CN117794555A - 用于治疗皮肤缺损的间充质干细胞 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及包含整合素α10选择的间充质干细胞(MSC)的组合物，所述组合物用于治疗和/或再生皮肤缺损。
Description
技术领域
本发明涉及用于治疗皮肤缺损的包含整合素α10选择的间充质干细胞(MSC)的组合物。
背景技术
慢性皮肤伤口被认为是医疗保健系统的巨大挑战。由糖尿病、血管功能不全和压疮导致的慢性溃疡的发病率对应渐增的年龄平均值而上升。腿部溃疡估计使欧盟的总医疗保健费用占其预算的约1％-2％。在英国，与压疮相关的费用是医疗保健总预算的约4％。此外，难愈性的伤口可能与可能持续数月或数年的疼痛、活动受限、生活质量下降、生产力有限以及财务压力相关。另一方面，烧伤受害者可能遭受危及生命的损伤以及长期后果。当前的管理政策与死亡率的显著降低相关，但尚未实现对>50％-60％的全身表面积的大面积烧伤的功能或美学结果的对应改善。
细胞疗法是一种新兴方法，该方法用于在结合或不结合网状自体皮肤移植的情况下改善大烧伤伤口的伤口愈合和覆盖范围从而替代受损皮肤并增强再生(El-Serafi等人2017；El-Serafi等人2018)。研究了作为先进的治疗药物的培养的自体角质形成细胞。不幸的是，遇到许多挑战，如难以分离、增殖速率慢以及需要进行皮肤活检以分离细胞(这在严重的情况下可能无法做到)(Karlsson等人2020)。此外，由这些细胞形成的表皮层由于有限的柔性而通常是脆弱的。作为可替代和潜在的来源，脂肪来源的干细胞(ADSC)具有分化成各种细胞谱系(包括表皮细胞)的潜力(Kosaric等人2019；Raghuram等人2020)。不幸的是，ADSC在体外有效分化为表皮细胞代表了未解决的挑战。另一方面，ADSC和其他干细胞类型的局部施加可以与增强的愈合特性相关。
在1995年，MSC首次在人中用作细胞药剂。在使用MSC作为治疗剂几年之后，关于其行为的许多问题仍未解决，这些问题包括MSC群体在最终产物中的异质性、在体内激活其免疫调节能力的充足条件、建库程序的后果、其递送的最佳途径、其对应激条件的反应(García-Bernal等人2021)。
发明内容
本发明涉及一种包含整合素α10选择的间充质干细胞(MSC)的组合物，因此涉及MSC的同质组合物，所述整合素α10选择的间充质干细胞(MSC)的组合物和MSC的同质组合物用于治疗和/或再生哺乳动物的皮肤缺损。事实上，诸位发明人已经发现，在伤口上局部施加整合素α10选择的MSC(在本文中也称为XSTEM)导致猪模型中伤口的优异愈合，并且新形成的皮肤组织非常类似于正常皮肤。显示了基底膜的再生、皮肤的角化和皮肤中高水平的呈束结构并且类似于天然存在的胶原蛋白的胶原蛋白的形成。与移植的皮肤细胞相比，整合素α10选择的MSC也显示更少的瘢痕化。最有趣的是，整合素α10选择的MSC产生比测试的其他细胞(包括自体角质形成细胞或干细胞)更稳健和完全的再上皮化，后者是也包含未针对特定标记物进行选择、特别是未针对整合素α10表达进行选择的MSC的异质细胞组合物。
基于整合素α10在MSC表面上的表达来选择MSC导致产生同质细胞组合物，所述同质细胞组合物与包含未选择的MSC的细胞组合物相比具有优异的免疫调节、抗炎和皮肤再生能力。
在本公开文本的一方面，提供了一种包含整合素α10选择的间充质干细胞(MSC)的组合物，所述组合物用于治疗和/或再生哺乳动物的皮肤缺损。
在本公开文本的另一方面，提供了包含整合素α10选择的间充质干细胞(MSC)的美容组合物用于减少哺乳动物中由皮肤缺损的愈合导致的瘢痕形成的用途。
在本公开文本的另一方面，提供了包含整合素α10选择的间充质干细胞(MSC)的组合物用于非治疗性治疗哺乳动物的皮肤缺损的用途。
附图说明
图1：紧接在产生手术伤口之后(即在细胞施加之前)以及在一周和两周之后的伤口的宏观图像。在任何伤口处均未能检测到炎症、撕裂或感染的迹象。自体干细胞(五十万个)以及具有和不具有自体角质形成细胞的五十万个细胞的XSTEM的伤口愈合模式特别令人感兴趣。媒介物是在盐水中的2.5％人血清白蛋白。
图2：在细胞施加两周后皮肤伤口活检物的苏木精和伊红染色。五十万个细胞的XSTEM(E)的表皮结构与正常皮肤活检物(A)是可比较的，而当细胞与自体角质形成细胞组合(F)时，表皮厚度更小。一百万个细胞的XSTEM(G)与较少组织的表皮和角化过度相关。在使用自体五十万个干细胞(D)、自体7x105个角质形成细胞(C)和媒介物(B)的情况下表皮发育效率较低。将比例尺设定在100μm。
图3：在细胞施加两周后皮肤伤口活检物的Masson三色染色。五十万个细胞的XSTEM(E)的胶原蛋白成束模式和染色强度与正常皮肤活检物(A)是可比较的。当细胞与自体角质形成细胞(F)或与自体五十万个干细胞(D)组合时，胶原蛋白染色的强度高于对照。与媒介物(B)相比，一百万个细胞的XSTEM(G)与较少组织的表皮和较低强度的胶原蛋白染色相关，而自体7x105个角质形成细胞(C)与较少的胶原蛋白产生相关。将比例尺设定在100μm。
图4：上皮形成(A)和伤口大小(B)的临床评价。与媒介物相比，五十万个细胞的XSTEM在一周和两周后显示出更好的上皮形成的趋势，这反映伤口的更快愈合。此外，尤其是在早期时间点(7天)，五十万个细胞的XSTEM具有比大多数研究组更好的上皮形成趋势。主要由伤口边缘收缩引起的伤口大小的变化显现出不受任何研究的细胞类型的影响。
图5：促进伤口愈合的因子的分泌。在用不同浓度的促炎性细胞因子IFNγ和TNFα(每种细胞因子分别为40ng/mL和60ng/mL)刺激XSTEM后72小时测量分泌的PGE2(A)和IDO(B)的浓度。未刺激的(0ng/mL)XSTEM用作对照。对于包含更高数目的细胞的细胞制剂，在条件培养基中从XSTEM分泌的VEGF(C)和HGF(D)的浓度更高。
