氨基)-3-甲基氮杂环丁烷-1-基)-6-氟-7-(2-甲氧基-3-甲基苯基)-8-(三氟甲基)-1H-[1,2,3]三唑并[4,5-c]喹啉-1-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯替代(2S,4S)-2-(氰基甲基)-4-(4-(3-(二甲基氨基)-3-甲基氮杂环丁烷-1-基)-6-氟-7-(5-氟喹啉-8-基)-8-(三氟甲基)-1H-[1,2,3]三唑并[4,5-c]喹啉-1-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯制备。

实施例2a。非对映异构体1。峰1。C₃₅H₃₈F₅N₈O₂的LCMS计算值(M+H)⁺:m/z＝697.3；实验值：697.3。

实施例2b。非对映异构体2。峰2。C₃₅H₃₈F₅N₈O₂的LCMS计算值(M+H)⁺:m/z＝697.3；实验值：697.3。

实施例3a和实施例3b.2-((2S,4S)-4-(7-(3-氯-2-甲氧基苯基)-4-(3-(二甲基氨基)-3-甲基氮杂环丁烷-1-基)-6-氟-8-(三氟甲基)-1H-[1,2,3]三唑并[4,5-c]喹啉-1-基)-1-((E)-4-氟丁-2-烯酰基)哌啶-2-基)乙腈

步骤1.(2S,4S)-4-(7-(3-氯-2-甲氧基苯基)-4-(3-(二甲基氨基)-3-甲基氮杂环丁烷-1-基)-6-氟-8-(三氟甲基)-1H-[1,2,3]三唑并[4,5-c]喹啉-1-基)-2-(氰基甲基)哌啶-1-甲酸叔丁酯

本化合物是根据实施例2a和实施例2b步骤1中所描述的程序，用(3-氯-2-甲氧基苯基)硼酸替代(2-甲氧基-3-甲基苯基)硼酸制备。C₃₅H₄₀ClF₄N₈O₂的LCMS计算值(M+H)⁺:m/z＝731.3；实验值：731.2。

步骤2. 2-((2S,4S)-4-(7-(3-氯-2-甲氧基苯基)-4-(3-(二甲基氨基)-3-甲基氮杂环丁烷-1-基)-6-氟-8-(三氟甲基)-1H-[1,2,3]三唑并[4,5-c]喹啉-1-基)-1-((E)-4-氟丁-2-烯酰基)哌啶-2-基)乙腈

本化合物是根据实施例1a和实施例1b步骤2中所描述的程序，用(2S,4S)-4-(7-(3-氯-2-甲氧基苯基)-4-(3-(二甲基氨基)-3-甲基氮杂环丁烷-1-基)-6-氟-8-(三氟甲基)-1H-[1,2,3]三唑并[4,5-c]喹啉-1-基)-2-(氰基甲基)哌啶-1-甲酸叔丁酯替代(2S,4S)-2-(氰基甲基)-4-(4-(3-(二甲基氨基)-3-甲基氮杂环丁烷-1-基)-6-氟-7-(5-氟喹啉-8-基)-8-(三氟甲基)-1H-[1,2,3]三唑并[4,5-c]喹啉-1-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯制备。

实施例3a。非对映异构体1。峰1。C₃₄H₃₅ClF₅N₈O₂的LCMS计算值(M+H)⁺:m/z＝717.3；实验值：717.2。

实施例3b。非对映异构体2。峰2。C₃₄H₃₅ClF₅N₈O₂的LCMS计算值(M+H)⁺:m/z＝717.3；实验值：717.2。

实施例4a和实施例4b.2-((2S,4S)-4-(6-氟-7-(5-氟喹啉-8-基)-4-((S)-1-((S)-1-甲基吡咯烷-2-基)乙氧基)-8-(三氟甲基)-1H-[1,2,3]三唑并[4,5-c]喹啉-1-基)-1-((E)-4-氟丁-2-烯酰基)哌啶-2-基)乙腈

步骤1.(2S,4S)-4-(7-溴-6-氟-4-(甲硫基)-8-(三氟甲基)-1H-[1,2,3]三唑并[4,5-c]喹啉-1-基)-2-(2-(叔丁氧基)-2-氧代乙基)哌啶-1-甲酸叔丁酯

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向密封管中装入中间体4(3.50g，4.75mmol)和2,2-二氟-2-(氟磺酰基)-乙酸甲酯(1.21ml，9.51mmol)(MFDA)、碘化铜(I)(0.272g，1.426mmol)和NMP(20mL)。将管用N₂吹扫，接着密封并在80℃下加热过夜。接着，将反应物冷却至室温，倒入NaHCO₃中，并用EtOAc萃取。将有机层合并，经MgSO₄干燥并浓缩。将粗产物在二氧化硅上纯化(40g，0-50％EtOAc于己烷中)，得到所需产物(2.5g，78％产率)。C₂₇H₃₃BrF₄N₅O₄S的LCMS计算值(M+H)⁺:m/z＝678.1；实验值：678.3。

步骤2.(2S,4S)-4-(7-溴-6-氟-4-(甲硫基)-8-(三氟甲基)-1H-[1,2,3]三唑并[4,5-c]喹啉-1-基)-2-(氰基甲基)哌啶-1-甲酸叔丁酯

本化合物是根据中间体3步骤2中所描述的程序，用(2S,4S)-4-(7-溴-6-氟-4-(甲硫基)-8-(三氟甲基)-1H-[1,2,3]三唑并[4,5-c]喹啉-1-基)-2-(2-(叔丁氧基)-2-氧代乙基)哌啶-1-甲酸叔丁酯替代(2S,4S)-4-(7-溴-4-(3-(二甲基氨基)-3-甲基氮杂环丁烷-1-基)-6-氟-8-(三氟甲基)-1H-[1,2,3]三唑并[4,5-c]喹啉-1-基)-2-(2-(叔丁氧基)-2-氧代乙基)哌啶-1-甲酸叔丁酯来制备。C₂₃H₂₄BrF₄N₆O₂S的LCMS计算值(M+H)⁺:m/z＝603.1；实验值：603.2。

步骤3.(2S,4S)-2-(氰基甲基)-4-(6-氟-7-(5-氟喹啉-8-基)-4-(甲硫基)-8-(三氟甲基)-1H-[1,2,3]三唑并[4,5-c]喹啉-1-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯

本化合物是根据实施例1a和实施例1b步骤1中所描述的程序，用(2S,4S)-4-(7-溴-6-氟-4-(甲硫基)-8-(三氟甲基)-1H-[1,2,3]三唑并[4,5-c]喹啉-1-基)-2-(氰基甲基)哌啶-1-甲酸叔丁酯替代中间体3来制备。C₃₂H₂₉F₅N₇O₂S的LCMS计算值(M+H)⁺:m/z＝670.2；实验值：670.2。

步骤4.(2S,4S)-2-(氰基甲基)-4-(6-氟-7-(5-氟喹啉-8-基)-4-((S)-1-((S)-1-甲基吡咯烷-2-基)乙氧基)-8-(三氟甲基)-1H-[1,2,3]三唑并[4,5-c]喹啉-1-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯

将(2S,4S)-2-(氰基甲基)-4-(6-氟-7-(5-氟喹啉-8-基)-4-(甲硫基)-8-(三氟甲基)-1H-[1,2,3]三唑并[4,5-c]喹啉-1-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(85mg，0.13mmol)溶解于CH₂Cl₂(1mL)中并冷却至0℃。一次性添加mCPBA(33mg，0.19mmol)，并搅拌反应30分钟，随后通过添加饱和NaHCO₃(2mL)淬灭反应。将混合物用CH₂Cl₂(5mL)萃取。将合并的有机层经MgSO₄干燥，过滤，接着浓缩，得到粗亚砜和砜的混合物。将装有(S)-1-((S)-1-甲基吡咯烷-2-基)乙-1-醇(16.4mg，0.13mmol)和无水THF(1mL)的小瓶冷却至0℃。添加LiHMDS(0.13mL，1M于THF中)。搅拌10分钟后，将反应物逐滴添加至粗亚砜的THF溶液中。再搅拌10分钟后，通过添加饱和NH₄Cl(5mL)淬灭反应并用EtOAc(15mL)萃取。将合并的有机层经MgSO₄干燥并在二氧化硅上纯化(0-100％EtOAc于己烷中)，得到呈白色固体状的所需产物(75mg，79％产率)。C₃₈H₄₀F₅N₈O₃的LCMS计算值(M+H)⁺:m/z＝751.3；实验值：751.5。

步骤5. 2-((2S,4S)-4-(6-氟-7-(5-氟喹啉-8-基)-4-((S)-1-((S)-1-甲基吡咯烷-2-基)乙氧基)-8-(三氟甲基)-1H-[1,2,3]三唑并[4,5-c]喹啉-1-基)-1-((E)-4-氟丁-2-烯酰基)哌啶-2-基)乙腈

本化合物是根据实施例1a和实施例1b步骤2中所描述的程序，用(2S,4S)-2-(氰基甲基)-4-(6-氟-7-(5-氟喹啉-8-基)-4-((S)-1-((S)-1-甲基吡咯烷-2-基)乙氧基)-8-(三氟甲基)-1H-[1,2,3]三唑并[4,5-c]喹啉-1-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯替代(2S,4S)-2-(氰基甲基)-4-(4-(3-(二甲基氨基)-3-甲基氮杂环丁烷-1-基)-6-氟-7-(5-氟喹啉-8-基)-8-(三氟甲基)-1H-[1,2,3]三唑并[4,5-c]喹啉-1-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯来制备。

实施例4a。非对映异构体1。峰1。C₃₇H₃₅F₆N₈O₂的LCMS计算值(M+H)⁺:m/z＝737.3；实验值：737.2。

实施例4b。非对映异构体2。峰2。C₃₇H₃₅F₆N₈O₂的LCMS计算值(M+H)⁺:m/z＝737.3；实验值：737.2。

实施例5a和实施例5b.1-(4-(6-氟-7-(5-氟喹啉-8-基)-4-((S)-1-((S)-1-甲基吡咯烷-2-基)乙氧基)-8-(三氟甲基)-1H-[1,2,3]三唑并[4,5-c]喹啉-1-基)哌啶-1-基)丙-2-烯-1-酮

步骤1. 4-(7-溴-6-氟-4-(甲硫基)-8-(三氟甲基)-1H-[1,2,3]三唑并[4,5-c]喹啉-1-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯

本化合物是根据实施例4a和实施例4b步骤1中所描述的程序，用中间体5替代中间体4来制备。C₂₁H₂₃BrF₄N₅O₂S的LCMS计算值(M+H)⁺:m/z＝564.1；实验值：564.0。

步骤2. 4-(7-溴-6-氟-4-((S)-1-((S)-1-甲基吡咯烷-2-基)乙氧基)-8-(三氟甲基)-1H-[1,2,3]三唑并[4,5-c]喹啉-1-基)哌啶-1-甲酸叔丁基酯

本化合物是根据实施例4a和实施例4b步骤4中所描述的程序，用4-(7-溴-6-氟-4-(甲硫基)-8-(三氟甲基)-1H-[1,2,3]三唑并[4,5-c]喹啉-1-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯替代(2S,4S)-2-(氰基甲基)-4-(6-氟-7-(5-氟喹啉-8-基)-4-(甲硫基)-8-(三氟甲基)-1H-[1,2,3]三唑并[4,5-c]喹啉-1-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯来制备。C₂₇H₃₄BrF₄N₆O₃的LCMS计算值(M+H)⁺:m/z＝645.2；实验值：645.4。

步骤3. 4-(6-氟-7-(5-氟喹啉-8-基)-4-((S)-1-((S)-1-甲基吡咯烷-2-基)乙氧基)-8-(三氟甲基)-1H-[1,2,3]三唑并[4,5-c]喹啉-1-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯

本化合物是根据实施例1a和实施例1b步骤1中所描述的程序，用4-(7-溴-6-氟-4-((S)-1-((S)-1-甲基吡咯烷-2-基)乙氧基)-8-(三氟甲基)-1H-[1,2,3]三唑并[4,5-c]喹啉-1-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯替代中间体3来制备。C₃₆H₃₉F₅N₇O₃的LCMS计算值(M+H)⁺:m/z＝712.3；实验值：712.5。

步骤4. 1-(4-(6-氟-7-(5-氟喹啉-8-基)-4-((S)-1-((S)-1-甲基吡咯烷-2-基)乙氧基)-8-(三氟甲基)-1H-[1,2,3]三唑并[4,5-c]喹啉-1-基)哌啶-1-基)丙-2-烯-1-酮

向4-(6-氟-7-(5-氟喹啉-8-基)-4-((S)-1-((S)-1-甲基吡咯烷-2-基)乙氧基)-8-(三氟甲基)-1H-[1,2,3]三唑并[4,5-c]喹啉-1-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(25mg，0.039mmol)中添加TFA(0.5mL)并在室温下搅拌10分钟。在真空下去除溶剂。将残余物溶解于CH₂Cl₂(1.0mL)中并冷却至0℃，向其中添加三乙胺(16μL，0.116mmol)，随后添加丙烯酰氯(5.3mg，0.058mmol)并在0℃下搅拌反应20分钟。将反应物用CH₂Cl₂稀释，用饱和NaHCO₃洗涤，并将有机溶剂干燥并浓缩。将粗产物再溶解于乙腈中并使用制备型LCMS(XBridge C18柱，用含有0.1％TFA的乙腈/水的梯度洗脱，流速60mL/min)纯化。

实施例5a。非对映异构体1。峰1。C₃₄H₃₃F₅N₇O₂的LCMS计算值(M+H)⁺:m/z＝666.3；实验值：666.4。

实施例5b。非对映异构体2。峰2。C₃₄H₃₃F₅N₇O₂的LCMS计算值(M+H)⁺:m/z＝666.3；实验值：666.4。

实施例6.2-((2S,4S)-4-(4-(3-(二甲基氨基)-3-甲基氮杂环丁烷-1-基)-7-(2,3-二甲基苯基)-6-氟-8-甲基-1H-[1,2,3]三唑并[4,5-c]喹啉-1-基)-1-((E)-4-甲氧基丁-2-烯酰基)哌啶-2-基)乙腈

步骤1.(2S,4S)-2-(氰基甲基)-4-(7-(2,3-二甲基苯基)-6-氟-8-甲基-4-(甲硫基)-1H-[1,2,3]三唑并[4,5-c]喹啉-1-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯

将中间体8(400mg，0.728mmol)、(2,3-二甲基苯基)硼酸(164mg，1.092mmol)、磷酸钾(464mg，2.184mmol)和Pd(Ph₃P)₄(84mg，0.073mmol)于二噁烷(6mL)/水(1mL)中的混合物排空并回填氮气(这一过程重复总计三次)。在105℃下搅拌反应1小时。将混合物用乙酸乙酯稀释并用水、盐水洗涤。将有机物过滤，干燥并浓缩。将产物通过用己烷/EtOAc(最大EtOAc 80％)洗脱的柱纯化。C₃₁H₃₆FN₆O₂S的LCMS计算值(M+H)⁺m/z＝575.3；实验值575.3。

步骤2.(2S,4S)-2-(氰基甲基)-4-(7-(2,3-二甲基苯基)-6-氟-8-甲基-4-(甲基亚磺酰基)-1H-[1,2,3]三唑并[4,5-c]喹啉-1-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯

在0℃下，将m-CPBA(167mg，0.966mmol)添加至(2S,4S)-2-(氰基甲基)-4-(7-(2,3-二甲基苯基)-6-氟-8-甲基-4-(甲硫基)-1H-[1,2,3]三唑并[4,5-c]喹啉-1-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(370.0mg，0.644mmol)于CH₂Cl₂(5.0mL)中的溶液中，接着在这一温度下搅拌反应10分钟。通过添加饱和Na₂S₂O₃淬灭反应，用乙酸乙酯稀释并用饱和NaHCO₃、盐水洗涤，过滤，干燥并浓缩，并将粗品直接用于下一步骤中。C₃₁H₃₆FN₆O₃S的LCMS计算值(M+H)⁺m/z＝591.3；实验值591.3。

步骤3.(2S,4S)-2-(氰基甲基)-4-(4-(3-(二甲基氨基)-3-甲基氮杂环丁烷-1-基)-7-(2,3-二甲基苯基)-6-氟-8-甲基-1H-[1,2,3]三唑并[4,5-c]喹啉-1-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯

将三乙胺(0.625mL，4.48mmol)添加至(2S,4S)-2-(氰基甲基)-4-(7-(2,3-二甲基苯基)-6-氟-8-甲基-4-(甲基亚磺酰基)-1H-[1,2,3]三唑并[4,5-c]喹啉-1-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(0.680g，1.121mmol)和N,N,3-三甲基氮杂环丁烷-3-胺(0.192g，1.681mmol)的溶液中，接着在70℃下搅拌2小时。将产物通过用CH₂Cl₂/MeOH(最大MeOH 15％)洗脱的柱纯化。通过SFC分离阻转异构体(柱，Phenomenex Lux 5um Cellulose-1，21.2×250mm，流动相25％MeOH于CO₂中，70mL/min等度洗脱)，得到两个峰，命名为PK1和PK2。C₃₆H₄₆FN₈O₂的LCMS计算值(M+H)⁺m/z＝641.4；实验值641.5。

步骤4. 2-((2S,4S)-4-(4-(3-(二甲基氨基)-3-甲基氮杂环丁烷-1-基)-7-(2,3-二甲基苯基)-6-氟-8-甲基-1H-[1,2,3]三唑并[4,5-c]喹啉-1-基)-1-((E)-4-甲氧基丁-2-烯酰基)哌啶-2-基)乙腈

本化合物是根据实施例1a和实施例1b步骤2中所描述的程序，用(2S,4S)-2-(氰基甲基)-4-(4-(3-(二甲基氨基)-3-甲基氮杂环丁烷-1-基)-7-(2,3-二甲基苯基)-6-氟-8-甲基-1H-[1,2,3]三唑并[4,5-c]喹啉-1-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(来自步骤3的PK1)替代(2S,4S)-2-(氰基甲基)-4-(4-(3-(二甲基氨基)-3-甲基氮杂环丁烷-1-基)-6-氟-7-(5-氟喹啉-8-基)-8-(三氟甲基)-1H-[1,2,3]三唑并[4,5-c]喹啉-1-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯并用(E)-4-甲氧基丁-2-烯酸替代(E)-4-氟丁-2-烯酸来制备。C₃₆H₄₄FN₈O₂的LCMS计算值(M+H)⁺m/z＝639.4；实验值639.5。¹H NMR(600MHz,DMSO)δ8.04(s,1H),7.30–7.21(m,2H),7.00(dd,J＝7.4,1.5Hz,1H),6.81–6.70(m,2H),5.30(s,1H),4.96(s,1H),4.74(d,J＝13.8Hz,1H),4.28(d,J＝14.3Hz,1H),4.11(s,2H),3.64(s,1H),3.39(dd,J＝17.0,8.5Hz,1H),3.33(s,3H),3.31–3.19(m,3H),2.83(s,6H),2.43(s,3H),2.41(m,1H)2.35(s,3H),2.20(s,3H),2.13(d,J＝13.2Hz,1H),1.94(s,3H),1.70(s,3H)。

实施例7.2-((2S,4S)-4-(6-氟-8-甲基-7-(1-甲基-1H-吲唑-6-基)-4-((S)-1-((S)-1-甲基吡咯烷-2-基)乙氧基)-1H-[1,2,3]三唑并[4,5-c]喹啉-1-基)-1-((E)-4-氟丁-2-烯酰基)哌啶-2-基)乙腈

步骤1.(2S,4S)-2-(氰基甲基)-4-(6-氟-8-甲基-7-(1-甲基-1H-吲唑-6-基)-4-(甲硫基)-1H-[1,2,3]三唑并[4,5-c]喹啉-1-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯

本化合物是根据实施例6步骤1中所描述的程序，用1-甲基-6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-1H-吲唑替代(2,3-二甲基苯基)硼酸来制备。C₃₁H₃₄FN₈O₂S的LCMS计算值(M+H)⁺m/z＝601.3；实验值601.3。

步骤2.(2S,4S)-2-(氰基甲基)-4-(6-氟-8-甲基-7-(1-甲基-1H-吲唑-6-基)-4-(甲基亚磺酰基)-1H-[1,2,3]三唑并[4,5-c]喹啉-1-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯

本化合物是根据实施例6步骤2中所描述的程序，用(2S,4S)-2-(氰基甲基)-4-(6-氟-8-甲基-7-(1-甲基-1H-吲唑-6-基)-4-(甲硫基)-1H-[1,2,3]三唑并[4,5-c]喹啉-1-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯替代(2S,4S)-2-(氰基甲基)-4-(7-(2,3-二甲基苯基)-6-氟-8-甲基-4-(甲硫基)-1H-[1,2,3]三唑并[4,5-c]喹啉-1-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯来制备。C₃₁H₃₄FN₈O₃S的LCMS计算值(M+H)⁺m/z＝617.2；实验值617.4。