定义
“抗整合素α10抗体”或“抗整合素α10亚基抗体”在本文中可互换地用于指代能够识别并至少结合到异源二聚体蛋白整合素α10β1的α10亚基的抗体。这些抗体可以是识别异源二聚体蛋白整合素α10β1的表位的抗体，其中所述表位包含整合素α10和整合素β1亚基两者的氨基酸残基。
如本文所用的“整合素α10”或“整合素alpha10”是指异源二聚体蛋白整合素α10β1的α10亚基。这指示不排除结合到整合素α10亚基从而形成整合素α10β1异源二聚体的四级结构的整合素β1亚基的存在。人整合素α10链序列是已知的，并且在GenBankTM/EBIDataBank登录号AF074015处可公开获得，并且已在(Camper 1998)中描述。“alpha”和“α”以及“α10”和“α10”是等效术语。
如本文所用，单数形式“一个/一种(a)”、“一个/一种(an)”和“所述(the)”包括复数指示物，除非上下文另外明确说明。
术语“一些实施方案”可以包括一个或多于一个实施方案。
在权利要求和/或说明书中，当在本文各处与术语“包含(comprising)”连用时，词语“一个/一种(a)”或“一个/一种(an)”的使用可以指“一个/一种(one)”，但也与“一个/一种或多个/多种(one or more)”、“至少一个/一种(at least one)”和“一个/一种或超过一个/一种(one or more than one)”的意思一致。
如本文所用的术语“分离”、“分选”和“选择”是指将细胞鉴定为某种细胞类型并且将其与不属于相同的细胞类型或另一种分化状态的细胞分开的行为。此外，这些术语还可以指通过存在特定标记物来鉴定细胞的动作。例如，在本发明中涉及整合素α10选择的间充质干细胞(MSC)。通常分离是指分开的第一步，其可以例如是机械的，而“选择”是更具特异性的并且例如在抗体的帮助下进行。本领域技术人员将理解“分离”、“分选”或“选择”细胞的程序导致所述细胞的富集。
如本文所用的术语“整合素α10富集的MSC”与术语“整合素α10高MSC”、“整合素α10选择的间充质干细胞”和“富集的整合素α10高间充质干细胞群体”同义。如实施例1所述，本发明所用的MSC是使用富集表达整合素α10的MSC的程序选择的，例如通过在抗整合素α10抗体的帮助下选择那些表达整合素α10的MSC。本领域技术人员将理解，针对特定特性进行选择的细胞(例如表达整合素α10的MSC或整合素α10高MSC)可以形成特定的、均质的细胞群体。
如本文所用的“间充质干细胞”或“MSC”是指由国际细胞治疗协会间充质和组织干细胞委员会所定义的多能基质细胞(参见Dominici M等人,Cytotherapy.8(4):315-7(2006))。当维持在标准培养条件下时，MSC必须具有塑料粘附性，并且必须表达CD105、CD73和CD90，且不表达CD45、CD34、CD14或CD11b、CD79α或CD19和HLA-DR表面分子。MSC必须具有在体外分化为成骨细胞、脂肪细胞或成软骨细胞的能力。
如本文所用，术语“皮肤缺损”是指但不限于：对内部或外部组织的损伤或创伤，优选地对皮肤的表皮和/或真皮的损伤或创伤。伤口可以是急性伤口或慢性伤口。举例来说，急性伤口可以是切口、撕裂、擦伤或烧伤、刺伤、穿透伤或由皮肤病(如银屑病、痤疮和湿疹)引起的伤口。举例来说，慢性伤口可以是静脉性溃疡、糖尿病性溃疡、压疮、角膜溃疡、消化性溃疡或由局部缺血和辐射中毒导致的伤口。
如本文所用，“皮肤缺损的治疗和/或再生”涉及促进、加速和/或改善受伤部位的愈合，即在受伤部位形成功能性皮肤。因此，“皮肤缺损的治疗和/或再生”理想地导致真皮和表皮(包括基底层)的形成或再生，其表征功能性皮肤。
术语“难愈性伤口”、“难以愈合的伤口”和“慢性伤口”在本文中可互换地使用。如本文所用的术语“难愈性伤口”和“慢性伤口”是指尚未愈合的伤口。例如，在大约4至6周内不愈合的伤口被认为是慢性的。“慢性伤口”可以是未能通过有序和及时的修复顺序进展的伤口或对治疗无反应和/或治疗需求超出患者的身体健康、忍受或耐力的伤口。最初被认为是急性伤口的许多伤口由于仍未被充分理解的因素而最终变成慢性伤口。一个重要因素是伤口内浮游细菌转变形成生物膜。例如，慢性伤口可能具有不能覆盖伤口的整个表面的上皮层并且经受细菌定植，这可导致形成对用抗细菌剂的治疗具有耐药性的生物膜。
通常，慢性伤口基于其主要原因分为三大类：静脉功能不全、动脉功能不全和糖尿病并发症，或者是压力相关的。由静脉功能不全导致的难愈性伤口占所有难愈性伤口的70％至90％，并且通常影响老年人。静脉功能不全导致静脉高压，其中血流中断，导致随后的局部缺血。静脉功能不全可能由于瓣膜损害引起的静脉外流或回流受阻而发生。在一段时间的局部缺血之后，组织再灌注可导致再灌注损伤，从而引起导致伤口形成的组织损伤。
示例性慢性伤口可以包括“烧伤溃疡”，包括一度烧伤，其可以是皮肤的浅表、变红的区域；二度烧伤，其可以是起疱的损伤部位，该损伤部位可以在去除水疱液之后自发地愈合；三度烧伤，其可能是整块皮肤烧伤，并且通常需要手术干预以便伤口愈合；烫伤，其可能因滚烫的热水、油脂或散热器液体而发生；热烧伤，其可能在接触火焰后发生，通常是深度烧伤；化学烧伤，其可能来自酸和碱，通常是深度烧伤；电烧伤；和接触烧伤，其通常是深度的并且可能因回气管尾管、热铁器和炉灶或其他材料而发生。
术语“重度遗传性起疱疾病”和“大疱性表皮松解症”在本文中可互换地使用。
如本文所用，“预防(Preventing)”或“预防(Prevention)”包括延迟、阻止疾病、障碍或病症的发作，降低疾病、障碍或病症发作的风险。
具体实施方式
整合素α10选择的间充质干细胞
在本公开文本的一些实施方案中，至少50％的MSC表达整合素α10亚基。