步骤3.(2S,4S)-2-(氰基甲基)-4-(6-氟-8-甲基-7-(1-甲基-1H-吲唑-6-基)-4-((S)-1-((S)-1-甲基吡咯烷-2-基)乙氧基)-1H-[1,2,3]三唑并[4,5-c]喹啉-1-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯

在0℃下，将LiHMDS(1.0M于THF中)(40.7mg，0.243mmol)添加至(S)-1-((S)-1-甲基吡咯烷-2-基)乙-1-醇(31.4mg，0.243mmol)于THF(1.0mL)中的溶液中并搅拌5分钟。在0℃下，将所形成的溶液添加至(2S,4S)-2-(氰基甲基)-4-(6-氟-8-甲基-7-(1-甲基-1H-吲唑-6-基)-4-(甲基亚磺酰基)-1H-[1,2,3]三唑并[4,5-c]喹啉-1-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(75.0mg，0.122mmol)于THF(1.0mL)中的溶液中，接着在室温下搅拌反应1小时。将混合物用乙酸乙酯稀释并用饱和NaHCO₃、水洗涤，过滤并浓缩，并直接用于下一步骤中。C₃₇H₄₅FN₉O₃的LCMS计算值(M+H)⁺m/z＝682.4；实验值682.5。

步骤4. 2-((2S,4S)-4-(6-氟-8-甲基-7-(1-甲基-1H-吲唑-6-基)-4-((S)-1-((S)-1-甲基吡咯烷-2-基)乙氧基)-1H-[1,2,3]三唑并[4,5-c]喹啉-1-基)-1-((E)-4-氟丁-2-烯酰基)哌啶-2-基)乙腈

本化合物是根据实施例1a和实施例1b步骤2中所描述的程序，用(2S,4S)-2-(氰基甲基)-4-(6-氟-8-甲基-7-(1-甲基-1H-吲唑-6-基)-4-((S)-1-((S)-1-甲基吡咯烷-2-基)乙氧基)-1H-[1,2,3]三唑并[4,5-c]喹啉-1-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯替代(2S,4S)-2-(氰基甲基)-4-(4-(3-(二甲基氨基)-3-甲基氮杂环丁烷-1-基)-6-氟-7-(5-氟喹啉-8-基)-8-(三氟甲基)-1H-[1,2,3]三唑并[4,5-c]喹啉-1-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯来制备。C₃₆H₄₀F₂N₉O₂的LCMS计算值(M+H)⁺m/z＝668.3；实验值668.5。¹H NMR(600MHz,DMSO)δ8.22(s,1H),8.17(s,1H),7.93(d,J＝8.3Hz,1H),7.72(s,1H),7.13(dd,J＝8.2Hz,1H),6.92–6.79(m,2H),5.87(d,J＝16.1Hz,1H),5.58(d,J＝7.5Hz,1H),5.31(d,J＝6.4Hz,1H),5.21(d,J＝2.4Hz,1H),5.14(d,J＝2.9Hz,2H),5.00(s,1H),4.76(d,J＝13.8Hz,1H),4.32(d,J＝14.2Hz,1H),4.11(s,3H),3.96(p,J＝7.7Hz,1H),3.65-3.59(m,3H),3.45–3.23(m,2H),3.19(m,1H),3.14(s,3H),2.44(s,3H),2.32–2.16(m,2H),2.11–1.89(m,2H),1.59(s,3H)。

实施例8.2-((2S,4S)-4-(6-氟-8-甲基-7-(6-甲基吡啶-3-基)-4-((S)-1-((S)-1-甲基吡咯烷-2-基)乙氧基)-1H-[1,2,3]三唑并[4,5-c]喹啉-1-基)-1-((E)-4-氟丁-2-烯酰基)哌啶-2-基)乙腈

步骤1.(2S,4S)-2-(氰基甲基)-4-(6-氟-8-甲基-7-(6-甲基吡啶-3-基)-4-(甲硫基)-1H-[1,2,3]三唑并[4,5-c]喹啉-1-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯

本化合物是根据实施例6步骤1中所描述的程序，用(6-甲基吡啶-3-基)硼酸替代(2,3-二甲基苯基)硼酸来制备。C₂₉H₃₃FN₇O₂S的LCMS计算值(M+H)⁺m/z＝562.2；实验值562.3。

步骤2.(2S,4S)-2-(氰基甲基)-4-(6-氟-8-甲基-7-(6-甲基吡啶-3-基)-4-(甲基亚磺酰基)-1H-[1,2,3]三唑并[4,5-c]喹啉-1-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯

本化合物是根据实施例6步骤2中所描述的程序，用(2S,4S)-2-(氰基甲基)-4-(6-氟-8-甲基-7-(6-甲基吡啶-3-基)-4-(甲硫基)-1H-[1,2,3]三唑并[4,5-c]喹啉-1-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯替代(2S,4S)-2-(氰基甲基)-4-(7-(2,3-二甲基苯基)-6-氟-8-甲基-4-(甲硫基)-1H-[1,2,3]三唑并[4,5-c]喹啉-1-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯来制备。C₂₉H₃₃FN₇O₃S的LCMS计算值(M+H)⁺m/z＝578.2；实验值578.4。

步骤3.(2S,4S)-2-(氰基甲基)-4-(6-氟-8-甲基-7-(6-甲基吡啶-3-基)-4-((S)-1-((S)-1-甲基吡咯烷-2-基)乙氧基)-1H-[1,2,3]三唑并[4,5-c]喹啉-1-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯

本化合物是根据实施例7步骤3中所描述的程序，用(2S,4S)-2-(氰基甲基)-4-(6-氟-8-甲基-7-(6-甲基吡啶-3-基)-4-(甲基亚磺酰基)-1H-[1,2,3]三唑并[4,5-c]喹啉-1-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯替代(2S,4S)-2-(氰基甲基)-4-(6-氟-8-甲基-7-(1-甲基-1H-吲唑-6-基)-4-(甲基亚磺酰基)-1H-[1,2,3]三唑并[4,5-c]喹啉-1-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯来制备。C₃₅H₄₄FN₈O₃的LCMS计算值(M+H)⁺m/z＝643.4；实验值643.5。

步骤4. 2-((2S,4S)-4-(6-氟-8-甲基-7-(6-甲基吡啶-3-基)-4-((S)-1-((S)-1-甲基吡咯烷-2-基)乙氧基)-1H-[1,2,3]三唑并[4,5-c]喹啉-1-基)-1-((E)-4-氟丁-2-烯酰基)哌啶-2-基)乙腈

本化合物是根据实施例1a和实施例1b步骤2中所描述的程序，用(2S,4S)-2-(氰基甲基)-4-(6-氟-8-甲基-7-(6-甲基吡啶-3-基)-4-((S)-1-((S)-1-甲基吡咯烷-2-基)乙氧基)-1H-[1,2,3]三唑并[4,5-c]喹啉-1-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯替代(2S,4S)-2-(氰基甲基)-4-(4-(3-(二甲基氨基)-3-甲基氮杂环丁烷-1-基)-6-氟-7-(5-氟喹啉-8-基)-8-(三氟甲基)-1H-[1,2,3]三唑并[4,5-c]喹啉-1-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯来制备。C₃₄H₃₉F₂N₈O₂的LCMS计算值(M+H)⁺m/z＝629.3；实验值629.5。

实施例9.2-((2S,4S)-4-(6-氟-8-甲基-7-(1-甲基-1H-吲唑-3-基)-4-((S)-1-((S)-1-甲基吡咯烷-2-基)乙氧基)-1H-[1,2,3]三唑并[4,5-c]喹啉-1-基)-1-((E)-4-甲氧基丁-2-烯酰基)哌啶-2-基)乙腈

步骤1.(2S,4S)-2-(氰基甲基)-4-(6-氟-8-甲基-7-(1-甲基-1H-吲唑-3-基)-4-(甲硫基)-1H-[1,2,3]三唑并[4,5-c]喹啉-1-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯

本化合物是根据实施例6步骤1中所描述的程序，用1-甲基-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-1H-吲唑替代(2,3-二甲基苯基)硼酸来制备。C₃₁H₃₄FN₈O₂S的LCMS计算值(M+H)⁺m/z＝601.3；实验值601.1。

步骤2.(2S,4S)-2-(氰基甲基)-4-(6-氟-8-甲基-7-(1-甲基-1H-吲唑-3-基)-4-(甲基亚磺酰基)-1H-[1,2,3]三唑并[4,5-c]喹啉-1-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯

本化合物是根据实施例6步骤2中所描述的程序，用(2S,4S)-2-(氰基甲基)-4-(6-氟-8-甲基-7-(1-甲基-1H-吲唑-3-基)-4-(甲硫基)-1H-[1,2,3]三唑并[4,5-c]喹啉-1-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯替代(2S,4S)-2-(氰基甲基)-4-(7-(2,3-二甲基苯基)-6-氟-8-甲基-4-(甲硫基)-1H-[1,2,3]三唑并[4,5-c]喹啉-1-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯来制备。C₃₁H₃₄FN₈O₃S的LCMS计算值(M+H)⁺m/z＝617.3；实验值617.3。

步骤3.(2S,4S)-2-(氰基甲基)-4-(6-氟-8-甲基-7-(1-甲基-1H-吲唑-3-基)-4-((S)-1-((S)-1-甲基吡咯烷-2-基)乙氧基)-1H-[1,2,3]三唑并[4,5-c]喹啉-1-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯

本化合物是根据实施例7步骤3中所描述的程序，用(2S,4S)-2-(氰基甲基)-4-(6-氟-8-甲基-7-(1-甲基-1H-吲唑-3-基)-4-(甲基亚磺酰基)-1H-[1,2,3]三唑并[4,5-c]喹啉-1-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯替代(2S,4S)-2-(氰基甲基)-4-(6-氟-8-甲基-7-(1-甲基-1H-吲唑-6-基)-4-(甲基亚磺酰基)-1H-[1,2,3]三唑并[4,5-c]喹啉-1-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯来制备。C₃₇H₄₅FN₉O₃的LCMS计算值(M+H)⁺m/z＝682.4；实验值682.4

步骤4. 2-((2S,4S)-4-(6-氟-8-甲基-7-(1-甲基-1H-吲唑-3-基)-4-((S)-1-((S)-1-甲基吡咯烷-2-基)乙氧基)-1H-[1,2,3]三唑并[4,5-c]喹啉-1-基)-1-((E)-4-甲氧基丁-2-烯酰基)哌啶-2-基)乙腈

/>

本化合物是根据实施例6步骤4中所描述的程序，用(2S,4S)-2-(氰基甲基)-4-(6-氟-8-甲基-7-(1-甲基-1H-吲唑-3-基)-4-((S)-1-((S)-1-甲基吡咯烷-2-基)乙氧基)-1H-[1,2,3]三唑并[4,5-c]喹啉-1-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯替代(2S,4S)-2-(氰基甲基)-4-(4-(3-(二甲基氨基)-3-甲基氮杂环丁烷-1-基)-7-(2,3-二甲基苯基)-6-氟-8-甲基-1H-[1,2,3]三唑并[4,5-c]喹啉-1-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯来制备。C₃₇H₄₃FN₉O₃的LCMS计算值(M+H)⁺m/z＝680.4；实验值680.3。

实施例10.2-((2S,4S)-4-(6-氟-7-(4-氟苯基)-8-甲基-4-((S)-1-((S)-1-甲基吡咯烷-2-基)乙氧基)-1H-[1,2,3]三唑并[4,5-c]喹啉-1-基)-1-((E)-4-甲氧基丁-2-烯酰基)哌啶-2-基)乙腈

本化合物是根据实施例9步骤1-4中所描述的程序，用(4-氟苯基)硼酸替代1-甲基-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-1H-吲唑来制备。C₃₅H₄₀F₂N₇O₃的LCMS计算值(M+H)⁺m/z＝644.3；实验值644.4。¹H NMR(500MHz,DMSO)δ10.09–9.21(s,1H),8.51–7.69(s,1H),7.53–7.44(dd,J＝8.5,5.7Hz,2H),7.44–7.36(t,J＝8.9Hz,2H),6.83–6.63(m,2H),5.92–5.72(m,1H),5.66–5.47(m,1H),5.41-4.20(m,2H),4.18–4.03(d,J＝2.5Hz,2H),4.00–3.85(m,1H),3.69–3.53(m,2H),3.39–3.32(s,3H),3.27–3.10(m,5H),2.55–2.36(d,J＝13.8Hz,6H),2.38–2.23(m,2H),2.19–2.04(m,2H),2.00–1.88(m,2H),1.64–1.50(d,J＝6.1Hz,3H)。

实施例11a和实施例11b.8-(1-(1-丙烯酰基哌啶-4-基)-6-氟-8-甲基-4-((S)-1-((S)-1-甲基吡咯烷-2-基)乙氧基)-1H-[1,2,3]三唑并[4,5-c]喹啉-7-基)-1-萘甲腈

步骤1. 4-(7-溴-6-氟-8-甲基-4-(甲硫基)-1H-[1,2,3]三唑并[4,5-c]喹啉-1-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯

本化合物是根据中间体8步骤2中所描述的程序，用中间体5替代(2S,4S)-4-(7-溴-6-氟-8-碘-4-(甲硫基)-1H-[1,2,3]三唑并[4,5-c]喹啉-1-基)-2-(氰基甲基)哌啶-1-甲酸叔丁酯来制备。C₂₁H₂₆BrFN₅O₂S的LCMS计算值(M+H)⁺m/z＝510.1；实验值510.1。

步骤2. 4-(7-溴-6-氟-8-甲基-4-(甲基亚磺酰基)-1H-[1,2,3]三唑并[4,5-c]喹啉-1-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯

本化合物是根据实施例6步骤2中所描述的程序，用4-(7-溴-6-氟-8-甲基-4-(甲硫基)-1H-[1,2,3]三唑并[4,5-c]喹啉-1-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯替代(2S,4S)-2-(氰基甲基)-4-(7-(2,3-二甲基苯基)-6-氟-8-甲基-4-(甲硫基)-1H-[1,2,3]三唑并[4,5-c]喹啉-1-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯来制备。C₂₁H₂₆BrFN₅O₃S的LCMS计算值(M+H-tBu)⁺m/z＝470.0；实验值470.0。

步骤3. 4-(7-溴-6-氟-8-甲基-4-((S)-1-((S)-1-甲基吡咯烷-2-基)乙氧基)-1H-[1,2,3]三唑并[4,5-c]喹啉-1-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯

向4-(7-溴-6-氟-8-甲基-4-(甲基亚磺酰基)-1H-[1,2,3]三唑并[4,5-c]喹啉-1-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(2.51g，4.7mmol)于THF(16mL)中的溶液中添加(S)-1-((S)-1-甲基吡咯烷-2-基)乙-1-醇(1.23g，9.54mmol)和DBU(1.44mL，9.54mmol)。将混合物在室温下搅拌过夜，接着用EtOAc稀释并用饱和NH₄Cl萃取。将合并的有机层经MgSO₄干燥，过滤，浓缩，接着通过柱色谱法，利用0-8％MeOH/DCM进行纯化。C₂₇H₃₇BrFN₆O₃的LCMS计算值(M+H)⁺m/z＝591.2；实验值591.2。

步骤4. 8-(6-氟-8-甲基-4-((S)-1-((S)-1-甲基吡咯烷-2-基)乙氧基)-1-(哌啶-4-基)-1H-[1,2,3]三唑并[4,5-c]喹啉-7-基)-1-萘甲腈

向反应小瓶中装入4-(7-溴-6-氟-8-甲基-4-((S)-1-((S)-1-甲基吡咯烷-2-基)乙氧基)-1H-[1,2,3]三唑并[4,5-c]喹啉-1-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(1.56g，2.64mmol)、8-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-1-萘甲腈(1.472g，5.27mmol)、SPhosPd G4(315mg，0.396mmol)、K₃PO₄(1.679g，7.91mmol)以及二噁烷(11mL)和H₂O(2.34mL)。向混合物充入N₂，保持5分钟，随后在100℃下加热3小时。完成后，将反应物冷却至室温，用EtOAc(20mL)稀释并用NH₄Cl水溶液(20mL)洗涤。将有机相分离，经MgSO₄干燥，过滤，接着浓缩。将浓缩的残余物再溶解于CH₂Cl₂(10mL)和TFA(5mL)中，并在室温下搅拌30分钟。接着，去除溶剂并将粗产物使用制备型LCMS(XBridge C18柱，用含有0.1％TFA的乙腈/水的梯度洗脱，流速60mL/min)纯化，得到呈TFA盐形式的所需产物。C₃₃H₃₅FN₇O的LCMS计算值(M+H)⁺m/z＝564.3；实验值564.2。

步骤5. 8-(1-(1-丙烯酰基哌啶-4-基)-6-氟-8-甲基-4-((S)-1-((S)-1-甲基吡咯烷-2-基)乙氧基)-1H-[1,2,3]三唑并[4,5-c]喹啉-7-基)-1-萘甲腈

向8-(6-氟-8-甲基-4-((S)-1-((S)-1-甲基吡咯烷-2-基)乙氧基)-1-(哌啶-4-基)-1H-[1,2,3]三唑并[4,5-c]喹啉-7-基)-1-萘甲腈于CH₂Cl₂(0.4M)中的溶液中添加三乙胺(5eq)，随后添加丙烯酰氯(1.5eq)于CH₂Cl₂(0.5M)中的溶液中。将混合物在室温下搅拌30分钟，接着通过添加MeOH淬灭。将混合物减压浓缩，接着用AcN稀释并通过制备型LCMS纯化。

实施例11a。非对映异构体1。峰1。C₃₆H₃₇FN₇O₂的LCMS计算值(M+H)⁺m/z＝618.3；实验值618.2。

实施例11b。非对映异构体2。峰2。C₃₆H₃₇FN₇O₂的LCMS计算值(M+H)⁺m/z＝618.3；实验值618.2。¹H NMR(600MHz,DMSO)δ9.98–9.50(d,J＝10.7Hz,1H),8.56–8.46(dd,J＝8.5,1.3Hz,1H),8.38–8.24(m,2H),8.16–8.10(dd,J＝7.2,1.4Hz,1H),7.91–7.83(dd,J＝8.3,7.0Hz,1H),7.81–7.72(dd,J＝8.3,7.2Hz,1H),7.71–7.64(d,J＝7.0Hz,1H),6.98–6.84(dd,J＝16.7,10.5Hz,1H),6.25–6.16(dd,J＝16.8,2.4Hz,1H),5.85–5.77(m,1H),5.77–5.73(dd,J＝10.5,2.4Hz,1H),5.57–5.44(m,1H),4.72–4.24(m,1H),4.01–3.88(m,1H),3.71–3.48(m,2H),3.31–3.19(m,2H),3.19–3.11(d,J＝4.8Hz,3H),2.48–2.34(m,2H),2.34–2.03(m,9H),2.00–1.86(m,2H),1.64–1.52(d,J＝6.1Hz,3H)。

实施例12.2-((2S,4S)-4-(7-(2-氯-3-甲基苯基)-4-(3-(二甲基氨基)-3-甲基氮杂环丁烷-1-基)-6-氟-8-甲基-1H-咪唑并[4,5-c]喹啉-1-基)-1-((E)-4-氟丁-2-烯酰基)哌啶-2-基)乙腈

步骤1.(2S,4S)-4-((7-溴-2-氯-8-氟-6-碘-3-硝基喹啉-4-基)氨基)-2-(氰基甲基)哌啶-1-甲酸叔丁酯

在室温下，将DIPEA(4.5mL，25.4mmol)添加至7-溴-2,4-二氯-8-氟-6-碘-3-硝基喹啉(中间体1)(7.9g，16.96mmol)和(2S,4S)-4-氨基-2-(氰基甲基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(中间体7)(4.87g，20.35mmol)于二噁烷(50mL)中的溶液中。将混合物在室温下搅拌过夜，接着在减压下去除大部分二噁烷。向剩余残余物中添加冰和水，并剧烈搅拌浆液。通过过滤收集固体沉淀并在空气下干燥，得到呈黄色固体状的所需产物(定量产率)。C₂₁H₂₂BrClFIN₅O₄的LCMS计算值(M+H)⁺:m/z＝668.0；实验值：667.8。

步骤2.(2S,4S)-4-((7-溴-2-(3-(二甲基氨基)-3-甲基氮杂环丁烷-1-基)-8-氟-6-碘-3-硝基喹啉-4-基)氨基)-2-(氰基甲基)哌啶-1-甲酸叔丁酯