实施例1描述了一种制造本公开文本中提供的整合素α10选择的MSC的方法。整合素α10选择的MSC的关键优势在于它们是使用整合素α10蛋白表达的标准进行选择的，因此是均质的MSC培养物和/或群体。这些细胞已被证明展现出干细胞标记物的稳健表达，参见例如WO 2018/138322。本领域技术人员将知道，可以使用若干种用于选择细胞并由此富集细胞的方法。在本发明中，在分离/选择程序期间富集表达整合素α10的MSC。为此，可以使用抗整合素α10抗体。可以如WO 2018/138322中所述进行MSC分离和选择，将该文献通过引用并入本文。如实施例1中所公开的，在选择阶段，所选择的MSC(其是使用抗整合素α10抗体通过整合素α10的表达进行选择的)表达整合素α10。更具体地，所选择的细胞是表达异二聚体整合素alpha10 beta1(α10β1)的MSC，因为整合素α10亚基与整合素β1亚基一起表达。选择阶段之后是扩增阶段，其中每个所选择的MSC的整合素α10表达都可以变化，即，并非所有MSC都可以在扩增期间的所有时间以及因此在施用时表达整合素α10。然而，在向患者施用MSC时，至少50％的所施用的细胞表达整合素α10亚基。
在本公开文本的一些实施方案中，至少50％，如至少55％、如至少60％、如至少65％、如至少70％、如至少75％、如至少80％、如至少85％、如至少90％、如至少95％、如至少96％、如至少97％、如至少98％、如至少99％、如至少100％的MSC表达整合素α10亚基。
在本公开文本的一些实施方案中，MSC呈MHC II类、CD45、CD34、CD11b和/或CD19阴性。
在本公开文本的一些实施方案中，MSC表达CD73、CD90和/或CD105。
在本公开文本的一些实施方案中，组合物分泌生长因子、抗炎因子和/或免疫调节因子。
在本公开文本的一些实施方案中，与其中少于50％的MSC表达整合素α10亚基的组合物相比，所述组合物以更高的浓度分泌生长因子、抗炎因子和/或免疫调节因子。
在本公开文本的一些实施方案中，与其中少于50％的MSC表达整合素α10亚基的组合物相比，所述组合物以更高的浓度分泌生长因子、抗炎因子和/或免疫调节因子。
在本公开文本的一些实施方案中，生长因子、抗炎因子和/或免疫调节因子是吲哚胺2,3-双加氧酶(IDO)、前列腺素E2(PGE2)、血管内皮生长因子(VEGF)和/或肝细胞生长因子(HGF)。血管内皮生长因子(VEGF)和肝细胞生长因子(HGF)是促进组织再生和皮肤再生的生长因子。与未针对整合素α10表达进行选择的MSC群体相比，本公开文本的整合素α10选择的MSC以更高的量和/或浓度分泌这些因子，并且因此在治疗如本文所定义的慢性伤口以及在皮肤缺损部位再生皮肤方面更有效。
在本公开文本的一些实施方案中，MSC选自间充质干细胞、间充质祖细胞和间充质基质细胞或其混合物。
在本公开文本的一些实施方案中，MSC被诱导表达整合素α10亚基。
在本公开文本的一些实施方案中，将MSC在包含哺乳动物血清和FGF-2的培养基中培养。
在本公开文本的一些实施方案中，将MSC在包含血小板裂解物和/或血小板裂解物组分的培养基中培养。
在本公开文本的一些实施方案中，将MSC在包含FGF-2和血小板裂解物和/或血小板裂解物组分的培养基中培养。
在本公开文本的一些实施方案中，将MSC在包含哺乳动物血清和血小板裂解物和/或血小板裂解物组分的培养基中培养。
在本公开文本的一些实施方案中，将MSC在包含TGFβ的培养基中培养。
在本公开文本的一些实施方案中，将MSC在包含FGF2的培养基中培养。
在本公开文本的一些实施方案中，将MSC在包含血小板裂解物和/或血小板裂解物组分的无血清培养基中培养。
在本公开文本的一些实施方案中，将MSC在包含生长因子的无血清培养基中培养。
在本公开文本的一些实施方案中，将MSC在包含生长因子FGF2和/或TGFβ的无血清培养基中培养。
在本公开文本的一些实施方案中，MSC是同种异体或自体的。
在本公开文本的一些实施方案中，MSC和哺乳动物来自相同物种。
在本公开文本的一些实施方案中，MSC和哺乳动物来自不同物种。
在本公开文本的一些实施方案中，从含有间充质干细胞的组织分离MSC，针对整合素α10β1的表达对MSC进行选择，并在培养物中对所选择的MSC进行扩增。
在本公开文本的一些实施方案中，已经用抗整合素α10抗体进行MSC的选择。
在本公开文本的一些实施方案中，MSC源自脂肪组织、骨髓、滑膜、外周血、脐带血、脐血、华通氏胶和/或羊水。
在本公开文本的一些实施方案中，MSC源自脂肪组织。
在本公开文本的一些实施方案中，MSC源自骨髓。
在本公开文本的一些实施方案中，MSC源自胎儿、新生儿、青少年或成年MSC和/或祖细胞。
在本公开文本的一些实施方案中，MSC不是源自胚细胞或胚胎。
在本公开文本的一些实施方案中，MSC是体外细胞培养物。在本公开文本的一些实施方案中，MSC是体外细胞悬浮液。
在本公开文本的一些实施方案中，包含整合素α10选择的MSC的组合物是美容组合物。
在本公开文本的一些实施方案中，包含整合素α10选择的MSC的组合物是非治疗性组合物。
皮肤缺损的治疗
在一方面，本公开文本提供了一种包含整合素α10选择的间充质干细胞(MSC)的组合物，所述组合物用于治疗和/或再生哺乳动物的皮肤缺损。
本公开文本的另一方面提供了一种包含整合素α10选择的间充质干细胞(MSC)的组合物，所述组合物用于预防哺乳动物的皮肤纤维化。
本公开文本的另一方面提供了一种用于在哺乳动物中再生皮肤缺损部位的皮肤和/或减少由皮肤缺损的愈合导致的瘢痕形成的方法，所述方法包括将包含整合素α10选择的间充质干细胞(MSC)的组合物施用于所述皮肤缺损。
本文所公开的治疗针对许多皮肤缺损。这些可以分为以下非广泛的类别列表：难愈性伤口或慢性伤口、由外部因素引起的皮肤障碍、炎性皮肤病、术后皮肤障碍以及皮肤的遗传或发育障碍如皮肤的遗传性障碍。