向(2S,4S)-4-((7-溴-2-氯-8-氟-6-碘-3-硝基喹啉-4-基)氨基)-2-(氰基甲基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(2.5g，3.74mmol)于二噁烷(20mL)中的溶液中添加DIPEA(2.61mL，14.95mmol)和N,N,3-三甲基氮杂环丁烷-3-胺二盐酸盐(1.05g，5.61mmol)。将混合物在50℃下搅拌过夜，接着在减压下去除大部分二噁烷。向剩余残余物中添加冰和水，并剧烈搅拌浆液，直至形成精细粉末。通过过滤收集固体沉淀并在空气下干燥，得到所需产物(2.7g，97％产率)。C₂₇H₃₅BrFIN₇O₄的LCMS计算值(M+H)⁺:m/z＝746.1；实验值：746.1。

步骤3.(2S,4S)-4-(7-溴-4-(3-(二甲基氨基)-3-甲基氮杂环丁烷-1-基)-6-氟-8-碘-1H-咪唑并[4,5-c]喹啉-1-基)-2-(氰基甲基)哌啶-1-甲酸叔丁酯

将(2S,4S)-4-((7-溴-2-(3-(二甲基氨基)-3-甲基氮杂环丁烷-1-基)-8-氟-6-碘-3-硝基喹啉-4-基)氨基)-2-(氰基甲基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(1.0g，1.34mmol)和铁(450mg，8.04mmol)的混合物溶解于AcOH(5.0mL)中并在60℃下加热，直至硝基完全还原。将混合物冷却至室温，接着用EtOAc稀释并经硅藻土垫过滤。浓缩滤液，得到(2S,4S)-4-((3-氨基-7-溴-2-(3-(二甲基氨基)-3-甲基氮杂环丁烷-1-基)-8-氟-6-碘喹啉-4-基)氨基)-2-(氰基甲基)哌啶-1-甲酸叔丁酯。C₂₇H₃₇BrFIN₇O₂的LCMS计算值(M+H)⁺:m/z＝716.1；实验值：716.1。

向浓缩的残余物中添加原甲酸三乙酯(0.45mL，2.68mmol)和甲苯(10mL)。将混合物在100℃下加热过夜，接着冷却至室温并浓缩。将残余物通过柱色谱法(0-10％MeOH/CH₂Cl₂)纯化，得到所需产物(534mg，55％产率)。C₂₈H₃₅BrFIN₇O₂的LCMS计算值(M+H)⁺:m/z＝726.1；实验值：726.1。

步骤4.(2S,4S)-4-(7-溴-4-(3-(二甲基氨基)-3-甲基氮杂环丁烷-1-基)-6-氟-8-甲基-1H-咪唑并[4,5-c]喹啉-1-基)-2-(氰基甲基)哌啶-1-甲酸叔丁酯

本化合物是根据中间体8步骤2中所描述的程序，用(2S,4S)-4-(7-溴-4-(3-(二甲基氨基)-3-甲基氮杂环丁烷-1-基)-6-氟-8-碘-1H-咪唑并[4,5-c]喹啉-1-基)-2-(氰基甲基)哌啶-1-甲酸叔丁酯替代(2S,4S)-4-(7-溴-6-氟-8-碘-4-(甲硫基)-1H-[1,2,3]三唑并[4,5-c]喹啉-1-基)-2-(氰基甲基)哌啶-1-甲酸叔丁酯来制备。C₂₉H₃₈BrFN₇O₂的LCMS计算值(M+H)⁺m/z＝614.2；实验值614.3。

步骤5.(2S,4S)-4-(7-(2-氯-3-甲基苯基)-4-(3-(二甲基氨基)-3-甲基氮杂环丁烷-1-基)-6-氟-8-甲基-1H-咪唑并[4,5-c]喹啉-1-基)-2-(氰基甲基)哌啶-1-甲酸叔丁酯

将(2S,4S)-4-(7-溴-4-(3-(二甲基氨基)-3-甲基氮杂环丁烷-1-基)-6-氟-8-甲基-1H-咪唑并[4,5-c]喹啉-1-基)-2-(氰基甲基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(785mg，1.277mmol)、(2-氯-3-甲基苯基)硼酸(283mg，1.661mmol)、碳酸钠(542mg，5.11mmol)和Pd(Ph₃P)₄(221mg，0.192mmol)于二噁烷(5.5mL)/水(1.1mL)中的混合物排空并回填氮气(这一过程重复总计三次)。在90℃下搅拌反应3小时。将混合物用乙酸乙酯稀释并用水、盐水洗涤。将有机物过滤，经MgSO₄干燥，浓缩，并通过制备型LCMS纯化。C₃₆H₄₄ClFN₇O₂的LCMS计算值(M+H)⁺m/z＝660.3；实验值660.3。

步骤6. 2-((2S,4S)-4-(7-(2-氯-3-甲基苯基)-4-(3-(二甲基氨基)-3-甲基氮杂环丁烷-1-基)-6-氟-8-甲基-1H-咪唑并[4,5-c]喹啉-1-基)-1-((E)-4-氟丁-2-烯酰基)哌啶-2-基)乙腈

本化合物是根据实施例1a和实施例1b步骤2中所描述的程序，用(2S,4S)-4-(7-(2-氯-3-甲基苯基)-4-(3-(二甲基氨基)-3-甲基氮杂环丁烷-1-基)-6-氟-8-甲基-1H-咪唑并[4,5-c]喹啉-1-基)-2-(氰基甲基)哌啶-1-甲酸叔丁酯替代(2S,4S)-2-(氰基甲基)-4-(4-(3-(二甲基氨基)-3-甲基氮杂环丁烷-1-基)-6-氟-7-(5-氟喹啉-8-基)-8-(三氟甲基)-1H-[1,2,3]三唑并[4,5-c]喹啉-1-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯来制备。分离出非对映异构体混合物形式的产物。C₃₅H₃₉ClF₂N₇O的LCMS计算值(M+H)⁺m/z＝646.3；实验值646.3。¹H NMR(600MHz,DMSO)δ10.66–10.31(s,1H),8.54–8.50(m,1H),7.96–7.82(d,J＝4.8Hz,1H),7.51–7.46(m,1H),7.44–7.37(td,J＝7.6,2.4Hz,1H),7.29–7.17(d,J＝7.6Hz,1H),6.89–6.80(m,2H),5.60–5.39(m,1H),5.36–4.85(m,1H),5.24–5.11(dd,J＝46.5,2.5Hz,2H),4.79–4.19(m,5H),3.72–3.56(m,1H),3.49–3.14(m,2H),2.85–2.75(s,6H),2.49–2.03(m,10H),1.71–1.61(s,3H)。

实施例13.2-((2S,4S)-4-(7-(2-氯-3-甲基苯基)-6-氟-8-甲基-4-((S)-1-((S)-1-甲基吡咯烷-2-基)乙氧基)-1H-咪唑并[4,5-c]喹啉-1-基)-1-(2-氟丙烯酰基)哌啶-2-基)乙腈

步骤1.(2S,4S)-4-(7-溴-4-氯-6-氟-8-碘-1H-咪唑并[4,5-c]喹啉-1-基)-2-(氰基甲基)哌啶-1-甲酸叔丁酯

本化合物是根据实施例12步骤1，随后步骤3中所描述的程序制备。C₂₂H₂₂BrClFIN₅O₂的LCMS计算值(M+H)⁺m/z＝648.0；实验值648.0。

步骤2.(2S,4S)-4-(7-溴-6-氟-8-碘-4-(甲硫基)-1H-咪唑并[4,5-c]喹啉-1-基)-2-(氰基甲基)哌啶-1-甲酸叔丁酯

本化合物是根据中间体4步骤2中所描述的程序，用(2S,4S)-4-(7-溴-4-氯-6-氟-8-碘-1H-咪唑并[4,5-c]喹啉-1-基)-2-(氰基甲基)哌啶-1-甲酸叔丁酯替代(2S,4S)-4-(7-溴-4-氯-6-氟-8-碘-1H-[1,2,3]三唑并[4,5-c]喹啉-1-基)-2-(2-(叔丁氧基)-2-氧代乙基)哌啶-1-甲酸叔丁酯来制备。C₂₃H₂₅BrFIN₅O₂S的LCMS计算值(M+H)⁺:m/z＝660.0；实验值：660.0。

步骤3.(2S,4S)-4-(7-溴-6-氟-8-甲基-4-(甲硫基)-1H-咪唑并[4,5-c]喹啉-1-基)-2-(氰基甲基)哌啶-1-甲酸叔丁酯

本化合物是根据中间体8步骤2中所描述的程序，用(2S,4S)-4-(7-溴-6-氟-8-碘-4-(甲硫基)-1H-咪唑并[4,5-c]喹啉-1-基)-2-(氰基甲基)哌啶-1-甲酸叔丁酯替代(2S,4S)-4-(7-溴-6-氟-8-碘-4-(甲硫基)-1H-[1,2,3]三唑并[4,5-c]喹啉-1-基)-2-(氰基甲基)哌啶-1-甲酸叔丁酯来制备。C₂₄H₂₈BrFN₅O₂S的LCMS计算值(M+H)⁺m/z＝548.1；实验值548.1。

步骤4.(2S,4S)-4-(7-(2-氯-3-甲基苯基)-6-氟-8-甲基-4-(甲硫基)-1H-咪唑并[4,5-c]喹啉-1-基)-2-(氰基甲基)哌啶-1-甲酸叔丁酯

本化合物是根据实施例12步骤5中所描述的程序，用(2S,4S)-4-(7-溴-6-氟-8-甲基-4-(甲硫基)-1H-咪唑并[4,5-c]喹啉-1-基)-2-(氰基甲基)哌啶-1-甲酸叔丁酯替代(2S,4S)-4-(7-溴-4-(3-(二甲基氨基)-3-甲基氮杂环丁烷-1-基)-6-氟-8-甲基-1H-咪唑并[4,5-c]喹啉-1-基)-2-(氰基甲基)哌啶-1-甲酸叔丁酯来制备。C₃₁H₃₄ClFN₅O₂S的LCMS计算值(M+H)⁺m/z＝594.2；实验值594.3。

步骤5.(2S,4S)-4-(7-(2-氯-3-甲基苯基)-6-氟-8-甲基-4-((S)-1-((S)-1-甲基吡咯烷-2-基)乙氧基)-1H-咪唑并[4,5-c]喹啉-1-基)-2-(氰基甲基)哌啶-1-甲酸叔丁酯

本化合物是根据实施例7步骤2-3中所描述的程序，用(2S,4S)-4-(7-(2-氯-3-甲基苯基)-6-氟-8-甲基-4-(甲硫基)-1H-咪唑并[4,5-c]喹啉-1-基)-2-(氰基甲基)哌啶-1-甲酸叔丁酯替代(2S,4S)-2-(氰基甲基)-4-(6-氟-8-甲基-7-(1-甲基-1H-吲唑-6-基)-4-(甲硫基)-1H-[1,2,3]三唑并[4,5-c]喹啉-1-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯来制备。C₃₇H₄₅ClFN₆O₃的LCMS计算值(M+H)⁺m/z＝675.3；实验值675.3。

步骤6. 2-((2S,4S)-4-(7-(2-氯-3-甲基苯基)-6-氟-8-甲基-4-((S)-1-((S)-1-甲基吡咯烷-2-基)乙氧基)-1H-咪唑并[4,5-c]喹啉-1-基)-1-(2-氟丙烯酰基)哌啶-2-基)乙腈

/>

本化合物是根据实施例1a和实施例1b步骤2中所描述的程序，用(2S,4S)-4-(7-(2-氯-3-甲基苯基)-6-氟-8-甲基-4-((S)-1-((S)-1-甲基吡咯烷-2-基)乙氧基)-1H-咪唑并[4,5-c]喹啉-1-基)-2-(氰基甲基)哌啶-1-甲酸叔丁酯替代(2S,4S)-2-(氰基甲基)-4-(4-(3-(二甲基氨基)-3-甲基氮杂环丁烷-1-基)-6-氟-7-(5-氟喹啉-8-基)-8-(三氟甲基)-1H-[1,2,3]三唑并[4,5-c]喹啉-1-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯并用2-氟丙烯酸替代(E)-4-氟丁-2-烯酸来制备。分离出呈非对映异构体混合物形式的产物。C₃₅H₃₈ClF₂N₆O₂的LCMS计算值(M+H)⁺m/z＝647.3；实验值647.3。

实施例14a和14b.8-(1-((2R,4S)-1-丙烯酰基-2-甲基哌啶-4-基)-6-氟-8-甲基-4-((S)-1-((S)-1-甲基吡咯烷-2-基)乙氧基)-1H-[1,2,3]三唑并[4,5-c]喹啉-7-基)-1-萘甲腈

步骤1.(2R,4S)-4-(7-溴-6-氟-8-碘-4-(甲硫基)-1H-[1,2,3]三唑并[4,5-c]喹啉-1-基)-2-甲基哌啶-1-甲酸叔丁酯

本化合物是根据中间体4中所描述的程序，用(2R,4S)-4-氨基-2-甲基哌啶-1-甲酸叔丁酯替代(2S,4S)-4-氨基-2-(2-(叔丁氧基)-2-氧代乙基)哌啶-1-甲酸叔丁酯来制备。C₂₁H₂₅BrFIN₅O₂S的LCMS计算值(M+H)⁺:m/z＝636.0；实验值：636.0。

步骤2.(2R,4S)-4-(7-溴-6-氟-8-甲基-4-(甲硫基)-1H-[1,2,3]三唑并[4,5-c]喹啉-1-基)-2-甲基哌啶-1-甲酸叔丁酯

将(2R,4S)-4-(7-溴-6-氟-8-碘-4-(甲硫基)-1H-[1,2,3]三唑并[4,5-c]喹啉-1-基)-2-甲基哌啶-1-甲酸叔丁酯(5g，7.86mmol)、甲基硼酸(0.941g，15.72mmol)、磷酸钾(5.00g，23.57mmol)和二氯双(三苯基膦)-钯(II)(0.827g，1.179mmol)于二噁烷(60mL)和水(20mL)中的混合物加热至90℃并搅拌3小时。接着，将混合物冷却至室温，用AcOEt和水稀释，分离。将水层用AcOEt萃取并将合并的有机层用盐水洗涤，经Na₂SO₄干燥，过滤并蒸发。将残余物通过柱色谱法(0-20％EtOAc于CH₂Cl₂中)纯化，得到呈褐色固体状的所需产物。C₂₂H₂₈BrFN₅O₂S的LCMS计算值(M+H)⁺m/z＝524.1；实验值524.1。

步骤3.(2R,4S)-4-(7-溴-6-氟-8-甲基-4-((S)-1-((S)-1-甲基吡咯烷-2-基)乙氧基)-1H-[1,2,3]三唑并[4,5-c]喹啉-1-基)-2-甲基哌啶-1-甲酸叔丁酯

本化合物是根据实施例7步骤2-3中所描述的程序，用(2R,4S)-4-(7-溴-6-氟-8-甲基-4-(甲硫基)-1H-[1,2,3]三唑并[4,5-c]喹啉-1-基)-2-甲基哌啶-1-甲酸叔丁酯替代(2S,4S)-2-(氰基甲基)-4-(6-氟-8-甲基-7-(1-甲基-1H-吲唑-6-基)-4-(甲硫基)-1H-[1,2,3]三唑并[4,5-c]喹啉-1-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯来制备。将残余物通过柱色谱法(20-80％AcOEt于DCM中)纯化，得到呈褐色固体状的所需产物。C₂₈H₃₉BrFN₆O₃的LCMS计算值(M+H)⁺m/z＝605.2；实验值605.2。

步骤4.(2R,4S)-4-(7-(8-氰基萘-1-基)-6-氟-8-甲基-4-((S)-1-((S)-1-甲基吡咯烷-2-基)乙氧基)-1H-[1,2,3]三唑并[4,5-c]喹啉-1-基)-2-甲基哌啶-1-甲酸叔丁酯

将(2R,4S)-4-(7-溴-6-氟-8-甲基-4-((S)-1-((S)-1-甲基吡咯烷-2-基)乙氧基)-1H-[1,2,3]三唑并[4,5-c]喹啉-1-基)-2-甲基哌啶-1-甲酸叔丁酯(200mg，0.330mmol)、8-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-1-萘甲腈(184mg，0.661mmol)、磷酸三钾(351mg，1.651mmol)和SPhos Pd G4(79mg，0.099mmol)于二噁烷(8mL)和水(2mL)中的混合物加热至90℃。在相同温度下搅拌3小时后，将混合物冷却至室温，用EtOAc和水稀释，分离。将水层用AcOEt萃取并将合并的有机层用盐水洗涤，经Na₂SO₄干燥，过滤并蒸发。将残余物通过柱色谱法(20-80％EtOAc于CH₂Cl₂中)纯化，得到呈褐色固体状的所需产物。C₃₉H₄₅FN₇O₃的LCMS计算值(M+H)⁺m/z＝678.4；实验值678.4。

步骤5. 8-(1-((2R,4S)-1-丙烯酰基-2-甲基哌啶-4-基)-6-氟-8-甲基-4-((S)-1-((S)-1-甲基吡咯烷-2-基)乙氧基)-1H-[1,2,3]三唑并[4,5-c]喹啉-7-基)-1-萘甲腈

(2R,4S)-4-(7-(8-氰基萘-1-基)-6-氟-8-甲基-4-((S)-1-((S)-1-甲基吡咯烷-2-基)乙氧基)-1H-[1,2,3]三唑并[4,5-c]喹啉-1-基)-2-甲基哌啶-1-甲酸叔丁酯(400mg，0.578mmol)溶解于5mL TFA中。将混合物在室温下搅拌10分钟，接着去除溶剂。

将残余物溶解于乙腈(10mL)中，并添加Et₃N(484μl，3.47mmol)。在0℃下搅拌数分钟后，混浊混合物变为澄清溶液。添加丙烯酰氯(94μl，1.157mmol)。将混合物在0℃下搅拌30分钟，接着用TFA稀释并使用制备型LCMS(XBridge C18柱，用含有0.1％TFA的乙腈/水的梯度洗脱，流速60mL/min)纯化，得到所需产物。

实施例14a。非对映异构体1。峰1。C₃₇H₃₉FN₇O₂的LCMS计算值(M+H)⁺m/z＝632.3；实验值632.3。

实施例14b。非对映异构体2。峰2。C₃₇H₃₉FN₇O₂的LCMS计算值(M+H)⁺m/z＝632.3；实验值632.3。

¹H NMR(500MHz,DMSO)δ9.87(s,1H),8.51(dd,J＝8.5,1.4Hz,1H),8.31(dd,J＝8.3,1.3Hz,1H),8.21(s,1H),8.14(dd,J＝7.2,1.3Hz,1H),7.87(dd,J＝8.3,7.1Hz,1H),7.77(dd,J＝8.3,7.2Hz,1H),7.68(d,J＝7.0Hz,1H),6.93–6.87(m,1H),6.16(dd,J＝16.7,2.4Hz,1H),5.95(s,1H),5.73(dd,J＝10.5,2.4Hz,1H),5.51(dd,J＝10.1,5.9Hz,1H),5.08(s,1H),4.68(s,1H),4.27(d,J＝13.9Hz,1H),3.95(dd,J＝7.8,7.7Hz,1H),3.68(s,1H),3.57(dq,J＝12.2,6.2Hz,1H),3.17(m,J＝4.9Hz,3H),2.46(d,J＝9.7Hz,2H),2.35–2.26(m,2H),2.22(s,3H),2.10(td,J＝11.8,5.2Hz,1H),1.93(tq,J＝14.3,6.8Hz,2H),1.58(d,J＝6.1Hz,4H),1.51(d,J＝7.0Hz,2H)。

实施例15a和15b.2-((2S,4S)-4-(7-(5,6-二甲基-1H-吲唑-4-基)-4-(3-(乙基(甲基)氨基)氮杂环丁烷-1-基)-6-氟-8-甲基-1H-[1,2,3]三唑并[4,5-c]喹啉-1-基)-1-(2-氟丙烯酰基)哌啶-2-基)乙腈

步骤1.(2S,4S)-2-(氰基甲基)-4-(7-(5,6-二甲基-1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-吲唑-4-基)-6-氟-8-甲基-4-(甲硫基)-1H-[1,2,3]三唑并[4,5-c]喹啉-1-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯

将中间体8(1g，1.755mmol)、5,6-二甲基-1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-1H-吲唑(0.938g，2.63mmol)、磷酸三钾(1.862g，8.77mmol)和Pd(Ph₃P)₄(0.203g，0.175mmol)于二噁烷(12mL)和水(6mL)中的混合物加热至100℃并搅拌2小时。接着，将混合物冷却至室温，用AcOEt和水稀释，分离。将水层用EtOAc萃取并将合并的有机层用盐水洗涤，经Na₂SO₄干燥，过滤并蒸发。将残余物通过柱色谱法(10-40％EtOAc于CH₂Cl₂中)纯化，得到呈褐色固体状的所需产物。C₃₇H₄₄FN₈O₃S的LCMS计算值(M+H)⁺m/z＝699.3；实验值699.3。

步骤2.(2S,4S)-2-(氰基甲基)-4-(7-(5,6-二甲基-1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-吲唑-4-基)-4-(3-(乙基(甲基)氨基)氮杂环丁烷-1-基)-6-氟-8-甲基-1H-[1,2,3]三唑并[4,5-c]喹啉-1-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯

本化合物是根据实施例6步骤2-3中所描述的程序，在步骤2中用(2S,4S)-2-(氰基甲基)-4-(7-(5,6-二甲基-1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-吲唑-4-基)-6-氟-8-甲基-4-(甲硫基)-1H-[1,2,3]三唑并[4,5-c]喹啉-1-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯替代(2S,4S)-2-(氰基甲基)-4-(7-(2,3-二甲基苯基)-6-氟-8-甲基-4-(甲硫基)-1H-[1,2,3]三唑并[4,5-c]喹啉-1-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯并在步骤3中用N-乙基-N-甲基氮杂环丁烷-3-胺二盐酸盐替代N,N,3-三甲基氮杂环丁烷-3-胺来制备。将粗残余物通过柱色谱法(20-80％EtOAc于CH₂Cl₂中)纯化，得到呈褐色固体状的所需产物。C₄₂H₅₄FN₁₀O₃的LCMS计算值(M+H)⁺m/z＝765.4；实验值765.3。

步骤3. 2-((2S,4S)-4-(7-(5,6-二甲基-1H-吲唑-4-基)-4-(3-(乙基(甲基)氨基)氮杂环丁烷-1-基)-6-氟-8-甲基-1H-[1,2,3]三唑并[4,5-c]喹啉-1-基)-1-(2-氟丙烯酰基)哌啶-2-基)乙腈

将(2S,4S)-2-(氰基甲基)-4-(7-(5,6-二甲基-1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-吲唑-4-基)-4-(3-(乙基(甲基)氨基)氮杂环丁烷-1-基)-6-氟-8-甲基-1H-[1,2,3]三唑并[4,5-c]喹啉-1-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(378mg，0.494mmol)溶解于TFA(5mL)中。将混合物在60℃下搅拌10分钟，接着去除溶剂。将残余物与2-氟丙烯酸(131mg，1.455mmol)组合，接着添加乙腈(10mL)，随后添加DIPEA(506μl，2.89mmol)和T3P(853μl，50％于EtOAc中，1.447mmol)。在室温下搅拌过夜后，将混合物用TFA稀释，过滤并使用制备型LCMS(XBridgeC18柱，用含有0.1％TFA的乙腈/水的梯度洗脱，流速60mL/min)纯化，得到呈TFA盐形式的所需产物。

实施例15a。非对映异构体1。峰1。C₃₅H₃₉F₂N₁₀O的LCMS计算值(M+H)⁺m/z＝653.3；实验值653.3。¹H NMR(600MHz,DMSO)δ13.02(s,br,1H),10.21(s,br,1H),8.09(s,1H),7.47(s,1H),7.30(s,1H),5.86(td,J＝11.4,5.5Hz,1H),5.45–5.38(m,1H),5.33(m,1H),4.69(s,8H),4.40(d,J＝8.8Hz,1H),4.15(s,1H),3.73(s,1H),3.36(dd,J＝17.2,6.6Hz,2H),3.11(m,1H),2.86(s,3H),2.49(d,J＝9.5Hz,1H),2.47(s,3H),2.13(s,3H),2.02(s,3H),1.25(t,J＝7.3Hz,3H)。

实施例15b。非对映异构体2。峰2。C₃₅H₃₉F₂N₁₀O的LCMS计算值(M+H)⁺m/z＝653.3；实验值653.3。

实施例16a和实施例16b.8-(6-氟-1-(1-((E)-4-氟丁-2-烯酰基)哌啶-4-基)-8-甲基-4-((S)-1-((S)-1-甲基吡咯烷-2-基)乙氧基)-1H-[1,2,3]三唑并[4,5-c]喹啉-7-基)-1-萘甲腈

向圆底烧瓶中装入来自实施例11步骤1-4的8-(6-氟-8-甲基-4-((S)-1-((S)-1-甲基吡咯烷-2-基)乙氧基)-1-(哌啶-4-基)-1H-[1,2,3]三唑并[4,5-c]喹啉-7-基)-1-萘甲腈(600mg，0.854mmol)、丙基膦酸酐溶液(50％于EtOAc中，1.6mL，2.56mmol)、(E)-4-氟丁-2-烯酸(267mg，2.56mmol)和乙腈(15mL)。将反应烧瓶冷却至0℃并将TEA(1.7mL，12.8mmol)添加至反应物中。在室温下搅拌2小时后，用NaHCO₃水溶液(10mL)淬灭反应，用EtOAc(25mL×3)萃取并浓缩。将粗混合物再溶解于乙腈中并使用制备型LCMS(XBridge C18柱，用含有0.1％TFA的乙腈/水的梯度洗脱，流速60mL/min)纯化，得到所需产物。

实施例16a。非对映异构体1。峰1。C₃₇H₃₈F₂N₇O₂的LCMS计算值(M+H)⁺:m/z＝650.3；实验值：650.3。

实施例16b。非对映异构体2。峰2。C₃₇H₃₈F₂N₇O₂的LCMS计算值(M+H)⁺:m/z＝650.3；实验值：650.3。

实施例17a和实施例17b.8-(1-((2S,4S)-2-(氰基甲基)-1-(2-氟丙烯酰基)哌啶-4-基)-4-(3-(二甲基氨基)-3-甲基氮杂环丁烷-1-基)-6-氟-8-甲基-1H-[1,2,3]三唑并[4,5-c]喹啉-7-基)-1-萘甲腈

步骤1.(2S,4S)-4-(7-溴-4-(3-(二甲基氨基)-3-甲基氮杂环丁烷-1-基)-6-氟-8-甲基-1H-[1,2,3]三唑并[4,5-c]喹啉-1-基)-2-(氰基甲基)哌啶-1-甲酸叔丁酯

本化合物是根据实施例6步骤2-3中所描述的程序，用中间体8替代(2S,4S)-2-(氰基甲基)-4-(7-(2,3-二甲基苯基)-6-氟-8-甲基-4-(甲硫基)-1H-[1,2,3]三唑并[4,5-c]喹啉-1-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯来制备。将粗残余物在二氧化硅上纯化(0-10％MeOH于DCM中)，得到呈褐色固体状的所需产物(700mg，63％产率)。C₂₈H₃₇BrFN₈O₂的LCMS计算值(M+H)⁺:m/z＝615.2；实验值：615.2。

步骤2.(2S,4S)-2-(氰基甲基)-4-(7-(8-氰基萘-1-基)-4-(3-(二甲基氨基)-3-甲基氮杂环丁烷-1-基)-6-氟-8-甲基-1H-[1,2,3]三唑并[4,5-c]喹啉-1-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯

向反应小瓶装入(2S,4S)-4-(7-溴-4-(3-(二甲基氨基)-3-甲基氮杂环丁烷-1-基)-6-氟-8-甲基-1H-[1,2,3]三唑并[4,5-c]喹啉-1-基)-2-(氰基甲基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(500mg，0.79mmol)、SPhos Pd G4(97mg，0.12mmol)、8-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-1-萘甲腈(453mg，1.63mmol)、K₃PO₄(571mg，2.44mmol)以及二噁烷(9mL)和H₂O(3mL)。向混合物充入N₂，保持5分钟，随后在90℃下加热2小时。完成后，将反应冷却至室温，用EtOAc(30mL)稀释并用水溶液(20mL)洗涤。将有机相分离，经MgSO₄干燥并在二氧化硅上纯化(0-10％MeOH于DCM中)，得到呈褐色固体状的所需产物(358mg，64％产率)。C₃₉H₄₃FN₉O₂的LCMS计算值(M+H)⁺:m/z＝688.4；实验值：688.3。

步骤3. 8-(1-((2S,4S)-2-(氰基甲基)-1-(2-氟丙烯酰基)哌啶-4-基)-4-(3-(二甲基氨基)-3-甲基氮杂环丁烷-1-基)-6-氟-8-甲基-1H-[1,2,3]三唑并[4,5-c]喹啉-7-基)-1-萘甲腈

本化合物是根据实施例1a和实施例1b步骤2中所描述的程序，用(2S,4S)-2-(氰基甲基)-4-(7-(8-氰基萘-1-基)-4-(3-(二甲基氨基)-3-甲基氮杂环丁烷-1-基)-6-氟-8-甲基-1H-[1,2,3]三唑并[4,5-c]喹啉-1-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯替代(2S,4S)-2-(氰基甲基)-4-(4-(3-(二甲基氨基)-3-甲基氮杂环丁烷-1-基)-6-氟-7-(5-氟喹啉-8-基)-8-(三氟甲基)-1H-[1,2,3]三唑并[4,5-c]喹啉-1-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯并用2-氟丙烯酸替代(E)-4-氟丁-2-烯酸来制备。

实施例17a。非对映异构体1。峰1。C₃₇H₃₆F₂N₉O的LCMS计算值(M+H)⁺:m/z＝660.3；实验值：660.3。¹H NMR(600MHz,DMSO)δ8.48(dd,J＝8.4,1.3Hz,1H),8.28(dd,J＝8.4,1.3Hz,1H),8.12(dd,J＝7.1,1.3Hz,1H),8.06(s,1H),7.85(dd,J＝8.3,7.1Hz,1H),7.75(dd,J＝8.3,7.1Hz,1H),7.62(dd,J＝7.1,1.3Hz,1H),5.90-5.75(m,1H),5.45-5.30(m,2H),4.00-4.50(m,11H),2.85(s,6H),2.50(s,1H),2.20-2.15(m,4H),1.70(s,3H)。

实施例17b。非对映异构体2。峰2。C₃₇H₃₆F₂N₉O的LCMS计算值(M+H)⁺:m/z＝660.3；实验值：660.3。

实施例18a和18b.2-((2S,4S)-4-(6,8-二氯-4-(3-(二甲基氨基)-3-甲基氮杂环丁烷-1-基)-7-(5-氟喹啉-8-基)-1H-[1,2,3]三唑并[4,5-c]喹啉-1-基)-1-((E)-4-甲氧基丁-2-烯酰基)哌啶-2-基)乙腈

步骤1. 7-溴-6,8-二氯-2H-苯并[d][1,3]噁嗪-2,4(1H)-二酮

将NCS(5.6g，41.9mmol)添加至2-氨基-4-溴-3-氯苯甲酸(10.0g，39.9mmol)于1,4-二噁烷(100mL)中的溶液中，接着在70℃下搅拌反应过夜。将混合物冷却至室温，随后添加三光气(4.7g，15.96mmol)，接着在80℃下搅拌2小时。完成后，添加冰并将混合物搅拌30分钟。通过过滤收集固体沉淀并用冰水洗涤，得到所需产物。

步骤2. 7-溴-6,8-二氯-3-硝基喹啉-2,4-二醇

在室温下，将DIPEA(3.49mL，19.97mmol)添加至2-硝基乙酸乙酯(2.66g，19.97mmol)于甲苯(40.0mL)中的溶液中。搅拌10分钟后，添加7-溴-6,8-二氯-2H-苯并[d][1,3]噁嗪-2,4(1H)-二酮(3.1g，10.0mmol)并将所得混合物在95℃下搅拌3小时。将反应物用冰水冷却，接着通过过滤收集固体并用少量乙酸乙酯洗涤，得到呈黄色固体状的所需产物(1.05g，30％)。C₉H₄BrCl₂N₂O₄的LCMS计算值(M+H)⁺:m/z＝352.9；实验值353.0。

步骤3. 7-溴-2,4,6,8-四氯-3-硝基喹啉

在室温下，将DIPEA(0.98mL，5.6mmol)添加至7-溴-6,8-二氯-3-硝基喹啉-2,4-二醇(1.0g，2.82mmol)于POCl₃(6.0mL，64.4mmol)中的混合物中。接着，在100℃下搅拌反应3小时。在真空下去除溶剂。将浓缩的残余物再溶解于乙酸乙酯中，接着用NaHCO₃(水溶液)洗涤。将合并的有机层真空浓缩，得到该粗产物不经进一步纯化即直接用于下一步骤中。

步骤4.(2S,4S)-4-((7-溴-6,8-二氯-2-(3-(二甲基氨基)-3-甲基氮杂环丁烷-1-基)-3-硝基喹啉-4-基)氨基)-2-(氰基甲基)哌啶-1-甲酸叔丁酯

向7-溴-2,4,6,8-四氯-3-硝基喹啉(1g，2.56mmol)于CH₂Cl₂(10mL)中的溶液中添加DIPEA(1.8mL，10.24mmol)和中间体7(730mg，3.0mmol)。将混合物在室温下搅拌过夜，接着添加N,N,3-三甲基氮杂环丁烷-3-胺(350mg，3.0mmol)并将混合物在室温下搅拌直至完成。将反应物用CH₂Cl₂稀释，接着用饱和NH₄Cl溶液洗涤。在真空下去除溶剂并将粗产物不经进一步纯化即直接用于下一步骤中。C₂₇H₃₅BrCl₂N₇O₄的LCMS计算值(M+H)⁺:m/z＝670.1；实验值670.1。

步骤5.(2S,4S)-4-(7-溴-6,8-二氯-4-(3-(二甲基氨基)-3-甲基氮杂环丁烷-1-基)-1H-[1,2,3]三唑并[4,5-c]喹啉-1-基)-2-(氰基甲基)哌啶-1-甲酸叔丁酯

将(2S,4S)-4-((7-溴-6,8-二氯-2-(3-(二甲基氨基)-3-甲基氮杂环丁烷-1-基)-3-硝基喹啉-4-基)氨基)-2-(氰基甲基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(1.7g，2.56mmol)于THF/MeOH/H₂O(1:1:1)(30mL)中浆液、铁(1.43g，25.6mmol)和NH₄Cl(1.37g，25.6mmol)在65℃下加热30分钟。完成后，将反应物用MeOH稀释并过滤。在真空下去除溶剂，将残余物用NaHCO₃碱化并用CH₂Cl₂萃取。在真空下去除溶剂。

将浓缩的残余物再溶解于乙酸(5mL)中并添加亚硝酸钠(176mg，5.12mmol)。将混合物在室温下搅拌1小时。完成后，在真空下去除溶剂，并将残余物用NaHCO₃碱化并用CH₂Cl₂萃取。将合并的有机层经MgSO₄干燥，过滤，浓缩至干并在硅胶上纯化，得到所需产物(1.0g，60％)。C₂₇H₃₄BrCl₂N₈O₂的LCMS计算值(M+H)⁺:m/z＝651.1；实验值651.0。

步骤6.(2S,4S)-2-(氰基甲基)-4-(6,8-二氯-4-(3-(二甲基氨基)-3-甲基氮杂环丁烷-1-基)-7-(5-氟喹啉-8-基)-1H-[1,2,3]三唑并[4,5-c]喹啉-1-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯

向(2S,4S)-4-(7-溴-6,8-二氯-4-(3-(二甲基氨基)-3-甲基氮杂环丁烷-1-基)-1H-[1,2,3]三唑并[4,5-c]喹啉-1-基)-2-(氰基甲基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(650mg，1.0mmol)于二噁烷/H₂O＝4:1(10mL)中的溶液中添加K₃PO₄(850mg，4mmol)、(5-氟喹啉-8-基)硼酸(286mg，1.5mmol)和Pd(PPh₃)₄(80mg，0.07mmol)，将反应混合物加热至90℃，保持1.5小时。完成后，将反应物用水稀释并用CH₂Cl₂萃取，将合并的有机层经MgSO₄干燥，过滤，浓缩至干并在硅胶上纯化，得到呈非对映异构体混合物形式的所需产物(550mg，76％)。C₃₆H₃₉Cl₂FN₉O₂的LCMS计算值(M+H)⁺:m/z＝718.3；实验值718.2。

步骤7. 2-((2S,4S)-4-(6,8-二氯-4-(3-(二甲基氨基)-3-甲基氮杂环丁烷-1-基)-7-(5-氟喹啉-8-基)-1H-[1,2,3]三唑并[4,5-c]喹啉-1-基)-1-((E)-4-甲氧基丁-2-烯酰基)哌啶-2-基)乙腈

本化合物是根据实施例6步骤4中所描述的程序，用(2S,4S)-2-(氰基甲基)-4-(6,8-二氯-4-(3-(二甲基氨基)-3-甲基氮杂环丁烷-1-基)-7-(5-氟喹啉-8-基)-1H-[1,2,3]三唑并[4,5-c]喹啉-1-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯替代(2S,4S)-2-(氰基甲基)-4-(4-(3-(二甲基氨基)-3-甲基氮杂环丁烷-1-基)-7-(2,3-二甲基苯基)-6-氟-8-甲基-1H-[1,2,3]三唑并[4,5-c]喹啉-1-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯来制备。将产物使用制备型LCMS(XBridge C18柱，用含有0.15％NH₄OH的乙腈/水的梯度洗脱，流速60mL/min)纯化，得到所需产物。

实施例18a。非对映异构体1。峰1。C₃₆H₃₇Cl₂FN₉O₂的LCMS计算值(M+H)⁺m/z＝716.2；实验值716.2。

实施例18b。非对映异构体2。峰2。C₃₆H₃₇Cl₂FN₉O₂的LCMS计算值(M+H)⁺m/z＝716.2；实验值716.2。

实施例19a和19b.2-((2S,4S)-4-(6,8-二氯-4-(3-(二甲基氨基)-3-甲基氮杂环丁烷-1-基)-7-(5-氟喹啉-8-基)-1H-[1,2,3]三唑并[4,5-c]喹啉-1-基)-1-((E)-4-氟丁-2-烯酰基)哌啶-2-基)乙腈

本化合物是根据实施例1a和实施例1b步骤2中所描述的程序，用(2S,4S)-2-(氰基甲基)-4-(6,8-二氯-4-(3-(二甲基氨基)-3-甲基氮杂环丁烷-1-基)-7-(5-氟喹啉-8-基)-1H-[1,2,3]三唑并[4,5-c]喹啉-1-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯替代(2S,4S)-2-(氰基甲基)-4-(4-(3-(二甲基氨基)-3-甲基氮杂环丁烷-1-基)-6-氟-7-(5-氟喹啉-8-基)-8-(三氟甲基)-1H-[1,2,3]三唑并[4,5-c]喹啉-1-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯来制备。

实施例19a。非对映异构体1。峰1。C₃₅H₃₄Cl₂F₂N₉O的LCMS计算值(M+H)⁺m/z＝704.2；实验值704.2。

实施例19b。非对映异构体2。峰2。C₃₅H₃₄Cl₂F₂N₉O的LCMS计算值(M+H)⁺m/z＝704.2；实验值704.2。

实施例20.2-((2S,4S)-4-(4-(3-(二甲基氨基)-3-甲基氮杂环丁烷-1-基)-6-氟-7-(5-氟喹啉-8-基)-8-(三氟甲基)-1H-[1,2,3]三唑并[4,5-c]喹啉-1-基)-1-((E)-4-甲氧基丁-2-烯酰基)哌啶-2-基)乙腈

本化合物是根据实施例1a和实施例1b，即实施例1a步骤2中所描述的程序，用(E)-4-甲氧基丁-2-烯酸替代(E)-4-氟丁-2-烯酸来制备。

向反应小瓶装入中间体3(1.3g，1.9mmol)、XPhos Pd G2(76mg，0.097mmol)、(5-氟喹啉-8-基)硼酸(408mg，2.1mmol)、K₃PO₄(1.24g，5.83mmol)以及二噁烷(5mL)和H₂O(1mL)。向混合物充入N₂，保持5分钟，随后在90℃下加热1小时。完成后，将反应冷却至室温，用EtOAc(20mL)稀释并用NH₄Cl水溶液(20mL)洗涤。将有机相分离，经MgSO₄干燥，过滤，接着浓缩。将粗产物先通过二氧化硅纯化(20g，50-100％EtOAc于CH₂Cl₂中)，接着再使用制备型LCMS(XBridge C18柱，用含有0.15％NH₄OH的乙腈/水的梯度洗脱，流速60mL/min)纯化，分离出非对映异构体(白色非晶形粉末，21％合并产率)。

步骤2. 2-((2S,4S)-4-(4-(3-(二甲基氨基)-3-甲基氮杂环丁烷-1-基)-6-氟-7-(5-氟喹啉-8-基)-8-(三氟甲基)-1H-[1,2,3]三唑并[4,5-c]喹啉-1-基)-1-((E)-4-甲氧基丁-2-烯酰基)哌啶-2-基)乙腈