在本公开文本的一些实施方案中，提供了一种包含整合素α10选择的MSC的组合物，所述组合物用于治疗和/或再生哺乳动物的皮肤缺损，其中所述皮肤缺损是难愈性伤口如慢性伤口。
诸位发明人已经证明整合素α10选择的MSC在猪模型中愈合皮肤缺损如难愈性伤口的能力，该猪模型是用于测试人的皮肤缺损(包括难愈性伤口)的愈合的最被接受和广泛使用的动物模型。事实上，在用于测试的动物中，猪的皮肤最像人的皮肤。此外，急性伤口和难愈性伤口的伤口愈合进程和过程大体上是相同的，不同的是在一些难愈性伤口的情况下可能存在潜在的疾病。此外，在我们的研究中产生的全层厚度伤口的大小和深度模仿慢性伤口，因为大的伤口大小不允许经由挛缩自发愈合。本领域技术人员将认识到，可以使用其他动物模型来确认整合素α10选择的MSC愈合皮肤缺损的能力。
本公开文本的整合素α10选择的MSC适合于并成功地治疗皮肤缺损，包括难愈性伤口，这归功于它们展示出的再生皮肤以及分泌通过对抗炎症和通过调节免疫系统和/或通过促进组织再生来促进伤口愈合的因子的能力。
在本公开文本的一些实施方案中，难愈性伤口与静脉功能不全、动脉功能不全和糖尿病并发症、罕见疾病如镰状细胞贫血相关，或者是压力相关难愈性伤口。
在本公开文本的一些实施方案中，难愈性伤口是由血管功能不全或糖尿病对血管的影响导致的真皮溃疡、伤口或皮肤缺损。例如，糖尿病足综合征/糖尿病足溃疡和糖尿病神经性溃疡是难愈性伤口类型，其可以受益于本公开文本的治疗。
在本公开文本的一些实施方案中，皮肤缺损是由外部因素引起的皮肤障碍。
可以受益于本公开文本的治疗的由外部因素引起的皮肤障碍的例子是压力性溃疡形成、由摩擦或机械应力引起的皮肤病、由异物引起的皮肤病、由于暴露于寒冷而引起或加剧的皮肤病、由热或电引起的皮肤病、由光或紫外线辐射引起的皮肤病、由电离辐射引起的皮肤病、过敏性接触性皮炎、光过敏性接触性皮炎、刺激性接触性皮炎、过敏性接触性荨麻疹、蛋白质接触性皮炎、过敏性接触性致敏、皮肤接触光敏剂引起的光毒性反应、对有毒或有害动物的皮肤反应。
在本公开文本的一些实施方案中，由外部因素引起的皮肤障碍是烧伤、长时间卧床休息引起的压疮、由创伤诱导的皮肤缺损或割伤。
在本公开文本的一些实施方案中，由外部因素引起的皮肤障碍是烧伤。例如，烧伤可以是二度烧伤，如深度烧伤或烧伤损伤。烧伤可由暴露于冷、热、电、光、紫外线辐射、电离辐射、过敏原、化学物质(如酸和碱)和其他外部试剂引起。
在本公开文本的一些实施方案中，皮肤缺损是炎性皮肤病。
可受益于本公开文本的治疗的炎性皮肤病的例子是皮炎、湿疹、特应性皮炎、丘疹鳞屑性皮肤病、荨麻疹、血管性水肿或其他荨麻疹障碍、炎性红斑和其他反应性炎性皮肤病、皮肤免疫大疱性疾病、皮肤红斑狼疮、瘢痕化或硬化性炎性皮肤病。
在本公开文本的一些实施方案中，皮肤缺损是术后皮肤障碍。
可受益于本公开文本的治疗的术后皮肤障碍的例子是不令人满意的皮肤手术瘢痕、皮瓣坏死、肌皮瓣坏死、皮肤移植失败、复合移植失败。
在本公开文本的一些实施方案中，术后皮肤障碍是手术切口。
在本公开文本的一些实施方案中，皮肤缺损是影响皮肤的遗传和/或发育障碍。
可受益于本公开文本的治疗的影响皮肤的遗传和/或发育障碍的例子是大疱性表皮松解症或遗传性皮肤病如天疱疮遗传性皮肤病。
在本公开文本的一些实施方案中，大疱性表皮松解症选自单纯型大疱性表皮松解症、交界型大疱性表皮松解症、营养不良型大疱性表皮松解症、隐性营养不良型大疱性表皮松解症、综合征型大疱性表皮松解症和大疱性表皮松解症。
独立于皮肤缺损的根本原因，本公开文本的包含整合素α10选择的MSC的组合物可用于治疗或再生具有本文所述的物理特征的皮肤缺损。
在本公开文本的一些实施方案中，皮肤缺损是外部缺损。因此，皮肤缺损可以是真皮和/或表皮的缺损。
此外，皮肤缺损可延伸至皮下组织，也称为皮下层或下皮。
在本公开文本的一些实施方案中，皮肤缺损是真皮和/或表皮和/或皮下组织的缺损。
在本公开文本的一些实施方案中，皮肤缺损是开放性缺损。
在本公开文本的一些实施方案中，皮肤缺损是发炎的伤口或溃疡。
在本公开文本的一些实施方案中，皮肤缺损是急性皮肤缺损。
在本公开文本的一些实施方案中，皮肤缺损是慢性皮肤缺损。如本文所提供的，慢性皮肤缺损是难愈性皮肤缺损。如果急性皮肤缺损在4-6周内的正常情况下没有愈合，则急性皮肤缺损可能会变成慢性皮肤缺损。
在本公开文本的一些实施方案中，皮肤缺损是全层厚度皮肤缺损。例如，影响真皮和表皮二者的皮肤缺损被认为是全层厚度皮肤缺损。
在本公开文本的一些实施方案中，皮肤缺损是部分厚度皮肤缺损。例如，影响表皮和仅部分真皮的皮肤缺损被认为是部分厚度皮肤缺损。
在本公开文本的一些实施方案中，皮肤缺损的表面积是至少0.3cm x 0.3cm，并且至多覆盖待治疗的哺乳动物的整个身体。本公开文本的包含整合素α10选择的MSC的组合物可用于治疗任何大小的皮肤缺损。
本领域技术人员(包括受过培训的医师)将认识到皮肤缺损可以根据伤口的原因和愈合过程中出现的并发症而变化。例如，一定大小例如小至0.3cm x 0.3cm的伤口可能给患者带来挑战，并且如果不能令人满意地愈合，则可能给患者带来感染风险，这在患有糖尿病并发症的患者中是常见的。另一方面，某些病症可能影响100％的患者皮肤区域，例如在重度烧伤的情况下。本文所述的整合素α10选择的MSC可用于治疗任何大小的伤口。
在本公开文本的一些实施方案中，施用根据本公开文本的包含整合素α10选择的MSC的组合物导致在施用部位增加的胶原蛋白产生。此外，所产生的胶原蛋白显现出如此排列成功能性皮肤所特有的束状结构。
在本公开文本的一些实施方案中，施用根据本公开文本的包含整合素α10选择的MSC的组合物导致在施用部位基底膜的再生。
在本公开文本的一些实施方案中，施用根据本公开文本的包含整合素α10选择的MSC的组合物导致在施用部位皮肤的角化。
施用形式
在一些实施方案中，用于治疗和/或再生哺乳动物的皮肤缺损的包含整合素α10选择的间充质干细胞(MSC)的组合物适于局部施用。
如本文所用，“局部施用”或“局部地施用”意指在动物体上或动物体内的部位处或附近直接施用药物，在该部位处需要药物的生物效应。
在本公开文本的一些实施方案中，将组合物局部地施用于皮肤缺损。
在本公开文本的一些实施方案中，本文所公开的组合物可以经由注射施用。例如，可以用膜(如丙烯膜或由任何其他适于覆盖哺乳动物上的皮肤缺损的材料制成的膜)覆盖皮肤缺损，并且可以在皮肤缺损与膜之间形成封闭空间(enclosure)。然后，可以通过使注射针从侧面穿过皮肤将本文所公开的组合物注射到皮肤缺损处(如在皮肤缺损与膜之间的封闭空间中)。这样的程序是本领域技术人员已知的。
在本公开文本的一些实施方案中，将本文所公开的组合物经由注射施用于皮肤中。
在本公开文本的一些实施方案中，将本文所公开的组合物经由注射施用皮肤下。
在本公开文本的一些实施方案中，在用本文所公开的组合物治疗之前覆盖皮肤缺损。
在本公开文本的一些实施方案中，在用本文所公开的组合物治疗之后覆盖皮肤缺损。
根据前述项中任一项所述的用于所述用途的组合物，其中所述组合物包含在100.000与2.000.000个之间的MSC，如在200.000与1.000.000个之间的MSC，如约200.000个MSC、如约300.000个MSC、如约400.000个MSC、如约500.000个MSC、如约600.000个MSC、如约700.000个MSC、如约800.000个MSC、如约900.000个MSC、如约1.000.000个MSC、如约1.200.000个MSC、如约1.500.000个MSC。
根据待治疗的皮肤缺损的大小，可以施用不同量的本公开文本的MSC。
在本公开文本的一些实施方案中，将组合物给药以包含20.000与150.000个之间的MSC/cm2的待治疗的皮肤缺损，如在30.000与130.000个之间的MSC/cm2的待治疗的皮肤缺损、如在30.000与120.000个之间的MSC/cm2的待治疗的皮肤缺损、如在30.000与100.000个之间的MSC/cm2的待治疗的皮肤缺损、如在30.000与90.000个之间的MSC/cm2的待治疗的皮肤缺损、如在30.000与80.000个之间的MSC/cm2的待治疗的皮肤缺损、如在30.000与75.000个之间的MSC/cm2的待治疗的皮肤缺损、如在30.000与70.000个之间的MSC/cm2的待治疗的皮肤缺损、如在30.000与60.000个之间的MSC/cm2的待治疗的皮肤缺损、如在40.000与60.000个之间的MSC/cm2的待治疗的皮肤缺损、如在40.000与70.000个之间的MSC/cm2的待治疗的皮肤缺损、如在40.000与75.000个之间的MSC/cm2的待治疗的皮肤缺损、如在40.000与80.000个之间的MSC/cm2的待治疗的皮肤缺损、如在50.000与100.000个之间的MSC/cm2的待治疗的皮肤缺损、如在50.000与120.000个之间的MSC/cm2的待治疗的皮肤缺损、如在50.000与130.000个之间的MSC/cm2的待治疗的皮肤缺损、如在50.000与150.000个之间的MSC/cm2的待治疗的皮肤缺损。
在本公开文本的一些实施方案中，将组合物以在药学上可接受的液体介质中的细胞悬浮液的形式施用。
在本公开文本的一些实施方案中，药学上可接受的液体介质包含人血清白蛋白。
在本公开文本的一些实施方案中，药学上可接受的液体介质包含在盐水中稀释的人血清白蛋白，如临床级人血清白蛋白。
在本公开文本的一些实施方案中，将组合物以在盐水中稀释的2.5％临床级人血清白蛋白中的细胞悬浮液的形式施用。
对于通过注射局部施用本公开文本的MSC或组合物来说可替代地或另外地，还可以通过使用已装载有整合素α10选择的MSC的敷料或储器来治疗皮肤缺损。因此，在本公开文本的一些实施方案中，将组合物在敷料或储器上局部施用于皮肤缺损。
在本公开文本的一些实施方案中，用于治疗和/或再生皮肤缺损的MSC是同种异体的。
在本公开文本的一些实施方案中，用于治疗和/或再生皮肤缺损的MSC是自体的。
在本公开文本的一些实施方案中，组合物进一步包含水凝胶。水凝胶可以帮助保护皮肤缺损部位免受感染，并且因此可以帮助愈合过程。
可以使用本领域技术人员已知的用于保湿皮肤的各种水凝胶。例如，水凝胶可以是纤维蛋白胶、透明质酸、明胶、胶原蛋白、海藻酸、纤维素或果胶，或任何功能等同的水凝胶。
在本公开文本的一些实施方案中，组合物进一步包含角质形成细胞，如自体或同种异体角质形成细胞。角质形成细胞可帮助促进皮肤缺损部位的上皮再生和血管网络的恢复。
在本公开文本的一些实施方案中，组合物进一步包含抗炎剂。抗炎剂的存在可以帮助最小化皮肤缺损部位的炎症，这进而可以帮助促进愈合。
在本公开文本的一些实施方案中，组合物进一步包含免疫抑制剂以防止细胞排斥和/或治疗失败。这在整合素α10选择的同种异体MSC单独或与同种异体角质形成细胞一起在本公开文本的组合物中的情况下可能是尤其有用的。
方法和用途
本公开文本的一方面提供了包含整合素α10选择的MSC的组合物用于制备用以治疗皮肤缺损的药剂的用途。
本公开文本的另一方面提供了一种治疗有需要的哺乳动物的皮肤缺损的方法，所述方法包括以有效治疗所述皮肤缺损的量向所述哺乳动物施用包含整合素α10选择的MSC的组合物。
本公开文本的一方面涉及一种包含整合素α10选择的间充质干细胞(MSC)的组合物用于减少哺乳动物中由皮肤缺损的愈合导致的瘢痕形成的非治疗性美容用途。
在本公开文本的另一方面，提供了包含整合素α10选择的间充质干细胞(MSC)的组合物用于非治疗性治疗哺乳动物的皮肤缺损的用途。
本公开文本的包含整合素α10选择的MSC的组合物还可用于减少或最小化瘢痕，例如用于减少或最小化瘢痕形成。如本文所用，术语“减少或最小化”优选地是指向受试者施用本公开文本的组合物以减少或最小化瘢痕的从头形成。此外，瘢痕的减少优选地还包括改善或预防瘢痕形成期间的疼痛和/或瘙痒。为了减少瘢痕，将本公开文本的组合物优选地在皮肤缺损处于愈合过程中时局部施用于皮肤缺损部位。