在室温下，向装入来自步骤1的(2S,4S)-2-(氰基甲基)-4-(4-(3-(二甲基氨基)-3-甲基氮杂环丁烷-1-基)-6-氟-7-(5-氟喹啉-8-基)-8-(三氟甲基)-1H-[1,2,3]三唑并[4,5-c]喹啉-1-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(非对映异构体1，300mg，0.41mmol)的反应小瓶中添加TFA(1mL)。搅拌15分钟后，去除挥发性物质。将残余物再溶解于乙腈(4mL)中并冷却至0℃。将DIPEA(0.21mL)添加至反应物中，随后添加(E)-4-甲氧基丁-2-烯酸(71mg，0.61mmol)和丙基膦酸酐溶液(50％于EtOAc中，0.50mL，0.82mmol)。在0℃下搅拌10分钟后，用NaHCO₃水溶液(5mL)淬灭反应，用EtOAc(5mL)萃取，用盐水洗涤并浓缩。将粗产物再溶解于乙腈中并使用制备型LCMS(XBridge C18柱，用含有0.1％TFA的乙腈/水的梯度洗脱，流速60mL/min)纯化，得到呈白色非晶形粉末形式的TFA盐形式的实施例20(单一非对映异构体)。C₃₇H₃₇F₅N₉O₂的LCMS计算值(M+H)⁺m/z＝734.3；实验值734.4。¹H NMR(600MHz,DMSO-d6)δ10.80(s,1H),8.87(dd,J＝4.2,1.7Hz,1H),8.62(dd,J＝8.5,1.8Hz,1H),8.41(s,1H),7.82(dd,J＝8.0,5.9Hz,1H),7.70(dd,J＝8.5,4.1Hz,1H),7.65(dd,J＝9.7,8.0Hz,1H),6.81–6.72(m,2H),5.93(s,1H),5.31(s,1H),4.96(m,2H),4.76–4.32(m,2H),4.11(d,J＝3.1Hz,2H),3.67–3.34(m,2H),3.33(s,3H),3.19(td,J＝16.6,10.1Hz,2H),2.84(s,6H),2.49–2.43(m,2H),2.33(s,1H),2.21(d,J＝15.7Hz,1H),1.71(s,3H)。

实施例21.2-((2S,4S)-4-(6-氟-7-(4-氟异喹啉-1-基)-8-甲基-4-((S)-1-((S)-1-甲基吡咯烷-2-基)乙氧基)-1H-[1,2,3]三唑并[4,5-c]喹啉-1-基)-1-((E)-4-甲氧基丁-2-烯酰基)哌啶-2-基)乙腈

步骤1.(2S,4S)-2-(氰基甲基)-4-(6-氟-8-甲基-4-((S)-1-((S)-1-甲基吡咯烷-2-基)乙氧基)-7-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-1H-[1,2,3]三唑并[4,5-c]喹啉-1-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯

向反应小瓶中装入(2S,4S)-4-(7-溴-6-氟-8-甲基-4-((S)-1-((S)-1-甲基吡咯烷-2-基)乙氧基)-1H-[1,2,3]三唑并[4,5-c]喹啉-1-基)-2-(氰基甲基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(315mg，0.5mmol)、双(频哪醇合)二硼(165mg，0.65mmol)、Pd(dppf)Cl₂(36mg，0.05mmol)、乙酸钾(147mg，1.5mmol)和二噁烷(5mL)。向混合物充入N₂，保持5分钟，随后在80℃下加热16小时。完成后，将反应冷却至室温，用DCM(100mL)稀释并用NH₄Cl水溶液(20mL)洗涤。将有机相分离，经MgSO₄干燥，过滤，接着浓缩。将粗产物不经进一步纯化即用于下一步骤。

步骤2. 2-((2S,4S)-4-(6-氟-7-(4-氟异喹啉-1-基)-8-甲基-4-((S)-1-((S)-1-甲基吡咯烷-2-基)乙氧基)-1H-[1,2,3]三唑并[4,5-c]喹啉-1-基)哌啶-2-基)乙腈

向反应小瓶中装入来自前一步骤1的粗(2S,4S)-2-(氰基甲基)-4-(6-氟-8-甲基-4-((S)-1-((S)-1-甲基吡咯烷-2-基)乙氧基)-7-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-1H-[1,2,3]三唑并[4,5-c]喹啉-1-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯、1-氯-4-氟异喹啉(118mg，0.65mmol)、Pd(PPh₃)₄(58mg，0.05mmol)、K₃PO₄(318mg，1.5mmol)、二噁烷(4mL)和水(1mL)。将混合物在90℃下加热1小时。完成后，将反应冷却至室温，用乙酸乙酯(100mL)稀释并用NH₄Cl水溶液(20mL)洗涤。将有机相分离，经MgSO₄干燥，过滤，接着浓缩。

将粗产物溶解于5mL DCM/TFA(1:1)溶液中。完成后，将反应物浓缩。将粗产物再溶解于乙腈中并使用制备型LCMS(XBridge C18柱，用含有0.1％TFA的乙腈/水的梯度洗脱，流速60mL/min)纯化，得到呈非对映异构体混合物形式的所需产物，C₃₃H₃₅F₂N₈O的LCMS计算值(M+H)⁺m/z＝597.3；实验值597.3。

步骤3. 2-((2S,4S)-4-(6-氟-7-(4-氟异喹啉-1-基)-8-甲基-4-((S)-1-((S)-1-甲基吡咯烷-2-基)乙氧基)-1H-[1,2,3]三唑并[4,5-c]喹啉-1-基)-1-((E)-4-甲氧基丁-2-烯酰基)哌啶-2-基)乙腈

向反应小瓶装入2-((2S,4S)-4-(6-氟-7-(4-氟异喹啉-1-基)-8-甲基-4-((S)-1-((S)-1-甲基吡咯烷-2-基)乙氧基)-1H-[1,2,3]三唑并[4,5-c]喹啉-1-基)哌啶-2-基)乙腈(30mg，0.05mmol)、DIPEA(0.087mL，0.5mmol)、(E)-4-甲氧基丁-2-烯酸(12mg，0.1mmol)、1mL MeCN和丙基膦酸酐溶液(50％于EtOAc中，0.06mL，0.1mmol)。在0℃下搅拌后10分钟，将反应物稀释于乙腈中并使用制备型LCMS(XBridge C18柱，用含有0.1％TFA的乙腈/水的梯度洗脱，流速60mL/min)纯化，得到呈非对映异构体混合物形式的所需产物。

实施例21。C₃₈H₄₁F₂N₈O₃的LCMS计算值(M+H)⁺m/z＝695.3；实验值695.3。

实施例22.2-((2S,4S)-4-(6-氟-7-(4-氟异喹啉-1-基)-8-甲基-4-((S)-1-((S)-1-甲基吡咯烷-2-基)乙氧基)-1H-[1,2,3]三唑并[4,5-c]喹啉-1-基)-1-(2-氟丙烯酰基)哌啶-2-基)乙腈

本化合物是根据实施例21中所描述的程序，用2-氟丙烯酸替代(E)-4-甲氧基丁-2-烯酸来制备。

实施例22。C₃₆H₃₆F₃N₈O₂的LCMS计算值(M+H)⁺m/z＝669.3；实验值669.3。

实施例23a和实施例23b.2-((2S,4S)-4-(6-氟-8-甲基-7-(3-甲基异喹啉-4-基)-4-((S)-1-((S)-1-甲基吡咯烷-2-基)乙氧基)-1H-[1,2,3]三唑并[4,5-c]喹啉-1-基)-1-(2-氟丙烯酰基)哌啶-2-基)乙腈

步骤1. 3-甲基-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)异喹啉

将4-溴-3-甲基异喹啉(1.110g，5.0mmol)、4,4,4',4',5,5,5',5'-八甲基-2,2'-联(1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷)(2.285g，9.00mmol)、乙酸钾(1.472g，15.00mmol)和PdCl₂(dppf)(0.366g，0.500mmol)于二噁烷(20.0mL)中的混合物在105℃下搅拌5小时。去除溶剂并将产物通过用己烷/EtOAc(最大EtOAc 80％)洗脱的柱纯化。C₁₆H₂₁BNO₂的LCMS计算值(M+H)⁺m/z＝270.1；实验值270.1。

步骤2. 2-((2S,4S)-4-(6-氟-8-甲基-7-(3-甲基异喹啉-4-基)-4-((S)-1-((S)-1-甲基吡咯烷-2-基)乙氧基)-1H-[1,2,3]三唑并[4,5-c]喹啉-1-基)哌啶-2-基)乙腈

将(2S,4S)-4-(7-溴-6-氟-8-甲基-4-((S)-1-((S)-1-甲基吡咯烷-2-基)乙氧基)-1H-[1,2,3]三唑并[4,5-c]喹啉-1-基)-2-(氰基甲基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(45.0mg，0.071mmol)、3-甲基-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)异喹啉(28.8mg，0.107mmol)、磷酸钾(45.4mg，0.214mmol)和甲烷磺酸(2-二环己基膦基-2',6'-二甲氧基-1,1'-联苯)(2'-甲基氨基-1,1'-联苯-2-基)钯(II)二氯甲烷加合物(SPhos PdG4)(5.68mg，7.14μmol)于二噁烷(2ml)/水(0.4ml)中的混合物抽真空，接着再填入N2两次，接着在95℃下搅拌反应4小时。将混合物用MeCN稀释，接着在PH＝10下通过制备型HPLC纯化。去除溶剂并将残余物溶解于MeCN(1.0mL)中，接着添加TFA(1.0mL)并在室温下搅拌反应40分钟。去除溶剂并将粗产物直接用于下一步骤中。C₃₄H₃₈FN₈O的LCMS计算值(M+H)⁺m/z＝593.3；实验值593.4。

步骤3. 2-((2S,4S)-4-(6-氟-8-甲基-7-(3-甲基异喹啉-4-基)-4-((S)-1-((S)-1-甲基吡咯烷-2-基)乙氧基)-1H-[1,2,3]三唑并[4,5-c]喹啉-1-基)-1-(2-氟丙烯酰基)哌啶-2-基)乙腈

在0℃下，将三乙胺(5.64μl，0.040mmol)添加至2-((2S,4S)-4-(6-氟-8-甲基-7-(3-甲基异喹啉-4-基)-4-((S)-1-((S)-1-甲基吡咯烷-2-基)乙氧基)-1H-[1,2,3]三唑并[4,5-c]喹啉-1-基)哌啶-2-基)乙腈(4.0mg，6.75μmol)、2-氟丙烯酸(1.215mg，0.013mmol)和1-丙烷膦酸环酐(T3P，50％于EtOAc中)(4.02μl，0.013mmol)于乙酸乙酯(0.8ml)中的溶液中，接着搅拌反应30分钟。去除溶剂并将粗产物再溶解于乙腈中，并使用制备型LCMS(XBridge C18柱，用含有0.1％TFA的乙腈/水的梯度洗脱，流速60mL/min)纯化，得到呈TFA盐形式的产物。

实施例23a。非对映异构体1。峰1。C₃₇H₃₉F₂N₈O₂的LCMS计算值(M+H)⁺m/z＝665.3；实验值665.4。

实施例23b。非对映异构体2。峰2。C₃₇H₃₉F₂N₈O₂的LCMS计算值(M+H)⁺m/z＝665.3；实验值665.4。¹H NMR(600MHz,DMSO)δ9.46(s,1H),8.32(s,1H),8.27(m,1H),7.72(m,2H),7.22(m,1H),5.94(m 1H),5.64(m,1H),5.28-5.37(m,2H),3.96(q,1H),3.63(m,3H),3.54(m、1H),3.38(m,2H),3.21(m、1H),3.16(s,3H),2.51(m,4H),2.40(s,3H),2.34(m,1H),2.19(s,3H),2.13(m,1H),1.97(m,2H),1.59(d,3H)。

实施例24a和实施例24b.2-((2S,4S)-4-(6-氟-8-甲基-7-(3-甲基异喹啉-4-基)-4-((S)-1-((S)-1-甲基吡咯烷-2-基)乙氧基)-1H-[1,2,3]三唑并[4,5-c]喹啉-1-基)-1-((E)-4-甲氧基丁-2-烯酰基)哌啶-2-基)乙腈

本化合物是根据实施例23a和实施例23b步骤3中所描述的程序，用(E)-4-甲氧基丁-2-烯酸替代2-氟丙烯酸来制备。

实施例24a。非对映异构体1。峰1。C₃₉H₄₄FN₈O₃的LCMS计算值(M+H)⁺m/z＝691.3；实验值691.5。

实施例24b。非对映异构体2。峰2。C₃₉H₄₄FN₈O₃的LCMS计算值(M+H)⁺m/z＝691.3；实验值691.5。

实施例25a和实施例25b.2-((2S,4S)-4-(6-氟-7-(7-氟-2-甲基喹啉-8-基)-8-甲基-4-((S)-1-((S)-1-甲基吡咯烷-2-基)乙氧基)-1H-[1,2,3]三唑并[4,5-c]喹啉-1-基)-1-(2-氟丙烯酰基)哌啶-2-基)乙腈

步骤1. 2-((2S,4S)-4-(6-氟-7-(7-氟-2-甲基喹啉-8-基)-8-甲基-4-((S)-1-((S)-1-甲基吡咯烷-2-基)乙氧基)-1H-[1,2,3]三唑并[4,5-c]喹啉-1-基)哌啶-2-基)乙腈

本化合物是根据实施例23a和实施例23b步骤2中所描述的程序，用(7-氟-2-甲基喹啉-8-基)硼酸替代3-甲基-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)异喹啉来制备。C₃₄H₃₇F₂N₈O的LCMS计算值(M+H)⁺m/z＝611.3；实验值611.4。

步骤2. 2-((2S,4S)-4-(6-氟-7-(7-氟-2-甲基喹啉-8-基)-8-甲基-4-((S)-1-((S)-1-甲基吡咯烷-2-基)乙氧基)-1H-[1,2,3]三唑并[4,5-c]喹啉-1-基)-1-(2-氟丙烯酰基)哌啶-2-基)乙腈

本化合物是根据实施例23a和实施例23b步骤3中所描述的程序，用2-((2S,4S)-4-(6-氟-7-(7-氟-2-甲基喹啉-8-基)-8-甲基-4-((S)-1-((S)-1-甲基吡咯烷-2-基)乙氧基)-1H-[1,2,3]三唑并[4,5-c]喹啉-1-基)哌啶-2-基)乙腈替代2-((2S,4S)-4-(6-氟-8-甲基-7-(3-甲基异喹啉-4-基)-4-((S)-1-((S)-1-甲基吡咯烷-2-基)乙氧基)-1H-[1,2,3]三唑并[4,5-c]喹啉-1-基)哌啶-2-基)乙腈来制备。

实施例25a。非对映异构体1。峰1。C₃₇H₃₈F₃N₈O₂的LCMS计算值(M+H)⁺m/z＝683.3；实验值683.4。

实施例25b。非对映异构体2。峰2。C₃₇H₃₈F₃N₈O₂的LCMS计算值(M+H)⁺m/z＝683.3；实验值683.4。

实施例26a和实施例26b.2-((2S,4S)-4-(6-氟-8-甲基-7-(1-甲基异喹啉-4-基)-4-((S)-1-((S)-1-甲基吡咯烷-2-基)乙氧基)-1H-[1,2,3]三唑并[4,5-c]喹啉-1-基)-1-((E)-4-甲氧基丁-2-烯酰基)哌啶-2-基)乙腈

步骤1.(1-甲基异喹啉-4-基)硼酸

将4-溴-1-甲基异喹啉(0.222g，1.0mmol)、4,4,4',4',5,5,5',5'-八甲基-2,2'-联(1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷)(0.457g，1.800mmol)、乙酸钾(0.294g，3.00mmol)和PdCl2(dppf)(0.073g，0.100mmol)于二噁烷(5.0ml)中的混合物在105℃下搅拌4小时。将产物在PH＝2(TFA)下通过制备型HPLC纯化。C₁₀H₁₁BNO₂的LCMS计算值(M+H)⁺m/z＝188.1；实验值188.1。

步骤2. 2-((2S,4S)-4-(6-氟-8-甲基-7-(1-甲基异喹啉-4-基)-4-((S)-1-((S)-1-甲基吡咯烷-2-基)乙氧基)-1H-[1,2,3]三唑并[4,5-c]喹啉-1-基)哌啶-2-基)乙腈

本化合物是根据实施例23a和实施例23b步骤2中所描述的程序，用(1-甲基异喹啉-4-基)硼酸替代3-甲基-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)异喹啉来制备。C₃₄H₃₈FN₈O的LCMS计算值(M+H)⁺m/z＝593.3；实验值593.4。

步骤3. 2-((2S,4S)-4-(6-氟-8-甲基-7-(1-甲基异喹啉-4-基)-4-((S)-1-((S)-1-甲基吡咯烷-2-基)乙氧基)-1H-[1,2,3]三唑并[4,5-c]喹啉-1-基)-1-((E)-4-甲氧基丁-2-烯酰基)哌啶-2-基)乙腈

在0℃下，将三乙胺(5.64μl，0.040mmol)添加至2-((2S,4S)-4-(6-氟-8-甲基-7-(1-甲基异喹啉-4-基)-4-((S)-1-((S)-1-甲基吡咯烷-2-基)乙氧基)-1H-[1,2,3]三唑并[4,5-c]喹啉-1-基)哌啶-2-基)乙腈(4.0mg，6.75μmol)、(E)-4-甲氧基丁-2-烯酸(1.567mg，0.013mmol)和1-丙烷膦酸环酐(T3P，50％于EtOAc中)(4.02μl，0.013mmol)于乙酸乙酯(0.8ml)中的溶液中，接着搅拌反应30分钟。去除溶剂并将粗产物再溶解于乙腈中，并使用制备型LCMS(XBridge C18柱，用含有0.1％TFA的乙腈/水的梯度洗脱，流速60mL/min)纯化，得到呈TFA盐形式的产物。

实施例26a。非对映异构体1。峰1。C₃₉H₄₄FN₈O₃的LCMS计算值(M+H)⁺m/z＝691.4；实验值691.5。

实施例26b。非对映异构体2。峰2。C₃₉H₄₄FN₈O₃的LCMS计算值(M+H)⁺m/z＝691.4；实验值691.5。

实施例27a和实施例27b.2-((2S,4S)-4-(6-氟-7-(7-氟喹啉-8-基)-8-甲基-4-((S)-1-((S)-1-甲基吡咯烷-2-基)乙氧基)-1H-[1,2,3]三唑并[4,5-c]喹啉-1-基)-1-(2-氟丙烯酰基)哌啶-2-基)乙腈

步骤1. 2-((2S,4S)-4-(6-氟-7-(7-氟喹啉-8-基)-8-甲基-4-((S)-1-((S)-1-甲基吡咯烷-2-基)乙氧基)-1H-[1,2,3]三唑并[4,5-c]喹啉-1-基)哌啶-2-基)乙腈

本化合物是根据实施例23a和实施例23b步骤2中所描述的程序，用(7-氟喹啉-8-基)硼酸替代3-甲基-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)异喹啉来制备。C₃₃H₃₅F₂N₈O的LCMS计算值(M+H)⁺m/z＝597.3；实验值597.4。

步骤2. 2-((2S,4S)-4-(6-氟-7-(7-氟喹啉-8-基)-8-甲基-4-((S)-1-((S)-1-甲基吡咯烷-2-基)乙氧基)-1H-[1,2,3]三唑并[4,5-c]喹啉-1-基)-1-(2-氟丙烯酰基)哌啶-2-基)乙腈

本化合物是根据实施例23a和实施例23b步骤3中所描述的程序，用2-((2S,4S)-4-(6-氟-7-(7-氟喹啉-8-基)-8-甲基-4-((S)-1-((S)-1-甲基吡咯烷-2-基)乙氧基)-1H-[1,2,3]三唑并[4,5-c]喹啉-1-基)哌啶-2-基)乙腈替代2-((2S,4S)-4-(6-氟-8-甲基-7-(3-甲基异喹啉-4-基)-4-((S)-1-((S)-1-甲基吡咯烷-2-基)乙氧基)-1H-[1,2,3]三唑并[4,5-c]喹啉-1-基)哌啶-2-基)乙腈来制备。

实施例27a。非对映异构体1。峰1。C₃₆H₃₆F₃N₈O₂的LCMS计算值(M+H)⁺m/z＝669.3；实验值669.4。

实施例27b。非对映异构体2。峰2。C₃₆H₃₆F₃N₈O₂的LCMS计算值(M+H)⁺m/z＝669.3；实验值669.4。

实施例28a和实施例28b.2-(4-(1-((2R,4S)-1-丙烯酰基-2-甲基哌啶-4-基)-6-氟-8-甲基-4-((S)-1-((S)-1-甲基吡咯烷-2-基)乙氧基)-1H-[1,2,3]三唑并[4,5-c]喹啉-7-基)-1-甲基-1H-吲唑-3-基)乙腈