在本公开文本的一些实施方案中，提供了一种包含整合素α10选择的MSC的美容组合物，其中所述组合物进一步包含美容上可接受的载体。
在本公开文本的一些实施方案中，提供了一种包含整合素α10选择的MSC的非治疗性组合物，其中所述组合物进一步包含美容上可接受的载体。
实施例
实施例1：整合素α10富集的MSC的产生
目标
本实施例阐明了如何分离、选择、扩增和储存整合素α10选择的MSC直到在治疗模型中使用。
如本文所用的术语“XSTEM”与术语“整合素α10富集的MSC”同义，XSTEM是用于指整合素α10富集的MSC的内部名称。
材料与方法：
从人或动物脂肪供体组织或其他含MSC的来源分离整合素α10选择的间充质干细胞(MSC)。分离/消化脂肪组织，并将脂肪来源的基质血管级分(SVF)重悬于MSC扩增培养基中，并接种至细胞培养瓶中以使MSC粘附在塑料上并增殖。
如通过流式细胞术所测量，分析塑料粘附细胞的细胞表面标记物CD73、CD90和CD105的阳性表达(≥95％)以及CD45、CD34、CD11b、CD19和HLA-DR的阴性表达(≤2％)。该特定抗原表达标准也是国际细胞治疗协会(International Society for CellularTherapy)设定的MSC定义的一部分(Dominici 2006)。将MSC制剂在MSC扩增培养基的单层培养物中扩增，并使用特异性结合整合素α10(从而识别完整受体整合素alpha10 beta1，即整合素α10β1)的抗体和磁珠分离来选择表达整合素α10的MSC或者通过FACS细胞分选来选择表达整合素α10的MSC。进一步扩增整合素α10选择的MSC，检查定义的MSC抗原的细胞表面表达，此外证明了三系分化能力。将α10选择的MSC在低温保存培养基中冷冻，并保持冷冻直至使用。
结果：
该程序产生整合素α10选择的MSC(XSTEM)，将其扩增并在可用于施用(例如局部施用)的小瓶中冷冻。
结论
制造过程生成满足定义人MSC的最小标准的α10选择的MSC，并且可以将其应用于细胞疗法中。
实施例2：由整合素α10选择的MSC分泌的伤口愈合因子
目标
本实施例阐明了整合素α10富集的MSC(XSTEM)通过分泌免疫调节、抗炎和促再生因子实现的旁分泌效应。如本文所用的术语“XSTEM”与术语“整合素α10富集的MSC”同义。
材料与方法：
用促炎性细胞因子干扰素γ(IFNγ)和肿瘤坏死因子α(TNFα)刺激整合素α10选择的间充质干细胞(XSTEM)，持续72小时。收集条件培养基并通过酶联免疫吸附测定(ELISA)分析吲哚胺2,3-双加氧酶(IDO)和前列腺素E2(PGE2)。还通过Luminex多重测定测量了在稳态下由不同细胞数目的XSTEM释放的在条件培养基中的血管内皮生长因子(VEGF)和肝细胞生长因子(HGF)的浓度。
结果：
PGE2在未刺激的XSTEM中显著表达，并且在用IFNγ和TNFα刺激后表达进一步增加(图5A)。XSTEM的IFNγ和TNFα刺激也诱导IDO的表达(图5B)。PGE2和IDO是已知通过抑制T细胞增殖和促进巨噬细胞的M2极化而具有免疫调节作用的抗炎分子。此外，XSTEM还分泌包括HGF和VEGF的促再生生长因子(图5C)，已知促再生生长因子促进皮肤伤口愈合(Guillamat-Prats等人2021)。基于表明整合素α10选择的MSC比未选择的MSC分泌显著更多的PGE2的先前研究(Uvebrant等人2019)，预期与未针对整合素α10表达进行选择的MSC相比，在整合素α10选择的MSC(和包含这些MSC中的大部分的组合物)中其他抗炎和免疫调节因子(如IDO、HGF和VEGF)的分泌也更优异。
结论
整合素α10选择的MSC分泌已知促进伤口愈合过程和组织再生的关键细胞因子和生长因子。因此，整合素α10选择的MSC可以成功地用于治疗皮肤缺损(包括慢性或难愈性伤口，如以炎症为特征的伤口)，这归功于这些MSC分泌促进伤口愈合的因子的优异能力，以及这些MSC可以再生皮肤的事实，如实施例3中所证明。
实施例3：皮肤缺损的体内治疗。
目标：
这些实验的目标是证明和评价整合素α10选择的MSC在经验证的猪模型中用于皮肤缺损愈合的治疗效果。猪皮肤在皮肤附着、毛被、表皮和真皮的厚度以及愈合机制方面接近人皮肤。因此，猪被认为是用于伤口愈合研究的相关物种(Sullivan等人2001)。此外，在我们的研究中产生的全层厚度伤口的大小和深度模仿慢性伤口，因为大的伤口大小不允许经由挛缩自发愈合(Jeschke等人2017)。慢性伤口的愈合机制大体上与非慢性伤口的愈合机制相同。然而，由于伤口部位的炎症和/或感染或潜在疾病的存在，慢性伤口通常难以愈合。
材料与方法：
根据以下工作流程对两只猪进行皮肤伤口体内研究：
-在第0天，通过手术取下具有下层脂肪的皮肤的全层厚度活检物。机械分离皮下脂肪层。将脂肪部分切碎并在37℃下在胶原蛋白酶I中在振荡下孵育90分钟以分离脂肪来源的干细胞(ADSC)。将皮肤部分切成小块，并在4℃下在分散酶中孵育过夜。然后将表皮从真皮机械剥离，并在37℃下与胰蛋白酶一起孵育30min。在用磷酸盐缓冲盐水适当洗涤后，将细胞计数并重悬于在盐水中的2.5％人血清白蛋白(临床级)中。根据靶细胞数将每组的体积调节至1ml。
-在接下来的一天(第1天)，在每只猪的背部通过手术产生六个临界大小(至少3*3cm的区域)的全层厚度皮肤伤口。
-同样在第1天，以不同浓度在伤口中施加如实施例1中所述制备的分离的自体细胞以及整合素α10选择的MSC：自体角质形成细胞(7x105个细胞/伤口)；自体干细胞(脂肪来源的干细胞(ADSC)，5x105个细胞/伤口)；整合素α10选择的MSC(5x105个细胞/伤口)；整合素α10选择的MSC+自体角质形成细胞(各5x105+5x105个细胞/伤口)；整合素α10选择的MSC(1x106个细胞/伤口)。根据手术指南适当覆盖伤口，并在施加非吸收性敷料后将细胞注射到伤口中。