步骤1.(4-溴-1-甲基-1H-吲唑-3-基)甲醇

在0℃下，向4-溴-1H-吲唑-3-甲酸甲酯(1.2g，4.70mmol)和碘甲烷(1.07g，7.5mmol)于THF(20mL)中的混合物添加氢化钠(0.34g，8.47mmol，60％于矿物油中的分散液)。将反应混合物搅拌5分钟并升温至室温，此时将其搅拌过夜。完成后，用NH₄Cl水溶液(5mL)淬灭反应混合物。将水相用EtOAc(10mL×3)萃取，用MgSO₄干燥，过滤并浓缩。随后，将粗混合物溶解于THF(20mL)中并冷却至-78℃，此时通过注射器缓慢添加LiAlH₄(11.7mL，11.7mmol，1M于THF中)。将反应混合物升温至0℃并再搅拌15分钟，此时缓慢添加NH₄Cl水溶液(10mL)。将水相用EtOAc(10mL×3)萃取，用MgSO₄干燥，过滤并浓缩。将粗混合物不经进一步纯化即用于下一步骤中。C₉H₁₀BrN₂O的LCMS计算值(M+H)⁺m/z＝241.0；实验值241.0。

步骤2. 2-(4-溴-1-甲基-1H-吲唑-3-基)乙腈

向在-78℃下冷却的在CH₂Cl₂(10mL)中的(4-溴-1-甲基-1H-吲唑-3-基)甲醇(0.67g，2.77mmol)中缓慢添加PBr₃(0.39mL，4.16mmol)。将反应混合物在相同温度下搅拌1小时，此时小心地用NaHCO₃水溶液(5mL)淬灭反应混合物。将水相用EtOAc(20mL×3)萃取，用MgSO₄干燥，过滤并浓缩。向粗混合物中添加DMSO(8mL)，随后在室温下添加NaCN(0.41g，8.32mmol)。将反应混合物在60℃下搅拌3小时并在完成后，重新冷却至室温。将水(20mL)添加至反应烧瓶中并析出所需产物。接着，通过过滤收集所需产物，用水洗涤，并空气干燥4小时。C₁₀H₉BrN₃的LCMS计算值(M+H)⁺m/z＝250.0；实验值250.0。

步骤3. 2-(1-甲基-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-1H-吲唑-3-基)乙腈

将在二噁烷(3mL)中的2-(4-溴-1-甲基-1H-吲唑-3-基)乙腈(0.12g，0.48mmol)、4,4,4',4',5,5,5',5'-八甲基-2,2'-联(1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷)(0.18g，0.72mmol)、乙酸钾(0.15g，1.54mmol)和PdCl₂(dppf)(0.024g，0.033mmol)在95℃下搅拌3小时。去除溶剂并将产物通过硅胶柱，用己烷/EtOAc(最大EtOAc 50％)洗脱来纯化。C₁₆H₂₁BN₃O₂的LCMS计算值(M+H)⁺m/z＝298.2；实验值298.2。

步骤4.(2R,4S)-4-(7-(3-(氰基甲基)-1-甲基-1H-吲唑-4-基)-6-氟-8-甲基-4-((S)-1-((S)-1-甲基吡咯烷-2-基)乙氧基)-1H-[1,2,3]三唑并[4,5-c]喹啉-1-基)-2-甲基哌啶-1-甲酸叔丁酯

向来自实施例14a和实施例14b步骤3的(2R,4S)-4-(7-溴-6-氟-8-甲基-4-((S)-1-((S)-1-甲基吡咯烷-2-基)乙氧基)-1H-[1,2,3]三唑并[4,5-c]喹啉-1-基)-2-甲基哌啶-1-甲酸叔丁酯(40mg，0.066mmol)于二噁烷/H₂O＝4:1(2mL)中的溶液中添加K₃PO₄(49mg，0.23mmol)、2-(1-甲基-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-1H-吲唑-3-基)乙腈(29mg，0.099mmol)和SPhosPdG₄(7.9mg，0.01mmol)，将反应混合物加热至90℃，保持1.5小时。完成后，将反应物用水稀释并用EtOAc(2mL×3)萃取，用MgSO₄干燥，过滤并浓缩。将粗混合物在硅胶上，用CH₂Cl₂/MeOH(最大MeOH 10％)洗脱来纯化，得到呈非对映异构体混合物形式的所需产物(20mg，44％)。C₃₈H₄₇FN₉O₃的LCMS计算值(M+H)⁺:m/z＝696.4；实验值696.4。

步骤5. 2-(4-(1-((2R,4S)-1-丙烯酰基-2-甲基哌啶-4-基)-6-氟-8-甲基-4-((S)-1-((S)-1-甲基吡咯烷-2-基)乙氧基)-1H-[1,2,3]三唑并[4,5-c]喹啉-7-基)-1-甲基-1H-吲唑-3-基)乙腈

本化合物是根据实施例14a和实施例14b步骤5，用(2R,4S)-4-(7-(3-(氰基甲基)-1-甲基-1H-吲唑-4-基)-6-氟-8-甲基-4-((S)-1-((S)-1-甲基吡咯烷-2-基)乙氧基)-1H-[1,2,3]三唑并[4,5-c]喹啉-1-基)-2-甲基哌啶-1-甲酸叔丁酯替代(2R,4S)-4-(7-(8-氰基萘-1-基)-6-氟-8-甲基-4-((S)-1-((S)-1-甲基吡咯烷-2-基)乙氧基)-1H-[1,2,3]三唑并[4,5-c]喹啉-1-基)-2-甲基哌啶-1-甲酸叔丁酯来制备。将混合物使用制备型LCMS(XBridge C18柱，用含有0.1％TFA的乙腈/水的梯度洗脱，流速60mL/min)纯化，得到所需产物。

实施例28a。非对映异构体1。峰1。C₃₆H₄₁FN₉O₂的LCMS计算值(M+H)⁺m/z＝650.3；实验值650.3。

实施例28b。非对映异构体2。峰2。C₃₆H₄₁FN₉O₂的LCMS计算值(M+H)⁺m/z＝650.3；实验值650.3。

实施例29.2-((2S,4S)-4-(4-(3-(乙基(甲基)氨基)-3-甲基氮杂环丁烷-1-基)-6-氟-7-(6-氟-5-甲基-1H-吲唑-4-基)-8-甲基-1H-[1,2,3]三唑并

[4,5-c]喹啉-1-基)-1-(2-氟丙烯酰基)哌啶-2-基)乙腈

步骤1.(2S,4S)-2-(氰基甲基)-4-(6-氟-7-(6-氟-5-甲基-1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-吲唑-4-基)-8-甲基-4-(甲硫基)-1H-[1,2,3]三唑并[4,5-c]喹啉-1-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯

将中间体8(2g，3.64mmol)、6-氟-5-甲基-1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-1H-吲唑(1.967g，5.46mmol)、磷酸三钾(3.86g，18.20mmol)和Pd(Ph₃P)₄(0.421g，0.364mmol)于二噁烷(25ml)/水(12ml)中的混合物抽真空并再填入N₂两次，接着在102℃下搅拌反应2小时。接着，将混合物冷却至室温，用AcOEt和水稀释，分离。将水层用EtOAc萃取并将合并的有机层用盐水洗涤，经Na₂SO₄干燥，过滤并蒸发。将残余物通过柱色谱法(10-40％EtOAc于CH₂Cl₂中)纯化，得到呈褐色固体状的所需产物。C₃₆H₄₁F₂N₈O₃S的LCMS计算值(M+H)⁺m/z＝703.3；实验值703.3。

步骤2. 2-((2S,4S)-4-(4-(3-(乙基(甲基)氨基)-3-甲基氮杂环丁烷-1-基)-6-氟-7-(6-氟-5-甲基-1H-吲唑-4-基)-8-甲基-1H-[1,2,3]三唑并[4,5-c]喹啉-1-基)哌啶-2-基)乙腈

在0℃下，将mCPBA(77％湿品)(0.842g，3.76mmol)添加至(2S,4S)-2-(氰基甲基)-4-(6-氟-7-(6-氟-5-甲基-1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-吲唑-4-基)-8-甲基-4-(甲硫基)-1H-[1,2,3]三唑并[4,5-c]喹啉-1-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(2.4g，3.41mmol)于CH₂Cl₂(30ml)中的溶液中，接着在这一温度下搅拌反应20分钟。通过添加饱和Na₂S₂O₃和Na₂CO₃水溶液淬灭反应，用CH₂Cl₂稀释并分离。将水层用CH₂Cl₂萃取。将合并的有机层经Na₂SO₄干燥并浓缩，得到(2S,4S)-2-(氰基甲基)-4-(6-氟-7-(6-氟-5-甲基-1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-吲唑-4-基)-8-甲基-4-(甲基亚磺酰基)-1H-[1,2,3]三唑并[4,5-c]喹啉-1-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯和相应磺酰基化合物的粗混合物，并将粗品直接用于下一步骤中。

将(2S,4S)-2-(氰基甲基)-4-(6-氟-7-(6-氟-5-甲基-1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-吲唑-4-基)-8-甲基-4-(甲基亚磺酰基)-1H-[1,2,3]三唑并[4,5-c]喹啉-1-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(和相应的磺酰基化合物，2.4g，3.34mmol)和N-乙基-N,3-二甲基氮杂环丁烷-3-胺(0.428g，3.34mmol)组合并添加乙腈(33.4ml)。向悬浮液中添加DIPEA(1.166ml，6.68mmol)，接着将混合物加热至70℃并在相同温度下搅拌2小时。蒸发溶剂，得到呈褐色固体状的粗产物。

将(2S,4S)-2-(氰基甲基)-4-(4-(3-(乙基(甲基)氨基)-3-甲基氮杂环丁烷-1-基)-6-氟-7-(6-氟-5-甲基-1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-吲唑-4-基)-8-甲基-1H-[1,2,3]三唑并[4,5-c]喹啉-1-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯溶解于10ml TFA中并加热至60℃，并在相同温度下搅拌10分钟。接着，冷却至室温并用乙腈稀释，过滤并使用制备型LCMS(XBridge C18柱，用含有0.1％TFA的乙腈/水的梯度洗脱，流速60mL/min)纯化，分离出非对映异构体(白色非晶形粉末，53％合并产率)。

非对映异构体1。峰1。C₃₂H₃₇F₂N₁₀的LCMS计算值(M+H)⁺m/z＝599.3；实验值599.3。

非对映异构体2。峰2。C₃₂H₃₇F₂N₁₀的LCMS计算值(M+H)⁺m/z＝599.3；实验值599.3。

步骤3. 2-((2S,4S)-4-(4-(3-(乙基(甲基)氨基)-3-甲基氮杂环丁烷-1-基)-6-氟-7-(6-氟-5-甲基-1H-吲唑-4-基)-8-甲基-1H-[1,2,3]三唑并[4,5-c]喹啉-1-基)-1-(2-氟丙烯酰基)哌啶-2-基)乙腈

将2-((2S,4S)-4-(4-(3-(乙基(甲基)氨基)-3-甲基氮杂环丁烷-1-基)-6-氟-7-(6-氟-5-甲基-1H-吲唑-4-基)-8-甲基-1H-[1,2,3]三唑并[4,5-c]喹啉-1-基)哌啶-2-基)乙腈双(2,2,2-三氟乙酸盐)(非对映异构体2，395mg，0.477mmol)与2-氟丙烯酸(134mg，1.488mmol)组合，接着添加乙腈(10mL)，随后添加DIPEA(780μl，4.46mmol)和T3P(877μl，50％于AcOEt中，1.488mmol)。在室温下搅拌过夜后，将混合物用TFA稀释，过滤并使用制备型LCMS(XBridge C18柱，用含有0.1％TFA的乙腈/水的梯度洗脱，流速60mL/min)纯化，得到呈白色非晶形粉末形式的TFA盐形式的实施例29(单一非对映异构体)。

实施例29。C₃₅H₃₈F₃N₁₀O的LCMS计算值(M+H)⁺m/z＝671.3；实验值671.3。¹H NMR(600MHz,DMSO)δ13.28(s,br,1H),10.16(s,br,1H),8.12(s,1H),7.47-7.44(m,2H),5.86(td,J＝11.4,5.5Hz,1H),5.45–5.38(m,2H),5.16(m,1H),4.77-4.73(m,2H),4.50-4.36(m,4H),3.66-3.44(m,2H),3.36(m,2H),3.11(m,1H),2.81(s,3H),2.49-2.45(m,2H),2.17(s,3H),2.03(s,3H),1.71(s,3H),1.27(t,J＝7.3Hz,3H)。

实施例30.2-((2S,4S)-4-(7-(5,6-二甲基-1H-吲唑-4-基)-4-(3-(乙基(甲基)氨基)-3-甲基氮杂环丁烷-1-基)-6-氟-8-甲基-1H-[1,2,3]三唑并[4,5-c]喹啉-1-基)-1-(2-氟丙烯酰基)哌啶-2-基)乙腈

将中间体8(2g，3.64mmol)、5,6-二甲基-1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-1H-吲唑(1.945g，5.46mmol)、磷酸三钾(3.86g，18.20mmol)和Pd(Ph₃P)₄(0.421g，0.364mmol)于二噁烷(25ml)/水(12ml)中的混合物抽真空并再填入N₂两次，接着在102℃下搅拌反应2小时。接着，将混合物冷却至室温，用AcOEt和水稀释，分离。将水层用EtOAc萃取并将合并的有机层用盐水洗涤，经Na₂SO₄干燥，过滤并蒸发。将残余物通过柱色谱法(10-40％EtOAc于CH₂Cl₂中)纯化，得到呈褐色固体状的所需产物。C₃₇H₄₄FN₈O₃S的LCMS计算值(M+H)⁺m/z＝699.3；实验值699.3。

步骤2. 2-((2S,4S)-4-(7-(5,6-二甲基-1H-吲唑-4-基)-4-(3-(乙基(甲基)氨基)-3-甲基氮杂环丁烷-1-基)-6-氟-8-甲基-1H-[1,2,3]三唑并[4,5-c]喹啉-1-基)哌啶-2-基)乙腈

在0℃下，将mCPBA(0.962g，77％湿品，4.29mmol)添加至(2S,4S)-2-(氰基甲基)-4-(7-(5,6-二甲基-1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-吲唑-4-基)-6-氟-8-甲基-4-(甲硫基)-1H-[1,2,3]三唑并[4,5-c]喹啉-1-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(2g，2.86mmol)于CH₂Cl₂(30ml)中的溶液中，接着在这一温度下搅拌反应20分钟。通过添加饱和Na₂S₂O₃和Na₂CO₃水溶液淬灭反应，用CH₂Cl₂稀释并分离。将水层用CH₂Cl₂萃取。将合并的有机层经Na₂SO₄干燥并浓缩，得到(2S,4S)-2-(氰基甲基)-4-(7-(5,6-二甲基-1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-吲唑-4-基)-6-氟-8-甲基-4-(甲基亚磺酰基)-1H-[1,2,3]三唑并[4,5-c]喹啉-1-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯和相应磺酰基化合物的粗混合物，并将粗品直接用于下一步骤中。

将(2S,4S)-2-(氰基甲基)-4-(7-(5,6-二甲基-1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-吲唑-4-基)-6-氟-8-甲基-4-(甲基亚磺酰基)-1H-[1,2,3]三唑并[4,5-c]喹啉-1-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(和相应磺酰基化合物，1.5g，2.098mmol)、N-乙基-N,3-二甲基氮杂环丁烷-3-胺(0.323g，2.52mmol)组合并添加乙腈(20ml)。向悬浮液中添加DIPEA(1.832ml，10.49mmol)，接着将混合物加热至70℃并在相同温度下搅拌2小时。蒸发溶剂，得到呈褐色固体状的粗产物。

将以上获得的(2S,4S)-2-(氰基甲基)-4-(7-(5,6-二甲基-1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-吲唑-4-基)-4-(3-(乙基(甲基)氨基)-3-甲基氮杂环丁烷-1-基)-6-氟-8-甲基-1H-[1,2,3]三唑并[4,5-c]喹啉-1-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯溶解于10ml TFA中并加热至60℃，并在相同温度下搅拌10分钟。接着，冷却至室温并用乙腈稀释，过滤并使用制备型LCMS(XBridge C18柱，用含有0.1％TFA的乙腈/水的梯度洗脱，流速60mL/min)纯化，分离出非对映异构体(白色非晶形粉末，51％合并产率)。

非对映异构体1。峰1。C₃₃H₄₀FN₁₀的LCMS计算值(M+H)⁺m/z＝595.3；实验值595.3。

非对映异构体2。峰2。C₃₃H₄₀FN₁₀的LCMS计算值(M+H)⁺m/z＝595.3；实验值595.3。

步骤3. 2-((2S,4S)-4-(7-(5,6-二甲基-1H-吲唑-4-基)-4-(3-(乙基(甲基)氨基)-3-甲基氮杂环丁烷-1-基)-6-氟-8-甲基-1H-[1,2,3]三唑并[4,5-c]喹啉-1-基)-1-(2-氟丙烯酰基)哌啶-2-基)乙腈

将2-((2S,4S)-4-(7-(5,6-二甲基-1H-吲唑-4-基)-4-(3-(乙基(甲基)氨基)-3-甲基氮杂环丁烷-1-基)-6-氟-8-甲基-1H-[1,2,3]三唑并[4,5-c]喹啉-1-基)哌啶-2-基)乙腈双(2,2,2-三氟乙酸盐)(非对映异构体2，400mg，0.486mmol)和2-氟丙烯酸(88mg，0.972mmol)组合，接着添加乙腈(10mL)，随后添加DIPEA(849μl，4.86mmol)和T3P(573μl，50％于AcOEt中，0.972mmol)。在室温下搅拌过夜后，将混合物用TFA稀释，过滤并使用制备型LCMS(XBridge C18柱，用含有0.1％TFA的乙腈/水的梯度洗脱，流速60mL/min)纯化，得到呈白色非晶形粉末形式的TFA盐形式的实施例30(单一非对映异构体)。

实施例30。C₃₆H₄₁F₂N₁₀O的LCMS计算值(M+H)⁺m/z＝667.3；实验值667.3。¹H NMR(600MHz,DMSO)δ13.02(s,br,1H),10.18(s,br,1H),8.10(s,1H),7.47(s,1H),7.31(d,J＝5.1Hz,1H),5.86(td,J＝11.4,5.5Hz,1H),5.41(dd,J＝18.2,4.4Hz,1H),5.38-4.62(m,9H),3.73-3.56(m,2H),3.36(dd,J＝16.9,6.8Hz,1H),3.07(td,J＝14.0,5.2Hz,1H),2.81(s,3H),2.49(s,3H),2.48-2.45(m,2H),2.14(s,3H),2.02(s,3H),1.71(s,3H),1.27(t,J＝7.3Hz,3H)。

实施例31a和实施例31b.2-(4-(1-((2R,4S)-1-丙烯酰基-2-甲基哌啶-4-基)-6-氟-8-甲基-4-((S)-1-((S)-1-甲基吡咯烷-2-基)乙氧基)-1H-[1,2,3]三唑并[4,5-c]喹啉-7-基)-1-甲基-1H-吲哚-3-基)乙腈

步骤1. 2-(1-甲基-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-1H-吲哚-3-基)乙腈

本化合物是根据实施例28a和实施例28b步骤3，用2-(4-溴-1-甲基-1H-吲哚-3-基)乙腈替代2-(4-溴-1-甲基-1H-吲唑-3-基)乙腈来制备。将混合物使用硅胶柱色谱法，用己烷/EtOAc(最大EtOAc 50％)洗脱来纯化。C₁₇H₂₂BN₂O₂的LCMS计算值(M+H)⁺m/z＝297.2；实验值297.2。

步骤2.(2R,4S)-4-(7-(3-(氰基甲基)-1-甲基-1H-吲哚-4-基)-6-氟-8-甲基-4-((S)-1-((S)-1-甲基吡咯烷-2-基)乙氧基)-1H-[1,2,3]三唑并[4,5-c]喹啉-1-基)-2-甲基哌啶-1-甲酸叔丁酯

本化合物是根据实施例28a和实施例28b步骤4，用2-(1-甲基-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-1H-吲哚-3-基)乙腈替代2-(1-甲基-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-1H-吲唑-3-基)乙腈来制备。将粗混合物在硅胶上用CH₂Cl₂/MeOH(最大MeOH 10％)洗脱来纯化，得到呈非对映异构体混合物形式的所需产物。C₃₉H₄₈FN₈O₃的LCMS计算值(M+H)⁺:m/z＝695.4；实验值695.4。

步骤3. 2-(4-(1-((2R,4S)-1-丙烯酰基-2-甲基哌啶-4-基)-6-氟-8-甲基-4-((S)-1-((S)-1-甲基吡咯烷-2-基)乙氧基)-1H-[1,2,3]三唑并[4,5-c]喹啉-7-基)-1-甲基-1H-吲哚-3-基)乙腈

本化合物是根据实施例14a和实施例14b步骤5，用(2R,4S)-4-(7-(3-(氰基甲基)-1-甲基-1H-吲哚-4-基)-6-氟-8-甲基-4-((S)-1-((S)-1-甲基吡咯烷-2-基)乙氧基)-1H-[1,2,3]三唑并[4,5-c]喹啉-1-基)-2-甲基哌啶-1-甲酸叔丁酯替代(2R,4S)-4-(7-(8-氰基萘-1-基)-6-氟-8-甲基-4-((S)-1-((S)-1-甲基吡咯烷-2-基)乙氧基)-1H-[1,2,3]三唑并[4,5-c]喹啉-1-基)-2-甲基哌啶-1-甲酸叔丁酯来制备。将混合物使用制备型LCMS(XBridge C18柱，用含有0.1％TFA的乙腈/水的梯度洗脱，流速60mL/min)纯化，得到所需产物。

实施例31a。非对映异构体1。峰1。C₃₇H₄₂FN₈O₂的LCMS计算值(M+H)⁺m/z＝649.3；实验值649.3。

实施例31b。非对映异构体2。峰2。C₃₇H₄₂FN₈O₂的LCMS计算值(M+H)⁺m/z＝649.3；实验值649.3。¹H NMR(600MHz,DMSO)δ8.17(s,1H),7.62(d,J＝8.3Hz,1H),7.48(s,1H),7.37(dd,J＝8.3,7.1Hz,1H),7.00(d,J＝7.1Hz,1H),6.96-6.84(m,1H),6.16(dd,J＝16.6,2.4Hz,1H),5.95-5.85(m,1H),5.73(dd,J＝10.5,2.4Hz,1H),5.57(dq,J＝12.4,6.2Hz,1H),4.73-4.62(m,1H),4.31-4.20(m,1H),3.97-3.91(m,1H),3.88(s,3H),3.65-3.54(m,2H),3.20-3.07(m,6H),2.51-2.45(m,2H),2.38-2.25(m,2H),2.24(s,3H),2.15-1.90(m,4H),1.57-1.43(m,6H)。

实施例32a和实施例32b.2-(4-(1-(1-丙烯酰基哌啶-4-基)-6-氟-8-甲基-4-((S)-1-((S)-1-甲基吡咯烷-2-基)乙氧基)-1H-[1,2,3]三唑并[4,5-c]喹啉-7-基)-1-甲基-1H-吲哚-3-基)乙腈

步骤1. 4-(7-(3-(氰基甲基)-1-甲基-1H-吲哚-4-基)-6-氟-8-甲基-4-((S)-1-((S)-1-甲基吡咯烷-2-基)乙氧基)-1H-[1,2,3]三唑并[4,5-c]喹啉-1-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯

/>

本化合物是根据实施例11a和实施例11b步骤4，用来自实施例31a和实施例31b步骤1的2-(1-甲基-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-1H-吲哚-3-基)乙腈替代8-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-1-萘甲腈来制备。将粗混合物在硅胶上用CH₂Cl₂/MeOH(最大MeOH 10％)洗脱来纯化，得到呈非对映异构体混合物形式的所需产物。C₃₈H₄₆FN₈O₃的LCMS计算值(M+H)⁺m/z＝681.4；实验值681.4。

步骤2. 2-(4-(1-(1-丙烯酰基哌啶-4-基)-6-氟-8-甲基-4-((S)-1-((S)-1-甲基吡咯烷-2-基)乙氧基)-1H-[1,2,3]三唑并[4,5-c]喹啉-7-基)-1-甲基-1H-吲哚-3-基)乙腈

本化合物是根据实施例14a和实施例14b步骤5，用4-(7-(3-(氰基甲基)-1-甲基-1H-吲哚-4-基)-6-氟-8-甲基-4-((S)-1-((S)-1-甲基吡咯烷-2-基)乙氧基)-1H-[1,2,3]三唑并[4,5-c]喹啉-1-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯替代(2R,4S)-4-(7-(8-氰基萘-1-基)-6-氟-8-甲基-4-((S)-1-((S)-1-甲基吡咯烷-2-基)乙氧基)-1H-[1,2,3]三唑并[4,5-c]喹啉-1-基)-2-甲基哌啶-1-甲酸叔丁酯来制备。将混合物使用制备型LCMS(XBridge C18柱，用含有0.1％TFA的乙腈/水的梯度洗脱，流速60mL/min)纯化，得到所需产物。

实施例32a。非对映异构体1。峰1。C₃₆H₄₀FN₈O₂的LCMS计算值(M+H)⁺m/z＝635.3；实验值635.3。

实施例32b。非对映异构体2。峰2。C₃₆H₄₀FN₈O₂的LCMS计算值(M+H)⁺m/z＝635.3；实验值635.3。¹H NMR(600MHz,DMSO)δ8.26(s,1H),7.61(d,J＝8.4Hz,1H),7.47(s,1H),7.45-7.35(m,1H),7.00(d,J＝7.1Hz,1H),6.93(dd,J＝16.7,104Hz,1H),6.18(dd,J＝16.7,2.5Hz,1H),5.79-5.70(m,2H),5.59-5.50(m,1H),4.62-4.53(m,1H),4.31-4.24(m,1H),3.99-3.90(m,1H),3.87(s,3H),3.70-3.11(m,10H),2.51-2.18(m,8H),1.58(d,J＝6.1Hz,3H)。

实施例33a和33b.2-((2S,4S)-4-(8-氯-7-(5,6-二甲基-1H-吲唑-4-基)-4-(3-(乙基(甲基)氨基)-3-甲基氮杂环丁烷-1-基)-6-氟-1H-[1,2,3]三唑并[4,5-c]喹啉-1-基)-1-(2-氟丙烯酰基)哌啶-2-基)乙腈

步骤1. 7-溴-2,4,6-三氯-8-氟-3-硝基喹啉

本化合物是根据中间体1中所描述的程序，用步骤1中的NCS替代NIS来制备。C₉H₂BrCl₃FN₂O₂的LCMS计算值(M+H)⁺m/z＝372.8；实验值372.8。

步骤2.(2S,4S)-4-(7-溴-8-氯-6-氟-4-(甲硫基)-1H-[1,2,3]三唑并[4,5-c]喹啉-1-基)-2-(氰基甲基)哌啶-1-甲酸叔丁酯

本化合物是根据中间体8步骤1中所描述的程序，用7-溴-2,4,6-三氯-8-氟-3-硝基喹啉替代7-溴-2,4-二氯-8-氟-6-碘-3-硝基喹啉来制备。C₂₂H₂₄BrClFN₆O₂S的LCMS计算值(M+H)⁺m/z＝569.1；实验值569.1。

步骤3.(2S,4S)-4-(8-氯-7-(5,6-二甲基-1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-吲唑-4-基)-6-氟-4-(甲硫基)-1H-[1,2,3]三唑并[4,5-c]喹啉-1-基)-2-(氰基甲基)哌啶-1-甲酸叔丁酯

将(2S,4S)-4-(7-溴-8-氯-6-氟-4-(甲硫基)-1H-[1,2,3]三唑并[4,5-c]喹啉-1-基)-2-(氰基甲基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(1g，1.755mmol)、5,6-二甲基-1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-1H-吲唑(0.938g，2.63mmol)、磷酸三钾(1.862g，8.77mmol)和Pd(Ph₃P)₄(0.203g，0.175mmol)于二噁烷(11.70ml)/水(5.85ml)中的混合物抽真空并再填入N₂两次，接着在102℃下搅拌反应2小时。接着，将混合物冷却至室温，用AcOEt和水稀释，分离。将水层用EtOAc萃取并将合并的有机层用盐水洗涤，经Na₂SO₄干燥，过滤并蒸发。将残余物通过柱色谱法(10-40％EtOAc于CH₂Cl₂中)纯化，得到呈褐色固体状的所需产物。C₃₆H₄₁ClFN₈O₃S的LCMS计算值(M+H)⁺m/z＝719.3；实验值719.3。

步骤4.(2S,4S)-4-(8-氯-7-(5,6-二甲基-1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-吲唑-4-基)-4-(3-(乙基(甲基)氨基)-3-甲基氮杂环丁烷-1-基)-6-氟-1H-[1,2,3]三唑并[4,5-c]喹啉-1-基)-2-(氰基甲基)哌啶-1-甲酸叔丁酯

本化合物是根据实施例6步骤2-3中所描述的程序，用步骤2中的(2S,4S)-4-(8-氯-7-(5,6-二甲基-1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-吲唑-4-基)-6-氟-4-(甲硫基)-1H-[1,2,3]三唑并[4,5-c]喹啉-1-基)-2-(氰基甲基)哌啶-1-甲酸叔丁酯替代(2S,4S)-2-(氰基甲基)-4-(7-(2,3-二甲基苯基)-6-氟-8-甲基-4-(甲硫基)-1H-[1,2,3]三唑并[4,5-c]喹啉-1-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯，并用步骤3中的N-乙基-N,3-二甲基氮杂环丁烷-3-胺替代N,N,3-三甲基氮杂环丁烷-3-胺来制备。将粗残余物通过柱色谱法(20-80％EtOAc于CH₂Cl₂中)纯化，得到呈褐色固体状的所需产物。C₄₂H₅₃ClFN₁₀O₃的LCMS计算值(M+H)⁺m/z＝799.4；实验值799.4。

步骤5. 2-((2S,4S)-4-(8-氯-7-(5,6-二甲基-1H-吲唑-4-基)-4-(3-(乙基(甲基)氨基)-3-甲基氮杂环丁烷-1-基)-6-氟-1H-[1,2,3]三唑并[4,5-c]喹啉-1-基)-1-(2-氟丙烯酰基)哌啶-2-基)乙腈

将(2S,4S)-4-(8-氯-7-(5,6-二甲基-1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-吲唑-4-基)-4-(3-(乙基(甲基)氨基)-3-甲基氮杂环丁烷-1-基)-6-氟-1H-[1,2,3]三唑并[4,5-c]喹啉-1-基)-2-(氰基甲基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(427mg，0.534mmol)溶解于TFA(5mL)中。将混合物在60℃下搅拌10分钟，接着去除溶剂。

将残余物与2-氟丙烯酸(144mg，1.601mmol)组合，接着添加乙腈(10mL)，随后添加DIPEA(0.93mL，5.34mmol)和T3P(0.94mL，50％于AcOEt中，1.601mmol)。在室温下搅拌过夜后，将混合物用TFA稀释，过滤并使用制备型LCMS(XBridge C18柱，用含有0.1％TFA的乙腈/水的梯度洗脱，流速60mL/min)纯化，得到呈TFA盐形式的所需产物。

实施例33a。非对映异构体1。峰1。C₃₅H₃₈ClF₂N₁₀O的LCMS计算值(M+H)⁺m/z＝687.3；实验值687.3。

实施例33b。非对映异构体2。峰2。C₃₅H₃₈ClF₂N₁₀O的LCMS计算值(M+H)⁺m/z＝687.3；实验值687.3。

实施例34a和实施例34b.2-((2S,4S)-4-(6-氟-7-(2-氟-6-甲氧基苯基)-8-甲基-4-((S)-1-((S)-1-甲基吡咯烷-2-基)乙氧基)-1H-[1,2,3]三唑并[4,5-c]喹啉-1-基)-1-((E)-4-甲氧基丁-2-烯酰基)哌啶-2-基)乙腈

步骤1. 2-((2S,4S)-4-(6-氟-7-(2-氟-6-甲氧基苯基)-8-甲基-4-((S)-1-((S)-1-甲基吡咯烷-2-基)乙氧基)-1H-[1,2,3]三唑并[4,5-c]喹啉-1-基)哌啶-2-基)乙腈

本化合物是根据实施例23a和实施例23b步骤2中所描述的程序，用(2-氟-6-甲氧基苯基)硼酸替代3-甲基-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)异喹啉来制备。C₃₁H₃₆F₂N₇O₂的LCMS计算值(M+H)⁺m/z＝576.3；实验值576.4。

步骤2. 2-((2S,4S)-4-(6-氟-7-(2-氟-6-甲氧基苯基)-8-甲基-4-((S)-1-((S)-1-甲基吡咯烷-2-基)乙氧基)-1H-[1,2,3]三唑并[4,5-c]喹啉-1-基)-1-((E)-4-甲氧基丁-2-烯酰基)哌啶-2-基)乙腈

本化合物是根据实施例26a和实施例26b步骤3中所描述的程序，用2-((2S,4S)-4-(6-氟-7-(2-氟-6-甲氧基苯基)-8-甲基-4-((S)-1-((S)-1-甲基吡咯烷-2-基)乙氧基)-1H-[1,2,3]三唑并[4,5-c]喹啉-1-基)哌啶-2-基)乙腈替代2-((2S,4S)-4-(6-氟-8-甲基-7-(1-甲基异喹啉-4-基)-4-((S)-1-((S)-1-甲基吡咯烷-2-基)乙氧基)-1H-[1,2,3]三唑并[4,5-c]喹啉-1-基)哌啶-2-基)乙腈来制备。

实施例34a。非对映异构体1。峰1。C₃₆H₄₂F₂N₇O₄的LCMS计算值(M+H)⁺m/z＝674.3；实验值674.3。

实施例34b。非对映异构体2。峰2。C₃₆H₄₂F₂N₇O₄的LCMS计算值(M+H)⁺m/z＝674.3；实验值674.3。

实施例35a和35b.2-((2S,4S)-4-(8-氯-4-(3-(乙基(甲基)氨基)-3-甲基氮杂环丁烷-1-基)-6-氟-7-(6-氟-5-甲基-1H-吲唑-4-基)-1H-[1,2,3]三唑并[4,5-c]喹啉-1-基)-1-(2-氟丙烯酰基)哌啶-2-基)乙腈

本化合物是根据实施例33中所描述的程序，用步骤3中的6-氟-5-甲基-1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-1H-吲唑替代5,6-二甲基-1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-1H-吲唑来制备。

实施例35a。非对映异构体1。峰1。C₃₄H₃₅ClF₃N₁₀O的LCMS计算值(M+H)⁺m/z＝691.3；实验值691.3。

实施例35b。非对映异构体2。峰2。C₃₄H₃₅ClF₃N₁₀O的LCMS计算值(M+H)⁺m/z＝691.3；实验值691.3。

实施例A.GDP-GTP交换测定.

例示化合物的抑制剂效力是在基于荧光的鸟嘌呤核苷酸交换测定中确定，该测定测量了氟硼荧(bodipy)-GDP(荧光标记的GDP)交换GppNHp(不可水解的GTP类似物)而在SOS1(鸟嘌呤核苷酸交换因子)存在下产生KRAS的活性状态的情况。将抑制剂在DMSO中连续稀释并取0.1μL体积转移至黑色低容量384孔板的孔中。将每孔5μL体积在测定缓冲液(25mMHepes pH 7.5、50mM NaCl、10mM MgCl2和0.01％Brij-35)中稀释至5nM的载有氟硼荧的KRAS G12C添加至板中并与抑制剂一起在环境温度下预培育2小时。在板上包括适当对照物(无抑制剂或含G12C抑制剂(AMG-510)的酶)。通过在测定缓冲液中添加含有1mM GppNHp和300nM SOS1的每孔5μL体积来起始交换。每孔10μL载有氟硼荧的KRAS G12C、GppNHp和SOS1的反应浓度分别是2.5nM、500uM和150nM。将反应板在环境温度下培育2小时，这一时间是估计的在不存在抑制剂情况下完全GDP-GTP交换的时间。对于KRAS G12D和G12V突变体，使用了类似的鸟嘌呤核苷酸交换测定，其中以2.5nM作为载有氟硼荧的KRAS蛋白的最终浓度并且对于G12D和G12V，在添加GppNHp-SOS1混合物之后分别培育4小时和3小时。在测定板中使用所描述的选择性结合和G12D突变体(Sakamoto等人,BBRC 484.3(2017),605-611)的环状肽或确定结合的内部化合物作为阳性对照。在PheraStar读板器仪器(BMG Labtech)上，在485nm激发和520nm发射下测量荧光强度。

使用GraphPad prism或Genedata Screener SmartFit分析数据。通过将数据拟合至利用可变希尔系数(Hill coefficient)产生S形剂量-反应曲线的四参数逻辑斯蒂公式来导出IC₅₀值。

KRAS_G12C交换测定IC₅₀数据、KRAS_G12C pERK测定IC₅₀数据、KRAS_G12C WB pERK测定IC₅₀数据提供于下表1中。符号指示IC₅₀≤50nM，/>指示IC₅₀>50nM但≤100nM；并且/>指示IC₅₀>100nM但≤1000nM，/>指示IC₅₀>1μM但≤5μM；/>指示IC₅₀>5μM。“NA”指示无法得到数据。

表1

/>

实施例B：发光活力测定

在补充有10％FBS的RPMI 1640培养基(Gibco/Life Technologies)中培养MIAPaCa-2(KRAS G12C；CRL-1420)、NCI-H358(KRAS G12C；/>CRL-5807)、A427(KRAS G12D；/>HTB53)、HPAFII(KRAS G12D；/>CRL-1997)、YAPC(KRAS G12V；DSMZ ACC382)、SW480(KRAS G12V；/>CRL-228)和NCI-H838(KRAS WT；/>CRL-5844)细胞。将在补充有2％FBS的RPMI 1640培养基中的每孔八百个细胞接种于含有50nL测试化合物点(最终浓度是1:500稀释液，并且是于0.2％DMSO中的最终浓度)的透明底的白色384孔Costar组织培养板中。将培养板在37℃、5％CO2培育3天。测定结束时，添加每孔25ulCellTiter-Glo试剂(Promega)。15分钟后，利用PHERAstar(BMG)读取发光。在GenedataScreener中，使用SmartFit分析有关IC₅₀值的数据。

实施例C：细胞pERK HTRF测定

MIA PaCa-2(KRAS G12C；CRL-1420)、NCI-H358(KRAS G12C；/>CRL-5807)、A427(KRAS G12D；/>HTB53)、HPAFII(KRAS G12D；/>CRL-1997)、YAPC(KRAS G12V；DSMZ ACC382)、SW480(KRAS G12V；/>CRL-228)和NCI-H838(KRASWT；/>CRL-5844)细胞是购自ATCC并维持在补充有10％FBS的RPMI 1640培养基(Gibco/Life Technologies)中。将细胞以5000个细胞/孔(8uL)平板接种于小容量、平底且用组织培养物处理的白色Greiner 384孔板中并在37℃、5％CO2培育过夜。次日早晨，将测试化合物储备溶液以3x最终浓度稀释于培养基中并取4uL添加至细胞中，并且最终浓度是0.1％DMSO。将细胞与测试化合物一起在37℃、5％CO2下培育4小时(G12C和G12V)或2小时(G12D)。将四微升含阻断试剂的4×裂解缓冲液(Cisbio)添加至各孔中，并在室温下，轻柔地旋转(300rpm)各板30分钟。将每孔四微升的Cisbio抗磷酸化ERK 1/2d2与抗磷酸化ERK1/2穴状化合物(1:1)混合，并添加至各孔中，在室温下于暗处培育过夜。在Pherastar读板器上，在665nm和620nm波长下读取各板。在Genedata Screener中，使用SmartFit分析有关IC₅₀值的数据。/>

实施例D：全血pERK1/2HTRF测定

将MIA PaCa-2细胞(KRAS G12C；CRL-1420)、HPAF-II(KRAS G12D；CRL-1997)和YAPC(KRAS G12V；DSMZ ACC382)维持在含10％FBS的RPMI 1640(Gibco/Life Technologies)中。对于MIA PaCa-2测定，在测定前，将细胞以于100uL培养基中25000个细胞/孔接种于96孔组织培养板(Corning#3596)中并在37℃、5％CO₂下培养2天。对于HPAF-II和YAPC测定，在测定前，将细胞以于100uL培养基中50000个细胞/孔接种于96孔组织培养板中并培养1天。将全血添加至在96孔板中的1uL化合物点(在DMSO中制备)中，并通过上下移液轻柔地混合，由此使血液中化合物的浓度是于0.5％DMSO中1×所希望浓度。从细胞中抽吸出培养基并添加每孔50uL含测试化合物的全血，并在37℃、5％CO₂下分别培育4小时用于MIA PaCa和YAPC测定；或培育2小时用于HPAF-II测定。倾倒出血液后，通过将PBS添加至孔侧并将PBS从板中倾倒至纸巾上，轻敲该板以充分排干，将各板轻柔地洗涤两次。接着，添加50微升/孔含阻断试剂(Cisbio)和Benzonase核酸酶(Sigma目录号E1014-5KU，1:10000最终浓度)的1x裂解缓冲液#1(Cisbio)，并在振荡(250rpm)下，在室温下培育30分钟。裂解后，使用Assist Plus(Integra Biosciences,NH)将16uL裂解产物转移至384孔Greiner小容量白色板中。使用Assist Plus将四微升的抗磷酸化ERK 1/2d2和抗磷酸化ERK 1/2穴状化合物(Cisbio)的1:1混合物添加至各孔中并在室温下，在暗处培育过夜。在Pherastar读板器上，在665nm和620nm波长下读取板。在Genedata Screener中，使用SmartFit分析有关IC₅₀值的数据。

实施例E：Ras活化Elisa

96孔Ras活化ELISA试剂盒(Cell Biolabs Inc；#STA441)使用了结合至96孔板的Raf1 RBD(Rho结合结构域)从细胞裂解产物选择性下拉Ras的活性形式。接着，利用泛Ras抗体和缀合HRP的二次抗体检测捕捉的GTP-Ras。