-第7天：在一周后随访皮肤缺损的愈合(伤口大小和上皮形成)。
-第14天：在两周后随访皮肤缺损的愈合(伤口大小和上皮形成)。此外，终止实验并切取伤口以用于组织学评价。对伤口进行临床评价，并收集、固定和制备活检物以用于组织学评价。根据本地方案用苏木精和伊红以及Masson三色染色对切片染色。
结果
将自体ADSC和角质形成细胞以及人整合素α10选择的MSC(XSTEM)施加于全层厚度、临界大小的皮肤伤口模型，并随访两周。将细胞作为具有和不具有5x105个自体角质形成细胞的5x105个XSTEM细胞以及1x106个XSTEM细胞施加。作为对照，施加5x105个自体ADSC、7x105个自体角质形成细胞和媒介物。
宏观地，在任何伤口处均未能检测到炎症、撕裂或感染的迹象(图1)。
苏木精和伊红染色显示，五十万个细胞的XSTEM的表皮结构与正常皮肤是可比较的(图2E和图2A)。当细胞与自体角质形成细胞组合时，表皮厚度较小(图2F)。一百万个细胞的XSTEM与较少组织的表皮和角化过度相关(图2G)。在使用自体干细胞、角质形成细胞或媒介物的情况下表皮发育效率较低(分别为图2D、图2C、图2B)。
Masson三色染色显示，五十万个细胞的XSTEM的胶原蛋白成束模式和染色强度与正常皮肤是可比较的(图3E和图3A)。当细胞与自体角质形成细胞或与自体干细胞组合时，胶原蛋白染色的强度高于对照(图3F和图3D)。一百万个细胞的XSTEM与较少组织的表皮和较低强度的胶原蛋白染色相关(图3G)，而与媒介物相比，自体角质形成细胞与较少的胶原蛋白产生相关(图3C和图3B)。
结论
以5x105(五十万)个整合素α10选择的MSC/伤口局部治疗皮肤缺损在14天后导致基底膜再生、皮肤角化和高水平的呈束结构的并且类似于皮肤中天然存在的胶原蛋白的胶原蛋白形成。对于用1百万个整合素α10选择的MSC/伤口的局部治疗，也观察到真皮和表皮的再生，但观察到较少组织的表皮。在用媒介物(安慰剂)、自体干细胞或自体角质形成细胞治疗的皮肤缺损中没有观察到这些作用。
参考文献
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Claims (60)
1.一种包含整合素α10选择的间充质干细胞(MSC)的组合物，所述组合物用于治疗和/或再生哺乳动物的皮肤缺损。
2.一种包含整合素α10选择的间充质干细胞(MSC)的组合物，所述组合物用于预防哺乳动物的皮肤纤维化。
3.一种用于在哺乳动物中再生皮肤缺损部位的皮肤和/或减少由皮肤缺损的愈合导致的瘢痕形成的方法，所述方法包括将包含整合素α10选择的间充质干细胞(MSC)的组合物施用于所述皮肤缺损。
4.根据前述权利要求中任一项所述的用于所述用途的组合物，其中所述皮肤缺损是难愈性伤口，如慢性伤口。
5.根据前述权利要求中任一项所述的用于所述用途的组合物，其中所述难愈性伤口与静脉功能不全、动脉功能不全和糖尿病并发症、罕见疾病如镰状细胞贫血相关，或者是压力相关难愈性伤口。
6.根据前述权利要求中任一项所述的用于所述用途的组合物，其中所述难愈性伤口是由血管功能不全或糖尿病对血管的影响导致的真皮溃疡、伤口或皮肤缺损。
7.根据前述权利要求中任一项所述的用于所述用途的组合物，其中所述皮肤缺损是由外部因素引起的皮肤障碍。
8.根据前述权利要求中任一项所述的用于所述用途的组合物，其中所述由外部因素引起的皮肤障碍是压力性溃疡形成、由摩擦或机械应力引起的皮肤病、由异物引起的皮肤病、由于暴露于寒冷而引起或加剧的皮肤病、由热或电引起的皮肤病、由光或紫外线辐射引起的皮肤病、由电离辐射引起的皮肤病、过敏性接触性皮炎、光过敏性接触性皮炎、刺激性接触性皮炎、过敏性接触性荨麻疹、蛋白质接触性皮炎、过敏性接触性致敏、皮肤接触光敏剂引起的光毒性反应、对有毒或有害动物的皮肤反应。
9.根据前述权利要求中任一项所述的用于所述用途的组合物，其中所述由外部因素引起的皮肤障碍是烧伤、长时间卧床休息引起的压疮、由创伤诱导的皮肤缺损或割伤。
10.根据前述权利要求中任一项所述的用于所述用途的组合物，其中所述皮肤缺损是炎性皮肤病。
11.根据前述权利要求中任一项所述的用于所述用途的组合物，其中所述炎性皮肤病是皮炎、湿疹、特应性皮炎、丘疹鳞屑性皮肤病、荨麻疹、血管性水肿或其他荨麻疹障碍、炎性红斑和其他反应性炎性皮肤病、皮肤免疫大疱性疾病、皮肤红斑狼疮、瘢痕化或硬化性炎性皮肤病。
12.根据前述权利要求中任一项所述的用于所述用途的组合物，其中所述皮肤缺损是术后皮肤障碍。
13.根据前述权利要求中任一项所述的用于所述用途的组合物，其中所述术后皮肤障碍是不令人满意的皮肤手术瘢痕、皮瓣坏死、肌皮瓣坏死、皮肤移植失败、复合移植失败。
14.根据前述权利要求中任一项所述的用于所述用途的组合物，其中所述术后皮肤障碍是手术切口。
15.根据前述权利要求中任一项所述的用于所述用途的组合物，其中所述皮肤缺损是影响皮肤的遗传和/或发育障碍。
16.根据前述权利要求中任一项所述的用于所述用途的组合物，其中所述影响皮肤的遗传和/或发育障碍是大疱性表皮松解症或遗传性皮肤病如天疱疮遗传性皮肤病。
17.根据前述权利要求中任一项所述的用于所述用途的组合物，其中所述大疱性表皮松解症选自单纯型大疱性表皮松解症、交界型大疱性表皮松解症、营养不良型大疱性表皮松解症、隐性营养不良型大疱性表皮松解症、综合征型大疱性表皮松解症和大疱性表皮松解症。
18.根据前述权利要求中任一项所述的用于所述用途的组合物，其中所述皮肤缺损是外部缺损。
19.根据前述权利要求中任一项所述的用于所述用途的组合物，其中所述皮肤缺损是开放性缺损。
20.根据前述权利要求中任一项所述的用于所述用途的组合物，其中所述皮肤缺损是发炎的伤口。