将MIA PaCa-2(KRAS G12C；CRL-1420)、NCI-H358(KRAS G12C；/>CRL-5807)、A427(KRAS G12D；/>HTB53)、HPAFII(KRAS G12D；/>CRL-1997)、YAPC(KRAS G12V；DSMZ ACC382)、SW480(KRAS G12V；/>CRL-228)和NCI-H838(KRASWT；/>CRL-5844)细胞维持于含10％FBS的RPMI 1640(Gibco/Life Technologies)中。将细胞以每孔25000个细胞接种于96孔组织培养版(Corning#3596)中的100uL培养基并在37℃和5％CO₂培养2天，由此使细胞在测定开始时达到约80％汇合。在37℃和5％CO₂下，将细胞用化合物处理4小时或过夜。收集时，将细胞用PBS洗涤，充分排干，接着在冰上，用50uL添加有Halt蛋白酶和磷酸酶抑制剂(1:100)的1×裂解缓冲液(由试剂盒提供)裂解1小时。

将Raf-1 RBD在测定稀释剂(试剂盒中提供)中以1:500稀释并将100μL稀释的Raf-1 RBD添加至Raf-1 RBD捕捉板各孔中。用板密封膜覆盖该板并在回旋振荡器上，在室温下将其培育1小时。在每次洗涤之间，通过充分抽吸将板用每孔250μL的1X洗涤缓冲液洗涤3次。一式两份，每孔添加50μL Ras裂解产物样本(10-100μg)。将“无细胞裂解产物”对照添加至两个孔中以确定背景值。将50μL测定稀释剂直接添加至所有孔的各孔中，并在回旋振荡器上，在室温下将板培育1小时。在每次洗涤之间，通过充分抽吸将板用每孔250μL的1X洗涤缓冲液洗涤5次。将100μL稀释的抗泛Ras抗体添加至各孔中并在回旋振荡器上，在室温下将板培育1小时。如先前所述，将板洗涤5次。将100μL稀释的二次抗体HRP缀合物添加至各孔中并在回旋振荡器上，在室温下将板培育1小时。如先前所述，将板洗涤5次并充分排干。将100μL化学发光试剂(试剂盒中提供)添加至各孔中，包括空白孔在内。在回旋振荡器上，在室温下将板培育5分钟，随后在板光度计上读取各微量孔的发光。在从所有值中减去“无裂解产物对照”的背景水平之后，计算相对于DMSO对照的抑制百分比。通过使用GraphPad Prism 7软件拟合抑制剂抑制百分比相对于抑制剂浓度的对数的曲线来确定IC₅₀。

实施例F：RAS-RAF和PI3K-AKT路径的抑制

通过测量KRAS下游效应物细胞外信号调控激酶(ERK)、核糖体S6激酶(RSK)、AKT(又称为蛋白激酶B，PKB)和下游底物S6核糖体蛋白的磷酸化情况来确定化合物的细胞效力。

为了测量磷酸化细胞外信号调控激酶(ERK)、核糖体S6激酶(RSK)、AKT和S6核糖体蛋白，将细胞(关于细胞系和所产生的数据类型的详情在表2中进一步详述)以4×10⁴个细胞/孔接种于Corning 96孔组织培养物处理板中含10％FBS的RPMI培养基中。次日，在37℃和5％CO₂下，将细胞在一系列浓度的测试化合物存在或不存在下培育4小时。将细胞用PBS洗涤并用1×含蛋白酶和磷酸酶抑制剂(Thermo Fisher,78446)的裂解缓冲液(Cisbio)裂解。使用以下抗体对10μg或20μg总蛋白质裂解产物进行SDS-PAGE和免疫印迹分析：磷酸化ERK1/2-Thr202/Tyr204(#9101L)、总ERK1/2(#9102L)、磷酸化AKT-Ser473(#4060L)、磷酸化p90RSK-Ser380(#11989S)和磷酸化S6核糖体蛋白-Ser235/Ser236(#2211S)是来自CellSignaling Technologies(Danvers,MA)。

表2

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实施例G：体内功效研究

Mia-Paca-2(KRAS G12C)、H358(KRAS G12C)、HPAF-II(KRAS G12D)、AGS(KRASG12D)、SW480(KRAS G12V)或YAPC(KRAS G12V)人癌细胞是从美国典型菌种保藏中心(American Type Culture Collection)获得并维持于补充有10％FBS的RPMI培养基中。对于功效研究实验，将5×10⁶个细胞皮下接种于6至8周龄BALB/c裸小鼠(Charles RiverLaboratories,Wilmington,MA,USA)的右后侧腹中。当肿瘤体积达到约150–250mm3时，根据肿瘤体积将小鼠随机分组，并通过口服施用化合物。使用下式计算肿瘤体积：(L×W²)/2，其中L和W分别是指长度和宽度尺寸。使用下式计算肿瘤生长抑制情况：(1-(V_T/V_C))×100，其中V_T是在治疗最后一天治疗组的肿瘤体积，并且V_C是在治疗最后一天对照组的肿瘤体积。使用借助Dunnett多重比较测试的双因素方差分析来确定治疗组之间的统计差异(GraphPadPrism)。将小鼠以每笼10-12只动物圈养，并提供养分，并且使其暴露于12小时亮/暗循环。通过吸入CO₂对肿瘤体积超过限值(体重的10％)的小鼠实施人道主义安乐死。将动物维持于国际实验动物评估和认可委员会(Assessment and Accreditation of LaboratoryAnimal Care,International)完全认证的屏障设施中。所有程序都根据美国公共卫生署人道管理和使用实验动物政策(US Public Service Policy on Human Care and Use ofLaboratory Animals)和Incyte动物管理和使用委员会指南(Animal Care and UseCommittee Guidelines)进行。

实施例H：Caco2测定

在37℃下，在含5％CO₂的气氛中使Caco-2细胞在补充有10％(v/v)胎牛血清、1％(v/v)非必需氨基酸、青霉素(100U/mL)和链霉素(100μg/mL)的DMEM生长培养基中生长。对于Caco-2，每7天或4天，通过用含有1μM EDTA的0.05％胰蛋白酶处理来对汇合的细胞单层进行传代培养。将Caco-2细胞接种于96孔Transwell板中。Caco-2细胞的接种密度是14,000个细胞/孔。接种后，每隔一天更换DMEM生长培养基。对于Caco-2细胞，在22天与25天间将细胞单层用于转运测定。

去除细胞培养基并更换为HBSS。为了测量TEER，将HBSS添加至供体隔室(顶侧)和接收隔室(基底侧)中。通过使用REMS自动进样器测量TEER以确保细胞单层的完整性。使用TEER值≥300Ωcm²的Caco-2细胞单层进行转运实验。为了确定在吸收方向(A-B)上的P_app，将测试化合物(50μM)于HBSS中的溶液添加至供体隔室(顶侧)中，而将含4％BSA的HBSS溶液添加至接收隔室(基底侧)中。顶端体积是0.075mL，而基底体积是0.25mL。培育期是在37℃下于含5％CO₂的气氛中120分钟。在培育期结束时，从供体侧和接收侧取出样品并添加等体积的乙腈以使蛋白质沉淀。在离心(3000rpm，Allegra X-14R离心机，来自BeckmanCoulter,Indianapolis,IN)后，收集上清液用于LCMS分析。根据以下公式确定渗透性值：

P_app(cm/s)＝(F*VD)/(SA*MD)，

其中通量率(F，质量/时间)是由接收侧感兴趣化合物的累积量的斜率计算，SA是细胞膜的表面积，VD是供体体积，并且MD是供体室中溶液的初始量。

Caco-2渗透性测定的数据提供于下表3中。符号指示Caco2≤0.5；并且/>指示Caco-2>0.5但≤1；且/>指示Caco-2>1。“NA”指示无法得到Caco-2数据。

表3

来自WO 2021/142252的某些化合物的Caco-2渗透性测定的数据提供于表4中。

表4

实施例I：人全血稳定性

利用LC-MS/MS确定示例化合物的全血稳定性。使用96-Well Flexi-Tier^TMBlock(Analytical Sales&Services,Inc,Flanders,NJ)作为培育板，该培育板含有1.0mL玻璃小瓶，并且每个小瓶具有0.5mL血液(来源于BIOIVT,Hicksville,NY或类似机构的混合性别的人全血)。将血液在水浴中预先温热至37℃，保持30分钟。通过添加每孔100μL超纯水来制备96深孔分析板。将每孔50μL冷却的超纯水添加至96深孔样品收集板中并用密封垫覆盖。将1μL的0.5mM化合物工作溶液(DMSO:水)添加至培育板中的血液中，达到1μM的最终浓度，通过充分移液进行混合，并取50μL转移50至样品收集板的T＝0孔中。使血液在水中静置2分钟，接着添加每孔400μL终止溶液(含有内标准品的乙腈)。将培育板放入Incu-Shaker CO₂Mini培育箱(Benchmark Scientific,Sayreville,NJ)中，在37℃下以150rpm振荡。在1小时、2小时和4小时，通过移液充分混合血液样品，并取50μL转移至样品收集板的相应孔中。使血液在水中静置2分钟，接着添加每孔400μL终止溶液。将收集板密封并以1700rpm涡旋3分钟(VX-2500多试管涡旋混合器；VWR International,Radnor,PA)，接着将样品在收集板中以3500rpm离心(Allegra X-14R离心机；Beckman Coulter,Indianapolis,IN)10分钟。从样品收集板中取每孔100μL上清液转移至分析板的相应孔中。将最终板以1700rpm涡旋1分钟并通过LC-MS/MS分析样品。使用1小时、2小时和4小时样品相对于T＝0的峰面积比来确定残留百分比。使用残留百分比的自然对数相对于时间的图来确定斜率，以计算化合物在血液中的半衰期(t_1/2＝0.693/斜率)。

人全血稳定性数据提供于下表5中。符号指示WBS≤70％；/>指示WBS>70％但≤90％；并且/>指示WBS>90％。“NA”指示无法获得WBS数据。

表5

实施例J：体外内在清除率实验方案

在体外代谢稳定性实验中，将测试化合物与人肝微粒体一起在37℃下培育。培育混合物在100mM磷酸盐缓冲液(pH 7.4)中含有测试化合物(1μM)、NADPH(2mM)和人肝微粒体(0.5mg蛋白质/mL)。将混合物在37℃下预培育2分钟，随后添加NADPH。在添加NADPH后开始反应，并在0、10分钟、20分钟和30分钟时用冰冷的甲醇淬灭反应。使用LC-MS/MS系统分析终止的培育混合物。分析系统由Shimadzu LC-30AD二元泵系统和SIL-30AC自动进样器(Shimadzu Scientific Instruments,Columbia,MD)并联接来自Applied Biosystems(Foster City,CA)的Sciex Triple Quad 6500+质谱仪组成。测试化合物和内标准品的色谱分离是使用来自ThermoFisher Scientific(Waltham,MA)的Hypersil Gold C18柱(50×2.1mm，5μM，)实现。流动相A由含0.1％甲酸的水组成，并且流动相B由含0.1％甲酸的乙腈组成。总LC-MS/MS操作时间可以是2.75分钟，并且流速是0.75mL/min。峰面积积分和峰面积比的计算是使用来自Applied Biosystems的Analyst软件(1.6.3版)执行。

体外内在清除率CL_int,体外是根据下式，由测试化合物消失的t_1/2计算：CL_int,体外＝(0.693/t_1/2)×(1/C_蛋白质)，其中C_蛋白质是在培育期间蛋白质的浓度，并且t_1/2是由log–浓度随时间变化的线性回归分析曲线的斜率(k)确定；因此，t_1/2＝ln2/k。通过使用基于生理学的比例因子、肝微粒体蛋白质浓度(45mg蛋白质/g肝)和肝重量(21g/kg体重)将CL_int,体外值缩放为适于人的体内值。使用公式CL_int＝CL_int,体外×(mg蛋白质/g肝重量)×(g肝重量/kg体重)。接着，在忽略所有结合的充分搅拌的肝模型中，通过使用CL_int和肝血流量Q(20mL·min^-1·kg^-1，在人体中)，由下式计算体内肝清除率(CL_H)：CL_H＝(Q×CL_int)/(Q+CL_int)。肝提取率是以CL_H除以Q计算。

实施例K：体内药物动力学实验方案

在体内药物动力学实验中，将测试化合物静脉内或通过经口管饲施用给雄性Sprague Dawley大鼠或雄性和雌性食蟹猕猴。对于静脉内(IV)给药，使用含10％二甲基乙酰胺(DMAC)的酸化盐水的配制物给予0.5至1mg/kg的测试化合物，对于大鼠，通过IV推注给药，而对于猴，通过5分钟或10分钟IV输注给药。对于口服(PO)给药，使用含5％DMAC和0.5％甲基纤维素的柠檬酸缓冲液(pH 2.5)给予1.0至3.0mg/kg测试化合物。在给药前以及给药后直至24小时前的各个时间点，收集血液样品。所有血液样品都使用EDTA作为抗凝血剂来收集，并离心以获得血浆样品。利用LC-MS方法确定测试化合物的血浆浓度。使用测量的血浆浓度，通过标准非房室方法，使用WinNonlin软件程序(8.0版，PharsightCorporation)计算PK参数。

在大鼠和猴中，进行测试化合物的盒式给药以获得初步PK参数。

利用雄性比格犬进行的体内药物动力学实验可以在以上描述的条件下进行。

实施例L：CYP的时间依赖性抑制(TDI)实验方案

本测定被设计用于表征当测试化合物随时间推移而代谢时CYP抑制的增加情况。这一潜在代谢机制包括紧密结合、准不可逆抑制性代谢物复合物的形成或通过形成代谢物的共价加合物引起的P450酶的失活。尽管本实验采用了10倍稀释液来减小代谢物浓度并因此减小可逆抑制作用，但可能(但不常见)的情况是，作为超强效CYP抑制剂的代谢物可能会引起阳性结果。

结果是使用人肝微粒体(HLM)，由4倍于CYP2C9、2C19、2D6和3A4(咪哒唑仑(midazolam))的Km浓度的CYP特异性探针底物的混合液得到。可以将HLM与10μM浓度的测试化合物一起在存在(+N)或不存在(-N)NADPH再生系统的情况下预培育30分钟，稀释10倍，并在添加有NADPH再生系统的新鲜等分试样的底物混合液的存在下培育8分钟。可使用代谢物标准品的校准曲线，使用LC-MS/MS定量地测量酶活性。此外，还将与已知的时间依赖性抑制剂替宁酸(tienilic aicd)(CYP2C9)、噻氯匹啶(ticlopidine)(CYP2C19)、帕罗西汀(paroxetine)(CYP2D6)和三乙酰竹桃霉素(troleandomycin)(CYP3A4)培育用作阳性对照，在存在或不存在NADPH再生系统的情况下预培育30分钟。

分析系统由Shimadzu LC-30AD二元泵系统和SIL-30AC自动进样器(ShimadzuScientific Instruments,Columbia,MD)并联接来自Applied Biosystems(Foster City,CA)的Sciex Triple Quad 6500+质谱仪组成。测试化合物和内标准品的色谱分离可使用ACQUITY UPLC BEH 130A，2.1×50mm，1.7μm HPLC柱(Waters Corp,Milford,MA)实现。流动相A由含0.1％甲酸的水组成，并且流动相B由含0.1％甲酸的乙腈组成。总LC-MS/MS操作时间将为2.50分钟，并且流速是0.9mL/min。峰面积积分和峰面积比的计算是使用来自Applied Biosystems的Analyst软件(1.6.3版)执行。

将在化合物与NADPH预培育后残留的对照CYP2C9、CYP2C19、CYP2D6和CYP3A4活性的百分比针对相应对照媒剂活性校正，接着以0分钟为100％进行计算。使用各同工酶的残留活性百分比的自然对数随时间变化的线性回归曲线计算斜率。–斜率等于酶损失率，或K_obs。

从前述描述，本领域技术人员将对除本文所描述的修改外的本发明的各种修改显而易见。这些修改也意图在所附权利要求书的范围内。本说明书中引用的每一参考文献，包括但不限于所有专利、专利申请和公开，都以全文引用的方式并入本文中。

Claims

1.一种具有式I的化合物：

或其药学上可接受的盐，其中：

Y是N或CH；

R¹选自Cl、CH₃、CH₂F、CHF₂和CF₃；Cy¹选自

R²选自F和Cl；R³选自

并且Cy²选自

条件是所述式I化合物不是

2.如权利要求1所述的化合物，其中所述式I的化合物是式II的化合物：

或其药学上可接受的盐，其中：

R¹选自Cl和CH₃；

Cy¹选自

R³选自

并且Cy²选自

3.如权利要求1所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中：Y是N或CH；

R¹选自Cl、CH₃、CH₂F、CHF₂和CF₃；

Cy¹选自

R²选自F和Cl；

R³选自

并且

Cy²选自

条件是所述式I的化合物不是

4.如权利要求1或3所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中

Y是N或CH；

R¹选自Cl、CH₃、CH₂F、CHF₂和CF₃；

Cy¹选自

R²选自F和Cl；R³选自

并且Cy²选自

5.如权利要求1至3中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中Y是CH。

6.如权利要求1至3中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中Y是N。

7.如权利要求1至6中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中Cy¹选自Cy¹-a、Cy¹-b、Cy¹-c、Cy¹-d和Cy¹-e。

8.如权利要求1至6中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中Cy¹选自Cy¹-f、Cy¹-g、Cy¹-h、Cy¹-i、Cy¹-j和Cy¹-k。

9.如权利要求1至7中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中Cy¹选自Cy¹-a和Cy¹-b。

10.如权利要求1或2所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中Cy¹选自Cy¹-l、Cy¹-m、Cy¹-n、Cy¹-o、Cy¹-p、Cy¹-q、Cy¹-r、Cy¹-s和Cy¹-t。

11.如权利要求1或2所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中Cy¹选自Cy¹-c、Cy¹-m、Cy¹-n、Cy¹-o、Cy¹-p、Cy¹-q、Cy¹-r、Cy¹-s和Cy¹-t。

12.如权利要求1至11中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中R¹选自CH₃、CH₂F、CHF₂和CF₃。

13.如权利要求1至12中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中R¹选自CH₃和CF₃。

14.如权利要求1和3至13中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中R²是F。

15.如权利要求1和3至13中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中R²是Cl。

16.如权利要求1至15中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中R³选自R³-a和R³-b。

17.如权利要求1和3至15中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中R³选自R³-b和R³-c。

18.如权利要求1和3至17中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中Cy²选自Cy²-a、Cy²-b和Cy²-d。

19.如权利要求1至18中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中Cy²选自Cy²-a和Cy²-b。

20.如权利要求1至18中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中Cy²选自Cy²-b和Cy²-d。

21.如权利要求1或3所述的化合物，其中所述式I的化合物选自

或其药学上可接受的盐。

22.如权利要求1所述的化合物，其中所述式I的化合物选自：

或其药学上可接受的盐。

23.一种药物组合物，所述药物组合物包含权利要求1至22中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，以及至少一种药学上可接受的载体或赋形剂。

24.一种抑制KRAS活性的方法，所述方法包括使权利要求1至22中任一项所述的化合物或权利要求23所述的组合物与KRAS接触。

25.如权利要求24所述的方法，其中所述接触包括向患者施用所述化合物。

26.一种治疗与KRAS相互作用抑制有关的疾病或病症的方法，所述方法包括向有需要的患者施用治疗有效量的权利要求1至22中任一项所述的化合物或权利要求23所述的组合物。

27.一种治疗与抑制带有G12C突变的KRAS蛋白有关的疾病或病症的方法，所述方法包括向有需要的患者施用治疗有效量的权利要求1至22中任一项所述的化合物或权利要求23所述的组合物。

28.一种用于治疗患者的癌症的方法，所述方法包括向所述患者施用治疗有效量的权利要求1至22中任一项所述的化合物或权利要求23所述的组合物。

29.如权利要求28所述的方法，其中所述癌症选自癌瘤、血液系统癌症、肉瘤和胶质母细胞瘤。

30.如权利要求29所述的方法，其中所述血液系统癌症选自骨髓增生性赘瘤、骨髓增生异常综合征、慢性和幼年型粒单核细胞性白血病、急性骨髓性白血病、急性淋巴细胞性白血病和多发性骨髓瘤。

31.如权利要求29所述的方法，其中所述癌瘤选自胰腺癌、结直肠癌、肺癌、膀胱癌、胃癌、食道癌、乳癌、头颈癌、子宫颈癌、皮肤癌和甲状腺癌。

32.如权利要求27所述的方法，其中所述疾病或病症是免疫或炎症性病症。

33.如权利要求32所述的方法，其中所述免疫或炎症性病症是由体细胞KRAS突变引起的Ras相关淋巴增生性病症和幼年型粒单核细胞白血病。