21.根据前述权利要求中任一项所述的用于所述用途的组合物，其中所述皮肤缺损被感染。
22.根据前述权利要求中任一项所述的用于所述用途的组合物，其中所述皮肤缺损是急性缺损或慢性缺损。
23.根据前述权利要求中任一项所述的用于所述用途的组合物，其中所述皮肤缺损是全层厚度皮肤缺损。
24.根据前述权利要求中任一项所述的用于所述用途的组合物，其中所述组合物适于局部施用。
25.根据前述权利要求中任一项所述的用于所述用途的组合物，其中将所述组合物局部施用于所述皮肤缺损。
26.根据前述权利要求中任一项所述的用于所述用途的组合物，其中将所述组合物经由注射施用。
27.根据前述权利要求中任一项所述的用于所述用途的组合物，其中将所述组合物给药以包含在20.000与150.000个之间的MSC/cm2的待治疗的皮肤缺损。
28.根据前述权利要求中任一项所述的用于所述用途的组合物，其中将所述组合物以在药学上可接受的液体介质中的细胞悬浮液的形式施用。
29.根据前述权利要求中任一项所述的用于所述用途的组合物，其中所述药学上可接受的液体介质包含人血清白蛋白。
30.根据前述权利要求中任一项所述的用于所述用途的组合物，其中所述药学上可接受的液体介质包含在盐水中稀释的人血清白蛋白，如临床级人血清白蛋白。
31.根据前述权利要求中任一项所述的用于所述用途的组合物，其中将所述组合物以在盐水中稀释的2.5％临床级人血清白蛋白中的细胞悬浮液的形式施用。
32.根据前述权利要求中任一项所述的用于所述用途的组合物，其中将所述组合物在敷料或储器上施用。
33.根据前述权利要求中任一项所述的用于所述用途的组合物，其中至少50％的所述MSC表达整合素α10亚基。
34.根据前述权利要求中任一项所述的用于所述用途的组合物，其中至少50％，如至少55％、如至少60％、如至少65％、如至少70％、如至少75％、如至少80％、如至少85％、如至少90％、如至少95％、如至少96％、如至少97％、如至少98％、如至少99％、如至少100％的所述MSC表达整合素α10亚基。
35.根据前述权利要求中任一项所述的用于所述用途的组合物，其中从含有间充质干细胞的组织分离所述MSC，针对整合素α10β1的表达对所述MSC进行选择，并在培养物中对所选择的MSC进行扩增。
36.根据前述权利要求中任一项所述的用于所述用途的组合物，其中含有间充质干细胞的组织是脂肪组织、骨髓、滑膜、脐带血、华通氏胶或羊水。
37.根据前述权利要求中任一项所述的用于所述用途的组合物，其中所述MSC呈MHCII阴性、CD45阴性、CD34阴性、CD11b阴性、CD19阴性和/或CD79α阴性。
38.根据前述权利要求中任一项所述的用于所述用途的组合物，其中所述MSC表达CD73、CD90和/或CD105。
39.根据前述权利要求中任一项所述的用于所述用途的组合物，其中所述组合物分泌抗炎因子和/或免疫调节因子。
40.根据前述权利要求中任一项所述的用于所述用途的组合物，其中与其中少于50％的所述MSC表达整合素α10亚基的组合物相比，所述组合物以更高的浓度分泌抗炎因子和/或免疫调节因子。
41.根据前述权利要求中任一项所述的用于所述用途的组合物，其中所述组合物分泌生长因子。
42.根据前述权利要求中任一项所述的用于所述用途的组合物，其中所述生长因子、抗炎因子和/或免疫调节因子是吲哚胺2,3-双加氧酶(IDO)、前列腺素E2(PGE2)、血管内皮生长因子(VEGF)和/或肝细胞生长因子(HGF)。
43.根据前述权利要求中任一项所述的用于所述用途的组合物，其中所述MSC选自间充质干细胞、间充质祖细胞和间充质基质细胞；或其混合物。
44.根据前述权利要求中任一项所述的用于所述用途的组合物，其中所述MSC被诱导以表达整合素α10亚基。
45.根据前述权利要求中任一项所述的用于所述用途的组合物，其中所述MSC是体外细胞悬浮液。
46.根据前述权利要求中任一项所述的用于所述用途的组合物，其中已经用抗整合素α10抗体进行所述MSC的选择。
47.根据前述权利要求中任一项所述的用于所述用途的组合物，其中所述MSC是同种异体或自体的。
48.根据前述权利要求中任一项所述的用于所述用途的组合物，其中所述施用导致在施用部位的胶原蛋白产生增加。
49.根据前述权利要求中任一项所述的用于所述用途的组合物，其中所述施用导致在施用部位的基底膜再生。
50.根据前述权利要求中任一项所述的用于所述用途的组合物，其中所述施用导致在施用部位的皮肤角化。
51.根据前述权利要求中任一项所述的用于所述用途的组合物，所述组合物进一步包含水凝胶。
52.根据前述权利要求中任一项所述的用于所述用途的组合物，其中所述水凝胶是纤维蛋白胶、透明质酸、明胶、胶原蛋白、海藻酸、纤维素或果胶。
53.根据前述权利要求中任一项所述的用于所述用途的组合物，所述组合物进一步包含角质形成细胞，如自体或同种异体角质形成细胞。
54.根据前述权利要求中任一项所述的用于所述用途的组合物，所述组合物进一步包含抗炎剂。
55.根据前述权利要求中任一项所述的用于所述用途的组合物，所述组合物进一步包含用于防止细胞排斥的免疫抑制剂。
56.包含整合素α10选择的间充质干细胞(MSC)的美容组合物用于减少哺乳动物中由皮肤缺损的愈合导致的瘢痕形成的用途。
57.包含整合素α10选择的间充质干细胞(MSC)的组合物用于非治疗性治疗哺乳动物的皮肤缺损的用途。
58.根据权利要求56和57中任一项所述的用途，其中所述组合物是根据权利要求24至47中任一项所述的。
59.包含整合素α10选择的MSC的组合物用于制备用以治疗皮肤缺损的药剂的用途。
60.一种治疗有需要的哺乳动物的皮肤缺损的方法，所述方法包括以有效治疗所述皮肤缺损的量向所述哺乳动物施用包含整合素α10选择的MSC的组合物。
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